一种治疗心脑血管疾病的赤芍、红花冻干粉针剂及其制备方法.pdf

本发明采用水提法提取红花和赤芍中的有效成分，采用大孔树脂吸附技术对其进行精制和纯化，并进一步采用中空纤维柱超滤，在精制纯化、保留有效成分的同时，除去了注射液中易引起过敏或不良反应的成分和热原，使注射液的质量得到大大提高，同时，采用中空纤维柱超滤后，在保留药物有效成分的同时，使注射液的澄明度得到大大改善，本发明用中药赤芍和红花以适当比例配伍，使二药的药效得到充分发挥，相得益彰，所以，本发明的赤芍、红花冻干粉针剂，具有疗效好、质量稳定、有效成分含量高的特点。

1、  一种治疗心脑血管疾病的赤芍、红花冻干粉针剂，其特征在于它是由重量比为1∶0.5-3的赤芍、红花提取的水溶性有效部位和冻干赋形剂组成。

2、  根据权利要求1所述的治疗心脑血管疾病的赤芍、红花冻干粉针剂，其制备方法是：
(1)、取赤芍、红花药材，赤芍粉碎成粗粉，与红花一起，加水煎煮提取三次，提取液合并，滤过，高速离心，清液加于已处理好的大孔吸附树脂柱上，先用2-3倍量的去离子水洗脱，再用20％-60％的乙醇溶液洗脱，收集20％-60％的乙醇洗脱液，减压回收乙醇至无醇味，继续浓缩至每1ml药液相当于1g生药；
(2)、取上述提取液，过截留分子量为3000的中空纤维柱超滤，超滤浓缩液加去离子水重复超滤2-3次，收集超滤透过液，低温浓缩至干，得赤芍、红花精制提取物；
(3)、取赤芍、红花精制提取物，加适量注射用水溶解，用0.1％的活性炭脱色，滤过，滤液加入新制的注射用水至规定量，再加入3％-10％的冻干赋形剂，，搅拌使溶解，以0.22μm的微孔滤膜滤过，滤液加注射用水至规定量，调节pH值，灌装，冷冻干燥，轧盖，即得。

3、  根据权利要求1或2所述的冻干粉针剂，其特征在于其中冻干赋形剂是甘露醇和乳糖中一种或二种的混合物。

一种治疗心脑血管疾病的赤芍、红花冻干粉针剂及其制备方法
技术领域
本发明属中药制药领域，具体涉及一种用于心血管疾病治疗的由中药赤芍和红花的有效部位组成的冻干粉针剂及其制备方法。
背景技术
心脑血管疾病在临床上是常见病、多发病，近年来，随着人们生活水平的提高，加上人口结构的老龄化，其发病率呈逐年上升的趋势，开发治疗心脑血管疾病的药物渐成研究的热点。越来越多的临床报道显示，中药在治疗心脑血管疾病方面具有良好的应用前景，特别是中药的副作用少，日益受到人们的喜爱。赤芍是常用的活血化瘀药，具清热凉血，散瘀止痛的功效，含芍药甙、氧化芍药甙、芍药内酯甙、羟基芍药甙等。赤芍具有抗血小板聚集的作用，对ADP和胶原诱导的血小板聚集性有不同程度抑制作用，可使血小板内cAMP水平显著升高，对喂高胆固醇、高脂肪大鼠血栓形成有一定的影响。赤芍浸膏给实验性动物粥样硬化家兔喂饲，能显著升高高密度脂蛋白、胆固醇和亚组分组，明显降低总胆固醇、低密度脂蛋白、胆固醇和极低密度脂蛋白胆固醇水平，使高血脂引起的TXA₂/PGI₂比值改变趋向平衡，并能降低血浆脂质过氧化物、动脉壁脂质、钙和磷脂及主动脉斑面积。其作用强于钙通道阻滞剂硝苯吡啶，说明赤芍能通过影响钙代谢、调节TXA₂/PGI₂平衡抗动脉粥样硬化。此外，赤芍有增加小鼠心肌营养血流量及犬的冠脉流量，降低冠脉阻力及心肌氧利用率的作用，其有效成份赤芍甙有增加犬冠脉流量和股动脉流量的作用。
中药红花有活血通经，散瘀止痛的功效，含红花醌甙、新红花甙和红花甙等甙类，其油中含棕榈酸、肉豆蔻酸、月桂酸、油酸、亚油酸等。红花善通利经脉，对血液循环有多方面的作用。有轻度兴奋心脏、降低冠脉阻力、增加冠脉流量和心肌营养性流量的作用。红花可抗血栓形成，红花及红花黄素有抑制ADP诱导血小板聚集，增加纤维蛋白溶解及抑制血栓形成等作用。红花还有降低血脂的作用，给高血脂症家兔灌胃红花油实验证明，本品可降低家兔血清总胆固醇、总酯、三硝酸甘油及非酯化脂肪酸水平。临床服用红花油加甲基橙皮甙或与食用油混合治疗87例高血脂症伴有高血压的患者，结果表明本品均可降低人血清胆固醇的作用，有效率达72-77.3％，但停药后胆固醇有回升。此外，红花还具有抗炎和免疫抑制作用。
