黄病毒科病毒的大环抑制剂
相关申请的交叉引用
根据35U.S.C.§119(e)，本申请要求2012年06月08日提交的美国临时申请序号为61/657,562的权益，通过引用将其全部内容本文合并入本文中。
技术领域
本申请提供了抑制病毒的新化合物，包含这种化合物的组合物，以及包括施用这种化合物的治疗方法。
背景技术
包含黄病毒科(Flaviviridae)的RNA病毒包括至少三个可区别的属，包括瘟疫病毒属(pestiviruses)、黄病毒属(flaviviruses)和丙肝病毒属(hepaciviruses)(Calisher等，J.Gen.Virol.1993，70，37-43)。尽管瘟疫病毒属引起许多经济上重要的动物疾病，如牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、古典猪瘟病毒(CSFV，猪霍乱)和绵羊边界疾病(BDV)，但它们在人类疾病中的重要性很少得到充分的表征(Moennig，V.等，Adv.Vir.Res.1992，48，53-98)。黄病毒属导致重要的人疾病，如登革热和黄热病，而丙肝病毒属引起人的丙肝病毒感染。由黄病毒科引起的其他重要病毒感染包括西尼罗河病毒(WNV)、日本脑炎病毒(JEV)、蜱传脑炎病毒、Junjin病毒、墨累溪谷脑炎、圣路易斯脑炎、奥姆斯克(Omsk)出血热病毒和兹卡(Zika)病毒。
丙肝病毒(HCV)是全世界的慢性肝病的主要原因(Boyer，N.等，J Hepatol.32:98-112，2000)，因此目前抗病毒研究主要的焦点是针对治疗人慢性HCV感染的改进方法的研发(Di Besceglie,A.M.和Bacon,B.R.,Scientific American(科学美国)，10月:80-85，(1999)；Gordon,C.P.等，J.Med.Chem.2005，48，1-20；Maradpour,D.等，Nat.Rev.Micro.2007，5(6)，453-463)。Dymock等在Antiviral Chemistry&Chemotherapy(抗病毒化学&化疗)，11:2；79-95(2000)中综述了多种HCV治疗。由于在慢性感染病人中每天巨大量的病毒产生和HCV病毒的高自发突变性，患有慢性HCV感染的病人的病毒学治愈是难以实现的(Neumann等，Science 1998，282，103-7；Fukimoto等，Hepatology，1996，24，351-4；Domingo等，Gene，1985，40，1-8；Martell等，J.Virol.1992，66，3225-9)。
目前，主要存在两种抗病毒化合物用于治疗人慢性HCV感染，核苷类似物病毒唑， 以及干扰素-α(IFN)。单单病毒唑对降低病毒RNA水平是无效的，且具有明显的毒性，已知能诱发贫血。已经报道IFN和病毒唑的组合能有效控制慢性丙肝(Scott，L.J.等，Drugs 2002，62，507-566)，但不到一半给予这种治疗的病人显示出持久的益处。因此，需要研发更有效的抗-HCV治疗。
大环sanglifehrin和衍生物是免疫调节剂，并且以独特的方式结合肽酰-脯氨酰顺/反异构酶(PPIase)亲环蛋白(WO 97/02285；WO 98/07743；J.Am.Chem.Soc 2003，125，3849-3859；J.Org.Chem.2000，65，9255-9260；Angew.Chem.Int.Ed.1999，38，2443-2446)。亲环蛋白是在体内调节蛋白折叠并抑制丙肝病毒的肽酰-脯氨酰顺/反异构酶(PPIase)(Lin等，WO2006/138507)。然而，sanglifehrin或其衍生物中没有一种已经能用于人抗病毒治疗。因此，对研发具有抗黄病毒科病毒活性及特别是抗HCV活性的大环sanglifehrin存在着持续的需求。
发明内容
在一个实施方案中，提供了一种式I所示的化合物：
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或其药学上可接受的盐、同位素、立体异构体、立体异构体的混合物、互变异构体、酯或前药，其中：
A是键、-O-、-S(O)n-、-NH-、-N((C1-C4)烷基)-或(C1-C2)亚烷基；
A1是(C1-C5)亚烷基、(C2-C5)亚烯基、(C2-C5)亚炔基、亚芳基、杂亚芳基、环亚烷基、杂环亚烷基、芳基(C1-C2)亚烷基、杂芳基(C1-C2)亚烷基、环烷基(C1-C2)亚烷基或杂环烷基(C1-C2)亚烷基，其中A1的sp3碳原子可选被-O-、-S(O)n-、-NH-或-N((C1-C4)烷基)-取代，而且其中A1的sp3或sp2碳原子可选被一个或多个选自由卤素、(C1-C8)烷基、(C2-C8)烯基、(C2-C8)炔基、芳基、杂环烷基、环烷基、芳基(C1-C4)烷基、环烷基(C1-C4)烷基、杂环烷基(C1-C4)烷基、芳基杂环烷基(C1-C4)烷基、-OR9、-SR9、-S(O)R9、-S(O)2R9和-N(R9)2组成的组的取代基取代，其中这种可选的取代是化学可行的；
A2是-CH(R8)-亚芳基、-CH(R8)-杂亚芳基、-CH(R8)-杂环烷基、-CH(R8)-环亚烷基、亚芳基、环亚烷基、(C1-C3)亚烷基、(C2-C3)亚烯基或(C2-C3)亚炔基，其中A2 的亚芳基、杂亚芳基、杂环亚烷基或环亚烷基部分可选被一个或多个选自由-OR9、-SR9、-S(O)R9、-S(O)2R9、-N(R9)2、卤素、卤代(C1-C4)烷基、卤代(C1-C4)烷氧基氰基和(C1-C8)烷基组成的组的取代基取代，其中这种可选的取代是化学可行的；
L1是-O-C(O)-、-O-CH2-、-NR11-C(O)-、-NR10-CH2-、-NH-C(R10)2-或-NH-S(O)2-，其中每个R10独立地是H、(C1-C4)烷基、卤代(C1-C4)烷基、(C1-C4)烯基或环烷基；而且R11是(C1-C4)烷基、卤代(C1-C4)烷基、(C1-C4)烯基或环烷基；
X1是键、-O-、-NH-、-N((C1-C4)烷基)-或杂环亚烷基；
R1和R2独立地是H、(C1-C4)烷基、(C2-C4)烯基、(C2-C4)炔基、卤素、氰基或-C(O)-(C1-C4)烷基；或
R1和R2与它们俩都连接的碳合在一起时，形成-C(＝O)-、-C(＝S)-或–C(＝N(C1-C4)烷基)-；
R3是H或(C1-C4)烷基，其可选被卤素、氰基、羟基或(C1-C4)烷氧基取代；
R4a和R4b独立地是H、(C1-C8)烷基、芳基、芳基(C1-C4)烷基、杂环烷基、杂环烷基(C1-C4)烷基、环烷基或环烷基(C1-C4)烷基，其中R4a和R4b各自可选被一个或多个选自由氰基、-COOH、卤素、羟基、(C1-C8)烷氧基、氨基、单(C1-C8)烷基氨基、二(C1-C8)烷基氨基、芳基和杂芳基组成的组的取代基取代，其中这种可选的取代是化学可行的；
R5a和R5b独立地是H、(C1-C8)烷基、(C2-C8)烯基、(C2-C8)炔基、(C1-C8)烷氧基、芳基、杂环烷基、环烷基、芳基(C1-C4)烷基、环烷基(C1-C4)芳基或杂环烷基(C1-C4)烷基，其中R5a和R5b中的每一个可选被一个或多个选自由-N3、氰基、-COOH、卤素、羟基、氨基、单(C1-C8)烷基氨基、二(C1-C8)烷基氨基、(C1-C8)烷氧基、芳基和杂芳基组成的组的取代基取代，或
R5a和R5b一起形成具有式(a)的螺环(spirocycle)：
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其中式(a)的一个或多个碳环原子可选被氮、氧或硫原子取代，而且其中式(a)的环原子可选具有一个或多个选自由氧、＝N(C1-C4)烷氧基、卤素、羟基、-NH2、(C1-C4)烷基、卤代(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基、-OC(O)R9、-C(O)2R9和-S(O)2R9组成的组的取代基；
R6a和R6b独立地是H、羟基、(C1-C8)烷基、(C2-C8)烯基、(C2-C8)炔基、(C1-C8)烷氧基、-CH2CH2CR9(＝N(C1-C4)烷氧基)、芳基、杂环烷基、环烷基、-SR9、-S(O)R9、-S(O)2R9和-N(R9)2，其中R6a和R6b中的每一个可选被一个或多个选自由卤素、羟基、氰基、(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基、卤代(C1-C4)烷氧基、芳基、环烷基、杂环烷基、单(C1-C8)烷基氨基、二(C1-C8)烷基氨基、-NHS(O)R9、-NHC(O)R9和(C1-C8)烷酰基组成的组的取代基取代，其中这种可选的取代是化学可行的；或R6a和R6b一起形成具有式(a)的螺环；
每个R8独立地是H、(C1-C4)烷基、卤代(C1-C4)烷基、(C2-C4)烯基、(C2-C4)炔基、芳基、杂芳基、杂环烷基或环烷基，其中R8可选被-OR、-N(R9)2、-CON(R9)2或氰基取代；
每个R9独立地是H、(C1-C4)烷基、卤代(C1-C4)烷基、(C2-C4)烯基或(C2-C4)炔基；
每个n独立地是0、1或2；和
m是1、2、3、4或5。
在另一个实施方案中，提供了一种药物组合物，其包括式I的化合物或其药学上可接受的盐、同位素、立体异构体、立体异构体的混合物、互变异构体、酯或前药，和一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂。在该实施方案的一方面，该药物组合物还包括一种或多种附加治疗剂。
再在另一个实施方案中，提供了一种治疗黄病毒科病毒感染的方法，包括给需要其的哺乳动物施用治疗有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐、同位素、立体异构体、立体异构体的混合物、互变异构体、酯或前药。在该实施方案的一方面，所述治疗导致患者中病毒载量的降低或者病毒RNA的清除。
再在另一个实施方案中，提供了一种治疗冠状病毒科病毒感染的方法，包括给需要其的哺乳动物施用治疗有销量的式I的化合物或其药学上可接受的盐、同位素、立体异构体、立体异构体的混合物、互变异构体、酯或前药。在该实施方案的一方面，所述治疗导致患者中病毒载量的降低或者病毒RNA的清除。
具体实施方式
定义
除非另有说明，本文使用的下列术语和短语意图具有下面的含义：
“烷酰基”是RC(O)-；“烷酰氧基”是RC(O)O-；和“烷酰氨基”是RC(O)NR’-；其中R是本文定义的烷基，而且R’是氢或烷基。
“烯基”是指具有至少一个不饱和位点即碳-碳sp2双键的直链或支链烃基。在一些实施方案中，烯基是C2-C20烯基基团、C2-C10烯基基团或C2-C6烯基基团。烯基基团的实例包括但不限于乙烯基(-CH＝CH2)、烯丙基(-CH2CH＝CH2)、环戊烯基(-C5H7)和5-己烯基(-CH2CH2CH2CH2CH＝CH2)。
“亚烯基”是指不饱和的支链或直链或环状烃基，其含有自母体烯烃的相同碳原子或两个不同碳原子去除两个氢原子而得到的两个单价基团中心。例如，亚烯基可含有2至20个碳原子、2至10个碳原子，或是2至6个碳原子。典型的亚烯基包括但不限于1,2-亚乙烯基(-CH＝CH-)。
“烷氧基”是RO-，其中R是如本文所定义的烷基。烷氧基的非限制性实例包括甲氧基、乙氧基和丙氧基。
“烷基”是指直链或支链烃基。在一个实施方案中，烷基具有1至20个碳原子(即C1-C20烷基)。在一些实施方案中，烷基是C1-C10烷基或C1-C6烷基。烷基的实例包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基和癸基。
“亚烷基”是指饱和的支链或直链基团或环烃基团，其含有自母体烷烃的相同碳原子或两个不同碳原子去除两个氢原子而得到的两个单价基团中心。例如亚烷基可含有1至20个碳原子、1至10个碳原子，或是1至6个碳原子。亚烷基的实例包括但不限于亚甲基(-CH2-)、亚乙基(-CH2CH2-)、1，3-亚丙基(-CH2CH2CH2-)和1,4-亚丁基(-CH2CH2CH2CH2-)。
“炔基”是指含有带至少一个不饱和位点的正常、仲碳原子或叔碳原子的烃基，即碳-碳sp三键。例如，炔基可含有2至20个碳原子(即C2-C20炔基)、2至12个碳原子(即C2-C12炔烃基)，或2至6个碳原子(即C2-C6炔基)。炔基的实例包括但不限于乙炔基(-C≡CH)和炔丙基(-CH2C≡CH)。
“氨基”指–NH2。
“烷氨基”是指被一个或多个烷基取代的氨基。“单(烷基)氨基”或“(烷基)氨基”是RNH-，“二(烷基)氨基”或“(烷基)2氨基”是R2N-，其中每个R基团均是如本文定义的烷基，可以相同也可以不同。烷氨基的实例包括但不限于甲胺基、乙胺基、丙胺基、丁胺基、二甲氨基、二乙胺基和甲基乙基氨基。
“亚炔基”是指不饱和的支链或直链或环状烃基，其含有自母体炔烃的相同碳原子或两个不同碳原子去除两个氢原子而得到的两个单价基团中心。例如，亚炔基可含有2至20个碳原子、2至10个碳原子，或是2至6个碳原子。典型的炔基包括但不限于乙炔 基(-C≡C-)、丙炔基(-CH2C≡C-)和4-戊炔基(-CH2CH2CH2C≡C-)。
“芳基”是指每个环中最多含7个原子的任一单环或双环碳环，其中至少一个环是芳香环，或是5至14个碳原子的芳香环系统，该芳香环系统包括与5或6元环烷基稠和的碳环芳香基团。芳基的实例包括但不限于苯基、萘基、四氢萘基和茚满基。
“芳烷基”是指被芳基基团取代的如本文中定义的烷基。
“亚芳基”指其具有2个通过从母体芳基的两个不同碳原子上除去两个氢原子衍生出的一价基团中心的如上定义的芳基。典型的亚芳基包括，但不限于，亚苯基，例如 ![]()
和亚萘基![]()
“芳基亚烷基”是指如上定义的芳基烷基，其含有自该基团的芳基上去除一个氢原子且自烷基上去除另一个氢原子而得到的两个单价基团中心。
“环烷基”是指含有至少饱和或部分不饱和环结构、且通过环碳相连的烃基。环烷基包括单、双、和多环烃基，可以是稠和、桥联或螺环。在多个实施方案中，它是指饱和或部分不饱和的C3-C12环部分(cyclic moiety)，实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环庚基和环辛基。
“环烷基烷基”是指被环烷基取代的烷基部。环烷基烷基的实例包括环丙基甲基、环丁基甲基、环戊基乙基和环己基甲基。
“环烷基亚烷基”指被环烷基基团取代的亚烷基部分。环烷基亚烷基基团的实例包括环丙基亚甲基、环丁基亚甲基、环戊基亚乙基和环己基亚甲基。
“环亚烷基”是指具有2个通过从母体环烷基的相同或2个不同碳原子除去2个氢原子衍生的一价基团中心的如以上所定义的环烷基。环亚烷基的实例包括，但不限于，环丙烯、环丁烯、环戊烯和环己烯。
“二烷基氨基烷基”是指被二烷基氨基基团取代的烷基部分，其中二烷基氨基如本文中定义的。
“酯”是指化合物的任何酯，其中该分子的任意-COOH功能基被–C(O)OR功能基取代，或其中该分子的任意–OH功能基被–OC(O)R功能基取代，其中该酯的R部分是可形成稳定酯部分的任意含碳基团，包括但不限于烷基、烯基、炔基、环烷基、环烷基烷基、芳基、芳基烷基、杂环基、杂环烷基及其取代衍生物。
“卤素”指氯(-Cl)、溴(-Br)、氟(-F)或碘(-I)。
“卤代烷氧基”是指如本文定义的被一个或多个卤素基团取代的烷氧基。
“卤代烷氧基烷基”是指如本文定义的被卤代烷氧基取代的烷基部分。
“卤代烷基”是指烷基基团，其中该烷基基团的一个或多个氢原子被一个卤素原子取代。卤代烷基的实例包括但不限于-CF3、-CHF2、-CFH2和-CH2CF3。
“杂环烷基”是指饱和或部分不饱和的单环、双环或三环基团，其含有2至14个环碳原子，并且除环碳原子之外含有1至4个选自P、N、O和S的杂原子。杂环基团可通过碳原子或通过杂原子相连，当取代时，取代基可与碳原子或杂原子结合。杂环基的的实例包括氮杂环丁烷基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并呋咱基、苯并吡唑基、苯并三唑基、苯并噻吩基、苯并恶唑基、咔唑基、咔啉基、噌啉基、呋喃基、咪唑基、二氢吲哚基、吲哚基、吲嗪基(indolazinyl)、吲唑基、异苯并呋喃基、异吲哚基、异喹啉基、异噻唑基、异恶唑基、萘吡啶基、恶二唑基、恶唑基、恶唑啉基、异恶唑啉基、氧杂环丁基、吡喃基、吡嗪基、吡唑基、哒嗪基、吡啶并吡啶基(pyridopyridinyl)、哒嗪基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、喹喔啉基、四氢吡喃基、四氢噻喃基、四氢异喹啉基、四唑基、四唑并吡啶基(tetrazolopyridyl)、噻二唑基、噻吩基、三唑基、氮杂环丁烷基、1,4-二氧杂环己基(1,4-dioxanyl)、六氢氮杂基(hexahydroazepinyl)、哌嗪基、哌啶基、吡啶-2-酮基、吡咯烷基、吗啉基、硫代吗啉基、二氢苯并咪唑基、二氢苯并呋喃基、二氢苯并噻吩基、二氢苯并恶唑基、二氢呋喃基、二氢咪唑基、二氢吲哚基、二氢异恶唑基、二氢异噻唑基、二氢恶二唑基、二氢恶唑基、二氢吡嗪基、二氢吡唑基、二氢吡啶基、二氢嘧啶基、二氢吡咯基、二氢喹啉基、二氢四唑基、二氢噻吩基、二氢三唑基、二氢氮杂环丁烷基、亚甲基二氧基苯甲酰基、四氢呋喃基和四氢噻吩基以及它们的氮氧化物。
“芳基杂环烷基”指其中氢原子已经被芳基基团取代的如本文定义的杂环烷基基团。
“芳基杂环烷基烷基”指如本文定义的烷基，其中氢原子已经被杂环烷基基团取代，而且该杂环烷基基团的氢原子已经被芳基基团取代。
“杂环烷基烷基”指其中氢原子已经被杂环烷基基团取代的如本文定义的烷基基团。
“杂环烷基亚烷基”指其中氢原子已经被杂环烷基基团取代的如本文定义的亚烷基。
“杂环亚烷基”是指具有2个通过从母体杂环烷基基团的相同或2个不同碳原子除去2个氢原子衍生出的一价基团中心的如上定义的杂环烷基。
“杂芳基”是指每个环上具有最多达7个原子的单环、双环或三环，其中至少一个环是芳香环且该环上含有1至4个选自由N、O和S组成的组的杂原子。杂芳基的非限制性实例包括吡啶基、噻吩基、呋喃基、嘧啶基、咪唑基、吡喃基、吡唑基、噻唑基、噻二唑基、异噻唑基、恶唑基、异恶唑基、吡咯基、哒嗪基、吡嗪基、喹啉基、异喹啉基、苯并呋喃基、二苯并呋喃基、二苯并噻吩基、苯并噻吩基、吲哚基、苯并噻唑基、苯并 恶唑基、苯并咪唑基、异吲哚基、苯并三唑基、嘌呤基、硫茚基和吡嗪基。杂芳基的连接可通过一个芳香环来进行，或者，如果杂芳基是双环或三环并且其中环不是芳香环或不含有杂原子，可通过非芳香环或不含杂原子的环来进行连接。“杂芳基”还可被理解为包括任何含氮杂芳基的氮氧化物衍生物。
“杂芳基烷基”是指其中氢原子已经被杂芳基基团取代的如本文中定义的烷基基团。
“杂芳基亚烷基”指其中氢原子已经被杂芳基取代的如本文中定义的亚烷基。
“杂亚芳基”是指如上文定义的杂芳基，其含有自母体杂芳基的相同碳原子或两个不同碳原子上去除两个氢原子而得到的两个单价基团中心。杂亚芳基的非限制性实例是：
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“羟基烷氧基”是指被羟基基团(-OH)取代的如本文中定义的烷氧基。羟基烷氧基的实例是羟基乙氧基。
“羟基烷基”是指被至少一个羟基基团取代的烷基基团。羟基烷基基团的实例包括，但不限于，羟甲基、羟乙基、羟丙基和羟丁基。
“前药”是指向生物系统给药时，作为自发化学反应、酶催化化学反应、光解和/或代谢化学反应的结果，可生成原料药即活性成分的任何化合物。因此，前药是具有治疗活性的化合物的共价修饰类似物或潜在形式。前药的非限制性实例包括酯分子、季铵分子、乙二醇分子等等。
术语“可选取代”是指其中所有取代基为氢的部分或其中该部分的一个或多个氢被非氢取代基取代。当化学上可行时还允许在同一原子上进行多重取代(例如，二氧取代以提供-S(O)2-、同碳取代基、螺环烷基或杂环烷基环等等)。在一些实施方案中，“一个或多个”取代基为一至三个取代基。
在本文中，于适用情况下，是可允许的异构体，例如互变异构体、外消旋体、对映体、非对映体、阻转异构体、双键的构型异构体(E-和/或Z-)、环取代模式中的顺式和反式构型以及同位素变体。
“药学上可接受”是指适合在药物制剂中使用的，通常认为是安全的，被国家或州政府的监管机构正式批准使用，或是列在美国药典或其他普遍认可的药典中以用于动物特别是用于人。
“药物学上可接受的载体”指药物学上可接受的并且与本发明的化合物一起给药的稀释剂、佐剂、赋形剂或载体，或其他成分。
“药学上可接受的盐”是指可以增强预期的药理活性的盐。药学上可接受的盐的实例包括与无机酸或有机酸形成的酸加成盐、金属盐和胺盐。与无机酸形成的酸加成盐的实例包括与盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸和磷酸形成的盐。与有机酸形成的酸加成盐的实例包括与例如乙酸、丙酸、己酸、庚酸、环戊烷丙酸、乙醇酸、丙酮酸、乳酸、丙二酸、琥珀酸、苹果酸、马来酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、邻-(4-羟基-苯甲酰基)-苯甲酸、肉桂酸、苦杏仁酸、甲磺酸、乙磺酸、1,2-乙二磺酸、2-羟基乙磺酸、苯磺酸、对-氯苯磺酸、2-萘磺酸、对甲苯磺酸、樟脑磺酸、4-甲基-二环[2.2.2]-2-辛烯-1-羧酸、葡庚糖酸、4,4’-亚甲基双(3-羟基-2-萘酸)、3-苯基丙酸、三甲基乙酸、叔丁基乙酸、月桂基硫酸、葡糖酸、谷氨酸、羟基萘甲酸、水杨酸、硬脂酸和粘康酸形成的盐。金属盐的实例包括与钠、钾、钙、镁、铝、铁和锌离子。胺盐的实例包括与氨和足够强至与羧酸形成盐的有机含氮碱基形成的盐。
给定化学式的化合物(例如式I化合物，其还包括式I-a、I-b、I-c、I-d、I-e或II)将包含本发明的化合物以及这些化合物在药学上可接受的盐、立体异构体、立体异构体或互变异构体的混合物。此外，本发明的化合物还可能具有一个或多个不对称中心，并可作为外消旋混合物或是单独的对映体或非对映体生产得到。给定化学式的任意给定化合物中存在的立体异构体的数量取决于存在的不对称中心的数量(当不对称中心的数量为n时，可能存在2n个立体异构体)。单独的立体异构体可通过在合成的某个适当阶段分离中间体的外消旋或非外消旋混合物来获得，或是通过常规方法拆分化合物来获得。单独的立体异构体(包括单独的对映体和非对映体)以及立体异构体的外消旋和非外消旋混合物均包括在本发明的范围之内，除非另有明确说明，否则它们均将通过本说明书的结构来进行描述。
“异构体”是具有相同分子式的不同化合物。异构体包括立体异构体、对映体和非对映体。
“立体异构体”是仅有原子的空间排列方式不同的异构体。立体异构体包括对映体和非对映体。
“对映体”是一对互为不可重叠的镜像的立体异构体。一对对映体的1:1混合物是“外消旋”混合物。术语“(±)”用于在适当情况下指明外消旋混合物。
“非对映异构体”是具有至少两个不对称原子但不互为镜像的立体异构体。
根据Cahn Ingold Prelog R S系统详细说明了绝对立体化学。当该化合物为纯对映体时，每个手性碳的立体化学可规定为R或S。绝对构型未知的拆分化合物根据它们在钠D线波长下旋转偏振光平面的方向被命名为(+)或(-)。
某些化合物存在互变异构体或“互变体”。互变异构体彼此间是平衡的。例如，含酰胺化合物可能与酰亚胺酸互变异构体存在平衡。无论给出哪种互变异构体，也无论互变异构体之间的平衡的性质如何，普通本领域技术人员可理解这些化合物同时包括酰胺和酰亚胺酸互变异构体。因此，含酰胺化合物应理解为包括其酰亚胺酸互变异构体。同样，含酰亚胺酸化合物应理解为包括包括其酰胺互变异构体。
“治疗有效量”是指当给药于受试者以治疗疾病时足以治疗该疾病的化合物量。“治疗有效量”可根据化合物、疾病及其严重程度、待治疗受试者的年龄、体重等等而不同。
术语“治疗中”及其语法等同词，在治疗疾病的上下文中使用时，是指减缓或停止疾病的发展，或是改善疾病的至少一种症状，更优选改善疾病的多于一种症状。例如，丙型肝炎病毒感染的治疗可包括降低HCV感染人类的HCV病毒载量，和/或降低HCV感染人类中存在的黄疸的严重程度。
本文中提供的任何化学式或结构，包括式I、I-a、I-b、I-c、I-d、I-e或II还将代表这些化合物的未标记形式以及同位素标记形式。“同位素”可具有由本文所给出的化学式描述的结构，但其一个或多个原子被具有选定原子质量或质量数的原子取代。可掺入至本发明化合物中的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、氟和氯的同位素，例如但不限于2H(氘，D)、3H(氚)、11C、13C、14C、15N、18F、31P、32P、35S、36Cl和125I。本发明可掺入的多种同位素标记的化合物包括例如放射性同位素如3H、13C和14C。这些同位素标记的化合物可能在代谢研究、反应动力学研究、检测或成像技术，例如正电子发射断层扫描(PET)或单光子发射计算机断层扫描(SPECT)包括药物或底物组织分布测定或是在放射性治疗病人中发挥作用。
本发明还包括式I、I-a、I-b、I-c、I-d、I-e或II化合物，其中连接在一个碳上的1至n个氢被氘取代，其中n是分子中氢的数量。这些化合物表现出增强的代谢抗性，因此有助于在给药至哺乳动物时增加式I、I-a、I-b、I-c、I-d、I-e或II任意化合物的半衰期。参见例如Foster，“药物代谢的研究中的氘同位素效应(Deuterium Isotope Effects in Studies of Drug Metabolism)”，Trends Pharmacol.Sci.5(12)：524-527(1984)。这些化合物通过本领域众所周知的方法例如使用一个或多个氢被氘取代的起始原料来合成得到。
本发明的氘标记或取代的治疗性化合物可能具有改善的DMPK(药物代谢和药代动 力学)性质，分布、代谢和排泄相关性质(ADME)。较重的同位素例如氘的取代可能提供了某些由更好的代谢稳定性带来的治疗优势，例如体内半衰期的增加、剂量需求的减少和/或治疗指数的改善。18F标记化合物可能有助于PET或SPECT研究。本发明的同位素标记化合物及其前药通常是根据下述的方案或是实施例和制备方法中公开的步骤，通过使用一种易得到的同位素标记试剂代替一种非同位素标记试剂而制备得到的。应当理解本文中的氘应被视为式I、I-a、I-b、I-c、I-d、I-e或II化合物的一个取代基。
这种较重同位素特别是氘的浓度可以通过同位素富集因子来定义。在本发明的化合物中，任何没有被特别指定为某个特定同位素的原子代表了该原子的任何稳定同位素。除非另外指明，否则当一个位置被特别指明为“H”或“氢”时，该位置应理解为具有天然同位素丰度组成的氢。因此，在本发明的化合物中，任何特别指明为氘(D)的原子代表氘。
化合物
本申请提供了一种式I表示的化合物，或其药学上可接受的盐、同位素、立体异构体、立体异构体的混合物、互变异构体、酯或前药：
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其中L1、A1、A2、X1、R1、R2、R3、R4a、R4b、R5和R6a、R6b如上面所定义的。
在一个实施方案中，提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐：
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其中：
A是键、-O-、-S(O)n-、-NH-、-N((C1-C4)烷基)-或(C1-C2)亚烷基；
A1是(C1-C5)亚烷基、(C2-C5)亚烯基、(C2-C5)亚炔基、亚芳基、杂亚芳基、环亚烷基、杂环亚烷基、芳基(C1-C2)亚烷基、杂芳基(C1-C2)亚烷基、环烷基(C1-C2)亚烷基或杂环烷基(C1-C2)亚烷基，其中A1的sp3碳原子可选被-O-、-S(O)n-、-NH-或-N((C1-C4)烷基)-取代，而且其中A1的sp3或sp2碳原子可选被一个或多个选自由卤素、(C1-C8)烷基、(C2-C8)烯基、(C2-C8)烯基、芳基、杂环烷基、环烷基、芳基(C1-C4)烷基、环烷基(C1-C4)烷基、杂环烷基(C1-C4)烷基、芳基杂环烷基(C1-C4)烷基、-OR9、-SR9、-S(O)R9、-S(O)2R9和-N(R9)2组成的组的基团取代；
A2是-CH(R8)-亚芳基、-CH(R8)-杂亚芳基、-CH(R8)-杂环亚烷基、-CH(R8)-环亚烷基、亚芳基、环亚烷基、(C1-C3)亚烷基、(C2-C3)亚烯基或(C2-C3)亚炔基，其中A2可选被一个或多个选自由OR9、-SR9、-S(O)R9、-S(O)2R9、-N(R9)2、卤素、卤代(C1-C4)烷基、卤代(C1-C4)烷氧基、氰基和(C1-C8)烷基组成的组的取代基取代；
L1是-O-C(O)-、-O-CH2-、-NR10-C(O)-、-NR10-CH2-、-NH-C(R10)2-或-NH-S(O)2-，其中每个R10独立地是H、(C1-C4)烷基、卤代(C1-C4)烷基、(C1-C4)烯基或环烷基；
X1是键、-O-、-NH-、-N((C1-C4)烷基)或杂环亚烷基；
R1和R2独立地是H、(C1-C4)烷基、(C2-C4)烯基、(C2-C4)炔基、卤素、氰基或-C(O)-(C1-C4)烷基；或
R1和R2与它们俩都连接的碳合在一起时，形成-C(＝O)-,-C(＝S)-或–C(＝N(C1-C4)烷基)-；
R3是H或(C1-C4)烷基，其可选被卤素、氰基、羟基或(C1-C4)烷氧基取代；
R4a和R4b独立地是H、(C1-C8)烷基、芳基、芳基(C1-C4)烷基、杂环烷基、杂环烷基(C1-C4)烷基、环烷基或环烷基(C1-C4)芳基，其中R4a和R4b中的每一个可选被一个或多个选自由氰基、-COOH、卤素、羟基、氨基、单(C1-C8)烷氨基、二(C1-C8)烷氨基、芳基和杂芳基组成的组的取代基取代；
R5a和R5b独立地是H、(C1-C8)烷基、(C2-C8)烯基、(C2-C8)炔基、(C1-C8)烷氧基、芳基、杂环烷基、环烷基、芳基(C1-C4)烷基、环烷基(C1-C4)烷基或杂环烷基(C1-C4)烷基，其中R5可选被一个或多个选自由-N3、氰基、-COOH、卤素、羟基、氨基、单(C1-C8)烷氨基、二(C1-C8)烷氨基、芳基和杂芳基组成的组的取代基取代；或
R5a和R5b一起形成具有式(a)的螺环：
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其中式(a)的碳环原子可选被一个或多个选自SO、SO2、O和N的杂原子取代，而且其中式(a)的碳环原子可选具有一个或多个选自卤素、羟基、-NH2、(C1-C4)烷基和(C1-C4)烷氧基的取代基；
R6a和R6b独立地是H、羟基、(C1-C8)烷基、(C2-C8)烯基、(C2-C8)炔基、(C1-C8)烷氧基、-CH2CH2CR9(＝N(C1-C4)烷氧基)、芳基、杂环烷基、环烷基、-SR9、-S(O)R9、-S(O)2R9和-N(R9)2，其中R6a和R6b中的每一个可选被一个或多个选自卤素、羟基、氰基、(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基、卤代(C1-C4)烷氧基、芳基、环烷基、杂环烷基、单(C1-C8)烷基氨基、二(C1-C8)烷基氨基、-NHS(O)R9、-NHC(O)R9和(C1-C8)烷酰基的取代基取代；或R6a和R6b一起形成具有式(a)的螺环；
每个R8独立地是H、(C1-C4)烷基、卤代(C1-C4)烷基、(C2-C4)烯基、(C2-C4)炔基、芳基、杂芳基、杂环烷基或环烷基，其中R8可选被-OR、-N(R9)2、-CON(R9)2或氰基取代；
每个R9独立地是H、(C1-C4)烷基、(C2-C4)烯基或(C2-C4)炔基；
每个n独立地是0、1或2；
m是1、2、3、4或5。
在该实施方案的一方面，A1是亚乙烯基、亚丙烯基、亚丁烯基、亚乙基、亚丙基、亚丁基、氧丙烯基、氧亚丙烯基、亚吡唑基、亚苯基或亚嘧啶基。
在该实施方案的另一方面，A2是-CH(R8)-亚喹啉基、-CH(R8)-异亚喹啉基、-CH(R8)-亚萘啶基、-CH(R8)-亚噌啉基、-CH(R8)-亚喹喔啉基、-CH(R8)-亚苯基、-CH(R8)-亚萘基或-CH(R8)-卤代亚苯基。在该实施方案的不同方面中，A2选自以下组成的组：
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和![]()
其中A5接头的左键与X1连接。在某些实施方案中，R8是甲基。
在一些实施方案中，X1是-O-、-NH-或–N(CH3)-；R1和R2当与它们连接的碳原子一起时形成-C(＝O)-；和R3是H。在另一个实施方案中，X1是-O-、-NH-或–N(CH3)-；R1和R2当与它们连接的碳一起时形成-C(＝O)-；R3是H；R4a和R4b中一个是H，另一个是甲基；而且R5a和R5b中一个是H，另一个是异丙基。
在一个实施方案中，X1是-O-、-NH-或–N(CH3)-；R1和R2当与它们连接的碳一起时形成-C(＝O)-；R3是H；R4a和R4b中的一个是H，另一个是甲基；R5a和R5b中的一个是H，另一个是异丙基；A2是-CH(R8)-杂亚芳基，R8是甲基。
在另一个实施方案中，X1是-O-或-NH-；R1和R2当与它们连接的碳一起时形成C(＝O)-；R3是H；R4a是H；R4b是甲基；R5是异丙基；和R8是甲基。
在一个实施方案中，R6a和R6b中一个是H；另一个是H、羟基、-CH2CH2CR9(＝N(C1-C4)烷氧基)、(C1-C8)烷基或(C1-C8)烷氧基，其中R6a或R6b可选被一个或多个选自由卤素、羟基、(C1-C4)烷氧基、卤代(C1-C4)烷氧基、杂环烷基、(C1-C4)烷酰基或二(C1-C4)烷氨基组成的组的基团取代。在另一个实施方案中，R6a是H；R6b是H、(C1-C8)烷基或被杂环烷基、(C1-C4)烷酰基或二(C1-C4)烷氨基取代的(C1-C8)烷基。
在一个实施方案中，L1是-O-C(O)-。在另一个实施方案中，L1是-O-CH2-。再在另一个实施方案中，L1是-N(CH3)-C(O)-。再在另一个实施方案中，L1是-NH-CH2-。在某些实施方案中，L1是-NH-S(O)2-。
在实施方案的另一个方面中，X1是4-到7-元杂环亚烷基。在一个特定的实施方案中，杂环亚烷基具有与-C(R1)(R2)-键合的N环原子，其，而且非限制性实例包括：
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在另一个实施方案中，提供了式II的化合物：
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或其药学上可接受的盐、同位素、立体异构体、立体异构体混合物、互变异构体、酯或前药，其中：
A1是![]()
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A2是-CH(R8)-亚芳基、-CH(R8)-杂亚芳基、-CH(R8)-杂环亚烷基、-CH(R8)-环亚烷基、亚芳基或环亚烷基；
X1是键、-CH2-、-O-、-NH-、-N(CH3)-、![]()
R4a是H、(C1-C4)烷氧基、卤代(C1-C4)烷氧基、羟基(C1-C8)烷基、(C1-C4)烷氧基(C1-C8)烷基或(C1-C8)烷基；
R5是H、(C1-C4)烷基、卤代(C1-C8)烷基、羟基(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基(C1-C8)烷基、环烷基或杂环烷基；
R6a和R6b独立地是H、羟基、(C1-C8)烷基、(C2-C8)烯基、(C2-C8)炔基、(C1-C8)烷氧基、-CH2CH2CR9(＝N(C1-C4)烷氧基)、芳基、杂环烷基、环烷基、-SR9、-S(O)R9、-S(O)2R9和-N(R9)2，其中R6a和R6b中的每一个可选被一个或多个选自由卤素、羟基、氰基、(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基、卤代(C1-C4)烷氧基、芳基、环烷基、杂环烷基、单(C1-C8)烷基氨基、二(C1-C8)烷基氨基、-NHS(O)R9、-NHC(O)R9和(C1-C8)烷酰基组成的组的取代基取代，其中这种可选的取代是化学可行的；或R6a和R6b一起形成具有式(a)的螺环；
R6a和R6b一起形成具有式(a)的螺环：
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其中式(a)的一个或多个碳环原子可选被氮、氧或硫原子取代，而且其中式(a)的环原子可选具有一个或多个选自由氧、＝N(C1-C4)烷氧基、卤素、羟基、-NH2、(C1-C4)烷基、卤代(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基、-OC(O)R9、-C(O)2R9和-S(O)2R9组成的组的取代基；
R7a和R7b独立地是H、-OH、(C1-C4)烷氧基、卤代(C1-C4)烷氧基或(C1-C8)烷基；
R8是H或(C1-C4)烷基；和
每个R9独立地是H、(C1-C4)烷基、卤代(C1-C4)烷基、(C2-C4)烯基或(C2-C4)炔基。
在通式II的某些实施方案中，A1是![]()
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其中A1接头的左键与A2连接；
A2是-CH(R8)-亚芳基、-CH(R8)-杂亚芳基、-CH(R8)-杂环亚烷基、-CH(R8)-环亚烷基、亚芳基或环亚烷基，其中A2接头的左键与X1连接；
X1是键、-CH2-、-O-、-NH-、-N(CH3)-、![]()
R4a是H、(C1-C4)烷氧基、卤代(C1-C4)烷氧基、羟基(C1-C8)烷基；
R5是H或(C1-C4)烷基；
R6a和R6b独立地是H、-OH、(C1-C4)烷氧基、卤代(C1-C4)烷氧基或(C1-C8)烷基、![]()
R6a和R6b一起形成![]()
R7a和R7b独立地是H、-OH、(C1-C4)烷氧基、卤代(C1-C4)烷氧基或(C1-C8)烷基；和R8是H或(C1-C4)烷基。
在通式II的某些实施方案中，R4a是甲基；R5a是异丙基；R8是甲基；和A2是
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在通式II的某些实施方案中，R4a是甲基；R5a是异丙基；R8是甲基；和A2是
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在一个实施方案中，R4a是甲基；R5是异丙基；R8是甲基；和A2是
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这种化合物的非限制实例包括下面的化合物及其药学上可接受的盐：
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其中A1接头的左键与A2连接。
上述化合物的A2接头可以被各种位置异构体代替。其非限制实例包括具有下面通式的化合物：
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其中上述通式的化合物具有用于化合物a-1到a-14的表中提供的相同的取代基组合或模式。
还包括具有下面通式的化合物：
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其中A1接头的左键与A2连接。
上述化合物的A2接头可以被各种位置异构体代替。其非限制实例包括具有下面通式的化合物：
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其中上述通式的化合物具有用于化合物a2-1到a2-14的表中提供的相同的取代基组合或模式。
在该实施方案的另一个方面中，R4a是甲基；R5是异丙基；R8是甲基；和A2是
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这种化合物的非限制实例包括下列化合物及其药学上可接受的盐：
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在另一个实施方案中，提供了通式II-c的化合物：
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或其药学上可接受的盐、同位素、立体异构体、立体异构体混合物、互变异构体、酯或前药，其中：
R6a和R6b独立地是H、羟基、(C1-C8)烷基、(C2-C8)烯基、(C2-C8)炔基、(C1-C8)烷氧基、-CH2CH2CR9(＝N(C1-C4)烷氧基)、芳基、杂环烷基、环烷基、-SR9、-S(O)R9、-S(O)2R9和-N(R9)2，其中R6a和R6b中的每一个可选被一个或多个选自由卤素、羟基、氰基、(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基、卤代(C1-C4)烷氧基、芳基、环烷基、杂环烷基、单(C1-C8)烷基氨基、二(C1-C8)烷基氨基、-NHS(O)R9、-NHC(O)R9和(C1-C8)烷酰基组成的组的取代基取代，其中这种可选的取代是化学可行的；或R6a和R6b一起形成具有式(a)的螺环；或
R6a和R6b一起形成具有式(a)的螺环：
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其中式(a)的一个或多个碳环原子可选被氮、氧或硫原子取代，而且其中式(a)的环原子可选具有一个或多个选自由氧、＝N(C1-C4)烷氧基、卤素、羟基、-NH2、(C1-C4)烷基、卤代(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基、-OC(O)R9、-C(O)2R9和-S(O)2R9组成的组的取代基；
每个R9独立地是H、(C1-C4)烷基、卤代(C1-C4)烷基、(C2-C4)烯基或(C2-C4)炔基。在本文描述的化合物的一个实施方案中，R6a和R6b独立地是H、-OH、(C1-C4)烷氧基、卤代(C1-C4)烷氧基、(C1-C8)烷基、卤代(C1-C8)烷基、羟基(C1-C8)烷基、(C1-C4)烷氧基(C1-C8)烷基、卤代(C1-C4)烷氧基(C1-C8)烷基、![]()
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在本文描述的化合物的一个实施方案中，R6a和R6b一起形成
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在一些实施方案中，R6a和R6b一起形成![]()
在一个实施方案中，所述化合物是
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或其药学上可接受的盐、同位素、立体异构体、立体异构体混合物、互变异构体、酯或前药。
在另一个实施方案中，所述化合物是
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或其药学上可接受的盐、同位素、立体异构体、立体异构体混合物、互变异构体、酯或前药。
再在另一个实施方案中，所述化合物是
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或其药学上可接受的盐、同位素、立体异构体、立体异构体混合物、互变异构体、酯或前药。
在一个实施方案中，所述化合物是
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或其药学上可接受的盐、同位素、立体异构体、立体异构体混合物、互变异构体、酯或前药。
在某些实施方案中，提供了式III的化合物：
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或其药学上可接受的盐、同位素、立体异构体、立体异构体混合物、互变异构体、酯或前药，其中
L1是-O-CH2-、-N(CH3)-C(O)-、-NH-CH2-、-N(CH3)-CH2-、-NH-CH(CF3)-或-NH-S(O)2-；
A1是![]()
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A2是-CH(R8)-亚芳基、-CH(R8)-杂亚芳基、-CH(R8)-杂环亚烷基、-CH(R8)-环亚烷基、亚芳基或环亚烷基；
X1是-O-、-N(CH3)-或-NH-；
R4a是H、(C1-C4)烷氧基、卤代(C1-C4)烷氧基或(C1-C8)烷基；
R5是H或(C1-C4)烷基；
R6a和R6b独立地是H、羟基、-CH2CH2CR9(＝N(C1-C4)烷氧基)、(C1-C8)烷基或(C1-C8)烷氧基，其可选被一个或多个选自由卤素、羟基、(C1-C4)烷氧基、卤代(C1-C4)烷氧基、杂环烷基、(C1-C4)烷酰基或二(C1-C4)烷基氨基组成的组的取代基取代；或
R6a和R6b一起形成具有式(a)的螺环；
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其中式(a)的一个或多个碳环原子可选被氮、氧或硫原子取代，而且其中式(a)的环原子可选具有一个或多个选自由氧、卤素、羟基、-NH2、(C1-C4)烷基、卤代(C1-C4)烷氧基、-OC(O)R9、-C(O)2R9和-S(O)2R9组成的组的取代基；
R7a和R7b独立地是H、-OH、(C1-C4)烷氧基、卤代(C1-C4)烷氧基或(C1-C8)烷基；和
R8是H或(C1-C4)烷基。
在通式III的一些实施方案中，L1是-O-CH2-、-N(CH3)-C(O)-、-NH-CH2-或-NH-S(O)2-；
A1是![]()
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A2是-CH(R8)-亚芳基、-CH(R8)-杂亚芳基、-CH(R8)-杂环亚烷基、-CH(R8)-环亚烷基、亚芳基或环亚烷基；
X1是-O-、-N(CH3)-或-NH-；
R4a是H、(C1-C4)烷氧基、卤代(C1-C4)烷氧基或(C1-C8)烷基；
R5是H或(C1-C4)烷基；
R6a和R6b独立地是H、-OH、(C1-C4)烷氧基、卤代(C1-C4)烷氧基或(C1-C8)烷基、
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R6a和R6b一起形成![]()
R7a和R7b独立地是H、-OH、(C1-C4)烷氧基、卤代(C1-C4)烷氧基或(C1-C4)烷基；和R8是H或(C1-C4)烷基。
在一个实施方案中，L1是-NH-CH2-；R4a是甲基；R5是异丙基；R8是甲基；和A2是
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在一个实施方案中，L1是-NH-S(O)2-；R4a是甲基；R5是异丙基；R8是甲基；和A2是
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在该实施方案的不同方面中，A2选自
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在一个实施方案中，L1是-N(CH3)-C(O)-；R4a是甲基；R5是异丙基；R8是甲基；和A2是
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在一个实施方案中，L1是-O-CH2-；R4a是甲基；R5是异丙基；R8是甲基；和A2是
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在该实施方案的一个方面中，L1是-NH-CH2-；R4a是甲基；R5是异丙基；和R8是甲基。这些化合物的非限制性实例包括下列化合物及其药学上可接受的盐：
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在该实施方案的一个方面中，L1是-NH-S(O)2-；R4a是甲基；R5是异丙基；和R8是甲基。这些化合物的非限制性实例包括下列化合物及其药学上可接受的盐：
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在该实施方案的一个方面中，L1是-N(CH3)-C(O)-；R4a是甲基；R5是异丙基；和R8是甲基。这些化合物的非限制性实例包括下列化合物及其药学上可接受的盐：
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在该实施方案的一个方面中，L1是-O-CH2-；R4a是甲基；R5是异丙基；和R8是甲基。这些化合物的非限制性实例包括下列化合物及其药学上可接受的盐：
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本领域技术人员将认识到应当为了提供足够稳定的以提供可以配制成可接受稳定的药物组合物的药物学上有用的化合物来选择本文中一般通式的化合物的取代基和其他部分。考虑具有这种稳定性的化合物落入本发明的范围内。本领域技术人员应当理解以上所述的定义和取代基的任意组合不应当导致不能实施的物质或化合物。
大环化合物的制备
可以根据以下所述的方案来制备本发明的化合物，如通式I、II、II-a、II-b、II-c或III的那些，但应当认识到也可以使用所说明的方法或其他方法的改进。如方案1中所说明的，从五种关键组分A-E，通过本领域技术人员适当地使用保护基团(PG1-PG8)，将它们按序结合在一起，来合成大环化合物M。编号1-5的虚线，本文中分别是指连接1、连接2等，是用于结合组分A-E的5个连接。其中发生特定连接的顺序可以改变， 并且取决于保护基团的选择和所需的化学性质。通常，将连接3、4或5用作最终的大环化步骤。
方案1
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连接1和2是酰胺键。使用本领域技术人员已知的标准肽耦合剂(EDC/HOBT、DCC、PyBOP、PyBROP、HATU、HBTU、COMU等)在各自的酸和胺之间形成连接。酸和胺耦合配对物在碱例如DIPEA、三乙胺等的存在下在有机溶剂例如DMF、二氯甲烷、乙腈等中在室温或略升高的温度下，与耦合剂结合。选择这三个步骤中的任何一个作为最终大环化步骤时，则优选大环内酰胺化条件。合适的大环内酰胺化程序包括，但不限于，Davis，J.S.J.Peptide Sci.2003，9,471-501中发现的那些。
连接4通常是碳-碳键或杂原子-碳键，其中杂原子是O、S或N。当连接4是碳-碳键时，则优选标准碳-碳键形成程序，通常涉及金属介导的交叉耦合反应。优选，使用sp2卤化物基团与末端烯烃之间的Heck-型耦合反应、sp2卤化物基团与乙烯基或芳基硼酸盐之间的Suzuki耦合或两个烯烃之间的环闭合复分解(RCM)形成碳-碳键。还可以进行如Nicolaou等，美国化学会志(Journal of American Chemical Society)2000，122，3830中所述的乙烯基锡烷与芳基或乙烯基卤化物之间进行Stille反应。在以上每个实例中，芳基或乙烯基卤化物基团也可以是芳基或乙烯基三氟甲基磺酸化物(triflate)。
例如，当A中的Y是烯烃，优选-CH＝CH2，并且B中的A1含有末端烯烃或Me-CH-CH-时，则进行交叉复分解反应。将两种组分在溶剂，例如，乙腈或甲苯中混合，并且加入复分解催化剂，例如，Grubbs I、Grubbs II、Hoyveda-Grubbs I、Hoyvede-Grubbs II等，接着加热。如果将这种连接用于闭合大环，优选RCM条件(例如，更稀释的条件，以避免二聚化)。对于相关的RCM条件和实例，参见Sedrani等，，Journal of American Chemical Society 2003，125，3849和Nicolaou等，Journal of American Chemical Society2000，122，3830。典型的RCM程序包括在RCM催化剂，例如，Grubbs I、Grubbs II、Hoyveda-Grubbs I或Hoyveda-Grubbs II的存在下，在溶剂例如甲苯或1,2-二氯乙烷中，加热(常规地或通过微波炉)无环前体。
作为选择，通过Heck耦合反应形成连接4时，在钯(II)催化剂，例如，钯(OAc)2)、膦配体(例如P(o-甲苯)3或P(t-丁基)3等)和碱基(例如，三乙胺)的存在下，在极性溶剂(例如，乙腈或甲苯)中混合乙烯基或芳基卤化物或三氟甲基磺酸盐A和烯烃组分B。常规地或在微波反应器中加热反应混合物。
或者，通过Suzuki耦合反应形成连接4时，在钯催化剂(例如，钯(II)Cl2(p-NMe2Ph)2和K3PO4或四(三苯基膦)钯(0))和碱(如，碳酸钾)的存在下，在合适的溶剂(例如，环戊基甲醚、甲苯、DMF、DME等)中，混合乙烯基或芳基卤化物或三氟甲基磺酸盐A和乙烯基或芳基硼酸盐B。将反应混合物常规地或在微波反应器中加热。在这样的耦合反应中，还可以颠倒两种起始材料上的反应官能团，使得A是芳基或乙烯基硼酸盐，而B含有乙烯基或芳基卤化物或三氟甲基磺酸盐。
或者，连接4可以是碳-氧键，并且在这种情况中，可以在羟基基团与烷基卤化物，或芳基(或杂芳基)卤化物之间使用典型的烷基化或亲核芳香族取代条件。在碱(例如，碳酸铯、氢氧化铯、氢化钠、NaHMDS等)的存在下，在惰性溶剂(例如，CPME、DMF、THF等)中，将羟基试剂与烷基或杂芳基卤化物(优选，碘化物或溴化物)混合，并加热。
或者，连接4可以是碳-氮键，并且在这种情况中，可以在胺基与烷基卤化物或杂芳基卤化物之间使用典型的烷基化、亲核芳香族取代或Buchward条件。例如，在碱(例如，碳酸铯、氢化钠等)的存在下，在惰性溶剂(例如，CPME)中，将胺和烷基或杂芳基卤化物混合，并且加热。用于碳-氮连接的可替换程序是在胺与羰基化合物之间进行还原性胺化。通常，在惰性溶剂(例如，THF、二噁烷)中混合胺和醛或酮，并且一段时间后用乙酰氧基硼氢化钠或可替换的还原剂处理。
连接5通常是酰胺(X1是NH或取代的N)，或酯(X1是O)键。形成酰胺键时，可以使用针对连接1-3描述的标准耦合程序。常常，这是闭合大环中的最终步骤。因为这样的大环内酰胺化耦合程序更有效。合适的大环内酰胺化方法包括，但不限于，以下参考文献中发现的那些：Davies，J.S.J.Peptide Sci.2003,9,471-501。
形成酯键时，可以使用耦合试剂(例如，EDC、DCC、PyBOP、HATU、COMU)，或这是大环形成中的最终步骤时，优选大环内酰胺化程序(例如，Shiina、Yamaguchi)。用于大环内酰胺化步骤的实例方法可以在Journal of American Chemical Society 2002，124,4257Paquette等或Chemical Reviews 2006，106(3)，911-939中找到。通常，在耦合剂和碱(例如，DIPEA、DMAP)的存在下，在极性溶剂(例如，DMF、乙腈等)中，混合酸和醇。
连接5也可以是醚键，其中R1和R2都是氢或烷基基团。在这一实例中，将以上针对连接4描述的碳-氧键形成程序用于连接2种组分。连接5还可以是胺键，其中R1和R2都是氢或烷基基团，并且用于连接胺和羰基组分的方法也是以上针对连接4描述的。
连接3是C-N、C-O或S(O)2-N。适合用于组分C和组分B的键形成反应包括以下方法。
当连接3中形成的键是L1是-OC(O)-(也即，C中的X1是O，B中的Z/Z1是-CO2H or-CO-)时，利用上述的耦合剂使用标准酯形成程序进行。当这是大环形成中的最终步骤时，优选如上所述的大环内酯化程序。
或者，当连接3是L1是-N(alkyl)C(O)-(也即，C中的X1是N(烷基)，B中的Z/Z1CO2H或CO-卤素)时，利用如上所述的耦合剂使用标准酯形成程序进行该步骤。当这是大环形成中的最终步骤时，优选如上所述的大环内酰胺化程序。
或者，当连接3是L1是-NHS(O)2-(也即，C中的X1是N(烷基)，B中的Z/Z1CO2H或CO-卤素)时，利用如上所述的耦合剂使用标准酯形成程序进行该步骤。当这是大环形成中的最终步骤时，优选如上所述的大环内酰胺化程序。
或者，当连接3是L1是-NHS(O)2-(也即，C中的X1是-NH-，B中的Z/Z1是-S(O)2OH或-S(O)2-卤素)时，利用如上所述的耦合剂使用标准酰胺形成程序进行该步骤。当这是大环形成中的最终步骤时，优选如上所述的大环内酰胺化程序。
或者，当连接3是L1是-NH-CH2-(也即，C中的X1是-NH-，B中的Z/Z1是酮或醛)时，优选使用如上所述的标准还原胺化程序进行。
或者，当连接3是L1是-O-CH2-(也即，C中的X1是O，B中的Z/Z1包含离去基团如卤化物或三氟甲基磺酸盐)时，优选使用如上所述的标准亲核烷基化程序进行。
以下的一般方案提供了用于从共同的前体A-E构建大环化合物M的一般实例和顺序。
方案2:RCM方法
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方案2(继续):RCM方法
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首先使用Greene和Wuts，有机合成的保护基团(Protective Groups in Organic Synthesis)，John Wiley and Sons，Inc.(本文中称为“Greene和Wuts”)中所述的条件，将化合物A-E去保护(PG2-PG8)，以提供化合物1a-1f。
在许多情况中，最佳保护基团及其去保护方法如下。对于化合物E，用于酸的典型保护基团PG1(其中R1和R2是C＝O)是甲基或三氯乙酯。可以通过极性溶剂例如含水THF等中的碱(例如，LiOH)来除去甲基和三氯乙酯。还可以通过用极性溶剂(例如，THF)中的锌和醋酸铵处理来除去三氯乙酯。通常，PG2和PG4是酸不稳定性基团，例如，BOC，并且使用二噁烷中的HCl或二噁烷、二氯甲烷中的TMSOTf，将BOC去保护。通常，PG3和PG5是酯基团，通过用含水THF或二噁烷中的碱金属氢氧化物处理来去除。通常，PG6是酸不稳定性基团，例如，用于胺的BOC，并且如针对PG2所述的来去除；或用于羟基基团的甲硅烷基醚，并且通过用有机溶剂(例如，二氯甲烷)中的HF·吡啶或TBAF处理来去除。通常，PG8是胺保护基团，例如，BOC，并且按照针对PG2所述的来去除或按照针对PG6所述的来去除的甲硅烷基醚或羟基基团，或通过用含水THF或二噁烷中的碱金属氢氧化物处理来去除醋酸酯保护基团。
然后使用以上针对连接1所述的条件，将化合物1f与酸1a耦合，产生化合物1g。然后使用Greene和Wuts中所述的条件将化合物1g去PG4保护，并且使用以上针对连接2所述的条件，与1c耦合，提供1h。用于产生1h的可替换顺序是使用以上针对连接2所述的条件，首先将胺1b与酸1c耦合，形成1i；使用Greene和Wuts中所述的条件，将1i中的保护基团PG3去保护，并且最后使用以上针对连接1所述的条件，与胺1f耦合，形成1h。
方案3:RCM方法
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使用Greene和Wuts中所述的条件将化合物1h去PG6保护，然后使用以上针对连接3所述的条件与B耦合以形成1j。还举例说明书了获得1j的可选择途径。使用以上针对连接3所述的方法将组分B与1d耦合。然后使用Greene和Wuts中描述的条件除去保护基团PG5，而且产物与从PG4去保护的1g产生的二肽耦合以提高1j。然后使用Greene和Wuts中描述的条件除去化合物1j中的保护基团PG1，并使用以上针对连接5所述的条件将酸与1e耦合以形成中间体1k。从中间体1h到1k的可替换顺序是首先去保护PG1，然后如以上针对连接5所述的与1e耦合；并如Greene和Wuts中所述的去保护PG6，接着使用以上针对连接3所述的条件与B耦合以形成1k。产物1k然后经受如以上针对连接4所述的RCM以形成化合物M。
方案4:大环内酰胺化/大环内酯化连接5
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使用以上针对连接4所述的条件，将化合物A与化合物B耦合，产生2a。在该顺序中，通常化合物B将被保护，例如酸将是酯、磺酸、磺酸酯、酮或醛，例如乙缩醛。然后按照Greene和Wuts中所述的将化合物2a去保护以产生酸2b。然后将酸2b与1h的去保护产物(通过Greene和Wuts中所述的PG6的去保护从1h制备)耦合，产生前体2c。使用Greene和Wuts中所述的条件进行2c的PG8和PG1去保护，然后使用以上针对连接5中的大环内酰胺化或大环内酯化所述的条件，将产物环化，以提供化合物M。方案5:大环内酰胺化/大环内酯化连接5
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然后按照Greene和Wuts中所述的将化合物2a去PG8保护以产生3a，其然后使用以上针对连接5所述的条件与1h的去PG1保护产物(通过Greene和Wuts中所述的PG1 的去保护从1h制备)耦合，产生前体3b。如果需要，使用使用Greene和Wuts中所述的条件进行3b的PG6和Z/Z1去保护，然后使用以上针对连接3中的大环内酰胺化或大环内酯化所述的条件，将产物环化，提供化合物M。
方案6:大环化合物M到M1-M5的进一步转化
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来自方案4-6的最终大环M常常在侧链上含有需要进一步去除的保护基团，以产生最终的化合物M。例如，当M含有C＝C作为RCM的结果时，将化合物M在氢气气氛下，在钯存在下，在碳催化剂下，在溶剂(如，乙醇、甲醇等)中混合，以提供还原的化合物M1。使用Greene和Wuts中所述的条件，除去R4a、R4b、R5、A1、A2和/或X1上的保护基团，产生化合物M2。另一种转化是点击化学(click chemistry)，用于提供三唑M3。通过在溶剂(例如，DMF)中，用炔烃或叠氮化物处理M中的炔烃或叠氮化物进行这种转化，合适的情况下，在CuI的存在下，以形成M3。去保护的化合物M2在去保护化后可以进一步转化成其他的大环M，例如，在溶剂(例如，DMF、乙腈等)中，在碱(例如，碳酸铯)的存在下，用烷基卤化物处理含有羟基基团的M2，形成烷基化产物M4。在溶剂(例如，DMF、甲醇等)中用胺处理含酮基的M2，接着加入乙酰氧基硼氢化钠，形成胺产物M5。
方案7:酸、酯、酮和醛B的制备
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许多具有A1中的末端烯烃或Me-CH＝C-或乙烯基/芳基硼酸盐基团的酸、酯、酮、醛、磺酸或卤化物B组分是商业上可购得的或在文献中有描述，并且这些可以直接用于 以上的方案中。此外，以下的方案是本领域技术人员可以用于产生其他的B组分的方法的实例。
方案8:B酸、酯、酮和醛B的制备
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在方案8，部分1中，用惰性溶剂(例如，-78℃的THF和HMPA)中的强去保护碱(例如，LDA)处理受保护的酸。然后加入预冷的二氯乙炔溶液(通过用THF中的氢化钾和MeOH(催化的)处理三氯乙烯制得)，产生氯乙炔产物。然后将该产物还原，例如，通过用醋酸和THF中的Cu处理，产生炔烃，然后将其进一步还原成烯烃，例如，通过在氢气的存在下，用有毒的钯还原剂(例如，Lindlar)处理炔烃的醇溶液。或者，在频哪醇硼烷的存在下，用二氯甲烷中的Cp2ZrHCl处理炔烃，形成乙烯基硼酸盐。
在方案8，部分2中，将具有α取代的β-酮酯转化成乙烯基三氟甲基磺酸盐，例如，通过用碱(例如，-78℃的THF中的LDA)处理β-酮酯的THF溶液，接着加入PhN(Tf)2。然后在升高的温度下，用吡啶处理三氟甲基磺酸盐产物，以形成炔烃。然后按照以上实施例1中所述的处理炔烃，产生烯烃或乙烯基硼酸盐产物。
在方案8，部分3中，使用手性醇醛缩合反应。首先使用针对连接1-3所述的标准酰胺键形成条件，将酰基基团连接手性助剂，例如，Evans、Oppolzer磺内酰胺(参见，JACS 1990，112，p2767)。用选择的醛、TBDMSOTf和碱(例如，无水溶剂(例如，二氯甲烷)中的三乙胺)处理Oppolzer助剂产物。在Lewis酸(例如，TiCl4、SnCl4、BF3OEt2)的存在下，用有机溶剂(例如，-78℃的THF)中的碱(例如，LDA、KHMDS、DIPEA)和选择的醛处理Evans助剂。按照Greene和Wuts中所述的，进行从醇醛反应得到的醇的保护，或替换地，进行用烷基卤化物或Meerwein’s试剂的烷基化，即，用惰性溶剂(例如，二氯甲烷)中的三甲基氧鎓四氟硼酸盐处理。然后使用标准碱金属氢氧化物去除条件除去助剂，例如，THF中的LiOH，或THF中的LiOH和过氧化氢，以提供游离酸产物。
在方案8，部分4中，按照Synlett 2002，12，2039-2040中所述的，用烯丙基卤化物将Evans助剂烯丙基化。然后通过用乙醇中的RhCl3处理，将产物异构化，然后通过碱和过氧化物，例如，THF/水中的LiOH和H2O2，去除助剂。或者，通过THF/水中的LiOH和H2O2直接去除助剂，以提供末端烯烃。
在方案8，部分5中，对醛(含有末端烯烃)使用Horner Wasdworth Emmons反应，产生α-β不饱和酯，然后将其选择性地还原成酯。例如，在低温下，用碱(例如，THF中的氢化钠)处理膦酸酯，接着添加醛，并加温，以产生不饱和酯。通过用甲醇中的镁粉处理来还原产物。
在方案8，部分6中，将α-β不饱和酸或转化成不饱和Evans助剂(参见Organic Letters2007,9，p1635)，并且用醛处理，以产生相应的烯烃产物。然后使用Greene和Wuts中所述的方法保护羟基基团，然后通过用碱和过氧化物处理，例如，THF/水中的LiOH和H2O2，来除去助剂。也可以按照以上针对丁间醇醛方案8，部分3中所述的，将羟基烷基化。
在方案8，部分7中，按照Angew.Chem.Int.Ed.2006，45(46)，7736中所述的，通过硝基烯烃来转化酮。然后在铜(I)盐(例如，CuI)，和三甲基甲硅烷基氯化物的存在下用惰性溶剂(例如，THF)中的乙烯基溴化镁处理硝基烯烃。然后在添加乙烯基基 团后，通过用惰性极性溶剂(例如，DMSO)中的亚硝酸钠和醋酸处理硝基烷基产物，转化成酸。
可以使用本领域技术人员已知的标准方法，转化方案8中描述的酸/酯产物，以产生酮、醛、羟基或卤化物化合物。例如，用溶剂(例如，THF、二氯甲烷)中的耦合剂把酸转化成Weinreb酰胺，接着用亲核试剂(例如，MeMgBr、CF3SiMe等等)处理，产生酮；通过用溶剂(例如，THF、二氯甲烷等)中的氢化铝锂处理酯，产生羟基基团。利用三氟甲磺酸酐和碱(例如，溶剂THF中的二异丙基乙胺)处理，将羟基基团激活成三氟甲磺酸。通过用PPh3和四溴化碳处理，进行把羟基转化为卤化物，例如溴化物。
几种类型的A(或如所示的A1)是商业上可购得的，或文献中有描述，其中X1是O或NH，并且Y是卤化物或烯烃。以下的方案描述了用于产生A1的其他一般方法。
方案9:A的制备
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1.A1中的Y＝卤素时
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2.A1中的Y＝烯烃时
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在方案9，部分1中(Y是A1中的卤素)；起始化合物6a通常是商业上可购得的芳香族化合物，其含有卤素Y和基团Z，其可以转化成酮6b。例如，典型的Z基团是卤化物、酸、醛。
例如，当Z是酸时，在碱(例如，DIPEA)和Weinreb胺(Me-NH-OMe)的存在下，用耦合剂，例如，HATU、EDC，处理6a，形成Weinreb酰胺。然后酰胺用亲核试剂(例如，TMS-CF3)处理，形成CF3取代的酮6b，或用溶剂(例如，-78℃的THF)中的Grignard试剂(例如，MeMgBr)处理，形成甲基酮6b。
当Z是卤素时，如果需要，那么通过用惰性溶剂(例如，乙腈)中的NaI和乙酰氯处理，进行初始转化成反应性更高的卤素。然后通过使用乙氧基乙烯基锡烷的Stille反应，将卤素转化成酮。在惰性溶剂(例如，甲苯)中用锡烷和钯(II)催化剂(例如PdCl2(PPh3)2)，处理卤化物，接着用2M HCl处理产物，以获得酮6b。在一些情况下，通过用THF中-78℃ nBuLi处理进行从卤化物基团形成烷基锂试剂，然后添加N-甲氧基-N-甲基乙酰胺以获得酮6b(例如，N-甲氧基-N-甲基乙酰胺获得R8＝甲基酮6b)。产生酮6b的最终方法是通过乙烯基基团。在钯催化剂(例如，PdCl2(dppf))的存在下，用乙烯基三氟硼酸盐处理6a，然后在低温下在极性溶剂(例如，甲醇)中，按序对乙烯基产物进行臭氧分解，以获得醛。然后将醛与亲核试剂(例如，TSM-CF3)或Grignard试剂(例如，MeMgBr)反应，以获得仲醇产物。然后用戴斯-马丁高碘烷氧化仲醇，以获得所需的酮6b或可以用作A1自身。
对酮6b使用手性还原方法产生手性醇(X1是O)和胺(X1是NH)。使用文献中可利用的多种手性还原方法中的一种，从6b形成手性醇6c。通常，在水中混合二氯(p-伞花烃)钌(II)二聚物和(1R,2R)-(-)-N-p-甲苯磺酰基-1,2-联苯乙二胺，并且在水混溶性溶剂(如，四氢呋喃)中加入甲酸钠和6b。然后在环境至回流之间的温度下搅拌反应物， 以产生6c，其中X1是O。或者，可以在低温下在惰性溶剂(例如，THF)中进行手性CBS还原，也获得手性醇6c。使用Greene和Wuts中所述的方法，进行6c中OH的保护，通常使用TBS醚或乙酰基基团，来提供A1(X1是O)。
或者，为了制备手性A1(X1是NH)，首先将酮6b转化成手性亚胺(R10是手性基团)，并且随后使用文献中所述的各种方法来还原。例如，将手性亚磺酰胺与酮6b反应，获得手性亚磺酰亚胺6d，随后将其用合适的还原剂(通常是NaBH4)还原，或三仲丁基硼氢化锂，或Noyori型还原，如以上针对手性醇所述的，使用二氯(p-伞花烃)钌(II)二聚物和(1R,2R)-(-)-N-p-甲苯磺酰基-1,2-联苯乙二胺。然后通过用合适的有机溶剂(如，甲醇)中的矿物酸(优选HCl)处理来除去亚磺酰胺助剂，获得6e，其中X1是NH。然后按照Greene和Wuts中所述的，进行NH基团的保护，产生A1(X1是NH)。在方案9的部分2中，说明了化合物A1的合成，其中Y是-CH＝CH2，用于复分解和交叉耦合反应的前体。示例性的方法如下。
首先可选使用合适的保护基团，将方案9，部分1中产生的化合物6c或6e对X1进行保护，如Greene和Wuts中所述的，然后通过合适的交叉耦合方法，将乙烯基基团引至芳基或sp2卤化物上。例如，在合适的有机溶剂(例如，乙腈、二氯甲烷等)中使用合适的钯催化剂，例如，PdCl2(dppf)2或PdCl2(PPh3)2，用乙烯基锡烷或乙烯基四氟硼酸盐，使用热或微波加热的过渡金属介导的耦合获得了烯烃A1。
可以用于引入乙烯基基团的另一种典型方法是从酮6b开始，其中Y是OH。最初，通过在碱(例如，吡啶)的存在下，用Tf2O处理，进行醇的三氟甲磺酰化。然后用Noyori还原，或按照以上所述的通过磺酰胺，将酮基还原，以提供手性醇或胺。然后按照Greene和Wuts中所述的，将手性醇或胺进行保护，然后将三氟甲基磺酸盐与乙烯基交叉耦合剂反应，例如，如上所述的，Stille耦合中的乙烯基锡烷，或乙烯基三氟硼酸盐，引入烯烃。使用6b酮产生烯烃的再一个实例是通过引入烯丙基基团。因此，在合适的碱(例如，碱金属碳酸盐，优选碳酸钾)和烯丙基溴化物的存在下，在惰性溶剂中处理其中Y是OH的6b，形成6f。化合物6f则与酮6b相似，并且因此能够按照以上部分1中所述的转化成化合物A1，其中X1是具有保护基团PG8的O或NH。
药物制剂
本发明的化合物用常规载体和赋形剂配制，它们将按照常规实践进行选择。片剂将包含赋形剂、助流剂、填充剂、粘合剂等。含水制剂以无菌的形式制备，并且当预期以口服给药以外形式递送时，通常将是等渗的。
尽管能够将活性成分单独给药，但是优选将它们制成药物制剂。本发明的制剂，无论是用于兽类还是人类应用，均包含至少一种活性成分与一种或多种可接受的载体，且可选包含其它治疗成分。
可以将适合于口服给药的本发明的制剂制成分散单位，如各自包含预定量活性成分的胶囊、扁囊剂或片剂；粉末或颗粒；在水性或非水性液体中的溶液或混悬剂；或水包油型液体乳剂或油包水型液体乳剂。还可以将活性成分作为大丸剂、药糖剂或糊剂给药。活性成分的有效剂量至少取决于待治疗病症的性质、毒性(不管化合物是否是预防使用(较低剂量)或是对抗活的病毒感染)、递送的方法和药物制剂，且将通过临床医生使用常规剂量递增研究而决定。有效剂量可以预期为约0.0001至约100mg/kg体重/天；通常，约0.01mg/kg至约10mg/kg体重/天；更常见地，约0.01mg/kg至约5mg/kg体重/天；最常见地，约0.05mg/kg至约0.5mg/kg体重/天。例如，用于大约70kg体重的成人的日候选剂量将为1mg至1000mg，优选5mg至500mg，并且可以采用单或多剂量形式。
联合治疗
本发明的化合物可以结合一种或多种活性剂。合适的待组合的活性剂的非限制性实例包括一种或多种干扰素、病毒唑或其类似物、HCV NS3蛋白酶抑制剂、NS5a抑制剂、α-葡萄糖苷酶1抑制剂、保肝药、甲氢戊酸脱羧酶拮抗剂、肾素-血管紧张素系统的拮抗剂、其他抗纤维化剂、内皮缩血管肽拮抗剂、HCV NS5B聚合酶的核苷或核苷酸抑制剂、HCV NS5B聚合酶的非核苷抑制剂、HCV NS5A抑制剂、TLR-7激动剂、亲环蛋白抑制剂、HCV IRES抑制剂、药物动力学增强剂和用于治疗HCV的其他药物；或其混合物。
更具体地，联用的一种或多种化合物选自以下组成的组：
1)干扰素，例如，PEG化的rIFN-α2b(PEG-Intron)、PEG化的rIFN-α2a(Pegasys)、rIFN-α2b(Intron A)、rIFN-α2a(Roferon-A)、干扰素α(MOR-22、OPC-18、Alfaferone、Alfanative、Multiferon、subalin)、干扰素alfacon-1(Infergen)、干扰素α-n1(Wellferon)、干扰素α-n3(Alferon)、干扰素β(Avonex，DL-8234)、干扰素-ω(ωDUROS，Biomed510)、albinterferonα-2b(Albuferon)、IFNαXL、BLX-883(Locteron)、DA-3021、糖基化的干扰素α-2b(AVI-005)、PEG-干复津、PEG化的干扰素λ(PEG化的IL-29)和belerofon；
2)病毒唑及其类似物，例如病毒唑(Rebetol、Copegus)和塔利韦林(Viramidine)； 3)HCV NS3蛋白酶抑制剂，例如，波普瑞韦(SCH-503034、SCH-7)、特拉瑞韦(telaprevir)(VX-950)、TM-435(TMC435350)、ABT-450、BI-201335、BI-1230、MK-7009、SCH-900518、VBY-376、VX-500、GS-9256、GS-9451、BMS-790052、BMS-605339、PHX-1766、AS-101、YH-5258、YH5530、YH5531、和ITMN-191(R-7227)；
4)α-葡糖苷酶1抑制剂，例如，西戈斯韦(celgosivir)(MX-3253)、米格列醇和UT-231B；5)保肝药，例如，emericasan(IDN-6556)、ME-3738、GS-9450(LB-84451)、silibilin和MitoQ；
6)HCV NS5B聚合酶的核苷或核苷酸抑制剂，例如，R1626、R7128(R4048)、IDX184、IDX-102、PSI-7851、BCX-4678、伐洛他滨(valopicitabine)(NM-283)、GS-6620和MK-0608；
7)HCV NS5B聚合酶的非核苷抑制剂，例如，非利布韦(PF-868554)、ABT-333、ABT-072、BI-207127、VCH-759、VCH-916、JTK-652、MK-3281、VBY-708、VCH-222、A848837、ANA-598、GL60667、GL59728、A-63890、A-48773、A-48547、BC-2329、VCH-796(nesbuvir)、GSK625433、BILN-1941、XTL-2125和GS-9190；
8)HCV NS5A抑制剂，例如，AZD-2836(A-831)、AZD-7295(A-689)和BMS-790052；
9)TLR-7激动剂，例如，咪喹莫特、852A、GS-9524、ANA-773、ANA-975、AZD-8848(DSP-3025)、PF-04878691和SM-360320；
10)亲环蛋白抑制剂，例如，DEBIO-025、SCY-635和NIM811；
11)HCV IRES抑制剂，例如，MCI-067；
12)药物动力学增强剂，例如，BAS-100、SPI-452、PF-4194477、TMC-41629、GS-9350、GS-9585和罗红霉素；
13)用于治疗HCV的其他药物，例如，胸腺肽α1(日达仙(Zadaxin))、硝唑尼特(nitazoxanide)(Alinea、NTZ)、BIVN-401(virostat)、PYN-17(altirex)、KPE02003002、actilon(CPG-10101)、GS-9525、KRN-7000、civacir、GI-5005、XTL-6865、BIT225、PTX-111、TX2865、TT-033i、ANA 971、NOc-205、tarvacin、EHC-18、VGX-410C、EMZ-702、AVI 4065、BMS-650032、BMS-791325、巴维昔单抗、MDX-1106(ONO-4538)、Oglufanide、FK-788和VX-497(merimepodib)；
14)甲氢戊酸脱羧酶拮抗剂，例如，他汀类(statins)、HMGCoA合成酶抑制剂(例如，hymeglusin)、角鲨烯合成抑制剂(例如，萨拉哥酸)。
15)血管紧张素II受体拮抗剂，例如，氯沙坦(losartan)、厄贝沙坦(irbesartan)、奥美沙坦(olmesartan)、坎地沙坦(candesartan)、缬沙坦(valsartan)、替米沙坦(telmisartan)、依普沙坦(eprosartan)；
16)血管紧张素转化酶抑制剂，例如，卡托普利(captopril)、佐芬普利(zofenopril)、恩纳普利(enalapril)、雷米普利(ramipril)、喹纳普利(quinapril)、培哚普利(perindopril)、赖诺普利(lisinopril)、贝那普利(benazepril)、福辛普利(fosinopril)；
17)其他抗纤维化剂，例如，氨氯吡脒(amiloride)，和
18)内皮缩血管肽拮抗剂，例如，波生坦(bosentan)和安贝生坦(ambrisentan)。
再在另一个实施方案中，本发明提供了包含本发明的组合物和第二种药物组合物的联合治疗，所述第二种药物组合物包含至少一种附加治疗剂，所述附加治疗剂选自由以下化合物组成的组：HIV蛋白酶抑制化合物、反转录酶的HIV非核苷抑制剂、反转录酶的HIV核苷抑制剂、反转录酶的HIV核苷酸抑制剂、HIV整合酶抑制剂、gp41抑制剂、CXCR4抑制剂、gp120抑制剂、CCR5抑制剂、干扰素、病毒唑类似物、NS3蛋白酶抑制剂、NS5a抑制剂、α-葡萄糖苷酶1抑制剂、亲环蛋白抑制剂、保肝药、HCV的非核苷抑制剂，和用于治疗HCV的其它药物，及其组合。
更具体地，本发明的一种或多种化合物可以与一种或多种化合物联用，所述化合物选自由以下的化合物组成的组：1)HIV蛋白酶抑制剂，例如，氨普那韦(amprenavir)、阿扎那韦(atazanavir)、呋山那韦(fosamprenavir)、茚地那韦(indinavir)、洛匹那韦(lopinavir)、利托那韦(ritonavir)、洛匹那韦+利托那韦、奈非那韦(nelfinavir)、沙奎那韦(saquinavir)、替拉那韦(tipranavir)、布瑞那韦(brecanavir)、达芦那韦(darunavir)、TMC-126、TMC-114、莫折那韦(mozenavir)(DMP-450)、JE-2147(AG1776)、AG1859、DG35、L-756423、RO0334649、KNI-272、DPC-681、DPC-684和GW640385X、DG17、PPL-100，2)反转录酶的HIV非核苷抑制剂，例如，卡普韦林(capravirine)、乙米韦林(emivirine)、地位韦啶(delaviridine)、依法韦仑(efavirenz)、奈韦拉平(nevirapine)、(+)胡桐素A、依曲韦林(etravirenz)、GW5634、DPC-083、DPC-961、DPC-963、MIV-150和TMC-120、TMC-278(利匹韦林(rilpivirine)、依法韦仑(efavirenz)、BILR 355BS、VRX 840773、UK-453,061、RDEA806，3)反转录酶的HIV核苷抑制剂，例如，齐多夫定(zidovudine)、恩曲他滨(emtricitabine)、去羟肌苷(didanosien)、司他夫定(stavudine)、扎西他滨(zalcitabine)、拉米夫定(lamivudine)、阿巴卡韦(abavavir)、氨多索韦(amdoxovir)、艾夫西他滨(elvucitabine)、阿洛夫定(alovudine)、Mb-210、racivir(±-FTC)、D-d4FC、恩曲他滨、叠氮膦(phosphazide)、 福齐夫定替酯(fozivudine tidoxil)、磷夫定酯(fosalvudine tidoxil)、阿立他滨(apricitibine)(AVX754)、氨多索韦、KP-1461、阿巴卡韦+拉米夫定、阿巴卡韦+拉米夫定+齐多夫定、齐多夫定+拉米夫定，4)反转录酶的HIV核苷酸抑制剂，例如，替诺福韦(tenofovir)、富马酸替诺福韦二吡呋酯+恩曲他滨、富马酸替诺福韦二吡呋酯+恩曲他滨+依法韦仑，和阿德福韦，5)HIV整合酶抑制剂、例如，姜黄素、姜黄素衍生物、菊苣酸、菊苣酸衍生物、3,5-二咖啡酰奎尼酸、3,5-二咖啡酰奎尼酸衍生物、金精三羧酸、金精三羧酸衍生物、咖啡酸苯乙酯、咖啡酸苯乙酯衍生物、酪氨酸磷酸化抑制剂、酪氨酸磷酸化抑制剂衍生物、槲皮素、槲皮素衍生物、S-1360、zintevir(AR-177)、L-870812和L-870810、MK-0518(雷特格韦(raltegravir))、BMS-707035、MK-2048、BA-011、BMS-538158、GSK364735C，6)gp41抑制剂，例如，恩夫韦肽(enfuvirtide)、西夫韦肽(sifuvirtide)、FB006M、TRI-1144、SPC3、DES6、Locus gp41、CovX和REP9，7)CXCR4抑制剂，例如AMD-070，8)进入抑制剂，例如SP01A、TNX-355，9)gp120抑制剂，例如BMS-488043和BlockAide/CR，10)G6PD和NADH-氧化酶抑制剂，例如，immunitin，10)CCR5抑制剂，例如阿拉韦罗(aplaviroc)、维立韦罗(vicriviroc)、INCB9471、PRO-140、INCB15050、PF-232798、CCR5mAb004和马拉韦罗(maraviroc)，11)干扰素，例如，PEG化的rIFN-α2b、PEG化的rIFN-α2a、rIFN-α2b、IFNα-2b XL、rIFN-α2a、共有的IFNα、干复津、利比、locteron、AVI-005、PEG-干复津、PEG化的IFN-β、口服干扰素α、feron、reaferon、intermaxα、r-IFN-β、干复津+actimmune、IFN-ω与DUROS，和albuferon，12)病毒唑类似物、例如，rebetol、copegus、VX-497和他立韦林(viramidine)，13)NS5a抑制剂，例如，A-831、A-689和BMS-790052，14)NS5b聚合酶抑制剂，例如，NM-283、伐洛他滨、R1626、PSI-6130(R1656)、IDX184、PSI-7851、HCc-796、BILB 1941、MK-0608、NM-107、R7128、VCH-759、PF-868554、GSK625433和XTL-2125，15)NS3蛋白酶抑制剂，例如，SCH-503034(SCH-7)、VX-950(特拉瑞韦)、ITMN-191和BILN-2065，16)α-葡萄糖苷酶1抑制剂，例如，MX-3253(西戈韦)和UT-231B，17)保肝药，例如，IDN-6556、ME3738、MitoQ和LB-84451，18)HCV的非核苷抑制剂，例如，苯并咪唑衍生物、苯并-1,2,4-噻二嗪衍生物和苯丙氨酸衍生物，19)用于治疗HCV的其它药物，例如，日达仙、硝唑尼特(alinea)、BIVN-401(virostat)、DEBIO-025、VGX-410C、EMZ-702、AVI 4065、巴土昔单抗、奥谷法奈、PYN-17、KPE02003002、actilon(CPG-10101)、KRN-7000、civacir、GI-5005、ANA-975(isatoribine)、XTL-6865、ANA 971、NOc-205、tarvacin、EHC-18和NIM811，19)药物动力学增强剂，例如，BAS-100、SPI-452、PF-4194477、TMC-41629、 GS-9350、GS-9585和罗红霉素，20)核糖核酸酶(RNAse)H抑制剂，例如，ODN-93和ODN-112，21)其它抗-HIV剂，例如，VGc-1、PA-457(bevirimat)、阿普林津(ampogem)、HRG214、cytolin、polymun、VGX-410、KD247、AMZ 0026、CYT 99007、A-221HIV、BAY 50-4798、MDX010(伊匹木单抗(iplimumab))、PBS119、ALG889和PA-1050040。
在这个实施方案的特定方面中，附加治疗剂选自病毒唑、特拉瑞韦、波普瑞韦和索非布韦(GS-7977(之前为PSI-7977)。
可以作为同时或按序的方案来给予本文所述的联合治疗。当按序给予时，可以以两次或多次给药来给予组合物。
本发明的化合物与一种或多种其他活性剂的共同给药通常指的是本发明的化合物和一种或多种其他活性剂的同时或按序给药，使得治疗有效量的本发明的化合物和一种或多种其他活性剂同时存在于患者体内。
本发明的一种或多种化合物通过适于待治疗病症的任何途径给药。合适的途径包括口服、直肠、鼻、局部(包括颊和舌下)、阴道和胃肠外(包括皮下、肌内、静脉内、皮内、鞘内和硬膜外)等。应当理解，优选的途径可随着例如接受者的状况而变化。本发明化合物的优点在于它们是口服生物可利用的且可以口服给药。
用于治疗病毒感染的方法
本申请提供了一种用于治疗黄病毒科病毒感染的方法，包括将治疗有效量的本文中所述的化合物或其药物学上可接受的盐、同位素、立体异构体、立体异构体的混合物、互变异构体、酯或前药，给药于需要的人患者。
本申请还提供了一种用于治疗冠状病毒科病毒感染的方法，包括将治疗有效量的本文中所述的化合物或其药物学上可接受的盐、同位素、立体异构体、立体异构体的混合物、互变异构体、酯或前药，给药于需要的人患者。
在一个实施方案中，抑制或治疗疾病的方法包括将包含治疗有效量的一种或多种本发明的化合物和药物学上可接受载体的组合物给药于动物。待给药的组合物可以进一步含有如上所述的第二种治疗剂。
