含有灵芝活性成分的红曲制剂及其制备方法 【技术领域】
本发明属于保健食品组分的改进，尤其涉及液体发酵技术领域。
背景技术
红曲是利用自然界中存在的真菌红曲霉(Monascus sp.，包括红曲霉和紫红曲霉)所生产的曲，因其为深红色，并生成红色色素，所以自古以来即称之为红曲。红曲在我国已有上千年的应用历史，传统上被用于色素、食品发酵和酒类酿造，广泛地用于饮料、食品、化妆品等领域中。据《本草纲目》记载，红曲具有“消食活血，健脾燥胃”的功能。近代研究发现，红曲具有许多药效：调节血脂，降血糖，抗菌，防癌，增强免疫力，抗发炎及抗氧化，降血压作用，减少老年痴呆症等。我国高血脂的患病率高达7％以上，且呈逐年增高的趋势。目前，对高血脂的控制主要以西药为主，降血脂的同时也带来严重的毒副作用，如血脂紊乱、肝肾功能损坏等。血脂偏高人群中有很大一部分人因惧怕服药产生的毒副作用而抗拒用药，使高血脂得不到控制，最终造成悲剧的发生。近年，我国研制出一些以红曲为原料的降血脂药品，如成都地奥的“脂必妥”药品，主要成分是红曲菌种大米固态发酵得到的红曲米粉。目前国内红曲类保健品的功能以降血脂为主，多为采用红曲菌种固态发酵生产得到的红曲米粉，如：“东方红曲片”、北大维信的“红曲降脂片”、红佛林胶囊等。少数有红曲发酵液或与其他成分勾兑的液体制剂，如：江苏省军区运西农场的红曲保健酒等。红曲作为调节血脂保健食品，可以长期服用，使绝大部分血脂偏高的人能得到很好地控制。
国内外红曲多采用固态发酵生产，存在许多缺点，如生产周期长、生产劳动量大、生产规模不易扩大、生物活性物质分离提取较难、且不易测定等。
灵芝是中国传统保健食品，自古以来就被认为是吉祥、富贵、美好、长寿的象征，有“仙草”、“瑞草”之称，中华传统医学长期以来一直视其为滋补强壮、固本扶正的珍贵中草药。民间传说灵芝有起死回生、长生不老之功效。《神农本草经》中将灵芝列为上品，认为“久食，轻身不老，延年神仙”。《本草纲目》中记载：灵芝味苦、平，无毒，益心气，活血，入心充血，助心充脉，安神，益肺气，补肝气，补中，增智慧，好颜色，利关节，坚筋骨，祛痰，健胃。现代医学证明：灵芝含有多种生理活性物质，具有较好的保护肝脏、增强免疫、抗辐射、耐缺氧、抗衰老等作用。
我国以灵芝为主要成分的保健食品产品众多，多为提取法制备，例如：中华灵芝宝、“中科”灵芝孢子油、灵芝破壁孢子冲剂、灵芝茶、灵芝胶囊等，功能主要为免疫调节、抗衰老。
【发明内容】
本发明的目的是提供含有灵芝活性成分的红曲制剂及其制备方法，使其产品具有灵芝的保肝护肝功能和红曲的降血脂功能，且功效较单一的灵芝或红曲产品更加显著；并使制备方法具有工艺简单可行，使所有原料能得到充分利用，获得多种制剂产品，同时满足产品质量的要求。
本发明提供的含有灵芝活性成分的红曲制剂的特点为，该制剂是由含有灵芝活性成分的红曲发酵物制成，其主要功效成份粗多糖≥4mg/100g、总黄酮≥3mg/100g、洛伐他汀≥0.1mg/100g；能制成下列任一种剂型：口服液、软胶囊剂、粉(散)剂、胶囊剂、片剂、蜜丸剂、膏剂、食品添加剂。
本发明所述各种剂型中主要功效成份含量为：
口服液：粗多糖≥5mg/100g、总黄酮≥4mg/100g、洛伐他汀≥0.15mg/100g；
软胶囊剂：粗多糖≥9mg/100g、总黄酮≥7mg/100g、洛伐他汀≥0.25mg/100g；