注射用冻干粉针剂具有起效迅速、稳定、便于运输、贮存等优点，因此，开发红花、赤芍的注射制剂将会具有广阔的市场前景。
超滤技术是指常温下以一定压力和流量，利用不对称微孔结构和半透膜分离介质、以错流方式进行过滤，使溶剂及小分子物质通过，高分子物质和微粒子如蛋白质、水溶性高聚物、细菌等被滤膜阻留，从而达到分离、纯化、浓缩的发展最快的新型膜分离技术，能够分离分子量为1000～1000000道尔顿的物质。使用不同的超滤膜如醋酸纤维、磺化聚砜、聚砜、聚砜酰胺、聚丙烯睛，能够对0.5、1、3、7万不同分子量物质进行选择性截留。与传统分离方法相比，具有分离过程无相变、分离效率高、无需添加化学试剂无污染、无需加热、能耗低、条件温和无破坏成分、操作方便、流程短的特点，能够部分取代传统的过滤、吸附和萃取等分离技术，已开始广泛应用于生物工程及中药制剂工艺中。可以用超滤法制备注射用水、输液及中药注射液，以5～7万分子量超滤膜制备口服液和固体制剂等等。另外，根据超滤膜的特点，还可以利用它来去除注射液中的鞣质、蛋白质和大分子的糖类等杂质，改善注射液的澄明度等。利用超滤技术制备注射液，还能够用来有效去除细菌和热原。总之，利用超滤技术后，注射液的质量会得到明显提高与改善。
虽然，以红花和赤芍两者之一的有效部位制成制成的制剂均有报道，专利CN01131268、CN02125604、CN01138665、CN98125121分别报道了红花的有效成分红花黄色素的制备方法及其制剂，专利CN03127995报道了一种赤芍总甙粉针剂及其制备方法，专利CN03113126公开了治疗心脑血管病的赤芍总苷的药物组合物及制备方法。然而，将二者结合起来应用于临床心脑血管方面疾病的治疗，特别是临床注射制剂方面的应用未见报道。药理研究表明，赤芍与红花具有明显的抗凝协同作用，对家兔的体外凝血实验研究发现：赤芍与红花具有明显的抗凝作用，单用药时，可使白陶土部分凝血性活酶时间和凝血酶时间明显延长，作用呈量效关系，两药合用时，使白陶土部分凝血活酶时间和凝血酶时间明显延长，呈协同抗凝作用，尤其是在两药按一定比例组合时，协同抗凝作用更强。将两药的提取物制成冻干粉针，不仅可避免肝脏的首过作用，提高生物利用度，而且有效期长，便于贮存和运输。两药的配伍应用，可充分发挥中药多组分、多靶点、多作用途径的特点，使之在临床上具有更好的疗效。
发明内容
本发明的目的在于提供一种疗效好、质量稳定、便于贮存和运输的红花和赤芍冻干粉针剂，采用水提法提取红花和赤芍中的水溶性有效成分，将提取物水溶液用大孔吸附树脂柱吸附，先用水洗去糖类等杂质，再用20％-60％的乙醇洗脱，收集20％-60％的乙醇洗脱液，减压回收乙醇至无醇味，加适量水，再过截留分子量为3000的中空纤维柱超滤，得红花和赤芍精制提取物。取红花和赤芍精制提取物，用适量水溶解后，以活性炭脱色，加适量冻干赋形剂，除菌滤过后冷冻干燥，即得。
本发明采用水提法直接提取红花和赤芍中的有效成分，采用大孔树脂吸附技术对其进行精制和纯化，并进一步采用中空纤维柱超滤，在精制纯化、保留有效成分的同时，除去了注射液中易引起过敏或不良反应的大分子和热原，使注射液的质量得到大大提高，同时，采用中空纤维柱超滤后，在保留药物有效成分的同时，使注射液的澄明度得大大改善，所以，本发明的赤芍、红花注射制剂具有质量好、有效成分含量高的特点。
本发明采用以下技术方案来实现：
