从兔圆小囊中分离提取小囊肽的方法.pdf

本发明公开了一种从兔圆小囊中分离提取小囊肽的方法，包括：步骤一，取圆小囊，清洗、破碎；步骤二，将破碎的圆小囊组织进行沸水浴处理将组织匀浆液用乙酸浸提；步骤三，离心，保留上清液；步骤四，将离心后的沉淀再次浸提，再次按照步骤三进行离心，保留上清液后，继续下一步；步骤五，合并两次上清液，用0.1mol/L NaoH溶液调pH至7.0，离心，弃掉沉淀，收集上清液；步骤六，将上清液过SephadexG100分离柱和分子筛，紫外线监测，收集峰值样品。本发明所述方法与现有技术比较，可以去除大多数杂蛋白，采用分离柱层析，一次即可使兔小囊肽得以纯化，而且节省试剂和时间，适合于较大量的分离纯化。

1、一种从兔圆小囊中分离提取小囊肽的方法，其特征在于，包括如下
步骤：
步骤一，取圆小囊，清洗、破碎；
步骤二，将破碎的圆小囊组织进行沸水浴处理，将组织匀浆液用乙酸浸
提；
步骤三，离心，保留上清液；
步骤四，将离心后的沉淀再次浸提，再次按照步骤三进行离心，保留上
清液后，继续下一步；
步骤五，合并两次上清液，调pH值，离心，弃掉沉淀，收集上清液；
步骤六，将上清液过分离柱和分子筛，紫外线监测，收集峰值样品。
2、根据权利要求1所述的从兔圆小囊中分离提取小囊肽的方法，其特
征在于，所述步骤一具体包括：
收集屠宰场屠宰兔的圆小囊，灭菌生理盐水冲洗，去浆膜，组织捣碎机
捣碎3次，每次1-2min。
3、根据权利要求1所述的从兔圆小囊中分离提取小囊肽的方法，其特
征在于，所述步骤二中将破碎的圆小囊组织进行沸水浴处理，具体包括：
将破碎的圆小囊组织进行沸水浴处理；将组织充分匀浆，沸水浴15min。
4、根据权利要求1所述的从兔圆小囊中分离提取小囊肽的方法，其
特征在于，所述步骤二中，将组织匀浆液用乙酸浸提具体包括：
按体积比1∶1加入5％乙酸，4℃条件下搅拌、浸提12小时。
5、根据权利要求1所述的从兔圆小囊中分离提取小囊肽的方法，其特
征在于，所述步骤三中，具体包括：
将混合物于4℃，8000转/min离心30min，取上清液，在4℃下保存。
6、根据权利要求1所述的从兔圆小囊中分离提取小囊肽的方法，其特
征在于，所述步骤四具体包括：
将沉淀物用等体积5％乙酸混合，再次于4℃搅拌浸提12小时，重复上
述离心过程，取上清液。
7、根据权利要求1所述的从兔圆小囊中分离提取小囊肽的方法，其特
征在于，所述步骤五收集上清液具体包括：在4℃、8000转/min离心15min
下，收集上清液。
8、根据权利要求1所述的从兔圆小囊中分离提取小囊肽的方法，其特
征在于，所述步骤六采用型号为Sephadex G100分离柱对上清液分离，将上
清液过分离柱Sephadex G100柱，用截留量为10kD分子筛收集10kD以下的
峰值样品。
9、根据权利要求1或8所述的从兔圆小囊中分离提取小囊肽的方法，
其特征在于，还包括：将分子量在7kD以下的具有抗菌活性的物质冻干保存。
10、根据权利要求1所述的从兔圆小囊中分离提取小囊肽的方法，其特
征在于，所述步骤五中调pH值，是采用0.1mol/L的NaOH溶液调pH至7.0。

从兔圆小囊中分离提取小囊肽的方法

技术领域

本发明涉及生命医学中的提取技术，具体地说，涉及一种从兔圆小囊中
分离提取小囊肽的方法。