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1、(10)申请公布号 CN 102936315 A(43)申请公布日 2013.02.20CN102936315A*CN102936315A*(21)申请号 201210479968.8(22)申请日 2012.11.23C08F 222/14(2006.01)C08F 220/56(2006.01)C08F 2/00(2006.01)C08J 9/28(2006.01)C08J 9/26(2006.01)B01J 20/26(2006.01)B01J 20/30(2006.01)(71)申请人南开大学地址 300071 天津市南开区卫津路94号(72)发明人刘方 李宁 王筱滢 赵蕊丽张业尼 周。
2、蓉(74)专利代理机构天津佳盟知识产权代理有限公司 12002代理人侯力(54) 发明名称一种可富集硬毛素的分子印迹聚合物的制备方法(57) 摘要一种可富集硬毛素的分子印迹聚合物的制备方法，以硬毛素为模板分子、以四氢呋喃和异辛烷的混合溶剂为致孔剂、以丙烯酰胺为功能单体、以乙二醇二甲基丙烯酸酯为交联剂，以偶氮二异丁腈为引发剂，经过混匀、氮吹脱氧、恒温水浴反应、索氏抽提和干燥后即可制得。本发明的优点和积极效果是：该制备方法工艺简单、成本低、易于实施，制备的分子印迹聚合物可用于从天然产物中分离提取硬毛素且专一性强、使用寿命长，特别是对于一些硬毛素含量很低的天然产物，可实现快速富集纯化。(51)Int。
3、.Cl.权利要求书1页 说明书3页 附图1页(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请权利要求书 1 页 说明书 3 页 附图 1 页1/1页21.一种可富集硬毛素的分子印迹聚合物的制备方法，其特征在于：以硬毛素为模板分子、以四氢呋喃和异辛烷的混合溶剂为致孔剂、以丙烯酰胺为功能单体、以乙二醇二甲基丙烯酸酯为交联剂，以偶氮二异丁腈为引发剂，步骤如下：1）将模板分子硬毛素和功能单体丙烯酰胺溶解在致孔剂四氢呋喃和异辛烷的混合溶剂中，混匀并搅拌2h；2）加入交联剂乙二醇二甲基丙烯酸酯，混匀并搅拌10min；3）再加入引发剂偶氮二异丁腈，混匀并搅拌10min，得到混合液；4）将上述混合液吹。
4、氮脱氧4min、恒温60下水浴72h，得到块状聚合物；5）将上述块状聚合物磨碎，用分级筛进行筛选并保留60目-100目的聚合物颗粒，然后将聚合物颗粒通过索氏抽提液抽提以去除未反应物，抽提时间为48h，得到分子印迹聚合物；6）将上述分子印迹聚合物在温度为60下干燥，即可制得可富集硬毛素的分子印迹聚合物。2.根据权利要求1所述可富集硬毛素的分子印迹聚合物的制备方法，其特征在于：所述致孔剂中四氢呋喃和异辛烷的体积比为5:1。3.根据权利要求1所述可富集硬毛素的分子印迹聚合物的制备方法，其特征在于：所述模板分子、功能单体和交联剂的摩尔比为1:5:35。4.根据权利要求1所述可富集硬毛素的分子印迹聚合物。
5、的制备方法，其特征在于：所述引发剂偶氮二异丁腈的加入量为致孔剂、功能单体和交联剂总质量的0.25%。5.根据权利要求1所述可富集硬毛素的分子印迹聚合物的制备方法，其特征在于：所述索氏抽提液为体积比为9：1的甲醇和乙酸的混合液。6.一种如权利要求1所述方法制备的可富集硬毛素的分子印迹聚合物的应用，其特征在于：用于从桑黄菌中分离、富集以提取硬毛素。权 利 要 求 书CN 102936315 A1/3页3一种可富集硬毛素的分子印迹聚合物的制备方法技术领域0001 本发明涉及分子印迹聚合物，特别是一种可富集硬毛素的分子印迹聚合物的制备方法。背景技术0002 硬毛素（hispidin）是多种药用真菌的活。
6、性成分之一，具有抗氧化、抗肿瘤细胞增殖、抑制HIV-1复制、抗老年痴呆等生物学活性。研究发现硬毛素对蛋白激酶C具有较强的抑制作用，这可能是它诱导肿瘤细胞凋亡的原因之一。然而，目前报道的硬毛素的天然来源有限，主要来自针层孔菌属和针孔菌属的菇类，如桑黄菌（phellinus igniarius）、桦褐孔菌（Inonotus obliquus）、斜生褐孔菌（Phaeoporus obliquus）等。因此，进一步开发含有硬毛素的天然资源有着重要的实际意义。0003 分子印迹技术是在抗原-抗体相互作用机理的影响下发展起来的。利用目标分子作为模板，并将其与具有结构互补的功能单体通过共价键或非共价键的方式。
7、相结合，并加入交联剂进行聚合反应，再去除模板分子后，会得到与模板分子在空间结构和功能基团上完全匹配的印迹聚合物。由于这种印迹聚合物对模板分子具有专一的识别能力，并且具有良好的物理化学稳定性，以及使用寿命长等优点，使得分子印迹技术在手性药物分离、固相萃取、临床药物分析、膜分离技术、模拟酶催化、仿生传感器等领域都展现了良好的应用前景。固相萃取技术具有易收集、操作简单、富集倍数大等优点，是一种常用的样品前处理方法。因此，采用分子印迹聚合物作为固相萃取分离富集材料，可以建立一套快速、准确、简便的分离目标物的提取分离方法。发明内容0004 本发明的目的是针对上述技术分析，提供一种可富集硬毛素的分子印迹聚。