本申请的方法特别适用于人，但可以用于其他动物，特别是哺乳动物，如，例如，非人灵长类、伴侣动物、农场动物、实验室动物以及野生的和动物园动物。
本申请的方法对于治疗由黄病毒科病毒直接或间接引起的疾病特别有用，因为本发明的化合物具有对抗那些病毒的抑制活性。因此，在一些实施方案中，本发明的方法用于抑 制或治疗由丙肝病毒引起的疾病。因此，在一些实施方案中，本发明的方法用于抑制或治疗由乙肝病毒引起的疾病的。在一个方面中，将这样的方法应用于患有由病毒感染引起的疾病的患者，所述疾病如登革热、黄热病、丙型肝炎、日本脑膜炎、基萨诺尔森林疾病、墨累谷脑炎、圣路易斯型脑炎、蜱传脑炎或西尼罗河脑炎。
在一些实施方案中，在约12周、约10周、约8周、约6周或约4周，或约4个月，或约5个月，或约6个月，或约1年，或约2年，获得了持续的病毒学应答。
本申请的方法对于治疗由冠状病毒科病毒直接或间接引起的疾病也特别有用，因为本发明的化合物对那些病毒具有抑制活性。因此，在一些实施方案中，本发明的方法用于抑制或治疗由SARS冠状病毒引起的疾病。在一个方面中，将这样的方法应用于患有由病毒感染引起的疾病的患者，所述疾病如严重急性呼吸道综合症(SARS)、癌症、炎症、肥胖症、获得性免疫缺陷综合症(AIDS)或硬化。
在另一个方面中，本文中公开的化合物可以用于治疗癌症。再在另一个方面中，本文中公开的化合物可以用于免疫调节。因此，在一些实施方案中，本发明的方法包括将免疫应答调节至所需水平，如在免疫增强、免疫抑制或免疫耐受性诱导中。
在一些实施方案中，将化合物给药约12周。在其他的实施方案中，化合物给药约12周或更短，约10周或更短，约8周或更短，约6周或更短，或约4周或更短。化合物可以每日给药一次、每日两次、每隔一天一次、一周两周、一周三次、一周四次或一周五次。
实施例
以下实施例只是说明性的，并且没有以任何方式限制本申请。
缩写和首字母缩写的列表
缩写 含义
℃ 摄氏度
di-tBuXPhos 2-二-叔-丁基膦基-3,4,5,6-四甲基-2′,4′,6′-三异丙基-1,1′-联
苯
2,6-lut. 2,6-卢剔啶
MNBA 2-甲基-6-硝基苯甲酸酐
4AMS 4埃分子筛
Ac 乙酰基
app 明显的
aq 含水
atm 大气
BINAP (2,2'-双(联苯膦基)-1,1'-联萘)
Bn 苄基
Boc 叔-丁氧基羰基
BOP 苯并三唑-1-基-氧-三-(二甲基氨基)-膦六氟磷酸酯
br 宽
Bu 丁基
cat 催化
cm 厘米
cod 环辛二烯
COMU (1-氰基-2-乙氧基-2-氧亚乙基氨基氧)二甲基氨基-吗啉代-
碳鎓六氟磷酸盐
CP/Cp 环戊基
CPME 环戊基甲醚
CSA 樟脑磺酸
Cy/cHex 环己基
d 双重峰
DAST 二乙基氨基三氟化硫
dba 二苄叉甲酮
DBU 1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯
DCC N,N'-二环己基碳二亚胺
DCE 二氯乙烷
DCM 二氯甲烷
dd 双重的双重峰
DIPEA N,N-二异丙基乙胺
DMAP 4-二甲基氨基吡啶
DMF 二甲基甲酰胺
DMSO 二甲亚砜
dq 双重的四重峰
EDC 1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺
equiv 当量
ESI 电喷雾电离
Et 乙基
g 克
HATU (二甲基氨基)-N,N-二甲基(3H-[1,2,3]三唑并[4,5- b]吡啶-3-
基氧)甲烷亚胺(methaniminium)六氟磷酸酯
HDMS 六甲基二硅氮烷(disilazane)
HOBT 羟基苯并三唑
HPLC 高性能液相色谱
hrs/h 小时
Hz 赫兹
IC50 半最大抑制浓度
i-Pr/iPr 异丙基
J 耦合常数
Kg 公斤
LCMS 液相色谱–质谱
LDA 二异丙基酰胺锂
M 摩尔
m 多重峰
m/z 质荷比
M+ 质峰
m-CPBA 间-氯代过氧苯甲酸
Me 甲基
mg 毫克
MHz 兆赫
min 分钟
mL 毫升
mM 毫摩尔
mm 毫米
mmol 毫摩尔
mol 摩尔
Ms 甲烷磺酰基
MW 微波
nM 纳摩尔
NMR N-甲基吗啉
o-Tol o-甲苯基
Ph 苯基
Pin 频哪醇
Piv 特戊酰
ppm 百万分之几
pTSA p-甲苯磺酸
py 吡啶
q 四重峰
quant 定量
rac 外消旋
Rf 保持系数
RT/rt/r.t. 室温
s 单重峰或秒
sat. 饱和的
SEMCl 2-三甲基甲硅烷基乙氧基甲基氯
t 三重峰
TBAF 四-n-丁基氯化铵
TBDMS/TBS 叔-丁基二甲基甲硅烷基
td 三重双重峰
TEA 三乙胺
Tf 三氟甲烷磺酰
TFA 三氟乙酸
THF 四氢呋喃
TLC 薄层色谱
TMS 三甲基甲硅烷基
Tr/tr 保持时间
Ts 甲苯磺酰基
UV 紫外线
δ 化学位移
μL 微升
μM 微摩尔
μmol 微摩尔
对于实施例1至58，和实施例93到107，除非另外指出，在Gilson HPLC系统上进行制备性HPLC，使用Agilent Eclipse XDB/C18 7 micron，250×21.2mm半制备性柱和20mL/min流速的乙腈/水移动相。
对于实施例59至92，和实施例108到112，除非另外指出，在Shimadzu HPLC系统上进行制备性HPLC，使用21.2×250mm 10 micro C18 Phenomenex Gemini半制备性柱和20mL/min流速的乙腈/水移动相。
实施例 1: (E)-(2R,3R)-7-(3-{(R)-1-[((S)-六氢-哒嗪-3-羰基)-氨基]-乙基}-苯基)-3-甲氧基-2-甲基-庚-6-烯酸 (S)-2-甲基-1-((S)-1-甲基-2-氧-乙基氨甲酰基)-丙酯- 化合物 1
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化合物1a的合成：制备甲苯(50mL)中的1-((1R,5S)-10,10-二甲基-3,3-二氧-3λ*6*-硫-4-氮杂-三环[5.2.1.0*1,5*]癸-4-基)-丙-1-酮(3.95g，14.55mmol)的溶液，然后蒸发至干。重复该过程，并将所得到的白色固体溶解于无水二氯甲烷(16mL)中。加入少量氢化钙，接着加入叔-丁基二甲基甲硅烷基三氟甲烷磺酸酯(3.83mL，14.5mmol)和无水三乙胺(2.33mL， 16.7mmol)。将反应混合物在氮气气氛下在室温(“RT”)下搅拌15小时(“h”)。将所得到的溶液蒸发，产生浓稠糊状物，将其重新溶解于无水二氯甲烷(15mL)中，并在氮气气氛下，逐滴加入-78℃下的无水二氯甲烷(20mL)中的4- 戊烯醛(2.69g，32.0mmol)和四氯化钛(二氯甲烷中的1M，32mL，32mmol)的搅拌溶液中。将反应在-78℃下搅拌30分钟(“min”)，接着用饱和含水氯化铵溶液(100mL)稀释。分层，并用二氯甲烷(2×50mL)萃取含水层。将合并的提取物通过硫酸钠干燥，过滤，并蒸发，获得棕色凝胶。这通过硅胶色谱来纯化，使用异-己烷/乙酸乙酯4:1，产生了作为无色凝胶的标题化合物(3.09g，60％)。
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化合物1b的合成：制备无水二氯甲烷(7mL)中的1a的溶液(250mg，0.703mmol)，并添加三甲基氧鎓四氟硼酸盐(208mg，1.406mmol)。室温搅拌反应混合物15h。用甲醇(1mL)，然后2M盐酸(20mL)和饱和盐水(20mL)处理反应混合物。用乙酸乙酯(3x15mL)提取混合物，而且提取物通过硫酸钠干燥，过滤并蒸发，获得黄色凝胶。该凝胶通过硅胶色谱来纯化，使用异-己烷/乙酸乙酯4:1，获得了作为无色凝胶的主题化合物(223mg,86％)。
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化合物1c的合成：添加水中的2M氢氧化锂的溶液(5mL)到四氢呋喃中的1b(223mg,0.60mmol)的搅拌溶液(15mL)中。搅拌的混合物15h加热到60℃。反应混合物部分蒸发，接着添加2M盐酸(20mL)。用乙酸乙酯(3x15mL)提取溶液。提取物通过硫酸钠干燥，过滤并蒸发，获得黄色凝胶(209mg)。该凝胶通过硅胶色谱纯化，使用异-己烷/乙酸乙酯3:1，获得作为黄色凝胶的主题化合物(68mg,66％)。
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化合物1d的合成：将乙腈(160mL)中的(S)-2-叔-丁氧基羰基氨基-丙酸(3.28g，17.32mmol)的溶液冷却至0℃，接着加入N,N-二异丙基乙胺(12mL，69.3mmol)，然后加入2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯(6.57g，17.32mmol)。将反应混合物在0℃下搅拌20min，并加入乙腈(80mL)中的(S)-六氢哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯乙酯三氟乙酸盐(按照Angew.Chem.Int.Ed.Engl.1999,38,2443中所述的制备，6.49g，17.3mmol)的溶液。使反应温热至室温，并且搅拌15h。将反应混合物蒸发，然后重新溶解于乙酸乙酯(150mL)中。用盐水(150mL)洗涤溶液。用乙酸乙酯(50mL)反萃取盐水。将有机层合并，通过硫酸钠干燥，过滤并蒸发，获得黑色油。将油通过硅胶色谱纯化，使用异-己烷/乙酸乙酯1:1，以产生作为无色凝胶的标题化合物(6.88g，92％)。
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化合物1e的合成：添加三氟甲磺酸三甲基硅酯(941μL,5.2mmol)到氮气气氛下，0℃无水二氯甲烷中的1d(1.5g,3.5mmol)中。0℃搅拌反应混合物1h，接着添加N,N-二异丙基乙胺(2.2mL,13.9mmol)，然后真空浓缩，获得(S)-1-[(S)-2-((S)-2-氨基-甲基-丁酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯-乙酯。得到的残留物溶于无水乙腈(20mL)并冷却至0℃，接着加入(S)-2-羟基-3-甲基-丁酸(413mg,3.5mmol)、对羟基苯并三唑一水合物(796mg,5.2mmol)、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(1.02g,5.2mmol)和N,N-二异丙基乙胺(1.7mL,10.4mmol)。将反应混合物于0℃搅拌90min，加温到室温，搅拌72h，并真空浓缩。添加乙酸乙酯到残留物中，然后用饱和的氯化铵和盐 水洗涤。有机层通过硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩。将残留物通过硅胶色谱纯化，使用异-己烷/乙酸乙酯2:1，以提供作为白色固体的标题化合物(1.1g,73％，2步)。
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化合物1f的合成：制备二氯甲烷(20mL)中的1e(830mg,1.92mmol)的搅拌溶液，并且添加1c(34mg,2.00mmol)、N,N'-二环己基碳二亚胺(594mg,2.88mmol)和N,N-二甲基氨基吡啶(23mg,0.192mmol)。室温搅拌反应18h。添加另外含量的1c(34mg,2.00mmol)、N,N'-二环己基碳二亚胺(594mg,2.88mmol)和N,N-二甲基氨基吡啶(23mg,0.192mmol)，并室温搅拌反应另外的22h。用水洗涤反应混合物，并用二氯甲烷(2x15mL)和乙酸乙酯(2x15mL)反萃取含水层。合并有机层，通过硫酸钠干燥，过滤并蒸发，获得棕色凝胶。将凝胶通过硅胶色谱进行纯化，使用异-己烷/乙酸乙酯1:1，然后用乙酸乙酯，获得作为白色固体的主题化合物(656mg,58％)。
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化合物1g的合成：制备四氢呋喃(30mL)中的1f(656mg,1.12mmol)的溶液，并且加入锌粉末(732mg,11.2mmol)和含水醋酸铵溶液(1M,8mL,8mmol)。室温搅拌反应18h。混合物过滤通过硅藻土(hyflo-supercel)，然后用氯化铵酸化，然后进一步用2M盐酸酸化到pH 1。用乙酸乙酯(3x25mL)提取混合物。提取物干燥通过硫酸钠，过滤并蒸发，获得固体，其用甲苯(40mL)共沸获得作为无色固体的标题产物(343mg,67％)。
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化合物1h的合成：二氯甲烷(20mL)中的(R)-溴-α-甲基苄胺(1.023g,5.112mmol)的溶液接着用三乙胺(720μL,5.112mmol)和二-叔-丁基碳酸氢钠(1.784g,8.179mmol)处理。室温搅拌过夜之后，真空除去挥发物，残留物通过硅胶色谱纯化，使用50g Isolute筒，用异己烷/二乙酸乙酯1:0到4:1的连续梯度洗脱，获得作为白色固体的标题化合物(1.552g,100％)。
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化合物1i的合成：甲苯(175mL)中的1h(10.26g,0.0342mol.)和三丁基(乙烯基)锡烷(32.5g,30mL,0.103mol.)的溶液用氮气脱气30min，接着添加双(三苯基膦)二氯化钯(II)(2.38g,0.0034mol)。将搅拌的混合物加热到60℃，持续16h，接着冷却到室温。反应混合物过滤通过硅藻土，然后蒸发获得深色油。将油通过硅胶色谱纯化，使用异己烷/乙酸乙酯19:0，获得作为黄色油的标题化合物(6.95g,82％)。
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化合物1j的合成：制备1,4-二噁烷(30mL)中的1i(6.95g,28.1mmol.)的溶液，并添加1,4-二噁烷(4M,60mL)中的氯化氢的溶液。将反应混合物室温搅拌2h，然后蒸发进行干燥。得到的固体重新溶解于甲苯中并蒸发。固体用二乙酸乙酯研磨，通过轻轻倒出除去二乙酸乙酯。然后真空干燥固体获得作为白色固体的标题化合物(4.96g,96％)。
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化合物1k的合成：制备乙腈中(25mL)中的1g(343mg,0.752mmol)、1j(138mg,0.752mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.52mL，3.00mmol)的溶液，并添加2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲烷亚胺(0.40g,1.05mmol)。混合物室温搅拌18h。将反应混合物蒸发，然后重新溶解于乙酸乙酯(25mL)和水(25mL)中。分离层，并进一步用乙酸乙酯(2×20mL)萃取含水层。合并的有几层通过硫酸干燥，过滤并蒸发获得棕色凝胶。将凝胶通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷/乙酸乙酯1:3，获得作为无色固体的标题化合物(217mg，49％)。
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标题化合物的合成：制备1,2-二氯甲烷(125mL)中的1k(217mg，0.37mmol)的搅拌溶液，并添加Hoveyda-Grubbs第2代催化剂(23mg，0.037mmol)。将搅拌的溶液加热回流3h。再次添加Hoveyda-Grubbs第2代催化剂(46mg，0.074mmol)，并将反应加热到85℃，又持续2h。用硅胶处理冷却的反应混合物。蒸发混合物，然后使用乙酸乙酯通过硅胶色谱进行纯化，获得类白色固体(177mg)。将该固体再次通过硅胶色谱进行纯化，使用5g筒和乙酸乙酯，获得作为白色固体的标题化合物(67mg，32％)。1H NMR(300MHz,d6-丙酮)0.93(d,J＝7.1Hz,3H),0.95(d,J＝7.3Hz,3H),1.15(d,J＝6.9Hz,3H),1.34(d,J＝6.7Hz,3H),1.43(d,J＝7.1Hz,3H),1.47-1.69(m,3H),1.70-1.91(m,3H),1.92-2.17(m,3H),2.32-2.48(m,1H),3.02-3.13(m,1H),3.35(s,3H),3.40-3.65(m,3H),4.27-4.43(m,2H),4.80(d,J＝5.3Hz,1H),5.00-5.15(m,1H),5.32-5.44(m,1H),6.20-6.33(m,1H),6.42(d,J＝15.8Hz,1H),7.10-7.32(m,3H),7.34(s,1H),7.87(d,J＝8.0Hz,1H).LCMS(m/z)557.3[M+H],Tr＝2.59min。
实施例2:化合物2
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化合物2a的合成：制备无水二氯甲烷(24ml)中的1-((1R,5S)-10,10-二甲基-3,3-二氧-3λ*6*-thia-4-氮杂-三环[5.2.1.0*1,5*]dec-4-yl)-丙-1-酮(6.0g,22.1mmol)的溶液，并添加叔丁基二甲硅基三氟甲磺酸(5.0mL,22.1mmol)，接着添加无水三乙胺(3.54mL,25.4mmol)。将反应混合物在氮气气氛下室温搅拌15h。这获得深色溶液，蒸发得到油。将该油溶解于无水二氯甲烷(22mL)中，并在氮气气氛下，–78℃下，将溶液逐滴添加到二氯甲烷(22mL)中的巴豆醛(3.66mL,44.2mmol)和四氯化钛(二氯甲烷中1M,44.2mL,44.2mmol)。–78℃下将反应混合物搅拌1h，接着添加氯化铵溶液(30mL)。使反应混合物升温到室温，接着分离各层。用二氯甲烷(2x25mL)萃取含水层。合并有机层，通过硫酸干燥，过滤并蒸发，获得棕色油。将油通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷/乙酸乙酯4:1，产生作为无色固体的标题化合物(6.7g,89％)。
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化合物2b的合成：制备无水二氯甲烷(80mL)中的2a(4.15g,12.1mmol)的溶液，并添加1,8-双(二甲氨基)萘(7.78g,36.3mmol)，接着添加三甲基氧鎓四氟硼酸盐(3.6g,24.2mmol)。将反应混合物于室温搅拌3h。用甲醇(3mL)处理反应混合物，并搅拌5min，接着添加盐酸(2M,200mL)和乙酸乙酯(250mL)。过滤混合物以除去不可溶的固体并分离各层。用乙酸乙酯(2x100mL)萃取含水层。合并有机层并用盐水洗涤，通过硫酸干燥，过滤并蒸发，获得作为淡棕色固体的标题化合物(2x100mL)。
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化合物2c的制备：添加水(2M,50mL,100mmol)氢氧化锂的溶液到四氢呋喃(130mL)中的2b(4.80g,12.1mmol)的搅拌溶液中。把反应混合物加热到60℃，持续15h。将反应混合物冷却到室温，接着部分蒸发并添加盐酸(2M,150mL)。用乙酸乙酯 (3x50mL)提取混合物。提取物通过硫酸钠干燥，过滤并蒸发，获得棕色油(3.5g)。将油通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷/二乙醚1:1，获得作为无色油的标题化合物(1.132g,59％)。
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化合物2d的合成：以与化合物1f相同的方式制备化合物2d，同时用2c(148mg,0.94mmol)代替1c，获得作为白色固体的标题化合物(340mg,76％)。
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化合物2e的制备：甲苯(100mL)中的6-溴-3-氯-异喹啉(Frontier Scientific,Logan,Utah USA)(8.0g,33mmol)和三丁基-(1-乙氧基-乙烯基)-锡烷(14.88g,14mL,41.2mmol)的溶液用氮气脱气30min。添加双(三苯基膦)二氯化钯(II)(1.16g,1.65mmol,5mol％)，并于60℃将反应混合物加热2h。将反应混合物冷却至室温，过滤混合物，并将滤出液蒸发。将残留物通过硅胶色谱进行纯化使用异己烷/乙酸乙酯20:1至10:1的梯度，获得作为淡黄色固体的标题化合物(7.1g,92％)。
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化合物2f的合成：将1,4-二恶烷(60mL)和2M盐酸(30mL)中的2e(7.1g,30mmol)的溶液于室温搅拌30min。蒸发掉大部分溶剂，并将残留物在乙酸乙酯与水之间分隔开。合并有机提取物，用水喝盐水洗涤，通过硫酸钠干燥，过滤并蒸发。残留物用异己烷中的5％乙醚研磨，收集得到的固体并干燥，获得作为白色固体的标题化合物(6.0g产量)。
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化合物2g的合成：在氮气下搅拌四氢呋喃(40mL)中的2f(1.72g,8.3mmol)的溶液。添加钛酸(IV)乙酯(3.8g,3.45mL,16.6mmol,tech.grade)，接着添加(R)-(+)-2-甲基-丙烷亚磺酰胺(propanesulfinimide)(1.11g,9.2mmol)，将反应混合物在氮气下于60℃搅拌18h。添加另外的(R)-(+)-2-甲基-丙烷亚磺酰胺(propanesulfinimide)(190mg,0.2当量)，并于65℃将反应混合物搅拌另外的2h。将反应混合物冷却到室温，并添加乙酸乙酯和盐水。悬浮液通过硅藻土过滤，过滤板用乙酸乙酯进行洗涤。分离乙酸乙酯层，用盐水洗涤，通过硫酸钠干燥，过滤并蒸发。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷乙酸乙酯7:3至3:7的梯度，获得标题化合物(2.2g,86％)。
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化合物2h的制备：(1S,2R)-(-)-顺式-1-氨基-2-茚醇(60mg,0.4mmol)、[Ru(p-cymen)Cl2]2(122mg,0.2mmol)和粉末的![]()
分子筛(2g)的混合物悬浮于无水2-丙醇(9mL)中，并在氮气下搅拌。于90℃加热悬浮液20min。将反应混合物冷却到40℃，添加2-丙醇(28mL)中的2g(1.23g,4mmol)的溶液，接着添加2-丙醇(10mL)中的叔丁醇钾(122mg,1.1mmol)的溶液。将反应混合物于40℃搅拌2h，然后使其冷却。将混合物直接倒入硅胶筒中，并用乙酸乙酯洗脱，蒸发后，获得作为棕色凝胶的标题化合物(1.19g,96％)。
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化合物2i的合成：2h(1.66g,2.11mmol)、三丁基(乙烯基)锡(1.85mL,6.35mmol)和四(三苯基膦)钯(488mg,0.42mmol，溶于1,4-二恶烷(10.5mL)中)的混合物放入微波碗中并加盖。加热反应混合物，并于160℃在微波反应器中搅拌40min。另一个反应在相同规模和条件下进行，合并反应并蒸发。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用异丙烷中的25-100％乙酸乙酯的梯度，获得作为棕色凝胶(1g)的标题化合物。
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化合物2j的合成：2i悬浮于1,4-二恶烷(17mL,68mmol)中的4M HCl中，并添加甲醇(34mL)。将反应混合物搅拌90min，然后蒸发，获得作为di-HCl盐的标题化合物。残留物通过SCX筒，用甲醇洗脱，然后用甲醇铵洗脱。收集碱性级分并蒸发，获得作为米色固体(530mg,63％,两步)的标题化合物。
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化合物2k的合成：以与化合物1k相同的方式制备化合物2k，首先通过用(S)-1-{(S)-2-[(S)-2-((E)-(2R,3R)-3-甲氧基-2-甲基-六-4-enoyloxy)-3-甲基-丁酰胺基]-丙酰基}-六氢-哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯-乙酯(340mg,0.59mmol)代替1g，接着用于化合物1g的合成，然后在化合物1k的合成中，用2j二氯化物(160mg,0.59mmol)代替(R)-1-(3-乙烯基-苯基)-盐酸乙胺，获得作为粘稠的淡棕色油的标题化合物(240mg,66％,2步)。
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标题化合物的合成：甲苯(161mL)中的2k(300mg,0.48mmol)的溶液用氮气脱气10min，接着加入Hoveyda Grubbs第2代催化剂(61mg,0.1mmol)。将搅拌的溶液加热到125℃，持续2h，接着加入另外含量的Hoveyda Grubbs第2代催化剂(61mg,0.1mmol)，并加热持续4h。将反应冷却到环境温度，并浓缩干燥。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用乙酸乙酯/丙酮1/10，然后3/1，接着通过制备级TLC，使用乙酸乙酯/丙酮8/1，产生作为类白色固体的标题化合物(4mg,1％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)0.80-1.11 (m,6H),1.20-1.38(m,3H),1.42-1.70(m,6H),1.67-1.88(m,2H),1.89-2.25(m,3H),2.60-2.75(m,2H),2.98-3.18(m,1H),3.48(s,3H),3.58-3.77(m,1H),4.36-4.67(m,2H),4.91(s,1H),5.18-5.43(m,1H),5.61-5.76(m,1H),6.40-6.65(m,1H),6.82-7.10(m,3H),7.36-7.50(m,1H),7.64(s,1H),7.85-8.01(m,1H),8.18(s,1H),9.16(s,1H).LCMS(m/z)＝580.3[M+H],Tr＝1.50min。
实施例3：化合物3
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化合物3a的合成：以与化合物1f相同的方式制备化合物3a，通过用3-丁烯酸代替1c，获得作为白色固体的标题化合物(397mg,66％)。
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化合物3b的合成：添加粉末状的锌(1.11g,17.1mmol)到四氢呋喃(17mL)和水(9mL)中的3a(390mg,0.78mmol)的溶液中，接着添加醋酸铵(899mg,11.7mmol)。室温搅拌反应混合物15h。反应通过硅藻土过滤，滤出液用浓缩的盐酸酸化到pH2，并用乙酸乙酯提取2次。有机层通过疏水性筛板(frit)干燥并真空浓缩，接着从甲苯(2x)共蒸发。随后的残留物溶解于无水乙腈(15mL)中，添加2j(211mg,0.78mmol)，接着添加羟基苯并三唑一水合物(119mg,0.78mmol)、1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺(210mg,1.1mmol)。室温搅拌反应混合物16h。添加硅胶到反应混合物中并真空浓缩。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷/乙酸乙酯1/1，然后乙酸乙酯，获得作为白色固体的标题化合物(276mg,57％,2步)。
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标题化合物的制备：添加甲苯/二氯乙烷(1:1,9mL)中的3b(250mg,0.45mmol)的溶液到无水甲苯(150mL)中的Hoveyda Grubbs第2代催化剂(85mg,0.14mmol)和2,6-二氯苯醌(8mg,0.05mmol)的回流溶液中超过1h。回流1h以后，添加另外含量的Hoveyda Grubbs第2代催化剂(42mg,0.07mmol)，继续加热3h。将反应冷却到室温并蒸发干燥。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用乙酸乙酯，然后乙酸乙酯/丙酮3/1，产生棕色泡沫。该棕色泡沫通过制备性TLC进行进一步纯化，使用乙酸乙酯/丙酮8/1(2x)，产生作为白色固体的标题化合物(2mg,1％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)0.73-1.20(m,9H),1.40-2.08(m,5H),2.15-2.61(m,4H),3.14-4.15(m,6H),4.78-5.63(m,3H),6.67-7.03(m,2H),7.38-7.58(m,2H),7.83-8.04(m,2H),9.17(s,1H).LCMS(m/z)＝522.2[M+H],Tr＝1.33min。
实施例4-化合物4
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化合物4a的合成：添加己烷(10mL,25mmol)中的2.5M丁基锂到-78℃的四氢呋喃(10mL)中的(S)-4-苄基-2-恶唑烷酮(3.85g,21.7mmol)的溶中，将混合物搅拌5min。然后添加戊酸酐(5.15mL,26.1mmol)，将溶液于-78℃搅拌50min，接着添加盐水(10mL)。然后当添加更多盐水(20mL)时，允许混合物升温到室温。用乙酸乙酯(2x50mL)提取有机物，而且合并的提取物通过硫酸钠进行干燥，过滤并蒸发，获得粗油。将该粗油通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷/乙酸乙酯9:1，产生标题化合物(5.24g,92％)。
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化合物4b的合成：将四氢呋喃(50mL)中的4a的溶液(5.24g,20.0mmol)冷却至–78℃。逐滴添加四氢呋喃(32.1mL,32mmol)中的1M六甲基二硅氮烷钠，而且内部温度保持在低于-70℃。完成添加以后，继续于-78℃搅拌1h。完成以后，逐滴添加烯丙基溴(6.98mL,80.2mmol)，并且内部温度保持在-55℃至-40℃之间。完成添加以后，于-55℃至-40℃之间继续搅拌3h，然后添加饱和的氯化铵(20mL)，并允许混合物升温至室温。有机物用乙酸乙酯(2x100mL)进行提取，用盐水洗涤，通过硫酸钠干燥并蒸发，获得粗黄色油。该油通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷/乙酸乙酯1:0，然后95:5，然后9:1，获得标题化合物(2.95g,49％)。
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化合物4c的合成：四氢呋喃(72mL)和水(36mL)中的4b(2.95g,9.79mmol)的溶液冷却至0℃。添加30％无水过氧化氢(4.72mL,48.9mmol)，接着添加水(7.2mL)中氢氧化锂(470mg,19.6mmol)的溶液。将混合物于0℃搅拌，3.42h以后，添加水(36mL)中的亚硫酸钠(11.3g,90mmol)的溶液，并将溶液于0℃搅拌15min。
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化合物4d的合成：添加4c(388mg,2.19mmol)、N,N′-二环己基碳二亚胺(564mg,2.74mmol)和4-二甲基氨基嘧啶(223mg,1.82mmol)到室温的二氯甲烷(9mL)中的1e(790mg,1.82mmol)的溶液中，并室温搅拌反应混合物3h。该时间过后，将反应混合 物用二氯甲烷(50mL)稀释，并用饱和的氯化铵溶液洗涤。含水相用二氯甲烷(2x50mL)再提取，并用盐水(100mL)洗涤合并的有机相，通过硫酸镁干燥并蒸发，获得白色残留物。将白色残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷/乙酸乙酯1:0至1:1，产生标题化合物(916mg,90％)。
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化合物4e的合成：制备四氢呋喃(41mL)中的4d(916mg,1.65mmol)的溶液，并添加锌粉(2.37g,36.2mmol)，接着添加水(10.2mL)中的醋酸铵(1.90g,24.7mmol)溶液。将反应混合物在室温下搅拌24h。将反应通过硅藻土过滤，通过用乙酸乙酯和饱和的含水硫酸氢钾洗涤。用盐酸(1M,5mL)处理混合物，并分层。用乙酸乙酯(2x100mL)萃取含水层。合并有机层，用盐水洗涤，通过硫酸钠干燥，过滤并蒸发，获得无法凝胶。将残留物与甲苯(3x100mL)共沸，获得作为白色固体的标题化合物(675mg,89％)。
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化合物4f的合成：将4e(368mg,0.87mmol)溶于乙腈(5mL)中，并添加2j(180mg,0.77mmol)，接着添加N,N-二异丙基乙胺(535μL,3.07mmol)和2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲烷铵(409mg,1.08mmol)。将反应混合物于室温下搅拌72h。添加2M盐酸(15mL)到反应混合物中，并将混合物真空浓缩。残留物在水(100mL)与乙酸乙酯(100mL)之间分离。分离含水层，并用乙酸乙酯(100mL)再提取。合并有机层，通过硫酸钠干燥，过滤并蒸发，获得粗残留物。将粗残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用乙酸乙酯，获得作为类白色固体的标题化合物(440mg,95％)。
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标题化合物的合成：甲苯(242mL)中的4f(440mg,0.73mmol)的溶液用氮脱气15min，然后添加Hoveyda-Grubbs第2代催化剂(91mg,0.15mmol)，然后将反应混合物在100-110℃加热2.5h。该时间过后，添加额外的Hoveyda-Grubbs第2代催化剂(91mg,0.15mmol)，并将反应混合物在110℃加热1h，并允许冷却到室温。将残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用异丙烷/乙酸乙酯1:1到纯乙酸乙酯的梯度。不纯的产物(160mg)进一步通过硅胶色谱进行纯化，使用二氯甲烷/丙酮99:1至4:1的梯度。获得与非纯级分一起的纯产物(4.4mg)，其通过反相制备性HPLC进行进一步纯化，收集纯产物(22.6mg)。纯化以后，收集作为白色固体的标题化合物(共27mg，6％)。1H NMR(300MHz,CD3OD)0.93-1.11(m,11H),1.24-1.47(m,6H),1.63-1.82(m,3H),1.84-2.01(m,3H),2.41-2.72(m,2H),2.82(td,J＝13.1,3.1Hz,1H),3.59-3.70(m,1H),4.46(dd,J＝9.8,3.3Hz,1H),4.70-4.79(m,2H),5.17(q,J＝6.9Hz,1H),5.83-5.96(m,1H),6.70(d,J＝16.5Hz,1H),6.85-6.99(m,1H),7.59(dd,J＝8.5,1.6Hz,1H),7.71(s,1H),7.96(s,1H),8.03(d,J＝8.5Hz,1H),8.54(br d,J＝8.9Hz,1H),9.10(s,1H).LCMS(m/z)578.3[M+H],Tr＝1.67min。
实施例5-化合物5
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化合物5a的合成：添加三氯化铑(48mg,0.23mmol)到室温的乙醇(13mL)和水(1.5mL)中的(S)-4-苄基-3-((R)-2-甲基-pent-4-烯酰)-恶唑烷-2-酮(Prepared as in JACS 1990,112(8)2998-3017,2.5g,9.16mmol)。将反应加热到80℃，持续8h，冷却并真空浓缩。添加水到所产生的残留物中，并用二氯甲烷提取。有机层通过疏水性筛板干燥并真空浓缩，获得作为棕色油的标题化合物(2.2g,88％)。
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化合物5b的合成：添加氢氧化锂(16mL,水中的2.0M溶液，32.2mmol)和过氧化氢(6.6mL,30％含水溶液,64.5mmol)到0℃的四氢呋喃(60mL)和水(20mL)中的5a(2.2g,8.1mmol)中。将反应在0℃搅拌16h，然后通过小心添加含水硫代硫酸钠淬灭。浓缩反应混合物以除去四氢呋喃，然后用二氯甲烷洗涤两次。用2M盐酸将含水层酸化到pH 1，并用二乙醚提取两次。合并的有机层通过疏水性筛板进行干燥并真空浓缩。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷/乙酸乙酯5/1，获得作为透明油的标题化合物(530mg,57％)。
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化合物5c的合成：以与1f相同的方式制备化合物5c，同时用5b(250mg,2.2mmol)代替1c，获得作为白色泡沫的标题化合物(750mg,77％)。
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化合物5d的合成：添加锌粉(2.03g,31.2mmol)到四氢呋喃(35mL)和水(20mL)中的5c(750mg,1.42mmol)的溶液中，接着添加醋酸铵(1.64g,21.3mmol)。将反应混合物在室温下搅拌15h。将反应通过硅藻土进行过滤，滤出液用浓缩的盐酸酸化到pH 2，并用乙酸乙酯提取两次。有机层通过疏水性筛板进行干燥并真空浓缩，接着从甲苯(2x)共蒸发。所产生的残留物溶于无水乙腈(15mL)中，添加2j(385mg,1.4mmol)，接着添加 N,N-二异丙基乙胺(743μL,4.3mmol)和2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲烷铵(755mg,2.0mmol)。将反应混合物在室温下搅拌3h。添加硅胶到反应混合物中并真空浓缩。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用乙酸乙酯，获得作为透明粘稠状油的标题化合物(580mg,71％,2步)。
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标题化合物的合成：甲苯(144mL)中的5d(250mg,0.43mmol)的溶液用氮脱气30min，接着升温到70℃，并添加Hoveyda Grubbs第2代催化剂(54mg,0.09mmol)。将搅拌的溶液加热到125℃，持续45min。添加另外含量的Hoveyda Grubbs第2代催化剂(50mg,0.08mmol)，并持续加热2h。添加另一份Hoveyda Grubbs第2代催化剂(54mg,0.09mmol)，并持续加热3h。将反应冷却到室温，并添加甲醇(2mL)中的异氰基乙酸乙酯钾(120mg)。搅拌1h以后，将反应混合物浓缩到大约其原始体积的一半，用硅胶处理，然后蒸发进行干燥。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用乙酸乙酯/丙酮1/10，然后5/1，获得白色固体。其将通过反相制备性HPLC进行进一步纯化，产生作为白色固体的标题化合物(2mg,1％)。1H NMR(300MHz,d4-MeOH,2:1非对映异构体混合物，举例了主要的非对映异构体峰)0.99(d,J＝6.7Hz,3H),1.01(d,J＝6.7Hz,3H),1.47(d,J＝6.9Hz,3H),1.56-1.64(m,6H),1.65-1.79(m,1H),1.83-2.00(m,3H),2.09-2.25(m,1H),2.73-2.87(m,1H),3.41-3.52(m,1H),3.63-3.71(m,1H),4.38-4.48(m,1H),5.12(d,J＝8.5Hz,1H),5.18(q,J＝6.7Hz,1H),5.82(q,J＝7.1Hz,1H),6.47(dd,J＝16.0,6.3Hz,1H),6.67(dd,J＝16.0,1.0Hz,1H),7.60-7.67(m,2H),7.75(s,1H),8.06(d,J＝8.7Hz,1H),9.14(s,1H).LCMS(m/z)＝536.2[M+H],Tr＝1.30min。
实施例6-化合物6
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化合物6a的合成：二氯甲烷(20mL)中的(R)-溴-α-甲基苄胺(2.0g,10mmol)的溶液用二氯甲烷(20mL)中的二碳酸二叔丁基酯(2.4g,11mmol)的溶液处理，并将反 应混合物在室温下搅拌1h。用2M盐酸、水和盐水洗涤溶液，通过硫酸钠进行干燥，过滤并蒸发。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用异丙烷/乙酸乙酯20:1至6:1的梯度，获得作为白色固体的标题化合物(2.51g,84％)。
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化合物6b的合成：在室温下搅拌1,2-二甲氧基乙烷(10mL)中的6a(900mg,3mmol),4-(2-甲氧基羰基乙基)苯基硼酸(624mg,3mmol)与水(2mL)中碳酸钾(828mg,6mmol)的混合物。添加四(三苯基膦)钯(0)(172mg,0.15mmol)，并将反应混合物在微波反应器中于100℃加热1h。分离有机层。将有机层通过疏水性筛板进行过滤，蒸发滤出液。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷/乙酸乙酯20:1至5:1的梯度，获得作为白色固体的标题化合物(958mg,83％)。
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化合物6c的合成：将四氢呋喃(15mL)中的6b(958mg,2.5mmol)的溶液在5℃进行搅拌。添加水(5mL)中的氢氧化锂(300mg,5mmol)的溶液，并将反应混合物在5℃下搅拌1h，然后在室温下搅拌1h。蒸发掉大部分溶剂，添加水，并添加2M盐酸调节pH到pH 2。用乙酸乙酯提取混合物。合并有机提取物，用水和盐水洗涤。将有机层通过疏水性筛板进行过滤，蒸发滤出液，获得作为白色固体的标题化合物(883mg,96％)。
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化合物6d的合成：在氮气下，在室温下搅拌二氯甲烷(60mL)中的6c(1.6g,4.3mmol)、1e(1.86g,4.3mmol)的溶液。添加N-(3-二甲基氨基丙基)-N’-乙基碳二亚胺盐酸盐(1.25g,6.5mmol)和4-二甲基氨基吡啶(525mg,4.3mmol)，并在氮气下，将反应混合物于室温下搅拌24h。将反应混合物用二氯甲烷稀释，用含水柠檬酸溶液(pH 2-3)、 水和盐水洗涤。有机层通过疏水性筛板过滤，并蒸发滤出液。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷/乙酸乙酯6:4，接着通过硅胶色谱纯化，使用异己烷/乙酸乙酯6:4，获得作为白色泡沫的标题化合物(2.0g,60％)。
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化合物6e的合成：在氮气下，室温搅拌四氢呋喃(50mL)中的6d(1.96g,2.5mmol)的溶液。添加锌粉(3.58g,55mmol)，接着添加水(25mL)中的醋酸铵(2.9g,37.5mmol)的溶液，并在氮气下，将反应混合物于室温搅拌24h。将反应混合物通过硅藻土过滤，过滤板用乙酸乙酯和2M盐酸洗涤。用2M盐酸酸化滤出液到pH 2，并添加氯化钠来饱和含水层。用乙酸乙酯(3x)提取混合物。合并有机提取物，用水和盐水洗涤，通过无水硫酸镁干燥，并蒸发溶剂。残留物与乙酸乙酯(3x)、甲苯(4x)共蒸发，干燥，获得作为白色固体的标题化合物(1.56g,95％)。
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标题化合物的合成：在氮气下，室温搅拌1,4-二恶烷(12mL)中的4M HCl中的6e(850mg,1.3mmol)的混合物1h。蒸发溶剂，用二乙基醚(3x)研磨残留物。收集得到的固体，用二乙醚洗涤并干燥，获得(S)-1-[(S)-2-((S)-2-{3-[3'-((R)-1-氨基-乙基)-二苯基-4-基]-丙酸基}-3-甲基-丁酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羧酸盐酸盐(1.3mmol)。在氮气下，于0℃搅拌二氯甲烷(1300mL)中的(S)-1-[(S)-2-((S)-2-{3-[3'-((R)-1-氨基-乙基)-二苯基-4-基]-丙酸基}-3-甲基-丁酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羧酸盐酸盐(1.3mmol)和N,N-二异丙基乙胺(671mg,0.9mL,5.2mmol)的溶液。添加2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯(988mg,2.6mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌20h。蒸发掉溶 剂，而且残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷/丙酮7:3至1:1的梯度，接着通过硅胶色谱，使用乙酸乙酯。得到的固体用乙醚研磨，收集固体并干燥，获得作为白色固体的标题化合物(395mg,57％)。1H NMR(300MHz,CD3OD)δ0.94(d,J＝6.7Hz,3H),1.00(d,J＝6.7Hz,3H),1.31(d,J＝7.1Hz,3H),1.54(d,J＝6.9Hz,3H),1.85-2.20(m,5H),2.65-3.10(m,5H),3.53-3.59(m,1H),4.38-4.25(m,1H),4.64(d,J＝12.5Hz,1H),4.72(d,J＝9.6Hz,1H),5.05(q,J＝6.9Hz,1H),5.24(q,J＝7.1Hz,1H),4.82-4.90(m,2H),7.23-7.30(m,3H),7.37-7.55(m,5H).LCMS(m/z)535.2[M+H],Tr＝5.11min。
实施例7：(E)-(2R,5S,11S,14S,17R,18R)-18-羟基-14-异丙基-2,11,17-三甲基-15-氧杂-3,9,12,28-四氮杂-三环[21.3.1.1*5,9*]二十八-1(26),21,23(27),24-四烯-4,10,13,16-四酮–化合物7
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化合物7a的合成：将无水二氯甲烷(520mL)中的1a(12.0g,0.034mol)的溶液冷却至0℃，接着添加吡啶(5.5mL,0.068mol)，然后添加叔丁基二甲硅基三氟甲磺酸酯(9mL,0.039mol)。将反应在0℃下搅拌15min，然后允许升温至室温，持续1.5h。反应混合物用饱和的含水碳酸氢钠溶液(400mL)淬灭。用二氯甲烷(200mL)反萃取含水层。合并有机层，用盐水洗涤(200mL)，然后用2M盐酸(200mL)洗涤。溶液通过硫酸钠干燥，过滤并蒸发，获得作为白色固体的标题化合物(15.29g,96％)。
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化合物7b的合成：制备四氢呋喃(300mL)中的7a(15.29g,0.0325mol)的溶液，并添加氢氧化锂(2M,120mL)的含水溶液。将搅拌的混合物加热到60℃，持续16h。将反应混合物冷却至室温，然后用2M盐酸(250mL)处理。分层，并用乙酸乙酯(2x200mL)萃取含水层。合并有机层，通过硫酸钠干燥，过滤并蒸发，获得类白色固体。该固体通过硅胶色谱进行纯化，使用二乙基醚/异己烷3:7，产生作为无色凝胶的标题化合物(7.18g,81％)。
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化合物7c的合成：在氮气气氛和室温下，添加7b(385mg,1.41mmol)、二环己基碳二亚胺(364mg,1.8mmol)和4-N,N-二甲氨基吡啶(142mg,1.2mmol)到无水二氯甲烷(4mL)中的1e(510mg,1.2mmol)中。室温下搅拌白色悬浮液20h，接着添加硅胶并真空浓缩。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷/乙酸乙酯2/1，获得作为粘稠、透明油的标题化合物(700mg,86％)。
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化合物7d的合成：添加锌粉(1.46g,22.4mmol)到四氢呋喃(22mL)和水(13mL)中的7c(700mg,1.02mmol)的溶液中，接着添加醋酸铵(1.2g,15.3mmol)。室温搅拌反应混合物15h。将反应通过硅藻土过来，并真空浓缩，以除去四氢呋喃。用浓缩盐酸将所产生的溶液酸化到pH 1-2，并用二氯甲烷(2x)提取。有机层通过疏水性筛板进行干燥并真空浓缩，接着与甲苯(2x)共蒸发。将所产生的无色粘稠油溶解于无水乙腈(8mL)，并添加1j(187mg,1.0mmol)，接着添加N,N-二异丙基乙胺(900μL,5.1mmol)和2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲烷铵(542mg,1.4mmol)。室温搅拌反应混合物15h。添加硅胶到反应混合物中，并真空浓缩。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷/乙酸乙酯1/1，获得作为类白色固体的标题化合物(450mg,64％)。
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化合物的合成：1,2-二氯乙烷(219mL)中的7d(450mg,0.66mmol)的溶液用氮气脱气15min，接着添加Hoveyda Grubbs第2代催化剂(41mg,0.07mmol)。将搅拌的溶液加热到80℃，持续2h。冷却反应，浓缩到接近20mL，用硅胶处理，然后蒸发进行干燥。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷/乙酸乙酯1/1，然后1/3，产生作为白色泡沫的(E)-(2R,5S,11S,14S,17R,18R)-18-(叔丁基-二甲基-硅氧基)-14-异丙基-2,11,17-三甲基-15-氧杂-3,9,12,28-四氮杂-三环[21.3.1.1*5,9*]二十八-1(26),21,23(27),24-四烯-4,10,13,16-四酮(138mg)。将该泡沫(80mg,0.12mmol)溶解于无水四氢呋喃(6.5mL)中，并转入聚丙烯小瓶中。在环境温度下，添加氟化氢·吡啶(102μL,1.2mmol)到反应混合物中，接着搅拌1h。添加另外含量的氟化氢·吡啶(600μL,7.1mmol)，接着搅拌1h。添加额外的氟化氢·吡啶(700μL,8.2mmol)，1h以后，通过缓慢添加反应混合物到乙酸乙酯/饱和的含水氯化铵的搅拌溶液中对反应淬灭。分离有机层，而且含水层用乙酸乙酯(2x)进一步提取。合并的有机层通过疏水性筛板进行干燥，并真空浓缩。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用乙酸乙酯/丙酮8/1，获得作为白色固体的标题化合物(33mg,16％,2步)。1H NMR(500MHz,CD3CN)0.92(d,J＝6.7Hz,3H),0.97(d,J＝6.7Hz,3H),1.26(d,J＝7.3Hz,3H),1.31(d,J＝6.7Hz,3H),1.41(d,J＝6.7Hz,3H),1.43-1.63(m,4H),1.78-1.89(m,2H),2.03-2.09(m,1H),2.40-2.49(m,2H),2.50-2.56(m,1H),2.65-2.72(m,1H),3.32(td,J＝11.0,2.4Hz,1H),3.49-3.61(m,1H),4.07(d,J＝12.2Hz,1H),4.31(d,J＝12.8Hz,1H),4.74(d,J＝5.5Hz,1H),4.97-5.04(m,1H),5.18-5.25(m,1H),6.27-6.34(m,1H),6.38(d,J＝15.9Hz,1H),6.96-7.31(m,6H).LCMS(m/z)＝543.2[M+H],Tr＝2.27min。
实施例8：(E)-(2R,5S,11S,14S)-14-异丙基-2,11-二甲基-15-氧杂-3,9,12,28-四氮杂-三环[21.3.1.1*5,9*]二十八-1(27),21,23,25-四烯-4,10,13,16-四酮–化合物8
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化合物8a的合成：室温下，添加七-6-烯酸(0.296mL,2.19mmol)、N,N′-二环己基碳二亚胺(564mg,2.74mmol)和4-N,N-二甲氨基吡啶(223mg,1.82mmol)到二氯甲烷(9mL)中的1e(791mg,1.83mmol)的溶液中，而且室温搅拌反应混合物2h。该时间以后，用二氯甲烷(50mL)稀释反应混合物，并用饱和的含水氯化铵溶液洗涤。用二氯甲烷(2x50mL)再次提取水相，用盐水(100mL)洗涤合并的有机物，通过硫酸镁干燥并蒸发，获得白色残留物。残留物通过硅胶色谱层析进行纯化，使用异己烷/乙酸乙酯1:1到纯乙酸乙酯，产生标题化合物(774mg,81％)。
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化合物8b的合成：制备四氢呋喃(29mL)中的8a(650mg,1.20mmol)的溶液，添加锌粉(1.72g,26.3mmol)，接着添加水(7.0mL)中的醋酸铵(1.38g,18.0mmol)的溶液。室温搅拌反应混合物72h。反应通过硅藻土过滤，通过用乙酸乙酯和饱和的含水硫酸氢钾洗涤。用盐酸(1M,3mL)处理混合物，分层。用乙酸乙酯(2x100mL)萃取含水层。合并有机层，用盐水洗涤，过滤并蒸发，获得无色凝胶。残留物与甲苯(3x100mL)共沸，获得作为白色固体的标题化合物(492mg,定量产生)。
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化合物8c的合成：添加1j(122mg,0.83mmol)到溶于乙腈(2mL)中的8b(257mg,0.63mmol)中，接着添加N,N-二异丙基乙胺(435μL,2.5mmol)和2-(1H-7-氮杂苯并三唑 -1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲烷铵(333mg,0.88mmol)。室温搅拌反应混合物48h。将混合物蒸发进行干燥48h，因此该残留物在水(100mL)与乙酸乙酯(100mL)之间分离。分离含水层并用乙酸乙酯(100mL)再次提取。合并有机层，通过硫酸镁干燥，过滤并蒸发，获得粗残留物。该残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷/乙酸乙酯7:3至1:1到纯乙酸乙酯的梯度，获得标题化合物(194mg,57％)。
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化合物的合成：1,2-二氯乙烷中的8c(194mg,0.36mmol)用氮气脱气15min，然后添加Hoveyda-Grubbs第2代催化剂(23mg,0.04mmol)，并将反应混合物于80℃加热2.3h。该时间过后，允许反应混合物冷却至室温，真空浓缩。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷/乙酸乙酯1:9到纯化乙酸乙酯的梯度，获得不纯的产物(74mg)，其通过预备性反相HPLC进一步纯化，收集作为白色固体的标题化合物(28mg,15％)。1H NMR(300MHz,CD3OD).0.96(d,J＝6.9Hz,3H),0.99(d,J＝6.9Hz,3H),1.41-1.51(m,8H),1.59-1.82(m,4H),1.85-1.96(m,2H),2.02-2.26(m,3H),2.32-2.57(m,2H),2.80(td,J＝12.9,2.2Hz,1H),3.50(dd,J＝11.0,2.5Hz,1H),4.39(br d,J＝13.2Hz,1H),4.76(d,J＝8.0Hz,1H),4.99(q,J＝6.9Hz,1H),5.46(q,J＝7.1Hz,1H),6.19(m,1H),6.40(d,J＝15.8Hz,1H),7.11-7.17(m,1H),7.20-7.30(m,3H).LCMS(m/z)513.2[M+H],Tr＝2.58min。
实施例9-化合物9
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添加10％钯碳(5mg)到乙酸乙酯(10mL)中的化合物4(16.6mg,0.0287mmol)的溶液中，并于氢气气氛下搅拌1.5h。然后添加另外的10％钯碳(5mg)，并在氢气气氛下继续搅拌24h。将反应混合物通过硅藻土干燥以除去催化剂，并蒸发，然后通过预备性反相制备性HPLC进行纯化，产生作为白色固体的标题化合物(5.3mg,32％)。1H NMR(300MHz,CD3OD)0.89-1.05(m,9H),1.29-1.46(m,2H),1.59(dd,J＝7.1,1.6Hz,6H),1.65-1.99(m,7H),2.09-2.18(m,1H),2.43-2.58(m,1H),2.74-3.06(m,3H),3.57-3.68(m,1H),4.43(dd,J＝13.4,2.7Hz,1H),4.59(br s,3H),4.66(d,J＝7.4Hz,1H),5.15(q,J＝6.9Hz,1H),5.66-5.78(m,1H),7.58(dd,J＝8.5,1.6Hz,1H),7.69(s,1H),7.70(s,1H),8.03(d,J＝8.5Hz,1H),8.40(br d,J＝8.7Hz,1H),9.08(s,1H).LCMS(m/z)580.3[M+H],Tr＝1.53min。
实施例10：(2R,5S,11S,14S,17R,18R)-18-羟基-14-异丙基-2,11,17-三甲基-15-氧杂-3,9,12,28-四氮杂-三环[21.3.1.1*5,9*]二十八-1(26),23(27),24-三烯-4,10,13,16-四酮–化合物10
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室温下，添加10％钯碳(5mg)到乙酸乙酯(10mL)中的(E)-(2R,5S,11S,14S,17R,18R)-18-(叔丁基-二甲基-硅氧基)-14-异丙基-2,11,17-三甲基-15-氧杂-3,9,12,28-四氮杂-三环[21.3.1.1*5,9*]二十八-1(26),21,23(27),24-四烯-4,10,13,16-四酮(50mg,0.08mmol)中。该系统用氢气净化，并用力搅拌16h。将滤出液真空浓缩。所产生的残留物溶解于无水四氢呋喃(5mL)中，并转入聚丙烯小瓶。室温下，添加氟化氢·吡啶(1.3mL,15.2mmol)到反应混合物中，接着搅拌3h。反应用乙酸乙酯稀释，并通过小心添加饱和含水氯化铵淬灭。分离有机层，通过输水玻璃干燥，并真空浓缩。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用乙酸乙酯/丙酮5/1，获得作为白色固体的标题化合物。该化合物通过用二乙醚研磨进行进一步纯化，过滤，并真空干燥固体(20mg,48％,2步)。1H NMR(300MHz,CD3CN)0.90-1.00(m,6H),1.24-1.30(m,6H),1.43(d,J＝6.9Hz,3H),1.32-2.08(m,11H),2.45-2.81(m,4H),3.23-3.36(m,1H),3.47-3.59(m,1H),3.67(d,J＝10.3Hz,1H),4.02(d,J＝11.8Hz,1H),4.29(d,J＝13.8Hz,1H),4.75(d,J＝5.4Hz,1H),4.95-5.08(m,1H),5.16-5.29(m,1H),7.03-7.29(m,6H).LCMS(m/z)＝545.3[M+H],Tr＝2.15min。
实施例11-化合物11
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化合物11a的合成：二氯甲烷(30mL)中的(E)-pent-3-烯-2-醇(1.024g,11.887mmol)的冷(0℃)溶液，随后用吡啶(1.222g,1.3mL,15.452mmol)和丙酰氯(1.430g,1.3mL,15.452mmol)处理。在0℃搅拌1.5h以后，将反应用饱和的碳酸氢钠淬灭。用二氯甲烷萃取含水层，然后合并有机物，通过相分离器过滤，并真空除去挥发物。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用50gIsolute筒，其用异己烷/Et2O 1:0至9:1的连续梯度洗脱，获得作为无色油的标题化合物(787mg,46％)。
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化合物11b的合成：四氢呋喃(15mL)中的N,N-二异丙胺(672.0mg,930μL,6.641mmol)的冷(0℃)溶液用n-丁基锂(2.5M,己烷中,2.4mL,6.088mmol)处理。0℃搅拌20min以后，将溶液冷却到-78℃，随后用三甲基氯硅烷(841.7mg,990μL,7.748mmol)和四氢呋喃(10mL)中的11a(787.0mg,5.534mmol)的溶液处理。反应混合物缓慢升温到室温。16h以后，反应用1M盐酸(40mL)淬灭，并用2M盐酸将pH调节到2。含水层用乙酸乙酯(2x40mL)提取，合并有机层，通过硫酸钠干燥，过滤，并真空除去挥发物。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用50g Isolute筒，其用异己烷/乙酸乙酯1:0至4:1的连续梯度洗脱，获得作为无色油的标题化合物(375mg,48％)。
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化合物11c的合成：以与化合物1f相同的方式制备化合物11c，使用11b和N-(3-二甲氨基丙基)-N’-乙基碳二亚胺盐酸盐代替1c和N,N’-二环己基碳二亚胺，产量为60％。
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化合物11d的合成：以与化合物1k相同的方式制备化合物11d，首先在制备1g中使用11c代替1f，然后在描述用于从1g合成1k的程序后，使用(R)-1-(3-乙烯基-异喹啉-6-基)-乙胺盐酸盐代替(R)-1-(3-乙烯-苯基)-乙胺盐酸盐，产率为81％。
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标题化合物的合成：以与化合物1相同的方式制备化合物11，使用11d代替1k，并使用甲苯代替二氯乙烷，产率为8％。1H NMR(300MHz,CD3OD)δ0.97-1.07(m,7H),1.25(d,J＝7.1Hz,3H),1.31(d,J＝7.1Hz,3H),1.55-1.63(m,6H),1.65-1.78(m,1H),1.83-2.00(m,3H),2.14(app sextet,J＝6.7Hz,1H),2.69-2.79(m,1H),2.80-2.90(m,1H),3.65(app t,J＝8.0Hz,1H),4.45(br d,J＝13.6Hz,1H),4.78(dd,J＝6.0,19.6Hz,2H),5.15(app pentet,J＝6.2Hz,1H),5.83(dq,J＝7.1,19.9Hz,1H),6.65(dd,J＝6.7,17.2Hz,1H),6.79-6.93(m,1H),7.53-7.61(m,1H),7.71(d,J＝5.1Hz,1H),7.96(d,J＝4.7Hz,1H),8.03(d,J＝8.0Hz,1H),9.10(s,1H).LCMS(m/z)564.1[M+H],596.1[M+Na],Tr＝3.73min。
实施例12-化合物12
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化合物12a的合成：制备二氯甲烷(5mL)中的2,2-二甲基-4-戊烯酸(202mg,1.58mmol)的溶液，添加乙二酰氯(411μL,4.74mmol)，接着添加二甲基甲酰胺(5μL)。使混合物大力起泡，并室温搅拌1h，接着蒸发，获得固体(241mg)。将固体溶解于甲苯(10mL)，添加1e(433mg,1.0mmol)，接着添加氰化银(310mg,2.25mmol)。用箔将烧瓶盖住以遮住光，接着加热到80℃，持续10min。留在室温中过夜。将反应加热到80℃，持续另外的4.5h，然后允许冷却。过滤并蒸发，获得浅黄色凝胶。该凝胶通过硅胶色谱进行纯化，使用乙酸乙酯/异己烷1:3，然后乙酸乙酯/异己烷1:1，产生作为无色油的标题化合物(200mg,37％)。
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化合物12b的合成：制备四氢呋喃(10mL)中的12a(100mg,0.184mmol)的溶液，并添加锌粉(360mg,5.52mmol)，接着添加pH 6磷酸盐缓冲液(1M,2mL)。室温搅拌反应18h，并添加另外的锌粉(120mg,1.84mmol)。室温搅拌反应另外的48h。过滤反应混合物以除去悬浮的固体。用四氢呋喃(15mL)和pH 6缓冲液(5mL)洗涤固体，并添加到滤出液中。蒸发溶液，而且残留物通过C18色谱进行纯化，使用乙腈/水0:1到1:3到1:1的梯度。这产生了作为无色油的标题化合物(69mg,91％)。
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化合物12c
化合物12c的合成：制备无水乙腈(5mL)中的12b(94mg,0.23mmol)的溶液，并冷却至0℃，接着添加2j(54mg,0.23mmol.)、N,N-二异丙基乙胺(160μL,0.92mmol)和2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲烷铵(122mg,0.32mmol)。使反应升温至室温并搅拌16h。蒸发反应混合物到硅胶，并通过硅胶色谱进行纯化，使用乙酸乙酯，获得作为无色油的标题产物(119mg,87％)。
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标题化合物的合成：制备甲苯(65mL)中的12c的溶液，并添加Hoveyda-Grubbs第2代催化剂(12.5mg,0.02mmol)。在氮气气氛下，将反应混合物加热到110℃，持续2h。添加另外含量的Hoveyda-Grubbs第2代催化剂(6mg,0.01mmol)，在110℃下搅拌反应另外的1h。使反应混合物冷却到室温，然后过了，接着吸附到硅胶上。该材料通过硅胶色谱进行纯化，使用乙酸乙酯/丙酮1:0到9:1的梯度。用二乙醚研磨得到的凝胶，真空下干燥，产生白色固体(29mg)。该固体通过预备性反相制备性HPLC进行进一步纯化，产生作为白色固体的标题产物(17mg,15％)。1H NMR(300MHz,CD3OD)1.08(d,J＝6.9Hz,3H),1.09(d,J＝6.7Hz,3H),1.18(s,3H),1.38(s,3H),1.59(d,J＝3.3Hz,3H),1.61(d,J＝3.1Hz,3H),1.83-2.00(m,3H),2.32-2.43(m,1H),2.75-2.82(m,2H),3.60-3.70(m,1H),4.40-4.50(m,1H),5.15(q,J＝6.9Hz,1H),6.65(d,J＝16.3Hz,1H),7.57(dd,J＝8.5,1.6Hz,1H),7.70(s,1H),8.00(s,1H),8.03(d,J＝8.7Hz,1H),9.10(s,1H).LCMS(m/z)564.1[M+H],Tr＝3.57min。
实施例13-化合物13
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化合物13a的合成：如WO 2001/024797中，在四氢呋喃/水(45mL,2:1)中制备的(S)-4-苄基-3-{(R)-2-[2-(2-甲基-[1,3]二恶戊烷-2-基)-乙基]-戊-4-烯酰}-恶唑烷-2-酮(939.7mg,2.516mmol)的冷(0℃)溶液，接着用过氧化氢(30％,水中,1.3mL,12.580mmol)和氢氧化锂(211.1mg,5.032mmol)处理。在0℃下，2.5h以后，用亚硫酸氢钠(1.4g)对反应淬灭。0.5h以后，真空除去挥发物，而且残留物用水稀释。用二氯甲烷(2x)萃取含水层，然后酸化到pH～2，并用二氯甲烷(3x)提取。合并最后的有机物，通过硫酸钠干燥，过滤，真空除去挥发物，获得作为无色油的标题化合物(538mg,quant.)。
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化合物13b的合成：以与化合物1f相同的方式制备化合物13b，使用13a和N-(3-二甲氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐代替1c和N,N′-二环己基碳二亚胺，产率为58％。
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化合物13c的合成：以与化合物1k相同的方式制备化合物13c，首先在1g的合成中使用13b代替1f，然后在描述用于从1g合成1k的程序后，使用(R)-1-(3-乙烯基-异喹啉-6-基)-乙胺二盐酸盐代替(R)-1-(3-乙烯基-苯基)-乙胺盐酸盐，产率为73％。
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标题化合物的合成：以与化合物1相同的方式制备化合物13，使用13c代替1k，并使用甲苯代替二氯乙烷，产率为32％。1H NMR(300MHz,CD3OD)δ0.88-1.00(m,1H),1.06(2d,J＝6.9Hz,6H),1.22-1.42(m,4H),1.52-1.63(m,7H),1.65-1.81(m,3H),1.84-1.99(m,3H),2.16(app pentet,J＝6.9Hz,1H),2.38-2.50(m,1H),2.51-2.61(m,1H),2.62-2.74(m,1H),2.83(dt,J＝2.7,13.8Hz,1H),3.59-3.72(m,1H),4.46(br dd,J＝3.3,13.6Hz,1H),4.69-4.79(m,4H),5.16(q,J＝7.1Hz,1H),5.89(q,J＝6.9Hz,1H),6.71(d,J＝16.3Hz,1H),6.84-6.98(m,1H),7.59(d,J＝8.5Hz,1H),7.71(s,1H),7.96(s,1H),8.03(d,J＝8.7Hz,1H),9.10(s,1H).LCMS(m/z)651.2[M+H],Tr＝3.68min。
实施例14-化合物14
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用对甲苯磺酸(27mg,0.141mmol)乙酮(10mL)中的13(183.7mg,0.282mmol)的溶液。室温搅拌2.5h以后，用碳酸氢钠的饱和溶液将反应淬灭，用乙酸乙酯(2x20mL)萃取含水层。合并有机物，通过硫酸钠干燥，过滤并真空除去挥发物。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用25g Isolute筒，用异己烷/丙酮1:0到2:3的连续梯度，然后用异己烷/丙酮研磨，获得作为白色固体的标题化合物(49.3mg,28％)。1H NMR(300MHz,CD3OD)1.04(d,J＝6.9Hz,3H),1.05(d,J＝6.9Hz,3H),1.53-1.62(m,7H),1.64-1.79(m,1H),1.84-2.03(m,5H),2.10-2.23(m,4H),2.39-2.53(m,1H),2.54-2.73(m,4H),2.82(dt,J＝2.9,13.1Hz,1H),3.59-3.70(m,1H),4.46(br dd,J＝4.0,12.7Hz,1H),5.17(q,J＝6.9Hz,1H),5.91(,J＝7.1Hz,1H),6.71(d,J＝16.3Hz,1H),6.86-7.00(m,1H),7.59(d,J＝8.7Hz,1H),7.71(s,1H),7.98(s,1H),8.03(d,J＝8.7Hz,1H),9.10(s,1H).LCMS(m/z)606.1 [M+H],Tr＝3.26min。
实施例15-化合物15
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制备2mL异丙醇中的O-(2-吗啉-4-基-乙基)-羟基胺(18mg,0.125mmol)和醋酸(1滴)的原液。添加1mL原液到固体化合物14(16.4mg,0.027mmol)中，室温搅拌18h以后，化合物通过反相HPLC进行纯化，获得作为白色固体的肟(1:1,13.3mg,67％)的几何异构体的混合物。1H NMR(300MHz,CD3OD)1.00-1.10(m,6H),1.54-1.64(m,5H),1.65-1.78(m,1H),1.81-2.04(m,8H),2.09-2.22(m,1H),2.23-2.33(m,1H),2.34-2.90(m,12H),3.53-3.76(m,6H),4.18(dt,J＝5.8,8.5Hz,2H),4.41-4.51(m,1H),4.68-4.82(m,2H),5.16(q,J＝7.3Hz,1H),5.82-5.96(m,1H),6.71(d,J＝15.8Hz,1H),6.84-7.00(m,1H),7.59(d,J＝8.7Hz,1H),7.71(s,1H),7.98(d,J＝2.9Hz,1H),8.04(d,J＝8.7Hz,1H),8.53(br dd,J＝3.1,9.4Hz,1H),9.10(s,1H).LCMS(m/z)734.7[M+H],Tr＝1.08min。
实施例16-化合物16
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接着用2M甲醇(480μL,0.96mmol)中的二甲胺和化合物14(5.8mg,0.0096mmol)的溶液处理甲醇(1mL)和醋酸(100μL)中的三乙酰氧基硼氢化钠(203.5mg,0.96mmol)的溶液。室温搅拌1个月之后，把反应混合物直接装载到反相制备性HPLC上，其用水/CH3CN 95:5到0:100的梯度洗脱。这获得了作为白色固体和作为非对映异构体的1:1 混合物的标题化合物(1.1mg,18％)。1H NMR(300MHz,CD3OD)δ0.87-0.97(m,1H),1.01-1.09(m,6H),1.24(d,J＝6.4Hz,3H),1.55-1.63(m,6H),1.64-1.80(m,2H),1.84-2.02(m,4H),2.10-2.24(m,1H),2.41-2.72(m,7H),2.73-2.90(m,3H),3.60-3.69(m,1H),4.41-4.51(m,1H),5.17(q,J＝7.1Hz,1H),5.85-5.95(m,1H),6.71(d,J＝16.0Hz,1H),6.85-6.99(m,1H),7.56-7.63(m,1H),7.71(s,1H),7.98(s,1H),8.04(d,J＝8.5Hz,1H),9.06-9.13(m,1H).LCMS(m/z)635.0[M+H],Tr＝0.94min。
实施例17：(E)-(2R,5S,11S,14S)-14-异丙基-2,11,15-三甲基-3,9,12,15,28-戊氮杂-三环[21.3.1.1*5,9*]二十八-1(27),21,23,25-四烯-4,10,13,16-四酮–化合物17
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化合物17a的合成：在氮气和0℃下搅拌二氯甲烷(35mL)中的1d(1.08g,2.5mmol)的溶液。添加三氟甲磺酸三甲基硅酯(682mg,0.55mL,3.1mmol)，并在0℃搅拌反应混合物45min。添加N,N-二异丙基乙胺(1.29g,1.73mL,10mmol)，蒸发溶剂获得粗的(S)-1-((S)-2-氨基-丙酰基)-六氢-哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯-乙醚(2.5mmol)，其用于接下来的步骤。在氮气和0℃下，搅拌乙腈(30mL)中的粗(S)-1-((S)-2-氨基-丙酰基)-六氢-哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯-乙酯(2.5mmol)的溶液。添加(S)-2-(叔丁氧羰基-甲基-氨基)-3-甲基-丁酸(635mg,2.75mmol)和N,N-二异丙基乙胺(1.29g,1.7mL,10mmol)，接着添加2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲烷铵(1.33g,3.5mmol)，室温下搅拌返回混合物18h。蒸发溶剂，并将残留物溶解于乙酸乙酯。用水、2M盐酸、水、饱和碳酸氢钠溶液、水和盐水洗涤溶液，然后通过无水硫酸钠干燥，过滤并蒸发。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷/乙酸乙酯1:1到纯乙酸乙酯的梯度，获得作为白色固体的标题化合物(950mg,70％)。
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化合物17b
化合物17b的合成：在氮气下，于0℃搅拌二氯甲烷(25mL)中的17a(950mg,1.74mmol)的溶液。添加三氟甲磺酸三甲基硅酯(577mg,0.47mL,2.6mmol)，并在0℃下搅拌反应混合物。添加另外的三氟甲磺酸三甲基硅酯(577mg,0.47mL,2.6mmol)，并在0℃下搅拌反应混合物2h。添加N,N-二异丙基乙胺(903mg,1.2mL,7mmol)，蒸发溶剂，干燥残留物，获得粗的(S)-1-[(S)-2-((S)-3-甲基-2-甲氨基-丁酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯-乙醚(1.74mmol)，其用于接下来的步骤。在氮气下，于0℃下搅拌乙腈(20mL)中的粗(S)-1-[(S)-2-((S)-3-甲基-2-甲氨基-丁酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯-乙醚(1.74mmol)的溶液。添加庚-6-烯酸(268mg,0.3mL,2.1mmol)和N,N-二异丙基乙胺(903mg,1.2mL,7mmol)。添加2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲烷铵(912mg,2.4mmol)，室温搅拌反应混合物18h。蒸发溶剂，并用乙酸乙酯稀释残留物。用饱和碳酸氢钠、水、2M盐酸、水和盐水洗涤溶液，通过无水硫酸钠干燥，过滤并蒸发。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷/乙酸乙酯3:1到1:1的梯度，获得作为白色固体的标题化合物(912mg,2.4mmol)。
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化合物17c的合成：在氮气下，室温搅拌四氢呋喃(30mL)中的17b(710mg,1.3mmol)的溶液。添加锌粉(1.86g,28.6mmol)，接着添加水(20mL)中的醋酸铵(1.50g,19.5mmol)的溶液，室温搅拌反应混合物24h。通过硅藻土过滤反应混合物，并用乙酸乙酯和硫酸氢钾溶液(pH～2)洗涤过滤板。用2M盐酸将滤出液酸化到pH 2，并用乙酸乙酯提取混合物。合并有机提取物，用水和盐水洗涤，通过无水硫酸钠干燥，过滤并蒸发。残留物与甲苯共同蒸发，干燥，获得作为凝胶的(S)-1-{(S)-2-[(S)-2-(庚-6-烯酰-甲基-氨基)-3-甲基-丁酰氨基]-丙酰基}-六氢-哒嗪-3-羧酸(468mg,85％)。在氮气下，室温搅拌乙腈(25mL)中的(S)-1-{(S)-2-[(S)-2-(庚-6-烯酰-甲基-氨基)-3-甲基-丁酰氨基]-丙酰基}-六氢-哒嗪-3-羧酸(468mg,1.1mmol)的溶液。添加1j(200mg,1.1mmol)和N,N-二异丙基乙胺(710mg,1.0mL,5.5mmol)，接着添加2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基 脲六氟磷酸酯甲烷铵(585mg,1.54mmol)，并室温搅拌反应混合物72h。蒸发溶剂，并将残留物溶于乙酸乙酯中。用2M盐酸、水、饱和的碳酸氢钠溶液、水和盐水洗涤溶液，通过无水硫酸钠干燥，过滤并蒸发。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷/乙酸乙酯1:1到乙酸乙酯的梯度，获得作为白色固体的标题化合物(300mg，49％)。
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标题化合物的合成：在氮气下，室温搅拌1,2-二氯乙烷(150mL)中的17c(276mg,0.5mmol)的溶液。添加Hoveyda-Grubbs第2代催化剂(32mg,0.05mmol)，并在氮气下，将反应混合物在80℃下加热3h。将反应混合物冷却到室温，添加硅胶，并蒸发反应混合物。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用乙酸乙酯到乙酸乙酯/丙酮7:3的梯度。用乙醚研磨残留物，收集得到的固体，用乙醚洗涤，干燥，获得作为白色固体的标题化合物(112mg,43％)。1H NMR(300MHz,CD3CN)δ0.82(d,J＝6.7Hz,3H),0.90(d,J＝6.5Hz,3H),1.34(d,J＝7.1Hz,3H),1.39(d,J＝6.3Hz,3H),1.40-1.90(m,10H),2.60-2.75(m,2H),2.86-2.92(m,4H),3.28-3.36(m,1H),3.93(d,J＝12.0Hz,1H),4.33-4.38(m,1H),4.58(d,J＝11.6Hz,1H),4.85-4.99(m,2H),6.16-6.51(m,3H),7.12-7.30(m,6H).LCMS(m/z)526.3[M+H],Tr＝2.16min。
实施例18-化合物18
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化合物18a的合成：缓慢添加乙酰氯(3.56mL,50.0mmol)到乙腈(27mL)中的7-溴-2-氯-喹啉(Fluorochem,8.10g,33.4mmol)和碘化钠(50.0g,334mmol)的搅拌浆液中。塞住烧瓶，密封，并在80℃加热3h，接着冷却。依序用10％含水碳酸钾溶液(80mL)、5％w/w含水亚硫酸钠溶液(80mL)和饱和的含水硫代硫酸钠溶液(80mL)以及用二氯甲烷(2X)提取的混合物。合并的有机提取物通过硫酸钠硫酸钠干燥、过滤并蒸发，获得粗的7-溴-2-碘-喹啉。添加三丁基(1-乙氧基乙烯)锡烷(13.6mL,40.1mmol)、1,4-二恶烷(67mL) 和双(三苯基膦)二氯化钯(II)(2.37g,3.34mmol)到喹啉中，并将反应混合物在100℃下加热5h，接着冷却。添加2M含水盐酸(67mL)，并将反应搅拌1h。将混合物过滤，用乙酸乙酯洗涤固体，并蒸发滤出液以除去有机物。残留物用乙酸乙酯(3x)提取，合并的有机提取物通过硫酸钠干燥，过滤并蒸发。产物在硅胶上纯化，其掺有10％w/w碳酸钾，用异己烷中0到6％乙酸乙酯的梯度洗脱，获得作为白色固体的标题化合物(5.5g,66％)。
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化合物18b的合成：添加钛酸(IV)乙酯(2.6g,2.35mL,11.4mmol)到四氢呋喃(28mL)中的18a(1.42g,5.68mmol)的溶液中，接着添加(R)-(+)-2-甲基-丙烷亚磺酰(825mg,6.82mmol)。在氮气下，于60℃搅拌反应混合物6h，并冷却。添加盐水，接着添加乙酸乙酯，悬浮液通过硅藻土过滤，并用乙酸乙酯洗涤过滤板。分离乙酸乙酯层，通过硫酸钠干燥，过滤并蒸发。残留物通过硅胶色谱进行纯化，用异己烷中的10-25％乙酸乙酯洗脱，获得标题化合物(448mg,22％)。
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化合物18c的合成：(1S,2R)-(-)-顺式-1-氨基-2-茚醇(19mg,0.13mmol)、[Ru(p-伞花烃)Cl2]2(39mg,0.064mmol)和粉末状的![]()
