一株平菇及其在降解黄曲霉毒素中的应用.pdf

摘要
申请专利号：	CN201210017977.5	申请日：	2012.01.19
公开号：	CN103215191A	公开日：	2013.07.24
当前法律状态：	授权	有效性：	有权
法律详情：	授权\|\|\|实质审查的生效IPC(主分类):C12N 1/14申请日:20120119\|\|\|公开
IPC分类号：	C12N1/14; A01G1/04; A62D3/02(2007.01)I; C12R1/645(2006.01)N; A62D101/28(2007.01)N	主分类号：	C12N1/14
申请人：	中国农业科学院农产品加工研究所
发明人：	刘阳; 王会娟; 邢福国
地址：	100193 北京市海淀区圆明园西路2号农产品加工研究所
优先权：
专利代理机构：	北京纪凯知识产权代理有限公司 11245	代理人：	关畅
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内容摘要

本发明公开了一株平菇及其在降解黄曲霉毒素中的应用。本发明提供的平菇(Pleurotus ostreatus)LY65，简称平菇LY65，保藏号为CGMCC No.5428。平菇LY65的发酵液可用于降解黄曲霉毒素B1，具有较高的降解能力，同时由于平菇菌株是可食用菌株，该发酵液对人畜无毒无害。平菇LY65及其发酵液在黄曲霉毒素B1的降解中具有良好的应用前景。

权利要求书

权利要求书
1.   平菇(Pleurotus ostreatus)LY65，它的保藏编号为CGMCC No.5428。

2.   一种制备权利要求1所述平菇(Pleurotus ostreatus)LY65的发酵液的方法，是液体培养权利要求1所述平菇(Pleurotus ostreatus)LY65，然后收集发酵液。

3.   根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述液体培养的条件为：28℃‑30℃、180rpm‑200rpm振荡培养9天‑10天。

4.   根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于：所述收集发酵液的方法如下：完成所述液体培养后离心收集上清液，即为发酵液。

