一种灵芝孢子的抗癌制剂生产方法 技术领域
本发明涉及中药抗癌制剂，尤其是一种灵芝孢子的抗癌制剂生产方法。
背景技术
本发明是对“一种灵芝孢子的抗癌制剂制备方法”专利申请的后续。
灵芝中的灵芝孢子为灵芝的遗传单位，它含有了灵芝子实体中所有的有效成分，抗癌有效成分含量非常丰富，经研究表明其中主要起效的成分为多糖类物质。多糖类物质为水溶性化合物，不溶于脂质，它通过增强人体自身免疫力来达到抑制肿瘤，有效杀灭肿瘤细胞，防止癌细胞的转移以及癌基因的突变，增强人体免疫力的作用，从根本上对肿瘤机理进行作用，从而达到很好的疗效。孢子中一般含有10％～20％的油脂，其油脂中并不含有对抑制肿瘤有效的多糖类物质。由于灵芝孢子中的多糖成分不溶于脂质，所以可经萃取去除脂质提高多糖成分的含量，且含有油脂的孢子粉在放置一断时间后由于油脂氧化等原因，会产生变质，影响产品质量，这就需要对灵芝孢子中的脂质进行萃取。但灵芝孢子外壁为一层坚硬的几丁质外壳，为了使脂质能够完全释放、便于萃取，就需要对灵芝孢子进行超细粉碎处理，打破坚硬地几丁质外壳，也即通俗的灵芝孢子破壁。破壁后的灵芝孢子经萃取去除了10％～20％的油脂，可提高多糖类有效成份的含量，且能稳定产品质量防止氧化变质。
发明内容
本发明目的在于提供一种灵芝孢子的抗癌制剂生产方法，采用CO2惰性气体为超临界状态下，对灵芝孢子中的脂质成分进行超临界提取，不会引入对人体有害的成分，所以安全高效。
本发明目的由以下方法实现：一种灵芝孢子的抗癌制剂生产方法，选取灵芝科灵芝属中的赤芝为原料，在赤芝栽培的成熟期，收集其孢子，经筛选后采用常温物理机械方法对赤芝孢子进行超细粉碎至0.2～0.5um之间，最后将破壁孢子粉根据需求进行制剂，其特征是对超细粉碎后的赤芝孢子采用CO2超临界萃取的工艺脱脂。CO2超临界萃取工艺要求为赤芝孢子粉装入萃取器中，从萃取器底部通入CO2气，控制温度为35-65℃，压力为20-35Mpa，萃取时间为1-35小时。将赤芝孢子粉加入水及明胶、淀粉中的一种或两种混合，加入量使灵芝孢子粉粘结成型为准，混合均匀，在室温下挤压成型，自然干燥后的灵芝孢子粉装入萃取器中，从萃取器底部通入CO2气，从萃取器上部流出含有油脂的CO2进入减压分离器，油脂从减压分离器底部放出，CO2气从减压分离器的顶部流出，从萃取器回收脱脂灵芝孢子粉，后将脱脂灵芝孢子粉干热灭菌0.5～3hr，使菌落总数小于10cfu/g。在符合GMP规范的车间内生产，制成制剂使得其服用更加方便快捷，有效成分可以充分释放。
本发明以CO2在超临界萃取技术为基础。超细粉碎后的灵芝孢子经检测合格之后采用CO2在超临界状态下，对其中的脂质进行超临界萃取。本发明中所用的灵芝品种是在我国所有的一百余种灵芝品种中进行筛选的，确定选用其中的赤芝(Ganoderma lucidum)，赤芝具有易于栽培，品种稳定，且经比较赤芝孢子的抑瘤功效强于其它品种的灵芝孢子。赤芝菌盖表面褐红色，具油漆光泽，又有一个表面光滑的菌柄，在赤芝栽培的成熟期，可收集其孢子。将收集好的孢子放入水中，则泥沙等杂质沉入水底，灵芝孢子中的瘪壳、空粒等则浮在水面上，而成熟饱满的孢子则悬浮在水中。将经过筛选后的灵芝孢子取出，自然烘干后对灵芝孢子在常温下进行超细粉碎。
本发明的优点和效果：本发明选用灵芝科灵芝属的赤芝孢子为原料，保证了其有效成分的含量和质量。经过收集、洗涤、筛选后对孢子粉进行常温物理破壁，使粒度达到0.2～0.5um便于对孢子中脂质的萃取。本发明在破壁后采用了CO2超临界萃取技术，超临界CO2安全无毒，不与其它成份产生化学作用，故不会给产品注入新的有害物质。与传统方法相比，本发明方法工艺流程简单，成本低，而且过程中萃取温度低，不会破坏灵芝孢子中的有效原生质成份。二氧化碳超临界加工过程中与空气隔绝，能够有效防止过氧化反应，而且超临界过程是杀菌过程。以上优点使得本发明的产品质量可靠，使得灵芝孢子的功效成分灵芝多糖得以保持并更有利于药效的发挥，使人体更容易将孢子中的各种成分充分吸收，对于抑制肿瘤作用产生了显著的提高。本发明由于去除了灵芝孢子中10％～20％的油脂，可以提高多糖等有效成分的含量。且油脂放置一断时间后由于氧化等原因，会产生变质，去除后可提高产品质量。最后采用了先进的制剂工艺对灵芝破壁孢子进行加工，增加了其成分的稳定性。由于灵芝无毒无害，对患者无副作用，使得肿瘤患者服用更方便、快捷、安全。
利用本发明制剂进行功能性试验：
1.抗移植性肝癌实验：本发明制剂以300mg/Kg，600mg/Kg和1200mg/Kg灌胃给药，对进行小鼠移植性肝癌H8ps的实验，结果见表1，对荷瘤小鼠免疫器官重量的影响见表2。
表1对小鼠移植性肝癌Heps的抑制作用(n＝10)
药物剂量 给药 动物数 体重变化(g) 瘤重(g) 抑瘤率
分组
mg/Kg×d 途径 始/终 给药前/给药后 X±S ％
H2O ig 10/10 19.4/31.4 3.05±0.62