分子筛(0.7g)的混合物，悬浮于无水2-丙醇(3mL)中，并在氮气下搅拌。在90℃下加热悬浮液30min。将反应混合物冷却到40℃，并添加2-丙醇(9mL)中的18b(448mg,1.27mmol)的溶液，接着添加2-丙醇(3mL)中的叔丁醇钾(36mg,0.32mmol)的溶液。在40℃下搅拌反应混合物2h，然后冷却。将混合物直接倒到硅胶筒上，并用乙酸乙酯洗脱。浓缩以后，在硅上进一步纯化残留物，用异己烷中的乙酸乙酯(1:1到1:0)，获得标题化合物(287mg,64％)。
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化合物18d的合成：18c(207mg,0.583mmol)、(E)-2,2-二甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂硼戊环-2-基)-3-丁酸甲酯(170mg,0.670mmol)、双[(二环己基)(4-二甲氨基苯基)膦]氯化钯(II)(24mg,0.029mmol)和磷酸三钾(371mg,1.75mmol)悬浮于环戊基甲醚(3mL)和水(1.5mL)中，并在氮气下，于80℃搅拌并加热混合物5h。冷却反应混合物，并用乙酸乙酯和水稀释。分离含水层，并用乙酸乙酯进一步洗涤，合并的有机提取物通过硫酸钠干燥，过滤并蒸发。残留物通过硅胶色谱纯化，使用异己烷中的乙酸乙酯的梯度(1:0到3:1)，获得作为棕色油的标题化合物(201mg,86％)。
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化合物18e的合成：18d(193mg,.48mmol)悬浮于1,4-二恶烷(5mL,20mmol)中的4M HCl中，并添加甲醇(10mL)。搅拌反应混合物2h，然后蒸发。用乙醚研磨残留物获得作为黄色固体的标题化合物(166mg)。
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化合物18f的合成：(S)-1-[(S)-2-((S)-2-羟基-3-甲基-丁酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羧酸(166mg,0.48mmol)、18e(190mg,0.48mmol)、O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲六氟磷酸酯(256mg,0.67mmol)和粉末状![]()
分子筛在氮气下悬浮于乙腈(9.6mL)中。添加N,N-二异丙基乙胺(186mg,250μL,1.44mmol)到搅拌的混合 物中，并将反应混合物搅拌20h。混合物通过相分离器进行过滤，蒸发滤出液，溶于二氯甲烷中，并依序用饱和的碳酸氢钠溶液、水和饱和的氯化铵溶液洗涤，然后通过硫酸钠干燥，过滤并蒸发。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷中的乙酸乙酯的梯度(1:1到1:0)，获得作为黄色凝胶的标题化合物(77mg,28％2步)。
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化合物18g的合成：添加水(0.8mL)和一水合氢氧化锂(9.2mg,0.221mmol)到四氢呋喃(4mL)中的18f(117mg,0.201mmol)中，同时搅拌。将反应混合物搅拌1h，然后添加另外的一水合氢氧化锂(36mg,0.857mmol)，并将混合物搅拌另外的19.5h。蒸发混合物，并使残留物与甲苯共沸。残留物通过制备性HPLC进行纯化，使用水中20-100％乙腈的梯度，获得作为白色固体的18g(60mg,53％)。
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标题化合物的合成：在氮气下，于50℃搅拌1,2-二氯乙烷(33mL)中的2-甲基-6-硝基苯甲酸酐(177mg,0.500mmol)、DMAP(92mg,0.750mmol)和粉末状的![]()
分子筛(1g)的浆液。18g(57mg,0.100mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，将该溶液通过注射泵5h添加到浆液中。添加完成后，含有酸的起始烧瓶用另外的N,N-二甲基甲酰胺(1mL)洗涤，将洗液转移到反应容器中，超过30min。于50℃搅拌反应混合物另外的1h，然后冷却。残留物通过制备性HPLC进行纯化，使用水中5-100％乙腈的梯度，获得作为白色固体的标题化合物(24.5mg,45％)。1H NMR(300MHz,CD3OD)δ1.00(d,J＝6.7Hz,3H),1.07(d,J＝6.7Hz,3H),1.43(s,3H),1.54(s,3H),1.59(d,J＝7.6Hz,3H),1.64 (d,J＝7.4Hz,3H),1.96(m,1H),2.17(m,1H),2.28(m,1H),2.71(m,1H),3.61(m,1H),4.43(m,1H),5.10(m,1H),5.24(d,J＝8.9Hz,1H),5.81(q,J＝7.1Hz,1H),6.46(ABq,ΔδAB＝0.18,JAB＝16.3Hz,2H),7.45(d,J＝8.5Hz,1H),7.62(dd,J＝8.5,1.3Hz,1H),7.79(s,1H),7.85(d,J＝8.5Hz,1H),8.26(d,J＝8.5Hz,1H),9.41(br d,J＝5.6Hz,1H).LCMS(m/z)550.2[M+H],Tr 2.05min。
实施例19-化合物19
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化合物19a的合成：1e(1.08g,2.50mmol)、2-甲基-6-硝基苯甲酸酐(1.46g,4.25mmol)、4-二甲氨基吡啶(122mg,1.00mmol)和粉末状的![]()
分子筛悬浮于干燥的二氯甲烷(11mL)中，在氮气下搅拌混合物。添加三乙胺(633mg,871μL,6.25mmol)和干燥的二氯甲烷(1.5mL)中的2,2-二甲基-丁-3-烯酸(390mg,3.43mmol)的溶液，并搅拌反应混合物17h。悬浮液通过相分离器筒，并蒸发滤出液。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷中乙酸乙酯的梯度(1:4到2:3)，获得作为棕色凝胶的标题化合物(735mg,56％)。
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化合物19b的合成：19a(124mg,0.235mmol)、(R)-1-(7-溴-喹啉-2-基)-乙醇(65mg,0.258mmol)、醋酸钯(8mg,0.035mmol)、三(邻甲苯)膦(22mg,0.071mmol)和三乙胺(48mg,66μL,0.47mmol)悬浮于乙腈(2.35mL)中。在微波反应器中将反应混合物在120℃加热并搅拌2h。蒸发残留物，bing悬浮于乙酸乙酯和饱和的氯化铵溶液中。分离有机层，并用饱和的氯化铵溶液洗涤，合并的含水洗液用乙酸乙酯反提取。用盐水洗涤合并 的有机层，通过硫酸钠干燥，过滤并蒸发。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷中的乙酸乙酯的梯度(1:1到3:1)，获得作为黄色凝胶的标题化合物(38mg,23％)。
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化合物19c的合成：添加锌(218mg,3.33mmol)和pH 6磷酸盐缓冲液(1mL)到四氢呋喃(5mL)中的19b(58mg,0.083mg)的溶液中。快速搅拌反应混合物18h。添加锌(218mg,3.33mol)，并将反应加热到40℃，持续1h，并冷却。混合物通过相分离器过滤，用四氢呋喃和pH 6磷酸盐缓冲液洗涤。滤出液用乙酸乙酯和水稀释，而且水相进一步用乙酸乙酯提取。合并的有机提取物通过硫酸钠干燥，过滤并蒸发。蒸发水相到大约1半的体积，用乙酸乙酯(5x)提取，合并的有机提取物通过硫酸钠干燥，过滤，与剩余的产物合并，并蒸发，获得黄色凝胶(51mg)。
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标题化合物的合成：在氮气下，于50℃搅拌1,2-二氯乙烷(27mL)中的2-甲基-6-硝基苯甲酸酐(143mg,0.415mmol)、4-二甲氨基吡啶(76mg,0.623mmol)和粉末状的![]()
分子筛(1g)的浆液。将19c(51mg,0.083mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中，通过注射泵3.5h添加该溶液到上面的浆液中。添加完成以后，用另外的N,N-二甲基甲酰胺(1mL)洗涤含有酸的起始烧瓶，将洗涤液10min转移到反应容器中。在50℃下将反应混合物搅拌另外的1h，然后冷却。残留物通过制备性HPLC进行纯化，使用水中10％-100％乙腈的梯度。残留物进一步通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷中的50％-60％乙酸乙酯的梯度(1:1到3:2)，获得作为无色凝胶的标题化合物(1.7mg,4％,2步)。1H NMR(300MHz,CD3OD)δ0.94(d,J＝7.0Hz,3H),0.99(d,J＝6.7Hz,3H),1.41(s,3H), 1.52(s,3H),1.65(d,J＝7.1Hz,3H),1.68(m,2H),1.73(d,J＝6.7Hz,3H),1.89–2.03(m,2H),2.15(m,1H),2.76(m,1H),3.82(m,1H),4.39(br d,J＝13.4Hz,1H),5.08(d,J＝9.8Hz,1H),5.81(q,J＝7.1Hz,1H),5.93(q,J＝6.9Hz,1H),6.34(ABq,ΔδAB＝0.11,JAB＝16.6Hz,2H),7.41(d,J＝8.5Hz,1H),7.67(s,1H),7.75(dd,J＝8.7,1.3Hz,1H),7.82(d,J＝8.7Hz,1H),8.22(d,J＝8.5Hz,1H).LCMS(m/z)551.2[M+H],Tr 2.22min。
实施例20-化合物20
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化合物20a的合成：二氯(p-伞花烃)钌(II)二聚体(3mg,0.005mmol)和(1R,2R)-(-)-N-对甲苯磺酰基-1,2-二苯基乙二胺(4.4mg,0.012mmol)悬浮于脱气的水(2mL)中，将混合物用氮气脱气15min。在氮气下，于70℃搅拌混合物90min。使得到的黄色溶液冷却到室温。添加2f(206mg,1mmol)、甲酸钠(340mg,5mmol)和脱气的四氢呋喃(1mL)，用氮气将反应混合物脱气5min。在40℃大力搅拌反应混合物2.5h。将反应混合物冷却到室温，并用乙酸乙酯提取。分离有机层，用水喝盐水洗涤，通过硫酸钠干燥，过滤并蒸发。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷/乙酸乙酯4:1到2:1的梯度，获得作为白色固体的标题化合物(193mg,92％)。
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化合物20b的合成：1,4-二恶烷(5mL)用氮气脱气，添加20a(208mg,1mmol)、三丁基(乙烯基)锡(951mg,0.9mL,3mmol)和双(三苯基膦)二氯化钯(II)(70mg,0.1mmol)，在微波反应器中于150℃加热混合物1h。添加另外的三丁基(乙烯基)锡(0.3mL,1mmol)和双(三苯基膦)二氯化钯(II)(70mg,0.1mmol)，在微波反应器中于150℃加热混合物1h。使反应混合物冷却到室温，通过助滤器过滤混合物，并用乙酸乙酯洗涤过滤板。蒸发滤出液，残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷/乙酸乙酯4:1到2:1的梯度，接着通过硅胶色谱，使用异己烷/乙酸乙酯3:1，获得作为白色固体的标题化合物(100mg,50％)。
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化合物20c的合成：制备二氯甲烷(200mL)中的1d(6.88g,15.9mmol)的溶液，并添加三氟乙酸(50mL)。室温搅拌反应混合物2h。TLC显示反应完成。蒸发溶液获得棕色油。凝胶与甲苯(50mL)共沸，并在真空下干燥得到的油，获得作为棕色凝胶的(S)-1-((S)-2-氨基-丙酰基)-六氢-哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯-三氟乙酸乙酯(7.8g)。乙腈(300mL)中的((S)-1-氨基甲酰-2-甲基丙基)-氨基甲酸叔丁酯的溶液冷却到0℃，然后添加N,N-二异丙基乙胺(13.8mL,79.7mmol)和2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯(6.33g,16.7mmol)。在0℃下搅拌反应15min，接着添加乙腈(85mL)中(S)-1-((S)-2-氨基-丙酰基)-六氢-哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯-三氟乙酸乙酯(ca.15.9mmol)。在0℃下搅拌反应另外的20min，然后升温至室温并搅拌15h。蒸发反应混合物，然后重新溶于乙酸乙酯(250mL)中。用水(150mL)洗涤溶液，然后通过硫酸钠干燥，过滤并蒸发，获得红色油。将该红色油通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷/乙酸乙酯7:3，然后异己烷/乙酸乙酯1:1，产生作为浅橙色固体的标题化合物(8.2g,92％)。
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化合物20d的合成：在氩气气氛下，于23℃添加氢氧化钠锂(26mg,1.1mmol)到四氢呋喃(3mL)和水(2mL)的20c(530mg,1.00mmol)的溶液中。19h以后，减压浓缩反应混合物，而且粗残留物通过硅胶快速柱色谱(12g Combiflash HP Gold Column,0-20％甲醇/二氯甲烷梯度)进行纯化，获得作为无色固体的标题化合物(339mg,92％)。
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化合物20e的合成：在氩气气氛下，于23℃添加N-(3-二甲氨基苯基)-N’-乙基碳二亚胺盐酸盐(211mg,1.10mmol)和4-二甲氨基吡啶(56.2mg,0.46mmol)，到二氯甲烷(4.6mL)中的20d(339mg,0.920mmol)和20bl(183mg,0.920mmol)的溶液中。21h以 后，反应混合物直接通过硅胶快速柱层析(24g Combiflash HP Gold Column,0-100％乙酸乙酯/己烷梯度)进行纯化，获得作为浅褐色固体的标题化合物(224mg,42％)。
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化合物20f的合成：在氩气气氛下，于0℃添加三氟甲磺酸三甲基硅酯(128mg,0.58mmol)到二氯甲烷(2.0mL)中的20e(224mg,0.390mmol)的溶液中。2h以后，减压浓缩反应混合物，获得作为浅黄色油的标题化合物(188mg,99％)，其可以不用进一步纯化而直接使用。
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化合物20g的合成：在氩气气氛下，于23℃添加氢氧化铯一水合物(98.5mg,0.585mmol)和活化的![]()
分子筛(53mg)到二甲基甲酰胺(1.00mL)中的20f(94mg,0.195mmol)的溶液中。10min后，添加5-溴-戊-1烯(29mg,0.195mmol)。4d以后，反应混合物用盐水(20mL)稀释，并用乙酸乙酯(3x20mL)提取。合并的有机提取物通过无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。粗残留物通过硅胶快速柱层析(12g Combiflash HP Gold Column,0–20％甲醇/二氯甲烷梯度)进行纯化，获得作为浅黄色固体的标题化合物(5.7mg,5％)。
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标题化合物的合成：在氩气气氛下，于23℃添加Hoveyda-Grubbs第2代催化剂(1.0mg,1.7μmol)到甲苯(3.7mL)中的20g(5.7mg,11μmol)的溶液中，并将得到的混合物加热到110℃。1.25h以后，使反应混合物冷却至23℃，并减压浓缩。粗残留物通过制 备性HPLC(Gemini 5u C18![]()
column,5-100％MeCN/H2O,0.1％三氟乙酸调节剂)进行纯化，获得作为白色固体三氟乙酸盐的标题化合物(3.7mg,56％)。1H NMR(CD3OD,400MHz):δ9.21(s,1H),8.09(d,J＝8.6Hz,1H),7.84(s,1H),7.79(s,1H),7.60(d,J＝8.6Hz,1H),6.66(d,J＝15.9Hz,1H),6.57–6.45(m,1H),5.99(q,J＝6.7Hz,1H),5.30(q,J＝7.0Hz,1H),4.31(br-d,J＝12.0Hz,1H),3.69–3.61(m,2H),2.91(br-t,J＝8.1Hz,2H),2.68(td,J＝12.8,3.2Hz,1H),2.55–2.44(m,1H),2.42–2.31(m,1H),2.15–2.03(m,1H),1.99–1.78(m,4H),1.74–1.59(m,2H),1.60(d,J＝6.7Hz,3H),1.56(d,J＝7.1Hz,3H),1.06(d,J＝6.9Hz,3H),0.99(d,J＝6.9Hz,3H).HPLC tR(min),4.169,纯度％:99％.(Phenomenex Kinetex 2.6u C18![]()
100×4.60mm 2.6微米柱,8.5min,1.5ml/min,2–98％MeCN/H2O,0.1％三氟乙酸调节剂梯度).LCMS(ESI)m/z 522.2[M+H]+,tR＝1.68min.(Gemini 5u C18![]()
50×4.60mm 5微米柱,3.5min,2ml/min,5–100％MeCN/H- 2O,0.1％乙酸调节剂梯度)。
实施例21-化合物21
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化合物21a的合成：在氩气气氛下，于0℃添加三氟甲磺酸三甲基硅酯(314mg,0.1.41mmol)到二氯甲烷(4.7mL)中的20c(500mg,0.945mmol)的溶液中。1h以后，减压浓缩反应混合物。得到的残留物用二氯甲烷(4.7mL)稀释，并在氮气气氛下，于23℃顺序添加N,N-二异丙基乙胺(657μL,3.78mmol)和丙-2烯-1-磺酰氯(140mg,0.992mmol)。17h以后，反应混合物用二氯甲烷(50mL)稀释，并用饱和的含水碳酸钠溶液(50mL)洗涤得到的混合物。分离有机层，通过污水硫酸钠干燥，并减压浓缩。粗残留物通过硅胶快速柱层析(24g Combiflash HP Gold Column,0–100％乙酸乙酯/己烷梯度)进行纯化，获得作为橙色油的标题化合物(256.4mg,51％)。
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化合物21b的合成：添加锌粉(625mg,9.57mmol)到四氢呋喃(8.0mL)中的21a(256mg,0.478mmol)的溶液中，接着在氩气气氛下，于23℃添加水(5.31mL)中的醋酸 铵(552mg,7.17mmol)的溶液。17h以后，将反应混合物升温至45℃。7h以后，使反应混合物冷却至室温，并通过硅藻土的板过滤，其用水(10mL)洗涤。减压浓缩滤出液以除去四氢呋喃，而且残留物在水(25mL)与乙酸乙酯(25mL)之间分离。分离各层，并用12N含水盐酸溶液将含水层酸化到pH＝2。用乙酸乙酯(4×50mL)萃取含水层，合并的有机提取物通过无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。通过添加甲苯(5mL)共沸除去残留的乙酸，接着减压浓缩(3x)，获得作为白色固体的标题化合物(156mg,80％)。
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化合物21c的合成：在氩气气氛下，于23℃添加N-(3-二甲氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐(105mg,0.546mmol)和4-二甲氨基吡啶(23.8mg,195μmol)到二氯甲烷(1.95mL)中的21b(156mg,0.390mmol)和20b(92.3mg,0.464mmol)的溶液中。21h以后，反应混合物通过硅胶快速柱层析(24g Combiflash HP Gold Column,0–100％乙酸乙酯/己烷梯度)进行纯化，获得作为无色油的标题化合物(155mg,70％)。
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标题化合物的合成：在氩气气氛下，于23℃添加Hoveyda-Grubbs第2代催化剂(16mg,25μmol)到甲苯(51mL)中的21c(150mg,256μmol)的溶液中，并将得到的混合物加热到110℃。2h以后，反应混合物用乙基乙烯醚(500μL)淬灭，并允许得到的混合物冷却至23℃。减压浓缩反应混合物，而且粗残留物通过硅胶快速柱层析(12g Combiflash HP Gold Column,0–100％乙酸乙酯/己烷梯度)进行纯化，获得作为褐色固体的标题化合物(18.6mg,13％)。1H NMR(CD3OD,400MHz):δ9.37(s,1H),8.23(d,J＝8.5Hz,1H),8.14(s,1H),7.97(s,1H),7.77(d,J＝8.7Hz,1H),6.85(d,J＝15.8Hz,1H),6.75–6.64(m,1H),6.22(q,J＝6.7Hz,1H),5.62–5.52(m,1H),4.40(dd,J＝13.3,3.3Hz,1H),4.21(dd,J＝14.8,5.8Hz,1H),4.10(dd,J＝13.4,7.5Hz,1H),4.06(d,J＝4.5Hz,1H),3.72(dd,J＝11.5,2.5Hz,1H),2.79(td,J＝12.8,3.2Hz,1H),2.19(app-sextet,J＝7.0Hz,1H),2.04–1.88(m, 2H),1.87-1.66(m,2H),1.72(d,J＝6.7Hz,3H),1.46(d,J＝7.2Hz,3H),1.05(d,J＝6.7Hz,3H),0.92(d,J＝6.8Hz,3H).HPLC tR(min),2.882,纯度％:98％.(Synergi 4u hydro-RP,50×4.60mm 4微米柱,7min,2ml/min,5–100％MeCN/H2O,0.05％三氟乙酸调节剂梯度).LCMS(ESI)m/z 558.44[M+H]+,tR＝1.88min.(Gemini 5u C18![]()
50×4.60mm 5微米柱,3.5min,2ml/min,5–100％MeCN/H2O,0.1％乙酸调节剂梯度).Rf＝0.25(乙酸乙酯)UV。
实施例22-化合物22
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化合物22a的合成：DCM(20mL)中1d(865mg,2mmol)的溶液在冰水浴中冷却。在氩气下，于0℃逐滴添加三氟甲磺酰三甲基硅酯，并将得到的溶液室温搅拌30min。蒸发反应混合物到干燥，并在氩气下，将得到的粗残留物溶于干乙腈(25mL)中。于0℃搅拌反应混合物，添加(S)-2-(叔丁氧基羰基(甲基)氨基)-3-甲基丁酸二环己胺盐(908mg,2.2mmol)和N,N-二异丙基乙胺(1.034g,8mmol)，接着添加2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲烷铵(1.065g,2.8mmol)。室温搅拌反应混合物48h。蒸发溶剂，将残留物溶于乙酸乙酯(100mL)中，用柠檬酸的20％水溶液、水(100mL)和盐水(100mL)洗涤溶液两次，通过硫酸镁干燥，过滤并蒸发。残留物通过硅胶色谱(从己烷中0-40％乙酸乙酯+甲醇(4/1)的梯度)进行纯化，蒸发后获得作为白色固体的标题化合物(617mg,56％)。
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化合物22b的合成：在氩气下，在冰水浴中冷却四氢呋喃(150mL)中的二异丙胺(2.51g,24.8mmol)的溶液。2min逐滴添加己烷(2.5M,9.7mL,24mmol)中的正丁基锂的溶液，将得到的溶液搅拌另外的10min。然后在二氧化碳:乙酮浴中将溶液冷却到-78℃，并30秒逐滴添加甲基2,2-二甲基-3-氧代丁酸酯(3.2g,22mmol)。搅拌溶液另外的15min， 通过套管5min，以四氢呋喃(20mL)中的溶液添加N-苯基-双(三氟甲磺酰亚胺)(8.4g,23.5mmol)，用另外一份四氢呋喃(10mL)洗涤。将得到的溶液搅拌10min，并从冷冻浴中移出。搅拌另外1h以后，真空浓缩反应混合物，用二乙醚(150mL)稀释。有机相用1M含水氢氧化钠(1x100mL,1x30mL)洗涤，通过无水硫酸镁干燥，过滤并浓缩，获得作为琥珀酸色液体的标题化合物(6.2g,100％)，其可以直接使用而不需要进一步纯化。
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化合物22c的合成：将无水吡啶(11mL,140mmol)中的22b(6.2g,22mmol)的溶液加热到70℃。18.5h以后，温度升高到90℃。总共搅拌72h以后，反应混合物在二乙醚(100mL)与3M含水HCl(100mL)的搅拌混合物之间分离。分相，并用饱和的含水碳酸钠(75mL)洗涤有机层，通过硫酸镁干燥，过滤并浓缩，获得作为浅棕色液体的标题化合物(2.7g,97％)，其可以直接使用而不需要进一步纯化。
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化合物22d的合成：在氩气下，在冰水浴中冷却双(环戊二烯)氯氢化锆。通过套管添加二氯甲烷(3mL)中的22c(1.4g,11.1mmol)和频那醇硼烷(2.4mL,16.5mmol)的溶液，用另外一份二氯甲烷(2mL)洗涤。从冷冻浴中移出得到的混合物，并于室温搅拌72h。然后用乙酸乙酯(50mL)稀释反应，用逐滴水(5mL)淬灭，并进一步用水(50mL)稀释。分离有机相与水相，并用乙酸乙酯(30mL)提取水相。合并的有机相通过无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，获得粗残留物，其通过硅胶色谱(己烷中的5％-15％乙酸乙酯)进行纯化，获得作为无色油的标题化合物(1.6g,57％)，其保持在15℃时结晶。
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化合物22e的合成：在氩气下，将20a(880mg,4.23mmol)、22d(1.24g,4.88mmol)、PdCl2(PCy2(p-NMe2Ph))2(173mg,0.21mmol)和K3PO4(2.64g,12.4mmol)溶于环戊基甲醚(11.9mL)和水(5.1mL)中。在油浴中，于90℃大力搅拌得到的双相混合物3.5h，将反应冷却到环境温度，并用乙酸乙酯(50mL)和水(40mL)稀释。分相，并用乙酸乙酯(2x50mL)提取水相。合并的有机相通过无水硫酸镁干燥，过滤并浓缩，获得粗残留物，其通过硅胶色谱(己烷中的25-60％乙酸乙酯)进行纯化，获得作为黄色油的标题化合物 (1.07g,85％)。
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化合物22f的合成：添加甲醇(4mL)、水(4mL)和氢氧化锂(96mg,4mmol)到四氢呋喃(8mL)中的22e(600mg,2mmol)的溶液中。室温搅拌得到的混合物10h，并用1M HCl(4.2mL,4.2mmol)淬灭。浓缩得到的溶液得到粗残留物，其与四氢呋喃(20mL)共蒸馏两次，用干燥的乙腈(20mL)共蒸馏两次，用干燥的甲苯(20mL)共蒸馏两次。得到的白色固体在高真空下干燥过夜，而且其可以直接使用而不需要进一步纯化(735mg,定量生产)。
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化合物22g的合成：在冰水浴中冷却二氯甲烷(10mL)中的17a(230mg,0.42mmol)的溶液。在氩气下，于0℃逐滴添加三氟甲磺酰三甲基硅酯(128mg,0.575mmol)，并室温搅拌得到的溶液30min。蒸发反应混合物到干燥，并在氩气下，将得到的粗残留物溶于干燥的乙腈(20mL)中。0℃搅拌反应混合物，添加22f(128mg,0.38mmol)和N,N-二异丙基乙胺(198mg,1.53mmol)，接着添加2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲烷铵(218mg,0.58mmol)。将反应混合物在50℃搅拌5天。蒸发溶剂，残留物溶于乙酸乙酯(50mL)中，溶液用柠檬酸(50mL)的20％水溶液、水(50mL)和盐水(50mL)洗涤两次，通过硫酸镁干燥，过滤并蒸发。残留物通过硅胶色谱(从己烷中的0-40％乙酸乙酯+甲醇(4/1)的梯度)进行纯化，蒸发后获得作为白色固体的标题化合物(88mg,32％)。
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标题化合物的合成：添加甲醇(1mL)、水(1mL)和氢氧化锂(2.9mg,0.12mmol)到四氢呋喃(2mL)中的22g(45mg,0.06mmol)的溶液中。于环境温度搅拌混合物2h，并用含水1M HCl(0.14mL,0.14mmol)淬灭。浓缩得到的溶液获得粗的残留物，其与四氢呋喃(5mL)共蒸馏两次，与干燥的乙腈(5mL)共蒸馏两次，并与干燥的甲苯(5mL)共蒸馏两次。得到的白色固体在高真空下干燥过夜，而且其可以直接使用而不需要进一步纯化(40mg,定量生产)。将2-甲基-6-硝基苯甲酸酐(83mg,0.24mmol)、4-二甲基甲酰胺(88mg,0.72mmol)和干燥的1,2-二氯乙烷(100mL)置于在烤箱中干燥的、氩气净化的烧瓶中。于70℃加热得到的溶液，并通过注射器，以干燥的N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中的溶液，12h逐滴添加来自前述步骤的粗产物。另外一份干燥的N,N-二甲基甲酰胺(2x1mL)用于完成定量转移。于70℃搅拌另外的8h以后，把反应混合物转移到分液漏斗中，并用水洗涤(添加100mL、5mL的盐水来支持分离)。用二氯甲烷(50mL)提取水相。用盐水(50mL)洗涤合并的有机提取物，通过硫酸镁干燥，过来，并减压浓缩。将得到的残留物溶于乙酸乙酯(100mL)，并用水洗涤(添加100mL、5mL的盐水来支持分离)。用乙酸乙酯提取水相。合并的有机提取物用水洗涤(添加100mL、5mL的盐水来支持分离)。用乙酸乙酯(50mL)提取得到的水相。合并的有机提取物用盐水(50mL)洗涤，通过硫酸镁干燥，过来并减压浓缩。残留物通过硅胶色谱(从己烷中的0-40％乙酸乙酯+甲醇(4/1)的梯度)进行纯化，蒸发后获得作为无色油的标题化合物(6mg,18％)。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ9.05(s,1H),7.95(d,J＝8.5Hz,1H),7.70(s,1H),7.46(d,J＝8.5Hz,1H),7.20(s,1H),6.76(d,J＝16.2Hz,1H),6.28(d,J＝16.2Hz,1H),5.93(m,1H),5.27–5.22(m,1H),5.14(m 1H),4.82(m 1H),4.29(m 1H),3.70(m,1H),3.38(m,1H),2.77(s,3H),2.63(m,1H),2.09(m,2H),1.93(m,2H),1.86(m,1H),1.79(m,2H),1.59(t,J＝7.4Hz,6H),1.45(m,2H),0.85(d,J＝6.6Hz,3H),0.76(d,J＝6.4Hz,3H).LC/MS(m/z)564(100％)[M+H]+；RT＝3.14min.；纯度>95％(Phenomenex Gemini 5微米C18,30x4.6mm,水中的5-100％乙腈,2mL/min,0.05％甲酸调节剂)。TLC Rf＝0.43,二氯甲烷中的5％甲醇。
实施例23-化合物23
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化合物23a的合成：在氩气下，将(S)-甲基2-羟基-3-甲基丁酸酯(578mg,4.37mmol)溶于四氢呋喃(3.7mL)和N,N-二甲基甲酰胺(2.5mL)中。在冰水浴中冷却该溶液。以四氢呋喃(3.7mL,3.7mmol)中的1.0M溶液，1.5min逐滴添加双(三甲硅基)氨基钠。另外的3.5min以后，添加5-溴戊-1-烯到一份中。搅拌反应2min，并从冷冻浴中移出。2h以后，反应用饱和的含水氯化铵(10mL)淬灭，并用乙酸乙酯(20mL)、水(10mL)和0.1N HCl(5mL)稀释。分相，用乙酸乙酯(20mL)提取水相。合并的有机相通过硫酸钠干燥，过滤并浓缩，获得粗残留物，其通过硅胶色谱(己烷中0-10％乙酸乙酯)进行纯化，获得作为无色液体的标题化合物(290mg,33％)。
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化合物23b的合成：添加水(1mL)和氢氧化锂一水合物(165mg,3.93mmol)到四氢呋喃(3mL)中的23a(155mg,0.774mmol)的溶液中。搅拌反应18h，同时添加甲醇(1mL)。搅拌反应另外的24h，然后真空浓缩50％，并用水(20mL)、乙酸乙酯(20mL)和3N含水HCl(15mL)稀释。分相，并用乙酸乙酯(2x20mL)提取水相。合并的有机相通过无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，获得(S)-3-甲基-2-戊-4-烯基氧-丁酸(115mg,80％)，其可以直接使用而不需要进一步纯化。在氩气下，将1d(240mg,0.55mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中。溶液在冰水浴中冷却，并添加三氟甲磺酰三甲基硅酯(209mg,0.94mmol)。将反应搅拌1h，并通过添加N,N-二异丙基乙胺(296mg,2.3mmol)淬灭。真空浓缩混合物，两次溶解于甲苯(10mL份)中，并从甲苯(10mL份)浓缩。得到的粗残留物直接使用而不需要进一步纯化。将(S)-3-甲基-2-戊-4-烯基氧-丁酸(0.62mmol)和(S)-1-[(S)-2-((S)-2-氨基-3-甲基-丁酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯乙酯(ca.0.55mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中。添加N,N-二异丙基乙胺(192mg,1.5mmol)，并将溶液在冰水浴中冷却。添加一份(1-氰基-2-乙氧基-2-氧代亚乙基氨基氧)二甲氨基-吗啉基-六氟磷酸碳(320mg,0.75mmol)，并搅拌反应15min。然后将反应从冷冻浴中移出，使其升温 到环境温度。搅拌过夜以后，用乙酸乙酯(30mL)和饱和的含水碳酸钠(30mL)稀释反应。分相，有机相用0.2N含水HCl(30mL)和盐水(5mL)的混合物洗涤，接着用半饱和盐水(30mL)和盐水(30mL)洗涤。有机相通过无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，获得粗残留物，其通过硅胶色谱(己烷中的30％-60％乙酸乙酯)进行纯化，获得作为非晶体残留物的标题化合物(157mg,57％)。
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化合物23c的合成：添加水(2.6mL)、醋酸铵(365mg,4.7mmol)和锌粉(460mg,7.0mmol)到四氢呋喃(5.3mL)中的23b(157mg,0.31mmol)的溶液中。室温大力搅拌得到的混合物24h，然后将反应加热到50℃。另外的3.5h以后，添加另外的锌粉(240mg,3.7mmol)。于50℃搅拌反应2h，然后冷却到35℃，并搅拌另外的18.5h。混合物用乙酸乙酯(50mL)通过硅藻土过滤，并用2N含水HCl(30mL)和盐水(15mL)的混合物洗涤。分层，用乙酸乙酯(2x30mL)提取水相。合并的有机相通过硫酸钠干燥，过滤并浓缩。得到的粗残留物在甲苯(10mL)中吸收两次，并从甲苯(10mL)浓缩，而且粗(S)-1-[(S)-2-((S)-3-甲基-2-戊-4-烯基氧基-丁酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羧酸可以直接使用而不需要进一步纯化。(S)-1-[(S)-2-((S)-3-甲基-2-戊-4-烯基氧基-丁酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羧酸(74mg,0.37mmol)和4-二甲基氨基吡啶(45.5mg,0.37mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中。添加一份N-(3-二甲氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐(78mg,0.41mmol)。室温搅拌反应44h，并用乙酸乙酯(50mL)、水(25mL)、饱和的含水碳酸钠(25mL)和盐水(50mL)稀释。分相，并用乙酸乙酯(50mL)提取水相。合并的有机相通过无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，获得粗残留物，其通过硅胶色谱(己烷中的50-80-100％乙酸乙酯)进行纯化，获得作为白色泡沫的标题化合物(118mg,69％,2步)。
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化合物23的合成：在氩气下，将23c(53mg,0.096mmol)溶于甲苯中。用氩气对溶液鼓泡，同时搅拌，持续10min。然后以氩气鼓泡的甲苯(2.0mL)中的溶液，添加Grubbs-Hoveyda第2代转位催化剂(9.0mg,0.014)。在预热的油浴中将反应加热到100℃，并搅拌35min。真空浓缩反应到～6.5mL终体积，并直接装载到硅胶柱上。用己烷中的60％-85％-100％乙酸乙酯洗脱，获得30mg纯材料，其通过反相HPLC(C18，水中15％-100％乙腈，0.1％三氟乙酸)再次纯化，获得作为非晶体固体的标题化合物(17.8mg,35％)，以它的三氟乙酸盐形式。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ9.56(s,1H),8.53(s,1H),8.39(d,J＝8.8Hz,1H),8.20(s,1H),7.87(d,J＝8.6Hz,1H),7.60–7.45(m,1H),6.73(d,J＝16.1Hz,1H),6.21(q,J＝6.7Hz,1H),5.93–5.79(m,1H),4.49–4.36(m,1H),3.84–3.73(m,1H),3.61(d,J＝6.7Hz,1H),3.59–3.45(m,2H),2.86–2.70(m,2H),2.44–2.31(m,1H),2.18–1.89(m,4H),1.88–1.61(m,7H),1.59(d,J＝7.1Hz,3H),1.04–0.95(m,6H)ppm.LCMS(m/z)523.3[M+H],RT 2.72min。
实施例24-化合物24
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化合物24的合成：化合物23(7.9mg,0.012mmol)的三氟乙酸盐溶解于乙酸乙酯(0.80mL)中。添加一份10％钯碳(5.6mg)，并用氢气冲洗反应容器。在1atm氢气下，搅拌反应混合物2.5h，然后通过硅藻土板用乙酸乙酯过来。浓缩滤出液，并将得到的粗残留物通过反相HPLC(C18，水中15％-100％乙腈，0.1％三氟乙酸)进行纯化，获得作为非晶体的标题化合物(4.2mg,60％)，以其三氟乙酸盐形式，接着冷冻干燥。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ9.63(s,1H),8.42(d,J＝8.8Hz,1H),8.26(s,1H),7.96(s,1H),7.91(d,J＝8.8Hz,1H),6.16(q,J＝6.5Hz,1H),5.79–5.68(m,1H),3.91–3.83(m,1H),3.46–3.40(m,1H),3.40(d,J＝5.7Hz,1H),3.26–3.09(m,4H),2.06–1.89(m,6H),1.84(m,1H),1.73–1.59(m,7H),1.52(d,J＝6.9Hz,3H),1.52(m,1H),0.93(s,3H),0.91(s,3H)ppm.LCMS(m/z)525.4[M+H],RT 2.51min。
实施例25-化合物25
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化合物25a 2,2-二甲基-丁-3-烯-1醇
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在氮气下，于-5℃搅拌四氢呋喃(15mL)中的2,2-二甲基-丁-3-烯酸(570mg,5mmol)和三乙胺(505mg,0.7mL,5mmol)的溶液。添加四氢呋喃(5mL)中的氯甲酸甲酯(473mg,0.4mL,5mmol)的溶液，并于-5℃搅拌反应混合物30min。过滤反应混合物，用四氢呋喃洗涤残留物，并蒸发滤出液。将残留物溶解于四氢呋喃(5mL)中，添加水(5mL)，并于0℃搅拌反应混合物。逐份添加硼氢化钠(190mg,5mmol)，并于0℃搅拌反应混合物15min，然后室温搅拌30min。添加饱和的氯化铵溶液(25mL)，并用二乙醚提取混合物。合并有机提取物，用盐水洗涤，通过无水硫酸镁干燥，过滤并蒸发。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷/二乙醚10:1至5:1的梯度，获得作为油的标题化合物(569mg,95％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ1.05(s,6H),1.33(t,J＝6.5Hz,1H),3.36(d,J＝6.5Hz,2H),5.09(dd,J＝17.4,1.3Hz,1H),5.12(dd,J＝10.9,1.3Hz,1H),5.79(dd,J＝17.4,10.9Hz,1H)。
化合物25b：1-(7-溴-喹啉-2-基)-乙醇
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缓慢添加乙酰氯(3.56mL,50.0mmol)到乙腈(27mL)中的7-溴-2-氯-喹啉(获自AstaTech,Inc.)(8.10g,33.4mmol)和碘化钠(50.0g,334mmol)的搅拌浆液中。塞住烧瓶，密封，并于80℃加热3h，然后冷却。依序用10％w/w含水碳酸钾溶液(80mL)、5％w/w含水亚硫酸钠溶液(80mL)和饱和的含水硫代硫酸钠溶液(80mL)处理混合物，并用二氯甲烷(2x)提取混合物。合并的有机提取物通过硫酸钠干燥，过滤并蒸发，获得粗7-溴-2-碘-喹啉。添加三丁基(1-乙氧基乙烯基)锡(13.6mL,40.1mmol)、1,4-二恶烷(67mL)和双(三苯基膦)二氯化钯(II)(2.37g,3.34mmol)到喹啉中，100℃加热反应混合物5h，接着冷 却。添加2M含水盐酸(67mL)，并搅拌反应1h。过滤混合物，用乙酸乙酯洗涤固体，并蒸发滤出液以除去有机物。用乙酸乙酯(3x)提取残留物，合并的有机提取物通过鹿酸奶干燥，过滤并蒸发。产物在硅胶上进行纯化，其掺有10％w/w碳酸钾，用异己烷中的0％-6％乙酸乙酯的梯度洗脱，获得作为白色固体的标题化合物(5.5g,66％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ2.86(s,3H),7.72-7.80(m,2H),8.21(ABq,ΔδAB＝0.11,JAB＝8.5Hz,2H),8.42(s,1H).LCMS(m/z)250.1/252.1[M+H],Tr＝2.90min。
化合物25c：(R)-1-(7-溴-喹啉-2-基)-乙醇
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将二氯(p-伞花烃)钌(II)二聚体和(1R,2R)-(-)-N-p-甲苯磺酰基-1,2-联苯乙二胺(88mg,0.012mmol)悬浮于脱气的水(40mL)中，并用氮气将混合物脱气5min。在氮气下，于70℃搅拌混合物90min。使得到的浑浊橙色混合物冷却到室温。添加脱气的四氢呋喃(40mL)中的1-(7-溴-喹啉-2-基)-乙醇(5.00g,20mmol)，接着添加甲酸钠(6.8g,100mmol)，用氮气将反应混合物脱气5min。在40℃下大力搅拌反应混合物4h，并冷却。然后用乙酸乙酯和水稀释，分离有机层，用水和盐水洗涤，通过硫酸钠干燥，过滤并蒸发。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷中0％-30％乙酸乙酯的梯度，获得作为类白色固体的标题化合物(4.96g,98％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ1.59(d,J＝6.7Hz,3H),4.85(d,J＝4.5Hz,1H),5.04-5.07(m,1H),7.40(d,J＝8.5Hz,1H),7.64(dd,J＝8.7,1.6Hz,1H),7.71(d,J＝8.7Hz,1H),8.15(d,J＝8.5Hz,1H),8.28(d,J＝1.6Hz,1H).LCMS(m/z)252.1/254.1[M+H],Tr＝1.74min。
化合物25d：乙酸(R)-1-(7-溴-喹啉-2-基)-乙酯
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添加醋酸酐(0.75mL,7.93mmol)和4-(二甲氨基)吡啶(24mg,0.197mmol)到0℃的无水二氯甲烷中的25c(1.00g,3.97mmol)和三乙胺(1.65mL,11.9mmol)的溶液中。搅拌反应混合物，并升温到室温。1.5h以后，添加水(100mL)，并分层。用二氯甲烷(2x100mL)再提取水相，而且用盐水(100mL)洗涤合并的有机物，通过硫酸镁过滤，干燥并真空浓缩，获得粗残留物。该粗残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷(66mL)，然后异己烷/乙酸乙酯95:5(300mL)，然后异己烷/乙酸乙酯9:1(1066mL)，产生作为无色 油的25d(1.16g,99％)。1H NMR(300MHz,CD3OD).1.65(d,J＝6.7Hz,3H),2.16(s,3H),5.98(q,J＝6.7Hz,1H),7.63(d,J＝8.5Hz,1H),7.72(dd,J＝8.7,1.8Hz,1H),7.87(d,J＝8.7Hz,1H),8.23(d,J＝1.8Hz,1H),8.37(d,J＝8.5Hz,1H).LCMS(m/z)293.9/296.0[M+H],Tr＝2.58min。
化合物25e：乙酸(R)-1-[7-((E)-4-羟基-3,3-二甲基-丁-1-烯基)喹啉-2-基]-乙酯
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在氮气下，室温搅拌1,4-二恶烷(5mL)中的2,2-二甲基-丁-3-烯-1-醇(40mg,0.4mmol)和25d(118mg,0.4mmol)的溶液。添加醋酸钯(II)(18mg,0.08mmol)和三(O-甲苯基)膦(24mg,0.08mmol)，接着添加1,4-二恶烷(1mL)中的N,N-二环己基甲胺(125mg,0.14mL,0.64mmol)的溶液，将反应混合物在100℃下加热90min。添加另外的醋酸钯(II)(9mg,0.04mmol)、三(O-甲苯基)膦(12mg,0.04mmol)，并将反应混合物在100℃下加热3h。使反应混合物冷却至室温。添加乙酸乙酯，用饱和的碳酸氢钠溶液和盐水洗涤混合物。有机溶液通过疏水性筛板过滤，并蒸发滤出液。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷/乙酸乙酯3:1至1:1，获得作为凝胶的25e(85mg,68％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ1.20(s,6H),1.43(t,J＝6.3Hz,1H),1.69(d,J＝6.7Hz,3H),2.18(s,3H),3.50(d,J＝6.3Hz,2H),6.06(q,J＝6.7Hz,1H),6.52(ABq,ΔδAB＝0.18,JAB＝16.0Hz,2H),7.42(d,J＝8.5Hz,1H),7.62(dd,J＝8.5,1.6Hz,1H),7.75(d,J＝8.5Hz,1H),8.03(br s,1H),8.11(d,J＝8.5Hz,1H).LCMS(m/z)314.1[M+H],Tr＝2.21min。
化合物25f：乙酸(R)-1-[7-((E)-3,3-二甲基-4-氧-丁-1烯基)喹啉-2-基]-乙酯
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在氮气下，于0℃搅拌二氯甲烷(5mL)中的25e(78mg,0.25mmol)的溶液。添加Dess-Martin高碘烷(106mg,0.25mmol)，并在0℃下搅拌反应混合物60min。添加另外的Dess-Martin高碘烷(22mg,0.05mmol)，并在0℃下搅拌反应混合物30min，然后室温搅拌15min。用二氯甲烷稀释反应混合物，并用饱和的碳酸氢钠溶液、水和盐水洗涤混合物。有机溶液通过疏水性筛板过滤，并蒸发滤出液。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷/乙酸乙酯4:1至1:1，获得作为凝胶的25f(85mg,68％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ1.37(s,6H),1.69(d,J＝6.7Hz,3H),2.18(s,3H),6.06(q,J＝6.7Hz,1H),6.40(d, J＝16.3Hz,1H),6.65(d,J＝16.3Hz,1H),7.44(d,J＝8.5Hz,1H),7.62(dd,J＝8.5,1.2Hz,1H),7.76(d,J＝8.5Hz,1H),8.04(br s,1H),8.13(d,J＝8.5Hz,1H),9.52(s,1H).LCMS(m/z)312.1[M+H],Tr＝2.65min。
化合物25g：(S)-1-[(S)-2-((S)-2-{(E)-4-[2-((R)-1-乙酸基-乙基)-喹啉-7-基]-2,2-二甲基-丁-3-烯基氨基}-3-甲基-丁酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯-乙酯
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在氮气下，于0℃搅拌二氯甲烷(5mL)中的20c(133mg,0.25mmol)的溶液。逐滴添加三氟甲磺酰三甲基硅酯(111mg,0.09mL,0.5mmol)，并在0℃下搅拌反应混合物。添加冷的饱和含水碳酸氢钠溶液(10mL)，并在0℃下搅拌混合物15min。添加二氯甲烷，分离有机层，用盐水洗涤，通过无水硫酸钠洗涤并蒸发，获得(S)-1-[(S)-2-((S)-2-氨基-3-甲基-丁酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯-乙酯(0.25mmol)，其可以直接使用而不需要进一步纯化。将二氯甲烷(5mL)中的(S)-1-[(S)-2-((S)-2-氨基-3-甲基-丁酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯-乙酯(0.25mmol)和25f(66mg,0.21mmol)的溶液在室温下搅拌10min。添加三乙酰氧基硼氢化钠(55mg,0.26mmol)和乙酸(1滴)，并室温搅拌反应混合物4h。添加另外的三乙酰氧基硼氢化钠(13mg,0.25mmol)，并室温搅拌反应混合物1h。用乙酸乙酯稀释反应混合物，并用饱和的碳酸氢钠溶液、水和盐水洗涤溶液。有机溶液通过疏水性筛板干燥，并蒸发滤出液。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷/乙酸乙酯1:1至0:1，获得作为凝胶的25g(84mg,46％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ0.86(d,J＝6.9Hz,3H),0.96(d,J＝6.9Hz,3H),1.20(s,3H),1.29(d,J＝7.0Hz,3H),1.31(s,3H),1.69(d,J＝6.7Hz,3H),1.70-2.15(m,6H),2.18(s,3H),2.52-2.63(m,2H),2.82-2.86(m,2H),3.66-3.73(m,1H),3.83(d,J＝11.4Hz,1H),4.45-4.50(m,1H),4.74(d,J＝12.0Hz,1H),4.95(d,J＝12.0Hz,1H),5.28-5.38(m,1H),6.06(q,J＝6.7Hz,1H),6.52(ABq,ΔδAB＝0.14,JAB＝16.0Hz,2H),7.42(d,J＝8.5Hz,1H),7.66(d,J＝8.5Hz,1H),7.74(d,J＝8.5Hz,1H),7.93(d,J＝8.5Hz,1H),8.00(s,1H),8.11(d,J＝8.5Hz,1H).LCMS(m/z)726.1/728.1[M+H],Tr＝2.08min。
化合物25
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在氮气下，于0℃搅拌四氢呋喃(3mL)中的25g(80mg,0.11mmol)的溶液。添加水(1mL)中的氢氧化锂一水合物(18.5mg,0.44mmol)的溶液，并于0℃搅拌反应混合物4h。添加盐酸(1M,0.45mL)，并蒸发溶剂。使残留物与四氢呋喃/甲苯(1:1,4x)共蒸发，用二乙醚(2x)研磨残留物，并干燥，获得作为白色固体的(S)-1-[(S)-2-((S)-2-{(E)-4-[2-((R)-1-羟基-乙基)-喹啉-7-基]-2,2-二甲基-丁-3-烯基氨基}-3-甲基-丁酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羧酸(0.11mmol)，其可以粗产物用于下一步的反应中。LCMS(m/z)554.2[M+H],Tr＝1.03min。
在氮气下，室温搅拌四氢呋喃(130mL)中的粗(S)-1-[(S)-2-((S)-2-{(E)-4-[2-((R)-1-羟基-乙基)-喹啉-7-基]-2,2-二甲基-丁-3-烯基氨基}-3-甲基-丁酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羧酸(0.11mmol)、N,N-二异丙基乙胺(84mg,0.65mmol)和4-二甲基氨基吡啶(5mg,0.04mmol)的混合物。添加2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲烷铵(133mg,0.35mmol)，并室温搅拌反应混合物2.5h。蒸发溶剂，残留物在乙酸乙酯与饱和的碳酸氢钠溶液之间分离。分离有机溶液，并用盐水洗涤。有机溶液通过疏水性筛板过滤，蒸发滤出液。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用乙酸乙酯。用二乙醚研磨残留物，并干燥得到的固体，获得作为白色固体的化合物25(21mg,30％)。1H NMR(300MHz,CD3OD)![]()
0.80(d,J＝6.7Hz,3H),0.98(d,J＝6.7Hz,3H),1.11(s,3H),1.25(s,3H),1.62(d,J＝7.1Hz,3H),1.67-1.71(m,3H),1.74(d,J＝6.7Hz,3H),1.88-2.05(m,2H),2.64(d,J＝8.5Hz,1H),2.70-2.80(m,3H),3.80-3.85(m,1H),4.35-4.40(m,1H),5.89-5.99(m,2H),6.42(ABq,ΔδAB＝0.15,JAB＝16.5Hz,2H),7.41(d,J＝8.5Hz,1H),7.61(dd,J＝8.5,1.5Hz,1H),7.82(d,J＝8.5Hz,1H),8.01(br s,1H),8.22(d,J＝8.5Hz,1H).LCMS(m/z)536.2[M+H],Tr＝1.47min。
实施例26：化合物26
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化合物26a(S)-1-{(S)-2-[(S)-2-(叔丁氧基羰基-甲基-氨基)-3-甲基-丁酰氨基]-丙酰基}-六氢-哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯-乙酯
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在氮气下，于0℃搅拌二氯甲烷(35mL)中的1d(1.08g,2.5mmol)的溶液。添加三氟甲磺酰三甲基硅酯(682mg,0.55mL,3.1mmol)，并于0℃搅拌反应混合物45min。添加N,N-二异丙基乙胺(1.29g,1.73mL,10mmol)，并蒸发溶剂，获得粗的(S)-1-((S)-2-氨基-丙酰基)-六氢-哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯-乙酯(2.5mmol)，其可以用于接下来的步骤。在氮气下，于0℃搅拌乙腈(30mL)中的粗(S)-1-((S)-2-氨基-丙酰基)-六氢-哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯-乙酯(2.5mmol)的溶液。添加(S)-2-(叔丁氧基羰基-甲基-氨基)-3-甲基-丁酸(635mg,2.75mmol,获自Sigma-Aldrich Inc.)和N,N-二异丙基乙胺(1.29g,1.7mL,10mmol)，接着添加2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲烷铵(1.33g,3.5mmol)，并室温搅拌反应混合物18h。蒸发溶剂，并将残留物溶于乙酸乙酯中。用水、盐酸(2M)、饱和的碳酸氢钠溶液、水和盐水洗涤溶液，通过无水硫酸钠干燥、过滤并蒸发。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷/乙酸乙酯1:1至0:1的梯度，获得作为白色固体的标题化合物(756mg,55％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ0.88(d,J＝6.5Hz,3H),0.97(d,J＝6.7Hz,3H),1.28(d,J＝6.7Hz,3H),1.49-1.54(m,9H),1.65-2.30(m,5H),2.82(s,3H),2.82-2.94(m,1H),3.62-4.18(m,3H),4.30-4.45(m,1H),4.73(d,J＝12.0Hz,1H),4.95(d,J＝12.0Hz,1H),5.29-5.39(m,1H),6.62-6.77(m,1H).LCMS(m/z)545.2/547.1[M+H],Tr＝3.02min。
化合物26b(S)-1-{(S)-2-[(S)-2-({(E)-4-[2-((R)-1-乙酸基-乙基)-喹啉-7-基]-2,2-二甲基-丁-3-烯基}-甲基-氨基)-3-甲基-丁酰氨基]-丙酰基}-六氢-哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯-乙酯
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使用26a代替20c，以与化合物25g相同的方式制备化合物26b，产率为42％。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ0.90(d,J＝6.5Hz,3H),1.05(d,J＝6.5Hz,3H),1.16(s,3H),1.19(s,3H),1.33(d,J＝6.7Hz,3H),1.69(d,J＝6.7Hz,3H),1.70-2.15(m,5H),2.17(s,3H),2.40(s,3H),2.57-2.62(m,3H),2.82-2.89(m,1H),3.66-3.73(m,1H),3.83(d,J＝11.4Hz,1H),4.43-4.48(m,1H),4.72(d,J＝11.8Hz,1H),4.94(d,J＝11.8Hz,1H),5.27-5.37(m,1H),6.06(d,J＝6.7Hz,1H),6.50(ABq,ΔδAB＝0.04,JAB＝16.5Hz,2H),6.77(d,J＝8.0Hz,1H),7.41(d,J＝8.3Hz,1H),7.6(d,J＝8.5Hz,1H),7.73(d,J＝8.5Hz,1H),7.95(br s,1H),8.11(d,J＝8.3Hz,1H).LCMS(m/z)740.2/742.3[M+H],Tr＝2.44min。
化合物26
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使用26b代替25g，以与化合物25类似的方式制备作为白色固体的化合物26，产率为11％。1H NMR(300MHz,CD3OD)![]()
0.86(d,J＝6.5Hz,3H),0.96(d,J＝6.5Hz,3H),1.14(s,3H),1.23(s,3H),1.44(d,J＝7.1Hz,3H),1.67-1.72(m,2H),1.75(d,J＝6.9Hz,3H),1.81-2.25(m,3H),2.51(s,3H),2.79-2.91(m,4H),3.69-3.73(m,1H),4.25-4.30(m,1H),5.47(q,J＝6.7Hz,1H),5.97(q,J＝6.7Hz,1H),6.54(ABq,ΔδAB＝0.06,JAB＝16.0Hz,2H),7.42(d,J＝8.3Hz,1H),7.55(d,J＝8.3Hz,1H),7.81(d,J＝8.5Hz,1H),7.95(br s,1H),8.21(d,J＝8.5Hz,1H).LCMS(m/z)550.3[M+H],Tr＝1.50min。
实施例27和28-化合物27和28
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化合物27a三氟-甲烷磺酸2-甲基-丁-3-烯基酯
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在氮气下，于-78℃搅拌二氯甲烷(40mL)中的2-甲基-丁-3-烯-1-醇(840mg,10mmol)和2,6-卢剔啶(1.5g,1.6mL,14mmol)。逐滴添加三氟甲烷磺酸酐(3.38g,2.0mL,12mmol)，并于-78℃搅拌反应混合物1h。添加水，并将反应混合物升温到0℃。添加另外的水，分离有机层，用冷的1M盐酸、水和盐水洗涤，通过无水硫酸镁干燥，过滤并蒸发，获得作为浅黄色油的粗产物(14mmol)，其静置时黑变。粗产物可以立即用于接下来的步骤。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ1.16(d,J＝6.9Hz,3H),2.66-2.76(m,1H),4.33-4.55(m,2H),5.20(dd,J＝10.5,0.9Hz,1H),5.21(dd,J＝16.3,0.9Hz,1H),5.66-5.81(m,1H)。
化合物27b(S)-3-甲基-2-(2-甲基-丁-3-烯氧基)-3-丁酸甲酯
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在氮气下，于-10℃搅拌四氢呋喃(30mL)中的(S)-2-羟基-3-甲基-丁酸甲酯(1.32g,10mmol)的溶液。逐滴添加双(三甲基硅基)氨化钠(6mL,12mmol,2M，四氢呋喃中)，并于-10℃搅拌反应混合物10min。添加一份三氟-甲烷磺酸2-甲基-丁-3-烯基酯(2.18g,10mmol)，并室温搅拌反应混合物2h。添加饱和的氯化铵溶液，并用乙酸乙酯提取混合物。合并有机提取物，用水和盐水洗涤，通过无水硫酸镁干燥，过滤并蒸发。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷/二乙醚20:1至10:1的梯度，获得作为油的标题化合物(429mg,21％over 2steps)，以两种非对映异构体的1:1混合物。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ0.96-0.99(m,6H),1.05(d,J＝6.9Hz,1.5H),1.08(d,J＝6.6Hz,1.5H),2.01-2.12(m,1H),2.45-2.56(m,1H),3.06-3.21(m,1H),3.44-3.60(m,2H),3.76(s,3H),5.00-5.11(m,2H),5.74-5.88(m,1H)。
化合物27c(S)-3-甲基-2-(2-甲基-丁-3-烯基氧基)-丁酸
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在氮气下，于0℃搅拌四氢呋喃(10mL)中的27b(429mg,2.1mmol)的溶液。添加水(5mL)中的氢氧化锂一水合物(265mg,6.3mmol)的溶液，接着添加甲醇(2mL)，于0℃搅拌反应混合物30min，然后室温搅拌4h。添加另外的氢氧化锂一水合物(90mg,2.1mmol)和甲醇(3mL)，并室温搅拌反应混合物3天。蒸发有机溶剂，用2M盐酸将溶液酸化到pH 2，用乙酸乙酯提取混合物。合并有机提取物，用水和盐水洗涤。有机溶液通过疏水性筛板过滤，蒸发滤出液，获得作为无色油的标题化合物(200mg,54％)，其以两种非对映异构体的1:1混合物。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ0.97-1.11(m,9H),2.14-2.23(m,1H),2.48-2.59(m,1H),3.37-3.50(m,2H),3.70-3.72(m,1H),5.11-5.19(m,2H),5.70-5.88(m,1H),8.50-9.50(br s,1H).LCMS(m/z)185.3[M-H],Tr＝2.33min。
化合物27d(S)-2-{(E)-4-[2-((R)-1-乙酸基-乙基)-喹啉-7-基]-2-甲基-丁-3-烯基氧基}-3-甲基-丁酸
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在氮气下，室温搅拌乙腈(10mL)中的27c(200mg,1.07mmol)和25d(314mg,1.07mmol)的溶液。添加醋酸钯(II)(48mg,0.2mmol)、三(o-甲苯基)膦(61mg,0.2mmol)，接着添加N,N-二环己基甲胺(418mg,0.46mL,2.14mmol)，并在微波反应器中在120℃下将反应混合物加热40min。添加另外的醋酸钯(II)(48mg,0.2mmol)、三(o-甲苯基)膦(61mg,0.2mmol)，并在微波反应器中在130℃下将反应混合物加热30min。蒸发溶剂，残留物在乙酸乙酯与1M盐酸之间分离。合并有机提取物，并用盐水洗涤。有机溶液通过疏水性筛板过滤，并蒸发滤出液，获得作为两种非对映异构体的1:1混合物的粗产物(1.07mmol)，其可用于接下来的步骤而不需要进一步纯化。LCMS(m/z)400.2[M+H],Tr＝2.75min。
化合物27e(S)-1-[(S)-2-((S)-2-{(E)-4-[2-((R)-1-乙酸基-乙基)-喹啉-7-基]-2-甲基-丁-3烯氧基}-3-甲基-丁酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯-乙酯
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在氮气下，于0℃搅拌二氯甲烷(30mL)中的1d(433mg,1.0mmol)的溶液。添加三氟甲磺酰三甲基硅酯(444mg,0.35mL,2.0mmol)，并于0℃搅拌反应混合物45min。添加N,N-二异丙基乙胺(516mg,0.7mL,4.0mmol)，蒸发溶剂，并干燥残留物，获得粗的(S)-1-((S)-2-氨基-丙酰基)-六氢-哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯-乙酯(1.0mmol)，其用于接下来的步骤。在氮气下，于0℃搅拌乙腈(30mL)中的粗(S)-1-((S)-2-氨基-丙酰基)-六氢-哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯-乙酯(1.0mmol)的溶液。添加27d(1.0mmol)和N,N-二异丙基乙胺(516mg,0.7mL,4.0mmol)，接着添加2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲烷铵(516mg,0.7mL,4.0mmol)，并于0℃搅拌反应混合物30min，然后室温搅拌2h。蒸发溶剂，将残留物溶于乙酸乙酯中。用冷的1M盐酸、水、饱和的碳酸氢钠溶液、水和盐水洗涤溶液。有机溶液通过疏水性筛板过滤，并蒸发滤出液。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷/乙酸乙酯1:1至1:2的梯度，获得作为白色固体的标题化合物(420mg,58％,2步)，以两种非对映异构体的1:1混合物。LCMS(m/z)713.3/715.3[M+H],Tr＝3.48min。
化合物27和28
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在氮气下，于0℃搅拌四氢呋喃(10mL)中的27e(143mg,0.2mmol)的溶液。添加水(2mL)中的氢氧化锂一水合物(42mg,1.0mmol)的溶液，并于0℃搅拌反应混合物3h，然后于10℃搅拌3h。添加1M盐酸(1mL,1.0mmol)，并蒸发溶剂。残留物与四氢呋喃/甲苯(1:1,3x)共蒸发，用二乙醚(2x)研磨残留物，干燥，获得作为浅黄色固体的(S)-1-[(S)-2-((S)-2-{(E)-4-[2-((R)-1-羟基-乙基)-喹啉-7-基]-2-甲基-丁-3烯基氧基}-3-甲基- 丁酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羧酸(0.2mmol)，以两种非对映异构体的混合物，其以粗产物用于接下来的反应。LCMS(m/z)541.2[M+H],Tr＝1.77min。在氮气下，室温搅拌四氢呋喃(200mL)中的粗(S)-1-[(S)-2-((S)-2-{(E)-4-[2-((R)-1-羟基-乙基)-喹啉-7-基]-2-甲基-丁-3烯基氧基}-3-甲基-丁酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羧酸(0.2mmol)的悬浮液。添加N,N-二异丙基乙胺(129mg,0.18mL,1.0mmol)和4-二甲基氨基吡啶(8mg,0.06mmol)，并室温搅拌反应混合物5min。添加2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲烷铵(107mg,0.28mmol)，并室温搅拌反应混合物2h。添加另外的2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲烷铵(30mg,0.08mmol)，并室温搅拌反应混合物2h。蒸发溶剂，将残留物悬浮于乙酸乙酯中。添加冷的1M盐酸，分离有机层，用水、饱和的碳酸氢钠溶液、水和盐水洗涤。有机溶液通过疏水性筛板过滤，并蒸发滤出液。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷/乙酸乙酯1:4至0:1的梯度，获得两种非对映异构体的1:1混合物。混合物通过反相制备性HPLC进行纯化，用乙腈(包含0.1％甲酸)/水(包含0.1％甲酸)45:55洗脱。合并包含纯的非对映异构体的级分，并蒸发。残留物在饱和的碳酸氢钠溶液于乙酸乙酯之间分离。分离有机层，用水和盐水洗涤。有机溶液通过疏水性筛板过滤，蒸发滤出液，获得两种非对映异构体。
实施例27化合物27(首先洗脱)非对映异构体1：(12mg,12％)，作为白色固体。 1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ0.70(d,J＝6.5Hz,3H),0.93(d,J＝6.5Hz,3H),0.97(d,J＝6.9Hz,3H),1.54(d,J＝6.9Hz,3H),1.55-1.62(m,2H),1.63(d,J＝6.7Hz,3H),1.73-1.95(m,3H),2.72-2.78(m,1H),3.25-3.30(m,1H),3.45-3.52(m,1H),3.65-3.72(m,2H),4.18-4.22(m,1H),4.87(d,J＝12.2Hz,1H),5.65-5.73(m,1H),5.96(q,J＝6.7Hz,1H),6.34(dd,J＝16.5,5.5Hz,1H),6.45(d,J＝16.5Hz,1H),7.48(d,J＝8.3Hz,1H),7.58(d,J＝8.7Hz,1H),7.80(s,1H),7.87(d,J＝8.5Hz,1H),8.28(d,J＝8.5Hz,1H),8.47(d,J＝8.3Hz,1H).LCMS(m/z)523.3[M+H],Tr＝2.30min。
实施例28化合物28(第二洗脱)非对映异构体2：(12mg,12％)，作为白色固体。 1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ0.73(d,J＝6.7Hz,3H),0.93(d,J＝6.5Hz,3H),1.10(d,J＝6.9Hz,3H),1.49(d,J＝7.1Hz,3H),1.55-1.62(m,2H),1.65(d,J＝6.9Hz,3H),1.75-1.95(m,3H),2.56-2.62(m,1H),2.72-2.82(m,1H),3.64-3.73(m,3H),4.18-4.32(m,1H),4.84(d,J＝12.1Hz,1H),5.65-5.73(m,1H),5.98(q,J＝6.7Hz,1H),6.34(dd,J＝16.5,5.2Hz,1H),6.48(d,J＝16.5Hz,1H),7.48(d,J＝8.5Hz,1H),7.61(d,J＝8.5Hz,1H),7.75(s,1H),7.87(d,J＝8.5Hz,1H),8.28(d,J＝8.3Hz,1H),8.43(d,J＝8.0Hz,1H).LCMS(m/z)523.3[M+H],Tr＝2.34min。
实施例29：化合物29
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化合物29a(S)-1-[(S)-2-((S)-2-羟基-3-甲基-丁酰胺基)-丙酰基]-六氢-吡啶-3-羧酸
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添加氢氧化锂一水合物(69mg,1.65mmol)到悬浮于四氢呋喃(15mL)和水(3mL)中的(S)-1-[(S)-2-((S)-2-羟基-3-甲基-丁酰胺基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯-乙酯1e(502mg,1.16mmol)中。搅拌反应混合物45min，然后添加盐酸(2M,0.75mL)。搅拌反应混合物5min，然后蒸发。粗的残留物可以直接用于接下来的步骤而不需要进一步的纯化。
化合物29b(S)-1-[(S)-2-((S)-2-氨基-3-甲基-丁酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羧酸(R)-1-(7-溴-喹啉-2-基)-乙胺
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18c(533mg,1.50mmol)溶解于1,4-二恶烷(4M,7.5mL)和甲醇(7.5mL)中的盐酸中。将反映混合物搅拌2h，然后蒸发。残留物通过SCX筒，其用甲醇洗脱，然后用甲醇中的1M氨水洗脱。收集碱性级分并蒸发。残留物溶解于二氯甲烷(30mL)中，并添加23mL该溶液到新制备的29a(350mg,1.16mmol)中。将反应容器冷却到0℃，并添加2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲烷铵(616mg,1.62mmol)和N,N-二异丙基乙胺(450mg,606μL,3.48mmol)。使反应混合物升温至环境温度并搅拌15h。用二氯甲烷稀释混合物，并接连用饱和的碳酸钠溶液、水和饱和的氯化铵洗涤，过滤并蒸发。残留物在硅上进行纯化，使用乙酸乙酯/甲醇1:0至19:1洗脱，获得作为 白色泡沫的标题化合物(205mg,33％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ0.85(d,J＝6.9Hz,3H),1.01(d,J＝6.9Hz,3H),1.41(d,J＝6.9Hz,3H),1.58(d,J＝6.7Hz,3H),1.60-1.81(m,2H),2.04-2.16(m,1H),2.20-2.29(m,1H),3.69-3.79(m,1H),3.26(br s,1H),3.43-3.54(m,1H),3.72(heptet,J＝6.4Hz,1H),3.86(d,J＝11.8Hz,1H),3.98(d,J＝3.1Hz,1H),4.47-4.56(m,1H),5.27(app pentet,J＝6.9Hz,1H),5.46(dq,J＝8.0,6.9Hz,1H),7.13(d,J＝8.2Hz,1H),7.39(d,J＝8.5Hz,1H),7.65(dd,J＝8.5,1.8Hz,1H),7.70(d,J＝8.5Hz,1H),8.10(d,J＝6.7Hz,1H),8.14(d,J＝8.5Hz,1H),8.43(s,1H).LCMS(m/z)536.0[M+H],Tr＝2.21min。
化合物29c(R)-4-异丙基-3-((E)-2-甲基-丁-2-烯酸酰基)-恶唑烷-2-酮
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无水四氢呋喃(50mL)中的巴豆酸(2.005g,20.031mmol)的冷(-20℃)溶液，依序用三乙胺(6.1mL,44.068mmol)和逐滴的特戊酰氯(2.7mL,22.034mmol)处理。在-20℃搅拌30min以后，添加氯化锂(1.019g,24.037mmol)和(R)-(+)-4-异丙基-2-恶唑烷酮(2.587g,20.031mmol)。使反应混合物缓慢升温至室温，搅拌3天，然后用饱和的氯化铵淬灭。乙酸乙酯(2x)用含水层提取。合并有机物，通过无水硫酸钠干燥，过滤，并真空除去挥发物。残留物通过硅胶色谱纯化，使用50g Isolute筒，用异己烷/乙酸乙酯1:0至4:1的连续梯度，获得作为无色固体的标题化合物(3.307g,78％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ0.92(d,J＝6.9Hz,3H),0.94(d,J＝7.1Hz,3H),1.83(d,J＝6.9Hz,3H),1.93(s,3H),2.38(d of heptet,J＝6.9,4.2Hz,1H),4.19(dd,J＝8.9,4.6Hz,1H),4.33(app t,J＝8.9Hz,1H),4.49-4.58(m,1H),6.23(q,J＝7.1Hz,1H)。
化合物29d(R)-4-异丙基-3-[(R)-2-甲基-2-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-丁-3-丁烯酰基]-恶唑烷-2-酮
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通过与无水甲苯共沸，除去29c(458.9mg,2.172mmol)中的残留水分。用甲苯中的双(三甲基硅基)氨化钠的溶液(0.6M,5.4mL,3.258mmol)逐滴处理无水甲苯(10mL)中的 干燥29c的冷(-78℃)溶液。于-78℃搅拌黄色溶液35min以后，添加2-(三甲基硅基)-乙氧基甲基氯(1.1mL,6.516mmol)。于0℃搅拌3.5h以后，反应用饱和的氯化铵淬灭。用二氯甲烷(2x)萃取含水层。合并有机物，通过相分离器过滤，并真空除去挥发物。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用50g Isolute筒，其用异己烷/乙酸乙酯1:0至9:1的连续梯度洗脱，获得作为无色油的标题化合物(543.3mg,73％)，其以非对映异构体的5:1混合物。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ0.01(s,9H),0.77-0.99(m,8H),1.49(s,3H),2.36(d of heptet,J＝6.9,3.8Hz,1H),3.42-3.60(m,3H),4.15-4.31(m,3H),4.49-4.57(m,1H),5.00(d,J＝17.6Hz,1H),5.10(d,J＝10.7,1H),6.19(dd,J＝17.8,10.7Hz,1H).LCMS(m/z)364.1[M+Na],Tr＝3.32min。
化合物29e(R)-3-((R)-2-羟甲基-甲基-丁-3-烯酰基)-4-异丙基-恶唑烷-2-酮
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添加四氟硼酸锂(1M,乙腈中的,42.9mL,42.9mmol)到乙腈(86mL)和水(1.72mL)的混合物中的29d(2.93g,8.58mmol)的搅拌溶液中。在氮气下，将混合物回流加热5h，并冷却到环境温度。添加另外的四氟硼酸锂(1M,乙腈中的,8.6mL,8.6mmol)，将混合物回流加热另外的75min，并冷却至室温。用水/二乙醚(2:3,100mL)稀释混合物，分离有机层，并用水洗涤。用二乙醚反提取合并的含水洗液，而且合并的有机提取物通过无水硫酸钠干燥，过滤并蒸发，获得作为黄色油的标题化合物(1.89g,91％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ0.89(d,J＝6.9Hz,3H),0.95(d,J＝6.9Hz,3H),1.35(s,3H),2.36-2.47(m,1H),2.56-2.70(br s,1H),3.47-3.54(m,1H),3.91(d,J＝11.6Hz,1H),4.22-4.31(m,2H),4.47-4.53(m,1H),4.97(d,J＝17.8Hz,1H),5.17(d,J＝10.7Hz,1H),6.09(dd,J＝17.8,10.7Hz,1H).LCMS(m/z)242.2[M+H],Tr＝1.82min。
化合物29f(R)-3-[(R)-2-(叔丁基-二甲基-硅烷氧甲基)-2-甲基-丁-3-烯酰基]-4-异丙基-恶唑烷-2-酮
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在氮气下，添加一份咪唑(821mg,12.1mmol)到N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中的29e(660mg,2.74mmol)和叔丁基二甲基氯硅烷(533mg,3.56mmol)的搅拌溶液中。于0℃搅拌反应15min，然后升温至环境温度，并搅拌5h。浓缩混合物，然后混合物在饱和的氯化铵溶液与乙醚之间分离。分离有机层，用水(3x)洗涤，通过无水硫酸钠干燥，过滤并蒸发。残留物在硅胶色谱上进行分离，用异己烷/乙酸乙酯1:0至19:1洗脱，获得作为无色油的标题化合物(316mg,32％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ0.05(s,3H),0.06(s,3H),0.86-0.94(m,6H),0.89(s,9H),1.45(s,3H),2.27-2.40(m,1H),3.71(d,J＝9.6Hz,1H),4.10-4.30(m,2H),4.43(d,J＝9.6Hz,1H),4.49-4.55(m,1H),4.99(d,J＝17.8Hz,1H),5.10(d,J＝9.6Hz,1H),6.17(dd,J＝17.8,10.9Hz,1H).LCMS(m/z)356.2[M+H],Tr＝4.02min。
化合物29g(R)-2-(叔丁基-二甲基-硅烷氧甲基)-2-甲基-丁-3-烯酸