粉(散)剂：粗多糖≥8mg/100g、总黄酮≥6mg/100g、洛伐他汀≥0.2mg/100g；
胶囊剂：粗多糖≥8mg/100g、总黄酮≥6mg/100g、洛伐他汀≥0.2mg/100g；
片剂：粗多糖≥7mg/100g、总黄酮≥5mg/100g、洛伐他汀≥0.15mg/100g；
蜜丸剂：粗多糖≥5mg/100g、总黄酮≥4mg/100g、洛伐他汀≥0.13mg/100g；
膏剂：粗多糖≥4mg/100g、总黄酮≥3mg/100g、洛伐他汀≥0.1mg/100g；
食品添加剂：粗多糖≥4mg/100g、总黄酮≥3mg/100g、洛伐他汀≥0.1mg/100g。
本发明所述的含有灵芝活性成分的红曲制剂的两种制备方法，都需获取含有灵芝活性物质的原料，可以是灵芝粉、灵芝水提液、灵芝发酵液的任一种。其特点在于：
①按重量/体积比配制红曲发酵罐培养基，其组成有：灵芝活性物原料，硝酸钠0.1-0.5％，磷酸二氢钾0.1-0.25％，七水磷酸镁0.1-0.25％，其余体积以水补足；经灭菌后接入红曲菌种子，26-27℃培养5-8天，在pH值7-8时终止发酵，发酵液过滤后分别得到液体和固体产品，准备用于制剂。其中，灵芝活性物原料的重量可以采用灵芝粉为4-6％、灵芝水提液为80-90％、灵芝发酵液为80-90％的任一种形式。
②按重量/体积比配制红曲发酵罐培养基，其组成有：大米粉1-5％，硝酸钠0.3-0.5％，磷酸二氢钾0.2-0.35％，七水磷酸镁0.2-0.3％，其余体积以水补足；经灭菌后接入红曲菌种子，26-27℃培养5-8天，得到红曲发酵液；按1∶1与灵芝水提液或灵芝发酵液混合，搅拌均匀，过滤后分别得到液体和固体产品，准备用于制剂。
按本发明上述方法得到含有灵芝活性成分红曲发酵物的液体和固体产品，可制备下述任一种红曲制剂：
a、在液体产品中按0.1-0.25mg/g加入安赛蜜，分装灭菌，得到红曲口服液，主要功效成分含量：粗多糖≥5mg/100g，总黄酮≥4mg/100g、洛伐他汀≥0.15mg/100g；
b、将液体产品真空浓缩，灭菌后包封于软胶囊中，得到红曲软胶囊剂，主要功效成分含量：粗多糖≥9mg/100g，总黄酮≥7mg/100g、洛伐他汀≥0.25mg/100g；
c、将固体产品干燥粉碎，过80-100目筛，筛下的粉末分装，得到红曲粉(散)剂，主要功效成分含量：粗多糖≥8mg/100g，总黄酮≥6mg/100g、洛伐他汀≥0.2mg/100g；
d、将固体产品干燥粉碎过筛，粉末分装于胶囊中，得到红曲胶囊剂，主要功效成分含量：粗多糖≥8mg/100g，总黄酮≥6mg/100g、洛伐他汀≥0.2mg/100g；
e、将固体产品干燥粉碎过筛，在粉末中加入淀粉1-3％，压制红曲片剂，主要功效成分含量：粗多糖≥7mg/100g，总黄酮≥5mg/100g、洛伐他汀≥0.15mg/100g；
f、将固体产品干燥粉碎过筛，在粉末中加入淀粉2-3％和蜂蜜，制成红曲蜜丸剂，主要功效成分含量：粗多糖≥5mg/100g，总黄酮≥4mg/100g、洛伐他汀≥0.13mg/100g；
g、将蜂蜜微火煮至蜡黄色，按1∶1重量加入固体产品粉末搅匀制成红曲膏剂，主要功效成分含量：粗多糖≥4mg/100g，总黄酮≥3mg/100g、洛伐他汀≥0.1mg/100g；