5.   权利要求2至4中任一所述方法制备得到的发酵液。

6.   权利要求1所述平菇(Pleurotus ostreatus)LY65的发酵液在降解黄曲霉毒素B1中的应用。

7.   如权利要求6所述的应用，其特征在于：所述发酵液为权利要求5所述发酵液。

8.   权利要求1所述平菇(Pleurotus ostreatus)LY65在制备降解黄曲霉毒素B1的产品中的应用。

9.   权利要求6所述发酵液在制备降解黄曲霉毒素B1的产品中的应用。

10.   一种培养权利要求1所述平菇(Pleurotus ostreatus)LY65的方法，是在28℃‑30℃条件下培养5天‑6天。

说明书

说明书一株平菇及其在降解黄曲霉毒素中的应用
技术领域
本发明涉及一株平菇及其应用，特别是涉及平菇及其在降解黄曲霉毒素中的应用。
背景技术
黄曲霉毒素(Aflatoxin，AFT)是黄曲霉(A.flavus)、寄生曲霉(A.parasiticus)及特曲霉(A.nomius)等真菌产生的次级代谢产物，现已分离出AFB1、AFB2、AFG1、AFG2、AFM1、AFM2、AFB2a、AFG2a、AFBM2a及AFGM2a等18种之多，其中AFB1的毒性最强。大量的流行病学调查及研究均证实，黄曲霉毒素B1的主要靶器官是肝脏，可导致肝脏坏死、肝癌的形成。黄曲霉毒素B1还会影响动物胚胎，造成免疫抑制和反复感染，降低某些动物的产奶和产蛋量。黄曲霉毒素主要存在于玉米、花生等农作物中，严重影响我国花生及其制品的出口，给我国的出口贸易带来了巨大的损失。因此，迫切需要一种高效安全的脱毒方法消除这类毒素对人畜健康的危害。
目前，黄曲霉毒素的生物学脱毒方法主要有以下几种：
1、微生物菌体本身及其细胞壁提取物吸附去除黄曲霉毒素：
例如鼠李糖乳杆菌ATCC53103、鼠李糖乳杆菌DSM‑705、乳酸乳球菌、嗜热链球菌、干酪乳杆菌干酪亚种CGMCC 1.539及某些酿酒酵母等，上述菌株能通过物理方式与黄曲霉毒素结合，形成毒素‑菌体复合物，但如何将复合物从食品和饲料中分离去除，成为一个难题。
2、微生物代谢产生的酶降解黄曲霉毒素：
例如从嗜麦窄食单胞菌、诺卡氏菌DSM 12676、假密环菌、分枝杆菌DSM 44556T及红串红球菌中提取出的降解酶，此方法降解效率高，降解条件温和，成本低而受到越来越多的关注。
发明内容
本发明的目的是提供一株平菇及其在降解黄曲霉毒素中的应用。
本发明提供的平菇(Pleurotus ostreatus)LY65，简称平菇LY65，已于2011年11月11日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101)，保藏号为CGMCC No.5428。
平菇LY65的发酵液可用于降解黄曲霉毒素B1(AFB1)，具有较高的降解能力，同时由于平菇菌株是可食用菌株，该发酵液对人畜无毒无害。
本发明还保护一种制备平菇LY65的发酵液的方法，是液体培养平菇LY65，然后收集发酵液。所述液体培养所采用的培养基的组成具体可为：蔗糖2％、酵母提取物0.3％、(NH4)2SO40.45％、K2HPO40.3％、MgSO4·7H2O 0.1％、柠檬酸0.025％、CaCl2·2H2O0.005％、微量元素混合液10mL，其余为水；所述百分含量均为质量百分含量。所述发酵培养基的pH值可为6.3。所述微量元素混合液的制备方法具体可为：取甘氨酸7.8g、MgSO4·7H2O 12g、MnSO4·H2O 2.9g、NaCl 17g、FeSO4·7H2O 0.359g、CoCl20.775g、CaCl2·2H2O 0.9g、ZnSO4·7H2O 0.348g、CuSO4·5H2O 0.04g、KAl(SO4)2·12H2O 0.021g、H3BO30.16g、NaMoO40.041g，用蒸馏水定容至1L。所述液体培养的条件具体可为：28℃‑30℃、180rpm‑200rpm(旋转半径具体可为20mm‑26mm)振荡培养9天‑10天。所述收集发酵液的方法具体如下：完成所述液体培养后离心收集上清液，即为发酵液。所述离心的条件具体可为10000rpm离心5min。
以上任一所述方法制备得到的发酵液也属于本发明的保护范围。
所述发酵液可用于降解黄曲霉毒素B1。所述降解黄曲霉毒素B1的条件具体可为：30℃、72h。所述降解过程中，可采用200rpm振荡。
本发明还保护平菇LY65在制备降解黄曲霉毒素B1的产品中的应用。
本发明还保护所述发酵液在制备降解黄曲霉毒素B1的产品中的应用。
本发明还保护一种培养平菇LY65的方法，是在28℃‑30℃条件下培养5天‑6天。所述培养具体可采用固体GMY培养基。所述固体GMY培养基的组成为：葡萄糖1％，麦芽提取物1％，酵母提取物0.4％，琼脂1.5％，其余为水；所述百分含量均为质量百分含量。所述固体GMY培养基为自然pH。
实验证明，平菇LY65的发酵液对黄曲霉毒素B1具有很强的降解能力。平菇LY65降解黄曲霉毒素B1的实验表明，790μL发酵液可以将1000.00ng黄曲霉毒素B1降解掉790.21ng，对黄曲霉毒素B1的降解率达79.02％，黄曲霉毒素B1的浓度从1250.00ng/g降低到了262.25ng/g。
