治疗口腔溃疡、胃溃疡、烧烫伤、外伤感染的药物及制备方法.pdf

本发明涉及一种治疗口腔溃疡、胃溃疡、烧烫伤、外伤感染(疮疖)的药物，利用黄蜀葵花总黄酮提取物作为药物活性成分。本发明提供了黄蜀葵花总黄酮提取物的提取制备方法及黄蜀葵花总黄酮提取物不同制剂的制备方法。

1.  一种治疗口腔溃疡、胃溃疡、烧烫伤、外伤感染(疮疖)的药物，其特征在于所述的中药制剂是由黄蜀葵花中提取黄蜀葵花总黄酮提取物制备而成。

2.  权利要求1所述的黄蜀葵花总黄酮提取物的制备方法，其特征在于所述制剂的工艺流程为：将黄蜀葵花用10～95％乙醇提工艺进行提取，将黄蜀葵花用10～95％乙醇提工艺进行提取1～2次，每次提取时间1～4小时，醇提液浓缩成浓缩液后水沉，水沉液滤过，浓缩成浓缩液(d＝1.13～1.16，60℃)；或醇提液减压回收乙醇，浓缩成浓缩液(d＝1.13～1.16，60℃)；将上述两种浓缩液加水稀释后通过以下三种柱层析分离提取有效部位，1.提取液通过大孔吸附树脂柱，采用醇水梯度洗脱[水～(10％～90％乙醇)]，洗脱液浓缩、干燥、粉碎后得到总黄酮含量在5～95％的黄蜀葵花总黄酮提取物；2.提取液通过聚酰胺柱，采用醇水梯度洗脱[水～(10％～90％乙醇)]，洗脱液浓缩、干燥、粉碎后得到总黄酮含量在5～95％的黄蜀葵花总黄酮提取物；3.提取液通过硅胶柱，采用氯仿-甲醇梯度洗脱，洗脱液浓缩、干燥、粉碎后得到总黄酮含量在5～95％的黄蜀葵花总黄酮提取物。

3.  权利要求1及权利要求2制剂过程中所述的黄蜀葵花总黄酮提取物，其成分包括：金丝桃苷(hyperin)0.5％～95％、杨梅素(myricetin)0.5％～95％、槲皮素(quercetin)0.5％～95％、槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖(1-6)-β-D-半乳糖(quercet in-3-O-α-L-rhamno-pyranosy(1-6)-β-D-galacto-pyranoside)0.5％～95％、槲皮素-3｀-葡萄糖苷(quercetin-3｀-glucoside)0.5％～95％，以及其他十几种黄酮类成分。

4.  权利要求1所述的中药制剂，其特征在于是由总黄酮含量为5～95％黄蜀葵花总黄酮提取物，通过加入各种辅料，制成片剂、胶囊剂、颗粒剂、滴丸、软胶囊、口服液、溶液剂、糖浆剂、注射液、贴片剂、膜剂、喷雾剂、粉雾剂、凝胶剂、软膏剂、口服及外用剂型，加入的辅料有卡波姆、卡波姆钠盐、羟丙甲纤维素、乙基纤维素、淀粉、微晶纤维素、硬脂酸镁、糊精乳糖、碳酸镁、氧化镁、吐温80、甘油、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇、亚硫酸钠、硫代硫酸钠、葡萄糖、滑石粉、甲基纤维素、羟甲基纤维素、苯甲酸、山梨酸、尼泊金乙酯。