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于0℃添加无水过氧化氢溶液(30％,494mg,449μL,4.36mmol)到四氢呋喃(4.4mL)和水(2.2mL)中的29f(310mg,.872mmol)的搅拌溶液中，接着添加氢氧化锂一水合物(73mg,1.74mmol)。在0℃下搅拌反应混合物5min，然后升温到环境温度，并搅拌16h。添加另外的四氢呋喃(1mL)，将混合物冷却到0℃，并添加氢氧化锂一水合物(37mg,0.87mmol)。在0℃下搅拌反应混合物40min，然后升温到环境温度，并搅拌7h。然后用焦亚硫酸钠对反应淬灭，并搅拌30min。用盐酸(2M)将混合物酸化到pH<3，并用二氯甲烷(3x)提取。合并的有机提取物通过无水硫酸镁干燥，过滤并蒸发。残留物在硅胶色谱上纯化，用异己烷/乙酸乙酯9:1洗脱，获得作为无色油的标题化合物(144mg,68％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ0.12(s,6H),0.93(s,9H),1.31(s,3H),3.65(d,J＝9.6Hz,1H),3.78(d,J＝9.6Hz,1H),5.24(d,J＝17.6Hz,1H),5.24(d,J＝10.9Hz,1H),5.96(dd,J＝17.4,10.9Hz,1H)。
化合物29h.(S)-1-{(S)-2-[(S)-3-甲基--2-((R)-2-甲基-2-叔丁基-二甲基-硅烷氧甲基-丁-3-烯酸基氨基)-丁酰氨基]-丙酰基}-六氢-哒嗪-3-羧酸(R)-1-(7-溴-喹啉-2-基)-乙胺
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添加二氯甲烷(4mL)中的29g(346mg,1.42mmol)的溶液，到二氯甲烷(10mL)中的29b(504mg,0.944mmol)、2-甲基-6-硝基苯甲酸酐(649mg,1.89mmol)、4-(二甲氨基)吡啶(46mg,0.378mmol)、三乙胺(238mg,328μL,2.36mmol)和粉末状![]()
分子筛(～1g)的搅拌溶液中。在氮气下，将反应搅拌91h，然后添加另外的2-甲基-6-硝基苯甲酸酐(325mg,0.90mmol)、4-(二甲氨基)吡啶(23mg,0.189mmol)和二氯甲烷(2mL)中的29g(173mg,0.71mmol)的溶液，然后将反应混合物搅拌另外的23h。反应混合物通过硅藻土过滤，冷却至0℃，并添加冰冻的水。分离有机层，依序用冰冻的饱和氯化铵溶液，冰冻的饱和碳酸钠溶液和饱和的盐水洗涤，通过无水硫酸钠干燥，过滤并蒸发，通过硅胶色谱进行纯化，用异己烷/乙酸乙酯1:1至0:1洗脱，获得作为米色油的标题化合物(244mg,34％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ0.05(s,3H),0.06(s,3H),0.88(s,9H),0.93(d,J＝6.9Hz,3H),0.94(d,J＝6.9Hz,3H),1.37(d,J＝6.5Hz,3H),1.42(s,3H),1.61(d,J＝6.7Hz,3H),1.54-1.71(m,2H),1.91-2.01(m,1H),2.23-2.35(m,2H),2.57-2.68(m,1H),3.39-3.50(m,1H),3.65(d,J＝9.5Hz,1H),3.73(d,J＝12.1Hz,1H),3.89(d,J＝9.6Hz,1H),4.51-4.60(m,1H),5.02(d,J＝3.6Hz,1H),5.21-5.43(m,4H),6.04(dd,J＝17.4,10.9Hz,1H),6.86(d,J＝8.0Hz,1H),7.42(d,J＝8.5Hz,1H),7.61-7.71(m,2H),8.02(d,J＝6.5Hz,1H),8.12(d,J＝8.5Hz,1H),8.36(s,1H).LCMS(m/z)760.3,762.3[M+H],Tr＝4.16min。
化合物29i
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添加无水1,4-二恶烷(18.4mL)中的29h(49mg,0.060mmol)的溶液到醋酸钯(II)固体(14mg,0.060mmol)和三(o-甲苯基)膦(20mg,0.060mmol)中，接着添加N,N-二环己基 甲胺(25mg,27μL,0.128mmol)和无水乙腈(0.2mL)。将混合物在微波反应器中于120℃加热25min。5批相等含量的进行反应，合并，用乙酸乙酯稀释，用饱和的氯化铵溶液(2x)、盐水洗涤，通过无水硫酸钠干燥，过滤并蒸发。残留物通过硅胶色谱进行纯化，用异己烷/乙酸乙酯1:1至1:3洗脱，获得作为黄色凝胶的标题化合物(81mg,37％)。LCMS(m/z)680.3[M+H],Tr＝3.75min。
化合物29
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将化合物29i(40mg,0.059mmol)溶解于乙腈(20mL)中，并添加氢氟酸(48％,水中,117mg,102μL,5.88mmol)。将反应混合物搅拌4h，添加另外的氢氟酸(48％,水中,117mg,102μL,5.88mmol)，并持续搅拌另外的3.5h。添加碳酸钠固体，并搅拌混合物5min，通过疏水性筛板过滤，并蒸发滤出液。残留物通过反相制备性HPLC进行纯化，使用乙腈/水1:4至7:3的梯度，获得作为白色固体的标题化合物(10.0mg,30％)。1H NMR(300MHz,CD3OD)δ1.01(d,J＝6.7Hz,3H),1.06(d,J＝6.7Hz,3H),1.48-1.78(m,2H),1.56(s,3H),1.60(d,J＝6.9Hz,3H),1.66(d,J＝7.4H,3H),1.91-2.00(m,1H),2.10-2.19(m,2H),2.63-2.75(m,1H),3.62(dd,J＝11.4,2.7Hz,1H),3.65(d,J＝10.9Hz,1H),3.95(d,J＝10.9Hz,1H),4.38-4.47(m,1H),5.08(q,J＝6.6Hz,1H),5.23(d,J＝9.2Hz,1H),5.80(q,J＝7.2Hz,1H),6.24(d,J＝16.5Hz,1H),6.57(d,J＝16.5Hz,1H),7.45(d,J＝8.5Hz,1H),7.66(dd,J＝8.5,1.3Hz,1H),7.83(s,1H),7.85(d,J＝8.5Hz,1H),8.25(d,J＝8.5Hz,1H).LCMS(m/z)566.3[M+H],Tr＝1.79min。
实施例30-化合物30
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添加10％钯碳(12.5mg,0.012mmol)到乙酸乙酯(6mL)中的化合物29(40mg,0.059 mmol)的搅拌溶液中。在氢气气氛下，使混合物反应1h，然后过滤掉催化剂。添加新的10％钯碳(12.5mg,0.012mmol)到滤出液中，并使搅拌的混合物在氢气气氛下反应1h。混合物通过硅藻土过滤，然后蒸发。将残留物溶解于乙酸乙酯(6mL)中，添加新的10％钯碳(12.5mg,0.012mmol)，并使搅拌的混合物在氢气气氛下反应2h。混合物通过硅藻土过滤并蒸发。残留物溶于乙腈(20mL)，并添加氟化氢(48％,水中,117mg,102μL,2.82mmol)。将反应混合物搅拌2h，添加另外的氟化氢(48％,水中,117mg,102μL,2.82mmol)，并搅拌另外的2h。添加碳酸氢钠固体，将混合物搅拌5min，然后通过疏水性筛板过滤。蒸发混合物，并溶于乙酸乙酯(6mL)中，添加10％钯碳(12.5mg,0.012mmol)。使搅拌的混合物在氢气气氛下反应7h，然后通过硅藻土过滤并蒸发。残留物通过两个连续的反相制备性HPLC进行纯化，使用乙腈/水1:4至3:7的梯度，然后用乙腈/水1:4至1:1的梯度，用0.1％甲酸修正，获得作为白色固体的标题化合物。1H NMR(300MHz,CD3OD)δ1.04(d,J＝6.7Hz,3H),1.09(d,J＝6.9Hz,3H),1.41(s,3H),1.48-1.75(m,2H),1.58(d,J＝6.7Hz,3H),1.60(d,J＝7.1H,3H),1.80-1.99(m,3H),2.12-2.25(m,1H),2.26-2.36(m,1H),2.61-2.73(m,1H),2.74-2.90(m,1H),2.96-3.11(m,1H),3.52(d,J＝10.9Hz,1H),3.60(dd,J＝11.2,2.3Hz,1H),3.80(d,J＝10.9Hz,1H),4.24-4.42(m,1H),4.81-4.94(m,1H),5.10(q,J＝6.7Hz,1H),5.94(d,J＝7.2Hz,1H),7.42(d,J＝8.5Hz,1H),7.43(dd,J＝8.3,1.6Hz,1H),7.80(d,J＝8.5Hz,1H),7.85(s,1H),8.24(d,J＝8.5Hz,1H).LCMS(m/z)568.2[M+H],Tr＝1.94min。
实施例31-化合物31
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化合物31a(S)-3-甲基-2-[2,2,2-三氟-亚乙基氨基]-丁酸甲酯
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水(50mL)中的(S)-2-氨基-3-甲基-丁酸甲酯盐酸盐(6.72g,40mmol)在饱和的碳酸氢钠溶液于二氯甲烷之间分离。分离有机层，用水和盐水洗涤，通过无水硫酸镁干燥，过滤并蒸发，获得(S)-2-氨基-3-甲基-丁酸甲酯(40mmol)。使用Dean-Stark装置，将甲苯 (125mL)中的(S)-2-氨基-3-甲基-丁酸甲酯(40mmol)、2,2,2-三氟-1-甲氧基-乙醇(5.2g,3.8mL,40mmol)和4-甲苯磺酸水合物(100mg)的溶液回流加热3h。将反应混合物冷却至室温，并蒸发溶剂。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷/乙酸乙酯10:1至5:1的梯度，获得作为无色油的标题化合物(4.79g,56％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ0.94(d,J＝7.1Hz,3H),0.97(d,J＝7.1Hz,3H),2.32-2.44(m,1H),3.73-3.77(m,4H),7.67(q,J＝3.3Hz,1H)。
化合物31b(S)-2-((S)-2,2-二甲基-1-三氟甲基-丁-3烯基氨基)-3-甲基-丁酸甲酯
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在氮气下，室温搅拌四氢呋喃(30mL)中的31a(4.2g,20mmol)和3,3-二甲基烯丙基溴(2.98g,2.3mL,20mmol)的溶液。添加锌颗粒(2.6g,40mmol)和氯三甲基硅烷(10滴)，室温搅拌反应混合物10min，然后回流加热2h。使反应混合物冷却至室温。添加饱和的氯化铵溶液，并用二乙醚提取混合物。分离有机层，用盐水洗涤，通过无水硫酸镁干燥，过滤并蒸发。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷/乙酸乙酯50:1至40:1的梯度，获得作为无色油的标题化合物(1.41g,25％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ0.91(d,J＝6.7Hz,3H),0.97(d,J＝6.7Hz,3H),1.16(s,6H),1.52-1.55(m,1H),1.81-1.92(m,1H),2.76-2.85(m,1H),3.20(dd,J＝9.8,7.1Hz,1H),3.72(s,3H),5.09(d,J＝17.4Hz,1H),5.11(d,J＝10.8Hz,1H),5.90(dd,J＝17.4,10.8Hz,1H).LCMS(m/z)282.1[M+H],Tr＝3.51min。
化合物31c(S)-2-((S)-2,2-二甲基-1-三氟甲基-丁-3-烯基氨基)-3-甲基-丁酸
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在氮气下，于0℃搅拌四氢呋喃(40mL)中的31b(1.12g,4.0mmol)的溶液。添加水(8mL)中的氢氧化锂一水合物(504mg,12.0mmol)的溶液，在0℃下搅拌反应混合物1h，然后室温下搅拌1h。添加甲醇(5mL)，并室温搅拌反应混合物22h。添加另外的水(2mL)中的氢氧化锂一水合物(336mg,8.0mmol)，并室温搅拌反应混合物24h。蒸发有机溶剂，用2M盐酸将溶液酸化到pH 2，并用乙酸乙酯提取混合物。合并有机提取物，用水和盐水洗涤。有机溶液通过疏水性筛板过滤，蒸发滤出液，获得作为无色油的标题化合物(770mg,72％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ1.00(d,J＝6.7Hz,3H),1.01(d,J＝ 6.9Hz,3H),1.20(s,6H),1.95-2.04(m,1H),2.87(q,J＝7.8Hz,1H),3.37(d,J＝5.8Hz,1H),5.12(d,J＝17.2Hz,1H),5.16(d,J＝10.7Hz,1H),5.90(dd,J＝17.2,10.7Hz,1H).LCMS(m/z)268.2[M+H],Tr＝2.88min。
化合物31d：(S)-2-{(E)-(S)-4-[2-((R)-1-乙酸基-乙基)-喹啉-7-基]-2,2-二甲基-1-三氟甲基-丁-3-烯基氨基}-3-甲基-丁酸
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在氮气下，室温搅拌乙腈(10mL)中的31c(267mg,1.0mmol)和25d(294mg,1.0mmol)的溶液。添加醋酸钯(II)(45mg,0.2mmol)、三(o-甲苯基)膦(61mg,0.2mmol)，接着添加N,N-二环己基甲胺(390mg,0.43mL,2.0mmol)，然后在微波反应器中，于120℃加热反应混合物30min。蒸发溶剂，残留物在乙酸乙酯与1M盐酸之间分离。合并有机提取物，并用盐水洗涤。有机溶液通过疏水性筛板过滤，蒸发滤出液，获得作为黄色蜡状固体的粗产物(640mg,1.0mmol)，其可以用于接下来的步骤中而不需要进一步纯化。LCMS(m/z)481.1[M+H],Tr＝3.26min。
化合物31e：(S)-1-[(S)-2-((S)-2-{(E)-(S)-4-[2-((R)-1-乙酸基-乙基)-喹啉-7-基]-2,2-二甲基-1-三氟甲基-丁-3-烯基氨基}-3-甲基-丁酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯-乙酯
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在氮气下，于0℃搅拌二氯甲烷(30mL)中的1d(433mg,1.0mmol)的溶液。添加三氟甲磺酰三甲基硅酯(444mg,0.35mL,2.0mmol)，并在0℃下搅拌反应混合物45min。添加N,N-二异丙基乙胺(516mg,0.7mL,4.0mmol)，蒸发溶剂，并干燥残留物，获得粗的(S)-1-((S)-2-氨基-丙酰基)-六氢-哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯-乙酯(1.0mmol)，其用于接下来 的步骤。在氮气下，于0℃搅拌乙腈(30mL)中的粗的(S)-1-((S)-2-氨基-丙酰基)-六氢-哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯-乙酯(1.0mmol)、N,N-二异丙基乙胺(516mg,0.7mL,4.0mmol)和粗的31d(1.0mmol)的混合物。添加2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲烷铵，在0℃下搅拌反应混合物30min，然后室温搅拌2h。蒸发溶剂，残留物溶于乙酸乙酯中，并用冷的1M盐水、水、饱和的碳酸氢钠溶液、水和盐水洗涤溶液。有机溶液通过疏水性筛板过滤，并蒸发滤出液。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷/乙酸乙酯3:1至0:1的梯度，获得作为白色泡沫的标题化合物(292mg,37％,2步)。 1H NMR(300MHz,CDCl3)δ0.95(d,J＝7.1Hz,3H),0.97(d,J＝7.1Hz,3H),1.30(d,J＝6.7Hz,3H),1.38(s,6H),1.62-1.68(m,3H),1.69(d,J＝6.7Hz,3H),1.90-1.96(m,2H),2.18(s,3H),2.18-2.21(m,1H),2.84-3.23(m,3H),3.68-3.72(m,1H),3.79(d,J＝11.1Hz,1H),4.37-4.42(m,1H),4.72(d,J＝11.8Hz,1H),4.96(d,J＝11.8Hz,1H),5.31-5.40(m,1H),6.06(q,J＝6.7Hz,1H),6.59(ABq,ΔδAB＝0.07,JAB＝16.2Hz,2H),7.05(d,J＝8.0Hz,1H),7.42(d,J＝8.5Hz,1H),7.66(d,J＝8.5Hz,1H),7.76(d,J＝8.5Hz,1H),8.01(s,1H),8.12(d,J＝8.5Hz,1H).LCMS(m/z)794.2/796.2[M+H],Tr＝3.48min。
化合物31
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在氮气下，于0℃搅拌四氢呋喃(10mL)中的31e(200mg,0.25mmol)的溶液。添加水(2mL)中的氢氧化锂一水合物(53mg,1.25mmol)的溶液，并在0℃下搅拌反应混合物5h。添加1M盐酸(1.25mL,1.25mmol)，并蒸发溶剂。残留物与四氢呋喃/甲苯(1:1,3x)共蒸发，用二乙醚(2x)研磨残留物，并干燥得到的固体，获得作为白色固体的(S)-1-[(S)-2-((S)-2-{(E)-(S)-4-[2-((R)-1-羟基-乙基)-喹啉-7-基]-2,2-二甲基-1-三氟甲基-丁-3-烯基氨基}-3-甲基-丁酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羧酸(0.25mmol)，其可以粗产物用于接下来的反应。LCMS(m/z)622.3[M+H],Tr＝1.97min。在氮气下，于0℃搅拌四氢呋喃(250mL)中的粗的(S)-1-[(S)-2-((S)-2-{(E)-(S)-4-[2-((R)-1-羟基-乙基)-喹啉-7-基]-2,2-二甲基-1-三氟甲基-丁-3-烯基氨基}-3-甲基-丁酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羧酸(0.25mmol)的悬浮液。添加N,N-二异丙基乙胺(161mg,0.22mL,1.25mmol)和4-二甲基 氨基吡啶(20mg)，并在0℃下搅拌反应混合物5min。添加2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲烷铵(133mg,0.35mmol)，在0℃下搅拌反应混合物30min，然后室温搅拌3h。添加另外的2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲烷铵(95mg,0.25mmol)，并在室温下搅拌反应混合物18h。蒸发溶剂，将残留物悬浮于乙酸乙酯中。添加冷的1M盐酸，分离有机层，用水、饱和的碳酸氢钠溶液、水和盐水洗涤。有机溶液通过疏水性筛板过滤，并蒸发滤出液。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷/乙酸乙酯4:1至2:1的梯度，获得作为白色固体的标题化合物(50mg,33％,2步)。1H NMR(300MHz,CD3OD)δ0.74(d,J＝6.7Hz,3H),1.00(d,J＝6.7Hz,3H),1.29(s,3H),1.35(s,3H),1.55-1.70(m,3H),1.71(d,J＝6.7Hz,3H),1.72(d,J＝6.5Hz,3H),1.87-1.97(m,2H),2.66-2.74(m,1H),2.90(d,J＝9.4Hz,1H),3.13(q,J＝7.8Hz,1H),3.70-3.79(m,1H),4.28-4.37(m,2H),5.84(q,J＝7.1Hz,1H),5.91(q,J＝6.7Hz,1H),6.33(d,J＝16.2Hz,1H),6.63(d,J＝16.2Hz,1H),7.42(d,J＝8.7Hz,1H),7.49(dd,J＝8.3,1.6Hz,1H),7.83(d,J＝8.5Hz,1H),8.20-8.23(m,2H).LCMS(m/z)604.3[M+H],Tr＝3.25min。
实施例32-化合物32
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化合物32a：(R)-3-甲基-2-[2,2,2-三氟-亚乙基氨基]-丁酸甲酯
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使用(R)-2-氨基-3-甲基-丁酸甲酯盐酸盐代替(S)-2-氨基-3-甲基-丁酸甲酯盐酸盐，以与化合物31a相同的方式制备化合物32a，产率为64％。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ0.94(d,J＝7.1Hz,3H),0.97(d,J＝7.1Hz,3H),2.32-2.44(m,1H),3.73-3.77(m,4H),7.67(q,J＝3.3Hz,1H)。
化合物32b：(R)-2-((R)-2,2-二甲基-1-三氟甲基-丁-3-烯基氨基)-3-甲基-丁酸甲酯
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使用32a代替31a，以与化合物31b相同的方式制备化合物32b，产率为30％。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ0.91(d,J＝6.7Hz,3H),0.97(d,J＝6.7Hz,3H),1.16(s,6H),1.52-1.55(m,1H),1.81-1.92(m,1H),2.76-2.85(m,1H),3.20(dd,J＝9.8,7.1Hz,1H),3.72(s,3H),5.09(d,J＝17.4Hz,1H),5.11(d,J＝10.8Hz,1H),5.90(dd,J＝17.4,10.8Hz,1H).LCMS(m/z)282.1[M+H],Tr＝3.51min。
化合物32c：(S)-2-((R)-2,2-二甲基-1-三氟甲基-丁-3-烯基氨基)-3-甲基-丁酸
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在氮气下，于0℃搅拌四氢呋喃(30mL)中的32b(1.30g,4.6mmol)的溶液。添加叔丁醇钾(1.55g,13.8mmol)，并在0℃下搅拌反应混合物，升温至室温，过夜。蒸发挥发物，添加2M盐酸，用乙酸乙酯提取混合物。合并有机提取物，用水和盐水洗涤。有机溶液通过疏水性筛板过滤，蒸发滤出液，获得含有(R)-2-((R)-2,2-二甲基-1-三氟甲基-丁-3-烯基氨基)-3-甲基-丁酸叔丁基酯、(S)-2-((R)-2,2-二甲基-1-三氟甲基-丁-3-烯基氨基)-3-甲基-丁酸叔丁基酯、(R)-2-((R)-2,2-二甲基-1-三氟甲基-丁-3-烯基氨基)-3-甲基-丁酸和(S)-2-((R)-2,2-二甲基-1-三氟甲基-丁-3-烯基氨基)-3-甲基-丁酸(4.6mmol)的混合物，其可以粗产物用于接下来的步骤。在氮气下，于5℃搅拌二氯甲烷(10mL)中的(R)-2-((R)-2,2-二甲基-1-三氟甲基-丁-3-烯基氨基)-3-甲基-丁酸叔丁基酯、(S)-2-((R)-2,2-二甲基-1-三氟甲基-丁-3-烯基氨基)-3-甲基-丁酸叔丁基酯、(R)-2-((R)-2,2-二甲基-1-三氟甲基-丁-3-烯基氨基)-3-甲基-丁酸和(S)-2-((R)-2,2-二甲基-1-三氟甲基-丁-3-烯基氨基)-3-甲基-丁酸(4.6mmol)的混合物的溶液。添加三氟乙酸(5mL)，并室温搅拌反应混合物20h。添加另外的三氟乙酸(5mL)，并室温搅拌反应混合物48h。蒸发溶剂，残留物与甲苯(3x)共蒸发。残留物在乙酸乙酯与水之间分离。合并有机提取物，用水和盐水洗涤。有机物通过疏水性筛板过滤，蒸发滤出液。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用异异己烷/乙酸乙酯10:1至5:1的梯度，获得作为无色油的(R)-2-((R)-2,2-二甲基-1-三氟甲基-丁-3-烯基氨基)-3-甲基-丁酸(152mg,12％)和作为无色油的标题化合物(321mg,26％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ0.99(d,J＝6.7Hz,3H),1.01(d,J＝6.7Hz,3H),1.23(s,6H),2.09-2.19(m,1H),2.85(q,J＝8.0Hz,1H),3.27(d,J＝4.0Hz,1H),5.16(d,J＝17.2Hz,1H),5.19(d,J＝10.8Hz,1H),5.91(dd,J＝17.3,10.8Hz,1H).LCMS(m/z)268.1[M+H], Tr＝2.95min。
化合物32d：(S)-2-{(E)-(R)-4-[2-((R)-1-乙酸基-乙基)-喹啉-7-基]-2,2-二甲基-1-三氟甲基-丁-3-烯基氨基}-3-甲基-丁酸
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使用32c代替31c，以与化合物31的相同的方式制备化合物32d，并以粗产物用于接下来的步骤。LCMS(m/z)481.1[M+H],Tr＝3.15min。
化合物32e：(S)-1-[(S)-2-((S)-2-{(E)-(R)-4-[2-((R)-1-乙酸基-乙基)-喹啉-7-基]-2,2-二甲基-1-三氟甲基-丁-3-烯基氨基}-3-甲基-丁酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯-乙酯
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用32d代替32c，以与化合物31e相同的方式制备化合物32e，产率为58％。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ0.90(d,J＝7.1Hz,3H),0.92(d,J＝7.1Hz,3H),1.31(d,J＝6.7Hz,3H),1.38(s,6H),1.69(d,J＝6.7Hz,3H),1.69-1.79(m,3H),1.89-2.02(m,2H),2.18(s,3H),2.18-2.21(m,1H),2.83-3.12(m,3H),3.66-3.73(m,1H),3.83(d,J＝11.4Hz,1H),4.42-4.48(m,1H),4.72(d,J＝11.8Hz,1H),4.95(d,J＝11.8Hz,1H),5.27-5.34(m,1H),6.06(q,J＝6.7Hz,1H),6.56(ABq,ΔδAB＝0.13,JAB＝16.3Hz,2H),7.16(d,J＝7.6Hz,1H),7.42(d,J＝8.5Hz,1H),7.62(d,J＝8.5Hz,1H),7.75(d,J＝8.5Hz,1H),8.02(s,1H),8.12(d,J＝8.5Hz,1H).LCMS(m/z)794.2/796.1[M+H],Tr＝3.65min。
化合物32
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用32e代替31e，以与化合物31相同的方式制备作为白色固体的化合物32，产率为35％。1H NMR(300MHz,CD3CN)δ0.94(d,J＝6.9Hz,3H),0.98(d,J＝6.7Hz,3H),1.19(d,J＝6.7Hz,3H),1.43(s,3H),1.47(s,3H),1.69(d,J＝6.7Hz,3H),1.70-1.90(m,4H),2.18-2.22(m,2H),3.39-3.60(m,3H),3.81-3.96(m,2H),4.73-4.81(m,1H),6.03-6.16(m,2H),6.78(ABq,ΔδAB＝0.10,JAB＝16.3Hz,2H),7.39(d,J＝8.5Hz,1H),7.52(d,J＝8.0Hz,1H),7.87(d,J＝8.3Hz,1H),7.98-8.05(br s,1H),8.25(d,J＝8.5Hz,1H),8.34(s,1H).LCMS(m/z)604.3[M+H],Tr＝2.78min。
实施例33-化合物33
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化合物33a(7-溴-喹啉-2-基甲基)-甲基-氨基甲酸叔丁基酯
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添加甲醇(2M,2.5mL,5.00mmol)中的甲胺到甲醇(5mL)中的7-溴-喹啉-2-甲醛(236mg,1.00mmol,如在EP 239746中制备的)的搅拌浆液中。搅拌反应混合物20h，然后蒸发。残留物悬浮于甲醇(5mL)中，并逐份添加硼氢化钠(57mg,1.50mmol)。将反应混合物搅拌1h，然后其在二氯甲烷与饱和的氯化铵溶液之间分离。分离有机层，用饱和的氯化铵溶液洗涤，用二氯甲烷萃取水层，合并的有机物通过无水硫酸钠干燥，过滤并蒸发。残留物溶于二氯甲烷(8mL)中，并添加二氯甲烷(2mL)中的二叔丁基碳酸氢钠(327mg,1.50mmol)的溶液到得到的搅拌溶液中。搅拌3h以后，用二氯甲烷稀释反应混 合物，用饱和的碳酸氢钠溶液(2x)洗涤，而且用二氯甲烷萃取水层。合并的有机提取物通过疏水性筛板，并蒸发。残留物通过硅胶色谱进行纯化，用异己烷/乙酸乙酯1:0至4:1的梯度洗脱，获得作为橙色油和旋转异构体的混合物的标题化合物(206mg,59％)。 1H NMR(300MHz,CDCl3)δ1.42-1.61(m,9H),2.92(s,1.5H),3.00(s,1.5H),4.71(s,1H),4.75(s,1H),7.34-7.46(m,1H),7.64(d,J＝8.5Hz,1H),7.70(d,J＝8.5Hz,1H),8.13(d,J＝5.8Hz,1H),8.26(s,1H).LCMS(m/z)351.1,353.1[M+H],Tr＝3.13min。
化合物33b(E)-4-{2-[(叔丁氧基羰基-甲基-氨基)-甲基]-喹啉-7-基}-2,2-二甲基-丁-3烯酸甲酯
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33a(206mg,0.586mmol)、22d(171mg,0.674mmol)、双[(二环己基)(4-二甲基氨基苯基)膦]氯化钯(II)(24mg,0.029mmol)和磷酸钾(373mg,1.76mmol)悬浮于环戊基甲酯(2mL)和水(1mL)中。在氮气下，于80℃搅拌并加热反应混合物。添加另外的双[(二环己基)(4-二甲基氨基苯基)膦]氯化钯(II)(12mg,0.015mmol)，并在90℃加热反应混合物90min。使反应冷却，用乙酸乙酯稀释，并用水(2x)洗涤。用乙酸乙酯萃取水层，用饱和的盐水洗涤合并的有机提取物，通过无水硫酸钠干燥，过滤并蒸发。残留物通过硅胶色谱进行纯化，用异己烷/乙酸乙酯1:0至7:3的梯度洗脱，获得作为黄色凝胶和旋转异构体混合物的标题化合物(178mg,76％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ1.43-1.57(m,15H),2.91(s,1.5H),2.99(s,1.5H),3.74(s,3H),4.71(s,1H),4.74(s,1H),6.64(app s,2H),7.27-7.39(m,1H),7.63(d,J＝8.5Hz,1H),7.76(d,J＝8.5Hz,1H),7.90(s,1H),8.10(d,J＝8.5Hz,1H).LCMS(m/z)399.1[M+H],Tr＝3.02min。
化合物33c(E)-4-{2-[({(S)-1-[(S)-2-((S)-2-羟基-甲基-丁酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羰基}-甲基-氨基)-甲基]-喹啉-7-基}-2,2-二甲基-丁-3-烯酸甲酯
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33b(134mg,0.336mmol)悬浮于1,4-二恶烷(4M,3.4mL,13.6mmol)中的盐酸中，搅拌反应混合物2.5h，然后蒸发。添加N,N-二甲基甲酰胺(7mL)中的29a(106mg,0.353mmol)的溶液到残留物中，接着添加N,N-二异丙基乙胺(87mg,117μL,0.672mmol)、1-羟基苯并三唑水合物(63mg,0.470mmol)和N-(3-二甲基氨基丙基)-N-乙基碳二亚胺盐酸盐(90mg,0.470mmol)，并搅拌反应混合物16h。用乙酸乙酯稀释反应混合物，连续用饱和的碳酸氢钠溶液、水、饱和的氯化铵溶液、水和盐水洗涤，通过无水硫酸钠干燥，过滤并蒸发。残留物通过硅胶色谱进行纯化，用乙酸乙酯/甲醇1:0至19:1的梯度洗脱，获得作为无色凝胶的标题化合物(128mg,65％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ0.80-1.06(m,6H),1.21-1.38(m,3H),1.47(s,6H),1.52-2.18(m,5H),2.63-2.78(m,1H),3.12(s,3H),3.73(s,3H),3.88-3.97(m,2H),4.08-4.26(m,2H),4.41-4.61(m,1H),4.75-4.99(m,2H),5.20-5.40(m,1H),6.63(app d,J＝2.0Hz,2H),7.22-7.34(m,1H),7.59-7.69(m,1H),7.72-7.78(m,1H),7.90-7.97(d,J＝8.0Hz,1H),8.08-8.20(m,1H).LCMS(m/z)582.3[M+H],Tr＝2.35min。
化合物33
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回流加热1,4-二恶烷(5.5mL)中的33c(64mg,0.110mmol)和1M NaOH(0.88mL,0.88mmol)的搅拌混合物，然后冷却。用2M盐酸把反应混合物中和到pH 7，并蒸发。残留物与叔丁醇/乙腈/甲苯共沸，然后与乙腈/甲苯共沸，获得粗的酸。
在氮气下，于50℃下通过注射泵3h添加N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中的粗酸的溶液到1,2-二氯乙烷(37mL)中的2-甲基-6-硝基苯甲酸(189mg,0.550mmol)、4-(二甲基氨基)吡啶(101mg,0.825mmol)和粉末状![]()
分子筛(～2g)的搅拌浆液中。含有原始酸的烧瓶 用另外的N,N-二甲基甲酰胺(1mL)洗涤，并将其10min添加到反应混合物中。在50℃下搅拌反应混合物另外的2.5h，然后冷却。化合物通过硅藻土过来，并连续用冰冻的饱和氯化铵溶液、冰冻的饱和碳酸氢钠溶液和饱和的盐水洗涤滤出液，通过硫酸钠干燥，过滤并蒸发。残留物通过制备性HPLC进行纯化，使用乙腈/水1:4至7:3的梯度，获得作为白色固体的标题化合物(3.9mg,6.5％)。LCMS(m/z)550.3[M+H],Tr＝2.35min。
实施例34和35化合物34和35
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化合物34a(S)-1-{(S)-2-[(S)-3-甲基-2-(2-甲基-丁-3-烯氧基)-丁酰氨基]-丙酰基}-六氢-哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯-乙酯
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使用(S)-3-甲基-2-(2-甲基-丁-3-烯氧基)-丁酸代替27d，以与化合物27e相同的方式制备化合物34a，产率为72％，而且以非对映异构体的1:1混合物分离。LCMS(m/z)502.1/504.1[M+H],Tr＝3.32min。
化合物34b(S)-1-{(S)-2-[(S)-3-甲基-2-((E)-2-甲基-4-{2-[(R)-1-(2(R)-甲基-丙烷-2-磺酰基氨基)-乙基]-喹啉-7-基}-丁-3-烯氧基)-丁酰氨基]-丙酰基}-六氢-哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯-乙酯
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将1,4-二恶烷(10mL)中的34a(642.0mg,1.282mmol)、18c(455.4mg,1.282mmol)、N,N-二环己基甲胺(0.83mL,3.846mmol)的溶液2h加热到100℃。冷却到室温以后，真空除去挥发物，而且残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用50g Isolute筒，其用异己烷/乙酸乙酯1:0至0:1的连续梯度，获得作为橙色凝胶和非对映异构体的1:1混合物的标题化合物(500.1mg,50％)。LCMS(m/z)774.3/776.2[M+H],Tr＝3.31min。
化合物34c(S)-1-{(S)-2-[(S)-3-甲基-2-((E)-2-甲基-4-{2-[(R)-1-((R)-2-甲基-丙烷-2-磺酰基氨基)-乙基]-喹啉-7-基}-丁-3-烯氧基)-丁酰氨基]-丙酰基}-六氢-哒嗪-3-羧酸甲酯
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用氢氧化锂一水合物(100.4mg,2.393mmol)处理四氢呋喃/水(30mL,5:1)中的34b(500.1mg,0.645mmol)的冷(0℃)溶液。于0℃搅拌45min以后，反应用盐酸溶液(2M,1.2mL)淬灭，并真空除去挥发物。残留的三氯乙醇与甲苯、甲苯/甲醇(2x)、甲苯一起共沸掉，然后高真空干燥。用二乙醚(2x)研磨白色固体，获得粗的(S)-1-{(S)-2-[(S)-3-甲基-2-((E)-2-甲基-4-{2-[(R)-1-((R)-2-甲基-丙烷-2-亚磺酰氨基)-乙基]-喹啉-7-基}-丁-3-烯氧基)-丁酰氨基]-丙酰基}-六氢-哒嗪-3-羧酸(LCMS(m/z)644.4[M+H],Tr＝2.44min)，其可以直接使用而不需要进一步纯化。干的四氢呋喃(210mL)中的粗(S)-1-{(S)-2-[(S)-3-甲基-2-((E)-2-甲基-4-{2-[(R)-1-((R)-2-甲基-丙烷-2-亚磺酰氨基)-乙基]-喹啉-7-基}-丁-3-烯氧基)-丁酰氨基]-丙酰基}-六氢-哒嗪-3-羧酸(0.645mmol)、N,N-二异丙基乙胺(0.56mL, 3.225mmol)和4-二甲基氨基吡啶(7.9mg,0.064mmol)的冷(0℃)溶液，用2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲烷铵(294.3mg,0.774mmol)处理。使反应缓慢升温到室温。16h以后，反应用无水甲醇(5mL)淬灭。真空除去挥发物，残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用50g Isolute筒，用二氯甲烷/甲醇1:0至9:1的连续梯度洗脱，获得作为橙色凝胶和非对映异构体的1:1混合物的标题化合物(482.0mg)。LCMS(m/z)658.3[M+H],Tr＝2.68min。
化合物34d：(S)-1-{(S)-2-[(S)-3-甲基-2-((E)-2-甲基-4-{2-[(R)-1-((R)-2-甲基-丙烷-2-亚磺酰氨基)-乙基]-喹啉-7-基}-丁-3-烯氧基)-丁酰氨基]-丙酰基}-六氢-哒嗪-3-羧酸
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在氮气下，于0℃搅拌四氢呋喃(15mL)中的粗34c(480mg,0.73mmol)的溶液。添加水(3mL)中的氢氧化锂一水合物(92mg,2.2mmol)的溶液，并在0℃下搅拌反应混合物1h。添加1M盐酸(2.2mL,2.2mmol)，并蒸发挥发物。残留物与四氢呋喃/甲苯(1:1,3x)共蒸发，然后用二乙醚(2x)研磨，并干燥，获得作为浅黄色凝胶和和非对映异构体的1:1混合物的标题化合物(0.73mmol)。LCMS(m/z)644.4[M+H],Tr＝2.44min。
化合物34和35
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在氮气下，室温搅拌1,4-二恶烷(10mL)中的粗34d(500mg,0.5mmol)的溶液。添加1,4-二恶烷(1mL)中的4M盐酸的溶液，并室温搅拌反应混合物30min。蒸发挥发物，残留物与四氢呋喃/甲苯(1:1,3x)共蒸发，然后用二乙醚(2x)研磨。干燥残留物获得作为深黄色凝胶(0.5mmol)和非对映异构体的1:1混合物的 (S)-1-[(S)-2-((S)-2-{(E)-4-[2-((R)-1-氨基-乙基)-喹啉-7-基]-2-甲基-丁-3-烯氧基}-3-甲基-丁酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羧酸盐酸盐，其可以粗产物用于接下来的反应。LCMS(m/z)540.2[M+H],Tr＝1.57min。在氮气下，于0℃下搅拌二氯甲烷(500mL)中的(S)-1-[(S)-2-((S)-2-{(E)-4-[2-((R)-1-氨基-乙基)-喹啉-7-基]-2-甲基-丁-3-烯氧基}-3-甲基-丁酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羧酸盐酸盐(0.5mmol)的悬浮液。添加N,N-二异丙基乙胺(387mg,0.52mL,3.0mmol)和4-二甲基氨基吡啶(20mg,0.18mmol)，并在0℃下搅拌反应混合物5min。添加2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲烷铵(380mg,1.0mmol)，并在0℃下搅拌反应混合物2h，然后室温下搅拌72h。蒸发挥发物。添加乙酸乙酯，用冷的1M盐酸、水、饱和的碳酸氢钠溶液，水和盐水洗涤混合物。有机溶液通过疏水性筛板过滤，并蒸发滤出液。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷/乙酸乙酯1:3到乙酸乙酯然后乙酸乙酯到乙酸乙酯/甲醇1:10的梯度。残留物通过反相制备性HPLC进行纯化，用乙腈(包含0.1％甲酸)/水(包含0.1％甲酸)35:65洗脱。合并含有纯的非对映异构体的级分并蒸发。残留物在饱和的碳酸氢钠溶液与乙酸乙酯之间分离。分离有机层，用水和盐水洗涤。有机溶液通过疏水性筛板过滤，干燥滤出液获得两种非对映异构体。
化合物34(首先洗脱)非对映异构体1：作为白色固体(3mg,1％)。1H NMR(300MHz,CD3OD)δ0.97(d,J＝6.7Hz,3H),1.06(d,J＝6.7Hz,3H),1.25(d,J＝6.9Hz,3H),1.59(d,J＝6.7Hz,3H),1.60-1.65(m,2H),1.66(d,J＝7.1Hz,3H),1.94-2.07(m,2H),2.28-2.33(m,1H),2.60-2.76(m,2H),3.49(d,J＝8.5Hz,1H),3.55-3.71(m,2H),3.92(dd,J＝9.5,4.4Hz,1H),4.41-4.46(m,1H),5.10(q,J＝6.5Hz,1H),5.82(q,J＝7.1Hz,1H),6.51(dd,J＝16.1,5.8Hz,1H),6.63(d,J＝16.1Hz,1H),7.43(d,J＝8.5Hz,1H),7.47(d,J＝8.5Hz,1H),7.82(d,J＝8.3Hz,1H),8.02(s,1H),8.24(d,J＝8.5Hz,1H).LCMS(m/z)522.2[M+H],Tr＝2.41min。
化合物35(第二洗脱)非对映异构体2：作为白色固体(3mg,1％)。1H NMR(300MHz,CD3OD)δ0.93(d,J＝6.7Hz,3H),1.06(d,J＝6.5Hz,3H),1.07(d,J＝6.9Hz,3H),1.51-1.55(m,1H),1.59(d,J＝6.5Hz,3H),1.68(d,J＝7.1Hz,3H),1.69-1.73(m,1H),1.94-1.99(m,2H),2.29-2.34(m,1H),2.65-2.75(m,2H),3.38-3.43(m,2H),3.57-3.62(m,1H),3.96(dd,J＝9.0,3.2Hz,1H),4.40-4.46(m,1H),5.10(q,J＝6.4Hz,1H),5.84-5.89(m,1H),6.38(dd,J＝16.1,6.3Hz,1H),6.65(d,J＝16.1Hz,1H),7.42(d,J＝8.5Hz,1H),7.46(dd,J＝8.5,1.6Hz,1H),7.82(d,J＝8.3Hz,1H),8.05(br s,1H),8.24(d,J＝8.5Hz,1H).LCMS(m/z)522.2[M+H],Tr＝2.38min。
实施例36-化合物36
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化合物36a(S)-1-[(S)-2-((S)-2-羟基-3-甲基-丁酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羧酸[(R)-1-(7-溴-喹啉-2-基)-乙基]-胺
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添加锌粉(1.3g,20.3mmol)到四氢呋喃(20mL)中的(S)-1-[(S)-2-((S)-2-羟基-3-甲基-丁酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯-乙酯(400mg,0.92mmol)的溶液中。用水(7mL)中的醋酸铵(1.1g,13.9mmol)的溶液处理该悬浮液。室温搅拌16h以后，过滤掉锌残留物，并真空除去挥发物。残留物在乙酸乙酯与饱和的硫酸氢钾溶液之间分离，用乙酸乙酯(2x)萃取水层，合并有机层，并真空除去挥发物。用甲苯(3x10mL)共沸掉残留的乙酸，获得粗的(S)-1-[(S)-2-((S)-2-羟基-3-甲基-丁酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羧酸(280mg,99％)，其中一半(140mg,0.46mmol)与无水乙腈(10mL)中的(R)-1-(7-溴-喹啉-2-基)-氯化乙胺(获自ASIBA Pharmatech,Inc.),(194mg,0.60mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.400mL,2.3mmol)合并。然后用2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲烷铵(227mg,0.60mmol)处理该溶液。室温搅拌3h以后，真空除去挥发物。残留物溶于乙酸乙酯中，并依序用饱和的氯化铵溶液和碳酸氢钠溶液洗涤。合并有机物，并真空除去挥发物。残留物通过硅胶色谱纯化，使用25g Biotage筒，用异己烷/丙酮1:0至1:1的连续梯度洗脱，获得作为白色固体的标题化合物(136mg,55％)。1H NMR(300MHz,CD3OD)δ0.83(d,J＝6.9Hz,3H),0.98(d,J＝6.9Hz,3H),1.38(d,J＝6.9Hz,3H),1.60(d,J＝6.9Hz,3H),1.65-1.75(m,3H),1.87-1.96(m,1H),2.02-2.12(m,2H),2.87-3.00(m,1H),3.55-3.62(m,1H),3.81(d,J＝3.4Hz,1H),4.24-4.34(m,1H),5.18-5.28(m,1H),5.31-5.40(m,1H),7.57(d,J＝8.7Hz,1H),7.69(dd,J＝8.7,1.8Hz,1H),7.85(d, J＝8.7Hz,1H),8.26(d,J＝1.6Hz,1H),8.33(d,J＝8.7Hz,1H).LCMS(m/z)534.1,536.1[M+H],Tr＝2.27min。
化合物36b(R)-2-甲氧基甲基-2-甲基-丁-3-烯酸
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使用化合物(R)-4-异丙基-3-((R)-2-甲氧基甲基-2-甲基-丁-3-烯氧基)-恶唑烷-2-酮(58a的对映体，如Tet.Lett.2000,41(33),6429-6433中所述的制备)代替29c，以与化合物29d相同的方式制备化合物36b，产率为99％。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ1.36(s,3H),3.41(s,3H),3.43(d,J＝8.9Hz,1H),3.61(d,J＝8.9Hz,1H),5.20-5.30(m,2H),6.00(dd,J＝17.6,10.7Hz,1H)。
化合物36
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用三乙胺(81μL,0.57mmol)处理无水乙腈(3mL)中的36a(123mg,0.23mmol)、36b(40mg,0.27mmol)、醋酸钯(II)(11mg,0.046mmol)、三(o-甲苯基)膦(21mg,0.068mmol)的溶液。在微波辐射下，于100℃搅拌20min后，将反应冷却至室温，并真空除去挥发物。残留物在二氯甲烷与饱和的硫酸氢钾溶液之间分离。合并有机物，并真空除去挥发物。将残留物与甲苯(3x10mL)共沸，获得粗的(E)-(R)-4-{2-[(R)-1-({(S)-1-[(S)-2-((S)-2-羟基-3-甲基-丁酰氨基)-1-氧-丙基]-六氢-哒嗪-3-羰基}-氨基)-乙基]-喹啉-7-基}-2-甲氧基甲基-2-甲基-丁-3-烯酸，将其溶于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，并通过注射泵，在氮气和50℃下，6h添加到1,2-二氯乙烷(35mL)中的2-甲基-6-硝基苯甲酸酐(161mg,0.47mmol)和4-二甲基氨基吡啶(86mg,0.70mmol)的搅拌浆液中。将反应冷却至室温，并依序用5％柠檬酸溶液和碳酸氢钠溶液洗涤。合并有机物，并真空除去挥发物。残留物通过制备性反相HPLC进行纯化，获得作为白色固体的标题化合物(8mg,15％)。1H NMR(300MHz,CD3OD)δ1.01(d,J＝6.7Hz,3H),1.06(d,J＝6.7Hz,3H),1.56(s,3H),1.60(d,J＝6.9Hz,3H),1.68(d,J＝6.9Hz,3H),1.69-1.75(m,1H),1.91-1.99(m,1H),2.10-2.30(m,2H),3.36(s,2H),3.41(s,3H),3.49(d,J＝8.9Hz, 1H),3.58-3.68(m,1H),3.80(d,J＝9.1Hz,1H),4.38-4.48(m,1H),5.03-5.13(m,1H),5.19(d,J＝9.1Hz,1H),5.74-5.85(m,1H),6.41(ABq,ΔδAB＝0.34,JAB＝16.4Hz,2H),7.45(d,J＝8.5Hz,1H),7.64(d,J＝8.5Hz,1H),7.79(s,1H),7.84(d,J＝8.5Hz,1H),8.25(d,J＝8.5Hz,1H).LCMS(m/z)580.2[M+H],Tr＝2.38min。
实施例37-化合物37
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化合物37a(7-溴-喹啉-2-基甲基)-(2,4-二甲氧基-苄基)-胺
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7-溴-喹啉-2-甲醛(354mg,1.50mmol，如EP 239746中所述的制备)溶于1,2-二氯乙烷(15mL)中，添加2,4-二甲氧基苄胺(251mg,225μL,1.50mmol)，搅拌反应混合物5min，接着添加三乙酸基硼氢化钠(477mg,2.25mmol)。搅拌3.5h以后，反应混合物用饱和的碳酸氢钠溶液淬灭，并添加乙酸乙酯。分离有机层，用碳酸氢钠洗涤，并用乙酸乙酯萃取水层。用饱和的盐水洗涤有机提取物，通过无水硫酸钠干燥，过滤并蒸发，获得作为黄色凝胶的粗的标题化合物(571mg)，其可以直接使用而不需要进一步纯化。LCMS(m/z)387.0,389.0[M+H],Tr＝1.57min。
化合物37b(7-溴-喹啉-2-基甲基)-氨基甲酸叔丁基酯
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37a(290mg,0.75mmol)溶于二氯甲烷(8mL)中，并添加三乙基硅烷(1.6mL)和三氟乙酸(8mL)。回流加热反应混合物，并搅拌20h，然后冷却。蒸发混合物，通过SCX筒纯化，用甲醇，然后甲醇氨洗脱，收集碱性级分并蒸发。残留物溶于二氯甲烷(8mL)中，添加二叔丁基碳酸盐，并搅拌反应混合物17h。用二氯甲烷稀释，用饱和的碳酸氢钠溶液(2x)洗涤，用二氯甲烷反萃取水层，而且合并的有机提取物通过疏水性筛板并蒸发。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷/乙酸乙酯1:0至4:1的梯度，获得作为浅黄色固体的标题化合物(150mg,59％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ1.52(s,9H),4.65(d,J＝4.9Hz,2H),5.90(br s,1H),7.39(d,J＝8.5Hz,2H),7.63(dd,J＝8.5,1.9Hz,2H),7.72(d,J＝8.5HZ,1H),8.11(d,J＝8.5Hz,1H),8.28(s,1H).LCMS(m/z)337.0,339.0[M+H],Tr＝2.79min。
化合物37c(E)-4-[2-(叔丁氧基羰基氨基-甲基)-喹啉-7-基]-2,2-二甲基-丁-3-烯酸甲酯
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37b(296mg,0.878mmol)、22d(256mg,1.01mmol)、双[(二环己基)(4-二甲基氨基苯基)膦]氯化钯(II)(36mg,0.044mmol)和磷酸钾(558mg,2.63mmol)悬浮于环戊基甲醚(3mL)和水(1.5mL)中。在氮气下于80℃搅拌并加热反应混合物3h。冷却反应，用乙酸乙酯稀释，用水(2x)和盐水洗涤，通过无水硫酸钠干燥，过滤并蒸发。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷/乙酸乙酯1:0至7:3的梯度，获得作为黄色固体的标题化合物(257mg,76％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ1.49(s,6H),1.52(s,9H),3.75(s,3H),4.63(d,J＝4.9Hz,2H),5.96(br s,1H),6.64(s,2H),7.32(d,J＝8.5Hz,1H),7.63(dd,J＝8.5,1.3Hz,1H),7.75(d,J＝8.5Hz,1H),8.00(s,1H),8.08(d,J＝8.5Hz,1H).LCMS(m/z)385.1[M+H],Tr＝2.64min。
化合物37d(E)-4-{2-[({(S)-1-[(S)-2-((S)-2-羟基-3-甲基-丁酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羰基}-氨基)-甲基]-喹啉-7-基}-2,2-二甲基-丁-3-烯酸甲酯
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37c(128mg,0.333mmol)悬浮于1,4-二恶烷(3.3mL)中的4M盐酸中，搅拌反应混合物2.5h，然后蒸发。添加N,N-二甲基甲酰胺(7mL)中的29a(105mg,0.350mmol)的溶液到残留物中，接着添加N,N-二异丙基乙胺(86mg,116μL,0.666mmol)。添加1-羟基苯并三唑水合物(63mg,0.466mmol)和N-(3二甲基氨基丙基)-N’-乙基碳二亚胺盐酸盐(89mg,0.466mmol)，并搅拌反应混合物16h。用乙酸乙酯稀释反应混合物，连续用饱和的碳酸氢钠溶液、水、饱和的氯化铵溶液、水、然后盐水洗涤，通过无水硫酸钠干燥，过滤并蒸发。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用乙酸乙酯/甲醇1:0至19:1的梯度，获得作为类白色固体的标题化合物(95mg,50％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ0.84(d,J＝6.9Hz,3H),1.00(d,J＝6.9Hz,3H),1.42(d,J＝6.9Hz,3H),1.48(s,6H),1.65-1.76(m,2H),1.88-1.98(m,1H),2.06-2.14(m,1H),2.19-2.29(m,1H),2.73-2.83(m,1H),3.45-3.56(m,1H),3.73(s,3H),3.95(d,J＝3.1Hz,1H),3.99(d,J＝11.6Hz,1H),4.42-4.52(m,1H),4.69-4.76(m,2H),5.41-5.51(m,1H),6.61-6.66(m,1H),6.74(d,J＝16.3Hz,1H),7.24-7.31(m,1H),7.62-7.69(m,1H),7.71-7.78(m,1H),7.95-8.10(m,2H).LCMS(m/z)568.3[M+H],Tr＝2.10min。
化合物37e(E)-4-{2-[({(S)-1-[(S)-2-((S)-2-羟基-3-甲基-丁酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羰基}-氨基)-甲基]-喹啉-7-基}-2,2-二甲基-丁-3-烯酸
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回流加热1,4-二恶烷(8mL)中的37d(95mg,0.167mmol)和NaOH(1M,1.34mL,1.34mmol)的搅拌混合物70min，然后冷却。用盐酸(2M)将反应混合物酸化到pH 4，并蒸发。残留物通过反相制备性HPLC进行纯化，使用乙腈/水1:19至7:3的梯度，获得作为白色固体的标题化合物(43mg,47％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ0.82(d,J＝6.8 Hz,3H),0.93-1.00(m,3H),1.38(d,J＝8.2Hz,3H),1.49(s,6H),1.58-1.76(m,2H),1.81-1.94(m,1H),1.99-2.12(m,1H),2.16-2.25(m,1H),2.67-2.79(m,1H),3.41-3.51(m,1H),3.92-4.00(m,1H),4.01-4.08(d,J＝11.6Hz,1H),4.40-4.54(m,1H),4.74(d,J＝4.5Hz,2H),5.41-5.52(m,1H),6.63-6.76(m,2H),7.26-7.32(m,1H),7.33-7.39(m,1H),7.55-7.64(m,1H),7.75(d,J＝8.5Hz,1H),8.04-8.14(m,2H).LCMS(m/z)554.2[M+H],Tr＝1.77min。
化合物37
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在氮气下，于50℃，通过注射泵，4h添加N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中的37e(43mg,0.078mmol)的溶液，到1,2-二氯乙烷(26mL)中的2-甲基-6-硝基苯甲酸(134mg,0.388mmol)、4-(二甲基氨基)吡啶(71mg,0.583mmol)和粉末状![]()
分子筛(～1g)的搅拌浆液中。用另外的N,N-二甲基甲酰胺(1mL)洗涤含有起始酸的烧瓶，并10min添加到反应混合物中。添加结束后，在50℃下搅拌反应混合物3h，然后冷却。混合物通过硅藻土过滤，连续用冰冻的饱和氯化铵溶液、冰冻的饱和碳酸氢钠溶液和饱和的盐水洗涤滤出液，通过无水硫酸钠干燥，过滤并蒸发。残留物通过反相制备性HPLC进行纯化，使用乙腈/水1:4至4:1的梯度，其用0.1％甲酸修饰，用乙醚研磨产物，获得作为白色固体的标题化合物(6.4mg,15％)。1H NMR(300MHz,CD3OD)δ1.02(d,J＝6.7Hz,3H),1.06(d,J＝6.9Hz,3H),1.46(s,3H),1.48(d,J＝7.3Hz,3H),1.54(s,3H),1.55-1.79(m,2H),1.94-2.04(m,1H),2.16-2.30(m,1H),2.30-2.40(m,1H),2.71-2.83(m,1H),3.53-3.60(m,1H),4.42-4.51(m,1H),4.67,4.75(ABq,JAB＝18.4Hz,2H),5.20(d,J＝8.9Hz,2H),5.89(q,J＝7.2,1H),6.44(d,J＝16.2Hz,1H),6.69(d,J＝16.2Hz,1H),7.40(d,J＝8.5Hz,1H),7.56(d,J＝8.5,1.3Hz,1H),7.85(d,J＝8.5Hz,1H),7.92(s,1H),8.23(d,J＝8.5Hz,1H).LCMS(m/z)536.2[M+H],Tr＝2.47min。
实施例38-化合物38
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化合物38a(R)-2-甲基-丙烷-2-亚磺酸[1-(7-溴-喹啉-2-基)-亚-(E)-乙基]-酰胺
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添加乙氧化钛(IV)到THF(28mL)中的18a(1.42g,5.68mmol)的溶液中，接着添加(R)-(+)-2-甲基-丙烷亚磺酰亚胺(825mg,6.82mmol)。在氮气下，于60℃搅拌反应混合物6h，并冷却。添加盐水，接着添加乙酸乙酯，悬浮液通过硅藻土过滤，并用乙酸乙酯洗涤过滤板。分离乙酸乙酯层，通过硫酸钠干燥，过滤并蒸发。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷/乙酸乙酯9:1至3:1的梯度，获得作为橙色固体的标题化合物(448mg,22％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ1.38(s,9H),2.99(s,3H),7.71(m,2H),8.16(d,J＝8.6Hz,1H),8.24(d,J＝8.6Hz,1H),8.37(s,1H).LCMS(m/z)352.9/354.9[M+H],Tr3.14min。
化合物38b(R)-2-甲基-丙烷-2-亚磺酸[(R)-1-(7-溴-喹啉-2-基)-乙基]-酰胺
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在氮气下，将(1S,2R)-(-)-顺式-1-氨基-2-茚醇(19mg,0.13mmol)、[Ru(p-伞花烃)Cl2]2(39mg,0.064mmol)和粉末状![]()
分子筛(0.7g)的混合物悬浮于无水2-丙醇(3mL)中，并搅拌。在90℃将悬浮液加热30min。使反应混合物冷却至40℃，并添加2-丙醇(9mL)中的38a(448mg,1.27mmol)的溶液，接着添加2-丙醇(3mL)中的叔丁醇钾(36mg,0.32mmol)的溶液。在40℃下，搅拌反应混合物2h，然后冷却。将混合物直接倒入硅胶筒中，并用乙酸乙酯洗脱。浓缩后，残留物进一步通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷/ 乙酸乙酯1:1至0:1的梯度，获得作为棕色凝胶的标题化合物(287mg,64％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ1.33(s,9H),1.60(d,J＝6.7Hz,3H),4.80(m,1H),5.42(br d,J＝4.2Hz,1H),7.42(d,J＝8.5Hz,1H),7.62(dd,J＝8.5,1.2Hz,1H),7.68(d,J＝8.7Hz,1H),8.12(d,J＝8.7Hz,1H),8.25(s,1H).LCMS(m/z)354.9/356.8[M+H],Tr 2.49min。
化合物38c 2-甲基-丙烷-2-亚磺酸(R)-[(R)-1-(7-溴-喹啉-2-基)-乙基]-甲基-酰胺
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用锂双(三甲基硅基)酰胺(0.28mL,0.28mmol,1M,己烷中的)处理N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中的38b(100mg,0.28mmol,与18c相同)的冷(-20℃)溶液。该温度下搅拌1h以后，添加碘甲烷(0.035mL,0.56mmol)，并将温度升至室温。室温搅拌1h以后，通过添加水(10mL)将反应淬灭。用二乙醚(3x20mL)提取混合物。合并有机物，并真空除去挥发物。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用10g Biotage筒，用异己烷/乙酸乙酯1:0至1:1的连续梯度，获得作为白色固体的标题化合物(149mg,62％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ1.25(s,9H),1.74(d,J＝6.9Hz,3H),2.53(s,3H),4.81(q,J＝6.9Hz,1H),7.55-7.70(m,3H),8.11(d,J＝8.5Hz,1H),8.27(s,1H).LCMS(m/z)369.0,371.0[M+H],Tr＝2.91min。
化合物38d(S)-1-[(S)-2-((S)-2-羟基-3甲基-丁酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羧酸[(R)-1-(7-溴-喹啉-2-基)-乙基]-甲基-酰胺
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用1,4-二恶烷(4M,5mL)中的盐酸处理甲醇(10mL)中的38c(450mg,1.22mmol)的溶液。室温搅拌2h以后，真空除去挥发物。与甲苯(3x10mL)共沸除掉残留的溶剂，获得粗的(R)-1-(7-溴-喹啉-2-基)-乙基]-甲基-氯化胺。
添加锌粉(1.30g,20.32mmol)到四氢呋喃(20mL)中的(S)-1-[(S)-2-((S)-2-羟基-3甲基-丁酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯-乙酯(400mg,0.92mmol)中。用水(7mL)中的醋酸铵(1.10g,13.9mmol)的溶液处理该悬浮液。室温搅拌16h以后，过滤掉锌残留物，并真空除去挥发物。残留物在乙酸乙酯与饱和的硫酸氢钾溶液之间分离，用乙 酸乙酯(2x)萃取水层，合并有机层，并真空除去挥发物。与甲苯(3x10mL)共沸除掉残留的醋酸，获得粗的(S)-1-[(S)-2-((S)-2-羟基-3甲基-丁酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羧酸，其与无水乙腈(15mL)中的粗(R)-1-(7-溴-喹啉-2-基)-乙基]-甲基-氯化胺和N,N-二异丙基乙胺(0.801mL,4.60mmol)合并。然后用2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲烷铵(464mg,1.22mmol)处理该溶液。室温搅拌2h以后，真空除去挥发物。残留物溶于乙酸乙酯中，随后用饱和的氯化氨溶液和碳酸氢钠溶液洗涤。合并有机物，并真空除去挥发物。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用25g Biotage筒，用异己烷/丙酮1:0至0:1的连续梯度，获得作为白色固体的标题化合物(318mg,58％)。1H NMR(300MHz,CD3OD)δ0.85(d,J＝6.9Hz,3H),1.00(d,J＝6.9Hz,3H),1.33(d,J＝6.9Hz,3H),1.69(d,J＝6.9Hz,3H),1.72-2.15(m,6H),2.98(s,3H),2.85-2.95(m,1H),3.80-3.90(m,1H),4.30-4.40(m,1H),5.25-5.35(m,1H),5.95-6.10(m,1H),7.45-7.78(m,1H),7.65-7.72(m,1H),7.80-7.90(m,1H),8.18-8-38(m,2H).LCMS(m/z)548.1,550.1[M+H],Tr＝2.60min。
化合物38
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使用38d代替36a(123mg,0.23mmol)，以与化合物36相同的方式制备化合物38，产率为4％。1H NMR(300MHz,CD3OD)δ1.00(d,J＝6.7Hz,3H),1.01(d,J＝6.7Hz,3H),1.52-1.59(m,6H),1.73(d,J＝7.4Hz,3H),1.76-1.88(m,2H),1.89-1.99(m,2H),2.09-2.21(m,1H),2.71-2.84(m,1H),3.29(s,3H),3.40(s,3H),3.44(d,J＝8.7Hz,1H),3.79(d,J＝8.9Hz,1H),4.13-4.22(m,1H),4.39-4.47(m,1H),5.05(d,J＝9.1Hz,1H),5.83-5.97(m,2H),6.38(ABq,ΔδAB＝0.24,JAB＝16.5Hz,2H),7.45(d,J＝8.5Hz,1H),7.64-7.73(m,2H),7.79(d,J＝8.5Hz,1H),8.19(d,J＝8.5Hz,1H).LCMS(m/z)594.2[M+H],Tr＝2.48min。
实施例39和40，化合物39和40
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化合物39a[(R)-1-(7-溴-喹啉-2-基)-乙基]-氨基甲酸叔丁基酯
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在氮气气氛下，于0℃，添加三乙胺(5.1mL,36.5mmol)、4-二甲基氨基吡啶(297mg,2.4mmol)和二叔丁基碳酸氢盐(4.0g,18.3mmol)，到无水二氯甲烷中的(R)-1-(7-溴-喹啉-2-基)-乙基]-乙胺盐酸盐(获自ASIBA Pharmatech Inc.)(3.5g,12.2mmol)。使反应升温至室温并搅拌2h。使反应冷却至0℃，并用盐酸(1M)淬灭。分离有机层，用盐水洗涤，通过疏水性筛板干燥，并真空浓缩。产物通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷/乙酸乙酯6:1，获得作为黄色固体的标题化合物(3g,70％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ1.49(s,9H),1.55(d,J＝6.9Hz,3H),4.93–5.10(m,1H),6.01–6.20(m,1H),7.38(d,J＝8.5Hz,1H),7.62(dd,J＝8.7,1.8Hz,1H),7.69(d,J＝8.7Hz,1H),8.11(d,J＝8.5Hz,1H),8.29(s,1H).LCMS(m/z)353.0[M+H],Tr＝3.02min。
化合物39b(E)-4-[2-((R)-1-叔丁氧基羰基氨基-乙基)-喹啉-7-基]-2,2-二甲基-丁-3-烯酸甲酯
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室温下，添加22d(840mg,3.43mmol)、磷酸钾(1.8g,8.57mmol)和双[(二环己基)(4-二甲基氨基苯基)膦]氯化钯(II)(116mg,0.14mmol)到环戊基甲酯(14mL)和水(7mL)中的39a(1g,2.86mmol)的溶液中。在80℃下加热反应2h。冷却反应，用乙酸乙酯稀释，并用盐水(2x)洗涤。有机层通过疏水性筛板干燥并真空浓缩。产物通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷/乙酸乙酯2:1，获得作为粘稠油的标题化合物(1.1g,96％)。1H NMR(300 MHz,CDCl3)δ1.43–1.52(m,15H),1.56(d,J＝6.7Hz,3H),3.75(s,3H),4.92–5.09(m,1H),6.16–6.32(m,1H),6.64(s,2H),7.30(d,J＝8.5Hz,1H),7.62(dd,J＝8.5,1.6Hz,1H),7.75(d,J＝8.5Hz,1H),8.02(s,1H),8.08(d,J＝8.5Hz,1H).LCMS(m/z)399.3[M+H],Tr＝2.75min。
化合物39c(E)-4-[2-((R)-1-叔丁氧基羰基氨基-乙基)-喹啉-7-基]-2,2-二甲基-丁-3烯酸
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添加氢氧化锂一水合物(580mg,13.8mmol)到四氢呋喃(24mL)和水(5mL)中的39b(1.1g,2.76mmol)的溶液中。20h将反应加热到40℃。使反应冷却至室温，并用含水盐酸(2M)将其酸化到pH 5。蒸发混合物到干燥，并添加二氯甲烷和乙腈。该悬浮液过滤通过疏水性筛板，并真空浓缩滤出液，获得作为黄色固体的标题化合物(800mg,76％)。 1H NMR(300MHz,CDCl3)δ1.46(s,9H),1.51(s,6H),1.56(d,J＝6.7Hz,3H),4.91–5.14(m,1H),6.35–6.52(m,1H),6.66,6.72(ABq,J＝16.2Hz,2H),7.31(d,J＝8.5Hz,1H),7.57(d,J＝8.0Hz,1H),7.70(d,J＝8.3Hz,1H),7.99–8.17(m,2H).LCMS(m/z)385.3[M+H],Tr＝2.21min。
化合物39d：(S)-1-(2-叔丁氧基羰基氨基-3-甲氧基-丙酰基)-六氢-哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯-乙酯
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使用N-α-Boc-O-甲基丝氨酸(1g,4.56mmol)代替L-N-Boc-丙氨酸，以与中间体1d相同的方式制备化合物39d(从如Angew.Chem.Intl.Ed.English,1999,38,2443中所述制备的双-N-Boc TCE酯起始)，获得作为清澈粘稠油(1.5g,71％)和两种非对映异构体的1:1混合物的标题化合物。LCMS(m/z)462.7[M+H],Tr＝2.71min。
化合物39e：(S)-1-[2-((S)-2-羟基-3-甲基-丁酰氨基)-3-甲氧基-丙酰基]-六氢-哒嗪-3- 羧酸2,2,2-三氯-乙酯
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在氮气气氛下，室温添加三氯乙酸(1.7mL)到无水三氯甲烷(7mL)中的39d(1.0g,2.16mmol)的溶液中。室温搅拌反应1.5h以后，并真空浓缩。所产生的残留物与甲苯(3x)共蒸发，产生粘稠淡棕色油。将其溶于无水乙腈(22mL)中，并冷却至0℃，接着添加(S)-2-羟基-3-甲基-丁酸(255mg,2.2mmol)、羟基苯并三唑一水合物(497mg,3.3mmol)、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)-碳二亚胺(623mg,3.3mmol)和N,N-二异丙基乙胺(1.9mL,10.8mmol)。将反应混合物升温至环境温度，并搅拌72h。用乙酸乙酯稀释反应，并用盐酸(1M)、饱和的碳酸氢钠和盐水洗涤。有机层通过疏水性筛板干燥，并真空浓缩。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷/丙酮3:2，获得作为清澈粘稠油和两种非对映异构体的1:1混合物的标题化合物(750mg,75％,2步)。LCMS(m/z)462.0[M+H],Tr＝2.24min。
化合物39f：(S)-1-[2-((S)-2-{(E)-4-[2-((R)-1-叔丁氧基羰基氨基-乙基)-喹啉-7-基]-2,2-二甲基-丁-烯酸氧基}-3-甲基-丁酰氨基)-3-甲氧基-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羧酸2，2，2-三氯乙酯
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在氮气气氛下，室温添加N,N-二异丙基乙胺(0.28mL,1.56mmol)、4-二甲基氨基吡啶(200mg,1.64mmol)和2-甲基-6-硝基苯甲酸酐(323mg,0.94mmol)到无水二氯甲烷(5mL)中的39b(300mg,0.78mmol)的溶液中，接着添加无水二氯甲烷(2.5mL)中的39e(433mg,0.94mmol)的溶液。搅拌反应2h，然后用乙酸乙酯稀释，并用水和盐水洗涤。有机层通过疏水性筛板干燥，并真空浓缩。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷 /乙酸乙酯1:2，获得作为清澈粘稠油和两种非对映异构体的1:1混合物的标题化合物(211mg,33％)。LCMS(m/z)828.3[M+H],Tr＝3.48min。
化合物39和40
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在0℃下，添加氢氧化钠(0.7mL,0.29mmol)的0.4M水溶液到无水四氢呋喃(3mL)中的39f(200mg,0.24mmol)的溶液中。在0℃下，搅拌反应1h，接着用盐酸(2M)将其酸化到pH 5，并真空浓缩。得到的残留物在二氯甲烷与水之间分离，分离有机层，通过疏水性筛板干燥，并真空浓缩。将残留物溶于无水1,4-二恶烷(1mL)中，并室温添加二恶烷(0.3mL,1.2mmol)中的盐酸的4M溶液。搅拌反应1.5h，真空浓缩，并用二乙醚研磨得到的固体，获得浅黄色固体。将该固体溶于无水N,N-二甲基甲酰胺(3mL)和N,N-二异丙基乙胺(0.21mL,1.2mmol)中，在氮气气氛下，于0℃将该溶液添加到无水二氯甲烷(80mL)中的2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲烷铵(137mg,0.4mmol)的预搅拌溶液中。添加后，室温搅拌反应2h，接着真空浓缩。所产生的残留物溶于乙酸乙酯中，用盐酸(0.5M)、饱和的碳酸氢钠和盐水洗涤。有机层通过疏水性筛板干燥，并真空浓缩。残留物通过反相制备性HPLC进行纯化，获得作为白色固体的两种非对映异构体。
化合物39(第二洗脱)非对映异构体1(7mg,5％)。1H NMR(300MHz,CD3OD)δ1.06(d,J＝6.7Hz,3H),1.09(d,J＝6.7Hz,3H),1.48(s,3H),1.57(d,J＝6.7Hz,3H),1.59(s,3H),1.51–1.65(m,1H),1.69–2.11(m,4H),2.19-2.37(m,1H),2.72–2.86(m,1H),2.91(s,3H),3.40–3.58(m,3H),3.80–3.90(m,1H),4.33–4.45(m,1H),5.11–5.22(m,3H),5.57–5.63(m,1H),6.54,6.71(ABq,J＝15.9Hz,2H),7.44(d,J＝8.5Hz,1H),7.54(d,J＝8.5Hz,1H),7.85(d,J＝8.5Hz,1H),7.96(s,1H),8.24(d,J＝8.5Hz,1H).LCMS(m/z)580.2[M+H],Tr＝2.58min。
化合物40(第一洗脱)非对映异构体2(3mg,2％)；1H NMR(300MHz,CD3OD)δ1.00(d,J＝6.7Hz,3H),1.05(d,J＝6.7Hz,3H),1.43(s,3H),1.54(s,3H),1.57(d,J＝6.7Hz,3H),1.53–1.75(m,1H),1.91–2.02(m,1H),2.12–2.24(m,1H),2.25–2.36(m,1H),2.64–2.76(m,1H),3.46(s,3H),3.59–3.70(m,1H),3.87(d,J＝6.0Hz,2H),4.41–4.50(m,1H),5.12(q,J＝6.7Hz,1H),5.18(d,J＝11.6Hz,1H),5.27(d,J＝8.5Hz,1H),6.09(t,J＝ 6.3Hz,1H),6.41,6.61(ABq,J＝16.3Hz,2H),7.43(d,J＝8.5Hz,1H),7.58(dd,J＝8.5,1.5Hz,1H),7.83(d,J＝8.5Hz,1H),8.03(s,1H),8.24(d,J＝8.5Hz,1H).LCMS(m/z)580.2[M+H],Tr＝2.62min。
实施例41：化合物41
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化合物41a[(R)-1-(7-溴-喹啉-2-基)-乙基]-甲基-氨基甲酸叔丁基酯
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在氮气气氛下，在-20℃下，10min逐滴添加双(二甲基硅基)氨基锂(1.0M in THF,1.7mL,1.71mmol)到无水N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中的39a(500mg,1.4mmmol)的溶液中。添加以后，在-20℃下，搅拌反应45min，然后添加碘甲烷(0.18mL,2.85mmol)。将反应升温至室温，搅拌1h，接着用饱和含水氯化铵淬灭，并用二乙醚(2x)提取。用5％含水氯化锂溶液洗涤合并的有机物，通过疏水性筛板干燥，并真空浓缩。产物通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷/乙酸乙酯6:1，获得作为粘稠油的标题化合物(500mg,96％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ1.50(s,9H),1.68(d,J＝6.9Hz,3H),2.72(br s,3H),5.34–5.92(m,1H),7.41(d,J＝8.5Hz,1H),7.62(dd,J＝8.5,1.8Hz,1H),7.68(d,J＝8.7Hz,1H),8.08(d,J＝8.7Hz,1H),8.29(d,J＝1.6Hz,1H).LCMS(m/z)367.0[M+H],Tr＝3.61min。
化合物41b(E)-4-{2-[(R)-1-(叔丁氧基羰基-甲基-氨基)-乙基]-喹啉-7-基}-2,2-二甲基-丁-3烯酸甲酯
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使用41a代替39a，以与化合物39b相同的方式制备化合物41b，产率为80％。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ1.50(s,9H),1.56(s,6H),1.69(d,J＝7.1Hz,3H),2.72(br s,3H),3.74(s,3H),5.28–6.01(m,1H),6.64(s,2H),7.33(d,J＝8.3Hz,1H),7.61(dd,J＝8.7,1.6Hz,1H),7.74(d,J＝8.3Hz,1H),8.01–8.08(m,2H).LCMS(m/z)413.2[M+H],Tr＝3.42min。
化合物41c(E)-4-{2-[(R)-1-(叔丁氧基羰基-甲基-氨基)-乙基]-喹啉-7-基}-2,2-二甲基-丁-3烯酸
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使用41b代替(E)-4-[2-((R)-1-叔丁氧基羰基氨基-乙基)-喹啉-7-基]-2,2-二甲基-丁-3-烯酸甲酯，以与化合物39c相同的方式制备化合物41c，产率为99％。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ1.49(s,9H),1.52(s,6H),1.69(d,J＝7.1Hz,3H),2.73(br s,3H),5.29–5.84(m,1H),6.66,6.70(ABq,J＝16.3Hz,2H),7.34(d,J＝8.9Hz,1H),7.59–7.66(m,1H),7.74(d,J＝8.5Hz,1H),8.00–8.09(m,2H).LCMS(m/z)399.1[M+H],Tr＝2.75min。
化合物41d(S)-1-[(S)-2-叔丁氧基羰基氨基-3-(叔丁基-二苯基-硅氧基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯-乙酯