平菇LY65及其发酵液在黄曲霉毒素B1的降解中具有良好的应用前景。
附图说明
图1为平菇(Pleurotus ostreatus)LY65的平板菌落形态。
图2为平菇(Pleurotus ostreatus)LY65的液体培养形态。
具体实施方式
以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。ppb代表1ng/mL。
PDA固体培养基：去皮马铃薯20％、葡萄糖2％、琼脂1.5％，其余为水；所述“％”均代表质量百分含量。
GMY固体培养基：葡萄糖1％、麦芽提取物1％、酵母提取物0.4％、琼脂1.5％，其余为水；所述“％”均代表质量百分含量。
MSM液体培养基(pH 6.3)：蔗糖2％、酵母提取物0.3％、(NH4)2SO40.45％、K2HPO40.3％、MgSO4·7H2O 0.1％、柠檬酸0.025％、CaCl2·2H2O 0.005％、微量元素混合液10mL，其余为水；所述“％”均代表质量百分含量。
微量元素混合液的组成为：甘氨酸7.8g、MgSO4·7H2O 12g、MnSO4·H2O 2.9g、NaCl17g、FeSO4·7H2O 0.359g、CoCl20.775g、CaCl2·2H2O 0.9g、ZnSO4·7H2O 0.348g、CuSO4·5H2O 0.04g、KAl(SO4)2·12H2O 0.021g、H3BO30.16g、NaMoO40.041g，用蒸馏水定容至1L。
实施例1、平菇LY65的获得和鉴定
一、平菇LY65的获得
1、2011年3月，在超净工作台中，取不同的可食用真菌，分别接种于GMY固体培养基平板中，于30℃恒温培养箱中培养5‑6d，菌株长满整个平板，取出，放在4℃冰箱中保存备用。
2、将活化后的菌株平板用直径7mm的打孔器在平板中央打孔，取4片接种到装有100mL液体培养基的250mL三角瓶中，于30℃、200rpm培养9‑10d。然后将发酵液10000rpm离心5min，得到上清液，将上述上清液应用到降解黄曲霉毒素B1试验中，从而筛选出对黄曲霉毒素B1降解能力最好的菌株，将该菌株命名为LY65(从平菇中筛选出来的)。
二、平菇LY65的鉴定
平菇LY65的平板菌落形态见图1。平菇LY65的菌丝体在琼脂培养基上表现为浓密、洁白的气生菌丝，培养后期在气生菌丝上常出现黄色分泌物，从而出现“黄梢”现象，不形成菌皮。
平菇LY65的液体培养形态见图2。平菇LY65的菌丝体在液体培养基上表现一个个圆形的菌丝球，培养后期会在瓶壁上长出白色的气生菌丝体。
三、平菇LY65的保藏
平菇(Pleurotus ostreatus)LY65，简称平菇LY65，已于2011年11月11日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101)，保藏号为CGMCC No.5428。
实施例2、平菇LY65发酵液的制备
将平菇LY65在GMY固体培养基平板上培养5天，然后用直径7mm打孔器打孔制备成菌丝圈，取4片菌丝圈接种到100mLMSM液体培养基中，在30℃、200rpm(旋转半径26mm)的条件下振荡培养9天，取发酵体系，10000rpm离心5min，得到发酵液。
实施例3、平菇LY65发酵液对溶液中黄曲霉毒素B1的降解作用试验
黄曲霉毒素B1标准品：sigma公司货号A6636。
1、将黄曲霉毒素B1标准品溶于乙腈(色谱纯)，得到浓度为100μg/mL的黄曲霉毒素B1标准溶液。
2、移取790μL实施例2制备的发酵液(将MSM液体培养基作为发酵液的对照)和10μL浓度为100μg/mL的黄曲霉毒素B1标准溶液(发酵液和标准溶液的总体积为800μL，总质量为1g；黄曲霉毒素B1在总体系中的初始浓度为1250ng/g)，加入到1.5mL灭菌离心管中，30℃、200rpm反应72h，取样，用黄曲霉毒素B1 ELISA试剂盒(北京华安麦科生物技术有限公司HE09004‑1，具体操作完全按照说明书进行)检测反应体系中黄曲霉毒素B1的浓度。
设置三个平行处理，结果取平均值±标准差。
采用发酵液的反应体系中，黄曲霉毒素B1的浓度为262.24±22.22ng/g。
采用MSM液体培养基的反应体系中，黄曲霉毒素B1的浓度为1250±54.01ng/g。
实验结果表明，平菇(Pleurotus ostreatus)LY65的发酵液对黄曲霉毒素B1的降解能力很强，当发酵液的量为790μL，黄曲霉毒素B1的含量为1000ng时，30℃、200rpm降解72h后，该发酵液对黄曲霉毒素B1的降解率达79.02±4.18％，可使总体系中的黄曲霉毒素B1浓度从1250±54.01ng/g降低到262.24±22.22ng/g。即1.00mL平菇发酵液可以将25mL黄曲霉毒素B1浓度超过国家限量标准(20ppb)1.5倍(即浓度为50ppb的黄曲霉毒素B1)降解到10ppb，此为国家限量标准的1/2。