h、将液体产品分装灭菌，得到液体食品添加剂，主要功效成分含量：粗多糖≥4mg/100g，总黄酮≥3mg/100g、洛伐他汀≥0.1mg/100g。
本发明所制备的红曲制剂，除用于保健食品、食品添加剂外，进一步提纯精制，确定所有成分及含量后，可开发用于药品。
本申请人按上述方法，以灵芝发酵液为原料进行紫红曲发酵得到的“灵芝红”口服液制剂，经试服具有降血脂和保肝护肝功能。经检测功效成分含量为：
总黄酮：≥9mg/100g，辅助调节血脂功能；
洛伐他汀(Lovastatin)：≥0.3mg/100g，辅助调节血脂功能；
不饱和脂肪酸：≥30mg/100g，辅助调节血脂功能；
粗多糖：≥10mg/100g，对化学性肝损伤有辅助保护功能。
动物实验结果表明：‘灵芝红’连续经口给予动物30天后，能显著降低大鼠血清中谷丙转氨酶的含量达35％；能显著降低血清总胆固醇、甘油三脂。人体试食实验结果表明：‘灵芝红’降总胆固醇有效率为83.9％、降甘油三脂有效率为85.7％、降血脂有效率为75.0％，受试者血清总胆固醇、甘油三脂明显降低。而对比实验结果表明：单一的灵芝制剂降低大鼠血清中谷丙转氨酶的含量在10-30％，单一的红曲制剂降低人体甘油三脂有效率在30-80％。
本发明利用现代生物技术制成的含有灵芝活性成分的红曲制剂，工艺先进、简单可行，不但具有灵芝、红曲产物的多种生理活性物质，更产生一些其他营养元素和物质；经初步检测，富含有大量多糖、黄酮、洛伐他汀、不饱和脂肪酸、蛋白质、氨基酸、r-氨基丁酸、微量元素等，功效较单一的灵芝或红曲更佳。
现代医学研究证明，许多物质包括脂质和脂蛋白等是在肝脏进行加工、生产和分解、排泄的。一旦肝脏有病，则脂质和脂蛋白也必将发生紊乱。本发明兼具红曲的降血脂等功能及灵芝的保肝护肝等功能，将两者有机地结合，使其功能相辅相成，产品新颖，不同于传统的红曲或灵芝，更具有市场潜力。目前我国已经进入老龄化社会，老龄人口已达到12％，高血脂人群且呈逐年增高的趋势，尤其是对一些轻度高血脂患者，本发明存在有巨大的市场。
【具体实施方式】
含有灵芝活性物质的获取方法有三种：
a、灵芝粉：将灵芝子实体切成薄片，干燥粉碎成粉状，多糖含量0.2％。
b、灵芝水提液：100g灵芝子实体粉碎成绿豆大小，用1升水80℃浸泡1小时过滤，为第一次提取液；向残渣中再加水1升，80℃浸泡3小时，将两次的提取液合并，得到灵芝水提液。
c、灵芝发酵液：配制发酵罐培养基(各组分重量比：蔗糖4％，葡萄糖2％，磷酸二氢钾0.1％，硫酸镁0.1％，酵母粉0.4％，其余体积加水补足)，经灭菌后接入灵芝菌种子，发酵罐27℃培养4天，pH3-4时终止发酵，得到灵芝发酵液。
以下实例中所用的紫红曲菌种购于中科院微生物研究所，经扩大培养后得到液体种子。以下实施例中各原料与各方法的组合且不局限于此。
实施例1：制备红曲口服液
配制发酵罐培养基(按1升配比：大米粉20g，硝酸钠5g，磷酸二氢钾2g，七水磷酸镁2g，其余体积加水补足)灭菌；将紫红曲种子接入发酵罐，27℃培养5天，得到红曲发酵液。将灵芝发酵液按1∶1体积加入，充分搅拌均匀，过滤得到滤液和固体物。滤液中按0.25mg/g加入安赛蜜，分装灭菌，得到红曲口服液，主要功效成分含量：粗多糖5mg/100g，总黄酮4.5mg/100g、洛伐他汀0.16mg/100g。
实施例2：制备红曲口服液