治疗口腔溃疡、胃溃疡、烧烫伤、外伤感染的药物及制备方法
技术领域：
本发明属于中药制剂领域，涉及一种治疗口腔溃疡、胃溃疡、烧烫伤、外伤感染(疮疖)的药物，同时涉及制备该药物的中间体黄蜀葵花总黄酮提取物地制备方法，以及黄蜀葵花总黄酮提取物各种制剂的制备方法。其剂型包括片剂、贴片剂、膜剂、喷雾剂、凝胶剂、散剂、溶液剂、粉雾剂、胶囊剂、滴丸、软胶囊、颗粒剂、糖浆剂、口服液、注射液以及其他剂型。
背景技术：
口腔溃疡，中医称为口疮，为口腔粘膜疾病中最常见的疾病，其临床表现为口腔粘膜反复出现孤立的圆形或椭圆形的浅表性溃疡，以局部有明显的灼热疼痛为口疮主症，并且口疮可发生于口腔粘膜任何部位。目前临床上经常使用西药一般是对症或免疫药物治疗，其复发率较高，疗效较差。如意可贴、西咪替丁，表皮生长因子等，其疗效均不十分理想。烧烫伤是由于外界物理化学因素对人体体表皮肤及粘膜造成急性损伤的疾病，其临床表现为创面疼痛红肿，创面感染等。胃溃疡是消化系统常见的疾病，属于祖国医学的“胃脘痛”等范畴，其临床表现为上腹部疼痛，胃粘膜损伤或局部胃粘膜缺血坏死而致溃疡。西药治疗副作用较大，长期服用也会对身体其它器官产生危害，并且不能根除，易于复发。因此应用中医中药治疗口腔溃疡、烧烫伤、胃溃疡、外伤感染(疮疖)是医学领域一项重要的课题。近年来，中医药在治疗口腔溃疡、胃溃疡、烧烫伤、外伤感染(疮疖)等方面已有很大的进展。
黄蜀葵花为锦葵科植物黄蜀葵Abelmoschus manihot(L.)Medic的干燥花，又名秋葵、甲花、侧金盏、水棉花等，古代为著名的一种观赏花卉，作为药用始于宋代，其味甘、辛，性凉。我国古代医药学家对黄蜀葵花的功用有详细的阐述。《嘉佑本草》记载黄蜀葵花“甘、寒、滑、无毒，主治小便淋及催生，治诸恶疮、脓水久不痤者，作末敷之即愈，为疮家要药。”《本草纲目》：“消痈肿，浸油，涂汤火伤。”《本草衍义》：“疮家为要药”。《四川常用中医药》：“下乳，排脓，通血脉，解疮毒。治烫伤”。我国古代也有用黄蜀葵花治疗口腔溃疡的记载，《直指方》：小儿口疮，烧末敷之，具有良好的清热利湿解毒功效。据现代药理实验文献报道该药具有明显的抗炎，抗菌，镇痛，促进愈合等药理作用。实验表明黄蜀葵花乙醇提取物对金黄色葡萄球菌，表皮葡萄球菌等革兰氏阳性菌及阴性菌均有很好的抑菌效果；并表明黄蜀葵花治疗口腔溃疡、烧烫伤、胃溃疡、外伤感染(疮疖)有其科学的理论基础。
发明内容：
本发明的目的在于利用黄蜀葵花研究一种新的药物，将其作为治疗口腔溃疡、胃溃疡、烧烫伤、外伤感染(疮疖)的药物。
本发明的另一目的在于提供从黄蜀葵花中提取分离用于治疗口腔溃疡、胃溃疡、烧烫伤、外伤感染(疮疖)的总黄酮有效部位的提取制备方法。
本发明的又一目的在于提供该黄蜀葵花总黄酮提取物制备成各种口服及外用剂型的制备方法。