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1、(10)申请公布号 CN 103215191 A(43)申请公布日 2013.07.24CN103215191A*CN103215191A*(21)申请号 201210017977.5(22)申请日 2012.01.19CGMCC No.5428 2011.11.11C12N 1/14(2006.01)A01G 1/04(2006.01)A62D 3/02(2007.01)C12R 1/645(2006.01)A62D 101/28(2007.01)(71)申请人中国农业科学院农产品加工研究所地址 100193 北京市海淀区圆明园西路2号农产品加工研究所(72)发明人刘阳王会娟邢福国(74。

2、)专利代理机构北京纪凯知识产权代理有限公司 11245代理人关畅(54) 发明名称一株平菇及其在降解黄曲霉毒素中的应用(57) 摘要本发明公开了一株平菇及其在降解黄曲霉毒素中的应用。本发明提供的平菇(Pleurotus ostreatus)LY65，简称平菇LY65，保藏号为CGMCC No.5428。平菇LY65的发酵液可用于降解黄曲霉毒素B1，具有较高的降解能力，同时由于平菇菌株是可食用菌株，该发酵液对人畜无毒无害。平菇LY65及其发酵液在黄曲霉毒素B1的降解中具有良好的应用前景。(83)生物保藏信息(51)Int.Cl.权利要求书1页说明书4页附图1页(19)中华人民共和国国家知识产。

3、权局(12)发明专利申请权利要求书1页说明书4页附图1页(10)申请公布号 CN 103215191 ACN 103215191 A1/1页21.平菇(Pleurotus ostreatus)LY65，它的保藏编号为CGMCC No.5428。2.一种制备权利要求1所述平菇(Pleurotus ostreatus)LY65的发酵液的方法，是液体培养权利要求1所述平菇(Pleurotus ostreatus)LY65，然后收集发酵液。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述液体培养的条件为：28-30、180rpm-200rpm振荡培养9天-10天。4.根据权利要求2或3所述的方法，其。

4、特征在于：所述收集发酵液的方法如下：完成所述液体培养后离心收集上清液，即为发酵液。5.权利要求2至4中任一所述方法制备得到的发酵液。6.权利要求1所述平菇(Pleurotus ostreatus)LY65的发酵液在降解黄曲霉毒素B1中的应用。7.如权利要求6所述的应用，其特征在于：所述发酵液为权利要求5所述发酵液。8.权利要求1所述平菇(Pleurotus ostreatus)LY65在制备降解黄曲霉毒素B1的产品中的应用。9.权利要求6所述发酵液在制备降解黄曲霉毒素B1的产品中的应用。10.一种培养权利要求1所述平菇(Pleurotus ostreatus)LY65的方法，是在28-30条件。

5、下培养5天-6天。权利要求书CN 103215191 A1/4页3一株平菇及其在降解黄曲霉毒素中的应用技术领域0001 本发明涉及一株平菇及其应用，特别是涉及平菇及其在降解黄曲霉毒素中的应用。背景技术0002 黄曲霉毒素(Aflatoxin，AFT)是黄曲霉(A.flavus)、寄生曲霉(A.parasiticus)及特曲霉(A.nomius)等真菌产生的次级代谢产物，现已分离出AFB1、AFB2、AFG1、AFG2、AFM1、AFM2、AFB2a、AFG2a、AFBM2a及AFGM2a等18种之多，其中AFB1的毒性最强。大量的流行病学调查及研究均证实，黄曲霉毒素B1的主要靶器官是肝。

6、脏，可导致肝脏坏死、肝癌的形成。黄曲霉毒素B1还会影响动物胚胎，造成免疫抑制和反复感染，降低某些动物的产奶和产蛋量。黄曲霉毒素主要存在于玉米、花生等农作物中，严重影响我国花生及其制品的出口，给我国的出口贸易带来了巨大的损失。因此，迫切需要一种高效安全的脱毒方法消除这类毒素对人畜健康的危害。0003 目前，黄曲霉毒素的生物学脱毒方法主要有以下几种：0004 1、微生物菌体本身及其细胞壁提取物吸附去除黄曲霉毒素：0005 例如鼠李糖乳杆菌ATCC53103、鼠李糖乳杆菌DSM-705、乳酸乳球菌、嗜热链球菌、干酪乳杆菌干酪亚种CGMCC 1.539及某些酿酒酵母等，上述菌株能通过物理方式与黄曲霉毒。