低剂量组 300×12 ig 10/10 19.6/27.0 1.59±0.70**** 47.87
中剂量组 600×12 ig 10/10 19.2/25.0 1.48±0.7*** 51.48
高剂量组 1200×12 ig 10/10 19.2/21.7 1.32±0.42*** 56.72
5-Fu 25×12 ig 10/10 18.9/24.8 1.42±0.52*** 53.44
**P＜0.01 ***P＜0.001与对照组比
表2对小鼠Heps肝癌免疫器官重量的影响(n＝10)
药物剂量 给药 动物数脾指数 胸腺指数
分组
mg/Kg×d 途径 始/终 X±S X±S
H2O ig 10/10 51.96±14.20 21.30±9.18
低剂量组 300×12 ig 10/10 79.86±18.59** 32.58±8.42*
中剂量组 600×12 ig 10/10 60.50±23.17 20.26±7.39
高剂量组 1200×12 ig 10/10 65.18±29.17 23.64±12.23
5-Fu 25×12 ig 10/10 88.05±51.08 20.64±11.80
*P＜0.05 **P＜0.01与对照组比
本发明制剂在本实验剂量范围内抑瘤率为47.87％～56.72％(P＜0.001)，显示了良好的量效关系。可增加Heps荷瘤小鼠免疫器官重量，其脾指数、胸腺指数升高较明显，提示其有刺激免疫功能作用。低剂量组脾指数及胸腺指数提高有显著意义(P＜0.05)。
2.抗移植性肉瘤实验：本发明制剂以300mg/Kg，600mg/Kg和1200mg/Kg灌胃给药，对进行小鼠移植性肉瘤S108的实验，实验结果见表3，对荷瘤小鼠免疫器官重量的影响见表4。
表3对小鼠移植性肉瘤S108的抑制作用(n＝10)
药物剂量 给药 动物数 体重变化(g) 瘤重(g) 抑瘤率
分组
mg/Kg×d 途径 始/终 给药前/给药后 X±S ％
H2O ig 10/10 18.5/23.5 1.29±0.61
低剂量组 300×8 ig 10/10 18.4/22.9 0.67±0.32* 47.87
中剂量组 600×8 ig 10/10 18.6/19.7 0.56±0.29** 51.48
高剂量组 1200×8 ig 10/10 18.5/19.3 0.52±0.22** 56.72
5-Fu 25×8 ig 10/10 18.7/21.7 0.67±0.21* 53.44
*P＜0.05 **P＜0.01与对照组比
表4对小鼠S108肉瘤免疫器官重量的影响(n＝10)
药物剂量 给药 动物数 脾指数 胸腺指数
分组
mg/Kg×d 途径 始/终 X±S X±S
H2O ig 10/10 73.48±17.07 35.56±12.04
低剂量组 300×8 ig 10/10 70.79±20.29 40.96±17.58
中剂量组 600×8 ig 10/10 82.50±27.94 36.50±12.63
高剂量组 1200×8 ig 10/10 78.96±25.14 42.50±23.63
5-Fu 25×8 ig 10/10 37.84±17.86 37.63±15.31
*P＜0.05 **P＜0.01与对照组比
本发明制剂在本实验剂量范围内抑瘤率为48.06％～59.69％(P＜0.05)，有良好的抑瘤作用，其抑瘤作用呈量效关系。可增加S108荷瘤小鼠免疫器官重量，给药组脾指数、胸腺指数有所上升，提示其有一定的刺激免疫功能作用。
具体实施方式
下面用实施例对本发明加以说明：
实施例1：将精选灵芝孢子粉(超细粉碎细度0.2um)加入水，加入量使之成型为准，用挤条挤出，干燥后称取100Kg，装入萃取器。控制压力26Mpa，温度50℃，萃取30小时，得孢子油15.8Kg，脱脂灵芝孢子84.4Kg。
实施例2：与实施例1操作相同，不同的是灵芝孢子粉超细粉碎细度为0.3um，重量1000g，超临界条件为：压力25MPa，温度50℃，萃取时间为2小时。得灵芝孢子油153g，脱脂灵芝孢子粉848g。
实施例3：与实施例1操作相同，不同的是灵芝孢子粉超细耪碎细度为0.5um，重量1000g，超临界条件为：压力32MPa，温度50℃，萃取时间为15小时。得灵芝孢子油160g，脱脂灵芝孢子粉842g。
实施例4：制备1000粒灵芝孢子胶囊，以本发明方法生产灵芝孢子粉200g，充填成1000粒胶囊。
实施例5：制备10000片灵芝孢子片剂，以本发明方法生产灵芝孢子粉2kg，加入淀粉8kg，干法制粒，压片制成10000片片剂。
实施例6：，制备500袋灵芝孢子茶饮料，以本发明方法生产灵芝孢子粉250g，加入茶叶750g，混合后粉碎，装入500袋中，制成袋泡茶饮料。
实施例7：制备1000粒灵芝孢子丸剂，以本发明方法生产灵芝孢子粉200g，加入淀粉800g，混合均匀后加水后将其制为丸剂。