本发明的技术方案是：将黄蜀葵花用10～95％醇提工艺进行提取1～2次，提取时间1～4小时，醇提液浓缩成浓缩液后水沉，滤过，浓缩成浓缩液(d＝1.13～1.16，60℃)；或醇提液减压回收乙醇，浓缩成浓缩液(d＝1.13～1.16，60℃)；将上述两种浓缩液加水稀释后通过以下三种柱层析分离提取有效部位，1.提取液通过大孔吸附树脂柱，采用醇水梯度洗脱[水～(10％乙醇～90％乙醇)]，洗脱液浓缩、干燥、粉碎后得到黄蜀葵花提取物，总黄酮含量为5～95％；2.提取液通过聚酰胺柱，采用醇水梯度洗脱[水～(10％乙醇～90％乙醇)]，洗脱液浓缩、干燥、粉碎后得到总黄酮提取物，总黄酮含量为5～95％；3.提取液拌样后通过硅胶柱，采用氯仿-甲醇梯度洗脱，洗脱液浓缩、干燥、粉碎后得到总黄酮提取物，总黄酮含量为5～95％；总黄酮提取物通过加入辅料和防腐剂制成片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、滴丸、软胶囊、糖浆剂、注射液、溶液剂、凝胶剂、喷雾剂、粉雾剂、贴片剂、膜剂等制剂。本发明不同剂型中加入的不同辅料，并不影响本发明的临床效果，这些辅料包括卡波姆、卡波姆钠盐、羟丙甲纤维素、乙基纤维素、淀粉、微晶纤维素、硬脂酸镁、糊精、乳糖、碳酸镁、氧化镁、吐温80、甘油、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇、亚硫酸钠、硫代硫酸钠、葡萄糖、滑石粉、甲基纤维素、羟甲基纤维素、苯甲酸、山梨酸、尼泊金乙酯(甲酯)等。因此本发明可以满足广大口腔溃疡、胃溃疡、烧烫伤、外伤感染(疮疖)患者对不同剂型的要求。
本发明技术方案中，从黄蜀葵花中所得到的总黄酮含量为5～95％的黄蜀葵花提取物，其提取分离制备工艺不仅局限于上述工艺，亦可采用其他提取分离手段得到。
利用上述工艺得到的黄蜀葵花总黄酮提取物中的总黄酮含量为5～95％，经检测其各组成成分如下：
1.黄蜀葵花总黄酮提取物经反复硅胶柱层析、聚酰胺柱层析、重结晶得到如金丝桃苷(hyperin)、杨梅素(myricetin)、槲皮素(quercetin)、槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖(1-6)-β-D-半乳糖(quercetin-3-O-α-L-rhamno-pyranosy(1-6)-β-D-galactopyranoside)、槲皮素-3`-葡萄糖苷(quercetin-3`-glucoside)等黄酮及其苷类化合物。
2.黄蜀葵花总黄酮总黄酮提取物干燥后，总黄酮含量按《中国药典》2000年版一部第292页[含量测定]项下方法测定，本品含总黄酮(以芦丁计)为5～95％。
2.1黄蜀葵花总黄酮提取物干燥后，经测定金丝桃苷(hyperoside)含量在0.5％～95％。
2.2黄蜀葵花总黄酮提取物干燥后，经测定杨梅素(myricetin)含量在0.5％～95％。
2.3黄蜀葵花总黄酮提取物干燥后，经测定槲皮素(quercetin)含量在0.5％～95％。
2.4黄蜀葵花提取物干燥后，经测定槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖(1-6)-β-D-半乳糖(quercetin-3-O-α-L-rhamno-pyranosy(1-6)-β-D-galacto-pyranoside)含量在0.5％～95％。
2.5黄蜀葵花提取物干燥后，经测定槲皮素-3′-葡萄糖苷(quercetin-3′-glucoside)含量在0.5％～95％。
另外还包括十余种其他黄酮及其苷类成分。部分化学成分结构式如下：