配制发酵罐培养基(按1升配比：灵芝发酵液800g，硝酸钠4g，磷酸二氢钾1g，七水磷酸镁2g，其余体积加水补足)灭菌；将紫红曲种子接入发酵罐，26℃培养7天。发酵液过滤，得到滤液和固体物。滤液中按0.1mg/g加入安赛蜜，分装灭菌，得到红曲口服液，主要功效成分含量：粗多糖10mg/100g，总黄酮9mg/100g、洛伐他汀0.30mg/100g。
实施例3：制备红曲口服液
配制发酵罐培养基(按1升配比：灵芝粉50g，硝酸钠3.5g，磷酸二氢钾2g，七水磷酸镁1.5g，其余体积加水补足)灭菌；将紫红曲种子接入发酵罐，27℃培养6天。发酵液过滤，得到滤液和固体物。滤液中按0.2mg/g加入安赛蜜，分装灭菌，得到红曲口服液，主要功效成分含量：粗多糖6.5mg/100g，总黄酮5.4mg/100g、洛伐他汀0.17mg/100g。
实施例4：制备红曲软胶囊剂
配制发酵罐培养基(按1升配比：大米粉30g，硝酸钠4g，磷酸二氢钾2g，七水磷酸镁2.5g，其余体积加水补足)灭菌；将紫红曲种子接入发酵罐，27℃培养5天，得到红曲发酵液。按1∶1加入灵芝水提液，充分搅拌均匀，过滤得到滤液和固体物。滤液真空浓缩一倍，灭菌后包封于软胶囊中，得到红曲软胶囊剂，主要功效成分含量：粗多糖9.5mg/100g，总黄酮7mg/100g、洛伐他汀0.25mg/100g。
实施例5：制备红曲粉(散)
将实施例1、2、3、4得到的固体物混合，置于恒温箱60℃烘干，粉碎过80-100目筛，筛下的粉末分装，得到红曲粉(散)剂，主要功效成分含量：粗多糖8.5mg/100g，总黄酮6mg/100g、洛伐他汀0.21mg/100g。
该粉剂可以用作固体食品(如面包、饼干等)的食品添加剂(添加量0.1-0.5％)。
实施例6：制备红曲胶囊剂
将实施例5得到的粉末分装于胶囊中，得到红曲胶囊剂，主要功效成分含量：粗多糖8.5mg/100g，总黄酮6mg/100g、洛伐他汀0.21mg/100g。
实施例7：制备红曲片剂
将实施例5得到的粉末中加入3％淀粉，压制红曲片剂，主要功效成分含量：粗多糖8.0mg/100g，总黄酮5.8mg/100g、洛伐他汀0.2mg/100g。
实施例8：制备红曲蜜丸剂
将实施例5得到的细粉末加入3％淀粉，用蜂蜜制成红曲蜜丸剂，主要功效成分含量：粗多糖5.0mg/100g，总黄酮4.0mg/100g、洛伐他汀0.13mg/100g。
实施例9：制备红曲膏剂
将蜂蜜微火煮至蜡黄色，加入实例5得到的粉末1∶1搅匀，制成红曲膏剂，主要功效成分含量：粗多糖4mg/100g、总黄酮3mg/100g、洛伐他汀0.11mg/100g。
实施例10：取例3中发酵液1升，经真空浓缩后冷冻干燥得到冻干粉，再经粉碎后加赋形剂制成片剂，可得到主要功效成分含量粗多糖为2mg/g、总黄酮1.8mg/g、洛伐他汀0.06mg/g的制剂。本例是想说明本申请的方法可以制备含量较高的制剂。
实施例1-4得到的滤液，均可做为食品添加剂，其具有保健品的功能，又具有着色剂的作用。如可以按0.1-0.5％加至果冻或饮料中。
本发明产品的主要功效成分经提纯精制后，其含量可以达到更高，而作为单一成分的药用量可以是很高的(如洛伐他汀80mg/次)，但由于本发明产品的主要功效是由多种组分相互作用的结果，而且国家对保健品的主要功效成分含量只有最低量要求，故本申请中主要功效成分含量的上限用药用量来限定显然不合适，所以本申请只限定了最低含量。