8、合物的制备方法，利用这种分子聚合物与模板分子在空间结构和结合位点的完全匹配，直接从天然产物中分离富集硬毛素，建立一种能够快速、安全、简便的硬毛素提取分离方法。0005 本发明的技术方案：0006 一种可富集硬毛素的分子印迹聚合物的制备方法，以硬毛素为模板分子、以四氢呋喃和异辛烷的混合溶剂为致孔剂、以丙烯酰胺为功能单体、以乙二醇二甲基丙烯酸酯为交联剂，以偶氮二异丁腈为引发剂，步骤如下：0007 1）将模板分子硬毛素和功能单体丙烯酰胺溶解在致孔剂四氢呋喃和异辛烷的混合溶剂中，混匀并搅拌2h；0008 2）加入交联剂乙二醇二甲基丙烯酸酯，混匀并搅拌10min；0009 3）再加入引发剂偶氮二异丁腈，。
9、混匀并搅拌10min，得到混合液；0010 4）将上述混合液吹氮脱氧4min、恒温60下水浴72h，得到块状聚合物；0011 5）将上述块状聚合物磨碎，用分级筛进行筛选并保留60目-100目的聚合物颗粒，然后将聚合物颗粒通过索氏抽提液抽提以去除未反应物，抽提时间为48h，得到分子印迹聚说 明 书CN 102936315 A2/3页4合物；0012 6）将上述分子印迹聚合物在温度为60下干燥，即可制得可富集硬毛素的分子印迹聚合物。0013 所述致孔剂中四氢呋喃和异辛烷的体积比为5:1。0014 所述模板分子、功能单体和交联剂的摩尔比为1:5:35。0015 所述引发剂偶氮二异丁腈的加入量为致孔剂。
10、、功能单体和交联剂总质量的0.25%。0016 所述索氏抽提液为体积比为9：1的甲醇和乙酸的混合液。0017 一种上述方法制备的可富集硬毛素的分子印迹聚合物的应用，用于从桑黄菌中分离、富集以提取硬毛素。0018 本发明的优点和积极效果是：该制备方法工艺简单、成本低、易于实施，制备的分子印迹聚合物可用于从天然产物中分离提取硬毛素且专一性强、使用寿命长，特别是对于一些硬毛素含量很低的天然产物，可实现快速富集纯化。附图说明0019 附图为应用该分子印迹聚合物分离桑黄菌粗提物中的硬毛素的测试图。0020 图中：峰A为硬毛素的测试值；曲线（1）为桑黄菌粗提物的测试值，曲线（2）为经过硬毛素分子印迹柱分离。
11、纯化得到的洗脱液的测试值。具体实施方式0021 实施例：0022 一种可富集硬毛素的分子印迹聚合物的制备方法，步骤如下：0023 1）将61.5mg硬毛素和88.85mg丙烯酰胺溶解在10mL四氢呋喃和2mL异辛烷的混合溶剂中，混匀并搅拌2h；0024 2）加入1647L乙二醇二甲基丙烯酸酯，混匀并搅拌10min；0025 3）再加入30mg偶氮二异丁腈，混匀并搅拌10min，得到混合液；0026 4）将上述混合液吹氮脱氧4min，密封置于恒温水浴锅中在60下反应72h，得到块状聚合物；0027 5）将上述块状聚合物用研钵磨碎，用分级筛进行筛选并保留60目-100目的聚合物颗粒，然后将聚合物颗。
12、粒用250mL索氏抽提液抽提以去除未反应物，索氏抽提液为体积比为9：1的甲醇和乙酸的混合液，抽提时间为48h，得到分子印迹聚合物；0028 6）将上述分子印迹聚合物在温度为60下干燥，即可制得可富集硬毛素的分子印迹聚合物。0029 将该可富集硬毛素的分子印迹聚合物用于从桑黄菌中分离、富集以提取硬毛素，实验方法及应用效果如下：0030 在一根4mL的SPE空管两端放置垫片，在其中均匀的装填150mg所制备的分子印迹聚合物。将填有分子印迹聚合物的SPE用10mL10%甲醇平衡；将10g桑黄菌用300ml甲醇提取三次，合并提取液，利用旋转蒸发去除溶剂，将得到的提取物溶于200ml水，用等体积乙酸乙酯。
13、萃取三次。合并乙酸乙酯相，并通过旋转蒸发去除溶剂，最后得到桑黄菌粗提物。将得到的桑黄菌粗提物溶于150mL 10%的甲醇溶液；将150mL样品溶液过装有分子印说 明 书CN 102936315 A3/3页5迹聚合物的SPE柱，这时硬毛素被吸附在富集材料上。然后用24mL 40%甲醇洗杂，洗去非特异性吸附在柱子上的物质，用20mL甲醇和乙酸（9:1，V/V）的混合溶液洗脱，得到的洗脱液利用旋转蒸发仪去除溶剂，最后用2ml甲醇溶解提取物，即为被分子印迹柱特异性吸附的硬毛素。0031 检测结果如附图所示，图中表明：当桑黄菌粗提物经过特异性分子印迹柱富集分离后，硬毛素得到了富集，桑黄粗提物中的其他组分的含量都有明显降低。由此可见，制备的硬毛素分子印迹聚合物能够专一的吸附样品中的硬毛素，从而达到富集纯化的目的。说 明 书CN 102936315 A1/1页6说 明 书 附 图CN 102936315 A。