           槲皮素                                              杨梅素

           金丝桃苷                                       槲皮素-3′-葡萄糖苷

         槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖(1-6)-β-D-半乳糖
本发明的使用方法：口服，每日1～2次，每次1～2片片剂(或2～4粒胶囊；1～2支口服液)；注射液每日一次，每次1～2支；外用每日2～3次，每次1～2片膜剂，或1～2片贴片剂，或每日喷于患处多次，或每日涂于患处多次，或将散剂敷于患处。
下面用药理实验结果阐明其药效作用：
1.观察黄蜀葵花总黄酮提取物对醋酸致伤、机械损伤和细菌感染建立的三种兔口腔溃疡模型的药效作用。实验结果见表。
                    表1  不同给药时间醋酸致溃疡缩小百分率(％)
组别                  给药3天     给药6天     给药9天
总黄酮阴性对照        13.5        36.8        63.5
总黄酮阳性对照        34.1        59.9        87.3
总黄酮大剂量组        35.2        64.6        86.0
总黄酮中剂量组        23.0        53.5        72.5
总黄酮小剂量组        26.9        47.9        73.4
                      表2  不同给药时间机械致溃疡缩小百分率(％)
                  动物数       药后     药后     药后     药后     药后
组别
                  (只)         2天      3天      4天      5天      6天
阴性对照          5            23.8     49.8     75.6     93.7     99.7
阳性对照          5            50.4     81.3     94.0     99.5     100
总黄酮大剂量组    5            45.2     75.4     91.7     99.5     100
总黄酮中剂量组    5            45.2     73.5     91.1     99.4     99.5
总黄酮小剂量组    5            35.0     61.3     79.9     95.5     99.6
               表3不同给药时间细菌致溃疡缩小百分率(％)
                  给药        给药      给药      给药      给药      给药       给药
组别
                  2天         3天       4天       5天       6天       7天        8天
阴性对照          16.4        35.6      49.7      70.6      84.2      88.7       92.1
阳性对照          35.8        50.9      85.6      98.3      99.3      100.0      100.0
总黄酮大剂量组    34.9        57.8      83.7      91.6      97.6      100.0      100.0
总黄酮中剂量组    18.7        32.3      66.7      91.9      96.5      98.0       99.0
总黄酮小剂量组    6.8         15.2      50.3      79.1      87.4      92.7       93.7
药理实验结果表明黄蜀葵花总黄酮提取物对三种家兔口腔溃疡模型均有明显的治疗作用(P＜0.05)。
2.采用平皿二倍稀释法测定了黄蜀葵花提取物对临床分离的90株细菌进行了抗菌抑菌试验。结果见表4。
                       表4总黄酮提取物对90株细菌的MIC测定
                                         MIC范围     MIC50     MIC90
细菌               株数  药物
                                         (mg/ml)     (mg/ml)   (mg/ml)
金黄色葡萄球菌     20    总黄酮提取物    0.03125-4   0.5       4
                         西瓜霜          0.25-16     4         16
表皮葡萄球菌       10    总黄酮提取物    0.0625-8    1         4
                         西瓜霜          0.125-16    1         8
大肠杆菌           20    总黄酮提取物    0.015625-8  0.5       4
                         西瓜霜          0.25-16     4         16
绿脓杆菌           20    总黄酮提取物    1-64        8         64
                         西瓜霜          4-64        16        64
变形杆菌           15    总黄酮提取物    0.25-16     4         16