1、取赤芍、红花药材，赤芍粉碎成粗粉，以上二味，加水煎煮提取三次，提取液合并，滤过，高速离心，清液加于已处理好的大孔吸附树脂柱上，先用去2-3倍量的去离子水洗脱，再用20％-60％的乙醇溶液洗脱，收集20％-60％的乙醇洗脱液，减压回收乙醇至无醇味，加去离子水至每1ml药液相当于1g生药。
2、取上述提取液，过截留分子量为3000的中空纤维柱超滤，超滤浓缩液加去离子水重复超滤2-3次，收集超滤透过液，低温浓缩至干，得赤芍、红花精制提取物。
3、取赤芍、红花精制提取物，加适量注射用水溶解，用0.1％的活性炭脱色，滤过，滤液加入新制地注射用水至规定量，再加入3％-10％的冻干赋形剂，搅拌使溶解，以0.22μm的微孔滤膜滤过，滤液加注射用水至规定量，灌装，冷冻干燥，轧盖，即得。
其中冻干赋形剂可以是甘露醇和乳糖中一种或二种的混合物。下面通以药理实验来说明本发明的冻干粉针剂的药理药效：
试验一：本发明的芍红冻干粉针对大鼠实验性体内血栓形成的影响
试验目的：通过动物试验观察芍红冻干粉针是否存在抗血栓形成的作用。
试验材料：受试药物 芍红冻干粉针
阳性对照药 灯盏花注射液
阴性对照药 生理盐水
实验动物Wistar种大鼠
实验方法如下：取雄性大鼠50只，体重255-300g，随机分为5组，每组10只，为阳性药物组、阴性药物组和受试药物高、中、低三个剂量组。连续腹腔注射给药5天，于末次给药30min后，测定体内血栓，剥离一侧颈总动脉，长约15mm，用玻璃纸遮盖伤口、附近组织以免组织温度影响血管壁温度，然后将刺激电极和温度探头钩于动脉血管上，用2mA的电流刺激7min，当动脉内血栓形成堵塞血流，以使动脉血液不能通过时，堵塞处远端温度突然下降，仪器报鸣，此时记下血栓形成时间。结果见表1：
表1芍红冻干粉针对大鼠体内血栓形成时间的影响(n＝10，x±s)
组别           剂量(mg/kg体        血栓形成时间
               重)
阴性药物组                         655.50±53.48
阳性药物组          70             759.60±96.81^**
小剂量组            35             721.80±56.23^*
中剂量组            70             740.90±76.85^**
高剂量组      140             890.50±118.97^***
与对照组比较^*＜0.05，^**＜0.01，^***＜0.001
结果显示，本发明的芍红冻干粉针具有抗大鼠体内血栓形成的作用，与生理盐水比较，具有明显的统计学意义。
结论：芍红冻干粉针具有显著的抗体内血栓形成的作用。
试验二：本发明的芍红冻干粉针对大鼠血清的影响
方法随机选取体重在250～270g的健康大鼠，断头取血，先在刻度管内加0.3ml的38％枸橼酸钠溶液，注入新采血液至3ml刻度处混匀，按照3000rpm离心20min，取血浆备用。然后用血液凝集仪测定参比血浆与凝血酶(或凝血活酶，或部分凝血活酶)当日标准凝固时间。样品血浆测定，用100μl移液管吸取100μl凝血酶(或凝血活酶，或部分凝血活酶)加入测试杯中，再用100μl移液管吸取样品血浆，最后分别加入被测药物：高、中、低剂量组，阳性对照组：灯盏花注射液；空白对照组：生理盐水。分别测定各组血浆的凝血酶时间(TT)、部分凝血活酶时间(KPTT)。结果见表2。
表2芍红冻干粉针剂对大鼠血清TT、KPTT的影响
组别                       剂量(mg/kg)        TT(s)             KPTT(s)
生理盐水                                   15.85±1.54         34.56±4.89