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在氮气气氛下，于0℃添加三氟乙酸(33mL,432mmol)到无水二氯甲烷(33mL)中的(S)-四氢-哒嗪-1,2,3-三羧酸1,2-二叔丁基酯3-(2,2,2-三氯-乙基)酯(按照Angew.Chem. Int.Ed.English 1999,38,2443.中描述的程序制备)，(5.0g,10.8mmol)中。将溶液升温至室温，并搅拌16h。真空浓缩反应，并将残留物与甲苯(3x)共沸。将得到的棕色粘稠油溶于无水乙腈(5mL)中，并添加到无水乙腈(25mL)中的(S)-2-叔丁氧基羰基氨基-3-(叔丁基-二苯基-硅氧基)-丙酸(2.39g,5.4mmol,如在PCT Int.Appl.2006,WO 2006004880 A2中制备的)、N,N-二异丙基乙胺(3.76mL,21.6mmol)和O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲六氟磷酸酯(2.05g,5.4mmol)的溶液中，该溶液已经在0℃下预先搅拌20min。将反应升温至室温，搅拌16h，接着真空浓缩。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷/乙酸乙酯4:1，获得作为清澈粘稠油的标题化合物(1.8g,49％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ1.08(s,9H),1.46(s,9H),1.53–1.67(m,1H),1.80–2.01(m,2H),2.82–2.96(m,1H),3.19–3.32(m,1H),3.62(d,J＝10.9Hz,1H),3.80–3.97(m,3H),4.23–4.34(m,1H),4.61(d,J＝12.0Hz,1H),4.90(d,J＝12.0Hz,1H),5.18–5.27(m,1H),5.51–5.63(m,1H),7.35–7.49(m,6H),7.58–7.70(m,4H).LCMS(m/z)686.2[M+H],Tr＝4.32min。
化合物41e(S)-1-[(S)-3-(叔丁基-二苯基-硅氧基)-2-((S)-2-羟基-3-甲基-丁酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯-乙酯
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使用(S)-1-[(S)-2-叔丁氧基羰基氨基-3-(叔丁基-二苯基-硅氧基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯-乙酯代替S)-1-[(S)-2-叔丁氧基羰基氨基-3-甲氧基-丙酰基)-六氢-哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯-乙酯，以与化合物39e相同的方式制备化合物41e，产率为50％。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ0.90(d,J＝6.7Hz,3H),1.07–1.09(m,12H),1.42–1.71(m,2H),1.80–1.91(m,1H),1.93–2.02(m,1H),2.07–2.15(m,1H),2.72(d,J＝5.9Hz,1H),2.86–3.02(m,1H),3.17–3.28(m,1H),3.60(d,J＝10.5Hz,1H),3.90–3.99(m,3H),4.18–4.29(m,1H),4.62,4.91(ABq,J＝11.9Hz,2H),5.42–5.50(m,1H),7.35–7.51(m,7H)7.58–7.71(m,4H).LCMS(m/z)686.2[M+H],Tr＝3.93min。
化合物41f
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使用(E)-4-{2-[(R)-1-(叔丁氧基羰基-甲基-氨基)-乙基]-喹啉-7-基}-2,2-二甲基-丁-3-烯酸和(S)-1-[(S)-3-(叔丁基-二苯基-硅氧基)-2-((S)-2-羟基-3-甲基-丁酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯-乙酯代替(E)-4-[2-((R)-1-叔丁氧基羰基氨基-乙基)-喹啉-7-基]-2,2-二甲基-丁-3-烯酸和(S)-1-[(S)-2-((S)-2-羟基-3-甲基-丁酰氨基)-3-甲氧基-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯-乙酸乙酯，以与化合物39f相同的方式制备化合物41f，产率为32％。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ0.98-1.05(m,6H),1.07(s,9H),1.50(s,9H),1.52–1.60(m,2H),1.57(s,3H),1.61(s,3H),1.68(d,J＝6.9Hz,3H),1.72–1.93(m,2H),2.31–2.46(m,1H),2.63–3.01(m,5H),3.47(d,J＝11.2Hz,1H),3.87(dd,J＝10.3,2.7Hz,1H),4.04(dd,J＝10.3,3.4Hz,1H),4.11–4.23(m,1H),4.60,4.88(ABq,J＝12.0Hz,2H),5.21(d,J＝3.6Hz,1H),5.38–5.44(m,1H),6.72,6.76(ABq,J＝16.3Hz,2H),7.31–7.49(m,8H),7.56–7.62(m,2H),7.64–7.71(m,4H),7.99–8.06(m,2H).LCMS(m/z)1066.5[M+H],Tr＝4.94min。
化合物41g
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使用41f代替(S)-1-[(S)-2-((S)-2-{(E)-4-[2-((R)-1-叔丁氧基羰基氨基-乙基)-喹啉-7-基]-2,2-二甲基-丁-3-烯酸氧基}-3-甲基-丁酰氨基)-3-甲氧基-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氟乙酯，以与化合物39相同的方式制备化合物41g，产率为77％。1H NMR(300 MHz,CDCl3)δ0.95–1.04(m,6H),1.46(s,3H),1.53(s,3H),1.54–1.61(m,12H),1.65–2.01(m,4H),2.19–2.37(m,1H),2.61(s,3H),2.65–2.78(m,1H),3.57–3.76(m,2H),3.79(d,J＝12.0Hz,1H),4.03–4.10(m,1H),4.52–4.63(m,1H),4.89(d,J＝8.5Hz,1H),5.93(q,J＝7.1Hz,1H),5.98–6.07(m,1H),6.28,6.47(ABq,J＝16.4Hz,2H),6.56–6.63(m,1H),7.21–7.54(m,7H),7.61–7.75(m,7H),8.02(d,J＝8.3Hz,1H).LCMS(m/z)818.4[M+H],Tr＝4.22min。
化合物41
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在氮气气氛下，室温添加氟化四丁基铵(1M in THF,1.2mL,1.2mmol)到无水四氢呋喃(1mL)中的化合物41g(190mg,0.23mmol)的溶液中。搅拌反应45min，接着用乙酸乙酯稀释，用饱和氯化铵洗涤。有机层通过疏水性筛板干燥，并真空浓缩。产物通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷/丙酮1:1，获得作为白色固体的标题化合物(35mg,27％)。 1H NMR(300MHz,CD3OD)δ0.98(d,J＝6.7Hz,3H),1.01(d,J＝6.5Hz,3H),1.42(s,3H),1.52(s,3H),1.72(d,J＝7.4Hz,3H),1.72–1.97(m,4H),2.09–2.25(m,1H),2.71–2.86(m,1H),3.30(s,3H),3.96(d,J＝6.3Hz,2H),4.18–4.30(m,1H),4.42–4.53(m,2H),5.08(d,J＝8.7Hz,1H),5.88(q,J＝7.4Hz,1H),6.06(t,J＝6.0Hz,1H),6.40,6.49(ABq,J＝16.5Hz,2H),7.44(d,J＝8.7Hz,1H),7.64(dd,J＝8.5,1.3Hz,1H),7.78(d,J＝8.5Hz,1H),7.89(s,1H),8.19(d,J＝8.7Hz,1H).LCMS(m/z)580.2[M+H],Tr＝2.14min。
实施例42–化合物42
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化合物42a 4-氧-1-乙烯基-环己烷羧酸
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用水(10mL)中的氢氧化锂一水合物(734mg,30.6mmol)的溶液，处理1,4-二恶烷(20mL)中的商购4-氧-1-乙烯基-环己烷羧酸乙酯(由Small Molecules Inc.提供)，(1.20g,6.11mmol)的溶液。在50℃脚本2h，真空除去挥发物。残留物在水浴二乙醚之间分离。通过添加饱和的硫酸氢钾溶液将水层酸化到pH 1，并用乙酸乙酯(3x)提取。有机层通过无水硫酸镁干燥，过滤，并真空除去挥发物，获得作为透明凝胶的标题化合物(1.00g,97％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ1.92-2.08(m,2H),2.36-2.59(m,6H),5.34(d,J＝17.5Hz,1H),5.35(d,J＝10.5Hz,1H),5.97(dd,J＝17.5,10.5Hz,1H),11.30(br s,1H)。
化合物42b 1-((E)-2-{2-[(R)-1-(叔丁氧基羰基-甲基-氨基)-乙基]-喹啉-7-基}-乙烯基)-4-氧-环己烷羧酸
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用三乙胺(267μL,1.91mmol)处理无水1,4-二恶烷(2mL)中的[(R)-1-(7-溴-喹啉-2-基)-甲基-氨基甲酸-叔丁基酯(200mg,0.55mmol)、4-氧-1-乙烯基-环己烷羧酸(138mg,0.82mmol)、醋酸钯(II)(25mg,0.11mmol)、三(o-甲苯基)膦(50mg,0.16mmol)的溶液。在微波辐射下，于100℃搅拌30min以后，使反应冷却至室温，并真空除去挥发物。残留物在乙酸乙酯与5％柠檬酸溶液之间分离，用乙酸乙酯(2x)萃取水层，合并有机物，并真空除去挥发物。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用25g Biotage筒，其用异己烷/乙酸乙酯1:0至1:1的连续梯度洗脱，获得作为白色固体的标题化合物(235mg,94％)。 1H NMR(300MHz,CDCl3)δ1.48(s,9H),1.68(d,J＝7.1Hz,3H),2.07-2.22(m,2H),2.44-2.70(m,6H),2.75(br s,3H),5.61(br s,1H),6.68(ABq,ΔδAB＝0.31,JAB＝16.3Hz,2H),7.36(d,J＝8.5Hz,1H),7.60(d,J＝8.5Hz,1H),7.75(d,J＝8.5Hz,1H),8.05-8.12(m,2H).LCMS(m/z)453.1[M+H],Tr＝2.48min。
化合物42c 1-((E)-2-{2-[(R)-1-(叔丁氧基羰基-甲基-氨基)-乙基]-喹啉-7-基}-乙烯基)-4-顺式-羟基-环己烷羧酸
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用三-仲-丁基硼氢化钾(1.56mL,1.56mmol,1M,四氢呋喃中)处理无水四氢呋喃(15mL)中的1-((E)-2-{2-[(R)-1-(叔丁氧基羰基-甲基-氨基)-乙基]-喹啉-7-基}-乙烯基)-4-氧-环己烷羧酸(235mg,0.52mmol)的冷(-50℃)溶液。把温度升至-30℃。搅拌20min以后，通过添加饱和的氯化铵溶液(10mL)将反应淬灭。把温度升至室温，通过添加柠檬酸把pH调节至pH 2，然后用乙酸乙酯(3x)提取。合并有机层，并真空除去挥发物。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用25g Biotage筒，其用异己烷/乙酸乙酯1:0至0:1的连续梯度洗脱，获得作为白色固体的标题化合物(185mg,78％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ1.48(s,9H),1.52-1.62(m,4H),1.67(d,J＝6.9Hz,3H),1.95-2.05(m,2H),2.42-2.55(m,2H),2.73(br s,3H),3.73(br s,1H),5.57(br s,1H),6.58(ABq,ΔδAB＝0.29,JAB＝16.3Hz,2H),7.34(d,J＝8.5Hz,1H),7.58(d,J＝8.5Hz,1H),7.72(d,J＝8.5Hz,1H),8.01-8.10(m,2H).LCMS(m/z)455.1[M+H],Tr＝2.31min。
化合物42d 1-((E)-2-{2-[(R)-1-(叔丁氧基羰基-甲基-氨基)-乙基]-喹啉-7-基}-乙烯基)-4-顺式-(叔丁基-二甲基-硅氧基)-环己烷羧酸
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用叔丁基二甲基氯硅烷(153mg,1.02mmol)处理N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中的1-((E)-2-{2-[(R)-1-(叔丁氧基羰基-甲基-氨基)-乙基]-喹啉-7-基}-乙烯基)-4-顺式-羟基-环己烷羧酸(185mg,0.41mmol)和咪唑(138mg,2.03mmol)的溶液。搅拌16h以后，通过添加碳酸钠溶液将反应淬灭。搅拌3h以后，通过添加硫酸氢钾溶液将pH调节到pH 3，然后用乙酸乙酯(3x)提取。合并有机物，并真空除去挥发物。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用25g Biotage筒，其用异己烷/乙酸乙酯1:0至7:3的连续梯度洗脱，获得作为白色固体的标题化合物(142mg,61％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ0.08(s,6H),0.91(s,9H),1.49(s,9H),1.53-1.64(m,4H),1.67(d,J＝6.9Hz,3H),1.80-1.92(m,2H),2.38-2.51(m,2H),2.72(br s,3H),3.70(br s,1H),5.59(br s,1H),6.58(ABq,ΔδAB＝0.30,JAB＝16.3Hz,2H),7.33(d,J＝8.5Hz,1H),7.58(dd,J＝8.5,1.3Hz,1H),7.71(d,J＝8.5Hz,1H),8.00-8.06(m,2H).LCMS(m/z)569.2[M+H],Tr＝4.37min。
化合物42e(S)-1-((S)-2-{(S)-2-[1-((E)-2-{7-[(R)-1-(叔丁氧基羰基-甲基-氨基)-喹啉-2-基}-乙烯基)-4-顺式-(叔丁基-二甲基-硅氧基)-环己烷羰基氧基}-3-甲基-丁酰氨基}-丙酰基)-六氢-哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯-乙酯
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用2-甲基-6-硝基苯甲酸酐(146mg,0.42mmol)处理无水二氯甲烷(10mL)中1-((E)-2-{2-[(R)-1-(叔丁氧基羰基-甲基-氨基)-乙基]-喹啉-7-基}-乙烯基)-4-顺式-(叔丁基-二甲基-硅氧基)-环己烷羧酸(142mg,0.25mmol)、(S)-1-[(S)-2-((S)-2-羟基-3-甲基-丁酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯-乙酯(108mg,0.25mmol)、三乙胺(0.087mL,0.62mmol)和4-二甲基氨基吡啶(15mg,0.12mmol)的溶液。搅拌60h以后，通过添加碳酸氢钠溶液(10mL)将反应淬灭，用二氯甲烷(2x)萃取水层，合并有机物，并真空除去挥发物。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用25g Biotage筒，其用异己烷/乙酸乙酯1:0至1:1的连续梯度，获得作为白色固体的标题化合物(105mg,43％)。1H NMR(300MHz,CD3OD)δ0.10(s,6H),0.93(s,9H),1.01(d,J＝6.9Hz,3H),1.02(d,J＝6.9Hz,3H),1.27(d,J＝6.9Hz,3H),1.40-1.50(m,9H),1.68(d,J＝6.9Hz,3H),1.72-1.81(m,4H),1.82-1.94(m,4H),1.95-2.10(m,2H),2.25-2.32(m,2H),2.37-2.44(m,1H),2.46-2.57(m,2H),2.80(br s,3H),3.52-3.70(m,1H),3.74-3.85(m,2H),4.73-4.80(m,1H),5.01(d,J＝4.7Hz,1H),5.30-5.45(m,2H),6.70(ABq,ΔδAB＝0.28,JAB＝16.3Hz,2H),7.37(d,J＝8.5Hz,1H),7.73-7.85(m,2H),7.97(s,1H),8.22(d,J＝8.5Hz,1H)。
化合物42
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用水(5mL)中的碳酸钾(221mg,1.60mmol)的溶液处理四氢呋喃(10mL)中的(S)-1-((S)-2-{(S)-2-[1-((E)-2-{7-[(R)-1-(叔丁氧基羰基-甲基-氨基)-乙基]-喹啉-2-基}-乙烯 基)-4-顺式-(叔丁基-二甲基-硅氧基)-环己烷羰基氧基]-3-甲基-丁酰氨基}-丙酰基)-六氢-哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯-乙酯(105mg,0.11mmol)的溶液。室温搅拌3h以后，通过添加稀释盐酸把pH调节到pH3，然后用乙酸乙酯(3x)提取。合并有机物，并真空除去挥发物。残留物溶于二氯甲烷(10mL)中，并用1,4-二恶烷(4M,5mL)中的盐酸处理。室温搅拌1h以后，真空除去挥发物。与甲苯(3x15mL)共沸除掉残留的溶剂，获得粗的(S)-1-{(S)-2-[(S)-2-(4-顺式-羟基-1-{(E)-2-[7-((R)-1-甲基氨基-乙基)-喹啉-2-基]-乙烯基}-环己烷羰基氧基)-3-甲基-丁酰氨基]-丙酰基}-六氢-哒嗪-3-羧酸。将该残留物溶于N,N-二甲基甲酰胺(4mL)和N,N-二异丙基乙胺(0.093mL,0.53mmol)中，并在氮气和室温下，通过注射泵1h添加到二氯甲烷(50mL)中的2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲烷铵(61mg,0.16mmol)的搅拌溶液中。通过添加碳酸氢钠溶液(10mL)将反应淬灭，用二氯甲烷(2x)萃取水层。合并有机物，并真空除去挥发物。残留物通过制备性反相HPLC进行纯化，获得作为白色固体的标题化合物(13mg,19％)。1H NMR(300MHz,CD3OD)δ1.02(d,J＝6.7Hz,3H),1.06(d,J＝6.7Hz,3H),1.27-1.48(m,3H),1.54(d,J＝7.1Hz,3H),1.72(d,J＝7.6Hz,3H),1.78-2.05(m,5H),2.11-2.25(m,1H),2.28-2.40(m,1H),2.50-2.62(m,1H),2.71-2.84(m,1H),3.27(s,3H),3.52-3.80(m,3H),4.11-4.24(m,1H),4.38-4.51(m,1H),5.16(d,J＝9.1Hz,1H),5.86-5.98(m,2H),6.36(ABq,ΔδAB＝0.17,JAB＝16.5Hz,2H),7.44(d,J＝8.7Hz,1H),7.64-7.72(m,2H),7.78(d,J＝8.5Hz,1H),8.18(d,J＝8.7Hz,1H).LCMS(m/z)620.5[M+H],Tr＝2.09min。
实施例43和44-化合物43和44
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化合物43a[1,4]二恶烷-2-羧酸甲酯
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室温搅拌N,N-二甲基甲酰胺(15mL)中的[1,4]二恶烷-2-羧酸(Enamine Ltd.供应)，(2.90g,22.0mmol)的溶液。添加碳酸钾(6.07g,44.0mmol)，并在5℃下搅拌悬浮液。逐滴添加碘甲烷(6.25g,2.75mL,44.0mmol)，并室温搅拌反应混合物24h。添加水和盐水， 并用二乙醚提取混合物。用氯化钠饱和水层，并用乙酸乙酯(3x)提取混合物。合并有机提取物，通过无水硫酸钠干燥，过滤并蒸发。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用戊烷/二乙醚4:1至1:1的梯度，获得作为挥发的、浅黄色油的标题化合物(3.06g,95％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ3.68-3.78(m,4H),3.81(s,3H),3.97-4.05(m,2H),4.29(dd,J＝8.5,3.1Hz,1H).LCMS(m/z)169.2[M+Na],Tr＝0.69min。
化合物43b 2-(1-羟基-乙基)-[1，4]二恶烷-2-羧酸甲酯
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在氮气下，于-78℃搅拌无水四氢呋喃(10mL)中的N,N-二异丙胺(1.67g,2.3mL,16.5mmol)的溶液。逐滴添加n-丁基锂(6.6mL,16.5mmol,2.5M,己烷中的溶液)，并在-78℃下搅拌反应混合物30min。添加四氢呋喃(10mL)中的[1,4]二恶烷-2-羧酸甲酯的溶液，然后在-78℃下搅拌反应混合物30min。添加一份乙醛(1.45g,1.8mL,33mmol)。移去冷冻浴，并室温搅拌反应混合物30min。把混合物冷却至5℃，并添加冰冻的1M盐酸将反应混合物酸化到pH 2。添加氯化钠来饱和溶液，并用二乙醚(4x)提取混合物。合并有机提取物，并用盐水洗涤。有机溶液通过疏水性筛板过滤，并蒸发滤出液。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用戊烷/二乙醚1:1至0:1的梯度，获得作为油和非对映异构体的3:1混合物的标题化合物(1.49g,71％)。LCMS(m/z)213.2[M+H],Tr＝0.62min。
化合物43c 2-[1-(甲苯-4-磺酰氧基)-乙基]-[1,4]二恶烷-2-羧酸甲酯
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室温搅拌吡啶(8mL)中的2-(1-羟基-乙基)-[1,4]二恶烷-2-羧酸甲酯(1.49g,7.8mmol)的溶液。添加4-甲基磺酰氯(1.50g,7.8mmol)，并室温搅拌反应混合物18h。蒸发掉大部分吡啶，添加1M盐酸将混合物酸化到pH 2，并用乙酸乙酯提取混合物。合并有机提取物，并用盐水洗涤。有机溶液通过疏水性筛板过滤，并蒸发滤出液。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用戊烷/二乙醚3:1至0:1的梯度，获得作为黄色凝胶和非对映异构体的3:1混合物的标题化合物(1.70g,63％)。LCMS(m/z)367.0[M+Na],Tr＝2.44min。
化合物43d 2-乙烯基-[1,4]二恶烷-2-羧酸甲酯
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将1,8-二氮杂二环十一-7-烯(3mL)中的2-[1-(甲苯-4-磺酰氧基)-乙基]-[1,4]二恶烷-2-羧酸甲酯(1.68g,4.9mmol)在密封管中，于130℃加热2h。将反应混合物冷却至室温，并添加2M盐酸和二乙醚。用二乙醚提取混合物，合并有机提取物并用盐水洗涤。有机溶液通过疏水性筛板过滤，并蒸发滤出液。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用戊烷/二乙醚3:1至1:1的梯度，获得作为挥发的、无色油的标题化合物(308mg,36％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ3.47(d,J＝11.6Hz,1H),3.62-3.78(m,2H),3.81-3.86(m,1H),3.84(s,3H),3.99-4.07(m,1H),4.33(d,J＝11.6Hz,1H),5.34(dd,J＝10.7,1.1Hz,1H),5.52(dd,J＝17.4,1.1Hz,1H),5.79(dd,J＝17.4,10.7Hz,1H).LCMS(m/z)195.1[M+Na],Tr＝1.23min。
化合物43e 2-{(E)-2-[2-((R)-1-叔丁氧基羰基氨基-乙基)-喹啉-7-基]-乙烯基}-[1,4]二恶烷-2-羧酸甲酯
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将乙腈(8mL)中的[(R)-1-(7-溴-喹啉-基)-乙基]-氨基甲酸叔丁基酯(316mg,0.9mmol)、2-乙烯基-[1,4]二恶烷-2-羧酸甲酯(154mg,0.9mmol)、醋酸钯(II)(41mg,0.18mmol)、三(o-甲苯基)膦(54mg,0.18mmol)和N,N-二环己基甲胺(351mg,0.38mL,1.8mmol)的溶液，在微波反应器中，于120℃加热30min。过滤反应混合物，并蒸发溶剂。残留物溶于二氯甲烷中；添加盐水和冰冻的1M盐酸将混合物酸化到pH 2。分离有机层，并用盐水洗涤。有机溶液通过疏水性筛板过滤，并蒸发滤出液。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷/乙酸乙酯7:3至6:4的梯度，获得作为黄色凝胶和非对映异构体的1:1混合物的标题化合物(157mg,40％)。LCMS(m/z)443.1[M+H],Tr＝2.34min。
化合物43f 2-{(E)-2-[2-((R)-1-叔丁氧基羰基氨基-乙基)-喹啉-7-基]-乙烯基}-[1,4]二恶烷-2-羧酸
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在氮气下，于5℃搅拌四氢呋喃(6mL)中的2-{(E)-2-[2-((R)-1-叔丁氧基羰基氨基-乙基)-喹啉-7-基]-乙烯基}-[1,4]二恶烷-2-羧酸甲酯(157mg,0.35mmol)的溶液。添加水(1.5mL)中的氢氧化锂一水合物(30mg,0.71mmol)的溶液，并室温搅拌反应混合物18h。蒸发掉大部分有机溶剂。用2M盐酸把溶液酸化到pH 2，并用二氯甲烷提取混合物。合并有机提取物，并用盐水洗涤。有机溶液通过疏水性筛板过滤，并蒸发滤出液，获得作为浅黄色泡沫和非对映异构体的1:1混合物的标题化合物(149mg,100％)。LCMS(m/z)429.1[M+H],Tr＝1.87min。
化合物43g(S)-1-{(S)-2-[(S)-2-(2-{(E)-2-[2-((R)-1-叔丁氧基羰基氨基-乙基)-喹啉-7-基]-乙烯基}-[1,4]二恶烷-2-羰基氧基)-3-甲基-丁酰氨基]-丙酰基}-六氢-哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯-乙酯
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在氮气下，室温下把二氯甲烷(5mL)中的2-{(E)-2-[2-((R)-1-叔丁氧基羰基氨基-乙基)-喹啉-7-基]-乙烯基}-[1,4]二恶烷-2-羧酸(50mg,0.1mmol)、[(S)-1-[(S)-2-((S)-2-羟基-3-甲基-丁酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯-乙酯(44mg,0.1mmol)、N,N-二异丙基乙胺(32mg,0.043mL,0.25mmol)、4-二甲基氨基吡啶(6mg,0.05mmol)和2-甲基-6-硝基苯甲酸酐(58mg,0.17mmol)的溶液搅拌18h。用二氯甲烷稀释反映混合物，用冰冻的饱和氯化铵溶液、冰冻的饱和碳酸氢钠溶液和盐水洗涤溶液。有机溶液通过疏水性筛板过滤，并蒸发滤出液。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷/乙酸乙酯1:1至1:3的梯度，获得作为白色固体和非对映异构体的1:1混合物的标题化合物(47mg,55％)。LCMS(m/z)842.2/844.0[M+H],Tr＝3.25和3.31min。
化合物43和44
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在氮气下，于0℃下搅拌四氢呋喃(4mL)中的(S)-1-{(S)-2-[(S)-2-(2-{(E)-2-[2-((R)-1-叔丁氧基羰基氨基-乙基)-喹啉-7-基]-乙烯基}-[1,4]二恶烷-2-羧酸)-3-甲基-丁酰氨基]-丙酰基}-六氢-哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯-乙酯(69mg,0.081mmol)的溶液。添加冰冻的氢氧化钠(0.1M,0.82mL,0.082mmol)水溶液，然后在0℃搅拌反应混合物20min。添加冷的1M盐酸将混合物酸化到pH 2，并蒸发溶剂。残留物与四氢呋喃/甲苯(1:1,3x)共蒸发，并用二乙醚(2x)研磨残留物，干燥得到的固体获得作为黄色固体和非对映异构体的1:1混合物的(S)-1-{(S)-2-[(S)-2-(2-{(E)-2-[2-((R)-1-叔丁氧基羰基氨基-乙基)-喹啉-7-基]-乙烯基}-[1,4]二恶烷-2-羰基氧基)-3-甲基-丁酰氨基]-丙酰基}-六氢-哒嗪-3-羧酸(0.081mmol)，其可以粗产物用于接下来的反应中。LCMS(m/z)712.3[M+H],Tr＝2.46min。
室温下将1,4-二恶烷(2mL)中的4M盐酸中的粗(S)-1-{(S)-2-[(S)-2-(2-{(E)-2-[2-((R)-1-叔丁氧基羰基氨基-乙基)-喹啉-7-基]-乙烯基}-[1,4]二恶烷-2-羰基氧基)-3-甲基-丁酰氨基]-丙酰基}-六氢-哒嗪-3-羧酸(0.081mmol)的混合物搅拌1h。蒸发溶剂，残留物与二乙醚(2x)共蒸发，干燥得到的固体，获得作为类白色固体和非对映异构体的1:1混合物的(S)-1-{(S)-2-[(S)-2-(2-{(E)-2-[2-((R)-1-氨基-乙基)-喹啉-7-基]-乙烯基}-[1,4]二恶烷-2-羰基氧基)-3-甲基-丁酰氨基]-丙酰基}-六氢-哒嗪-3-羧酸盐酸盐(0.081mmol)，其可以粗产物用于接下来的反应中。LCMS(m/z)612.1[M+H],Tr＝1.38min。
在氮气下，于0℃搅拌二氯甲烷(75mL)中的粗(S)-1-{(S)-2-[(S)-2-(2-{(E)-2-[2-((R)-1-氨基-乙基)-喹啉-7-基]-乙烯基}-[1,4]二恶烷-2-羰基氧基)-3-甲基-丁酰氨基]-丙酰基}-六氢-哒嗪-3-羧酸盐酸盐(0.081mmol)。添加二氯甲烷(6mL)中的N,N-二异丙基乙胺(42mg,0.324mmol)的溶液，在0℃下搅拌得到的溶液。添加2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲烷铵(62mg,0.162mmol)，并在0℃下搅拌反应混合物30min，然后室温搅拌1h。蒸发大部分溶剂，用冰冻的1M盐酸和盐水洗涤溶液(～20mL)。有机溶液通过疏水性筛板过滤，并蒸发滤出液。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷/乙酸乙酯1:4至0:1的梯度，获得非对映异构体的 1:1混合物。混合物通过反相制备性HPLC进行纯化，用乙腈/水3:7洗脱，获得两种分离的非对映异构体。
化合物43(第一洗脱)对映异构体1：作为白色固体(4.0mg,8％)。1H NMR(300MHz,CD3OD)δ1.06(d,J＝6.7Hz,3H),1.12(d,J＝6.7Hz,3H),1.56-1.60(m,7H),1.68-1.73(m,1H),1.95-2.00(m,1H),2.20-2.35(m,2H),2.69-2.78(m,1H),3.55-3.85(m,5H),4.03-4.12(m,1H),4.43-4.48(m,1H),4.57(d,J＝11.6Hz,1H),5.12(q,J＝6.7Hz,1H),5.24(d,J＝10.4Hz,1H),5.39(d,J＝8.5Hz,1H),5.83(q,J＝7.2Hz,1H),6.29(d,J＝16.3Hz,1H),6.97(d,J＝16.3Hz,1H),7.49(d,J＝8.5Hz,1H),7.61(dd,J＝8.5,1.3Hz,1H),7.86-7.90(m,2H),8.28(d,J＝8.5Hz,1H).LCMS(m/z)594.2[M+H],Tr＝2.14min。
化合物44(第二洗脱)对映异构体2：作为白色固体(4.6mg,10％)。1H NMR(300MHz,CD3OD)δ1.08(d,J＝6.5Hz,3H),1.10(d,J＝6.5Hz,3H),1.49-1.54(m,1H),1.59(d,J＝6.7Hz,3H),1.64(d,J＝7.1Hz,3H),1.66-1.71(m,1H),1.90-1.96(m,1H),2.20-2.28(m,2H),2.63-2.71(m,1H),3.55-3.93(m,6H),4.40-4.47(m,2H),4.98(d,J＝12.0Hz,1H),5.09(q,J＝6.7Hz,1H),5.20(d,J＝8.9Hz,1H),5.79(q,J＝7.1Hz,1H),6.10(d,J＝16.3Hz,1H),6.88(d,J＝16.3Hz,1H),7.47(d,J＝8.5Hz,1H),7.62(dd,J＝8.5,1.6Hz,1H),7.85-7.88(m,2H),8.26(d,J＝8.5Hz,1H).LCMS(m/z)594.2[M+H],Tr＝2.17min。
实施例45和46-化合物45和46
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化合物45a吗啉-2,4-二羧酸4-叔丁基酯2-甲酯
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依序用碳酸钾(4.14g,30.0mmol)和碘甲烷(7.10g,3.1mL,50.0mmol)处理N,N-二甲基甲酰胺(30mL)中的吗啉-2,4-二羧酸4-叔丁基酯(由NeoMPS,Inc.供应),(5.78g,25.0mmol)的溶液。室温搅拌18h以后，用水稀释反应混合物，并用乙酸乙酯萃取水层。合并有机提取物，用水(4x)和盐水洗涤，然后通过疏水性筛板过滤，并真空除去挥发物。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷/乙酸乙酯3:1至1:3的梯度，获得作为白色 固体的标题化合物(4.83g,79％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ1.49(s,9H),3.06-3.15(m,2H),3.56-3.64(m,1H),3.75-3.79(m,1H),3.81(s,3H),4.00-4.14(m,3H).LCMS(m/z)268.1[M+Na],Tr＝1.94min。
化合物45b 2-(1-羟基-乙基)-吗啉-2,4-二羧酸4-叔丁基酯-2-甲酯
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用己烷(3.4mL,8.524mmol,2.5M)中的n-丁基锂的溶液处理无水四氢呋喃(10mL)中的N,N-二异丙胺(1.3mL,9.092mmol,通过氢化钙干燥)的冷(-78℃)溶液。在-78℃下搅拌30min以后，用无水四氢呋喃(10mL)中的吗啉-2,4-二羧酸4-叔丁基酯-2-甲酯(1.394g,5.683mmol)处理混合物。在-78℃下搅拌20min以后，用乙醛(0.96mL,17.05mmol)处理混合物。室温搅拌1h以后，在0℃下用盐酸(1M,40mL)将反应淬灭。用二氯甲烷(2x)萃取水层。合并有机物，通过相分离器过滤，并真空除去挥发物。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用50g Isolute筒，用异己烷/乙酸乙酯1:0至3:2的连续梯度洗脱，获得作为黄色油和非对映异构体的2:1混合物的标题化合物(1.476g,90％)。
化合物45c 2-(1-三氟甲烷磺酰氧基-乙基)-吗啉-2,4-二羧酸4-叔丁基酯2-甲酯
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用无水四氢呋喃(10mL)中的2-(1-羟基-乙基)-吗啉-2,4-二羧酸4-叔丁基酯2-甲酯(1.262g,4.361mmol)的溶液处理无水四氢呋喃(10mL)中的氢化钠(262mg,6.542mmol,60％,矿物油中)的冷(-78℃)悬浮液。在-78℃下搅拌浅黄色悬浮液15min，然后用无水四氢呋喃(10mL)中的N-(5-氯-2-吡啶基)-双(三氟甲烷磺酰亚胺)(3.425g,8.722mmol)的溶液处理。室温搅拌1.5h以后，反应用饱和的氯化铵溶液淬灭。用二氯甲烷(2x)萃取水层。合并有机物，通过相分离器过滤，并真空除去挥发物。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用50g Isolute筒，用异己烷/乙酸乙酯1:0至4:1的连续梯度洗脱，获得作为黄 色油和非对映异构体的2:1混合物的标题化合物(1.384g,75％)。
化合物45d 2-乙烯基-吗啉-2,4-二羧酸4-叔丁基酯2-甲酯
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用1,8-二氮杂二环[5.4.0]十一-7-烯(2.5mL,16.422mmol)处理二氯甲烷(40mL)中的2-(1-三氟甲烷磺酰氧基-乙基)-吗啉-2,4-二羧酸4-叔丁基酯2-甲酯(1.384g,3.284mmol)的温热(35℃)溶液。在35℃下搅拌2h以后，将反应冷却至0℃，并用盐酸(1M,50mL)淬灭。用二氯甲烷萃取水层。合并有机物，通过相分离器过滤，并真空除去挥发物，获得作为橙色油的标题化合物，其可直接用于接下来的步骤而不需要进一步纯化。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ1.49(s,9H),3.13-3.29(m,2H),3.60-3.73(m,1H),3.79(s,3H),3.83-3.92(m,2H),4.24(d,J＝13.1Hz,1H),5.37(d,J＝10.9Hz,1H),5.55(d,J＝17.4Hz,1H),5.84(dd,J＝17.4,10.9Hz,1H)。
化合物45e 2-乙烯基-吗啉-2,4-二羧酸4-叔丁基酯
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用氢氧化锂一水合物(413.3mg,9.852mmol)处理四氢呋喃/甲醇/水(50mL,2:2:1)中的粗的2-乙烯基-吗啉-2,4-二羧酸4-叔丁基酯2-甲酯(3.284mmol)的溶液。室温搅拌2h以后，真空除去挥发物，将残留物冷却至0℃，并用盐酸(1M)淬灭。用二氯甲烷(2x)萃取水层。合并的有机物通过相分离器过滤，并真空除去挥发物，获得作为无色针状物的标题化合物(761.4mg,90％,2步)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ1.48(s,9H),3.31-3.42(m,1H),3.45-3.61(m,2H),3.87-3.94(m,2H),4.02(d,J＝13.6Hz,1H),5.44(d,J＝10.7Hz,1H),5.60(d,J＝17.4Hz,1H),5.85(dd,J＝17.4,10.7Hz,1H).
化合物45f 2-((E)-2-{2-[(R)-1-({(S)-1-[(S)-2-((S)-2-羟基-3-甲基-丁酰氨基)-丙酰基]- 六氢-哒嗪-3-羰基}-氨基)-乙基]-喹啉-7-基}-乙烯基)-吗啉-2,4-二羧酸4-叔丁基酯
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通过鼓吹氮气对1,4-二恶烷(5mL)中的(S)-1-[(S)-2-((S)-2-羟基-3-甲基-丁酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羧酸[(R)-1-(7-溴-喹啉-2-基)-乙基]-酰胺(95mg,0.178mmol)、2-乙烯基-吗啉-2,4-二羧酸4-叔丁基酯(45.7mg,0.178mmol)、三(o-甲苯基)膦(11mg,0.036mmol)和三乙胺(0.08mL,0.534mmol)的溶液脱气5min，然后升温至50℃，并用三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(16.3mg,0.018mmol)处理。在100℃下搅拌50min，将反应冷却至室温，通过硅藻土板过滤，其用乙酸乙酯漂洗。真空除去挥发物，获得作为橙色泡沫的粗的标题化合物，其可直接使用而不需要进一步纯化。LCMS(m/z)711.3[M+H],Tr＝2.14min。
化合物45和46
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用2-甲基-6-硝基苯甲酸酐(122.6mg,0.356mmol)处理干燥的二氯甲烷(150mL)中的粗2-((E)-2-{2-[(R)-1-({(S)-1-[(S)-2-((S)-2-羟基-3-甲基-丁酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羰基}-氨基)-乙基]-喹啉-7-基}-乙烯基)-吗啉-2,4-二羧酸4-叔丁基酯(0.178mmol)、4-二甲基氨基吡啶(21.7mg,0.178mmol)和三乙胺(0.08mL,0.534mmol)的溶液。室温搅拌1.5h以后，添加另外的2-甲基-6-硝基苯甲酸酐(122.6mg,0.356mmol)。室温搅拌16h以后，添加另外的三乙胺(0.2mL)和4-二甲基氨基吡啶(217mg,1.780mmol)。室温搅拌4h以后，真空除去挥发物。残留物在二氯甲烷与饱和的碳酸氢钠溶液之间分离。用二氯甲烷萃取水层。合并有机物，通过相分离器过滤，并真空除去挥发物。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用25g Isolute筒，用异己烷/乙酸乙酯1:0至0:1的连续梯度洗脱，然后 通过反相制备性HPLC，用水/乙腈95:5至0:1的连续梯度洗脱，获得作为两种分离的异构体的标题化合物。
化合物45(第二洗脱)非对映异构体1(1.9mg,1.5％)，作为白色固体。1H NMR(300MHz,CD3OD)δ1.06(d,J＝6.7Hz,6H),1.47-1.54(m,10H),1.55-1.77(m,8H),1.90-2.00(m,1H),2.16-2.31(m,2H),2.62-2.74(m,1H),3.04-3.18(m,2H),3.54-3.62(m,1H),3.68-3.80(m,1H),3.83-3.93(m,1H),3.94-4.03(m,1H),4.38-4.47(m,1H),4.57-4.67(m,1H),5.03(d,J＝12.0Hz,1H),5.10(q,J＝6.7Hz,1H),5.19(d,J＝8.7Hz,1H),5.80(q,J＝7.3Hz,1H),6.18(d,J＝16.3Hz,1H),6.93(d,J＝16.3Hz,1H),7.47(d,J＝8.5Hz,1H),7.62(dd,J＝8.5,1.3Hz,1H),7.87(d,J＝8.5Hz,1H),7.90(s,1H),8.27(d,J＝8.5Hz,1H).LCMS(m/z)693.3[M+H],Tr＝2.68min。
化合物46(第一洗脱)非对映异构体2(0.8mg,1％)，作为白色固体。1H NMR(300MHz,CD3OD)δ0.97-1.06(m,6H),1.40(d,J＝6.7Hz,3H),1.43-1.58(m,13H),1.65-1.74(m,1H),1.97-2.07(m,1H),2.18-2.37(m,2H),3.42-3.49(m,1H),3.74-4.03(m,4H),5.16(q,J＝7.1Hz,1H),5.27-5.33(m,1H),5.35(q,J＝6.7Hz,1H),6.58(d,J＝16.3Hz,1H),6.78(d,J＝7.1Hz,1H),7.20(d,J＝16.0Hz,1H),7.44(d,J＝8.5Hz,1H),7.70(d,J＝8.5Hz,1H),7.74-7.81(m,1H),7.99(s,1H),8.06(d,J＝7.6Hz,1H),8.13(d,J＝8.5Hz,1H).LCMS(m/z)693.5[M+H],Tr＝3.39min。
实施例47-化合物47
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化合物47a(S)-1-{(S)-2-[(S)-2-((E)-4-{2-[(R)-1-(叔丁氧基羰基-甲基-氨基)-乙基]-喹啉-7-基}-2,2-二甲基-丁-3-烯酰氧基)-3-甲基-丁酰氨基]-丙酰基}-六氢-哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯-乙酯
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用水(5mL)中的氢氧化锂一水合物(112mg,4.7mmol)的溶液处理1,4-二恶烷(10mL)中的(E)-4-{2-[(R)-1-(叔丁氧基羰基-甲基-氨基)-乙基]-喹啉-7-基}-2,2-二甲基-丁-3-烯酸甲酯(193mg,0.47mmol)的溶液。在50℃下搅拌1h以后，真空除去挥发物。残留物在水浴二乙醚之间分离。通过添加盐酸将水层酸化到pH 2，然后用乙酸乙酯(3x)提取。合并有机物，并真空除去挥发物。残留物溶于二氯甲烷(10mL)中，并用4-二甲基氨基吡啶(57mg,0.47mmol)、2-甲基-6-硝基苯甲酸酐(275mg,0.80mmol)和三乙胺(0.197mL,1.41mmol)处理二氯甲烷(10mL)中的残留物。搅拌30min以后，添加(S)-1-[(S)-2-((S)-2-羟基-3-甲基-丁酰氨基)-丙酰基}-六氢-哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯-乙酯(203mg,0.47mmol)。搅拌16h以后，通过添加碳酸氢钠溶液(10mL)，将反应淬灭，用二氯甲烷(2x)萃取水层，合并有机层，并真空除去挥发物。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用25g Biotage筒，用异己烷/丙酮1:0至3:1的连续梯度洗脱，获得作为白色固体的标题化合物(260mg,68％)。1H NMR(300MHz,CD3OD)δ0.97-1.05(m,6H),1.29(d,J＝6.9Hz,3H),1.44(br s,9H),1.55(s,3H),1.57(s,3H),1.68(d,J＝6.9Hz,3H),1.71-2.00(m,4H),2.02-2.30(m,3H),2.80(br s,3H),3.56(br s,1H),3.78-3.83(m,1H),4.75-4.82(m,1H),4.93-5.01(m,2H),5.35-5.45(m,1H),6.65-6.82(m,2H),7.36(d,J＝8.5Hz,1H),7.72-7.83(m,2H),7.98(s,1H),8.21(d,J＝8.5Hz,1H).LCMS(m/z)814.1[M+H],Tr＝3.97min。
化合物47
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制备四氢呋喃(30mL)中的(S)-1-{(S)-2-[(S)-2-((E)-4-{2-[(R)-1-(叔丁氧基羰基-甲基-氨基)-乙基]-喹啉-7-基}-2,2-二甲基-丁-3-烯酰氧基)-3-甲基-丁酰氨基]-丙酰基}-六氢-哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯-乙酯(260mg,0.32mmol)的溶液，并添加水(15mL)中的碳酸钾(663mg,4.80mmol)的溶液。室温搅拌反应1.5h。用盐酸(1M)把反应混合物酸化到pH 3，然后用乙酸乙酯(3x20mL)提取。合并的提取物通过无水硫酸钠干燥，过滤并蒸发。残留物在真空下干燥1h，接着溶于二氯甲烷(30mL)中，并用1,4-二恶烷(4M,15mL)中的盐酸处理。室温搅拌1h，然后蒸发。用甲苯(2x20mL)共沸掉残留的水，产生白色固体(251mg)。该白色固体溶于无水N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中，并添加N,N-二异丙基乙胺(279μL,1.6mmol)。然后通过注射泵，将该溶液1h添加到无水二氯甲烷(150mL)中的2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲烷铵(183mg,0.48mmol)的搅拌溶 液中。用饱和的碳酸氢钠溶液(30mL)洗涤反应混合物，通过相分离器过滤并蒸发。残留物通过反相制备性HPLC进行纯化，产生作为白色固体的标题产物(54mg,30％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ0.97(s,3H),0.99(s,3H),1.44(s,3H),1.50-1.55(m,6H),1.56-2.03(m,4H),1.68(d,J＝7.4Hz,3H),2.20-2.34(m,1H),2.64-2.79(m,1H),3.14(s,3H),3.90-4.01(m,1H),4.50-4.61(m,1H),4.85(d,J＝8.5Hz,3H),5.88-6.15(m,1H),6.30(d,J＝16.5Hz,1H),6.38(d,J＝8.0Hz,1H),6.53(d,J＝16.3Hz,1H),6.61-6.87(m,1H),7.28(d,J＝8.5Hz,1H),7.52(d,J＝8.3Hz,1H),7.68(d,J＝8.5Hz,1H),7.87(s,1H),8.05(d,J＝8.5Hz,1H).LCMS(m/z)564.2[M+H],Tr＝2.54min。
实施例48-化合物48
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化合物48a乙基2,2-双(羟甲基)-3-氧丁酸酯。
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在0℃下，逐滴添加三乙胺(1.0M,四氢呋喃中,57mL,0.06mol)到甲醛(210mL,2.8mol,40％aq.)和二恶烷(550mL)中的乙酰乙酸乙酯(150g,1.2mol)的搅拌溶液中。将温度升至35-40℃，并搅拌混合物1h。用水(400mL)稀释反应混合物，用甲苯(3x600mL)提取副产物。在35℃下蒸发水相到起始体积的四分之一，并用乙酸乙酯(3x900mL)提取。提取物通过硫酸钠干燥并蒸发，获得作为黄色油的粗产物(75g)，其可以直接用于接下来的步骤而不需要进一步纯化。
化合物48b乙基-5-乙酰基-1,3-二恶烷-5-羧酸酯
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在50℃下，将浓缩盐酸(360mL)中的乙基2,2-双(羟甲基)-3-氧丁酸酯(75g,0.39mol)和40％甲醛(360mL)的溶液加热17h。将两相溶液冷却至室温，并用乙酸乙酯(2x200mL)提取。用水洗涤合并的有机层，通过硫酸镁干燥，并蒸发，获得残留物，其通过快速柱层析进行纯化，用石油醚/乙酸乙酯15:1至9:1的连续梯度洗脱，获得作为无色油 的标题化合物(33g,14％,2步)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ1.25(m,3H),2.31(s,3H),4.25-4.19(m,4H),4.35(d,J＝12.0Hz,2H),4.77(d,J＝6.0Hz,1H),4.82(d,J＝6.0Hz,1H)。
化合物48c乙基5-(1-羟乙基)-1,3-二恶烷-5-羧酸酯
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乙基5-乙酰基-1,3-二恶烷-5-羧酸酯(2)(22.3g,0.11mol)溶于乙醇(100mL)中，并在0℃下添加一份硼氢化钠(2.08g,0.055mol)。在相同的温度下搅拌混合物1h。用丙酮消除过滤的硼氢化钠，并用乙酸乙酯(3x600mL)提取溶液。真空浓缩合并的有机提取物，获得作为无色油的标题化合物(18.9g,84％)。
化合物48d乙基5-(1-甲苯磺酰氧基)-乙基)-1，3-二恶烷-5-羧酸酯
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在0℃下，添加4-甲苯磺酰氯(19.1g,99mmol)到干吡啶(40mL)中的乙基5-(1-羟乙基)-1,3-二恶烷-5-羧酸酯的混合物中。室温搅拌混合物16h。添加水(40mL)，并用乙酸乙酯(2x400mL)提取混合物。用盐水(3x)洗涤有机层。真空浓缩以后，通过硅胶色谱纯化粗产物，用石油醚/乙酸乙酯25:1至5:1洗脱，获得作为无色油的标题化合物(22.7g,76％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ1.26(m,3H),1.34(d,J＝6.8Hz,3H),2.45(s,3H),3.80(d,J＝11.6Hz,1H),3.87(d,J＝11.6Hz,1H),4.02(d,J＝11.6Hz,1H),4.08(d,J＝12.0Hz,1H),4.20-4.17(m,2H),5.03-4.98(m,1H),7.34(d,J＝8.0Hz,2H),7.79(d,J＝8.8Hz,2H)。
化合物48e 5-乙烯基-[1,3]二恶烷-5-羧酸乙酯
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把乙基5-(1-甲苯磺酰氧基)-乙基)-1,3-二恶烷-5-羧酸酯(20.7g,58mmol)和DBU(25mL)的混合物在140℃加热3h。冷却至室温后，将反应混合物倒入乙醚(300mL)中，用盐水(3x)洗涤有机层。乙醚层通过硫酸钠干燥，并真空浓缩。残留物通过硅胶色谱进行纯化，用石油醚/乙酸乙酯30:1至20:1洗脱，获得粗产物，对其进行减压蒸馏(45-49℃/0.3mbar)，获得作为无色油的标题化合物(3.6g,33％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ1.29(t,J＝11.0Hz,3H),3.70(d,J＝11.6Hz,2H),4.25(t,J＝7.2Hz,2H),4.44(t,J＝11.2Hz,2H), 4.71(d,J＝8.0Hz,1H),4.95(d,J＝6.0Hz,1H),5.24(m,1H),5.27(m,1H),5.65(m,1H)。该1H光谱数据域标题化合物合成的报道高度一致，其描述在Borremans,F.et al.Bull.Soc.Chim.Belg.1976,85,681-696中。
化合物48f 5-乙烯基-[1,3]二恶烷-5-羧酸
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用氢氧化锂一水合物(269mg,6.408mmol)处理四氢呋喃/甲醇/水(15mL,2:2:1)中的5-乙烯基-[1,3]二恶烷-5-羧酸乙酯(397.7mg,2.136mmol)的溶液。室温搅拌1.5h以后，真空除去挥发物，将残留物冷却至0℃，并用盐酸(1M)淬灭。用氯化钠饱和水层，用二氯甲烷(3x)提取。合并的有机物通过相分离器过滤，并真空除去挥发物，获得作为无色油的标题化合物(320.3mg,95％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ3.72(d,J＝11.6Hz,2H),4.50(d,J＝11.4Hz,2H),4.73(d,J＝6.2Hz,1H),5.02(d,J＝6.0Hz,1H),5.27-5.39(m,2H),5.69(dd,J＝17.6,10.9Hz,1H)。
化合物48g 5-((E)-2-{2-[(R)-1-({(S)-1-[(S)-2-((S)-2-羟基-3-甲基-丁酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羰基}-氨基)-乙基]-喹啉-7-基}-乙烯基)-[1,3]二恶烷-5-羧酸
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通过鼓吹氮气，对1,4-二恶烷(15mL)中的(S)-1-[(S)-2-((S)-2-羟基-3-甲基-丁酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羧酸[(R)-1-(7-溴-喹啉-2-基)-乙基]-酰胺(398.4mg,0.745mmol)、5-乙烯基-[1,3]二恶烷-5-羧酸(117.9mg,0.745mmol)、三(o-甲苯基)膦(45.3mg,0.149mmol)和三乙胺(0.32mL,2.235mmol)的溶液脱气5min，然后升温至50℃，并用三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(68.2mg,0.074mmol)处理。在100下搅拌40min后，将反应冷却至室温，通过硅藻土板过滤，其用乙酸乙酯漂洗。真空除去挥发物，获得作为橙色泡沫的粗的标题化合物，其可直接使用而不需要进一步纯化。LCMS(m/z)612.2[M+H],Tr＝1.70min。
化合物48
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通过注射泵，3h把干燥的二氯甲烷(18mL)中的5-((E)-2-{2-[(R)-1-({(S)-1-[(S)-2-((S)-2-羟基-3-甲基-丁酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羰基}-氨基)-乙基]-喹啉-7-基}-乙烯基)-[1,3]二恶烷-5-羧酸(0.745mmol)的溶液添加到含有![]()
分子筛的干燥的二氯甲烷(230mL)中的2-甲基-6-硝基苯甲酸酐(385.0mg,1.117mmol)、4-二甲基氨基吡啶(273.0mg,2.235mmol)的溶液中。添加结束以后，室温下搅拌反应40分钟，然后过滤，并真空部分除去挥发物。用pH 4柠檬酸缓冲液、一种饱和的碳酸氢钠溶液洗涤有机物，并在相分离器上过滤。真空除去挥发物，残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用25g Isolute筒，用异己烷/丙酮1:0至1:1的连续梯度洗脱，获得纯度为90％的标题化合物(133.8mg，产率为30％)。该材料第三次通过反相准备性HPLC进行纯化，用水/乙腈95:5至0:1的连续梯度洗脱，获得作为白色固体的标题化合物(8.1mg)。1H NMR(300MHz,CD3OD)δ1.06(d,J＝6.7Hz,3H),1.11(d,J＝6.7Hz,3H),1.47-1.80(m,8H),2.12-2.31(m,2H),2.65-2.77(m,1H),3.59-3.66(m,1H),3.85(d,J＝11.4Hz,1H),3.92(d,J＝11.4Hz,1H),4.39-4.53(m,2H),4.63-4.71(m,1H),4.98(d,J＝6.2Hz,1H),5.08(q,J＝6.9Hz,1H),5.35(d,J＝9.1Hz,1H),5.82(q,J＝7.3Hz,1H),6.15(d,J＝16.5Hz,1H),6.63(d,J＝16.5Hz,1H),7.47(d,J＝8.5Hz,1H),7.69(dd,J＝8.5,1.8Hz,1H),7.75(s,1H),7.86(d,J＝8.5Hz,1H),8.26(d,J＝8.5Hz,1H).LCMS(m/z)594.1[M+H],Tr＝2.60min。
实施例49-化合物49
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化合物49a.2-(1-羟基-乙基)-四氢-吡喃-2羧酸甲酯
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在氮气下，于-78℃搅拌四氢呋喃(4mL)中的N,N-二异丙胺(909mg，1.25mL，9mmol)的溶液。逐滴添加n-丁基锂(3.6mL,9mmol,2.5M,己烷中的溶液)，并于-78℃搅拌反应混合物30min。添加四氢呋喃(8mL)中的四氢-吡喃-2-羧酸甲酯(864mg,6mmol)，并于-78℃搅拌反应混合物20min。添加一份乙醛(792mg,1.0mL,18mmol)。移去冰水浴，并于室温下搅拌反应1h。将反应混合物冷却至0℃，添加冰冻的盐酸(2M)将反应混合物酸化到pH 2。添加氯化钠来饱和水相，并用乙酸乙酯提取混合物。合并有机提取物，用盐水洗涤。有机溶液通过疏水性筛板过滤，并蒸发滤出液。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用戊烷/二乙醚1:1至0:1的梯度，获得作为油和非对映异构体的2:1混合物的标题化合物(1.28g)。LCMS(m/z)189.3[M+H],Tr＝1.23min。
化合物49b 2-乙烯基-四氢-吡喃-2-羧酸甲酯
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在氮气下，于-78℃搅拌四氢呋喃(6mL)中的氢化钠(200mg，5mmol，油中的60％悬浮液)的悬浮液。添加四氢呋喃(3mL)中的2-(1-羟基-乙基)-四氢-吡喃-2-羧酸甲酯(620mg，3.3mmol)的溶液，并在-78℃下搅拌反应混合物15min。添加四氢呋喃(10mL)中的N-(5-氯-2-吡啶基)双(三氟甲烷亚磺酰胺)(2.60g，6.6mmol)的溶液，并在-78℃下搅拌反应混合物30min。将反应混合物升温至室温，然后在室温下搅拌1h。将反应混合物冷却至5℃，并谨慎添加饱和的氯化铵溶液。用二乙醚提取反应混合物。合并有机物，并用盐水洗涤。有机溶液通过疏水性筛板过滤，并蒸发滤出液。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用戊烷/二乙醚10:1至5:1的梯度，获得作为油和非对映异构体的2:1混合物的2-(1-三氟甲烷磺酰氧基-乙基)-四氢-吡喃-2-羧酸甲酯(2.12g，3.3mmol)，其可以立即用于下一步骤中。LCMS(m/z)321.0[M+H],Tr＝2.88min。
在氮气下，室温搅拌二氯甲烷(5mL)中的2-(1-三氟甲烷磺酰氧基-乙基)-四氢-吡喃-2-羧酸甲酯(2.12g，3.3mmol)的溶液。添加1,8-二氮杂二环十一-7-烯(2.0g，2mL，13.2mmol)，并在室温下搅拌反应混合物18h。将反应混合物冷却至0℃，并用冰冻的盐酸(2M)酸化至pH 2。用二氯甲烷提取混合物。合并有机提取物，并用盐水洗涤。有机溶液通过疏水性筛板过滤，并蒸发滤出液。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用戊烷/二乙醚10:1至5:1的梯度，获得作为油的标题化合物(466mg,75％,2 步)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ1.55-1.80(m,5H),2.21-2.29(m,1H),2.68-2.77(m,1H),3.79(s,3H),3.91-3.98(m,1H),5.26(dd,J＝10.7,0.9Hz,1H),5.41(dd,J＝17.4,1.1Hz,1H),5.87(dd,J＝17.4,10.7Hz,1H).LCMS(m/z)193.2[M+H],Tr＝2.01min。
化合物49c(S)-1-{(S)-2-[(S)-2-(2-{(E)-2-[2-((R)-1-叔丁氧基羰基氨基-乙基)-喹啉-7-基]-四氢-吡喃-2-羰基氧基)-3-甲基-丁酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯乙酯
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将乙腈(4mL)中的[(R)-1-(7-溴-喹啉-2-基)-乙基]-氨基甲酸叔丁基酯(320mg,0.9mmol)、2-乙烯基-四氢-吡喃-2-羧酸甲酯(330mg,0.9mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(82mg,0.09mmol)、三(o-甲苯基)膦(54mg,0.18mmol)和N,N-二环己基甲胺(526mg,0.58mL,2.7mmol)的溶液，在微波反应器中于120℃加热30min。过滤反应混合物，并蒸发溶剂。将残留物溶于乙酸乙酯中，并用冰冻的盐酸(1M)洗涤溶液。用乙酸乙酯萃取水层，合并有机提取物，并用盐水洗涤。有机溶液通过疏水性筛板过滤，并蒸发滤出液，获得作为油的2-{(E)-2-[2-((R)-1-叔丁氧基羰基氨基-乙基)-喹啉-7-基]-乙烯基}-四氢-吡喃-2-羧酸甲酯(130mg，21％)。LCMS(m/z)441.1[M+H],Tr＝2.75min。
在氮气下于5℃搅拌2-{(E)-2-[2-((R)-1-叔丁氧基羰基氨基-乙基)-喹啉-7-基]-乙烯基}-四氢-吡喃-2-羧酸甲酯(130mg，0.3mmol)的溶液。添加水(1.5mL)中的氢氧化锂一水化物(25mg，0.6mmol)的溶液，并在室温下搅拌反应混合物18h。蒸发大部分有机溶剂。用冰冷的盐酸(2M)将溶液酸化到pH 2，并用二氯甲烷提取混合物。合并有机提取物，并用盐水洗涤。有机溶液通过疏水性筛板过滤，并蒸发滤出液，获得作为黄色凝胶的2-{(E)-2-[2-((R)-1-叔丁氧基羰基氨基-乙基)-喹啉-7-基]-乙烯基}-四氢-吡喃-2-羧酸甲酯(135mg，0.3mmol)，其可以粗产物用于接下来的步骤。LCMS(m/z)427.1[M+H],Tr＝2.17min。
在氮气下，于0℃搅拌二氯甲烷(5mL)中的2-{(E)-2-[2-((R)-1-叔丁氧基羰基氨基-乙基)-喹啉-7-基]-乙烯基}-四氢-吡喃-2-羧酸甲酯(135mg，0.3mmol)、N,N-二异丙基乙胺(96mg，0.133mL，0.75mmol)、4-二甲氨基吡啶(80mg，0.66mmol) 和2-甲基-6-硝基苯甲酸酐(193mg，0.56mmol)的溶液。添加二氯甲烷(2mL)中的(S)-1-[(S)-2-((S)-2-羟基-3-甲基-丁酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯-乙酯(142mg，0.33mmol)的溶液，并在室温下搅拌反应混合物6h。用二氯甲烷稀释反应混合物，并用冰冷的饱和碳酸氢钠溶液、水、冰冷的盐酸(1M)、水和盐水洗涤溶液。有机溶液通过疏水性筛板过滤，并蒸发滤出液。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷/乙酸乙酯3:1至1:3的梯度，获得作为白色固体和两种非对映异构体的1:1混合物的标题化合物(44mg，17％)。LCMS(m/z)840.2,842.0[M+H],Tr＝3.75min。
化合物49
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在氮气下，于0℃搅拌四氢呋喃(2mL)中(S)-1-{(S)-2-[(S)-2-(2-{(E)-2-[2-((R)-1-叔丁氧基羰基氨基-乙基)-喹啉-7-基]-乙烯基}-四氢-吡喃-2-羰基氧基)-3-甲基-丁酰氨基]-丙酰基}-六氢-哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯乙酯(42mg，0.05mmol)的溶液。添加冰冷的氢氧化钠(0.1M，0.5mL，0.05mmol)的水溶液，并在0℃下搅拌反应混合物30min。添加另外的氢氧化钠(0.1M，1.0mL，0.1mmol)的水溶液，并在0℃下搅拌反应混合物1h。添加另外的氢氧化钠(0.1M，1.0mL，0.1mmol)的水溶液，并在0℃下搅拌反应混合物90min。添加冷盐酸(1M)将混合物酸化到pH 2，并蒸发溶剂。残留物与四氢呋喃/甲苯(1:1,3x)共同蒸发，用二乙醚(2x)研磨残留物，并将得到的固体干燥，获得作为黄色固体和非对映异构体的1:1的(S)-1-{(S)-2-[(S)-2-(2-{(E)-2-[2-((R)-1-叔丁氧基羰基氨基-乙基)-喹啉-7-基]-乙烯基}-四氢-吡喃-2-羰基氧基)-3-甲基-丁酰氨基]-丙酰基}-六氢-哒嗪-3-羧酸(0.05mmol)，其可以粗产物用于接下来的步骤。LCMS(m/z)710.3[M+H],Tr＝2.80min。
将盐酸(4M,1,4-二恶烷中,2mL)中的粗的(S)-1-{(S)-2-[(S)-2-(2-{(E)-2-[2-((R)-1-叔丁氧基羰基氨基-乙基)-喹啉-7-基]-乙烯基}-四氢-吡喃-2-羰基氧基)-3-甲基-丁酰氨基]-丙酰基}-六氢-哒嗪-3-羧酸(0.05mmol)的混合物在室温下搅拌1h。蒸发溶剂，将残留 物与二乙醚(2x)共同蒸发，并干燥得到固体，获得作为类白色固体和非对映异构体的1:1混合物的(S)-1-{(S)-2-[(S)-2-(2-{(E)-2-[2-((R)-1-氨基-乙基)-喹啉-7-基]-乙烯基}-四氢-吡喃-2-羰基氧基)-3-甲基-丁酰氨基]-丙酰基}-六氢-哒嗪-3-羧酸盐酸盐(0.05mmol)，其可以粗产物用于接下来的步骤中。LCMS(m/z)610.1[M+H],Tr＝1.60min。
在氮气下，于0℃搅拌二氯甲烷(45mL)中的粗的(S)-1-{(S)-2-[(S)-2-(2-{(E)-2-[2-((R)-1-氨基-乙基)--喹啉-7-基]-乙烯基}-四氢-吡喃-2-羰基氧基)-3-甲基-丁酰氨基]-丙酰基}-六氢-哒嗪-3-羧酸盐酸盐(0.05mmol)的悬浮液。添加二氯甲烷(5mL)中的N,N-二异丙基乙胺(26mg,0.2mmol)的溶液，并在0℃下搅拌得到的溶液。添加2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲烷铵(38mg,0.1mmol)，并在0℃下搅拌反应混合物30min，然后室温搅拌1h。将反应混合物冷却至0℃，用冰冷的盐酸(1M)和盐水洗涤溶液。有机溶液通过疏水性筛板过滤，并蒸发滤出液。用二乙醚研磨残留物，并干燥残留物。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷/丙酮2:1的梯度。用异己烷/二乙醚1:1研磨残留物，并干燥得到的固体，获得作为白色固体和非对映异构体的1:1混合物的标题化合物(6.0mg，21％)。LCMS(m/z)592.2[M+H],Tr＝2.51min and(m/z)592.2[M+H],Tr＝2.61min。
实施例50和51，化合物50和51
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化合物50a四氢-吡喃-3-羧酸苄基酯
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用草酰氯(2.0mL,23.927mmol)处理二氯甲烷(60mL)和N,N-二甲基甲酰胺(5滴)中的四氢-吡喃-3-羧酸(2.831g,21.752mmol)的冷(0℃)溶液。室温搅拌2h以后，添加苄甲醇(2.5mL,23.927mmol)。室温搅拌2h以后，静置过夜，真空除去挥发物，残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用50g Isolute筒，用异己烷/乙酸乙酯1:0至4:1的连续梯度洗脱，获得作为白色固体的标题化合物(4.587g,96％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ1.58-1.88(m,3H),2.03-2.13(m,1H),2.62-2.72(m,1H),3.47(ddd,J＝11.4,9.6,3.4Hz, 1H),3.63(dd,J＝11.4,9.1Hz,1H),3.85(app dt,J＝11.1,3.8Hz,1H),4.06(ddd,J＝11.4,4.0,1.6Hz,1H),5.12,5.17(ABq,JAB＝12.5Hz,2H),7.31-7.46(m,5H)。
化合物50b 3-(1-羟基-乙基)-四氢-吡喃-3-羧酸苄基酯
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用己烷(12.5mL,31.234mmol,2.5M)中的n-丁基锂的溶液处理无水四氢呋喃(60mL)中的N,N-二异丙胺(4.7mL,33.316mmol,通过氢化钙干燥)的冷(-78℃)溶液。在-78℃下搅拌25min以后，用无水四氢呋喃(20mL)中的四氢-吡喃-3-羧酸苄基酯(4.587g,20.823mmol)的溶液处理混合物。在-78℃下搅拌15min以后用乙醛(3.5mL,62.469mmol)处理混合物。室温搅拌45min以后，用盐酸(2M,50mL)在0℃下将反应淬灭。用氯化钠饱和水层，用二氯甲烷(2x)提取。合并有机物，通过相分离器过滤，并真空除去挥发物。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用100g Isolute筒，用异己烷/乙酸乙酯1:0至3:2的连续梯度洗脱，获得作为黄色油和非对映异构体的3:1混合物的标题化合物(2.212g，40％)。LCMS(m/z)287.0[M+Na],Tr＝2.00min。
化合物50c 3-(1-三氟甲烷磺酰基氧基-乙基)-四氢-吡喃-3-羧酸苄基酯
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用无水四氢呋喃(20mL)中的3-(1-羟基-乙基)-四氢-吡喃-3-羧酸苄基酯(2.212g,8.368mmol)缓慢处理无水四氢呋喃(20mL)中的氢化钠(502.1mg,12.552mmol,60％，矿物油中的)的冷(-78℃)悬浮液。在-78℃下搅拌浅黄色悬浮液15min，然后用无水四氢呋喃(20mL)中的N-(5-氯-2-吡啶基)双(三氟甲烷亚磺酰胺)(6.572g,16.736mmol)的溶液处理。室温搅拌3h以后，添加另外的氢化钠(502.1mg,12.552mmol,60％，矿物油中的)。室温搅拌2h以后，添加另外的氢化钠(502.1mg,12.552mmol,60％，矿物油中的)。室温搅拌30min后，用盐酸(2M,50mL)在-20℃下，将反应淬灭。用二氯甲烷(3x)萃取水层。合并有机物，通过相分离器过滤，并真空除去挥发物，获得处于混合物中的标题化合物，其可以直接使用而不需要进一步纯化。LCMS(m/z)397.0[M+H],Tr＝2.48min。
化合物50d 3-乙烯基-四氢-吡喃-3-羧酸苄基酯
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用1,8-二氮杂二环[5.4.0]十一-7-烯(5.0mL,33.472mmol)处理二氯甲烷(100mL)中的3-(1-三氟甲烷磺酰基氧基-乙基)-四氢-吡喃-3-羧酸苄基酯(8.368mmol)的溶液。室温搅拌2.5h以后，真空除去挥发物，残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用100g Isolute筒，用异己烷/乙酸乙酯1:0至4:1的连续梯度洗脱，获得作为无色油的标题化合物(809.5mg,39％,2步)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ1.58-1.80(m,3H),2.29-2.40(m,1H),3.42-3.54(m,2H),3.81(app dt,J＝10.5,4.2Hz,1H),4.27(dd,J＝11.4,1.8Hz,1H),5.13-5.27(m,4H),5.77(dd,J＝17.4,10.9Hz,1H),7.31-7.42(m,5H)。
化合物50e 3-乙烯基-四氢-吡喃-3-羧酸
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用氢氧化锂一水合物(413.6mg,9.859mmol)处理四氢呋喃/甲醇/水(25mL,2:2:1)中的3-乙烯基-四氢-吡喃-3-羧酸苄基酯(809.5mg,3.286mmol)的溶液。室温搅拌2h以后，添加另外的氢氧化锂一水合物(413.6mg 9.859mmol)。室温搅拌2h以后，真空除去挥发物，将残留物冷却至0℃，并用盐酸(1M)淬灭。用氯化钠饱和水层，用二氯甲烷(3x)提取。合并的有机物通过相分离器过滤，并真空除去挥发物。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用25g Isolute筒，用异己烷/乙酸乙酯1:0至1:1的连续梯度洗脱，获得粗的标题化合物，其溶于二乙醚中。用饱和的碳酸氢钠溶液提取有机物。用盐酸(2M)将水层酸化到pH～2，用氯化钠饱和，并用二氯甲烷(2x)提取，获得作为白色固体的标题化合物(377.1mg,73％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ1.59-1.90(m,3H),2.27-2.38(m,1H),3.39-3.55(m,2H),3.87(app dt,J＝11.2,4.0Hz,1H),4.26(dd,J＝11.4,2.0Hz,1H),5.22-5.32(m,2H),5.79(dd,J＝17.8,10.7Hz,1H)。
化合物50f 3-((E)-2-{2-[(R)-1-({(S)-1-[(S)-2-((S)-2-羟基-3-甲基-丁酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羰基}-氨基)-乙基]-喹啉-7-基}-乙烯基)-四氢-吡喃-3-羧酸
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通过鼓吹氮气，对1,4-二恶烷(15mL)中的(S)-1-[(S)-2-((S)-2-羟基-3-甲基-丁酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羧酸[(R)-1-(7-溴-喹啉-2-基)-乙基]-酰胺(600mg,1.122mmol)、3-乙烯基-四氢-吡喃-3-羧酸(175.3mg,1.122mmol)、三(o-甲苯基)膦(68.3mg,0.224mmol)和三乙胺(0.47mL,3.366mmol)的溶液脱气5min，然后升温至50℃，并用三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(102.7mg,0.112mmol)处理。在100℃下搅拌45min后，将反应冷却至室温，通过硅藻土板过滤，其用乙酸乙酯漂洗。真空除去挥发物，获得作为橙色泡沫的粗的标题化合物，其可直接使用而不需要进一步纯化。LCMS(m/z)610.2[M+H],Tr＝1.97min。
化合物50和51
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通过注射泵，4h把干燥的二氯甲烷(20mL)中的粗的3-((E)-2-{2-[(R)-1-(
{(S)-1-[(S)-2-((S)-2-羟基-3-甲基-丁酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羰基}-氨基)-乙基]-喹啉-7-基}-乙烯基)-四氢-吡喃-3-羧酸(1.122mmol)的溶液添加到含有![]()
分子筛的干二氯甲烷(350mL)中的2-甲基-6-硝基苯甲酸酐(772.6mg,2.244mmol)、4-二甲基氨基吡啶(548.2mg,4.488mmol)的溶液中。添加结束以后，室温下搅拌反应3天，然后过滤，并真空部分除去挥发物。用pH 4柠檬酸缓冲液、饱和的碳酸氢钠溶液洗涤有机物，并在相分离器上过滤。真空除去挥发物，残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用50g Isolute筒，用异己烷/丙酮1:0至2:3的连续梯度洗脱，获得两种级分，其进一步通过反相准备性HPLC进行纯化，用水/乙腈95:5至0:1洗脱，获得两种分离的、单一异构体1和2。
化合物50(第一洗脱)非对映异构体1(50.1mg,7.5％)，作为白色固体。1H NMR(300MHz,CD3OD)δ1.0(d,J＝6.4Hz,3H),1.09(d,J＝6.7Hz,3H),1.47-1.72(m,9H), 1.73-1.88(m,2H),1.91-2.02(m,1H),2.11-2.32(m,2H),2.35-2.45(m,1H),2.65-2.78(m,1H),3.46-3.67(m,3H),3.84-3.94(m,1H),4.39-4.54(m,2H),5.03-5.16(m,2H),5.34(d,J＝9.1Hz,1H),5.81(q,J＝7.3Hz,1H),6.23(d,J＝16.5Hz,1H),6.62(d,J＝16.5Hz,1H),7.46(d,J＝8.5Hz,1H),7.66(dd,J＝8.5,1.3Hz,1H),7.75(s,1H),7.85(d,J＝8.5Hz,1H),8.26(d,J＝8.5Hz,1H).LCMS(m/z)592.2[M+H],Tr＝2.31min。
化合物51(第二洗脱)非对映异构体2(28.8mg,4.3％)，作为白色固体。1H NMR(300MHz,CD3OD)δ1.06(d,J＝6.7Hz,3H),1.09(d,J＝6.7Hz,3H),1.60(d,J＝6.7Hz,3H),1.65(d,J＝7.3Hz,3H),1.68-1.79(m,3H),1.88-2.00(m,2H),2.12-2.29(m,2H),2.55-2.76(m,2H),3.49-3.67(m,3H),3.84-3.93(m,1H),4.29(dd,J＝11.2,1.6Hz,1H),4.39-4.48(m,1H),5.08(q,J＝6.7Hz,1H),5.28(d,J＝8.7Hz,1H),5.82(q,J＝7.1Hz,1H),6.20(d,J＝16.7Hz,1H),6.62(d,J＝16.7Hz,1H),7.46(d,J＝8.5Hz,1H),7.66(dd,J＝8.5,1.6Hz,1H),7.79(s,1H),7.85(d,J＝8.5Hz,1H),8.25(d,J＝8.5Hz,1H).LCMS(m/z)592.1[M+H],Tr＝2.27min。
实施例52，化合物52
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化合物52a(S)-环丁基-羟基-乙酸
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用水(10mL)中的亚硝酸钠(1.836g,26.610mmol)的溶液处理含水硫酸(0.5M,18mL)中的环丁基-L-甘氨酸(572.8mg,4.435mmol)的冷(0℃)溶液。室温搅拌19h以后，用氯化钠饱和该溶液，并用四氢呋喃(3x)提取。有机物通过疏水性筛板过滤，并真空除去挥发物。然后用乙酸乙酯提取固体残留物，有机物通过疏水性筛板过滤，然后用乙酸乙酯提取固体残留物，有机物通过疏水性筛板过滤，并真空除去挥发物，获得作为橙色凝胶的标题化合物(235.9mg，41％)，其可以直接应用而不需要进一步纯化。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ1.76-2.23(m,6H),2.66-2.82(m,1H),4.18(d,J＝5.8Hz,1H)。
化合物52b(S)-1-[(S)-2-((S)-2-环丁基-2-羟基-乙酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羧酸[(R)-1-(7-溴-喹啉-2-基)-乙基]-酰胺
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用盐酸(3mL,11.964mmol,4M,1,4-二恶烷中的)的溶液处理二氯甲烷(15mL)中的(S)-2-{(S)-3-[(R)-1-(7-溴-喹啉-2-基)-乙基氨甲酰基]-四氢-哒嗪-1-基}-1-甲基-2-氧-乙基)-氨基甲酸叔丁基酯53a(1.065g,1.994mmol)的冷(0℃)溶液。室温搅拌2h以后，添加氯化氢(3mL,11.964mmol,4M in 1,4-dioxane)的溶液。室温搅拌2h以后，真空除去挥发物。与甲苯共沸除去残留的水，获得作为白色固体的(S)-1-((S)-2-氨基-丙酰基)-六氢-哒嗪-3-羧酸[(R)-1-(7-溴-喹啉-2-基)-乙基]-酰胺盐酸盐，其然后与(S)-环丁基-羟基-乙酸(235.9mg,1.812mmol)和干二氯甲烷(20mL)合并。将该悬浮液冷却至0℃，并依序用N,N-二异丙基乙胺(0.95mL,5.436mmol)和(苯并三唑-1-基氧基)三(二甲氨基)膦六氟磷酸酯(961.7mg,2.174mmol)处理。将反应缓慢升温至室温。搅拌反应17h以后，用盐酸(2M)将反应淬灭。用二氯甲烷萃取水层。用饱和的碳酸氢钠溶液洗涤有机物。用二氯甲烷提取碱性水层。合并有机物，通过相分离器过滤并真空除去挥发物。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用50g Isolute筒，用异己烷/丙酮1:0至1:1的连续梯度洗脱，获得作为橙色泡沫的标题化合物(427.5mg，39％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ1.40(d,J＝8.0Hz,3H),1.59(d,J＝6.4Hz,3H),1.63-2.10(m,10H),2.21-2.32(m,1H),2.58-2.78(m,2H),3.41-3.54(m,1H),4.01(app t,J＝5.8Hz,1H),4.52(d,J＝13.8Hz,1H),5.28(app pentet,J＝6.9Hz,1H),5.41(app pentet,J＝8.0Hz,1H),7.00(d,J＝8.2Hz,1H),7.40(d,J＝8.5Hz,1H),7.65(dd,J＝8.5,1.8Hz,1H),7.71(d,J＝8.5Hz,1H),8.06(d,J＝7.1Hz,1H),8.16(d,J＝8.5Hz,1H),8.44(s,1H).LCMS(m/z)547.0,549.0[M+H],Tr＝2.39min。
