一种灵芝孢子的抗癌制剂制备方法 技术领域
本发明涉及中药抗癌制剂，尤其是一种灵芝孢子的抗癌制剂制备方法。
背景技术
癌症产生于恶性肿瘤的发展，现阶段对肿瘤的手术、放、化疗使患者气血虚弱，肝肾亏损，血中白细胞大量减少，免疫功能低下，导致治疗难度增大，患者痛苦加剧。现今大量的医学研究已经用于减少和克服癌症灾难，但至今商未找到根治的方法。只能采用化学药物结合手术的方法。常用抗肿瘤放化疗药物目前一般分为六类，即烷化剂、抗代谢药、抗生素、植物药、激素类和杂类。其作用原理：一是直接作用于肿瘤细胞，特别是正处于增殖期的肿瘤细胞的药物，如烷化剂、抗代谢药、抗生素、植物药和某些杂类药物；二是促使癌细胞分化的药物，主要是性激素，如应用雌激素或雄激素治疗乳腺癌、应用雌激素治疗前列腺癌，其作用不是杀伤癌细胞，而是促使细胞分化，从而使癌细胞失去分裂功能而死亡；三是某些药物可具有防止转移的作用，如干扰素诱导剂。但其毒副作用较大，不良反应主要是以下方面：(1)骨髓抑制：白细胞、血小板下降比较明显，可导致感染和出血，有的有红细胞和血红蛋白下降；(2)消化道反应：如食欲减退、恶心、呕吐、腹泻等；(3)口腔粘膜反应：如口炎、咽炎、溃疡；(4)脱发(5)有的药物可引起神经系统毒性症状如周围神经炎等，有的药物可引起出血性膀胱炎；少数药物如阿霉素及正定霉素对心肌有影响。此外，多数抗肿瘤药物均对机体免疫功能有一定的影响；有的对肾上腺皮质机能有抑制。这给患者生理造成损伤，带来很大的痛苦，且不利于进一步根治。
灵芝自古以来便为药用圣品，现代科学研究证明其抗癌疗效显著，能明显抑制癌细胞产生，防止癌细胞转移、复发，并能增强人体自身免疫力，减轻肿瘤患者因手术、放、化疗带来的毒副作用。灵芝中的灵芝孢子为灵芝的遗传单位，它含有了灵芝子实体中所有地有效成分，抗癌有效成分含量非常丰富，经研究表明其中主要起效的成分为三萜类和多糖类物质。灵芝三萜类物质为脂溶性，具有很强的生理活性，能够直接对癌细胞进行杀灭，防止癌细胞扩散转移。多糖类物质为水溶性化合物，它通过增强人体自身免疫力来达到抑制肿瘤的作用。两种有效成分从多方面入手抑制肿瘤，有效杀灭肿瘤细胞，防止癌细胞的转移以及癌基因的突变，增强人体免疫力，从根本上对肿瘤机理进行作用，从而达到很好的疗效。孢子外壁为一层坚硬的几丁质外壳，在人体中不能完全分解，导致其中的有效成分不能完全释放，所以就需要对灵芝孢子进行超细粉碎处理，也即通俗的灵芝孢子破壁。
现阶段的破壁方法报道很多，但大多数仅仅强调所谓的破壁率，只求破坏灵芝孢子的几丁质外壳，而实际上破壁后的灵芝孢子粉的粒径尺寸仍是十分重要的指标，粒径过大则影响破壁效果，人体对孢子外壳内的有效成分仍难以吸收，粒径过小则加工过程中会对灵芝孢子的有效成分造成破坏。
发明内容
近年来中药特别是灵芝在癌症治疗方面的研究有了突破性进展，应用现代科学技术使得生产工艺有了质的飞跃。本发明就是依据这方面的知识，目的在于提供一种灵芝孢子的抗癌制剂制备方法：
一种灵芝孢子的抗癌制剂制备方法，用灵芝的种子灵芝孢子经超细粉碎处理后制成，其特征是所述的灵芝选取灵芝科灵芝属中的赤芝。在赤芝栽培的成熟期，收集其孢子，将收集好的孢子放入水中筛选，泥沙等杂质沉入水底，孢子中的瘪壳、空粒等则浮在水面上，而成熟饱满的孢子则悬浮在水中，将经过筛选后的赤芝孢子取出，自然烘干后采用常温物理机械方法对赤芝孢子进行超细粉碎，最后将破壁孢子粉根据需求进行制剂。超细粉碎的细度要求在0.2～0.5um之间。
灵芝品种很多，品质良莠不齐，本发明中所用的灵芝品种是在我国所有的一百余种灵芝品种中进行筛选的，确定选用其中的赤芝(Ganoderma lucidum)，赤芝具有易于栽培，品种稳定，且经比较赤芝孢子的抑瘤功效强于其它品种的灵芝孢子。赤芝菌盖表面褐红色，具油漆光泽，又有一个表面光滑的菌柄。本发明以常温下超细粉碎为基础，对赤芝孢子在常温下进行超细粉碎。将赤芝孢子放入超细耪碎机中，连续粉碎30分钟，注意加装除尘罩以防止设备运行中产生粉尘，操作人员需佩带防护耳罩降低噪声影响，由于在超细粉碎过程中产生大量热量，应用冷凝水及时冷却，以提高产品质量、延长机器寿命。粉碎后经显微镜下观察测量，粉碎细度应在0.2～0.5um之间。检测合格后干热灭菌0.5～3hr，使菌落总数小于10cfu/g。在符合GMP规范的车间内生产，制成制剂使得其服用更加方便快捷，有效成分可以充分释放。
本发明的优点和效果：本发明选用灵芝科灵芝属的赤芝孢子为原料，保证了其有效成分的含量和质量。经过收集、洗涤、筛选后对孢子进行常温物理破壁，使粒度达到0.2～0.5um，常温下进行粉碎有效成分不会因为温度的剧烈改变产生变化，且在工艺中没有引入化学成分，使得灵芝孢子的功效成分灵芝多糖和灵芝三萜类得以保持并更有利于药效的发挥，并可将孢子外壁中的各种成分充分吸收，对于抑制肿瘤作用产生了显著的提高。最后可采用先进的制剂工艺对灵芝破壁孢子粉进行加工，增加了其成分的稳定性。由于灵芝无毒无害，对患者无副作用，使得肿瘤患者服用更方便、快捷、安全。