7、素结合，形成毒素-菌体复合物，但如何将复合物从食品和饲料中分离去除，成为一个难题。0006 2、微生物代谢产生的酶降解黄曲霉毒素：0007 例如从嗜麦窄食单胞菌、诺卡氏菌DSM 12676、假密环菌、分枝杆菌DSM 44556T及红串红球菌中提取出的降解酶，此方法降解效率高，降解条件温和，成本低而受到越来越多的关注。发明内容0008 本发明的目的是提供一株平菇及其在降解黄曲霉毒素中的应用。0009 本发明提供的平菇(Pleurotus ostreatus)LY65，简称平菇LY65，已于2011年11月11日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北。

8、辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101)，保藏号为CGMCC No.5428。0010 平菇LY65的发酵液可用于降解黄曲霉毒素B1(AFB1)，具有较高的降解能力，同时由于平菇菌株是可食用菌株，该发酵液对人畜无毒无害。0011 本发明还保护一种制备平菇LY65的发酵液的方法，是液体培养平菇LY65，然后收集发酵液。所述液体培养所采用的培养基的组成具体可为：蔗糖2、酵母提取物0.3、(NH4)2SO40.45、K2HPO40.3、MgSO47H2O 0.1、柠檬酸0.025、CaCl22H2O0.005、微量元素混合液10mL，其余为水；所述百分含量均为质量百分含量。所述发。

9、酵培养基的说明书CN 103215191 A2/4页4pH值可为6.3。所述微量元素混合液的制备方法具体可为：取甘氨酸7.8g、MgSO47H2O 12g、MnSO4H2O 2.9g、NaCl 17g、FeSO47H2O 0.359g、CoCl20.775g、CaCl22H2O 0.9g、ZnSO47H2O 0.348g、CuSO45H2O 0.04g、KAl(SO4)212H2O 0.021g、H3BO30.16g、NaMoO40.041g，用蒸馏水定容至1L。所述液体培养的条件具体可为：28-30、180rpm-200rpm(旋转半径具体可为20mm-26mm)振荡培养9天-10天。所。

10、述收集发酵液的方法具体如下：完成所述液体培养后离心收集上清液，即为发酵液。所述离心的条件具体可为10000rpm离心5min。0012 以上任一所述方法制备得到的发酵液也属于本发明的保护范围。0013 所述发酵液可用于降解黄曲霉毒素B1。所述降解黄曲霉毒素B1的条件具体可为：30、72h。所述降解过程中，可采用200rpm振荡。0014 本发明还保护平菇LY65在制备降解黄曲霉毒素B1的产品中的应用。0015 本发明还保护所述发酵液在制备降解黄曲霉毒素B1的产品中的应用。0016 本发明还保护一种培养平菇LY65的方法，是在28-30条件下培养5天-6天。所述培养具体可采用固体GMY培养基。所。

11、述固体GMY培养基的组成为：葡萄糖1，麦芽提取物1，酵母提取物0.4，琼脂1.5，其余为水；所述百分含量均为质量百分含量。所述固体GMY培养基为自然pH。0017 实验证明，平菇LY65的发酵液对黄曲霉毒素B1具有很强的降解能力。平菇LY65降解黄曲霉毒素B1的实验表明，790L发酵液可以将1000.00ng黄曲霉毒素B1降解掉790.21ng，对黄曲霉毒素B1的降解率达79.02，黄曲霉毒素B1的浓度从1250.00ng/g降低到了262.25ng/g。0018 平菇LY65及其发酵液在黄曲霉毒素B1的降解中具有良好的应用前景。附图说明0019 图1为平菇(Pleurotus ostreat。

12、us)LY65的平板菌落形态。0020 图2为平菇(Pleurotus ostreatus)LY65的液体培养形态。具体实施方式0021 以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。ppb代表1ng/mL。0022 PDA固体培养基：去皮马铃薯20、葡萄糖2、琼脂1.5，其余为水；所述“”均代表质量百分含量。0023 GMY固体培养基：葡萄糖1、麦芽提取物1、酵母提取物0.4、琼脂1.5，其余为水；所述。

13、“”均代表质量百分含量。0024 MSM液体培养基(pH 6.3)：蔗糖2、酵母提取物0.3、(NH4)2SO40.45、K2HPO40.3、MgSO47H2O 0.1、柠檬酸0.025、CaCl22H2O 0.005、微量元素混合液10mL，其余为水；所述“”均代表质量百分含量。0025 微量元素混合液的组成为：甘氨酸7.8g、MgSO47H2O 12g、MnSO4H2O 2.9g、说明书CN 103215191 A3/4页5NaCl17g、FeSO47H2O 0.359g、CoCl20.775g、CaCl22H2O 0.9g、ZnSO47H2O 0.348g、CuSO45H2O 0.0。