化合物52c(E)-4-{2-[(R)-1-({(S)-1-[(S)-2-((S)-2-环丁基-2-羟基-乙酰基氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羰基}-氨基)-乙基]-喹啉-7-基}-2,2-二甲基-丁-3-烯酸
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通过鼓吹氮气，将1,4-二恶烷(10mL)中的(S)-1-[(S)-2-((S)-2-环丁基-2-羟基-乙酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羧酸[(R)-1-(7-溴-喹啉-2-基)-乙基]-酰胺(427.5mg,0.782mmol)、2,2-二甲基-丁-3-烯酸(89.3mg,0.782mmol)、三(o-甲苯基)膦(47.6mg,0.156mmol)和三乙胺(0.33mL,2.346mmol)的溶液脱气5min，然后升温至50℃，并用三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(71.6mg,0.078mmol)处理。在100下搅拌1.5h后，添加三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(71.6mg,0.078mmol)和三(o-甲苯基)膦(47.6mg,0.156mmol)。搅拌40min以后，将反应冷却至室温，通过硅藻土板过滤，其用乙酸乙酯漂洗。真空除去挥发物，获得作为橙色泡沫的粗的标题化合物，其可直接使用而不需要进一步纯化。LCMS(m/z)580.2[M+H],Tr＝2.01min。
化合物52
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通过注射泵，4h把干燥的二氯甲烷(280mL)中的粗的(E)-4-{2-[(R)-1-({(S)-1-[(S)-2-((S)-2-环丁基-2-羟基-乙酰基氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羰基}-氨基)-乙基]-喹啉-7-基}-2,2-二甲基-丁-3-烯酸(0.782mmol)的溶液添加到含有![]()
分子筛的干燥的二氯甲烷(280mL)中的2-甲基-6-硝基苯甲酸酐(538.4mg,1.564mmol)、4-二甲基氨基吡啶(382.1mg,3.128mmol)的溶液中。添加结束以后，室温下搅拌反应30min，然后过滤，并真空部分除去挥发物。用pH 4柠檬酸缓冲液、饱和的碳酸氢钠溶液洗涤有机物，并在相分离器上过滤。真空除去挥发物，残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用50g Isolute筒，用异己烷/丙酮1:0至1:1的连续梯度洗脱，然后通过反相制备性HPLC进行纯化，用水/乙腈95:5至0:1的连续梯度洗脱，获得作为白色固体的标题化合物(48.6mg, 11％)。1H NMR(300MHz,CD3OD)δ1.43(s,3H),1.47-1.75(m,12H),1.89-2.12(m,6H),2.24-2.33(m,1H),2.69(app dt,J＝12.9,3.1Hz,1H),2.84(app sextet,J＝8.0Hz,1H),3.60(dd,J＝11.6,2.9Hz,1H),4.38-4.47(m,1H),5.10(q,J＝6.7Hz,1H),5.53(d,J＝8.0Hz,1H),5.81(q,J＝7.1Hz,1H),6.38(d,J＝16.3Hz,1H),6.57(d,J＝16.3Hz,1H),7.44(d,J＝8.5Hz,1H),7.61(dd,J＝8.5,1.6Hz,1H),7.81-7.87(m,2H),8.25(d,J＝8.5Hz,1H).LCMS(m/z)562.1[M+H],Tr＝2.68min。
实施例53，化合物53
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化合物53a((S)-2-{(S)-3-[(R)-1-(7-溴-喹啉-2-基)-乙基氨甲酰基]-四氢-哒嗪-1-基}-1-甲基-2-氧-乙基)-氨基甲酸叔丁基酯
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用氢氧化锂一水合物(874.4mg,20.844mmol)处理四氢呋喃/水(60mL,5:1)中的(S)-1-((S)-2-叔丁氧基羰基氨基-丙酰基)-六氢-哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯-乙酯(3.007g,6.948mmol)的冷溶液。在0℃下搅拌40min后，用盐酸(1M,50mL)将反应淬灭。用乙酸乙酯(2x)萃取水层。合并有机物，通过无水硫酸钠干燥，过滤并真空除去挥发物。与甲苯(3x)共沸掉残留的三氯乙醇，获得作为白色固体的(S)-1-((S)-2-叔丁氧基羰基氨基-丙酰基)-六氢-哒嗪-3-羧酸，其然后与(R)-1-(7-溴-喹啉-2-基)-乙胺盐酸盐(1.998g,6.948mmol)合并，并悬浮于无水乙腈(60mL)和四氢呋喃(10mL)中。将悬浮液冷却至0℃，并依序用N,N-二异丙基乙胺(6mL,34.740mmol)和1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑[4,5-b]吡啶-3-氧化物六氟磷酸酯(3.699g,9.727mmol)。缓慢升温至室温，并搅拌16h，用盐酸(1M,70mL)在0℃下将反应淬灭。合并有机物，用饱和的碳酸氢钠溶液洗涤，通过无水硫酸钠干燥，过滤并真空除去挥发物。残留物通过硅胶色 谱进行纯化，使用100g Isolute筒，用异己烷/乙酸乙酯1:0至1:4的连续梯度洗脱，获得作为白色泡沫的标题化合物(3.702g，99％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ1.38(d,J＝6.9Hz,3H),1.43(s,9H),1.47-1.55(m,2H),1.58(d,J＝6.9Hz,3H),1.60-1.78(m,2H),2.22-2.31(m,1H),2.65-2.78(m,1H),3.39-3.52(m,1H),4.55(d,J＝13.4Hz,1H),5.18-5.34(m,2H),5.36-5.45(m,1H),7.37(d,J＝8.5Hz,1H),7.65(dd,J＝8.5,1.6Hz,1H),7.70(d,J＝8.5Hz,1H),8.04(d,J＝6.5Hz,1H),8.14(d,J＝8.5Hz,1H),8.36(s,1H).LCMS(m/z)536.1,537.1[M+H],Tr＝2.58min。
化合物53b.(S)-1-[(S)-2-(2-环丙基-2-羟基-乙酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羧酸[(R)-1-(7-溴-喹啉-2-基)-乙基]-酰胺
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将((S)-2-{(S)-3-[(R)-1-(7-溴-喹啉-2-基)-乙基氨甲酰基]-四氢-哒嗪-1-基}-1-甲基-2-氧-乙基)-氨基甲酸叔丁基酯(1.07g,2.00mmol)悬浮于二氯甲烷(20mL)中，将混合物冷却至0℃，同时搅拌。添加1,4-二恶烷(11mL)中的4M氯化氢，将反应混合物搅拌90min，然后蒸发。用甲苯共沸掉残留的水，将残留物悬浮于二氯甲烷(20mL)中，并添加环丙基-羟基-乙酸(255mg,2.20mmol)。将混合物冷却至0℃，同时搅拌，添加N,N-二异丙基乙胺(775mg,1.05mL,6.00mmol)，接着添加(苯并三唑-1-基氧基)三(二甲基氨基)膦六氟磷酸酯(1.06g,2.40mmol)。将反应升温至环境温度，并搅拌18h。添加1M盐酸，用饱和的碳酸氢钠溶液洗涤有机层，通过疏水性筛板，并蒸发。残留物通过硅胶色谱进行纯化，用乙酸乙酯/甲醇1:0至9:1的梯度洗脱，获得作为白色泡沫的标题化合物(328mg)。原始含水提取物用二氯甲烷/甲醇(9:1,2x)再提取，有机提取物通过无水硫酸钠干燥，过滤并蒸发。残留物通过硅胶色谱进行纯化，用乙酸乙酯/甲醇1:0至17:3的梯度洗脱，获得作为白色泡沫的标题化合物(378mg)。合并两种泡沫(706mg,66％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ0.46-0.73(m,4H),1.04-1.18(m,1H),1.49-1.59(m,6H),1.53-1.78(m,2H),1.95-2.04(m,1H),2.25-2.34(m,1H),2.64-2.82(m,1H),3.44-3.55(m,2H),3.60-3.84(m,1H),4.50-4.60(m,1H),5.23-5.33(m,1H),5.48-5.55(m,1H),7.36-7.41(m,1H),7.62-7.73(m,2H),8.13-8.19(m,2H),8.47-8.51(m,1H).LCMS(m/z)[M+H]532.0,534.0Tr＝2.07min.LCMS(m/z)532.0,533.9[M+H],Tr＝2.12min。
化合物53
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用氮气对1,4-二恶烷(15mL)中的(S)-1-[(S)-2-(2-环丙基-2-羟基-乙酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羧酸[(R)-1-(7-溴-喹啉-2-基)-乙基]-酰胺(592mg,1.11mmol)、5-乙烯基[1,3]二恶烷-5-羧酸(176mg,1.11mmol)、三乙胺(343mg,472μL,3.39mmol)和三(o-甲苯基)膦(67mg,0.22mmol)的溶液脱气5min，然后在氮气下升温至50℃，同时搅拌。添加三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(101mg,0.11mmol)，并将混合物回流加热20min，然后冷却至室温。悬浮液通过硅藻土过来，并蒸发滤出液，获得粗的5-((E)-2-{2-[(R)-1-({(S)-1-[(S)-2-(2-环丙基-2-羟基-乙酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羰基}-氨基)-乙基]-喹啉-7-基}-乙烯基)-[1,3]二恶烷-5-羧酸。
通过注射泵，5h添加二氯甲烷(20mL)中的5-((E)-2-{2-[(R)-1-({(S)-1-[(S)-2-(2-环丙基-2-羟基-乙酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羰基}-氨基)-乙基]-喹啉-7-基}-乙烯基)-[1,3]二恶烷-5-羧酸的溶液到二氯甲烷(375mL)中的粉末状![]()
分子筛、2-甲基-6-硝基苯甲酸酐(764mg,2.22mmol)和4-(二甲基氨基)-吡啶(542mg,4.44mmol)的搅拌混合物中。用另外的二氯甲烷(5mL)洗涤原始含有粗的酸的烧瓶，并将其大约5min添加到反应混合物中。搅拌反应混合物16h，然后通过硅藻土过滤，并蒸发到～100mL，连续用冰冷的饱和氯化铵溶液、冰冷的饱和碳酸氢钠溶液、饱和的盐水洗涤，然后通过疏水性筛板过滤。残留物通过硅胶色谱进行纯化，用异己烷/丙酮1:0至1:1的梯度洗脱，然后通过反相制备性HPLC纯化，使用1:9至3:2的梯度，其用0.1％甲酸修饰，获得作为黄色固体的标题化合物(39mg,6％)。1H NMR(300MHz,CD3OD)δ0.52-0.76(m,4H),1.30-1.40(m,1H),1.49-1.76(m,2H),1.60(d,J＝6.9Hz,3H),1.64(d,J＝7.1Hz,3H),1.93-2.02(m,1H),2.21-2.30(m,1H),2.66-2.77(m,1H),3.59-3.66(m,1H),3.85,3.96(ABq,JAB＝11.4Hz,2H),4.41-4.51(m,2H),4.63-4.70(m,1H),4.82(d,J＝6.2Hz,1H),4.98(d,J＝6.0Hz,1H),5.04-5.13(m,2H),5.83-5.91(m,1H),6.17(d,J＝16.7Hz,1H),6.66(d,J＝16.7Hz,1H),7.47(d,J＝8.5Hz,1H),7.68(dd,J＝8.5,1.5Hz,1H),7.83(s,1H),7.86(d,J＝8.5Hz,1H),8.26(d,J＝8.5Hz,1H).LCMS(m/z)592.2[M+H],Tr＝2.04min。
实施例54，化合物54
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化合物54a(2S,3S)-2-羟基-3-甲氧基-丁酸
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制备1M硫酸(10mL)中的甲基L-别-苏氨酸(900mg,6.75mmol)的溶液，冷却至0℃，接着10min逐滴添加水(2.25mL)中的亚硝酸钠(693mg,10mmol)的溶液。在0℃下搅拌反应混合物15h。添加氯化铵固体来饱和溶液，其然后用二乙醚(3x 25mL)提取。合并提取物，通过无水硫酸钠干燥，过滤并蒸发，获得作为无色油的标题产物(193mg,21％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ1.29(d,J＝6.5Hz,3H),3.48(s,3H),3.71-3.81(m,1H),4.35(d,J＝4.7Hz,1H)。
化合物54b.(S)-1-[(S)-2-((2S,3S)-2-羟基-3-甲氧基-丁酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羧酸[(R)-1-(7-溴-喹啉-2-基)-乙基]-酰胺
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用1,4-二恶烷(4M,1.44mL,5.76mmol)中的氯化氢处理二氯甲烷(20mL)中的((S)-2-{(S)-3-[(R)-1-(7-溴-喹啉-2-基)-乙基氨基甲酰基]-四氢-哒嗪-1-基}-1-甲基-2-氧-乙基)-氨基甲酸叔丁基酯(838mg,1.44mmol)的溶液，并室温搅拌2h。蒸发溶液到干燥。残留物溶于二氯甲烷(20mL)中，并添加(2S,3S)-2-羟基-3-甲氧基-丁酸(193mg,1.44mmol)，接着添加N,N-二异丙基乙胺(1.0mL,5.76mmol)和O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲六氟磷酸酯(819mg,2.16mmol)。室温搅拌溶液20h，然后蒸发到干燥。残留物通过硅胶色谱进行纯化，用丙酮/乙酸乙酯1:9至1:1的梯度洗脱，产生作为白色凝胶的标题化合物(243mg,31％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ1.14(d,J＝6.2Hz,3H),1.33-1.50(m,6H),1.58(d,J＝6.7Hz,3H),2.20-2.30(m,1H),2.66-2.79(m,1H), 3.26-3.63(m,3H),3.37(s,3H),3.90(d,J＝11.8Hz,1H),4.20(d,J＝5.1Hz,1H),4.46-4.56(m,1H),5.20-5.31(m,1H),5.36-5.49(m,1H),7.41(d,J＝8.5Hz,1H),7.61-7.70(m,2H),8.15(d,J＝8.5Hz,1H),8.41(s,1H).LCMS(m/z)550.0,552.0[M+H],Tr＝2.05min。
化合物54c(E)-4-{2-[(R)-1-({(S)-1-[(S)-2-((2S,3S)-2-羟基-3-甲氧基-丁酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羰基}-氨基)-乙基]-喹啉-7-基}-2,2-二甲基-丁-3-烯酸
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制备1,4-二恶烷中的(S)-1-[(S)-2-((2S,3S)-2-羟基-3-甲氧基-丁酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羧酸[(R)-1-(7-溴-喹啉-2-基)-乙基]-酰胺(243mg,0.44mmol)和2,2-二甲基-丁-3-烯酸(50mg,0.44mmol)的溶液，并添加三乙胺(183μL,1.32mmol)。反应混合物用氮气净化5min，然后添加三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(40mg,0.044mmol)。在氮气气氛下，将反应混合物在100℃下加热1.5h。反应通过硅藻土(hyflo supercel)过滤，用乙酸乙酯洗涤。真空蒸发滤出液，产生作为黄色凝胶的粗的标题化合物。LCMS(m/z)584.2[M+H],Tr＝1.77min。
化合物54
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制备无水二氯甲烷(160mL)中的2-甲基-6-硝基苯甲酸酐(389mg,1.13mmol)的溶液，并添加![]()
分子筛和4-(二甲氨基)吡啶(275mg,2.25mmol)。通过注射泵5.5h添加二氯甲烷(11mL)中粗的(E)-4-{2-[(R)-1-({(S)-1-[(S)-2-((2S,3S)-2-羟基-3-甲氧基-丁酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羰基}-氨基)-乙基]-喹啉-7-基}-2,2-二甲基-丁-3-烯酸(ca.0.44mmol)。添加结束以后，室温下搅拌反应混合物另外的30min。过滤溶液，用饱和的碳酸氢钠水溶液(70mL)洗涤。有机物通过相分离筒过滤，并蒸发，获得黄色凝胶(0.97g)， 其通过硅胶色谱进行纯化，用乙酸乙酯/丙酮1:0至4:1的梯度洗脱，产生无色凝胶(133mg)，其通过反相制备性HPLC纯化，用乙腈/水9:11洗脱，产生作为白色固体的标题产物(15.5mg,6％)。1H NMR(300MHz,CD3OD)δ1.23(d,J＝6.3Hz,3H),1.44(s,3H),1.53(s,3H),1.58(d,J＝6.9Hz,3H),1.61(d,J＝7.4Hz,3H),1.34-1.84(m,2H),1.91-2.01(m,2H),2.25-2.36(m,1H),2.63-2.77(m,1H),3.43(s,3H),2.54-3.67(m,1H),2.73-3.83(m,1H),4.40-4.50(m,1H),4.07-5.16(m,1H),5.56(d,J＝5.6Hz,1H),5.86(q,J＝7.1Hz,1H),6.45,6.60(ABq,JAB＝16.1Hz,2H),7.44(d,J＝8.5Hz,1H),7.59(m,1H),7.84(d,J＝8.3Hz,1H),7.93(s,1H),8.25(d,J＝8.5Hz,1H).LCMS(m/z)566.1[M+H],Tr＝2.32min。
实施例55，化合物55
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化合物55a(R)-2-羟基甲基-2-甲基-丁-3-烯酸甲酯
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在氮气下，于0℃搅拌二氯甲烷(40mL)中的(R)-2-羟基甲基-2-甲基-丁-3-烯酸(600mg,4.2mmol)的溶液。添加三溴化硼(1M,二氯甲烷中的,16.8mL,16.8mmol)，在0℃下搅拌反应混合物90min。谨慎添加甲醇(20mL)，将反应混合物30min升温至室温，然后在室温下搅拌30min。蒸发溶剂，残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用戊烷/二乙醚3:1至1:1的梯度，获得作为清澈油的标题化合物(540mg,90％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ1.35(s,3H),2.33(m,1H),3.62(m,1H),3.75(s,3H),3.75-3.80(m,1H),5.21(dd,J＝17.4,0.5Hz,1H),5.24(dd,J＝10.7,0.5Hz,1H),5.98(dd,J＝17.4,10.7Hz,1H).LCMS(m/z)145.1[M+H],Tr＝1.16min。
化合物55b.(R)-2-二氟甲氧基甲基-2-甲基-丁-3-烯酸甲酯
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在氮气下，室温搅拌乙腈(8mL)中的(R)-2-羟基甲基-2-甲基-丁-3-烯酸甲酯(288mg,2.0mmol)。添加碘化铜(I)(80mg,0.4mmol)，接着添加二氟-氟磺酰基-乙酸(356mg, 0.2mL,2.0mmol)，将反应混合物回流加热30min。将反应混合物冷却至室温，添加水，并用乙酸乙酯提取混合物。合并有机提取物，用盐水洗涤。有机溶液通过疏水性筛板过滤，并蒸发滤出液。残留物通过硅基色谱进行纯化，使用戊烷/二乙醚10:1至5:1的梯度，获得作为清澈油的标题化合物(195mg,50％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ1.40(s,3H),3.75(s,3H),3.86(d,J＝9.4Hz,1H),4.10(d,J＝9.4Hz,1H),5.24(d,J＝17.4Hz,1H),5.24(dd,J＝10.9Hz,1H),5.95(dd,J＝17.4,10.9Hz,1H),6.22(t,J＝74.3Hz,1H)。
化合物55c(R)-2-二氟甲氧基甲基-2-甲基-丁-3-烯酸
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在氮气下，于5℃搅拌四氢呋喃(6mL)中的(R)-2-二氟甲氧基甲基-2-甲基-丁-3-烯酸甲酯(159mg,0.8mmol)的溶液。添加水(1.5mL)中的氢氧化锂一水合物(100mg,2.4mmol)的溶液，并在5℃下搅拌反应混合物1h，然后室温下搅拌20h。添加水，并用盐酸(2M)将混合物酸化到pH 2，用二乙醚提取混合物。合并有机提取物，并用盐水洗涤。有机溶液通过疏水性筛板过滤，并蒸发滤出液，获得作为清澈油的标题化合物(133mg,92％)。1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ1.24(s,3H),3.80(d,J＝9.4Hz,1H),4.02(d,J＝9.4Hz,1H),5.19(dd,J＝10.6Hz,1H),5.20(d,J＝17.6Hz,1H),5.91(dd,J＝17.6,10.6Hz,1H),6.68(t,J＝75.6Hz,1H),12.5-13.0(br s,1H).LCMS(m/z)179.1[M-H],Tr＝1.79min。
化合物55
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在氮气下，于50℃搅拌(S)-1-[(S)-2-((S)-2-羟基-3-甲基-丁酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羧酸[(R)-1-(7-溴-喹啉-2-基)-乙基]-酰胺(160mg,0.3mmol)、(R)-2-二氟甲氧基甲基-2-甲基-丁-3-烯酸(54mg,0.3mmol)、三(o-甲苯基)膦(18mg,0.06mmol)和三乙胺(91mg,0.125mL,0.9mmol)的溶液。添加三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(27mg,0.03mmol)，并加反应混合物回流加热40min。使反应混合物冷却至室温，将混合物通过疏水性筛板过滤，并蒸发滤出液，获得粗的(E)-(R)-2-二氟甲氧基甲基-4-{2-[(R)-1-({(S)-1-[(S)-2-((S)-2-羟基-3-甲基-丁酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羰基}-氨 基)-乙基]-喹啉-7-基}-2-甲基-丁-3-烯酸(0.3mmol)，其用于接下来的步骤。LCMS(m/z)634.2[M+H],Tr＝2.04min。
在氮气下，室温搅拌二氯甲烷(200mL)中的粉末状![]()
分子筛(200mg)、4-二甲基氨基吡啶(146mg,1.2mmol)和2-甲基-6-硝基苯甲酸酐(206mg,0.6mmol)。通过注射泵，4h添加二氯甲烷(4mL)中的粗的(E)-(R)-2-二氟甲氧基甲基-4-{2-[(R)-1-({(S)-1-[(S)-2-((S)-2-羟基-3-甲基-丁酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羰基}-氨基)-乙基]-喹啉-7-基}-2-甲基-丁-3-烯酸(0.3mmol)的溶液，并室温下搅拌反应混合物18h。反应混合物通过硅藻土过滤，蒸发滤出液到大约50mL的体积。用冰冷的饱和绿环溶液、冰冷的饱和碳酸氢钠溶液和盐水洗涤溶液。有机溶液通过疏水性筛板过滤，并蒸发滤出液。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷/乙酸乙酯1:2至0:1的梯度，然后通过反相制备性HPLC纯化，用乙腈/水1:4至1:0的梯度洗脱，获得作为白色固体的标题化合物(21mg,11％)。1H NMR(300MHz,CD3OD)δ1.01(d,J＝6.7Hz,3H),1.06(d,J＝6.7Hz,3H),1.60(d,J＝6.7Hz,3H),1.61(s,3H),1.66(d,J＝7.1Hz,3H),1.66-1.70(m,2H),1.93-1.98(m,1H),2.13-2.26(m,2H),2.64-2.73(m,1H),3.55-3.67(m,1H),3.94(d,J＝9.6Hz,1H),4.26(d,J＝9.6Hz,1H),4.40-4.45(m,1H),5.04(d,J＝12.0Hz,1H),5.08(q,J＝6.7Hz,1H),5.23(d,J＝9.2Hz,1H),5.81(q,J＝7.1Hz,1H),6.24(d,J＝16.5Hz,1H),6.45(t,J＝75.4Hz,1H),6.63(d,J＝16.5Hz,1H),7.46(d,J＝8.5Hz,1H),7.66(dd,J＝8.5,1.5Hz,1H),7.80(br s,1H),7.86(d,J＝8.5Hz,1H),8.26(d,J＝8.5Hz,1H).LCMS(m/z)616.2[M+H],Tr＝2.58min。
实施例56，化合物56
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化合物56a.(R)-2-甲基-2-三氟甲氧基甲基-丁-3-烯酸
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在氮气下，添加锌双(三氟甲基磺酰基)亚酰胺(750mg,1.2mmol)和(1-(三氟甲基)-1,2-苯碘酰-3(1H)-酮(758mg,2.4mmol)到干燥的氘代氯仿(4mL)中的(R)-2-羟甲基 -2-甲基-丁-3-烯酸甲酯(288mg,2.0mmol)的搅拌溶液中。在氮气下，室温下搅拌密封烧瓶中的反应混合物5天。用二氯甲烷稀释得到的悬浮液，分离上清液并蒸发。添加二氯甲烷(5mL)到残留物中，上清液溶液通过硅胶色谱进行纯化，使用戊烷/二乙醚10:1至5:1的梯度，获得作为清澈油的粗的(R)-2-甲基-2-三氟甲氧基甲基-丁-3-烯酸甲酯(98mg)，其用于接下来的步骤中。
在氮气下，于5℃搅拌四氢呋喃(4mL)中的(R)-2-甲基-2-三氟甲氧基甲基-丁-3-烯酸甲酯(98mg)。添加水(1mL)中的氢氧化锂一水合物(63mg,1.5mmol)的溶液，并在5℃下搅拌反应混合物1h，然后室温搅拌3天。添加水，用盐酸(2M)将混合物酸化到pH 2，用二乙醚提取混合物。合并有机提取物，并用盐水洗涤。有机溶液通过疏水性筛板过滤，并蒸发滤出液，获得作为清澈油的粗的标题化合物(95mg)，其用于接下来的步骤中。LCMS(m/z)197.1[M-H],Tr＝2.16min。
化合物56
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在氮气下，于50℃搅拌1,4-二恶烷(10mL)中的(S)-1-[(S)-2-((S)-2-羟基-3-甲基-丁酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羧酸[(R)-1-(7-溴-喹啉-2-基)-乙基]-酰胺(212mg,0.4mmol)、粗的(R)-2-甲基-2-三氟甲氧基甲基-丁-3-烯酸(95mg)、三(o-甲苯基)膦(24mg,0.08mmol)和三乙胺(121mg,0.17mL,1.2mmol)的溶液。添加三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(36mg,0.04mmol)，并将反应混合物回流加热40min。使反应混合物冷却至室温，将混合物通过疏水性筛板过滤，并蒸发滤出液，获得粗的(E)-(R)-4-{2-[(R)-1-({(S)-1-[(S)-2-((S)-2-羟基-3-甲基-丁酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羰基}-氨基)-乙基]-喹啉-7-基}-2-甲基-2-三氟甲氧基甲基-丁-3-烯酸，其用于接下来的步骤中。LCMS(m/z)652.1[M+H],Tr＝2.17min。
在氮气下，室温搅拌二氯甲烷(200mL)中的粉末状![]()
分子筛(200mg)、4-二甲基氨基吡啶(195mg,1.6mmol)和2-甲基-6-硝基苯甲酸酐(275mg,0.8mmol)的混合物。通过注射泵，4h添加二氯甲烷(5mL)中的粗的(E)-(R)-4-{2-[(R)-1-({(S)-1-[(S)-2-((S)-2- 羟基-3-甲基-丁酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羰基}-氨基)-乙基]-喹啉-7-基}-2-甲基-2-三氟甲氧基甲基-丁-3-烯酸的溶液，并室温搅拌反应混合物18h。反应混合物通过硅藻土过滤，蒸发滤出液到大约50mL的体积。用冰冷的饱和氯化铵溶液、冰冷的饱和碳酸氢钠溶液和盐水洗涤溶液。有机溶液通过疏水性筛板过滤，并蒸发滤出液。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷/乙酸乙酯1:2至0:1的梯度，然后通过反相制备性HPLC纯化，用乙腈/水1:4至1:0的梯度洗脱，获得作为白色固体的标题化合物(4.3mg,0.3％,4步)。1H NMR(300MHz,CD3OD)δ1.01(d,J＝6.7Hz,3H),1.07(d,J＝6.7Hz,3H),1.60(d,J＝6.7Hz,3H),1.63(s,3H),1.66(d,J＝7.1Hz,3H),1.66-1.70(m,2H),1.93-1.97(m,1H),2.14-2.27(m,2H),2.64-2.73(m,1H),3.58-3.67(m,1H),4.10(d,J＝9.1Hz,1H),4.37-4.42(m,1H),4.45(d,J＝9.1Hz,1H),5.03(d,J＝12.0Hz,1H),5.09(q,J＝6.7Hz,1H),5.24(d,J＝8.9Hz,1H),5.81(q,J＝7.1Hz,1H),6.23(d,J＝16.5Hz,1H),6.64(d,J＝16.5Hz,1H),7.47(d,J＝8.5Hz,1H),7.67(dd,J＝8.5,1.5Hz,1H),7.82(br s,1H),7.87(d,J＝8.5Hz,1H),8.26(d,J＝8.5Hz,1H).LCMS(m/z)634.1[M+H],Tr＝2.85min。
实施例57，化合物57
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化合物57a.6-硝基甲基-[1,4]二氧杂环庚烷-6-醇
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在氮气下，添加硝基甲烷(4mL)到硫酸镁(2.05g,17.0mmol)中，并大力搅拌混合物。添加硝基甲烷(2mL)中的[1,4]二氧杂环庚烷-6-酮(899mg,7.74mmol,如PCT Int.Appl.2010139717中所述的制备)的溶液，并室温下搅拌该混合物5min。添加硝基甲烷(2mL)中的2,8,9-三异丙基-2,5,8,9-四氮杂-1-磷酰二环[3,3,3]十一烷(231mg,250μL,0.77mmol)的溶液，并将混合物在40℃下加热19h。将冷却的反应混合物直接装载到硅上，并通过硅胶色谱进行纯化，使用戊烷/二乙醚1:1至1:3的梯度，获得作为黄色油的 标题化合物(798mg,58％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ3.27(s,1H),3.77-3.93(m,4H),3.85(s,4H),4.58(s,2H)。
化合物57b 6-硝基亚甲基-[1,4]二氧杂环庚烷
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在氮气下，将二氯甲烷(20mL)中的6-硝基甲基-[1,4]二氧杂环庚烷-6-醇(0.74g,4.18mmol)和三乙胺(1.86g,2.56mL,18.4mmol)的搅拌混合物冷却至-78℃，并逐滴添加甲磺酰氯化物(1.43g,970μL,12.5mmol)。搅拌反应混合物30min，然后用饱和的氯化铵溶液淬灭。从冷水浴中移出混合物，并升温至环境温度。分离有机层，并用二氯甲烷萃取水层。合并的有机提取物通过无水硫酸钠干燥，过滤并蒸发。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用戊烷/二乙醚3:1至1:1的梯度，获得作为黄色油的标题化合物(512mg,77％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ3.81-3.90(m,4H),4.36(d,J＝0.5Hz,2H),5.04(d,J＝2.5Hz,2H),7.02(t,J＝2.5Hz,1H).LCMS(m/z)182.1.0[M+Na],Tr＝1.04min。
化合物57c 6-硝基甲基-6-乙烯基-[1,4]二氧杂环庚烷
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通过鼓吹氮气，对甲苯(13mL)和水(3.25mL)的混合物除去氧气20min。然后将其添加到6-硝基亚甲基-[1,4]二氧杂环庚烷(512mg,3.22mmol)中。添加2,2’-双(二苯基膦)-1,1’-联萘(218mg,0.35mmol)和乙烯基三氟硼酸钾(1.73g,12.9mmol)，通过鼓吹氮气将混合物除去氧气5min。添双(1,5-环锌二烯)四氟硼酸铑(I)(131mg,0.32mmol)，搅拌反应混合物，并在氮气下回流加热4.5h。使混合物冷却，并在二乙醚与水之间分离。分离水层，用二乙醚提取，合并的有机提取物通过无水硫酸钠干燥，过滤并蒸发。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷/二乙醚3:1至13:7的梯度，获得作为浅棕色油的标题化合物(155mg,26％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ3.77-3.93(m,8H),4.64(s,2H),5.22(d,J＝17.9Hz,1H),5.30(d,J＝11.2Hz,1H),5.79(dd,J＝17.8,11.2Hz,1H).LCMS(m/z)210.1[M+Na],Tr＝1.51min。
化合物57d 6-乙烯基-[1,4]二氧杂环庚烷-6-羧酸
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在氮气下，添加乙酸(684mg,652μL,11.4mmol)和亚硝酸钠(237mg,3.43mmol)到N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中的6-硝基甲基-6-乙烯基-[1,4]二氧杂环庚烷(214mg,1.14mmol)的搅拌溶液中。将混合物在40℃下加热23h，冷却。用盐酸(2M)将混合物酸化到pH 1，并用二乙醚(3x)萃取水层。用水洗涤合并的有机提取物，通过无水硫酸镁干燥，过滤并蒸发。用甲苯共沸除掉残留的N,N-二甲基甲酰胺，获得作为黄色凝胶的标题化合物(79mg,40％)。用氯化钠饱和原始水层，并用二乙醚提取，用水洗涤合并的有机提取物，通过无水硫酸镁干燥，过滤并蒸发。用甲苯共沸除掉残留的N,N-二甲基甲酰胺，获得作为黄色凝胶的标题化合物(22mg,11％)。最后合并两种凝胶(101mg,51％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ3.76-3.93(m,4H),3.88(d,J＝12.5Hz,2H),4.35(d,J＝12.7Hz,2H),5.26(d,J＝17.8Hz,1H),5.27(d,J＝10.9Hz,1H),5.79(dd,J＝17.4,10.9Hz,1H).LCMS(m/z)195.2[M+Na],Tr＝0.96min。
化合物57e 6-((E)-2-{2-[(R)-1-({(S)-1-[(S)-2-((S)-2-羟基-3-甲基-丁酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羰基}-氨基)-乙基]-喹啉-7-基}-乙烯基)-[1,4]二氧杂环庚烷-6-羧酸
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通过鼓吹氮气，对1,4-二恶烷(2mL)中的(S)-1-[(S)-2-((S)-2-羟基-3-甲基-丁酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羧酸[(R)-1-(7-溴-喹啉-2-基)-乙基]-酰胺(68mg,0.128mmol)、6-乙烯基-[1,4]二氧杂环庚烷-6-羧酸(22mg,0.128mmol)、三乙胺(39mg,54μL,0.384mmol)和三(o-甲苯基)膦(8mg,0.026mmol)的混合物除去氧气5min，然后在氮气下升温至50℃，同时搅拌。添三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(12mg,0.013mmol)，将混合物回流40min，然后冷却。过滤悬浮液，蒸发滤出液，获得粗的标题化合物，其可以直接用于接下来的阶段。LCMS(m/z)626.2[M+H],Tr＝1.67min。
化合物57
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在氮气下，通过注射泵，2.5h添加二氯甲烷(5mL)中的粗的6-((E)-2-{2-[(R)-1-({(S)-1-[(S)-2-((S)-2-羟基-3-甲基-丁酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羰基}-氨基)-乙基]-喹啉-7-基}-乙烯基)-[1,4]二氧杂环庚烷-6-羧酸(0.128mmol)的溶液到二氯甲烷(38mL)中的粉末状![]()
分子筛(～1g)、2-甲基-6-硝基苯甲酸酐(88mg,0.256mmol)和4-(二甲氨基)-吡啶(63mg,0.512mmol)的搅拌混合物中。用二氯甲烷(1mL)洗涤原始含有粗的酸的烧瓶，并大约10min添加到反应混合物中。搅拌反应混合物1h，然后通过硅藻土过滤，并连续用冰冷的饱和氯化铵溶液、冰冷的饱和碳酸氢钠溶液、饱和的盐水洗涤，然后通过无水硫酸钠干燥，过滤并蒸发。残留物通过反相制备性HPLC进行纯化，使用乙腈/水1:9至7:3的梯度，其含有0.1％甲酸，用二乙醚研磨后，获得作为白色固体的标题化合物(6.5mg,8％,2步)。1H NMR(300MHz,CD3OD)δ1.04(d,J＝6.7Hz,3H),1.08(d,J＝6.7Hz,3H),1.53-1.73(m,2H),1.60(d,J＝6.7Hz,3H),1.66(d,J＝7.4Hz,3H),1.90-2.00(m,1H),2.10-2.28(m,2H),2.63-2.75(m,1H),3.57-3.65(m,1H),3.76-3.91(m,5H),4.13(d,J＝12.5Hz,1H),4.38(d,J＝12.7Hz,1H),4.38-4.46(m,1H),4.53(d,J＝12.7Hz,1H),5.07(q,J＝6.7Hz,1H),5.35(d,J＝9.2Hz,1H),5.76-5.86(m,1H),6.30(d,J＝16.5Hz,1H),6.49(d,J＝16.5Hz,1H),7.46(d,J＝8.5Hz,1H),7.68-7.73(m,2H),7.85(d,J＝8.9Hz,1H),8.19(br s,1H),8.25(d,J＝8.5Hz,1H).LCMS(m/z)608.2[M+H],Tr＝2.12min。
实施例58，化合物58
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化合物58a.(S)-4-异丙基-3-((S)-2-甲氧基甲基-2-甲基-丁-3-烯酸酰基)-恶唑烷-2-酮
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在氮气下，于-78℃逐滴添加甲苯中的双(三甲基硅基)氨基钠(0.6M,54mL,32mmol)的溶液到无水甲苯(40mL)中的(S)-4-异丙基-3-((E)-2-甲基-丁-2-烯酸酰基)-恶唑烷-2-酮(根据实施例29c中报道的方法制备，但是使用恶唑烷酮的相反对映异构体)(4.44 g,21mmol)的溶液中。添加完成时，将反应混合物保持在-78℃下搅拌另外的30min。缓慢添加氯甲基甲酯(3.38g,42mmol)。在-60℃下保持搅拌30min，然后搅拌1h，同时将温度升至0℃。添加饱和的氯化铵溶液(230mL)，将混合物保留在室温搅拌10min。用乙酸乙酯(2x)萃取水层，而且用盐水洗涤合并的有机层，通过无水硫酸钠干燥并过滤。蒸发滤出液。粗的残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用Biotage KP-Sil 100g筒，用异己烷/乙酸乙酯1:0至9:1的梯度洗脱，获得作为无色油的标题化合物(2.55g,48％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ0.80-1.00(m,6H),1.50(s,3H),2.25-2.45(m,1H),3.35(s,3H),3.46(d,J＝8.7Hz,1H),4.16-4.23(m,2H),4.28(app t,J＝8.2Hz,1H),4.45-4.60(m,1H),5.01(d,J＝17.6Hz,1H),5.12(d,J＝10.7Hz,1H),6.19(dd,J＝17.6,10.7Hz,1H).LCMS(m/z)255.3[M+H],Tr＝2.58min。
化合物58b(S)-2-甲氧基-2-甲基-丁-3-烯酸
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在0℃下，添加过氧化氢(30％solution,3mL,29.35mmol)和氢氧化锂一水合物(0.59g,11.75mmol)到四氢呋喃(30mL)和水(15mL)中的(S)-4-异丙基-3-((R)-2-甲氧基甲基-2-甲基-丁-3-烯酸酰基)-恶唑烷-2-酮(1.5g,5.87mmol)的搅拌溶液中。将反应混合物在0℃下搅拌3h以后，然后用饱和的焦亚硫酸钠处理，并用逐滴添加盐酸(10M)将溶液的pH调节到1。用乙酸乙酯(2x)萃取水层，而且用盐水洗涤合并的有机层，通过无水硫酸钠干燥，并过滤。蒸发滤出液。粗的残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用Biotage KP-Sil 50g筒，用异己烷/乙酸乙酯1:0至3:1的梯度洗脱，获得作为无色油的标题化合物(0.546g,65％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ1.36(s,3H),3.42(s,3H),3.45(d,J＝8.9Hz,1H),3.62(d,J＝8.9Hz,1H),5.20-5.30(m,2H),6.01(dd,J＝17.6,10.7Hz,1H),9.80-11.80(br.s,1H)。
化合物58c(E)-(S)-4-[2-((R)-1-叔丁氧基羰基氨基-乙基)-喹啉-7-基]-2-甲氧基甲基-2-甲基-丁-3烯酸
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添加乙腈(2mL)和1,4-二恶烷(6mL)到装有[(R)-1-(7-溴-喹啉-2-基)-乙基]-氨基甲酸叔丁基酯(706mg,2mmol)、(S)-2-甲氧基甲基-2-甲基-丁-3-烯酸(290mg,2mmol)、三(o-甲苯基)膦(610mg,2mmol)和N,N-二环己基-甲基-胺(0.85mL,4mmol)的小瓶中。用氮气净化小瓶。添加醋酸钯(II)(450mg,2mmol)。将小瓶密封，并在130℃下通过微波辐射1h。然后用饱和的硫酸氢钾溶液处理混合物。用乙酸乙酯(2x)萃取水层，用盐水洗涤合并的有机层，通过无水硫酸钠干燥，过滤。蒸发滤出液。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用Biotage KP-Sil 100g筒，用乙酸乙酯/甲醇1:0至41:9的梯度洗脱，获得作为琥珀色油的标题化合物(0.176g,21％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ1.45(s,9H),1.54(s,3H),1.57(d,J＝6.5Hz,3H),3.47(s,3H),3.62(d,J＝8.7Hz,1H),3.77(d,J＝8.7Hz,1H),4.90-5.10(m,1H),6.60-6.85(m,2H),7.34(d,J＝8.4Hz,1H),7.61(d,J＝8.4Hz,1H),7.75(d,J＝8.4Hz,1H),8.06-8.17(m,2H).LCMS(m/z)415.3[M+H],Tr＝2.11min。
化合物58d(S)-1-[(S)-2-((S)-2-{(E)-(S)-4-[2-((R)-1-叔丁氧基羰基氨基-乙基)-喹啉-7-基]-2-甲氧基甲基-2-甲基-丁-3-烯酸酰氧基}-3-甲基-丁酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯-乙酯
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添加(S)-1-[(S)-2-((S)-2-羟基-3-甲基-丁酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯-乙酯(205mg,0.47mmol)、4-二甲基氨基吡啶(116mg,0.95mmol)、N,N-二异丙基乙胺(123mg,0.95mmol)和2-甲基-6-硝基苯甲酸酐(164mg,0.47mmol)到二氯甲烷(2mL)(E)-(S)-4-[2-((R)-1-叔丁氧基羰基氨基-乙基)-喹啉-7-基]-2-甲氧基甲基-2-甲基-丁-3-烯酸(176mg,0.34mmol)的溶液中。室温搅拌反应混合物18h，然后用饱和的碳酸氢钠溶液处理，用二氯甲烷(2x)提取，而且用盐水洗涤合并的有机层，通过无水硫酸钠干燥，并过滤。蒸发滤出液。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用Biotage KP-Sil 50g筒，用异己烷/乙酸乙酯9:1至0:1的梯度洗脱，获得作为黄色固体的标题化合物(0.22g,78％)。 1H NMR(300MHz,CDCl3)δ0.85-1.10(m,6H),1.20-1.70(m,23H),2.05-2.20(m,1H),2.30-2.45(m,1H),3.44(s,3H),3.60-3.95(m,4H),4.15-4.32(m,1H),4.68-4.70(m,1H),4.90-5.05(m,2H),5.20-5.45(m,1H),6.10-6.28(m,1H),6.60-6.85(m,2H),7.10-7.20(m, 1H),7.28(d,J＝8.4Hz,1H),7.66-7.74(m,2H),8.00(d,J＝4.0Hz,1H),8.05(d,J＝8.4Hz,1H).LCMS(m/z)828.5[M+H],Tr＝3.48min。
化合物58
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添加锌粉(190mg,2.92mmol)和水(1.5mL)中的醋酸铵(153mg,1.99mmol)的溶液到四氢呋喃(3mL)中的(S)-1-[(S)-2-((S)-2-{(E)-(S)-4-[2-((R)-1-叔丁氧基羰基氨基-乙基)-喹啉-7-基]-2-甲氧基甲基-2-甲基-丁-3-烯酸酰氧基}-3-甲基-丁酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯-乙酯(0.22g,0.265mmol)的溶液中。将得到的溶液搅拌24h。混合物通过硅藻土板过滤，用饱和的硫酸氢钾洗涤滤出液。用乙酸乙酯萃取水层。用盐水洗涤合并的有机层，通过无水硫酸钠干燥，并过滤。蒸发滤出液，然后与甲苯共蒸发，获得琥珀色油，其用1,4-二恶烷(4M,4mL)中的氯化氢处理。搅拌1h以后，蒸发挥发物，获得粗的固体，其溶于无水二氯甲烷(20mL)和无水N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中。添加N,N-二异丙基乙胺(66mg,0.515mmol)和2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲烷铵(59mg,0.155mmol)。将混合物搅拌1.5h，然后添加水，有机层通过相分离玻璃器玻璃过滤。蒸发有机滤出液，然后与甲苯共蒸发，获得琥珀色油。粗的残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用Biotage KP-Sil 10g筒，用异己烷/乙酸乙酯9:1至0:1的梯度，然后通过反相制备性HPLC纯化30min，用水/乙腈13:7至13:12洗脱，获得标题化合物。
化合物58(2.83mg,4.8％)，作为白色固体。1H NMR(300MHz,CD3OD)δ1.02(d,J＝6.7Hz,3H),1.08(d,J＝6.7Hz,3H),1.48(s,3H),1.50-1.80(m,7H),1.91-2.03(m,1H),2.11-2.22(m,1H),2.24-2.34(m,1H),2.65-2.78(m,1H),3.39(s,3H),3.43(d,J＝8.5Hz,1H),3.54-3.67(m,1H),3.99(d,J＝8.5Hz,1H),4.40-4.50(m,1H),5.02-5.20(m,2H),5.30(d,J＝8.9Hz,1H),5.82(q,J＝7.1Hz,1H),6.31(d,J＝16.5Hz,1H),6.64(d,J＝16.5Hz,1H),7.46(d,J＝8.5Hz,1H),7.64(dd,J＝8.2,1.5Hz,1H),7.79(s,1H),7.85(d,J＝8.5Hz,1H),8.26(d,J＝8.5Hz,1H).LCMS(m/z)580.2[M+H],Tr＝2.45min。
实施例59,化合物59
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化合物59a：
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添加水(8ml)中的亚硝酸钠(1.1g,16mmol)的溶液到1M硫酸(16ml,1M水溶液)中的L-缬氨酸-d8(CAS Number:35045-72-8；C/D/N Isotopes Inc.)(1g,8mmol)的溶液中，其冷却至0℃。添加期间将温度保持在低于5℃，并在该温度下搅拌混合物过夜。然后用硫酸铵饱和该溶液，用二乙醚(3x25ml)提取，通过硫酸钠干燥，并减压蒸发，获得作为无色油的标题化合物(0.68g,67％)，其静置时结晶。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ无信号.LCMS(m/z)125.0[M-H],Tr＝0.65min。
化合物59b：
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在冰水浴中冷却二氯甲烷(30mL)中的1d(866mg,2mmol)的溶液。在氮气下，于0℃逐滴添加三甲基硅基三氟甲烷磺酸酯(667mg,3mmol)，将得到的溶液在室温下搅拌30min。蒸发反应混合物到干燥，并将得到的粗残留物(LCMS(m/z)332.2/334.3[M+H],Tr＝2.06min)溶于无水二氯甲烷(20mL)中，并冷却至0℃。添加59a(252mg,2.2mmol)、N,N-二异丙基乙胺(0.86mL,5mmol)和(苯并三唑-1-基氧基)-三(二甲基氨基)膦六氟磷酸酯(1062mg,2.4mmol)到其中。将反应升温至室温，并搅拌8h。蒸发混合物到干燥，将残留物溶于乙酸乙酯(100mL)，用10％柠檬酸(100mL)、饱和的NaHCO3(100 mL)和盐水(100mL)洗涤。有机层通过MgSO4干燥，添加1体积当量的己烷，将该溶液通过5cm的硅胶层过滤，用50mL的乙酸乙酯/己烷混合物(1/1)洗涤硅胶层。用乙酸乙酯(100mL)洗涤出想要的产物，减压浓缩，并与二氯甲烷共同蒸馏。高真空下干燥1天以后，分离59b(878mg,定量生产)。
化合物59c：
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将2-甲基-6-硝基苯甲酸酐(344mg,1mmol)、4-二甲基氨基吡啶(128mg,1.05mmol)、Boc-保护的喹啉羧酸(192mg,0.50mmol)和无水二氯甲烷(20mL)放置到烤箱干燥的、氩气净化的烧瓶中。添加N,N-二异丙基乙胺(0.26mL,1.50mmol)到得到的溶液中，并在室温下搅拌该反应混合物10min。通过注射器逐滴添加59b(331mg,0.75mmol)，作为无水二氯甲烷(10mL)中的溶液。室温搅拌12h以后，将反应混合物转到分液漏斗中，并用水(添加20mL,10mL盐水来支持分离)洗涤。用二氯甲烷(20mL)提取水相。用盐水(20mL)洗涤合并的有机提取物，通过硫酸镁干燥，过滤并减压浓缩。残留物通过硅胶色谱进行纯化(从异己烷中0-40％乙酸乙酯+甲醇(4/1)的梯度)，蒸发以后，获得作为白色固体的59c(391mg,97％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.28(d,J＝8.5Hz,1H),7.97(s,1H),7.87(d,J＝8.5Hz,1H),7.81(d,J＝8.5Hz,1H),7.52(d,J＝8.5Hz,1H),6.90–6.71(m,2H),5.49–5.34(m,2H),5.50–4.98(m,2H),4.87–4.79(m,2H),4.17–4.10(m,1H),4.90–4.80(m,2H),2.15–2.06(m,1H),1.99–1.85(m,2H),1.82–1.72(m,1H),1.72–1.62(m,1H),1.58(d,J＝5.8Hz,3H),1.52(d,J＝7.1Hz,3H),1.47(s,9H),1.32(dd,J＝13.9,6.9Hz,6H).LCMS(m/z)806.2/808.1[M+H],Tr＝2.82min。
化合物59
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添加水(10mL)中的氢氧化锂的溶液到四氢呋喃(20mL)中的59c(390mg,0.48mmol)中。室温搅拌2h以后，添加1M盐酸(0.55mL 1M水中的溶液,0.55mmol)，并减压浓缩反应混合物，而且残留物在二氯甲烷(50mL)与水(50mL)之间分离。收集有机层，减压浓缩，并在高真空下干燥1天。在氩气和室温下，用1,4-二恶烷(10mL,40mmol)中的4M氯化氢处理残留物4h。减压浓缩反应混合物。将该残留物溶于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)，并将获得的溶液添加到氩气净化的烧瓶中，该烧瓶中含有2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲烷铵(276mg,0.73mmol)、N,N-二异丙基乙胺(312mg,2.42mmol)和二氯甲烷(200mL)。反应混合物用氩气再次净化，并室温下搅拌2h。用水(100ml)和盐水(100ml)洗涤获得的反应混合物，通过硫酸镁干燥，过滤，并减压浓缩。残留物通过硅胶色谱进行纯化(从异己烷中0-40％乙酸乙酯+甲醇(4/1)的梯度)，蒸发以后，获得作为白色固体的59(137mg,51％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.27(d,J＝8.5Hz,1H),7.86(d,J＝8.4Hz,1H),7.80(s,1H),7.64(dd,J＝8.5,1.6Hz,1H),7.46(d,J＝8.5Hz,1H),6.56(d,J＝16.3Hz,1H),6.38(d,J＝16.3Hz,1H),5.82(q,J＝7.3Hz,1H),5.11(q,J＝6.7Hz,1H),4.45(dd,J＝13.0,3.5Hz,1H),3.62(dd,J＝11.8,2.8Hz,1H),2.72(td,J＝13.0,3.3Hz,1H),2.40–2.65(m,1H),2.02–1.94(m,1H),1.77–1.68(m,2H),1.65(d,J＝7.3Hz,3H),1.60(d,J＝6.7Hz,3H),1.55(s,3H),1.44(s,3H).LCMS(m/z)558.4[M+H],Tr＝2.41。
实施例60，化合物60
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化合物60a：
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添加水(8ml)中的亚硝酸钠(1.0g,15mmol)的溶液到1M硫酸(15ml,1M水溶液)中的(2S,3R)-2-氨基-3-甲氧基丁酸(CAS Number:4144-02-9；Ark Pharm,Inc.)(1g,7.5mmol)的溶液中，其冷却至0℃。添加期间将温度保持在低于5℃，并在该温度下搅拌 混合物过夜。然后用硫酸铵饱和该溶液，用二乙醚(5x25ml)提取，通过硫酸钠干燥，并减压蒸发，获得作为无色油的60a(0.27g,67％)，其静置时结晶。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ4.14(d,J＝3.6Hz,1H),3.81(qd,J＝6.4,3.6Hz,1H),3.41(s,3H),1.25(d,J＝6.4Hz,3H).LCMS(m/z)132.9[M-H],Tr＝0.39min。
化合物60b：
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在冰水浴中冷却二氯甲烷(20mL)中的1d(517mg,1.19mmol)的溶液。在氩气下，于0℃逐滴添加三甲基硅基三氟甲烷磺酸酯(398mg,1.79mmol)，将得到的溶液在室温下搅拌30min。蒸发反应混合物到干燥，并将得到的粗残留物(LCMS(m/z)332.2/334.3[M+H],Tr＝2.06min)溶于无水二氯甲烷(20mL)中，并冷却至0℃。添加60a(192mg,1.43mmol)、N,N-二异丙基乙胺(0.51mL,2.98mmol)和(苯并三唑-1-基氧基)-三(二甲基氨基)膦六氟磷酸酯(633mg,1.43mmol)到其中。将反应升温至室温，并搅拌8h。蒸发混合物到干燥，将残留物溶于乙酸乙酯(100mL)，用10％柠檬酸(100mL)、饱和的NaHCO3(100mL)和盐水(100mL)洗涤。有机层通过MgSO4干燥，添加1体积当量的己烷，将该溶液通过5cm的硅胶层过滤，用50mL的乙酸乙酯/己烷混合物(1/1)洗涤硅胶层。用乙酸乙酯(100mL)洗涤出想要的产物，减压浓缩，并与二氯甲烷共同蒸馏。高真空下干燥1天以后，分离60b(537mg,定量生产)。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ5.53(q,J＝6.9Hz,1H),5.10(d,J＝12.1Hz,1H),4.92(d,J＝12.2Hz,1H),3.96(d,J＝2.6Hz,1H),3.94(dd,J＝7.1,4.7Hz,1H),3.86(qd,J＝6.4,2.5Hz,1H),3.81–3.60(m,2H),3.42(s,3H),2.34–2.14(m,1H),2.09–1.90(m,2H),1.87–1.76(m,1H),1.41(d,J＝6.9Hz,3H),1.32(d,J＝6.4Hz,3H).LCMS(m/z)448.1/450.0[M+H],Tr＝2.11min。
化合物60c：
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将2-甲基-6-硝基苯甲酸酐(172mg,0.5mmol)、4-二甲基氨基吡啶(64mg,0.50mmol)、N-Boc保护的(R,E)-4-(2-(1-(叔丁氧基羰基氨基)乙基)喹啉-7-基)-2,2二甲基丁-3-烯酸(96mg,0.25mmol)和无水二氯甲烷(10mL)放置到烤箱干燥的、氩气净化的烧瓶中。添加N,N-二异丙基乙胺(0.13mL,0.75mmol)到得到的溶液中，并在室温下搅拌该反应混合物10min。通过注射器逐滴添加60b(168mg,0.38mmol)，作为无水二氯甲烷(10mL)中的溶液。室温搅拌12h以后，将反应混合物转到分液漏斗中，并用水(添加20mL,10mL盐水来支持分离)洗涤。用二氯甲烷(20mL)提取水相。用盐水(20mL)洗涤合并的有机提取物，通过硫酸镁干燥，过滤并减压浓缩。残留物通过硅胶色谱进行纯化(从异己烷中0-40％乙酸乙酯+甲醇(4/1)的梯度)，蒸发以后，获得作为白色固体的60c(149mg,73％)。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ8.35(d,J＝8.6Hz,1H),8.07–8.01(m,1H),7.93(d,J＝8.5Hz,1H),7.88(d,J＝8.4Hz,1H),7.58(d,J＝8.5Hz,1H),6.98–6.77(m,2H),5.48(q,J＝6.5,6.1Hz,1H),5.20(d,J＝4.0Hz,1H),5.06(d,J＝12.1Hz,1H),4.88(d,J＝12.1Hz,1H),4.25–4.15(m,1H),3.99–3.85(m,2H),3.80–3.55(m,2H),3.46(s,3H),2.20–2.09(m,1H),2.07–1.94(m,1H),1.92–1.80(m,1H),1.80–1.71(m,1H),1.68–1.64(m,6H),1.59(d,J＝7.1Hz,3H),1.54(s,9H),1.37(d,J＝7.0Hz,3H),1.29(d,J＝6.4Hz,3H).LCMS(m/z)814.1/816.1[M+H],Tr＝2.64min。
化合物60
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添加水(5mL)中的氢氧化锂(4.5mg,0.19mmol)的溶液到四氢呋喃(10mL)中的60c(139mg,0.17mmol)中。室温搅拌2h以后，添加1M盐酸(0.20mL 1M水中的溶液, 0.20mmol)，并减压浓缩反应混合物，而且残留物在二氯甲烷(50mL)与水(50mL)之间分离。收集有机层，减压浓缩，并在高真空下干燥1天。在氩气和室温下，用1,4-二恶烷(5mL,20mmol)中的4M氯化氢处理残留物4h。减压浓缩反应混合物。将该残留物溶于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)，并将获得的溶液添加到氩气净化的烧瓶中，该烧瓶中含有2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲烷铵(98mg,0.26mmol)、N,N-二异丙基乙胺(110mg,0.86mmol)和二氯甲烷(100mL)。反应混合物用氩气再次净化，并室温下搅拌2h。用水(50ml)和盐水(50ml)洗涤获得的反应混合物，通过硫酸镁干燥，过滤，并减压浓缩。残留物通过硅胶色谱进行纯化(从异己烷中0-60％乙酸乙酯+甲醇(4/1)的梯度)，蒸发以后，获得作为白色固体的60(32mg,33％)。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ8.24(d,J＝8.5Hz,1H),7.83(d,J＝8.4Hz,1H),7.81(s,1H),7.61(dd,J＝8.4,1.6Hz,1H),7.43(d,J＝8.5Hz,1H),6.54(d,J＝16.3Hz,1H),6.37(d,J＝16.3Hz,1H),5.78(q,J＝7.2Hz,1H),5.44(d,J＝8.2Hz,1H),5.08(q,J＝6.7Hz,1H),4.41(dd,J＝13.5,3.4Hz,1H),3.77–3.63(m,1H),3.59(dd,J＝11.8,2.9Hz,1H),3.41(s,3H),2.68(td,J＝12.9,3.1Hz,1H),2.31–2.24(m,1H),1.99–1.91(m,1H),1.72–1.64(m,2H),1.61(d,J＝7.2Hz,3H),1.57(d,J＝6.7Hz,3H),1.53(s,3H),1.42(s,3H),1.26(d,J＝6.4Hz,3H).LCMS(m/z)566.3[M+H],Tr＝2.42min。
实施例61，化合物61
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化合物61a
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添加HCl溶液(1.2mL,4M,二恶烷中,1M)到1d(500.3mg,1.16mmol)中。搅拌18h以后，真空浓缩反应，获得作为非晶形浅黄色固体的游离二肽(free dipetide)。
添加TMSCl(0.35mL,2.77mmol)到DMF(10mL,0.3M)中的L-(+)-乳酸(252.3mg,2.80mmol)中，接着添加i-Pr2NEt(1.0mL,5.74mmol)。3h以后，添加HATU(1.08g,2.84mmol)。10min以后，添加游离二肽(free dipetide)到DMF(11.5mL,1M)中。60min以后，真空浓缩反应到5mL，用EtOAc(10mL)稀释，并用水(10mL)洗涤。用EtOAc(2x10mL)提取水溶液，并用5％aq.LiCl(5x20mL)和盐水(20mL)洗涤合并的有机物，通过MgSO4干燥，并真空浓缩。化合物通过柱层析(0-100％EtOAc/己烷)进行纯化，获得作为白色泡沫的61a(346.6g,74％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.22(d,J＝8.1Hz,1H),5.36(p,J＝6.9Hz,1H),4.95(d,J＝11.9Hz,1H),4.72(d,J＝11.9Hz,1H),4.34(d,J＝12.1Hz,1H),4.23(q,J＝6.8Hz,1H),3.70(m,1H),3.16(m,1H),2.91(m,1H),2.18(m,1H),1.94(m,1H),1.72(m,2H),1.49(dd,J＝7.1,3.4Hz,2H),1.43(t,J＝7.0Hz,3H),1.34(d,J＝6.9Hz,3H).LCMS(m/z)477.85[M+H]。
化合物61b
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在氩气下，于0℃，添加i-Pr2NEt(0.16mL,0.936mmol)到DCM(2.2mL,0.1M)中的N-Boc(R,E)-4-(2-(1-(叔丁氧基羰基氨基)乙基)喹啉-7-基)-2,2-二甲基丁-3-烯酸(150.9mg,0.390mmol)、61a(191.6mg,0.468mmol)和DMAP(115.3mg,0.936mmol)中，接着添加2-硝基-6-硝基苯甲酸酐(278.6mg,0.780mmol)。将反应升温至室温，60min后，用DCM(10mL)稀释，用饱和的NH4Cl(aq)(15mL)洗涤。用DCM(2x15mL)提取水溶液。用H2O(50mL)洗涤合并的有机物，通过MgSO4干燥，并真空浓缩。化合物通过柱色谱(0-75％EtOAc/己烷)进行纯化，获得作为黄色油的61b(214.8mg,71％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.11(d,J＝7.4Hz,1H),8.04(m,2H),7.72(d,J＝8.8Hz,1H),7.65(d,J＝8.4Hz,1H),6.70(dd,J＝20.5,10.7Hz,4H),5.22(m,2H),4.94(dd,J＝11.8,8.2Hz,3H),4.71(d,J＝11.9Hz,2H),4.32(m,1H),3.68(m,2H),2.82(m,3H),2.16(m,1H),1.89(m,1H),1.68(m,2H),1.54(s,6H),1.51(d,J＝7.5Hz,6H),1.47(s,9H),1.42(d,J＝6.8Hz,3H),1.29(m,3H)..LCMS(m/z)770.17[M+H]。
化合物61
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在0℃下，添加0.3M NaOH(aq)(0.93mL,0.249mmol)到THF(2.8mL,0.1M)中的61b(214.8mg,0.279mmol)中。40min以后，将1M HCl(aq)(0.29mL)将反应淬灭到～pH 4。然后用EtOAc(15mL)稀释混合物，用水(3x5mL)和盐水(10mL)洗涤，通过MgSO4干燥，并真空浓缩，获得黄色泡沫(190.1mg)。该粗的材料溶于二恶烷(1mL)中，并添加HCl溶液(3mL,4M,二恶烷中)。18h以后，真空浓缩悬浮液，获得黄色固体(175.3mg)。该粗的材料溶于DMF(5mL)中，用DCM(750mL,0.0003M)稀释，并添加i-Pr2NEt(0.30mL,1.62mmol)，接着添加HATU(151.9mg,0.400mmol)。20min以后，用5％LiCl(aq)(2x500mL)和盐水(500mL)洗涤混合物，通过MgSO4干燥，并真空浓缩，获得橙色残留物。用DCM/tBME研磨该混杂物，获得作为黄色残留物的61(68.0mg,47％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.98(s,1H),8.25(s,1H),8.11(s,1H),7.74(d,J＝7.0Hz,2H),7.45(s,2H),6.69(d,J＝15.4Hz,2H),6.43(d,J＝16.1Hz,1H),5.80(m,1H),5.41(m,1H),4.57(d,J＝8.9Hz,2H),4.15(s,1H),3.77(m,1H),3.66(m,4H),3.55(m,2H),3.08(m,2H),2.58(m,1H),1.97(d,J＝14.1Hz,1H),1.56(m,6H),1.44(m,6H)..LCMS(m/z)522.23[M+H].Rt＝4.75min。
实施例62，化合物62
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化合物62a
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添加2,2-二甲氧基丙烷(75mL,1M)到L-(-)-苹果酸(10g,74.6mol)和对甲苯磺酸一水合物(172.5mg,7.46mmol)中。18h以后，添加水(50mL)和NaHCO3(72.3mg)，用DCM(3x100mL)提取混合物。合并的有机物通过MgSO4干燥，并真空浓缩，获得黄色油。该材料通过用Et2O/己烷结晶进行纯化，获得作为白色固体的62a(11.2g,88％)。 1H NMR(400MHz,CDCl3):δ4.72(dd,J＝6.6,3.9Hz,1H),3.00(dd,J＝17.3,3.9Hz,1H),2.86(dd,J＝17.3,6.6Hz,1H),1.63(s,3H),1.57(s,3H)。
化合物62b
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在0℃下，添加草酰氯(0.23mL,2.66mmol)到DCM(22mL,0.1M)中的62a(385.9g,2.21mmol)中，接着添加一滴DMF。将反应升温至室温，并搅拌60min。然后真空浓缩反应，获得淡黄色针状物。将粗的残留物溶于甲苯(22mL,0.1M)中，并添加Pd/BaSO4(111.9mg)。混合物用H2净化，并回流3h。然后将混合物冷却至室温，通过硅藻土过滤，用EtOAc漂洗，并真空浓缩，获得作为黄色油的62b(160mg,47％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.78(s,1H),4.79(dd,J＝7.0,3.5Hz,1H),3.09(dd,J＝18.3,3.5Hz,1H),2.92(dd,J＝18.3,7.0Hz,1H),1.63(s,3H),1.58(s,3H)。
化合物62c
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在-15℃下，添加DAST(0.88mL,6.66mmol)到DCM(11mL,0.5M)中的62b(1g,5.55mmol)中，将反应缓慢升温至室温。14h以后，用冷的饱和NaHCO3(aq)(10mL)将反应缓慢淬灭。分相，并用DCM(2x15mL)提取水溶液。合并的有机物通过MgSO4干燥，并真空浓缩，获得作为黄色-橙色油的62c(956.2mg,92％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ6.01(tdd,J＝56.1,5.4,4.1Hz,1H),4.53(ddd,J＝8.4,4.0,0.8Hz,1H),2.52–2.36(m,1H),2.32–2.15(m,1H),1.65–1.60(m,3H),1.56–1.53(m,3H).19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-117.10–-119.71(m)。
化合物62d
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添加1M HCl(aq)(5mL,1M)到THF(5mL,1M)中的62c(956.2mg,5.31mmol)中。18h以后，用NaCl饱和反应，用Et2O(2x20mL)和THF(15mL)提取。合并的有机物通过MgSO4干燥，并真空浓缩，获得作为清澈油的62d(654.8mg,88％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ6.06(tdd,J＝56.4,5.5,4.2Hz,1H),4.48–4.39(m,1H),2.51–2.33(m,1H),2.33–2.12(m,1H).19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-117.40–-120.28(m)。
化合物62e
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添加HCl溶液(6.5mL,25.5mmol,4M,二恶烷中的)到二恶烷(2mL)中的1d(2.75g,6.37mmol)中。搅拌18h以后，真空浓缩反应，获得作为非晶形、浅黄色固体的游离二肽(free dipetide)。
添加TMSCl(0.59mL,4.67mmol)到DMF(16mL,0.3M)中的62d(654.8mg,4.67mmol)中，接着添加i-Pr2NEt(2.0mL,11.7mmol)。2h以后，将游离二肽添加到DMF(6mL,1M)中，接着添加i-Pr2NEt(4.0mL,23.4mmol)和HATU(2.66g,7.01mmol)。45min以后，真空浓缩反应到5mL，用饱和的NaHCO3(aq)(50mL)稀释，并用EtOAc(3x50mL)提取。用5％LiCl(aq)(4x50mL)和盐水(100mL)洗涤合并的有机物，通过MgSO4干燥，并真空浓缩。化合物通过柱色谱(50-100％EtOAc/己烷)进行纯化，获得作为褐色泡沫的62e(1.24g,59％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):![]()
6.06(m,1H),5.36(p,J＝7.2Hz,1H),4.95(d,J＝12.0Hz,1H),4.72(d,J＝11.8Hz,1H),4.32(m,2H),3.85(m,1H),3.70(m,1H),2.94(m,1H),2.39(m,1H),2.16(m,2H),1.94(m,1H),1.74(m,2H),1.34(d,J＝6.9Hz,3H).19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-117.56(dt,J＝56.4,16.5Hz).LCMS(m/z)456.03[M+H]。
化合物62f
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在氩气下，添加i-Pr2NEt(0.10mL,0.528mmol)到DCM(2.2mL,0.1M)中的N-Boc(R,E)-4-(2-(1-(叔丁氧基羰基氨基)-乙基)-喹啉-7-基)-2,2-二甲基丁-3-烯酸(98.7mg,0.220mmol)、62e(115.3mg,0.264mmol)和DMAP(66.1mg,0.528mmol)中，接着添加2-甲基-6-硝基苯甲酸酐(115.9mg,0.330mmol)。60min后，用DCM(10mL)稀释反应，用饱和的NH4Cl(aq)(10mL)洗涤。用DCM(10mL)提取水溶液。合并的有机物用H2O(15mL)洗涤，通过MgSO4干燥，并真空浓缩。化合物通过柱色谱(20-100％EtOAc/己烷)进行纯化，获得作为浅黄色泡沫的62f(159.0mg,89％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.02(d,J＝15.5Hz,1H),7.78–7.60(m,3H),7.18(s,1H),6.71(m,2H),5.93(tt,J＝55.9,4.4Hz,1H),5.37(dd,J＝7.5,4.3Hz,1H),5.23(m,1H),4.91(d,J＝11.9Hz,1H),4.69(d,J＝11.9Hz,1H),4.25(d,J＝9.7Hz,1H),3.76(d,J＝11.0Hz,1H),3.64(m,1H),2.84(m 1H),2.48(m,1H),2.15(m,2H),1.88(dt,J＝3.8,2.8Hz,2H),1.67(dq,J＝12.4,6.4Hz,6H),1.55(d,J＝7.0Hz,9H),1.44(s,12H)..19F NMR(376MHz,cdcl3)δ-115.88(ddt,J＝55.4,33.0,17.6Hz).LCMS(m/z)822.19[M+H]。
化合物62
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在0℃下，添加0.3M NaOH(aq)(0.65mL,0.194mmol)到THF(2.0mL,0.1M)中的62f(158.0mg,0.194mmol)中。20min以后，用M HCl(aq)(0.2mL)将反应淬灭到～pH 4。然后用EtOAc(20mL)稀释混合物，用水(3x5mL)和盐水(5mL)洗涤，通过MgSO4干燥，并真空浓缩，获得黄色残留物(153.9mg)。将粗的材料溶于二恶烷(1mL)中，并添加HCl溶液(1mL,4M,二恶烷中的)。2h以后，真空浓缩悬浮液获得黄色固体(202.5mg)。将DMF(2mL,0.1M)中的该粗的材料用DCM(650mL,0.0003M)稀释，并添加i-Pr2NEt(0.17mL,0.982mmol)，接着添加HATU(89.9mg,0.232mmol)。30min以后，用5％LiCl(2x300mL)、饱和的NaHCO3(300mL)和盐水(300mL)洗涤混合物，通过MgSO4干燥，并真空浓缩。粗的材料通过制备性HPLC(Gemini,30-90％MeCN/H2O)进行纯化，获得作为类白色固体的62(39.2mg,36％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.02(s,1H),8.09(d,J＝18.2Hz,2H),7.76(s,1H),7.45(s,1H),6.70(d,J＝16.0Hz,2H),6.43(d,J＝7.9Hz,1H),6.30(d,J＝15.8Hz,1H),5.99(d,J＝55.2Hz,1H),5.74(s,1H),5.48(s,1H),5.23(s,1H),5.11(s,1H),4.92(s,1H),4.56(d,J＝12.9Hz,1H),3.55(m,2H),2.58(t,J＝ 11.7Hz,2H),2.40(m,4H),1.67(m,6H),1.58(m,5H),1.49(m,9H)..19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-117.00(ddt,J＝61.8,56.0,14.9Hz).LCMS(m/z)690.33[M+H].Tr＝5.178min。
实施例63，化合物63
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化合物63a
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在0℃下，缓慢添加2MNaNO2(aq)(11.5mL,10.5mmol)到1M H2SO4(14mL,0.5M)中的(S)-2-氨基-2-环戊基乙酸(1g,6.98mmol)中，并将反应升温至室温。48h以后，将反应冷却回至0℃，添加另外的2M NaNO2(10mL,9.11mmol)，并将反应升温至室温。3天以后，用EtOAc(3x50mL)提取反应，通过Na2SO4干燥，并真空浓缩，获得作为白色固体的63a(925mg,83％)。1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ3.79(d,J＝5.9Hz,1H),2.18–2.04(m,1H),1.63–1.33(m,8H)。
化合物63b
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添加HCl溶液(34mL,0.25M,4M,二恶烷中的)到二恶烷(5mL)中的1d(4g,9.24mmol)中。搅拌18h以后，真空浓缩反应，获得作为非晶形、浅黄色固体的游离二肽(3.69g)。在0℃下，添加(苯并三唑-1-基氧基)三(二甲基氨基)膦六氟磷酸酯(1.25g,4.17mmol)到DCM(35mL,0.05M)中的63a(501.5mg,3.48mmol)、二肽(1.28g,3.48mmol)和i-Pr2NEt(0.61mL,3.48mmol)中，并将反应升温至室温。24h以后，真空浓缩反应。用EtOAc(200mL)稀释残留物，用10％柠檬酸(2x100mL)、饱和NaHCO3(2x100 mL)和盐水(200mL)洗涤，通过Na2SO4干燥，并真空浓缩。通过装有ELSD(0-100％EtOAc/己烷)的柱色谱进行纯化，获得作为金橙色油的63b(458.3mg,20％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ6.95(s,1H),5.35(p,J＝6.8Hz,1H),4.94(d,J＝12.0Hz,1H),4.69(d,J＝12.0Hz,1H),4.30(d,J＝10.2Hz,1H),4.07(d,J＝4.7Hz,1H),3.69(d,J＝7.0Hz,1H),2.92(m,1H),2.20(m,1H),1.91(m,1H),1.72(m,3H),1.55(m,8H),1.32(d,J＝6.8Hz,3H).LCMS(m/z)458.20[M+H]。
化合物63c