用本发明制剂进行功能性试验：
1.单核-巨噬细胞功能试验：小鼠碳廓清试验：经口给予小鼠赤芝孢子30、300(相当于人每日每千克体重推荐摄入量的10倍)和600mg/Kg剂量15天，各剂量组小鼠的单核-巨噬细胞吞噬指数均高于阴性对照值，高剂量组具有显著差异(P＜0.05)，提示该样品可以增强小鼠单核-巨噬细胞吞噬功能。见表1。
表1 赤芝孢子对小鼠碳轮廓的影响
组别 剂量(mg/Kg) 动物数(只) 吞噬指数(X±SD)
对照组 0 10 5.95±0.76
剂量组 30 10 6.67±0.42
300 10 6.43±0.50
600 10 6.98±0.89*
*与阴性对照组相比P＜0.05
2.NK细胞活性试验：经口给予小鼠赤芝孢子30、300(相当于人每日每千克体重推荐摄入量的10倍)和600mg/Kg剂量15天后，采用乳酸脱氢酶法检测各剂量组小鼠脾脏NK细胞活性，各剂量组活性均极显著高于对照组(P＜0.01)，赤芝芝孢子具有增强小鼠NK细胞活性的功能。见表2。
表2 赤芝孢子对小鼠NK细胞活性的影响
组别 剂量(mg/Kg) 动物数(只) NK细胞活性(％)
对照组 0 12 51.34±9.65
低剂量组 30 12 71.23±7.42**
中剂量组 300 12 72.41±11.11**
高剂量组 600 12 83.22±5.67**
**与对照组相比P＜0.01
3.抑制肿瘤作用试验：昆明种小鼠经口给予赤芝芝孢子30、300相当于人每日每千克体重推荐摄入量的10倍)和600mg/Kg剂量20天，分别皮下接种Heps及S108瘤株，再继续给予上述剂量8天。在两瘤株各两次试验中，与阴性对照组相比各剂量组核瘤鼠的肿瘤生长均有不同程度的抑制，并存在量效关系。高剂量组对Heps、S108株抑瘤率均＞30％，并有显著或极显著性差异(P＞0.05，P＜0.01)。而动物体重在试验前后与对照组比较均无显著差异，动物抑制肿瘤作用试验阳性。见表3、表4。
表3 赤芝孢子对接种HEPS肿瘤株小鼠瘤重的影响
组别 剂量 去瘤后体重(g) 肿瘤重(g) 抑瘤率
(mg/Kg) ( X±S) ( X±S) (％)
阴性对照组 0 42.4±3.5 1.473±0.387
第 赤芝孢子 30 40.5±3.8 1.115±0.409 24.3
一 300 41.3±4.1 0.872±0.422** 40.8
次 600 39.2±3.7 0.789±0.425** 46.4
阳性对照组(5-FU) 25 39.8±4.1 0.595±0.220** 59.6
阴性对照组 0 39.6±4.2 1.581±0.527
第 赤芝孢子 30 38.6±3.5 1.080±0.426* 31.7
二 300 39.4±3.4 1.003±0.348* 36.6
次 600 37.7±3.7 0.951±0.513** 39.8
阳性对照组(5-FU) 25 37.3±3.8 0.812±0.199** 48.6
与阴性对照相比，*P＜0.05，**P＜0.01
表4 赤芝孢子对接种S108肿瘤株小鼠瘤重的影响
组别 剂量 去瘤后体重(g) 肿瘤重(g) 抑瘤率
(mg/Kg) ( X±S) ( X±S) (％)
阴性对照组 0 31.6±3.1 1.419±0.637
第 赤芝孢子 30 30.6±3.1 1.295±0.359 8.74
一 300 29.5±2.9 1.058±0.431 25.4
次 600 30.1±2.7 0.807±0.305** 43.1
阳性对照组(5-FU) 25 27.1±2.5 0.724±0.321** 48.9
阴性对照组 0 32.9±3.5 1.333±0.309
第 赤芝孢子 30 30.9±1.9 1.109±0.401 16.8
二 300 31.2±3.5 1.077±0.287 19.2
次 600 32.0±2.8 0.839±0.246** 37.1
阳性对照组(5-FU) 25 30.6±3.5 0.786±0.220** 41.0
与阴性对照相比，**P＜0.01
具体实施方式
下面用实施例对本发明加以说明：
实施例1：制备1000粒赤芝孢子胶囊，以本发明方法制备赤芝孢子粉200g，充填成1000粒胶囊。
实施例2：制备10000片赤芝孢子片剂，以本发明方法制备赤芝孢子粉2kg，加入淀粉8kg，干法制粒，压片制成10000片片剂。
实施例3：，制备500袋赤芝孢子茶饮料，以本发明方法生产赤芝孢子粉250g，加入茶叶750g，混合后粉碎，装入500袋中，制成袋泡茶饮料。
实施例4：制备1000粒赤芝孢子丸剂，以本发明方法生产赤芝孢子粉200g，加入淀粉800g，混合均匀后加水后将其制为丸剂。