灯盏花注射液组                   70        19.34±1.23^*       47.13±4.23^*
芍红冻干粉针小剂量组             35        19.87±1.45^*       50.67±4.72^*
中剂量组                         70        22.34±1.55^**      56.14±3.75^**
高剂量组                         140       30.05±1.94^***     62.54±3.72^***
与对照组比较^*＜0.05，^**＜0.01，^***＜0.001
结果表明，本发明的芍红冻干粉针剂对凝血酶时间(TT)和部分凝血活酶时间(KPTT)具有显著的延长作用。
实施例一
 处方    赤芍1000g                        红花1000g
以上二味，赤芍粉碎成粗粉，与红花一起，加水煎煮提取三次，提取液合并，滤过，高速离心，离心液加于已处理好的AB-8型大孔吸附树脂柱上，先用去2倍量的去离子水洗脱，再用3倍量30％的乙醇溶液洗脱，收集30％的乙醇洗脱液，减压回收乙醇至无醇味，继续浓缩至每1ml药液相当于生药1g。
2、取上述药液，以截留分子量为3000的中空纤维柱超滤，超滤浓缩液加去离子水重复超滤3次，收集超滤透过液，低温浓缩至干，得赤芍、红花精制提取物。
3、取赤芍、红花精制提取物，加适量注射用水溶解，用0.1％的活性炭脱色，滤过，滤液加入新制的注射用水至2000ml，再加入5％的冻干赋形剂甘露醇，搅匀，以0.22μm的微孔滤膜滤过，滤液加注射用水至2000ml，灌装于西林瓶，冷冻干燥，轧盖，即得成品。
实施例二
处方    赤芍1000g                       红花500g
以上二味，赤芍粉碎成粗粉，与红花一起，加水煎煮提取三次，提取液合并，滤过，高速离心，离心液加于已处理好的AB-8型大孔吸附树脂柱上，先用去2倍量的去离子水洗脱，再用3倍量30％的乙醇溶液洗脱，收集30％的乙醇洗脱液，减压回收乙醇至无醇味，继续浓缩至每1ml药液相当于生药1g。
2、取上述药液，以截留分子量为3000的中空纤维柱超滤，超滤浓缩液加去离子水重复超滤3次，收集超滤透过液，低温浓缩至干，得赤芍、红花精制提取物。
3、取赤芍、红花精制提取物，加适量注射用水溶解，用0.1％的活性炭脱色，滤过，滤液加入新制的注射用水至2000ml，再加入5％的冻干赋形剂甘露醇，搅匀，以10％的氢氧化钠调节pH值至7.5，用0.22μm的微孔滤膜滤过，滤液加注射用水至2000ml，灌装于西林瓶，冷冻干燥，轧盖，即得成品。
实施例三
处方    赤芍1000g                      红花500g
以上二味，赤芍粉碎成粗粉，与红花一起，加水煎煮提取三次，提取液合并，滤过，高速离心，离心液加于已处理好的D101型大孔吸附树脂柱上，先用3倍量柱体积的去离子水洗脱，再用4倍量柱体积的40％的乙醇溶液洗脱，收集40％的乙醇洗脱液，减压回收乙醇至每1ml药液相当于生药1g。
2、取上述药液，以截留分子量为3000的中空纤维柱超滤，超滤浓缩液加去离子水重复超滤3次，收集超滤透过液，低温浓缩至干，得赤芍、红花精制提取物。
3、取赤芍、红花精制提取物，加适量注射用水溶解，用0.1％的活性炭脱色，滤过，滤液加入新制的注射用水至2000ml，再加入5％的冻干赋形剂甘露醇，搅匀，以10％的氢氧化钠调节pH值至7.5，用0.22μm的微孔滤膜滤过，滤液加注射用水至2000ml，灌装于西林瓶，冷冻干燥，轧盖，即得成品。