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添加醋酸钯(II)(61.5mg,0.272mmol)、三(2-甲基苯基)膦(168mg,0.543mmol)、三乙胺(0.71mL,5.43mmol)到二恶烷(14.5mL,0.125M)中的39a(636mg,1.81mmol)和48f(286mg,1.81mmol)中。在微波反应器中60min将混合物加热到100℃。反应通过硅藻土过滤，用乙酸乙酯漂洗，并真空浓缩。将该粗的材料悬浮于Et2O(15mL)中，并用饱和的NaHCO3(aq)(9x30mL)提取。用1M HCl(aq)把合并的水溶液酸化到～pH 4，用EtOAc(3x500mL)提取，通过MgSO4干燥，并真空浓缩，获得作为黄色泡沫的标题化合物(457mg,59％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.16(m,2H),7.78(s,1H),7.68(s,1H),7.42(s,1H),6.90(d,J＝16.6Hz,1H),6.38(m,2H),5.01(d,J＝5.7Hz,2H),4.85(d,J＝6.1Hz,1H),4.58(m,2H),3.95(m,2H),1.58(s,3H),1.43(s,9H).LCMS(m/z)429.00[M+H]。
化合物63d
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在氩气下，添加i-Pr2NEt(0.15mL,0.84mmol)到DCM(3.5mL,0.1M)中的N-Boc保护的1,3-二恶烷羧酸63c(149.7mg,0.35mmol)、化合物63b(189.3mg,0.42mmol)和DMAP(104.5mg,0.84mmol)中，接着添加2-甲基-6-硝基苯甲酸酐(181.6mg,0.525mmol)。18h以后，用DCM(10mL)稀释反应，用水(3x10mL)洗涤，通过MgSO4干燥，并真空浓缩，获得黄色泡沫，其通过柱色谱(0-100％EtOAc/己烷)进行纯化，获得作为类白色泡沫的63d(192.0mg,51％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):![]()
8.04(s,1H),7.96(s,1H), 7.71(s,1H),7.54(s,1H),7.29(d,J＝7.4Hz,2H),6.74(d,J＝16.7Hz,1H),6.17(d,J＝16.2Hz,2H),5.35(d,J＝4.3Hz,1H),5.32(d,J＝7.1Hz,1H),5.16(d,J＝5.9Hz,1H),4.97(d,J＝6.1Hz,1H),4.92(d,J＝12.0Hz,1H),4.75(d,J＝5.9Hz,1H),4.68(m,3H),4.31(d,J＝12.6Hz,1H),3.73(m,5H),2.85(m,2H),2.13(m,1H),1.76(m,4H),1.58(m,12H),1.45(s,9H),1.27(d,J＝6.9Hz,3H).LCMS(m/z)868.15[M+H]。
化合物63
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在0℃下，添加0.3M NaOH(aq)(0.55mL,0.6.56mmol)到THF(2.2mL,0.1M)中的63c(192.0mg,0.219mmol)中。通过LCMS每小时监控反应，同时添加0.3M NaOH(aq)。3h以后显示反应完成，并用1M HCl(aq)(0.34mL)将反应淬灭调至～pH 4。然后用EtOAc(15mL)稀释混合物，用水(3x5mL)洗涤，通过MgSO4干燥，并真空浓缩，获得黄色泡沫(171.4mg)。将该粗的材料溶于二恶烷(1mL)中，并添加HCl溶液(3mL,4M,二恶烷中的)。60min后，真空浓缩该悬浮液，获得黄色固体(193.1mg)。将该粗的材料溶于DMF(1mL)中，用DCM(100mL)稀释，并添加i-Pr2NEt(0.22mL,1.23mmol)，接着添加HATU(113.8mg,0.295mmol)。30min以后，用5％LiCl(3x100mL)、饱和NaHCO3(100mL)和盐水(100mL)洗涤混合物，通过MgSO4干燥，并真空浓缩获得橙色残留物。该粗的材料通过柱色谱(25-100％EtOAc/己烷)进行纯化，获得作为稍白色的残留物的63(46.0mg,26％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.04(d,J＝5.7Hz,1H),8.16–8.03(m,4H),7.72(d,J＝8.4Hz,2H),7.48(d,J＝8.3Hz,2H),7.24(s,1H),6.76(d,J＝16.4Hz,2H),6.48(d,J＝8.5Hz,1H),6.14(d,J＝16.5Hz,1H),5.90–5.79(m,1H),5.15(m,2H),5.00(d,J＝5.8Hz,1H),4.81(d,J＝6.0Hz,1H),4.57(m,4H),3.91(dd,J＝44.8,11.5Hz,3H),3.56(m,2H),2.57(m,2H),2.43(m,2H),.1.62(m,8H).LCMS(m/z)620.48[M+H].Rt＝2.60min。
实施例64：化合物64
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化合物64a
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在0℃下，缓慢添加2MNaNO2(aq)(15mL,30.19mmol)到1M H2SO4(aq)(12mL,0.5M)中的2-氨基-2-环丁基乙酸(1g,6.04mmol)中，将反应缓慢升温至室温。3天以后， 1H NMR显示没有起始材料，并用EtOAc(3x50mL)提取反应。合并的有机物通过Na2SO4干燥，并真空浓缩，获得作为黄色固体的64a(495.0g,44％)。1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ3.78(d,J＝8.5Hz,1H),2.62(m,1H),1.94(m,4H)。
化合物64b
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在氩气下，添加i-Pr2NEt(0.10mL,0.588mmol)到N-Boc保护的喹啉基1,3-二恶烷羧酸63c(105.3mg,0.245mmol)和三肽(使用64a从描述用于1e的方法制备)(129.9mg,0.294mmol)，以及DCM(3mL,0.1M)中的DMAP(73.5mg,0.588mmol)中，接着添加2-甲基-6-硝基苯甲酸酐(127.0mg,0.268mmol)。18h以后，用DCM(10mL)稀释反应，用水(3x5mL)洗涤，通过MgSO4干燥，并真空浓缩，获得棕色泡沫，其通过柱色谱(0-100％EtOAc/己烷)进行纯化，获得作为类白色泡沫的64b(201.3mg,85％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.06(s,1H),7.98(s,1H),7.73(s,1H),7.54(s,1H),7.31(s,1H),6.76(m,1H),6.18(m,1H),5.32(m,2H),5.17(dd,J＝17.5,5.9Hz,1H),4.90(m,2H),4.74(m,4H),4.38(m,1H),3.79(m,5H),3.00(m,1H),2.86(d,J＝10.3Hz,1H),2.14(m,2H),1.88(m,8H),1.62(m,4H),1.53(s,3H),1.46(s,9H).LCMS(m/z)856.16[M+H]。
化合物64
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在0℃下，添加0.3M NaOH(aq)(0.58mL,0.177mmol)到THF(2.5mL,0.1M)中的64b(201.3mg,0.235mmol)中。通过LCMS每小时监控反应，同时添加0.3M NaOH(aq)。90min以后显示反应完成，并用1M HCl(aq)(0.26mL)将反应淬灭调至～pH 4。然后用EtOAc(15mL)稀释混合物，用水(3x5mL)洗涤，通过MgSO4干燥，并真空浓缩，获得白色泡沫。将该粗的材料溶于二恶烷(1mL)中，并添加HCl溶液(3mL,4M,二恶烷中的)。60min后，真空浓缩该悬浮液，获得黄色固体。将DMF(0.5mL)中的粗的材料用DCM(100mL)稀释，并添加i-Pr2NEt(0.22mL,1.26mmol)，接着添加HATU(119.6mg,0.302mmol)。30min以后，用5％LiCl(3x100mL)、饱和NaHCO3(100mL)和盐水(100mL)洗涤混合物，通过MgSO4干燥，并真空浓缩。该粗的材料通过制备性HPLC(Synergi Polar-RP,40-55％MeCN/H2O)进行纯化，获得作为稍白色残留物的64(3.5mg,2％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.48(s,1H),8.60(s,1H),8.52(s,1H),7.96(s,2H),7.66(d,J＝8.6Hz,1H),6.85(d,J＝16.7Hz,1H),6.35(d,J＝16.6Hz,1H),6.20(d,J＝8.6Hz,1H),5.53(m,1H),5.30(m,1H),4.94(dd,J＝7.2,3.2Hz,2H),4.87(d,J＝5.9Hz,1H),4.48(m,J＝9.8Hz,3H),4.06(d,J＝11.2Hz,1H),3.94(d,J＝11.1Hz,1H),3.76(m,2H),2.68(m,1H),2.54(m,1H),1.92(m,13H),1.64(m,6H).LCMS(m/z)606.46[M+H].Tr＝3.57min(Gemini 5u C18![]()
50×4.60mm 5微米柱,10min,2ml/min,5–100％乙腈/水,0.1％TFA调节剂)。
实施例65，化合物65
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化合物65a
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在0℃下，缓慢添加2MNaNO2(aq)(11.5mL,22.9mmol)到1M H2SO4(aq)(30mL,0.5M)中的L-异亮氨酸(2g,15.2mmol)中，并将反应缓慢升温至室温。7天以后，用(NH4)2SO4饱和该反应，用EtOAc(3x50mL)提取，通过Na2SO4干燥，并真空浓缩，获得作为白色固体的65a(1.25g,57％)。1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ3.77(d,J＝4.9Hz,1H),1.66(m,1H),1.40(m,1H),1.15(1H),0.84(dd,J＝15.0,7.2Hz,6H)。
化合物65b
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添加HCl溶液(13.6mL,1M,4M,二恶烷中的)到1d(5.88g,13.6mmol)中。搅拌18h以后，真空浓缩反应获得作为非晶形浅黄色固体的游离二肽。在0℃下，添加(苯并三唑-1-基氧基)三(二甲基氨基)膦六氟磷酸酯(1.38g,4.54mmol)到DCM(40mL,0.1M)中的65a(492.4mg,3.78mmol)、二肽(1.39g,3.78mmol)和i-Pr2NEt(0.66mL,3.787mmol)中，并将反应缓慢升温至室温。18h以后，真空浓缩反应。用EtOAc(200mL)稀释残留物，用10％柠檬酸(200mL)、饱和NaHCO3(200mL)和盐水(200mL)洗涤，通过Na2SO4干燥，并真空浓缩。通过装有ELSD(0-100％EtOAc/己烷)的柱色谱进行纯化，获得作为白色固体的65b(856.8mg,51％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.18(s,1H),5.39(m,1H),4.95(d,J＝11.9Hz,1H),4.71(d,J＝11.9Hz,1H),4.34(m,1H),4.00(d,J＝3.4Hz,1H),3.70(m,1H),2.93(m,1H),2.18(m 1H),1.89(m,1H),1.73(t,J＝9.7Hz,2H),1.42(m,1H),1.34(d,J＝6.9Hz,3H),1.24(t,J＝8.7,5.6Hz,3H),1.19(m,1H),1.00(d,J＝6.9Hz,3H).LCMS(m/z)46.00[M+H]。
化合物65c
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在氩气下，添加i-Pr2NEt(0.07mL,0.420mmol)到DCM(1.8mL,0.1M)中的N-Boc保护的喹啉基1,3-二恶烷羧酸63c(74.9mg,0.175mmol)、65b(96.2mg,0.175mmol)和DMAP(52.7mg,0.420mmol)中，接着添加2-甲基-6-硝基苯甲酸酐(93.1mg,0.263mmol)。18h以后，用DCM(10mL)稀释反应，用水(3x5mL)洗涤，通过MgSO4干燥，并真空浓缩，获得作为黄色泡沫的65c(185.8mg,99％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.22(s,1H),8.06(d,J＝8.4Hz,1H),7.98(s,1H),7.73(d,J＝8.4Hz,1H),7.31(d,J＝8.4Hz,1H),6.75(d,J＝16.7Hz,1H),6.55(s,2H),6.18(d,J＝16.2Hz,1H),5.34(m,2H),4.98(m,2H),4.73(m,4H),4.33(d,J＝14.7Hz,1H),3.85(dd,J＝27.7,11.0Hz,2H),2.18(dt,J＝15.3,8.4Hz,1H),1.53(d,J＝6.6Hz,3H),1.47(s,9H),1.33(d,J＝6.8Hz,2H),1.29(d,J＝6.8Hz,3H),0.98(d,J＝6.8Hz,3H),0.92(t,J＝7.6Hz,3H).LCMS(m/z)856.51[M+H]。
化合物65
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在0℃下，添加0.3M NaOH(aq)(0.44mL,0.131mmol)到THF(1.8mL,0.1M)中的65c(150mg,0.175mmol)中。通过LCMS每30min监控反应，同时添加0.3M NaOH(aq)。2h以后显示反应完成，并用1M HCl(aq)(0.40mL)将反应淬灭调至～pH 4。然后用EtOAc(15mL)稀释混合物，用水(3x5mL)和盐水(5mL)洗涤，通过MgSO4干燥，并真空浓缩，获得黄色泡沫(116.8mg)。将该粗的材料溶于二恶烷(1mL)中，并添加HCl溶液(3mL,4M,二恶烷中的)。60min后，真空浓缩该悬浮液，获得橙色固体。将DMF(1mL)中的粗的材料用DCM(100mL)稀释，并添加i-Pr2NEt(0.22mL,1.26mmol)，接着添加HATU(305.2mg,0.803mmol)。30min以后，用5％LiCl(3x100mL)、饱和NaHCO3(100mL)和盐水(100mL)洗涤混合物，通过MgSO4干燥，并真空浓缩，获得橙色残留物。该粗的材料通过柱色谱(20-100％MeCN/H2O)进行纯化。残留物溶于EtOAc(20mL)中，并 用5％LiCl(10x10mL)洗涤，获得作为稍白色残留物的65(24.2mg,13％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.09(s,1H),8.11(s,1H),7.75(s,1H),7.52(s,1H),7.3(s,1H),6.73(d,J＝16.5Hz,2H),6.33(d,J＝8.6Hz,1H),6.14(d,J＝16.2Hz,1H),5.85(s,1H),5.11(s,2H),5.02(d,J＝5.9Hz,1H),4.80(d,J＝6.2Hz,1H),4.65(d,J＝11.3Hz,1H),4.56(d,J＝11.6Hz,2H),3.95(d,J＝11.5Hz,1H),3.83(d,J＝11.3Hz,1H),3.56(m,1H),2.56(m,1H),1.96(m,1H),1.61(m,10H),1.26(t,J＝7.1Hz,3H),1.01(d,J＝5.8Hz,3H).LCMS(m/z)608.47[M+H].Tr＝3.67min。
实施例66，化合物66
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化合物66a
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添加HCl溶液(34mL,0.25M,4M,二恶烷中的)到1d(4g,9.24mmol)中。搅拌18h以后，真空浓缩反应获得作为非晶形浅黄色固体的游离二肽(3.69g)。在0℃下，添加(苯并三唑-1-基氧基)三(二甲基氨基)膦六氟磷酸酯(981.1mg,3.27mmol)到DCM(45mL,0.05M)中的α-羟基环丙基乙酸(获自ArkPharm,Inc.)，(493.5mg,4.09mmol)、二肽(1000mg,2.72mmol)和i-Pr2NEt(0.48mL,2.72mmol)中，并将反应缓慢升温至室温。24h以后，真空浓缩反应。用EtOAc(100mL)稀释残留物，用10％柠檬酸(5x50mL)、饱和NaHCO3(2x50mL)和盐水(100mL)洗涤，通过Na2SO4干燥，并真空浓缩。通过装有ELSD(0-100％EtOAc/己烷)的柱色谱进行纯化，获得作为白色泡沫的66a(425.8mg,36％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.14(m,1H),5.37(m,1H),4.95(d,J＝12.0Hz,1H),4.72(dd,J＝12.0,2.8Hz,1H),4.33(m,1H),3.86(m,1H),3.70(m,1H),3.48(dd,J＝12.0,8.2Hz,1H),2.93(m,1H),2.86(d,J＝10.3Hz,1H),2.19(m,1H),1.94(m,1H),1.73(m,2H),1.35(m,3H),1.09(m,1H),0.67(m,1H),0.54(m,3H).LCMS(m/z)430.12[M+H]。
化合物66b
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在氩气下，添加i-Pr2NEt(0.19mL,1.08mmol)到DCM(4.6mL,0.1M)中的指定N-Boc喹啉基羧酸盐74c(242.1mg,0.451mmol)、66a(238.4mg,0.451mmol)和DMAP(132.3mg,1.08mmol)中，接着添加2-甲基-6-硝基苯甲酸酐(235.6mg,0.676mmol)。18h以后，用DCM(10mL)稀释反应，用水(3x10mL)洗涤，通过MgSO4干燥，并真空浓缩，获得黄色泡沫，其通过柱色谱(0-100％EtOAc/己烷)进行纯化，获得作为浅金色油的66b(313.7mg,66％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):![]()
8.05(d,J＝8.3Hz,1H),7.97(s,1H),7.70(d,J＝8.3Hz,1H),7.62(d,J＝8.2Hz,1H),7.27(s,1H),7.08(m,1H),6.76(d,J＝16.6Hz,1H),6.43(d,J＝16.3Hz,1H),6.19(m,1H),5.25(m,J＝15.1Hz,1H),4.92(m,2H),4.81(dd,J＝14.1,6.4Hz,1H),4.70(dd,J＝12.7,10.3Hz,1H),4.29(m,1H),3.66(m,3H),2.49(m,1H),2.09(m,2H),1.80(m,2H),1.68(m,4H),1.52(d,J＝6.2Hz,3H),1.47(s,9H),1.29(m,3H),1.12(s,1H),0.57(m,4H).LCMS(m/z)968.24[M+H]。
化合物66
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在0℃下，添加0.3M NaOH(aq)(0.81mL,0.243mmol)到THF(3.2mL,0.1M)中的66b(313.7mg,0.324mmol)中。通过LCMS每30min监控反应，同时添加0.3M NaOH(aq)。60min以后显示反应完成，并用1M HCl(aq)(0.36mL)将反应淬灭调至～pH 4。然后用EtOAc(15mL)稀释混合物，用水(3x5mL)洗涤，通过MgSO4干燥，并真空浓缩，获得浅黄色泡沫(283.7mg)。将该粗的材料溶于二恶烷(1mL)中，并添加HCl溶液(3mL,4M,二恶烷中的)。60min后，真空浓缩该悬浮液，获得浅黄色固体(275.5mg)。将DMF(1.5mL)中的粗的材料用DCM(100mL)稀释，并添加i-Pr2NEt(0.30mL,1.69mmol)，接着添加HATU(157.2mg,0.405mmol)。30min以后，用5％LiCl(3x100mL)、 饱和NaHCO3(100mL)和盐水(100mL)洗涤混合物，通过MgSO4干燥，并真空浓缩。该粗的材料通过制备性HPLC(Synergi Polar-RP,35％MeCN/H2O)进行纯化，并冻干，获得作为白色固体的66(3.4mg,1％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.54(s,1H),8.10(s,1H),7.73(d,J＝7.3Hz,2H),7.43(s,1H),6.72(dd,J＝19.3,8.7Hz,1H),6.48(dd,J＝24.9,16.4Hz,1H),5.89(m,1H),5.17(t,J＝6.2Hz,1H),4.72(m,1H),4.57(m,1H),3.70(m,2H),3.52(m,2H),2.54(m,6H),2.02(m,3H),1.62(m,10H),1.30(m,3H),0.88(m,1H),0.60(m,4H).LCMS(m/z)604.60[M+H].Tr＝2.23min(Gemini 5u C18![]()
50×4.60mm 5微米柱,5min,2ml/min,5–100％乙腈/水,0.1％TFA调节剂)。
实施例67，化合物67
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化合物67a
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在0℃下，缓慢添加2M NaNO2(aq)(9.5mL,19.0mmol)到1M H2SO4(aq)(12.5mL,0.5M)中的(S)-2-氨基-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸(获自AstaTech,Inc.)(1.01g,6.35mmol)，并将反应缓慢升温至室温。24h以后，1H NMR显示没有起始材料，用EtOAc(3x50mL)萃取反应。合并的有机物通过Na2SO4干燥，并真空浓缩，获得作为类白色固体的67a(868.8g,85％)。1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ3.84(m,2H),3.76(d,J＝5.1Hz,1H),3.24(m,2H),1.81(m,1H),1.39(m,4H)。
化合物67b
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添加HCl溶液(45mL,0.25M,4M二恶烷中的)到二恶烷(5mL)中的1d(5g,11.6mmol)中。搅拌18h以后，真空浓缩反应获得作为非晶形浅黄色固体的游离二肽(4.71g)。
在0℃下，添加(苯并三唑-1-基氧基)三(二甲基氨基)膦六氟磷酸酯(827.9mg,1.87mmol)到DCM(16mL,0.1M)中的67a(300.9mg,1.87mmol)、二肽(447.9mg,1.25mmol)和i-Pr2NEt(0.27mL,1.56mmol)中，并将反应缓慢升温至室温。18h以后，真空浓缩反应。用EtOAc(100mL)稀释残留物，用10％柠檬酸(3x100mL)、饱和NaHCO3(aq)(100mL)和盐水(100mL)洗涤，通过Na2SO4干燥，并真空浓缩。通过装有ELSD(0-100％EtOAc/己烷)的柱色谱进行纯化，获得作为类白色泡沫的67b(171.3mg,23％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.15(d,J＝7.9Hz,1H),5.38(p,J＝6.8Hz,1H),4.95(d,J＝11.9Hz,1H),4.71(d,J＝11.9Hz,1H),4.31(d,J＝14.2Hz,1H),3.99(m,3H),3.94(d,J＝3.8Hz,1H),3.70(m,1H),3.39(m,2H),2.94(m,1H),2.19(m,1H),1.98(m,2H),1.75(dd,J＝19.3,10.0Hz,2H),1.64(ddd,J＝24.9,12.7,4.6Hz,2H),1.55(t,J＝8.4Hz,2H),1.39(m,1H),1.33(d,J＝6.8Hz,3H).LCMS(m/z)474.26[M+H]。
化合物67c
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在氩气下，添加i-Pr2NEt(0.15mL,866mmol)到DCM(3.5mL,0.1M)中的(R,E)-4-(2-(1-(叔丁氧基羰基氨基)乙基)-喹啉-7-基)-2,2-二甲基丁-3-烯酸(136.9mg,0.361mmol)、67b(171.3mg,0.361mmol)和DMAP(106.1mg,866mmol)中，接着添加2-甲基-6-硝基苯甲酸酐(189.2mg,0.541mmol)。2.5h以后，添加另外的2-甲基-6-硝基苯甲酸酐(50.8)。另1h以后，用DCM(10mL)稀释反应，用水(3x5mL)洗涤，通过MgSO4干燥，并真空浓缩，获得作为类白色泡沫的67c(324.4mg,90％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.22(d,J＝5.9Hz,2H),8.05(d,J＝8.3Hz,1H),8.02(s,1H),7.71(s,1H),7.66(d,J＝8.8Hz,1H),7.28(s,1H),7.12(s,1H),6.70(d,J＝14.1Hz,1H),6.52(d,J＝6.4Hz,2H),6.22(s,1H),5.14(d,J＝3.7Hz,1H),4.94(m,2H),4.70(d,J＝12.1Hz,1H),3.96(s,2H),3.73(m,1H),3.37(t,J＝12.1Hz,2H),2.29(m,1H),2.19(m,1H),1.89(m,1H),1.57(d,J＝ 6.1Hz,6H),1.52(m,6H),1.48(m,15H),1.28(d,J＝6.7Hz,3H).LCMS(m/z)840.67[M+H]。
化合物67
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在0℃下，添加0.3M aq.NaOH(8.2mL,0.244mmol)到THF(3.4mL,0.1M)中的67c(273.5mg,0.325mmol)中。通过LCMS每小时监控反应，同时添加0.3M NaOH(aq)。2h以后显示反应完成，并用1M当量的HCl(0.77mL)将反应淬灭调至～pH 4。然后用EtOAc(15mL)稀释混合物，用水(3x5mL)和盐水(5mL)洗涤，通过MgSO4干燥，并真空浓缩，获得黄色泡沫(251.0mg)。将该粗的材料溶于二恶烷(1mL)中，并添加HCl溶液(3mL,4M,二恶烷中的)。60min后，真空浓缩该悬浮液，获得浅黄色固体(266.8mg)。将DMF(1mL)中的粗的材料用DCM(100mL)稀释，并添加i-Pr2Net(0.28mL,1.63mmol)，接着添加HATU(148.9g,0.325mmol)。30min以后，用5％当量的LiCl(3x100mL)、饱和NaHCO3(100mL)和盐水(100mL)洗涤混合物，通过MgSO4干燥，并真空浓缩，获得橙色残留物。该粗的材料通过柱色谱(25-100％EtOAc/己烷)进行纯化，获得作为浅黄色残留物的67(38.4mg,18％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.07(s,1H),8.13(d,J＝7.1Hz,1H),8.05(s,1H),7.74(d,J＝8.1Hz,1H),7.47(d,J＝7.4Hz,1H),7.28(s,1H),6.65(d,J＝16.0Hz,1H),6.43–6.26(m,1H),5.79(m,1H),5.36(m,1H),5.23(m,1H),5.11(m,1H),4.99(d,J＝7.6Hz,1H),4.54(dd,J＝13.5,2.5Hz,1H),3.96(d,J＝11.1Hz,2H),3.84(dd,J＝33.2,14.1Hz,1H),3.64(d,J＝11.9Hz,1H),3.51(t,J＝11.5Hz,1H),3.33(m,3H),2.57(td,J＝13.1,2.5Hz,1H),2.43(d,J＝14.1Hz,1H),2.33(m,1H),2.21(m,1H),1.96(d,J＝12.9Hz,1H),1.70(m,4H),1.63(s,6H),1.60(m,6H),1.53(s,3H),1.48(s,2H),1.44(s,3H).LCMS(m/z)592.37[M+H].Tr＝2.45min。
实施例68：化合物68
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化合物68a
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在0℃下，缓慢添加2M NaNO2(aq)(6.0mL,12.4mmol)到1M H2SO4(aq)(8.5mL,0.5M)中的2-氨基-3-氟丁酸(获自Fluorochem,Ltd.)，(509.4mg,4.13mmol)中，并将反应缓慢升温至室温。24h以后，1H NMR显示微量的起始材料，并用EtOAc(3x25mL)提取反应。合并的有机物通过Na2SO4干燥，并真空浓缩，获得作为白色固体的68a(437.2g,87％)。1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ5.07–4.65(m,1H),4.07(ddd,J＝33.7,23.1,3.1Hz,1H),1.28(ddd,J＝24.7,18.4,6.4Hz,3H).19F NMR(376MHz,DMSO):δ-180.63(dqd,J＝48.5,24.3,14.9Hz),-186.54(ddq,J＝48.3,31.5,24.1Hz)。
化合物68b
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添加HCl溶液(45mL,0.25M,4M二恶烷中的)到二恶烷(5mL)中的1d(5g,11.6mmol)中。搅拌18h以后，真空浓缩反应获得作为非晶形浅黄色固体的游离二肽(4.71g)。在0℃下，添加(苯并三唑-1-基氧基)三(二甲基氨基)膦六氟磷酸酯(1.2130g,2.76mmol)到DCM(20mL,0.1M)中的68a(225.3mg,1.84mmol)、二肽(671.2mg,1.84mmol)和i-Pr2NEt(0.32mL,1.84mmol)中，并将反应缓慢升温至室温。18h以后，真空浓缩反应。用EtOAc(100mL)稀释残留物，用10％柠檬酸(3x100mL)、饱和NaHCO3(aq)(100mL)和盐水(100mL)洗涤，通过Na2SO4干燥，并真空浓缩。通过装有ELSD(0-100％EtOAc/己烷)的柱色谱进行纯化，获得作为白色泡沫的68b(318.9mg,32％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ5.39(m,1H),5.07(m 1H),4.95(d,J＝11.9Hz,1H),4.70(dd,J＝11.9,4.2Hz,1H),4.31(m,1H),4.10(ddd,J＝13.9,10.0,5.5Hz,1H),3.70(d,J＝6.4Hz,1H),2.91(m,1H),2.87(d,J＝10.3Hz,1H),2.20(m,1H),1.91(m,1H),1.72(m, 1H),1.36(m,8H).19F NMR(376MHz,CDCl3):δ-181.98–-182.68(m),-186.38–-187.09(m),-187.09–-187.99(m).LCMS(m/z)437.82[M+H]。
化合物68c
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在氩气下，添加i-Pr2NEt(0.23mL,1.29mmol)到DCM(5.4mL,0.1M)中的指定N-Boc-喹啉基羧酸盐(211.3mg,0.538mmol)、68b(235.0mg,0.538mmol)和DMAP(156.9mg,1.29mmol)中，接着添加2-甲基-6-硝基苯甲酸酐(279.5mg,0.807mmol)。18h以后，用DCM(15mL)洗涤反应，用水(3x5mL)洗涤，通过MgSO4干燥，并真空浓缩，获得作为浅黄色泡沫的68c(455.7mg,90％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.10(d,J＝8.7Hz,1H),8.03(m,1H),7.68(d,J＝21.0Hz,2H),7.27(s,1H),6.74(d,J＝7.5Hz,2H),6.21(m,1H),5.27(d,J＝15.8Hz,2H),5.12(m,1H),4.93(d,J＝12.0Hz,1H),4.70(dd,J＝11.9,2.9Hz,1H),4.28(m,1H),3.69(m,1H),2.86(d,J＝10.2Hz,1H),2.65(d,J＝9.3Hz,1H),2.16(M,1H),1.89(M,1H),1.63(s,2H),1.61(d,J＝3.7Hz,3H),1.54(d,J＝10.1Hz,9H),1.47(s,10H),1.29(m,8H)。
化合物68
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在0℃下，添加0.3M当量NaOH(1.3mL,0.426mmol)到THF(5.4mL,0.1M)中的68c(455.7mg,0.567mmol)中。通过LCMS每小时监控反应，同时添加0.3M当量NaOH。3h以后显示反应完成，并用1M当量的HCl(0.75mL)将反应淬灭调至～pH 4。然后用EtOAc(15mL)稀释混合物，用水(3x5mL)和盐水(5mL)洗涤，通过MgSO4干燥，并真空浓缩，获得浅黄色泡沫(388.7mg)。将该粗的材料溶于二恶烷(1.5mL)中，并添加HCl溶液(3mL,4M,二恶烷中的)。60min后，真空浓缩该悬浮液，获得浅黄色固体(464.1mg)。将DMF(1.5mL)中的粗的材料用DCM(100mL)稀释，并添加 i-Pr2Net(0.51mL,2.90mmol)，接着添加HATU(265.6mg,0.695mmol)。30min以后，用5％LiCl(aq)(3x100mL)、饱和NaHCO3(aq)(100mL)和盐水(100mL)洗涤混合物，通过MgSO4干燥，并真空浓缩，获得橙色残留物。该粗的材料通过制备性HPLC(Synergi Polar-RP,50％MeCN/H2O)进行纯化，并冻干，获得作为白色固体的68(25.3mg,7％)。 1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.01(d,J＝9.8Hz,1H),8.22(s,1H),8.10(s,1H),7.74(d,J＝8.2Hz,1H),7.46(d,J＝7.6Hz,1H),6.97(m,1H),6.70(m,2H),6.48(d,J＝15.7Hz,1H),5.86(m,1H),5.37(m,1H),5.18(m,1H),4.55(d,J＝11.9Hz,1H),3.83(m,1H),3.57(m,1H),3.27(m,1H),2.52(m,1H),1.95(m,1H),1.68(d,J＝22.6Hz,6H),1.59(s,61H),1.55(s,2H),1.48(s,6H),1.43–1.21(m,3H).19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-184.47–-185.27(m),-187.78–-188.41(m).LCMS(m/z)554.42[M+H].Tr＝2.49。
实施例69，化合物69
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化合物69a：
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从18e(192mg,0.50mmol)开始，N-Boc保护和用NaOH/THF/水进行随后的酯水解，用1N HCl酸化并浓缩得到粗的残留物后，提供定量产生的中间体羧酸。将得到的材料直接进行酰胺形成，其中搅拌无水二氯甲烷(20mL)中的2-甲基-6-硝基苯甲酸酐(344mg,1mmol)、4-二甲基氨基吡啶(128mg,1.05mmol)和N-Boc保护的异喹啉基酸。 添加N,N-二异丙基乙胺(0.26mL,1.50mmol)到得到的溶液中，并室温搅拌反应混合物10min。描述用于实施例58的程序后，逐滴添加无水二氯甲烷(10mL)中的1e(331mg,0.75mmol)。室温搅拌12h以后，将反应混合物转移到分液漏斗中，并用水(添加20mL,10mL的盐水来支持分离)洗涤。用二氯甲烷(20mL)提取水相。用盐水(20mL)洗涤合并的有机提取物，通过硫酸镁干燥，过滤并减压浓缩。残留物通过硅胶色谱(从异己烷中0-40％乙酸乙酯+甲醇(4/1)的梯度)进行纯化，蒸发后，获得作为白色固体的69a(391mg,97％)。LCMS(m/z)798.1[M+H],Tr＝2.82min(Gemini 5u C18![]()
50×4.60mm 5微米柱,3.5min,2ml/min,5–100％乙腈/水,0.1％乙酸调剂剂梯度)。
化合物69
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添加水(10mL)中的氢氧化锂(13mg,0.53mmol)的溶液到四氢呋喃(20mL)中的69a(390mg,0.48mmol)中。室温搅拌2h以后，添加1M盐酸(0.55mL 1M水中的溶液,0.55mmol)，减压浓缩反应混合物，残留物在二氯甲烷(50mL)与水(50mL)之间分离。收集有机层，减压浓缩，并在高真空下干燥1天。在氩气下，室温下，用1,4-二恶烷(10mL,40mmol)中的4M氯化氢处理残留物4h。减压浓缩反应混合物。将该残留物溶于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)，把获得的溶液添加到氩气净化的烧瓶中，该烧瓶含有2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲烷铵(276mg,0.73mmol)、N,N-二异丙基乙胺(312mg,2.42mmol)和二氯甲烷(200mL)。反应混合物用氩气再次净化，并室温搅拌2h。用水(100ml)和盐水(100ml)洗涤获得的反应混合物，通过硫酸镁干燥，过滤，并减压浓缩。残留物通过硅胶色谱(从异己烷中0-40％乙酸乙酯+甲醇(4/1)的梯度)进行纯化，蒸发后，获得作为白色固体的69(4mg,3％)。1H NMR(400MHz,CD3CN):δ9.12(s,1H),7.93(d,J＝6.4Hz,1H),7.60,(s,1H),7.43(s,1H),7.27(m,1H),7.03(d,J＝12Hz,1H),6.83(d,J＝12,1H),5.65(d,J＝3Hz,1H),4.96(m,2H),4.30(d,J＝9.3Hz,1H),3.21(m,1H),2.91(bm,1H),2.32(m,1H),1.94-1.75(cm,3H),1.64(s,3H),1.62–1.48(m,4H),1.46-1.35(m,2H),1.01(d,J＝6.7Hz,3H),0.91(d,J＝6.7Hz,3H).LCMS(m/z)550.4[M+H]，Tr＝1.81min。
实施例70，化合物70
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化合物70a：
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添加水(8ml)中的亚硝酸钠(1.0g,15mmol)的溶液到1M硫酸(15ml,1M水溶液)中的3,3-二甲基丁酸(1g,7.5mmol)的溶液中，其冷却至0℃。添加期间将温度保持在低于5℃，并在该温度下搅拌混合物过夜。然后用硫酸铵饱和该溶液，用二乙醚(5x25ml)提取，通过硫酸钠干燥，并减压蒸发，获得作为无色油的标题化合物(0.27g,67％)，其静置时结晶。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ3.41(s,1H),1.25(s,9H).LCMS(m/z)133.2[M+H],Tr＝0.39min(Gemini 5u C18![]()
50×4.60mm 5微米柱,3.5min,2ml/min,5–100％乙腈/水,0.1％乙酸调节剂梯度)。
化合物70b：
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二氯甲烷(20mL)中的1d(517mg,1.19mmol)的溶液在冰水浴中冷却。在氩气下，于0℃逐滴添加三甲基硅基三氟甲烷磺酸酯(398mg,1.79mmol)，将得到的溶液在室温下搅拌30min。蒸发反应混合物到干燥，将得到的粗残留物(LCMS(m/z)332.2/334.3[M+H],Tr＝2.06min)溶于无水二氯甲烷(20mL)中，并冷却至0℃。添加70a (192mg,1.43mmol)、N,N-二异丙基乙胺(0.51mL,2.98mmol)和(苯并三唑-1-基氧基)三(二甲氨基)膦六氟磷酸酯(633mg,1.43mmol)到该溶液中。将反应升温至室温，并搅拌8h。蒸发混合物到干燥，将残留物溶于乙酸乙酯(100mL)中，用10％柠檬酸(100mL)、饱和的NaHCO3(100mL)和盐水(100mL)洗涤。有机层通过MgSO4干燥，添加1体积当量的己烷，将该溶液通过5cm的硅胶层过滤，用50mL乙酸乙酯/己烷混合物(1/1)洗涤硅胶层。用乙酸乙酯(100mL)洗涤出想要的产物，减压浓缩，并与二氯甲烷共同蒸馏。高真空下干燥1天以后，分离化合物70b(537mg,当量产生)。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ5.52(q,J＝6.9Hz,1H),5.11(d,J＝12.1Hz,1H),4.91(d,J＝12.2Hz,1H),3.94(d,J＝2.6Hz,1H),3.84(dd,J＝7.1,4.7Hz,1H),3.84(m,1H),3.80–3.58(m,2H),3.41(s,3H),2.33–2.13(m,1H),2.09–1.92(m,2H),1.86–1.75(m,1H),1.42(d,J＝6.9Hz,3H),1.32(s,9H).LCMS(m/z)446.0[M+H],Tr＝2.11min。
化合物70c
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将2-甲基-6-硝基苯甲酸酐(172mg,0.5mmol)、4-二甲基氨基吡啶(64mg,0.50mmol)、指定的N-Boc喹啉基羧酸盐(96mg,0.25mmol)和无水二氯甲烷(10mL)放置到烤箱干燥的、氩气净化的烧瓶中。添加N,N-二异丙基乙胺(0.13mL,0.75mmol)到得到的溶液中，并在室温下搅拌该反应混合物10min。通过注射器逐滴添加70b(168mg,0.38mmol)，作为无水二氯甲烷(10mL)中的溶液。室温搅拌12h以后，将反应混合物转到分液漏斗中，并用水(添加20mL,10mL盐水来支持分离)洗涤。用二氯甲烷(20mL)提取水相。用盐水(20mL)洗涤合并的有机提取物，通过硫酸镁干燥，过滤并减压浓缩。残留物通过硅胶色谱(从异己烷中0-40％乙酸乙酯+甲醇(4/1)的梯度)进行纯化，蒸发以后，获得作为白色固体的70c(149mg,73％)。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ8.35(d,J＝8.6Hz,1H),8.07–8.01(m,1H),7.93(d,J＝8.5Hz,1H),7.88(d,J＝8.4Hz,1H),7.58(d,J＝8.5Hz,1H),6.98–6.77(m,2H),5.48(q,J＝6.5,6.1Hz,1H),5.20(d,J＝4.0Hz,1H),5.06(d,J＝12.1Hz,1H),4.88(d,J＝12.1Hz,1H),4.25–4.15(m,1H),3.99–3.85(m,2H),3.80–3.55(m,2H),3.46(s,3H),2.20–2.09(m,1H),2.07–1.94(m,1H),1.92–1.80(m,1H), 1.80–1.71(m,1H),1.68–1.64(m,6H),1.59(d,J＝7.1Hz,3H),1.54(s,9H),1.37(d,J＝7.0Hz,3H),1.29(d,J＝6.4Hz,3H).LCMS(m/z)812.3[M+H],Tr＝2.64min(Gemini 5u C18 ![]()
50×4.60mm 5微米柱,3.5min,2mL/min,5–100％乙腈/水,0.1％乙酸调节剂梯度)。
化合物70
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添加水(5mL)中的氢氧化锂(4.5mg,0.19mmol)的溶液到四氢呋喃(10mL)中的的70c(139mg,0.17mmol)中。室温搅拌2h以后，添加1M盐酸(0.20mL 1M水中的溶液,0.20mmol)，减压下浓缩反应混合物，残留物在二氯甲烷(50mL)与水(50mL)之间分离。收集有机层，减压浓缩，并在高真空下干燥1天。在氩气下，室温下，用1,4-二恶烷(5mL,20mmol)中的4M氯化氢处理残留物4h。减压浓缩反应混合物。将该残留物溶于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)，把获得的溶液添加到氩气净化的烧瓶中，该烧瓶含有2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲烷铵(98mg,0.26mmol)、N,N-二异丙基乙胺(110mg,0.86mmol)和二氯甲烷(100mL)。反应混合物用氩气再次净化，并室温搅拌2h。用水(50ml)和盐水(50ml)洗涤获得的反应混合物，通过硫酸镁干燥，过滤，并减压浓缩。残留物通过HPLC进行纯化，冻干后，获得作为白色固体的化合物70(20mg,21％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.05(s,1H),8.05(bs,1H),7.69(s,1H),7.24(s,1H),7.61(dd,J＝8.4,1.6Hz,1H),7.43(d,J＝8.5Hz,1H),6.62(d,J＝12.3Hz,1H),6.33(d,J＝12.3Hz,1H),6.14(m,1H),5.86(bs,1H),5.08(m,1H),4.53(s,1H),4.12(d,J＝6.1Hz,1H),3.57–3.49(m,2H),2.02-1.92(bm,2H),1.68(m,1H),1.72–1.45(cm,8H),1.07(s,9H),0.91(m,3H).LCMS(m/z)564.3[M+H],Tr＝2.42min。
实施例71：化合物71
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实施例70中描述的合成程序以后，从获自Apollo Scientific,Inc.的1g市售4,4,4-三氟-DL-缬氨酸制备指定的N-Boc保护的喹啉基开环酸(seco-acid)，产率为5％。
添加水(5mL)中的氢氧化锂(4.5mg,0.19mmol)的溶液到四氢呋喃(10mL)中的的该化合物(139mg,0.17mmol)中。室温搅拌2h以后，添加1M盐酸(0.20mL 1M水中的溶液,0.20mmol)，减压浓缩反应混合物，残留物在二氯甲烷(50mL)与水(50mL)之间分离。收集有机层，减压浓缩，并在高真空下干燥1天。在氩气和室温下，用1,4-二恶烷(5mL,20mmol)中的4M氯化氢处理残留物4h。减压浓缩反应混合物。将该残留物溶于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)，把获得的溶液添加到氩气净化的烧瓶中，该烧瓶含有2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲烷铵(98mg,0.26mmol)、N,N-二异丙基乙胺(110mg,0.86mmol)和二氯甲烷(100mL)。反应混合物用氩气再次净化，并室温搅拌2h。用水(50ml)和盐水(50ml)洗涤获得的反应混合物，通过硫酸镁干燥，过滤，并减压浓缩。残留物通过HPLC在C18柱上进行纯化，用乙腈/水洗脱液，蒸发后，获得作为最后洗脱的三种异构体(7mg,8％)的白色固体的71。1H NMR(400MHz,CD3CN):δ7.86(s,1H),7.72(s,1H),7.61(d,J＝5.8Hz,1H),7.43(d,J＝5.8Hz,1H),7.31(m,1H),6.50(d,J＝12.2Hz,1H),6.34(d,J＝12.2Hz,1H),5.60(m,2H),5.08(m,1H),4.38(m,1H),4.18(d,J＝9.1Hz,1H),3.52(m,1H),2.91(m,1H),2.59(m,1H),1.94-1.48(cm,10H),1.42(s,3H),1.38(cm,5H).LCMS(m/z)604.3[M+H],Tr＝2.42min。
实施例72，化合物72
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添加水(8ml)中的亚硝酸钠(1.0g,15mmol)的溶液到1M硫酸(15ml,1M水溶液)中的获自Sigma-Aldrich Inc.的2-氨基-3-氟-3-甲基丁酸(1g,7.5mmol)的溶液中，其冷却至0℃。添加期间将温度保持在低于5℃，并在该温度下将混合物搅拌过夜。然后用硫酸铵饱和该溶液，用二乙醚(5x25ml)提取，通过硫酸钠干燥，减压蒸发，获得作为无 色油的标题化合物(0.4g,37％)，其静置时结晶。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ4.34(d,1H),1.35(d,6H).LCMS(m/z)137.4[M+H],Tr＝0.79min。
化合物72b
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在冰水浴中冷却二氯甲烷(20mL)中的(517mg,1.19mmol)的溶液。在氩气下，于0℃逐滴添加三甲基硅基三氟甲烷磺酸酯(398mg,1.79mmol)，将得到的溶液在室温下搅拌30min。蒸发反应混合物到干燥，并将得到的粗残留物(LCMS(m/z)332.2/334.3[M+H],Tr＝2.06min)溶于无水二氯甲烷(20mL)中，并冷却至0℃。添加72a(192mg,1.43mmol)、N,N-二异丙基乙胺(0.51mL,2.98mmol)和(苯并三唑-1-基氧基)-三(二甲基氨基)膦六氟磷酸酯(633mg,1.43mmol)到其中。将反应升温至室温，并搅拌8h。蒸发混合物到干燥，将残留物溶于乙酸乙酯(100mL)，用10％柠檬酸(100mL)、饱和的NaHCO3(100mL)和盐水(100mL)洗涤。有机层通过MgSO4干燥，添加1体积当量的己烷，将该溶液通过5cm的硅胶层过滤，用50mL的乙酸乙酯/己烷混合物(1/1)洗涤硅胶层。用乙酸乙酯(100mL)洗涤出想要的产物，减压浓缩，并与二氯甲烷共同蒸馏。高真空下干燥1天以后，分离72b(400mg,80％)。1H NMR(400MHz,CD3OD):![]()
5.53(q,J＝6.9Hz,1H),5.10(d,J＝12.1Hz,1H),4.92(d,J＝12.2Hz,1H),3.96(d,J＝2.6Hz,1H),3.94(dd,J＝7.1,4.7Hz,1H),3.86(qd,J＝6.4,2.5Hz,1H),3.81–3.60(m,2H),3.42(s,3H),2.34–2.14(m,1H),2.09–1.90(m,2H),1.87–1.76(m,1H),1.41(d,J＝6.9Hz,3H),1.32(d,J＝6.4Hz,3H).LCMS(m/z)450.1[M+H],Tr＝2.11min。
化合物72c
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实施例70中描述的程序以后，将2-甲基-6-硝基苯甲酸酐(172mg,0.5mmol)、4-二甲基氨基吡啶(64mg,0.50mmol)、N-Boc保护的喹啉1,3-二恶烷羧酸63c(96mg,0.25mmol)和无水二氯甲烷(10mL)放置到烤箱干燥的、氩气净化的烧瓶中。添加N,N-二异丙基乙胺(0.13mL,0.75mmol)到得到的溶液中，并在室温下搅拌该反应混合物10min。通过注射器添加72b(168mg,0.38mmol)，作为无水二氯甲烷(10mL)中的溶液。室温搅拌2h以后，将反应混合物转到分液漏斗中，并用水(添加20mL,10mL盐水来支持分离)洗涤。用二氯甲烷(20mL)提取水相。用盐水(20mL)洗涤合并的有机提取物，通过硫酸镁干燥，过滤并减压浓缩。残留物通过硅胶色谱(从异己烷中0-40％乙酸乙酯+甲醇(4/1)的梯度)进行纯化，蒸发以后，获得作为白色固体的72c(149mg,73％)。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ8.35(d,J＝8.6Hz,1H),8.07–8.01(m,1H),7.93(d,J＝8.5Hz,1H),7.88(d,J＝8.4Hz,1H),7.58(d,J＝8.5Hz,1H),6.98–6.77(m,2H),5.48(q,J＝6.5,6.1Hz,1H),5.20(d,J＝4.0Hz,1H),5.06(d,J＝12.1Hz,1H),4.88(d,J＝12.1Hz,1H),4.25–4.15(m,1H),3.99–3.85(m,2H),3.80–3.55(m,2H),3.46(s,3H),2.20–2.09(m,1H),2.07–1.94(m,1H),1.92–1.80(m,1H),1.80–1.71(m,1H),1.68–1.64(m,6H),1.59(d,J＝7.1Hz,3H),1.54(s,9H),1.37(d,J＝7.0Hz,3H),1.29(d,J＝6.4Hz,3H).LCMS(m/z)860.1/862.5[M+H].,Tr＝2.64min。
化合物72
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添加水(5mL)中的氢氧化锂(4.5mg,0.19mmol)的溶液到四氢呋喃(10mL)中的的72c(139mg,0.17mmol)中。室温搅拌2h以后，添加1M盐酸(0.20mL 1M水中的溶液,0.20mmol)，减压浓缩反应混合物，残留物在二氯甲烷(50mL)与水(50mL)之间分离。收集有 机层，减压浓缩，并在高真空下干燥1天。在氩气和室温下，用1,4-二恶烷(5mL,20mmol)中的4M氯化氢处理残留物4h。减压浓缩反应混合物。将该残留物溶于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)，把获得的溶液添加到氩气净化的烧瓶中，该烧瓶含有2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲烷铵(98mg,0.26mmol)、N,N-二异丙基乙胺(110mg,0.86mmol)和二氯甲烷(100mL)。反应混合物用氩气再次净化，并室温搅拌2h。用水(50ml)和盐水(50ml)洗涤获得的反应混合物，通过硫酸镁干燥，过滤，并减压浓缩。残留物通过硅胶色谱(从异己烷中0-60％乙酸乙酯+甲醇(4/1)的梯度)进行纯化，蒸发以后，获得作为白色固体的标题化合物(32mg,33％)。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ8.26(s,1H),7.83(d,J＝8.2Hz,1H),7.83(d,J＝8.2Hz,1H),7.51(m,2H),6.71(d,J＝12.3Hz,1H),6.19(d,J＝12.3Hz,1H),5.86(q,J＝7.2Hz,1H),5.48(d,J＝8.2Hz,1H),5.08(m,2H),4.41(m,1H),3.77–3.62(m,1H),3.59(m,1H),2.68(m,1H),2.31–2.24(m,1H),1.99–1.91(m,1H),1.72–1.54(cm,8H),1.42(s,3H),LCMS(m/z)612.1[M+H],Tr＝2.22min。
实施例73，化合物73
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实施例43中描述的合成顺序后，使用1.5g甲基-氧杂环戊烷-3-羧酸盐(C.A.S.#53662-85-4)，由Enamine,Ltd.供应，以110g含量(1.2％产率)制备上述的指定双保护的开环酸(seco-acid)。该中间体然后进行实施例70中描述的标准多步骤合成程序获得化合物73，其中最终的HPLC纯化以后，获得4mg，其作为非对映异构体混合物。1H NMR(400MHz,CD3CN):δ8.81(m,1H),8.15(d,J＝6.1Hz,1H),7.73(d,J＝6.2Hz,1H),7.60(m,1H),7.35(m,1H),7.06(m,1H),6.48-6.33(m,2H),5.62(m,1H),5.08(m,1H),4.95(m,1H),4.30(m,2H),4.08(m,2H),3.90-3.69(cm,4H),3.56(m,2H),3.39(m,2H),2.68(cm,3H),2.31–2.24(m,2H),1.55–1.35(cm,7H),0.92–0.82(cm,7H).LCMS(m/z)578.2[M+H],Tr＝2.11min。
实施例74、75、76和77-化合物74、75、76和77
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化合物74和75
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化合物76和77
中间体74a
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添加NEt3(0.72mL,5.166mmol)到1,4-二恶烷(5mL)中的39a溴化物(556mg,1.583mmol)、乙基-4-氧-1-乙烯基环己烷羧酸盐(获自Small Molecules,Inc.)，(559mg,2.849mmol)，Pd(OAc)2(70mg,0.312mmol)和(o-Tol)3P(100mg,0.329mmol)的混合物中，将得到的混合物在微波反应器中于100℃加热30min。浓缩混合物，并用水和乙酸乙酯(各自～50mL)处理。在混合物通过硅藻土板过滤后，分离滤出液中两种级分。用乙酸乙酯(x1)提取含水级分后，用水(x1)洗涤两种有机级分，合并，干燥(MgSO4)，并浓缩。残留物通过CombiFlash进行纯化，使用己烷-乙酸乙酯作为洗脱液，获得479mg(65％)产物74a。1H NMR(400MHz,氯仿-d):δ8.07(d,J＝8.3Hz,1H),8.01(s,1H),7.75(d,J＝8.5Hz,1H),7.58(d,J＝8.3Hz,1H),7.31(d,J＝8.5Hz,1H),6.74(d,J＝16.1Hz,1H),6.47(d,J＝16.3Hz,1H),6.16(s,1H),4.27(q,J＝7.1Hz,2H),2.76–2.56(m,2H),2.57–2.38(m,4H),2.18–2.00(m,2H),1.47(s,9H),1.32(t,J＝7.1Hz,3H).LCMS(m/z)467.0[M+H],Tr＝2.33min。
化合物74b
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在–60℃浴中搅拌THF(5mL)中的74a(237mg,0.508mmol)的溶液，同时添加THF(0.61mL)中的1.0M三仲丁基硼氢化锂。30min将反应混合物缓慢升温至0℃后，用乙酸乙酯稀释混合物，并用水(x2)洗涤。用乙酸乙酯(x1)提取含水级分后，合并两种有机级分，干燥(MgSO4)，并浓缩。残留物通过CombiFlash进行纯化，使用己烷-乙酸乙酯作为洗脱液，获得192mg(81％)74b，作为～4:1混合物。LCMS(m/z)469.0[M+H],Tr＝2.20min。
化合物74c
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在50℃浴中，搅拌THF(2mL)、MeOH(2mL)和水(2mL)中的74b(192mg,0.410mmol)和LiOH(87.7mg,2.090mmol)的混合物3h。将混合物浓缩至～1/3体积，用水稀释，用1N HCl(2.2mL)中和，并用乙酸乙酯(x2)提取。提取物用水(x1)洗涤，合并，干燥(MgSO4)，并浓缩。在35℃浴中，搅拌DMF中的残留物、咪唑(115mg,1.689mmol)和TBSCl(79mg,0.524mmol)1.5h，接着添加另外的咪唑(102mg,1.498mmol),和TBSCl(77mg,0.511mmol)。将得到的混合物在35℃下搅拌17h，浓缩，用乙酸乙酯稀释，接着用5％LiCl溶液(x2)洗涤。用乙酸乙酯(x1)提取含水级分后，合并两种有机级分，干燥(MgSO4)，并浓缩。将残留物溶于THF(2mL)、MeOH(2mL)和水(2mL)中，并在室温下与K2CO3(226mg,1.635mmol)一起搅拌30min。将溶液浓缩到～1/2体积，用水稀释，并用1N HCl(～3.5mL)酸化，接着用乙酸乙酯(x2)提取。提取物用水(x1)洗涤，合并，干燥(MgSO4)，并浓缩。残留物通过CombiFlash进行纯化，使用己烷-乙酸乙酯作为洗脱液，获得193mg(85％)产物74c，其作为明显的～4:1异构体混合物。LCMS(m/z)555.1[M+H],Tr＝2.60min。
化合物74d
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室温下将酸74c(131mg,0.236mmol)、化合物1e(125mg,0.289mmol)、Shiina试剂(98mg,0.285mmol)和DMAP(72mg,0.589mmol)溶于CH2Cl2(3mL)中。3min后，添加DIPEA(0.1mL,0.574mmol)，并将得到的混合物在室温下搅拌16.5h。用乙酸乙酯稀释混合物，并用水(x2)洗涤。用乙酸乙酯(x1)提取含水级分后，合并两种有机级分，干燥(MgSO4)，并浓缩。残留物通过CombiFlash进行纯化，使用己烷-乙酸乙酯作为洗脱液，获得作为混合物的90mg(39％)74d。LCMS(m/z)968.2[M+H],Tr＝3.04min。
化合物74、75、76和77
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化合物74和75
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化合物76和77
在0℃下，添加K2CO3(89mg,0.644mmol)到THF(1mL)中的74d(90mg,0.093mmol)、MeOH(1mL)和水(1mL)的混合物中。将混合物在0℃下搅拌2.5h，冷冻下64h，室温下3h，并在30℃下1.5h。用饱和NaCl溶液稀释混合物，并用乙酸乙酯(x2)提取。用乙酸乙酯(x1)提取含水级分后，合并两种有机级分，干燥(MgSO4)，浓缩，并真空干燥。残留物溶于二恶烷(3mL)中的4N HCl中，在室温下搅拌45min，接着浓缩，并在真空中干燥2h，获得粗的羟基氨基酸。在室温下搅拌CH2Cl2(100mL)中的HATU(177mg,0.466mmol)的悬浮液，作为粗的羟基氨基酸的溶液，而且5min添加DMF(7.5 mL)中的DIPEA(0.13mL,0.746mmol)。室温下1.5h后，浓缩混合物，并用乙酸乙酯稀释残留物，接着用5％LiCl溶液(x2)、0.1N HCl(x1)和水(x1)洗涤。用乙酸乙酯(x1)提取含水级分后，合并两种有机级分，干燥(MgSO4)，并浓缩。残留物通过制备性HPLC进行纯化，使用21.2x250mm 10micron C18Phenomenex Gemini半制备性柱，和乙腈/水(含有0.1％TFA调节剂)作为流动相，以20mL/min的流速，用50min梯度，其包含0min–5min:20％乙腈；5min–48min:20％乙腈到80％乙腈；48min–50min:80％乙腈，获得4中分离的产物级分。然后独立浓缩每种级分以除去MeCN，用NaHCO3溶液中和，用水稀释，并用乙酸乙酯(x2)提取。浓缩分别提取物获得4.6mg(8％)74、1.1mg(2％)75、10.5mg(19％)76和2.3mg(4％)77。
化合物74-77代表化合物的立体异构体：
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预期的立体异构体包括：
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化合物74：第一洗脱的异构体。1H NMR(400MHz,甲醇-d4):δ8.23(d,J＝8.5Hz,1H),7.82(d,J＝8.4Hz,1H),7.77(d,J＝1.7Hz,1H),7.62(dd,J＝8.4,1.7Hz,1H),7.43(d,J＝8.5Hz,1H),6.61(d,J＝16.4Hz,1H),6.29(d,J＝16.4Hz,1H),5.79(q,J＝7.2Hz,1H), 5.23(d,J＝8.6Hz,1H),5.06(q,J＝6.6Hz,1H),4.41(dd,J＝13.2,4.3Hz,1H),3.88(s,1H),3.57(dd,J＝11.7,2.8Hz,1H),2.68(td,J＝13.0,3.3Hz,1H),2.25(d,J＝11.2Hz,1H),2.21–2.06(m,3H),2.00–1.88(m,3H),1.84–1.63(m,5H),1.60(d,J＝7.3Hz,3H),1.57(d,J＝6.8Hz,3H),1.61–1.47(m,1H),1.28(s,1H),1.05(d,J＝6.8Hz,3H),1.00(d,J＝6.7Hz,3H).LCMS(m/z)606.3[M+H],Tr＝2.03min。
化合物75：第二洗脱的异构体。1H NMR(400MHz,甲醇-d4):δ8.23(d,J＝8.5Hz,1H),7.81(d,J＝8.5Hz,1H),7.76(d,J＝1.7Hz,1H),7.60(dd,J＝8.4,1.6Hz,1H),7.42(d,J＝8.5Hz,1H),6.53(d,J＝16.3Hz,1H),6.25(d,J＝16.3Hz,1H),5.80(q,J＝7.2Hz,1H),5.28(d,J＝8.6Hz,1H),5.06(q,J＝6.7Hz,1H),4.41(d,J＝13.8Hz,1H),3.60(m,2H),2.76–2.62(m,1H),2.57(d,J＝14.1Hz,1H),2.33(dd,J＝13.0,3.9Hz,1H),2.29–2.10(m,2H),1.94(m,3H),1.78–1.38(m,3H),1.61(d,J＝7.3Hz,3H),1.57(d,J＝6.7Hz,3H),1.28(s,4H),1.07(d,J＝6.8Hz,3H),1.04d,J＝6.8Hz,3H).LCMS(m/z)606.3[M+H],Tr＝2.02min。
化合物76：第三洗脱的异构体。1H NMR(400MHz,甲醇-d4):δ9.43(d,J＝6.2Hz,1H),8.24(d,J＝8.5Hz,1H),8.02–7.94(m,1H),7.84(d,J＝8.4Hz,1H),7.57(dd,J＝8.4,1.6Hz,1H),7.43(d,J＝8.5Hz,1H),6.86(d,J＝16.3Hz,1H),6.33(d,J＝16.3Hz,1H),5.85(q,J＝7.2Hz,1H),5.19(d,J＝9.0Hz,1H),5.15(m,1H),4.49–4.38(m,1H),3.83(s,1H),3.41(dd,J＝11.8,2.8Hz,1H),2.79(td,J＝12.8,3.2Hz,1H),2.39(dd,J＝13.2,3.4Hz,1H),2.21(m,1H),2.18–2.06(m,3H),2.06–1.91(m,2H),1.76(m,2H),1.68(m,2H),1.44–1.61(m,1H),1.56(d,J＝6.7Hz,3H),1.28(s,1H),1.22(d,J＝7.2Hz,3H),1.04(d,J＝6.9Hz,3H),1.02(d,J＝6.7Hz,3H).LCMS(m/z)606.3[M+H],Tr＝2.10min。
化合物77：第四洗脱的异构体。1H NMR(400MHz,甲醇-d4):δ9.45(d,J＝6.3Hz,1H),8.25(d,J＝8.4Hz,1H),8.00(d,J＝1.6Hz,1H),7.84(d,J＝8.4Hz,1H),7.55(dd,J＝8.4,1.6Hz,1H),7.44(d,J＝8.5Hz,1H),6.78(d,J＝16.3Hz,1H),6.36(d,J＝16.3Hz,1H),5.88(q,J＝7.2Hz,1H),5.45(d,J＝12.0Hz,1H),5.24(d,J＝8.9Hz,1H),5.17(q,J＝6.6Hz,1H),4.51–4.39(m,1H),3.71–3.54(m,1H),3.51–3.38(m,1H),2.85–2.72(m,1H),2.63(d,J＝13.5Hz,1H),2.43(m,2H),2.24(m,1H),1.98(m,3H),1.77–1.59(m,2H),1.57(d,J＝6.7Hz,3H),1.54(d,J＝3.6Hz,1H),1.41(q,J＝13.0Hz,1H),1.35–1.26(m,2H),1.26(d,J＝7.2Hz,3H),1.07(d,J＝6.8Hz,3H),1.06(d,J＝6.8Hz,3H).LCMS(m/z)606.3[M+H],Tr＝2.11min。
实施例78和实施例79-化合物78和79
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化合物78a
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在-20–-30℃浴中搅拌THF(50mL)中的甲苯(5.15mL,26mmol)中的50％乙醛酸乙酯的溶液，同时10min添加THF(50mL)中的0.5M环丙基溴化镁。在-30℃浴中2h后，用水(250mL)将反应混合物淬灭，并用乙酸乙酯(x3)提取。提取物用水(x1)洗涤，合并，干燥(MgSO4)，并浓缩。残留物通过CombiFlash进行纯化，使用己烷-乙酸乙酯作为洗脱液，获得882mg(17％)78a，纯度为72％。1H NMR(400MHz,氯仿-d):4.27(q,J＝7.2Hz,2H),3.77(d,J＝6.6Hz,1H),1.56(s,1H),1.32(t,J＝7.1Hz,3H),1.15–1.03(m,1H),0.59–0.46(m,3H),0.46–0.38(m,1H)。
化合物78b
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室温添加Shiina试剂(180mg,0.523mmol)和DIEA(0.24mL,1.378mmol)到CH2Cl2(5mL)中的指定酸(100mg,0.260mmol)、乙醇(75mg,0.375mmol,纯度为72％)和DMAP(79mg,0.647mmol)的溶液中。室温下16.5h以后，浓缩混合物，将残留物溶于乙酸乙酯中，接着用稀释的柠檬酸溶液(x1)和NaHCO3溶液(x1)洗涤。用乙酸乙酯(x1)提取含水级分后，合并两种有机级分，干燥(MgSO4)，并浓缩。残留物通过CombiFlash进行纯化，使用己烷-乙酸乙酯作为洗脱液，获得作为非对映异构体混合物的76mg(57％)产物78b。1H NMR(400MHz,氯仿-d):8.05(d,J＝8.4Hz,1H),7.99(s,1H),7.72(d,J＝8.4Hz,1H),7.61(dd,J＝8.5,1.7Hz,1H),7.28(d,J＝8.6Hz,1H),6.69(d,J＝16.3Hz,1H), 6.63(d,J＝16.2Hz,1H),6.22(s,1H),5.09–4.87(m,1H),4.49(d,J＝7.9Hz,1H),4.21(p,J＝7.0Hz,2H),1.53(d,J＝7.3Hz,3H),1.51(s,3H),1.49(s,3H),1.47(s,9H),1.30(m,1H),1.26(t,J＝7.1Hz,3H),0.72–0.52(m,3H),0.51–0.41(m,1H).LCMS(m/z)511.0[M+H],Tr＝2.49min。
化合物78c
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在0℃下，添加K2CO3(104mg,0.752mmol)到THF(2mL)中的乙醚反应物78b(76mg,0.149mmol)、MeOH(2mL)和水(2mL)的溶液中。在0℃下搅拌1.5h，室温下10.5h后，用1N HCl(1.6mL)酸化混合物，用水稀释，并用乙酸乙酯(x2)提取。用乙酸乙酯(x1)提取含水级分后，合并两种有机级分，干燥(MgSO4)，并浓缩。残留物通过CombiFlash进行纯化，使用己烷-乙酸乙酯作为洗脱液，获得49mg(68％)的中间体产物，纯度为～15％。LCMS(m/z)483.0[M+H]。室温下将二恶烷(2mL)中的4N HCl中的二肽(48mg,0.111mmol)的溶液搅拌1h。浓缩混合物后，将残留物与甲苯共蒸发。在室温下，搅拌CH2Cl2(3mL)和DMF(1mL)中的残留物、前面获得的酸(49mg)和HATU(80mg,0.210mmol)的溶液，同时添加DIEA(0.1mL,0.574mmol)。室温搅拌30min后，用EA稀释混合物，用5％LiCl溶液(x2)、柠檬酸溶液(x1)、饱和的NaHCO3(x1)和饱和的NaCl溶液(x1)洗涤。用乙酸乙酯(x1)提取含水级分后，合并两种有机级分，干燥(MgSO4)，并浓缩。残留物通过CombiFlash进行纯化，使用己烷-乙酸乙酯作为洗脱液，获得作为非对映异构体混合物的64mg(79％)的产物78c。1H NMR(400MHz,氯仿-d):8.05(d,J＝8.4Hz,1H),8.00(s,1H),7.71(d,J＝8.3Hz,1H),7.67–7.60(m,1H),7.28(d,J＝8.5Hz,1H),7.03(dd,J＝16.5,7.6Hz,1H),6.71(dd,J＝16.2,3.8Hz,1H),6.64(d,J＝16.2Hz,1H),6.21(s,1H),5.37–5.20(m,1H),4.97(s,1H),4.92(d,J＝11.9Hz,1H),4.77(dd,J＝7.8,3.2Hz,1H),4.69(dd,J＝11.9,3.7Hz,1H),4.36–4.18(m,1H),3.81(t,J＝8.9Hz,1H),3.65(m,1H),2.84(br,1H),2.14(m,1H),1.88(m,1H),1.77–1.59(m,2H), 1.55(S,3H),1.53(S,3H),1.51(d,J＝8.2Hz,3H),1.46(s,9H),1.24(m,4H),0.65(m,1H),0.50(m,3H).LCMS(m/z)796.0[M+H],Tr＝2.50min。
化合物78和化合物79
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在0℃下，搅拌THF(1mL)和水(1mL)中的反应物(64mg,0.080mmol)的混合物，同时添加1N KOH(0.09mL)。在0℃下搅拌1.25h，用1N HCl(0.1mL)酸化混合物，用水稀释，并用乙酸乙酯(x2)提取。用乙酸乙酯(x1)提取含水级分后，合并两种有机级分，干燥(MgSO4)，并浓缩。残留物溶于二恶烷(2mL)中的4N HCl中，在室温下搅拌1h。浓缩混合物，并将残留物与甲苯共蒸发，在0℃下，搅拌DMF(2.5mL)和CH2Cl2(25mL)中的残留物和HATU(155mg,0.408mmol)的溶液，同时添加DIEA(0.12mL,0.689mmol)。30min以后，浓缩溶液，用乙酸乙酯稀释，接着用5％LiCl溶液(x2)、柠檬酸溶液(x1)和饱和的NaHCO3(x1)洗涤。用乙酸乙酯(x1)提取含水级分后，合并两种有机级分，干燥(MgSO4)，并浓缩。残留物通过制备性HPLC分离，获得2种级分。独立浓缩每种级分以除去MeCN，用NaHCO3溶液中和，用灌水稀释，并用乙酸乙酯(x2)提取。合并提取物，干燥(MgSO4)，并浓缩，获得11.9mg(23％)78和11.0mg(22％)79。
化合物78:1H NMR(400MHz,甲醇-d4):δ8.63(d,J＝7.2Hz,1H),8.23(d,J＝8.5Hz,1H),7.85(s,1H),7.82(d,J＝8.4Hz,1H),7.57(dd,J＝8.5,1.7Hz,1H),7.42(d,J＝8.5Hz,1H),6.56(d,J＝16.2Hz,1H),6.35(d,J＝16.2Hz,1H),5.87–5.72(m,1H),5.14–5.01(m,1H),4.89(d,J＝8.9Hz,1H),4.43(dd,J＝13.8,4.4Hz,1H),3.57(dd,J＝11.8,2.9Hz,1H),2.69(td,J＝13.0,3.3Hz,1H),2.34–2.21(m,1H),1.94(d,J＝13.4Hz,1H),1.76–1.61(m,1H),1.59(d,J＝7.2Hz,3H),1.56(d,J＝6.7Hz,3H),1.51(s,3H),1.40(s,3H),1.30(m,2H),0.69–0.57(m,3H),0.56–0.42(m,1H).LCMS(m/z)548.3[M+H],Tr＝2.25min。
化合物79:1H NMR(400MHz,甲醇-d4):δ9.27(d,J＝6.2Hz,1H),8.24(s,1H),8.21(d,J＝8.5Hz,1H),8.02(d,J＝6.7Hz,1H),7.80(d,J＝8.3Hz,1H),7.46(dd,J＝8.3,1.7Hz,1H),7.41(d,J＝8.4Hz,1H),6.72(d,J＝16.0Hz,1H),6.57(d,J＝16.1Hz,1H),5.91–5.76(m,1H),5.13(m,1H),4.73(d,J＝8.9Hz,1H),4.43(dd,J＝8.8,4.0Hz,1H), 3.55(dd,J＝11.9,2.9Hz,1H),2.69(td,J＝13.1,3.3Hz,1H),2.32(dd,J＝13.4,3.4Hz,1H),1.93(d,J＝13.2Hz,1H),1.68(qt,J＝13.4,4.4Hz,1H),1.57(d,J＝6.9,Hz,3H),1.56(d,J＝6.9,Hz,3H),1.54(s,3H),1.53–1.45(m,1H),1.42(s,3H),1.28(s,1H),0.78–0.59(m,3H),0.50(m,1H).LCMS(m/z)548.3[M+H],Tr＝2.33min。
实施例80-化合物80
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化合物80
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室温添加异丁酰氯(0.05mL)到吡啶(0.15mL)中的74(7.13mg,0.012mmol)的溶液中。室温下1h后，用乙酸乙酯稀释混合物，用柠檬酸溶液(x1)和饱和的NaHCO3溶液(x1)洗涤。用EA(x1)提取含水级分以后，合并两种有机级分，干燥(MgSO4)，并浓缩。残留物通过CombiFlash纯化，使用己烷-乙酸乙酯作为洗脱物，获得6.4mg(80％)产物80。1H NMR(400MHz,甲醇-d4):δ8.83(d,J＝7.5Hz,1H),8.23(d,J＝8.5Hz,1H),7.83(d,J＝8.5Hz,1H),7.79(s,1H),7.64(dd,J＝8.4,1.7Hz,1H),7.43(d,J＝8.5Hz,1H),6.61(d,J＝16.4Hz,1H),6.30(d,J＝16.4Hz,1H),5.80(q,J＝7.1Hz,1H),5.26(d,J＝8.5Hz,1H),5.07(q,J＝6.7Hz,1H),4.96(s,1H),4.41(dd,J＝13.5,4.1Hz,1H),3.62–3.54(m,1H),2.68(td,J＝13.2,3.4Hz,1H),2.60(p,J＝7.0Hz,1H),2.33(d,J＝13.4Hz,1H),2.25(d,J＝12.0Hz,1H),2.21–2.09(m,2H),2.05–1.76(m,7H),1.76–1.63(m,1H),1.60(d,J＝7.2Hz,3H),1.57(d,J＝6.7Hz,3H),1.56–1.46(m,1H),1.20(d,J＝7.0Hz,6H),1.06(d,J＝6.8Hz,3H),1.02(d,J＝6.7Hz,3H).LCMS(m/z)676.3[M+H],Tr＝1.35min。
实施例81-化合物81
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化合物81
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室温添加异丁酰氯(0.05mL)到吡啶(0.15mL)中的75(6.6mg,0.011mmol)的溶液中。室温下1h后，用乙酸乙酯稀释混合物，用柠檬酸溶液(x1)和饱和的NaHCO3溶液(x1)洗涤。用乙酸乙酯(x1)提取含水级分以后，合并两种有机级分，干燥(MgSO4)，并浓缩。残留物通过CombiFlash纯化，使用己烷-乙酸乙酯作为洗脱物，获得5.1mg(69％)产物。1H NMR(400MHz,甲醇-d4):δ8.27(d,J＝8.5Hz,1H),7.83(d,J＝8.2Hz,1H),7.79(s,1H),7.64(d,J＝8.3Hz,1H),7.46(d,J＝8.5Hz,1H),6.58(d,J＝16.3Hz,1H),6.29(d,J＝16.4Hz,1H),5.81(p,J＝7.4Hz,1H),5.28(d,J＝8.4Hz,1H),5.08(q,J＝6.8Hz,1H),4.77(m,1H),4.42(d,J＝15.0Hz,1H),3.58(d,J＝11.6,3.2Hz,1H),2.68(td,J＝12.8,3.2Hz,1H),2.56(m,1H),2.52(hept,J＝7.0Hz,1H),2.35(d,J＝13.1Hz,1H),2.30–2.11(m,2H),2.10–1.88(m,3H),1.75(td,J＝13.6,2.8Hz,1H),1.71–1.40(m,5H),1.61(d,J＝7.5Hz,3H),1.59(d,J＝6.9Hz,3H),1.14(d,J＝7.0,Hz,6H),1.08(d,J＝6.8Hz,3H),1.03(d,J＝6.7Hz,3H).LCMS(m/z)676.5[M+H],Tr＝1.20min。
实施例82，化合物82
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化合物82
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室温添加n-丁酰氯(0.05mL)到吡啶(0.15mL)中的75(7.0mg,0.012mmol)的溶液中。室温下1h后，用乙酸乙酯稀释混合物，用10％柠檬酸溶液(x1)和饱和的NaHCO3溶液(x1)洗涤。用乙酸乙酯(x1)提取含水级分以后，合并两种有机级分，干燥(MgSO4)，并浓缩。残留物通过CombiFlash纯化，使用己烷-乙酸乙酯作为洗脱物，获得5.7mg(73％)产物82。1H NMR(400MHz,甲醇-d4):δ8.23(d,J＝8.5Hz,1H),7.82(d,J＝8.5Hz,1H),7.77(s,1H),7.61(dd,J＝8.4,1.7Hz,1H),7.43(d,J＝8.5Hz,1H),6.56(d,J＝16.4Hz,1H),6.26(d,J＝16.3Hz,1H),5.80(q,J＝7.2Hz,1H),5.28(d,J＝8.6Hz,1H),5.06(q,J＝6.6Hz,1H),4.77(m,1H),4.47–4.34(m,1H),3.58(dd,J＝12.8,2.8Hz,1H),2.68(td,J＝12.8,3.2Hz,1H),2.58(d,J＝13.9Hz,1H),2.41–2.31(m,1H),2.28(t,J＝7.3Hz,2H),2.24–2.11(m,1H),2.10–1.88(m,3H),1.80–1.38(m,9H),1.61(d,J＝7.3Hz,3H),1.57(d,J＝6.8Hz,3H),1.07(d,J＝6.8Hz,3H),1.03(d,J＝6.7Hz,3H),0.94(t,J＝7.4Hz,3H).LCMS(m/z)676.4[M+H],Tr＝1.19min。
实施例83，化合物83
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化合物83a