                         西瓜霜          0.0625-4    2         4
克氏肺炎杆菌       15    总黄酮提取物    0.5-16      4         16
                         西瓜霜          0.2-32      16        32
抗菌试验结果显示黄蜀葵花总黄酮提取物对实验中的革兰氏阳性及阴性菌均具有较强的杀灭或抑制作用，抗菌谱较为广泛。
3.采用热板法和小鼠扭体法测定了黄蜀葵花总黄酮提取物的镇痛作用。结果见表5。
                    表5.对小鼠热板致痛的影响(n＝10)
                  剂量        药后不同时间(秒钟) 痛阈值(s，X±SD)
组别
                  (mg/kg)     90              120             150
阴性对照          -           19.3±4.74      18.8±3.52      20.1±4.31
阳性对照          500         25.6±7.23^*    23.8±5.35^*   20.6±3.13
总黄酮大剂量组    500         28.0±9.60^*    24.1±6.26^*   22.1±4.56
总黄酮中剂量组    250         25.4±6.57^*    23.7±4.60^*   20.7±4.03
总黄酮小剂量组    125         21.8±4.52      21.1±4.53      21.0±5.19
                     ^*分别与空白对照组相比P＜0.05
结果表明黄蜀葵花总黄酮提取物具有一定的镇痛作用。
综上所述，黄蜀葵花提取物可以明显的促进溃疡面的愈合，并具有较好的抑菌作用和一定的镇痛作用，从而对口腔溃疡、胃溃疡、烧烫伤、外伤感染(疮疖)具有良好的治疗作用。
附图说明：
附图为黄蜀葵花总黄酮提取物高效液相图。
具体实施方式：
下面通过具体实施例对黄蜀葵花提取物的提取方法作进一步详述。
实施例1：
将黄蜀葵花20kg置提取罐中，加80％乙醇15倍量，提取二次，每次1小时，合并提取液，滤过，滤液浓缩成相对密度为1.13～1.16(60℃)的浓缩液；加入适量水稀释，通过大孔吸附树脂柱，采用醇水梯度洗脱，水洗脱3个柱体积，10％及30％乙醇各洗脱3个柱体积，70％乙醇洗脱1个柱体积。洗脱液浓缩、干燥、粉碎后得到总黄酮提取物，其总黄酮含量为5～95％。
实施例2：
将黄蜀葵花20kg置提取罐中，加70％乙醇适量，提取二次，每次1小时，合并提取液，滤过，滤液浓缩成相对密度为1.13～1.16(60℃)的浓缩液，加适量水水沉24h，抽滤，浓缩至相应体积，通过大孔吸附树脂柱，采用醇水梯度洗脱，水洗脱3个柱体积，10％及30％乙醇各洗脱3个柱体积，70％乙醇洗脱1个柱体积。洗脱液浓缩、干燥、粉碎后得到总黄酮提取物，其总黄酮含量为5～95％。
实施例3：
将黄蜀葵花20kg置提取罐中，加60％乙醇20倍量，提取二次，每次1小时，合并提取液，滤过，滤液浓缩成相对密度为1.13～1.16(60℃)的浓缩液，加适量水水沉24h，抽滤，浓缩至相应体积，通过聚酰胺柱，采用醇水梯度洗脱，水洗脱3个柱体积，10％及30％乙醇各洗脱3个柱体积，70％乙醇洗脱1个柱体积。洗脱液浓缩、干燥、粉碎后得到总黄酮提取物，其总黄酮含量为5～95％。
实施例4：
将黄蜀葵花20kg置提取罐中，加90％乙醇14倍量，提取二次，每次2小时，合并提取液，滤过，滤液浓缩成相对密度为1.13～1.16(60℃)的浓缩液，加适量水水沉24h，抽滤，浓缩至稠膏，拌样，采用硅胶柱层析，采用氯仿-甲醇(0.5∶99.5～50∶50)梯度洗脱，洗脱液浓缩、干燥、粉碎后得到总黄酮提取物，其总黄酮含量为5～95％。
实施例5：片剂
将上述各实施例中任何一黄蜀葵花总黄酮提取物干粉加入230g淀粉，混匀，制粒，过筛，加2g硬脂酸镁，混匀，压片，即为本发明的片剂。
实施例6：胶囊剂
将上述各实施例中任何一黄蜀葵花总黄酮提取物干粉加入230g淀粉，混匀，制粒，过筛，装胶囊，即为本发明的胶囊剂。
实施例7：颗粒剂
将上述各实施例中任何一黄蜀葵花总黄酮提取物干粉加入乳糖100g，糊精300g，制粒，整粒，过筛，制成颗粒，即成本发明的颗粒剂。
实施例8：散剂
将上述各实施例中任何一黄蜀葵花总黄酮提取物干粉研细，加入50g糊精，过筛，即成本发明的散剂。
实施例9：溶液剂
取上述各实施例中任何一黄蜀葵花总黄酮提取物干粉研细，加蒸馏水100ml，加甘油50g，搅拌使溶，再加入适量蒸馏水，即成本发明的溶液剂。
实施例10：糖浆剂
取上述各实施例中任何一黄蜀葵花总黄酮提取物干粉研细，加蒸馏水100ml，加甘油50g，搅拌使溶，加单糖浆至1000ml，即成本发明的糖浆剂。
实施例11：注射液
将上述各实施例中任何一黄蜀葵花总黄酮提取物中，加入600ml蒸馏水，水沉(0～-2℃)48小时，微孔滤膜滤过，灌装，即为本发明的注射液。
实施例12：贴片剂
将上述各实施例中任何一黄蜀葵花总黄酮提取物干粉加入200g羟丙甲纤维素、100g卡波姆、100g卡波姆钠盐，混匀，制粒，烘干，过筛，加入3.0g硬脂酸镁，混匀，压片，二次压片，压制隔离层，即为本发明的贴片
实施例13：膜剂
将上述各实施例中任何一黄蜀葵花总黄酮提取物干粉中加入1％卡波姆，2％羟丙甲纤维素，2％羧甲基纤维素钠，5％甘露醇，5％聚乙二醇，制膜，即成本发明的膜剂。
实施例14：凝胶剂
将上述各实施例中任何一黄蜀葵花总黄酮提取物干粉中加入PEG-400、甘油、交联型聚丙烯酸钠、水至研钵中，研匀后加水至1000g，即成本发明的膜剂。
实施例15：喷雾剂
将上述各实施例中任何一黄蜀葵花提取物干粉中加入丙二醇50ml，无菌蒸馏水500ml，充分混匀，装入喷雾器或雾化器中，即成本发明的喷雾剂。
实施例16：粉雾剂
将上述各实施例中任何一黄蜀葵花提取物干粉中加入润滑剂，混匀，装入粉末雾化器，即成本发明的粉雾剂。