14、4g、KAl(SO4)212H2O 0.021g、H3BO30.16g、NaMoO40.041g，用蒸馏水定容至1L。0026 实施例1、平菇LY65的获得和鉴定0027 一、平菇LY65的获得0028 1、2011年3月，在超净工作台中，取不同的可食用真菌，分别接种于GMY固体培养基平板中，于30恒温培养箱中培养5-6d，菌株长满整个平板，取出，放在4冰箱中保存备用。0029 2、将活化后的菌株平板用直径7mm的打孔器在平板中央打孔，取4片接种到装有100mL液体培养基的250mL三角瓶中，于30、200rpm培养9-10d。然后将发酵液10000rpm离心5min，得到上清液，将上述上清液。

15、应用到降解黄曲霉毒素B1试验中，从而筛选出对黄曲霉毒素B1降解能力最好的菌株，将该菌株命名为LY65(从平菇中筛选出来的)。0030 二、平菇LY65的鉴定0031 平菇LY65的平板菌落形态见图1。平菇LY65的菌丝体在琼脂培养基上表现为浓密、洁白的气生菌丝，培养后期在气生菌丝上常出现黄色分泌物，从而出现“黄梢”现象，不形成菌皮。0032 平菇LY65的液体培养形态见图2。平菇LY65的菌丝体在液体培养基上表现一个个圆形的菌丝球，培养后期会在瓶壁上长出白色的气生菌丝体。0033 三、平菇LY65的保藏0034 平菇(Pleurotus ostreatus)LY65，简称平菇LY65，已于20。

16、11年11月11日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101)，保藏号为CGMCC No.5428。0035 实施例2、平菇LY65发酵液的制备0036 将平菇LY65在GMY固体培养基平板上培养5天，然后用直径7mm打孔器打孔制备成菌丝圈，取4片菌丝圈接种到100mLMSM液体培养基中，在30、200rpm(旋转半径26mm)的条件下振荡培养9天，取发酵体系，10000rpm离心5min，得到发酵液。0037 实施例3、平菇LY65发酵液对溶液中黄曲霉毒素B1的降解作用试验0038 黄曲霉毒。

17、素B1标准品：sigma公司货号A6636。0039 1、将黄曲霉毒素B1标准品溶于乙腈(色谱纯)，得到浓度为100g/mL的黄曲霉毒素B1标准溶液。0040 2、移取790L实施例2制备的发酵液(将MSM液体培养基作为发酵液的对照)和10L浓度为100g/mL的黄曲霉毒素B1标准溶液(发酵液和标准溶液的总体积为800L，总质量为1g；黄曲霉毒素B1在总体系中的初始浓度为1250ng/g)，加入到1.5mL灭菌离心管中，30、200rpm反应72h，取样，用黄曲霉毒素B1ELISA试剂盒(北京华安麦科生物技术有限公司HE09004-1，具体操作完全按照说明书进行)检测反应体系中黄曲霉毒素B1的。

18、浓度。0041 设置三个平行处理，结果取平均值标准差。0042 采用发酵液的反应体系中，黄曲霉毒素B1的浓度为262.2422.22ng/g。0043 采用MSM液体培养基的反应体系中，黄曲霉毒素B1的浓度为125054.01ng/g。说明书CN 103215191 A4/4页60044 实验结果表明，平菇(Pleurotus ostreatus)LY65的发酵液对黄曲霉毒素B1的降解能力很强，当发酵液的量为790L，黄曲霉毒素B1的含量为1000ng时，30、200rpm降解72h后，该发酵液对黄曲霉毒素B1的降解率达79.024.18，可使总体系中的黄曲霉毒素B1浓度从125054.01ng/g降低到262.2422.22ng/g。即1.00mL平菇发酵液可以将25mL黄曲霉毒素B1浓度超过国家限量标准(20ppb)1.5倍(即浓度为50ppb的黄曲霉毒素B1)降解到10ppb，此为国家限量标准的1/2。说明书CN 103215191 A1/1页7图1图2说明书附图CN 103215191 A。

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