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添加NEt3(1.65mL,11.838mmol)到二恶烷(18mL)中的[(R)-1-(7-溴-喹啉-2-基)-乙基]-氨基甲酸-叔丁基酯39a(1160mg,3.303mmol)、乙烯酸(833mg,4.953mmol)、Pd(OAc)2(149mg,0.664mmol)和(o-Tol)3P(203mg,0.667mmol)的混合物中，并在微波反应器中，将得到的混合物在100℃下加热30min。混合物通过硅藻土板过滤，用乙酸 乙酯洗涤滤出液，接着用水(x2)洗涤。用乙酸乙酯(x1)提取含水级分以后，用水(x1)洗涤两种有机级分，合并，干燥(MgSO4)，并浓缩。残留物通过CombiFlash纯化，使用己烷-乙酸乙酯作为洗脱物，获得1033mg(71％)产物83a。1H NMR(400MHz,氯仿-d):δ8.23(s,1H),8.14(br d,1H),7.76(d,J＝8.5Hz,1H),7.61(d,J＝8.3Hz,1H),7.39(br,1H),6.87(d,J＝16.3Hz,1H),6.60(d,J＝16.2Hz,1H),6.49(s,1H),5.04(s,1H),2.81–2.58(m,4H),2.49(m,2H),2.13(m,2H),1.55(br,3H),1.40(s,9H).LCMS(m/z)439.0[M+H],Tr＝0.87min。
化合物83b
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室温下搅拌MeOH(2mL)和水(2mL)中的83a(150mg,0.342mmol)的溶液，同时添加甲氧基胺盐酸盐(70mg,0.838mmol)和1N KOH(0.7mL)。室温下1h后，用乙酸乙酯稀释混合物，用10％柠檬酸(x1)和水(x1)洗涤。用乙酸乙酯(x1)提取含水级分以后，用水(x1)洗涤两种有机级分，合并，干燥(MgSO4)，并浓缩。残留物通过CombiFlash纯化，使用己烷-EA作为洗脱物，获得144mg(90％)产物83b。LCMS(m/z)468.0[M+H],Tr＝0.98min。
化合物83c
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室温下，将酸83b(144mg,0.308mmol)、1e(162mg,0.374mmol)、Shiina试剂(276mg,0.802mmol)和DMAP(107mg,0.876mmol)的混合物溶于CH2Cl2(5mL)中。30min以后，添加DIEA(0.15mL,0.861mmol)，并将得到的混合物在室温下搅拌16h。用乙酸乙酯稀释混合物，并用水(x2)洗涤。用乙酸乙酯(x1)提取含水级分以后，合并两种有机级分，干燥(MgSO4)，并浓缩。残留物通过CombiFlash纯化，使用己烷-乙酸乙酯作为洗脱物，获得作为异构体混合物的161mg(59％)产物83c。LCMS(m/z)881.3[M+H],Tr＝1.37min。
化合物83
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在0℃下，搅拌THF(2mL)和水(2mL)中的83c(161mg,0.182mmol)的混合物，同时添加1N KOH(0.19mL)。在0℃下搅拌1h，用1N HCl(0.20mL)酸化混合物，用水稀释，并用乙酸乙酯(x2)提取。用乙酸乙酯(x1)提取含水级分后，合并两种有机级分，干燥(MgSO4)，并浓缩。在室温下搅拌二恶烷(2mL)中的CH2Cl2(2mL)和4N HCl中的残留物1h。浓缩混合物后，将残留物与甲苯(x2)共蒸发，在0℃下，搅拌DMF(2.5mL)和CH2Cl2(50mL)中的残留物和HATU(150mg,0.394mmol)的溶液，同时添加DIEA(0.2mL,1.148mmol)。在0℃下1.5h以后，浓缩溶液，并用乙酸乙酯稀释，接着用5％LiCl溶液(x2)洗涤。用乙酸乙酯(x1)提取含水级分后，合并两种有机级分，干燥(MgSO4)，并浓缩。残留物通过CombiFlash进行纯化，使用己烷-乙酸乙酯作为洗脱液。部分纯化的产物通过制备性HPLC进行进一步纯化，获得作为一种异构体的17.2mg(23％)化合物83。1H NMR(400MHz,甲醇-d4):δ9.40(d,J＝5.9Hz,1H),8.87(d,J＝7.5Hz,1H),8.22(d,J＝8.5Hz,1H),7.81(d,J＝8.5Hz,1H),7.78(s,1H),7.61(dd,J＝8.5,1.7Hz,1H),7.43(d,J＝8.5Hz,1H),6.60(d,J＝16.4Hz,1H),6.29(d,J＝16.4Hz,1H),5.81(q,J＝7.2Hz,1H),5.30(d,J＝8.6Hz,1H),5.12–5.01(m,1H),4.40(dd,J＝13.8,4.2Hz,1H),3.79(s,3H),3.56(dd,J＝11.6,2.9Hz,1H),3.18(dt,J＝15.0,4.3Hz,1H),2.68(td,J＝13.0,3.2Hz,1H),2.61–2.50(m,1H),2.48–2.11(m,5H),2.06–1.86(m,2H),1.83–1.62(m,3H),1.60(d,J＝7.3Hz,3H),1.57(d,J＝6.8Hz,3H),1.51(dd,J＝13.3,9.6Hz,1H),1.06(d,J＝6.8Hz,3H),1.01(d,J＝6.6Hz,3H).LCMS(m/z)633.5[M+H],Tr＝1.05min。
实施例84，化合物84
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化合物84a
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根据Bercot,E.A.etal.inOrganic Letters,2008,10,p.5251-5254报道的用于烯醇化物芳基化作用的报道方法，使用1-叔丁基-4-乙基哌啶-1,4-二羧酸盐，这比诶1-叔丁基-4-乙基-4-乙烯基哌啶-1,4-二羧酸盐84a，产率为12％。
1H NMR(400MHz,氯仿-d):δ5.76(dd,J＝17.5,10.7Hz,1H),5.19–5.02(m,2H),4.14(q,J＝7.1Hz,2H),3.80–3.59(m,2H),3.02(ddd,J＝13.8,10.2,3.3Hz,2H),2.10(dtt,J＝13.6,3.2,1.6Hz,2H),1.56(ddd,J＝13.7,10.1,4.1Hz,2H),1.41(s,9H),1.22(t,J＝7.1Hz,3H).LCMS[M+H]+＝184.05(-Boc).Tr＝2.43min。
化合物84
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将1-叔丁基-4-乙基哌啶-1,4-二羧酸盐(282mg)水解成它的酸，然后进行Heck反应和后续的Shiina反应，进行实施例36中报告的方法后，形成84(129mg)。1H NMR(400MHz,甲醇-d4):δ9.41(d,J＝6.2Hz,1H),8.28–8.18(m,1H),8.00(s,1H),7.57(d,J＝8.5Hz,1H),7.43(d,J＝8.5Hz,1H),6.84(d,J＝16.3Hz,1H),6.34(d,J＝16.3Hz,1H),5.86(q,J＝7.3Hz,1H),5.44(d,J＝12.2Hz,1H),5.23(d,J＝8.9Hz,1H),5.15(t,J＝6.4Hz,1H),4.43(d,J＝13.2Hz,1H),3.96–3.80(m,2H),2.79(d,J＝12.7Hz,1H),2.47–2.15(m,4H),1.95(m,1H),1.80(m,2H),1.55(d,J＝6.7Hz,4H),1.46(s,9H),1.32–1.16(m,10H),1.04(dd,J＝8.3,6.7Hz,6H).LCMS[M+H]+＝691.30；Tr＝2.02min。
实施例85，化合物85
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化合物85a
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实施例84中报告的程序以后，通过室温下用二恶烷/DCM中的4N HCl处理1h，除去1-叔丁基-4-乙基-4-乙烯基哌啶-1,4-二羧酸盐84a(450mg)的N-Boc基团，获得乙基4-己烯基哌啶-4-羧酸盐。室温下乙基4-乙烯基哌啶-4-羧酸盐与DCM中的MsCl和TEA反应18h，获得乙基1-(甲基磺酰基)-4-乙烯基哌啶-4-羧酸盐85a(409mg,产率为98％)。LCMS[M+H]+＝249.90(-Boc)；Tr＝1.96min。
化合物85
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将化合物85a(409mg)水解成它的酸，将该材料进行Heck耦合，而且Shiina-介导的内酯化反应用于形成85(34mg)，以与实施例84中报告的相似的方式。1H NMR(400MHz,甲醇-d4):δ8.22(d,J＝8.5Hz,1H),7.85–7.74(m,2H),7.70–7.58(m,1H),7.42(d,J＝8.5Hz,1H),6.45(dd,J＝132.8,16.3Hz,2H),5.79(q,J＝7.1Hz,1H),5.28(d,J＝8.5Hz,1H),5.05(q,J＝6.5Hz,1H),4.39(d,J＝13.2Hz,1H),4.06(s,3H),3.70(dd,J＝18.6,5.4Hz,1H),3.64(s,2H),3.60–3.51(m,1H),3.04–2.84(m,2H),2.73–2.60(m,1H),2.53(d,J＝13.7Hz,1H),2.34(d,J＝13.7Hz,1H),2.30–2.09(m,2H),2.04–1.82(m,3H),1.64(dd,J＝10.8,6.5Hz,1H),1.57(dd,J＝10.6,7.0Hz,6H),1.49(dd,J＝9.7,5.2Hz,1H),1.45–1.18(m,2H),1.02(dd,J＝17.8,6.7Hz,6H).LCMS[M+H]+＝669.49；Tr＝0.95min。
实施例86和实施例87-化合物86和87
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化合物86a
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将水(7mL)/丙酮(14mL)/硫酸(7.2mL)溶液中的反应物t-丁基-L-苏氨酸(由Sigma-Aldrich,Inc.供应)(1g,5.7mmol)冷却至0℃。逐滴添加水(5mL)中的亚硝酸钠(1.18g,17.1mmol)的溶液。搅拌混合物，并升温至室温过夜。通过旋转蒸发除去丙酮以后，用EtOAc提取残留物两次，并用盐水洗涤。有机层通过(MgSO4)干燥，并浓缩。残留物在硅胶柱上通过CombiFlash进行纯化，使用MeOH/DCM。获得674mg(产率为67％)(2S,3R)-3-叔丁氧基-2-羟基丁酸86a。1H NMR(400MHz,氯仿-d):4.18–4.02(m,1H),2.40(m,1H),1.32–1.25(m,12H)。
化合物86b
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(2S,3R)-3-叔丁氧基-2-羟基丁酸86a(337mg,1.9mmol)与从1d除去N-Boc产生的指定二肽在0℃下反应30min，如用DMF中的DIPEA(2mL)、BOP(924mg,2.09mmol)合成1e(1.2eq)中描述的，热胺和室温下30min。用3％LiCl aq.将反应淬灭。用EtOAc提取溶液两次，并用盐水洗涤。有机层通过(MgSO4)干燥，并浓缩。残留物在硅胶柱上通过CombiFlash进行纯化，使用MeOH/DCM。获得599mg(产率为64％)想要的三肽86b。LCMS[M+H]+＝489.88(100％),Tr＝1.05min。
化合物86
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使用语实施例84中报告的相同的合成程序，将313mg三肽86b转变成最终的化合物86，产生7mg 86。1H NMR(400MHz,甲醇-d4):δ8.80(d,J＝8.5Hz,1H),8.22(d,J＝8.5Hz,1H),7.88(s,1H),7.80(m,1H),7.55(m,1H),7.42(d,J＝8.5Hz,1H),6.57-6.35(dd,J＝132.8,16.3Hz,2H),5.79(q,J＝7.1Hz,1H),5.28(d,J＝8.5Hz,1H),5.05(q,J＝6.5Hz,1H),4.39(d,J＝13.2Hz,1H),4.06(m,1H),3.60(dd,J＝18.6,5.4Hz,1H),2.78(s,9H),2.70–2.63(m,1H),2.27(d,J＝13.7Hz,1H),1.90(d,J＝13.7Hz,1H),1.68-1.63(m,1H),1.57(dd,J＝10.6,7.0Hz,6H),1.50(s,3H),1.40(s,3H),1.23(m,12H).LCMS[M+H]+＝608.25；Tr＝1.17min。
化合物87
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在上述报告的86的合成期间，获得作为副产物的17mg 87。1H NMR(400MHz,甲醇-d4):δ8.94(d,J＝8.5Hz,1H),8.22(d,J＝8.5Hz,1H),7.81-7.77(m,2H),7.58(m,1H),7.40(d,J＝8.5Hz,1H),6.54-6.31(dd,J＝132.8,16.3Hz,2H),5.76(q,J＝7.1Hz,1H),5.33(d,J＝8.5Hz,1H),5.05(q,J＝6.5Hz,1H),4.40(d,J＝13.2Hz,1H),4.06(m,1H),3.60(dd,J＝18.6,5.4Hz,1H),2.70–2.63(m,1H),2.27(d,J＝13.7Hz,1H),1.90(d,J＝13.7Hz,1H),1.68-1.63(m,1H),1.57(dd,J＝10.6,7.0Hz,6H),1.50(s,3H),1.40(s,3H),1.23(m,12H).LCMS[M+H]+＝552.31；Tr＝0.90min。
实施例88，化合物88
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化合物88a：1,2-二氯-乙炔
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将无油的氢化钾(来自1740mg ca.30％分散于矿物油中,ca.13mmol)、无水四氢呋喃(10mL)和己烷(1mL)放置到烤箱干燥的、氩气净化的烧瓶中。烧瓶用氩气再次净化，并添加三氯乙烯(900μL,1.32g,10mmol)，接着添加干甲醇(10μL,7.9mg,0.25mmol)。将混合物在室温下搅拌2h。该时间以后，添加己烷(10mL)，而且得到的溶液立即用于接下来的步骤。
化合物88b：4-氯乙炔基-四氢-吡喃-4-羧酸甲酯
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添加四氢呋喃(50mL)到烤箱干燥的、氩气净化的烧瓶中，用冰浴冷却溶液。添加四氢呋喃/庚烷/乙苯中的二异丙基氨基锂(7.2mL,13mmol)的1.8M溶液。将得到的溶液冷却至–78℃，用甲基四氢-2H-吡喃-4-羧酸盐(Sigma-Aldrich)(1.20mL.1.30g,9mmol)逐滴处理，接着用六甲基磷酰胺(1.56mL,1.61g,9mmol)处理。将得到的溶液升温至0℃，搅拌20min，冷却至–78℃，并用预冷的(0℃)1,2-二氯-乙炔(ca.10mmol)的溶液逐滴处理。将反应混合物在–78℃下搅拌30min，然后升温至室温。在室温下4h后，将反应混合物倒入碎冰中，并用二乙醚(200mL)提取(添加5mL盐水来支持分离)。分离有机相，用水(200mL)洗涤。用二乙醚(100mL)提取水相。用盐水(100mL)洗涤合并的有机级分，通过硫酸钠干燥，通过2cm硅胶层过滤(用50mL乙酸乙酯洗涤硅胶层)，然后减压浓缩。粗的产物进行硅胶色谱(从异己烷中0-15％乙酸乙酯梯度)，获得作为无色油的标题化合物(1.22g,67％)。Rf＝0.48,30％异己烷中的乙酸乙酯,乙醇中的磷钼酸.LCMS(m/z)203.2/205.3[M+H],Tr＝3.12min(Gemini 5u C18![]()
50×4.60 mm 5微米柱,3.5min,2ml/min,5–100％乙腈/水,0.1％乙酸调节剂梯度).1H NMR(400MHz,CDCl3):δ3.79-3.65(m,4H),3.72(s,3H),1.97(m,2H),1.78(m,2H)。
化合物88c：4-乙炔基-四氢-吡喃-4-羧酸甲酯
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将4-氯乙炔基-四氢-吡喃-4-羧酸甲酯(1.01g,5mmol)和铜粉(1.6g,25mmol)悬浮于四氢呋喃(100mL)中。添加乙酸(15mL)，并将反应混合物3h加热至60℃。该时间以后，将反应混合物倒入水中(用滤纸将铜粉过滤掉)，并用二乙醚(3x50mL)提取。用饱和的氯化铵溶液(3x50mL)、饱和的碳酸氢钠溶液(2x50mL)和水(50mL)洗涤合并的有机提取物。用二乙醚(50mL)提取水相。用盐水(50mL)洗涤合并的提取物，通过硫酸镁干燥，通过2cm硅胶层过滤(用50mL乙酸乙酯洗涤硅胶层)，并减压浓缩。在高真空下干燥1天以后，分离作为无色油的标题化合物(0.84g,定量产生)。Rf＝0.37,30％异己烷中的乙酸乙酯,乙醇中的磷钼酸LCMS(m/z)169.0[M+H],Tr＝2.43min(Gemini 5u C18![]()
50×4.60mm 5微米柱,3.5min,2ml/min,5–100％乙腈/水,0.1％乙酸调节剂梯度).1H NMR(400MHz,CDCl3):δ3.80-3.67(m,4H),3.73(s,3H),2.34(s,1H),1.98(m,2H),1.80(m,2H)。
化合物88d
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添加醋酸钯(0.19g,0.85mmol)和三-o-甲苯基膦(0.26g,0.85mmol)到无水二恶烷(30mL)中的甲基4-乙烯基四氢-2H-吡喃-4-羧酸盐(用Lindlar’s催化剂在88c的氢化后制备)，(0.726g,4.27mmol)、三乙胺(1.29g,12.81mmol)和[(R)-1-(7-溴-喹啉-2-基)-乙基]-氨基甲酸叔丁基酯39a(1.5g,4.27mmol)的混合物中。将反应混合物2h加热至100℃，并用EtOAc(100mL)稀释。用水洗涤粗产物，通过Na2SO4干燥。浓缩后，残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷/乙酸乙酯1:0至0:1的梯度，获得88a(1.1g,59％)。LCMS(m/z)441.2[M+H].Tr＝2.21min。
化合物88e
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添加水(11.4mL)中的1N KOH到THF(10mL)和MeOH(5ml)中的88d(1.0g,2.27mmol)的溶液中。将反应混合物在50℃下搅拌2h，通过添加水(11.4mL)中的1N HCl酸化。用EtOAc(2x100mL)提取以后，通过Na2SO4干燥，并浓缩，该粗的酸可以使用，而不需要进一步纯化。将上述粗的酸(0.328g,0.77mmol)、1e(0.398,0.92mmol),4-DMAP(0.225g,1.85mmol)、DIPEA(0.239g,1.85mmol)和Shiina试剂(0.632g,1.84mmol)溶于DCM(10mL)中。在室温下搅拌反应混合物过夜。浓缩后，用EtOAc(100mL)稀释该粗产物，用饱和的NH4Cl洗涤，通过Na2SO4干燥。浓缩后，残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷/乙酸乙酯1:0至0:1的梯度，获得88e(0.55g,85％)。LCMS(m/z)841.2[M+H].Tr＝2.56min。
化合物88
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添加水(0.83mL)中的1N KOH到THF(10mL)中的88e(0.70g,0.83mmol)的溶液中。室温下大力搅拌反应混合物20min，并通过添加水(0.83mL)中的1N HCl进行酸化。浓缩后，粗产物溶于4N HCl/二恶烷(2ml)中，并搅拌1h。浓缩后，与甲苯(3x)共蒸发，把上述粗产物溶于DCM(800mL)中。添加N,N-二异丙基乙胺(0.54g,4.2mmol)、DMAP(催化含量)和2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲烷铵(0.63g,1.66mmol)。将反应混合物在室温下搅拌1h。浓缩后，粗产物通过制备性HPLC进行纯化，获得作为白色固体的88(0.22g,45％)。1H NMR(400MHz,甲醇-d4):δ8.81(d,J＝7.7Hz,1H),8.54–8.30(m,1H),8.11–7.78(m,2H),7.68(dd,J＝8.5,1.7Hz,1H),7.53(d,J＝8.5Hz,1H),6.62(d,J＝16.3Hz,1H),6.34(d,J＝16.3Hz,1H),5.78(m,1H),5.21(dd,J＝8.1,1.0Hz,1H),5.09(q,J＝6.7Hz,1H),4.38(d,J＝13.2Hz,1H),3.92(ddq,J＝ 19.0,12.0,4.0,3.4Hz,2H),3.71–3.40(m,3H),2.69(m,1H),2.38(m,1H),2.17(m,3H),2.08–1.74(m,4H),1.76–1.44(m,7H),1.00(dd,J＝24.1,6.7Hz,6H).LCMS(m/z)592.3[M+H].Tr＝2.15min。
实施例89，化合物89
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化合物89a
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添加醋酸钯(0.063g，0.28mmol)和三-o-甲苯基膦到无水二恶烷(15mL)中的[(R)-1-(7-溴-喹啉-2-基)-乙基]-氨基甲酸叔丁基酯39a(0.50g,1.42mmol)、三乙胺(0.43g4.26mmol)和获自Small Molecules,Inc.的乙烯基环己酮乙氧基酯(0.279g,1.42mmol)的混合物中。将反应混合物3h加热至100℃，并用EtOAc(50mL)稀释。用水洗涤粗的混合物，并通过Na2SO4干燥。浓缩后，残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷/乙酸乙酯1:0至0:1的梯度，获得89a(0.30g,45％)。LCMS(m/z)467.2[M+H].Tr＝2.39min。
化合物89b
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逐滴添加甲基溴化镁(3.0M solution in ether,0.43mL)到无水THF(5mL)中的89a(0.3g,0.64mmol)的溶液中，其冷却至-78℃。将混合物在-78℃搅拌1h。用EtOAc(30mL)稀释反应混合物，并用饱和NH4Cl(2mL)淬灭。分层后，将有机层通过Na2SO4干燥，并浓缩。粗的残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷/乙酸乙酯1:0至1:1，获得作 为1:1顺式/反式混合物的混合物的标题化合物89b(0.17g,56％)。LCMS(m/z)483.3[M+H].Tr＝2.36min。
化合物89c
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添加水(1.76mL)中的1N KOH的溶液到THF(2mL)和甲醇(1mL)中的89b(0.17g,0.353mmol)的溶液中。将反应混合物在室温下搅拌1h。添加1N HCl(1.76mL)到反应混合物中。浓缩后，将粗产物在高真空下过夜。把上述粗产物和2,6-卢剔啶(0.227g,2.12mmol)溶于DCM(5mL)中。把反应混合物冷却至0℃，逐滴添加TBSOTf(0.280g,1.06mmol)到反应混合物中。室温搅拌1h并浓缩后，粗产物通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷/乙酸乙酯1:0至1:1，获得89c(0.150g,58％)。LCMS(m/z)741.4[M+H].Tr＝3.56min。
化合物89d
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制备四氢呋喃(1mL)和甲醇(1ml)中的89c(0.15g,0.20mmol)的溶液，并添加碳酸氢钾的1M aq.溶液。室温下搅拌反应混合物1h。添加二碳酸二叔丁基酯(0.44g,0.20mmol)到反应溶液中。然后，室温下搅拌反应混合物另外的1h，通过添加水中的1N HCl酸化到pH＝4。浓缩并与甲苯(3x)共蒸发后，获得粗的酸。将上述粗的酸、1e(0.104g,0.24mmol)、DMAP(0.06g,0.48mmol)、DIPEA(0.02g,0.48mmol)和shiina试剂(0.138g,0.40mmol)溶于DCM(10mL)中。室温下搅拌反应混合物过夜。浓缩后，用EtOAc(100mL)稀释该粗产物，用饱和NH4Cl洗涤，并通过Na2SO4干燥。浓缩后，残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷/乙酸乙酯1:0至0:1的梯度，获得89d(0.07g,35％)。LCMS(m/z)983.5[M+H].Tr＝2.98min。
化合物89
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添加水(0.061mL)中的1N KOH的溶液到THF(1mL)中的89d(0.06g,0.061mmol)的溶液中。室温下大力搅拌反应混合物20min，并通过添加水(0.1mL)中的1N HCl进行酸化。浓缩后，粗产物溶于4N HCl/二恶烷(3ml)中，并室温搅拌1h。浓缩并与甲苯(3x)共蒸发后，把上述粗产物溶于DCM(20mL)中。添加N,N-二异丙基乙胺(0.039g,0.31mmol)、DMAP(催化含量)和2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲烷铵(0.028g,0.073mmol)。将反应混合物在室温下搅拌1h。浓缩后，粗产物通过制备性HPLC进行纯化，获得作为单一化合物的89(0.006g,16％)。其他的异构体不是纯的。1H NMR(400MHz,甲醇-d4):δ8.93(d,J＝8.6Hz,1H),8.18(d,J＝8.6Hz,1H),8.14–8.02(m,2H),7.86(d,J＝8.5Hz,1H),7.04(d,J＝16.5Hz,1H),6.81(d,J＝16.5Hz,1H),5.27(dd,J＝27.9,7.0Hz,2H),4.00(s,1H),3.58(dd,J＝9.0,3.7Hz,1H),3.06(d,J＝39.1Hz,1H),2.32–1.77(m,11H),1.81–1.50(m,5H),1.43(s,3H),1.32(d,J＝6.9Hz,4H),0.95(d,J＝6.9Hz,3H),0.80(d,J＝6.8Hz,3H).LCMS(m/z)620.3[M+H].Tr＝2.12min。
实施例90和91，化合物90和91
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化合物90a
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添加醋酸钯(II)(95mg,0.42mmol)、指定的烯二甲基吡喃乙氧基羧酸酯(670mg,3.16mmol)、2-叔丁基膦-3,4,5,6-四甲基-2′,4′,6′-三异丙基-1,1′-二苯基(202mg,0.42mmol)和三乙胺(630mg,6.3mmol)到无水乙腈(25mL)中的(R)-叔丁基1-(7-溴喹啉-2-基)-氨基甲酸乙酯39a(740mg,2.1mmol)的溶液中，然后将混合物在微波中于150℃加热2h。反应混合物通过硅藻土过来，并用四氢呋喃(20mL)洗涤过滤板。蒸发滤出液，然后添加水(50mL)，并用乙酸乙酯(2x50mL)提取有机提取物。合并的有机物通过硫酸钠干燥，过滤，并减压浓缩，提供粗的残留物。将该粗的残留物进行硅胶色谱纯化(从异己烷中0-70％乙酸乙酯的梯度)，获得作为白色固体的90a(170mg,17％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.04(d,J＝8.4Hz,1H),7.96(s,1H),7.71(d,J＝8.5Hz,1H),7.53(d,J＝8.5Hz,1H),7.27(d,J＝8.4Hz,1H),6.60(d,J＝16.3Hz,1H),6.35(d,J＝16.3Hz,1H),6.20–6.10(m,1H),5.01–4.89(m,1H),4.25–4.09(m,2H),3.91–3.69(m,2H),2.41–2.14(m,2H),1.80–1.61(m,2H),1.56(s,3H),1.45(s,9H),1.32–1.21(m,6H),1.15(s,3H).LCMS(m/z)483.2[M+H],Tr＝4.28min。
化合物90b：
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用氢氧化锂(12mg,0.50mmol)处理四氢呋喃/水/甲醇(10mL,4:1:1)中的90a(160mg,0.33mmol)的溶液中。在60℃下搅拌6h，减压浓缩反应。将残留物溶于水(20mL)中，添加1M盐酸(0.5mL,0.5mmol)，用二氯甲烷(2x50mL)快速提取混合物。合并有机物，用盐水洗涤，通过硫酸钠干燥并过滤。蒸发滤出液，获得作为白色固体的90b(110mg,73％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.03(d,J＝8.2Hz,1H),7.96(s,1H),7.70(d,J＝8.5Hz,1H),7.58(d,J＝8.5Hz,1H),7.22(d,J＝8.2Hz,1H),6.62(d,J＝16.3Hz,1H),6.35(d,J＝16.3Hz,1H),6.17–6.15(m,1H),5.21–4.94(m,1H),3.92–3.72(m,2H),2.43–2.15(m, 2H),1.82–1.63(m,2H),1.61(s,3H),1.42(s,9H),1.24(s,3H),1.15(s,3H).LCMS(m/z)455.2[M+H],Tr＝3.35min(Gemini 5u C18![]()
50×4.60mm 5微米柱,6min,2ml/min,5–100％乙腈/水,0.1％乙酸调节剂梯度)。
化合物90c
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把2-甲基-6-硝基苯甲酸酐(125mg,0.36mmol)、4-二甲基氨基吡啶(62mg,0.51mmol)、90b(110mg,0.24mmol)和无水二氯甲烷(10mL)放置到烤箱干燥、氩气净化的烧瓶中。添加N,N-二异丙基乙胺(66mg,0.51mmol)到得到的溶液中，室温下搅拌该反应混合物10min。通过注射器，逐滴添加1e(157mg,0.36mmol)，作为无水二氯甲烷(5mL)中的溶液。室温搅拌12h以后，将反应混合物转到分液漏斗中，并用用洗涤(添加20mL,10mL盐水以支持分离)。用二氯甲烷(20mL)提取水相。用盐水(20mL)洗涤合并的有机提取物，通过硫酸钠干燥，过滤，并减压浓缩。残留物通过硅胶色谱进行纯化(从异己烷中0-40％乙酸乙酯+甲醇(4/1)的梯度)，蒸发后，获得作为白色固体的90c(201mg,96％)。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ8.28(d,J＝8.4Hz,1H),7.98(s,1H),7.88(d,J＝8.2Hz,1H),7.78(d,J＝9.4Hz,1H),7.53(d,J＝8.4Hz,1H),6.93–6.81(m,1H),6.67–6.51(m,1H),5.51–5.34(m,2H),5.03(d,J＝12.1Hz,2H),4.86(d,J＝12.1Hz,2H),4.13(q,J＝7.1Hz,1H),3.91–3.83(m,3H),2.49–2.33(m,2H),2.30–2.20(m,1H),2.17–2.07(m,3H),2.02–1.85(m,2H),1.83–1.65(m,2H),1.53(d,J＝7.1Hz,3H),1.47(s,9H),1.34(d,J＝6.9Hz,3H),1.04(d,J＝6.9Hz,6H),0.88(d,J＝6.8Hz,6H).LCMS(m/z)868.2/870.2[M+H],Tr＝3.22min(Gemini 5u C18![]()
50×4.60mm 5微米柱,3.5min,2ml/min,5–100％乙腈/水,0.1％乙酸调节剂梯度)。
化合物90和91
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添加水(5mL)中的氢氧化锂(6mg,0.53mmol)的溶液到四氢呋喃(10mL)中的90c(195mg,0.22mmol)中。室温搅拌2h后，添加1M盐酸(0.25mL 1M水中的溶液,0.25mmol)，减压浓缩反应混合物，残留物在二氯甲烷(50mL)与水(50mL)之间分离。收集有机层，减压浓缩，并高真空下干燥1天。在氩气下，室温下用1,4-二恶烷(5mL,20mmol)中的4M氯化氢处理残留物4h。减压浓缩反应混合物。将该残留物溶于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)，添加获得的溶液到氩气净化的烧瓶中，该烧瓶中含有2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲烷铵(128mg,0.34mmol)、N,N-二异丙基乙胺(144mg,1.12mmol)和二氯甲烷(100mL)。反应混合物用氩气再次净化，并室温下搅拌2h。用水(100ml)和盐水(100ml)洗涤获得的反应混合物，通过硫酸镁干燥，过滤，并减压浓缩。残留物通过硅胶色谱进行纯化(从异己烷中的0-40％乙酸乙酯的梯度)，蒸发后，首先获得作为白色固体的化合物90(27mg,19％)，然后获得作为白色固体的化合物91(17mg,12％)。
化合物90：1H NMR(400MHz,CD3OD):δ9.08(d,J＝8.6Hz,1H),8.48(s,1H),8.27(d,J＝8.6Hz,1H),8.03(s,1H),7.97(dd,J＝8.5,1.5Hz,1H),6.91–6.69(m,2H),5.92–5.73(m,1H),5.36–5.22(m,1H),4.42–4.26(m,1H),4.01–3.83(m,2H),3.83–3.73(m,1H),3.71–3.62(m,1H),3.55–3.42(m,1H),2.53–2.41(m,1H),2.33–2.26(m,1H),2.13–2.05(m,1H),2.00–1.87(m,2H),1.81(d,J＝7.2Hz,3H),1.79–1.61(m,4H),1.44–1.38(m,2H),1.33(s,3H),1.30–1.24(m,3H),1.22(s,3H),1.11–1.02(m,3H),0.99(d,J＝6.8Hz,3H).LCMS(m/z)620.4[M+H],Tr＝3.45min。
化合物91：1H NMR(400MHz,CD3OD):δ8.27(d,J＝8.5Hz,1H),7.86(d,J＝8.5Hz,1H),7.83(s,1H),7.64(dd,J＝8.4,1.7Hz,1H),7.47(d,J＝8.5Hz,1H),6.63(d,J＝16.2Hz,1H),6.24(d,J＝16.3Hz,1H),5.82(q,J＝7.2Hz,1H),5.24(d,J＝8.3Hz,1H),5.16–5.05(m,1H),4.53–4.40(m,1H),3.91–3.82(m,2H),3.67–3.57(m,1H),2.72(td,J＝12.9,3.3Hz,1H),2.54–2.44(m,1H),2.40(dd,J＝13.8,1.9Hz,1H),2.34–2.16(m,2H),2.02–1.92(m,1H),1.90–1.79(m,1H),1.78–1.70(m,2H),1.68–1.52(m,2H),1.64(d,J＝7.2Hz,3H),1.61(d,J＝6.7Hz,3H),1.31(s,3H),1.20(s,3H),1.12(d,J＝6.8Hz,3H),1.08(d,J＝6.6Hz,3H).LCMS(m/z)620.4[M+H],Tr＝3.47min(Gemini 5u C18![]()
50×4.60mm 5微米柱,6min,2ml/min,5–100％乙腈/水,0.1％乙酸调节剂梯度)。
实施例92-化合物92
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化合物92a
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在0℃下，逐滴添加NaBH4(697mg,18.35mmol)的MeOH(80mL)溶液到装备有滴液漏斗的烧瓶中的MeOH(80mL)中的商业供应的乙基-4-氧-1-乙烯基环己烷羧酸盐(由Small Molecules,Inc.供应),(3.0g,15.29mmol)。在0℃下搅拌10min，并室温下搅拌48h。用饱和NH4Cl溶液淬灭后，用EtOAc提取，并用盐水洗涤一次。有机层通过(Na2SO4)干燥，并浓缩。通过CombiFlash在硅胶柱上分离顺式和反式异构体，使用EtOAC/己烷作为洗脱液。用EA/HEX，TLC＝1/3,反式的Rf＝0.5,顺式Rf＝0.4.产量：反式异构体92a是425mg，顺式异构体是864mg，顺式/反式的混合物是468mg。(顺式+反式)的总产量是1.76g，59％。
对于反式异构体92a：1H NMR(400MHz,氯仿-d):δ5.84–5.71(m,1H),5.23–5.11(m,2H),4.11(q,J＝7.5Hz,2H),3.79(tq,J＝6.8,3.6Hz,1H),1.90(ddd,J＝11.7,8.2,4.2Hz,4H),1.71(ddt,J＝11.9,7.8,3.7Hz,2H),1.61–1.50(m,2H),1.22(t,J＝7.1Hz,3H)。
对于顺式异构体：1H NMR(400MHz,氯仿-d):δ5.78(dd,J＝17.5,10.6Hz,1H),5.13–5.00(m,2H),4.15(q,J＝7.1Hz,2H),3.61(dt,J＝13.2,6.4Hz,1H),2.38–2.22(m,2H),1.89(dt,J＝10.7,5.2Hz,2H),1.47–1.29(m,4H),1.24(t,J＝7.1Hz,3H)。
化合物92b
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与CH3OBF4(1.66g,10.7mmol)和Proton Spronge(2.3g,10.7mmol)一起添加DCM(10mL)中的反应物92a(1R,4R)-乙基4-羟基-1-乙烯基环己烷羧酸盐(425mg,2.13mmol)，并室温搅拌24h。通过一堆硅藻土过滤后，用饱和的NaHCO3溶液洗涤滤出液。有机层通过(Na2SO4)干燥，浓缩，并通过CombiFlash在硅胶柱上纯化，使用EtOAC/己烷作为洗脱物。获得223mg(产率为49％)的(1R,4R)-乙基4-羟基-1乙烯基-环己烷羧酸盐92b。1H NMR(400MHz,氯仿-d):5.87–5.68(m,1H),5.20–4.99(m,2H),4.23–3.95(m,2H),3.36–3.19(m,4H),1.87(pd,J＝13.5,5.6Hz,4H),1.75–1.54(m,4H),1.29–1.14(m,3H)。
化合物92c
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从223mg(1.05mmol)92b出发，使用乙基-4-氧-1-乙烯基环己烷羧酸盐代替，以与实施例74中相同的方式，进行Heck反应以形成(1R,4R)-乙基1-((E)-2-(7-((R)-1-(叔丁氧基羰基氨基)-乙基)-萘-2-基)-乙烯基)-4-甲氧基环己烷羧酸盐，获得424mg(产率为89％)中间体化合物92c。LCMS[M+H]+＝455.10。
化合物92
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使用多步合成，从424mg(0.92mmol)92c开始，制备化合物92，其中用1e酯化，选择性水解，然后除去N-Boc，获得中间体，使用内酯化和实施例90中报告的最终纯化方法，在用DCM/DMF中的HATU/DIPEA处理后，其完成大环92(36mg)，总产率为6.2％。1H NMR(400MHz,甲醇-d4):δ8.21(d,J＝8.5Hz,1H),7.80(d,J＝8.4Hz,1H),7.75(d,J＝1.7Hz,1H),7.59(dd,J＝8.5,1.7Hz,1H),7.41(d,J＝8.5Hz,1H),6.40(dd,J＝124.5,16.3Hz,2H),5.78(q,J＝7.2Hz,1H),5.23(d,J＝8.6Hz,1H),5.09–4.99(m,1H),4.45–4.34(m,1H),3.60–3.51(m,1H),3.44(s,1H),3.33(s,3H),2.66(td,J＝13.0,3.3Hz,1H),2.29–2.09(m,3H),2.05–1.78(m,6H),1.74–1.62(m,2H),1.62–1.39(m,8H),1.26(m,3H),1.02(dd,J＝19.3,6.7Hz,6H).LCMS[M+H]+＝620.63。
实施例93-化合物93
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化合物93a(S)-4-苄基-3-(2-环丙基-乙酰基)-恶唑烷-2-酮
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随后用三乙胺(21.4mL,153.75mmol)和三甲基乙酰氯(6.9mL,56.375mmol)处理无水四氢呋喃(150mL)中的环丙基乙酸(5.13g,51.250mmol)的冷却的(-40℃)溶液。在-40℃下搅拌1h，用(S)-4-苄基-恶唑烷-2-酮(9.99g,56.375mmol)和氯化锂(2.39g,56.375mmol)处理混合物。使混合物缓慢升温至室温，在室温下搅拌22h后，反应在二氯甲烷与半饱和的氯化铵之间分离。用二氯甲烷萃取水层。合并有机物，通过相分离器过滤，并真空除去挥发物。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用100g Isolute筒，用异己烷/乙酸乙酯1:0至9:1的连续梯度洗脱，获得作为无色油的标题化合物(11.63g,87％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ0.19-0.32(m,2H),0.56-0.69(m,2H),1.10-1.24(m,1H),2.76-2.87(m,2H),2.96(dd,J＝16.9,6.9Hz,1H),3.34(dd,J＝13.2,3.3Hz,1H),4.15-4.29(m,2H),4.66-4.77(m,1H),7.20-7.40(m,5H).LCMS(m/z)282.1[M+Na],Tr＝2.78min。
化合物93b(S)-4-苄基-3-((S)-2-环丙基-2-羟基-乙酰基)-恶唑烷-2-酮
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用无水四氢呋喃(100mL)稀释双(三甲基硅基)氨基钠(0.6M,甲苯中,65mL,38.918mmol)的冷(-78℃)溶液，用无水四氢呋喃(50mL)中的(S)-4-苄基-3-(2-环丙基-乙酰基)-恶唑烷-2-酮(9.174g,35.380mmol)的溶液处理。在-78℃下搅拌45min，用无水四 氢呋喃(50mL)中的2-苯磺酰基-3-苯基-氧杂吖丙啶(11.064g,42.456mmol)的溶液处理混合物。在-78℃下搅拌55min后，用乙酸(10.1mL,176.9mmol)将反应淬灭，并升温至室温。用碳酸氢钠溶液(300mL)将混合物淬灭，并倒入二氯甲烷/异丙烷(3:1,400mL)。用二氯甲烷萃取水层，合并有机物，用饱和硫代硫酸钠、盐酸(1M,300mL)、水洗涤，并通过相分离器过滤。真空除去挥发物，残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用100g Isolute筒，用异己烷/乙酸乙酯1:0至7:3的连续梯度洗脱，获得作为无色油的标题化合物(7.922g,81％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ0.42-0.65(m,4H),1.25-1.38(m,1H),2.88(dd,J＝13.4,9.6Hz,1H),3.35(dd,J＝13.4,3.4Hz,1H),3.44(d,J＝8.2Hz,1H),4.25-4.37(m,2H),4.67-4.72(m,1H),4.80(dd,J＝8.0,6.0Hz,1H),7.21-7.41(m,5H).LCMS(m/z)298.1[M+Na],Tr＝2.27min。
化合物93c(S)-4-苄基-3-((S)-2-环丙基-2-三异丙基硅氧基-乙酰基)-恶唑烷-2-酮
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随后用2,6-卢剔啶(3.5mL,30.052mmol)和三异丙基硅基三氟甲烷磺酸酯(6.1mL,22.539mmol)处理二氯甲烷(60mL)中的(S)-4-苄基-3-((S)-2-环丙基-2-羟基-乙酰基)-恶唑烷-2-酮(4.137g,15.026mmol)的冷却的(0℃)溶液。室温搅拌1h后，用pH 4缓冲液(酞酸盐)将反应淬灭。用二氯甲烷萃取水层。合并有机物，通过相分离器过滤，并真空除去挥发物。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用100g Isolute筒，用异己烷/乙酸乙酯1:0至9:1的连续梯度洗脱，获得作为无色油的标题化合物(5.28g,81％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ0.40-0.49(m,2H),0.53-0.62(m,1H),0.63-0.71(m,1H),1.02-1.18(m,21H),1.20-1.34(m,1H),2.66(dd,J＝13.1,10.5Hz,1H),3.49(dd,J＝13.1,3.4Hz,1H),4.17-4.27(m,2H),4.63-4.73(m,1H),5.58(d,J＝5.1Hz,1H),7.24-7.40(m,5H)。
化合物93d(S)-环丙基-羟基-乙酸
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随后用过氧化氢(30％水溶液,2.7mL,26.173mmol)和氢氧化锂一水合物(439.2mg,10.470mmol)处理四氢呋喃/水(60mL,5:1)中的(S)-4-苄基-3-((S)-2-环丙基-2-三异丙基硅氧基-乙酰基)-恶唑烷-2-酮(2.260g,5.235mmol)的冷却的(0℃)溶液。在0℃ 下搅拌4h，用浓缩的盐酸(～8mL)和偏亚硫酸氢钠(9.9g)将反应淬灭。用四氢呋喃/乙酸乙酯(2x)萃取水层。合并有机物，通过相分离器过滤，并真空除去挥发物。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用25g Isolute筒，用二氯甲烷/甲醇1:0至9:1的连续梯度洗脱，获得作为无色针状物的标题化合物(298.3mg,49％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ0.45-0.71(m,4H),1.14-1.29(m,1H),3.87(d,J＝6.9Hz,1H)。
化合物93e((S)-2-{(S)-3-[(R)-1-(7-溴-喹啉-2-基)-乙基氨甲酰基]-四氢-哒嗪-1-基}-1-甲基-2-氧-乙基)-氨基甲酸叔丁基酯
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用氢氧化锂一水合物(874.4mg,20.844mmol)处理四氢呋喃/水(60mL,5:1)中的(S)-1-((S)-2-叔丁氧基羰基氨基-丙酰基)-六氢-哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯-乙酯(3.007g,6.948mmol)的冷(0℃)溶液。在0℃下搅拌40min，用盐酸(1M,50mL)将反应淬灭。用乙酸乙酯(2x)萃取水层。合并有机物，通过无水硫酸钠干燥，过滤，并真空除去挥发物。用甲苯(3x)共沸除掉残留的三氯乙醇，获得作为白色固体的(S)-1-((S)-2-叔丁氧基羰基氨基-丙酰基)-六氢-哒嗪-3-羧酸，然后将其与(R)-1-(7-溴-喹啉-2-基)-乙胺盐酸盐(1.998g,6.948mmol)合并，并悬浮于无水乙腈(60mL)和四氢呋喃(10mL)。将悬浮液冷却至0℃，随后用N,N-二异丙基乙胺(6mL,34.740mmol)和1-[双(二甲氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑[4,5-b]吡啶-3-氧化物六氟磷酸酯(3.699g,9.727mmol)处理。缓慢升温至室温，并搅拌16h后，在0℃下用盐酸(1M,70mL)将反应淬灭。用乙酸乙酯(2x)萃取水层。合并有机物，用饱和的碳酸氢钠溶液洗涤，通过无水硫酸钠干燥，过滤，并真空除去挥发物。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用100g Isolute筒，用异己烷/乙酸乙酯1:0至1:4的连续梯度洗脱，获得作为白色泡沫的标题化合物(3.702g,99％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ1.38(d,J＝6.9Hz,3H),1.43(s,9H),1.47-1.55(m,2H),1.58(d,J＝6.9Hz,3H),1.60-1.78(m,2H),2.22-2.31(m,1H),2.65-2.78(m,1H),3.39-3.52(m,1H),4.55(d,J＝13.4Hz,1H),5.18-5.34(m,2H),5.36-5.45(m,1H),7.37(d,J＝8.5Hz,1H),7.65(dd,J＝8.5,1.6Hz,1H),7.70(d,J＝8.5Hz,1H),8.04(d,J＝6.5Hz,1H),8.14(d,J＝8.5Hz,1H),8.36(s,1H).LCMS(m/z)536.1,537.1[M+H],Tr＝2.58min。
化合物93f.(S)-1-[(S)-2-((S)-2-环丙基-2-羟基-乙酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羧酸[(R)-1-(7-溴-喹啉-2-基)-乙基]-酰胺
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用氯化氢(1.9mL,7.505mmol,4M,1,4-二恶烷中的)的溶液处理二氯甲烷(20mL)中的((S)-2-{(S)-3-[(R)-1-(7-溴-喹啉-2-基)-乙基氨甲酰基]-四氢-哒嗪-1-基}-1-甲基-2-氧-乙基)-氨基甲酸叔丁基酯(802.2mg,1.501mmol)的冷却(0℃)溶液。室温搅拌3h以后，真空除去挥发物。用甲苯共沸掉残留的水，获得作为白色固体的(S)-1-[(S)-2-氨基-丙酰基)-六氢-哒嗪-3-羧酸[(R)-1-(7-溴-喹啉-2-基)-乙基]-酰胺盐酸盐，其然后与(S)-环丙基-羟基-乙酸(174.3mg,1.501mmol)和干乙腈(20mL)合并。将该悬浮液冷却至0℃，接着用N,N-二异丙基乙胺(0.79mL,4.503mmol)和(苯并单座-1-基-氧基)三(二甲基氨基)膦六氟磷酸酯(796.6mg,1.801mmol)处理。将反应缓慢升温至室温。搅拌16h后，在0℃下，用盐酸(1M,40mL)将反应淬灭，并用二氯甲烷稀释。用二氯甲烷萃取水层。用饱和的碳酸氢钠溶液洗涤有机物。用二氯甲烷提取碱性水层。合并有机物，通过相分离器过滤，并真空除去挥发物。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用50g Isolute筒，用二氯甲烷/甲醇1:0至95:5的连续梯度，获得作为白色固体的标题化合物(393.0mg,49％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ0.43-0.72(m,4H),1.03-1.15(m,1H),1.47(d,J＝6.7Hz,3H),1.59(d,J＝6.7Hz,3H),1.64-1.78(m,2H),1.93-2.03(m,1H),2.23-2.33(m,1H),2.65-2.77(m,1H),3.44-3.58(m,2H),3.62-3.75(m,2H),3.80(d,J＝11.8Hz,1H),4.49-4.59(m,1H),5.28(app pentet,J＝6.7Hz,1H),5.49(app pentet,J＝7.8Hz,1H),7.20(d,J＝8.2Hz,1H),7.40(d,J＝8.5Hz,1H),7.64(dd,J＝8.7,1.8Hz,1H),7.70(d,J＝8.5Hz,1H),8.15(d,J＝8.5Hz,1H),8.48(s,1H).LCMS(m/z)534.0[M+H],Tr＝2.07min。
化合物93g 6-((E)-2-{2-[(R)-1-({(S)-1-[(S)-2-((S)-2-环丙基-2-羟基-乙酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羰基}-氨基)-乙基]-喹啉-7-基}-乙烯基)-[1,4]二氧杂环庚烷-6-羧酸
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1,4-二恶烷(9mL)中的(S)-1-[(S)-2-((S)-2-环丙基-2-羟基-乙酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羧酸[(R)-1-(7-溴-喹啉-2-基)-乙基]-酰胺(244mg,0.459mmol)、6-乙烯基-[1,4]二氧杂环庚烷-6-羧酸57d(79mg,0.459mmol)、三乙胺(140mg,192μL,1.38mmol)和三(o-甲苯基)膦(28mg,0.092mmol)的溶液用氮气脱气5min，然后在氮气下升温至50℃，同时搅拌。添加三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(42mg,0.046mmol)，45min将混合物加热至80℃，然后冷却至室温。过滤悬浮液，蒸发，获得粗的标题化合物，其用于接下来的阶段而不需要进一步纯化。LCMS(m/z)624.2[M+H],Tr＝1.58min。
化合物93
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在氮气下，通过注射泵，把二氯甲烷(10mL)中的93g的溶液3h添加到二氯甲烷(138mL)中的粉末状![]()
分子筛(～1g)、2-甲基-6-硝基苯甲酸酐(316mg,0.918mmol)和4-(二甲基氨基)-吡啶(224mg,1.84mmol)的搅拌混合物中。用二氯甲烷(1mL)洗涤原始含有粗的酸的烧瓶中，并将其ca.20min添加到反应混合物中。添加结束后，搅拌反应混合物1.5h，通过硅藻土过滤，并连续用冰冷的饱和氯化铵溶液、冰冷的饱和碳酸氢钠溶液、饱和的盐水洗涤，通过疏水性筛板过滤，并蒸发。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷/丙酮1:1至1:3的连续梯度，接着通过反相制备性HPLC进行纯化，使用乙腈/水1:9至7:3，用二乙醚研磨后，获得作为白色固体的标题化合物(21mg,8％,2步)。 1H NMR(300MHz,CD3OD)δ0.49-0.74(m,4H),1.27-1.41(m,1H),1.48-1.78(m,2H),1.60(d,J＝6.9Hz,3H),1.65(d,J＝7.3Hz,3H),1.91-2.01(m,1H),2.20-2.29(m,2H),2.65-2.76(m,1H),3.57-3.94(m,5H),4.17(d,J＝12.7Hz,1H),4.36(d,J＝12.7Hz,1H),4.39-4.48(m,1H),4.53(d,J＝12.7Hz,1H),5.03-5.12(m,3H),5.84(q,J＝7.1Hz,1H),6.33(d,J＝16.5Hz,1H),6.52(d,J＝16.5Hz,1H),7.47(d,J＝8.5Hz,1H),7.70(dd,J＝8.5, 1.6Hz,1H),7.78(br s,1H),7.86(d,J＝8.5Hz,1H),8.26(d,J＝8.5Hz,1H).LCMS(m/z)606.2[M+H],Tr＝2.08min。
实施例94，化合物94
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化合物94a 3-甲基-四氢-哒嗪-1,2,3-三羧酸1,2-二叔丁基酯3-甲酯
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在0℃下，添加四n-丁基氯化铵(22mL,22mmol,1M,四氢呋喃中的)到含有![]()
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分子筛的四氢呋喃/甲醇(50mL,1:1)中的(S)-四氢-哒嗪-1,2,3-三羧酸1,2-二叔丁基酯3-(2,2,2-三氯-乙基)酯(5.0g,10.8mmol)的溶液中。室温搅拌24h后，混合物通过硅藻土板过滤，蒸发滤出液。残留物在二乙醚与饱和的碳酸氢钠溶液之间分离。用二乙醚萃取水层。合并有机提取物，溶液通过疏水性筛板过滤，并蒸发溶剂。残留物通过硅胶色谱进行纯化，用异己烷/乙酸乙酯20:1至3:2洗脱，获得作为无色油和旋转异构体的混合物的(S)-四氢-哒嗪-1,2,3-三羧酸1,2-二叔丁基酯3-甲酯(3.0g,82％)。LCMS(m/z)345.1[M+H],Tr＝2.78min。在-78℃下，用双(三甲基硅基)氨基锂(13mL,13.0mmol,1M,四氢呋喃中的)处理四氢呋喃(20mL)中的(S)-四氢-哒嗪-1,2,3-三羧酸1,2-二叔丁基酯3-甲酯(3.0g,8.72mmol)的溶液。-78℃下搅拌1h，用碘甲烷(1.4mL,22.5mmol)处理混合物。在-78℃下搅拌反应混合物1h，然后在0℃搅拌1h，并在室温下搅拌1h。将反应混合物再冷却至0℃，并用水淬灭。用二氯甲烷(2x)提取水相，使有机溶液通过疏水性筛板，并蒸发溶剂。残留物通过硅胶色谱进行纯化，用异己烷/乙酸乙酯4:1至0:1的梯度洗脱，获得作为无色油的标题化合物(1.62g,52％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ1.41-1.52(m,18H),1.53-1.67(m,4H),1.71-1.99(m,3H),3.17-3.51(m,1H),3.70-3.81(m,3H),3.90-4.21(m,1H).LCMS(m/z)359.0[M+H],Tr＝2.90min。
化合物94b.3-[(R)-1-(7-溴-喹啉-2-基)-乙基氨甲酰基]-3-甲基-四氢-哒嗪-1,2-二羧酸二叔丁基酯
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在0℃下，添加氢氧化锂一水合物(2.2g,52.3mmol)到四氢呋喃/水/甲醇(50mL,5:1:1)中的3-甲基-四氢-哒嗪-1,2,3-三羧酸1,2-二叔丁基酯3-甲酯(1.62g,4.52mmol)的溶液中。在0℃下搅拌反应混合物1h，然后室温下搅拌1h。将反应混合物在40℃下加热19h，然后冷却至室温，并蒸发溶剂。残留物在乙酸乙酯与水之间分离，并用盐酸(1M)将混合物酸化至pH 5。分离有机相，并用乙酸乙酯提取水相。合并的有机提取物通过无水硫酸镁干燥，过滤，并蒸发溶剂。将残留物溶于甲苯中，蒸发溶剂，获得作为黄色油的3-甲基-四氢-哒嗪-1,2,3-三羧酸1,2-二叔丁基酯(1.47g,95％)。LCMS(m/z)343.1[M-H],Tr＝2.36min。在0℃下，添加(R)-1-(7-溴-喹啉-2-基)-乙胺盐酸盐(1.30g,4.5mmol)和N,N-二异丙基乙胺(2.8mL,16.0mmol)到二氯甲烷(30mL)中的3-甲基-四氢-哒嗪-1,2,3-三羧酸1,2-二叔丁基酯(1.37g,4.0mmol)的溶液中，接着添加(二甲基氨基)-N,N-二甲基(3H-[1,2,3]三唑[4,5-b]吡啶-3-基氧基)甲脒六氟磷酸酯(1.81g,4.76mmol)。将反应混合物在0℃下搅拌30min，然后在室温下搅拌2h。用二氯甲烷稀释反应混合物，并用水洗涤。分层，并用二氯甲烷萃取水层。合并的有机提取物通过疏水性筛板，并蒸发溶剂。残留物通过硅胶色谱进行纯化，用异己烷/乙酸乙酯20:1至0:1的梯度洗脱，获得作为黄色泡沫和非对映异构体的混合物的标题化合物(929mg,40％)。LCMS(m/z)577.3,579.2[M+H],Tr＝3.72min。
化合物94c((S)-2-{3-[(R)-1-(7-溴-喹啉-2-基)-乙基氨甲酰基]-3-甲基-四氢-哒嗪-1-基}-1-甲基-2-氧-乙基)-氨基甲酸叔丁基酯
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在0℃下，添加三氟乙酸(3mL)到二氯甲烷(10mL)中的3-[(R)-1-(7-溴-喹啉-2-基)-乙基氨甲酰基]-3-甲基-四氢-哒嗪-1,2-二羧酸二叔丁基酯(925mg,1.6mmol)的溶液中。将反应混合物在0℃下搅拌30min，然后在室温下搅拌36h。减压浓缩反应混合物，残留物与甲苯(3x)共蒸发，获得作为浅黄色泡沫的3-甲基-六氢-哒嗪-3-羧酸[(R)-1-(7-溴-喹啉-2-基)-乙基]-酰胺双三氟乙酸盐(1.6mmol)。LCMS(m/z)377.3,379.2[M+H],Tr＝1.18min。在0℃下，添加O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲六氟磷酸酯(915mg,2.41mmol)和N,N-二异丙基乙胺(1.5mL,8.42mmol)到无水乙腈(12mL)中的(S)-2-叔丁氧基羰基氨基-丙酸(303mg,1.6mmol)的溶液中。将反应混合物在0℃下搅拌15min，然后用无水乙腈(8mL)中的[(R)-1-(7-溴-喹啉-2-基)-乙基]-酰胺双三氟乙酸盐(1.6mmol)处理。蒸发溶剂，残留物在二氯甲烷与水之间分离。分离有机层，并用二氯甲烷体外水层。合并的有机提取物通过疏水性筛板，并蒸发溶剂。残留物通过硅胶色谱机械能纯化，用异己烷/乙酸乙酯20:1至0:1的梯度洗脱，获得作为黄色油和非对映异构体的混合物的标题化合物(857mg,40％,2步)。LCMS(m/z)548.0,550.0[M+H],Tr＝2.68min。
化合物94d 1-[(S)-2-((S)-2-羟基-3-甲基-丁酰氨基)-丙酰基]-3-甲基-六氢-哒嗪-3-羧酸[(R)-1-(7-溴-喹啉-2-基)-乙基]-酰胺
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在0℃下，添加三氟乙酸(3mL)到二氯甲烷(15mL)中的((S)-2-{3-[(R)-1-(7-溴-喹啉-2-基)-乙基氨甲酰基]-3-甲基-四氢-哒嗪-1-基}-1-甲基-2-氧-乙基)-氨基甲酸叔丁基酯(1.92g,3.5mmol)的溶液中。将反应混合物升温至室温，然后搅拌4h。浓缩反应混合物，将残留物与甲苯(3x)共蒸发，获得作为黄色油的1-((S)-2-氨基-丙酰基)-3-甲基-六氢-哒嗪-3-羧酸[(R)-1-(7-溴-喹啉-2-基)-乙基]-酰胺三氟乙酸盐(3.5mmol)。LCMS(m/z)448.0,450.0[M+H],Tr＝1.22min。将1-((S)-2-氨基-丙酰基)-3-甲基-六氢-哒嗪-3-羧酸[(R)-1-(7-溴-喹啉-2-基)-乙基]-酰胺三氟乙酸盐(3.5mmol)溶于二氯甲烷(20mL)中，并将溶液冷却至0℃。添加(S)-2-羟基-3-甲基-丁酸(458mg,3.8mmol)、N,N-二异丙基乙胺(5mL,28.0mmol)和(苯并三唑-1-基氧基)三(二甲基氨基)膦六氟磷酸酯(1.86g,4.2mmol)。使反应混合物升温至室温，并搅拌16h。蒸发溶剂，将残留物溶于乙酸乙酯中。 用柠檬酸(10％)、饱和的碳酸氢钠溶液和盐水洗涤有机溶液，通过无水硫酸镁干燥，并蒸发溶剂。残留物通过硅胶色谱进行纯化，用乙酸乙酯/甲醇1:0至20:1的梯度洗脱，获得作为白色泡沫和非对映异构体的1:4混合物的标题化合物(745mg,39％,2步)。LCMS(m/z)548.0,550.0[M+H],Tr＝2.21min。
化合物94e
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1,4-二恶烷(10mL)中的1-[(S)-2-((S)-2-羟基-3-甲基-丁酰氨基)-丙酰基]-3-甲基-六氢-哒嗪-3-羧酸[(R)-1-(7-溴-喹啉-2-基)-乙基]-酰胺(164mg,0.3mmol)、4-氧-1-乙烯基-环己烷羧酸(50mg,0.3mmol)、三(o-甲苯基)膦(18mg,0.06mmol)和三乙胺(91mg,0.13mL,0.9mmol)的搅拌溶液用氮气脱气15min。将溶液加热至50℃，并添加三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(28mg,0.03mmol)。将反应混合物在80℃加热1h。反应混合物冷却至室温，而且混合物通过疏水性筛板过滤，并蒸发滤出液，获得作为黄色凝胶和非对映异构体混合物的粗的1-((E)-2-{2-[(R)-1-({1-[(S)-2-((S)-2-羟基-3-甲基-丁酰氨基)-丙酰基]-3-甲基-六氢-哒嗪-3-羰基}-氨基)-乙基]-喹啉-7-基}-乙烯基)-4-氧-环己烷羧酸(0.3mmol)。LCMS(m/z)636.2[M+H],Tr＝1.65min。在氮气下，室温下搅拌含有![]()
分子筛(200mg)的二氯甲烷(200mL)中的2-甲基-6-硝基苯甲酸酐(206mg,0.6mmol)和4-(二甲基氨基)-吡啶(146mg,1.2mmol)的溶液。4h逐滴添加二氯甲烷(5mL)中的1-((E)-2-{2-[(R)-1-({1-[(S)-2-((S)-2-羟基-3-甲基-丁酰氨基)-丙酰基]-3-甲基-六氢-哒嗪-3-羰基}-氨基)-乙基]-喹啉-7-基}-乙烯基)-4-氧-环己烷羧酸(0.3mmol)，并在室温下搅拌反应混合物18h。反应混合物通过硅藻土过滤，并将溶液部分蒸发至体积为～30mL。用冰冷的饱和氯化铵溶液、冰冷的饱和碳酸氢钠溶液和盐水洗涤溶液。有机溶液通过疏水性筛板过滤，蒸发滤出液。残留物通过硅胶色谱进行纯化，用异己烷/乙酸乙酯1:1至0:1的梯度洗脱，获得作为白色固体和非对映异构体混合物的标题化合物(77mg,41％)。LCMS(m/z)618.2[M+H],Tr＝2.38min。
化合物94
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在氮气下，于-78℃搅拌无水四氢呋喃(4mL)中的化合物94e(41mg,0.066mmol)的溶液。添加硼氢化锂(2M,四氢呋喃中的,0.15mL,0.23mmol)，并在-78℃下搅拌反应混合物30min。添加盐酸(2M)和乙酸乙酯，使反应混合物升温至室温。分离有机层，用乙酸乙酯萃取水层。合并有机提取物，用盐水洗涤。有机溶液通过疏水性筛板过滤，蒸发滤出液。有机残留物通过反相制备性HPLC进行纯化，用乙腈(用0.1％甲酸修饰的)/水(用0.1％甲酸修饰的)3:7洗脱。合并含有产物的级分，并蒸发。残留物溶于乙酸乙酯中，并用小体积的饱和碳酸氢钠溶液和盐水洗涤。有机溶液通过疏水性筛板过滤，并蒸发滤出液，获得作为白色固体和非对映异构体的9:1混合物的标题化合物(12mg,29％)。1H NMR(300MHz,CD3OD)(主要非对映异构体的峰)δ1.04(d,J＝6.5Hz,3H),1.10(d,J＝6.7Hz,3H),1.20-1.40(m,3H),1.48(s,3H),1.58(d,J＝7.1Hz,3H),1.59(d,J＝7.3Hz,3H),1.65-1.80(m,3H),1.95-2.25(m,4H),2.34-2.38(m,1H),2.56-2.71(m,2H),3.35-3.40(m,1H),3.60-3.67(m,1H),4.42-4.50(m,1H),5.14(q,J＝7.2Hz,1H),5.27(d,J＝7.4Hz,1H),5.74(q,J＝7.1Hz,1H),6.34(d,J＝16.3Hz,1H),6.60(d,J＝16.3Hz,1H),7.46(d,J＝8.5Hz,1H),7.58(d,J＝8.3Hz,1H),7.84(d,J＝8.3Hz,1H),7.93(br s,1H),8.26(d,J＝8.5Hz,1H).LCMS(m/z)620.2[M+H],Tr＝2.17min。
实施例95:化合物95
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化合物95a.羟基-氧杂环丁-3-基-乙酸乙酯
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在氮气下，于-78℃逐滴添加六甲基二硅基氨基钠(0.6M,甲苯中的,14.4mL,8.66mmol)无水四氢呋喃(72mL)中的氧杂环丁-3-基乙酸乙酯(获自Activate Scientific GmbH)，(1.04g,7.21mmol)的搅拌溶液中，获得黄橙色溶液。将反应混合物在-78℃下 搅拌30min，然后2min添加四氢呋喃(7mL)中的2-(苯基磺酰基)-3-苯基-氧杂吖丙啶(2.83g,10.8mmol)的溶液。将反应混合物在-78℃下搅拌90min，然后通过注射添加饱和的氯化铵溶液(10mL)。使反应混合物升温至环境温度，在5min后添加另外的饱和的氯化铵溶液(10mL)，然后在环境温度下搅拌1h。用盐酸(2M)将反应混合物中和至pH 7，用水稀释混合物，并用乙酸乙酯(4x)提取。用盐水洗涤合并的有机提取物，通过无水硫酸镁干燥，过滤，并部分蒸发至大约～10mL。用二氯甲烷稀释混合物，过滤掉固体，蒸发滤出液，而且残留物通过硅胶色谱进行纯化，用异己烷/二乙醚1:0至1:3的梯度，获得作为白色凝胶的标题化合物(688mg,60％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ1.30(t,J＝7.2Hz,3H),2.95(d,J＝5.1Hz,1H),3.26-3.38(m,1H),4.26(q,J＝7.1Hz,2H),4.42(dd,J＝7.4,5.1Hz,1H),4.67-4.81(m,4H).LCMS(m/z)161.2[M+H]Tr＝0.72min。
化合物95b 2,2-二甲基-丁-3-烯酸乙氧基羰基-氧杂环丁-3-基-甲酯
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添加二氯甲烷(4mL)中的2,2-二甲基-丁-3-烯酸(294mg,2.58mmol)的溶液到二氯甲烷(4mL)中的羟基-氧杂环丁-3-基-乙酸乙酯(330mg,2.06mmol)、2-甲基-6-硝基苯甲酸酐(1.42g,4.12mmol)和4-二甲基氨基吡啶(100mg,0.82mmol)的搅拌溶液中。搅拌反应混合物4h，然后蒸发。残留物通过硅胶色谱进行纯化，用异己烷/二乙醚4:1，获得作为白色固体的标题化合物(383mg,73％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ1.27(t,J＝7.1Hz,3H),1.39(s,3H),1.41(s,3H),3.48-3.61(m,1H),4.20(q,J＝7.1Hz,2H),4.62-4.68(m,2H),4.72-4.85(m,2H),5.12-5.24(m,3H),6.09(dd,J＝17.5,10.6Hz,1H).LCMS(m/z)257.1[M+H],Tr＝2.31min。
化合物95c.2,2-二甲基-丁-3-烯酸羧基-氧杂环丁-3-基-甲酯
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添加水(20.25mL)中的碳酸钾(123mg,0.888mmol)的溶液到四氢呋喃(81mL)中的2,2-二甲基-丁-3-烯酸乙氧基羰基-氧杂环丁-3-基-甲酯(207mg,0.808mmol)的搅拌溶液中，接着添加甲醇(4.05mL)。将反应混合物加热回流7h，然后冷却。添加盐酸(2M,400μL)，并蒸发溶剂。残留物用二氯甲烷(2x)提取，并丢弃洗液。用盐酸(2M)将水溶液酸化到pH 5，用二氯甲烷(2x)提取，使合并的有机提取物通过疏水性筛板，并蒸发。 添加盐酸(大约5滴)到水层，用二氯甲烷(2x)提取混合物，使合并的有机提取物通过疏水性筛板，蒸发，并与前述材料合并，获得作为黄色/绿色油的标题化合物(123mg,67％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ1.39(s,3H),1.40(s,3H),3.54-3.67(m,1H),4.67-4.75(m,2H),4.81-4.92(m,2H),5.14(d,J＝10.9Hz,1H),5.15-5.32(m,2H),6.08(dd,J＝17.5,10.5Hz,1H),9.30(br s,1H).LCMS(m/z)229.1[M+H]Tr＝1.67min。
化合物95d.(S)-1-((S)-2-氨基-丙酰基)-六氢-哒嗪-3-羧酸[(R)-1-(7-溴-喹啉-2-基)-乙基]-酰胺
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在0℃下，添加三氟乙酸(3.3mL)到二氯甲烷(10mL)中的(S)-1-((S)-2-氨基-丙酰基)-六氢-哒嗪-3-羧酸[(R)-1-(7-溴-喹啉-2-基)-乙基]-酰胺(330mg,0.618mmol)的搅拌溶液中，并搅拌反应混合物1h，然后蒸发。将残留物溶于二氯甲烷中，用饱和碳酸氢钠溶液(2x)洗涤，用二氯甲烷洗涤含水提取物，合并的有机提取物通过疏水性筛板，并蒸发，获得黄色泡沫(232mg)，其可以直接进行接下来的步骤。
化合物95e 2,2-二甲基-丁-3-烯酸((S)-2-{(S)-3-[(R)-1-(7-溴-喹啉-2-基)-乙基氨甲酰基]-四氢-哒嗪-1-基}-1-甲基-2-氧-乙基氨甲酰基)-氧杂环丁-3-基-甲酯
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在氮气下，将无水N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中的(S)-1-((S)-2-氨基-丙酰基)-六氢-哒嗪-3-羧酸[(R)-1-(7-溴-喹啉-2-基)-乙基]-酰胺(141mg,0.618mmol)和2,2-二甲基-丁-3-烯酸羧基-氧杂环丁-3-基-甲酯(315mg,0.725mmol)的搅拌溶液冷却至0℃。添加2,2,6,6-四甲基哌啶(261mg,313μL,1.85mmol)，接着快速添加(1-氰基-2-乙氧基-2-氧亚乙基氨基氧基)二甲基氨基-吗啉基-碳鎓六氟磷酸酯(371mg,0.865mmol)。使反应混合物升温至室温，并搅拌15h。用二氯甲烷稀释反应混合物，用饱和的氯化铵溶液(2x)、饱 和的碳酸氢钠溶液(2x)洗涤，有机层通过相分离器过滤，并蒸发。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷/乙酸乙酯1:0至0:1的梯度，获得作为黄色/棕色泡沫和非对映异构体的1:1混合物的标题化合物(167mg,42％)。LCMS(m/z)644.2,646.1[M+H],Tr＝2.63min。
化合物95.
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1,4-二恶烷(86mL)中的2,2-二甲基-丁-3-烯酸((S)-2-{(S)-3-[(R)-1-(7-溴-喹啉-2-基)-乙基氨甲酰基]-四氢-哒嗪-1-基}-1-甲基-2-氧-乙基氨甲酰基)-氧杂环丁-3-基-甲酯(167mg,0.259mmol)、三乙胺(79mg,108μL,0.777mmol)和三(o-甲苯基)膦(16mg,0.052mmol)的溶液用氮气脱气10min，然后在氮气下升温至50℃，同时搅拌。添加三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(24mg,0.026mmol)。将反应混合物90min加热至80℃，添加另外的三(o-甲苯基)膦(16mg,0.052mmol)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(24mg,0.026mmol)。在80℃下加热30min以后，冷却混合物，通过硅藻土过滤，并蒸发滤出液。残留物通过反相制备性HPLC纯化，使用乙腈/水1:9至7:3的梯度，获得作为黄色油的标题化合物(15.6mg,11％)。1H NMR(300MHz,CD3OD)δ1.46(s,3H),1.50-1.73(m,1H),1.56(s,3H),1.59(d,J＝6.7Hz,3H),1.64(d,J＝7.2Hz,3H),1.90-2.01(m,1H),2.23-2.32(m,1H),2.63-2.74(m,1H),3.47-3.62(m,2H),4.37-4.45(m,1H),4.64(t,J＝6.5Hz,1H),4.72-4.82(m,4H),5.09(q,J＝6.7Hz,1H),5.75(q,J＝7.4Hz,1H),5.82(d,J＝6.9Hz,1H),6.38(d,J＝16.3Hz,1H),6.60(d,J＝16.3Hz,1H),7.45(d,J＝8.5Hz,1H),7.61(dd,J＝8.5,1.6Hz,1H),7.81(br s,1H),7.85(d,J＝8.5Hz,1H),8.26(d,J＝8.5Hz,1H).LCMS(m/z)564.2[M+H],Tr＝2.16min。
实施例96.化合物96
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用1,4-二恶烷(0.12mL,0.455mmol)中的氯化氢(4M)的溶液处理二氯甲烷(10mL)中的化合物45(63.0mg,0.091mmol)的冷(0℃)溶液。室温搅拌6天以后，添加1,4-二恶烷(0.12mL,0.455mmol)中的二氯甲烷(10mL)和氯化氢(4M)。室温搅拌4h后，真空除去挥发物，用甲苯共沸除掉残留的水，获得白色固体，将其悬浮于二氯甲烷(5mL)中，接着用三乙胺(0.02mL,0.136mmol)和乙醛(0.01mL,0.182mmol)处理该混合物。室温搅拌30min后，用三乙氧基硼氢化钠(38.6mg,0.182mmol)处理反应混合物。室温搅拌1h后，用几滴饱和碳酸氢钠将反应混合物淬灭，并通过相分离器过滤。真空除去挥发物，而且残留物通过反相制备性HPLC进行纯化，使用乙腈/水5:95至3:7的梯度，其用0.1％甲酸调节。挥发物蒸发后，白色固体在乙酸乙酯与饱和的碳酸氢钠溶液之间分离。有机物通过相分离器过滤，并真空除去挥发物，获得作为白色固体的标题化合物(8.3mg,15％,2步)。1H NMR(300MHz,CD3OD):δ1.02-1.18(m,9H),1.22-1.33(m,1H),1.51-1.73(m,7H),1.89-2.00(m,1H),2.11(d,J＝11.6Hz,1H),2.16-2.36(m,3H),2.39-2.57(m,2H),2.61-2.73(m,1H),2.74-2.82(m,1H),3.54-3.67(m,2H),3.87-4.02(m,2H),4.38-4.47(m,1H),4.99(d,J＝12.0Hz,1H),5.05-5.14(m,2H),5.79(q,J＝7.4Hz,1H),6.13(d,J＝16.3Hz,1H),6.92(d,J＝16.3Hz,1H),7.46(d,J＝8.5Hz,1H),7.60(dd,J＝8.5,1.6Hz,1H),7.86(d,J＝8.5Hz,1H),7.91(s,1H),8.26(d,J＝8.5Hz,1H).LCMS(m/z)621.3[M+H],Tr＝1.20min。
实施例97.化合物97
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用1,4-二恶烷(0.31mL,1.231mmol)中的氯化氢(4M)的溶液处理二氯甲烷(10mL)中的化合物45(85.3mg,0.123mmol)的冷(0℃)溶液。室温搅拌2天后，添加另外的1,4-二恶烷(0.31mL,1.2mmol)中的氯化氢(4M)。室温搅拌1.5h后，真空除去挥发物，与甲 苯共沸除去残留的水，获得白色固体，将其悬浮于二氯甲烷(5mL)中，接着用三乙胺(0.04mL,0.246mmol)和甲磺酰氯(0.01mL,0.148mmol)处理混合物。室温搅拌30min后，用三乙酰氧基硼氢化钠(38.6mg,0.182mmol)处理混合物。室温搅拌1h后，用饱和的碳酸氢钠溶液将反应混合物淬灭。用二氯甲烷萃取水层。合并有机物，通过相分离器过滤。真空除去挥发物，残留物通过反相制备性HPLC进行纯化，使用乙腈/水5:95至1:0的梯度，获得作为白色固体的标题化合物(14.7mg,18％,2步)。1H NMR(300MHz,CD3OD)δ1.05-1.12(m,6H),1.52-1.73(m,8H),1.91-2.00(m,1H),2.17-2.30(m,2H),2.62-2.74(m,1H),2.93(s,3H),3.01(d,J＝11.8Hz,1H),3.05-3.13(m,1H),3.51-3.68(m,2H),3.83-3.94(m,1H),4.07-4.15(m,1H),4.24-4.31(m,1H),4.39-4.47(m,1H),5.02(d,J＝11.8Hz,1H),5.10(q,J＝6.7Hz,1H),5.19(d,J＝8.7Hz,1H),5.81(q,J＝7.3Hz,1H),6.19(d,J＝16.3Hz,1H),6.99(d,J＝16.3Hz,1H),7.48(d,J＝8.5Hz,1H),7.62(dd,J＝8.5,1.6Hz,1H),7.87(d,J＝8.5Hz,1H),7.93(s,1H),8.27(d,J＝8.2Hz,1H).LCMS(m/z)671.3[M+H],Tr＝2.07min。
实施例98.化合物98
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化合物98a 2,2-双-羟甲基-3-氧-丁酸-叔丁基酯
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在氮气下，于0℃下搅拌1,4-二恶烷(50mL)中的3-氧-丁酸叔丁基酯(15.8g,100mmol)和含水甲醛(37％,水中的溶液,18mL,230mmol)的溶液。逐滴添加四氢呋喃(5mL)中的三乙胺(505mg,0.7mL,5mmol)的溶液，并将反应混合物在40℃下搅拌1h，然后室温搅拌20h。蒸发大部分溶剂，添加水，并用乙酸乙酯提取混合物。合并有机提取物，用盐水洗涤。有机溶液通过疏水性筛板过滤，蒸发滤出液。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷/乙酸乙酯7:3至1:1的梯度，获得作为清澈油的2,2-双-羟甲基-3-氧-丁酸-叔丁基酯(8.67g,40％)。1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ1.38(s,9H),2.07(s,3H),3.81-3.86(m,4H),4.77(t,J＝5.1Hz,2H).LCMS(m/z)217.0[M-H],Tr＝1.45min。
化合物98b 5-乙酰基-2,2-二甲基-[1,3]二恶烷-5-羧酸叔丁基酯
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室温下搅拌2,2-双-羟甲基-3-氧-丁酸-叔丁基酯(8.67g,40mmol)、丙酮(30mL,400mmol)、2,2-二甲氧基丙烷(41.6g,50mL,400mmol)和4-甲苯磺酸一水合物(152mg,0.8mmol)的混合物18h。部分蒸发溶剂到体积为～20mL。添加饱和的碳酸氢钠溶液，并用乙酸乙酯提取混合物。合并有机提取物，用水和盐水洗涤。有机层通过疏水性筛板过滤，蒸发滤出液。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷/乙酸乙酯9:1至4:1的梯度，获得作为清澈油的标题化合物(7.82g,75％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ1.39(s,3H),1.44(s,3H),1.48(s,9H),2.32(s,3H),6.36(ABq,ΔδAB＝0.05,JAB＝11.8Hz,4H).LCMS(m/z)281.2[M+Na],Tr＝2.44min。
化合物98c 2,2-二甲基-5-乙烯基-[1,3]二恶烷-5-羧酸叔丁基酯
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在氮气下，于-78℃搅拌无水四氢呋喃(30mL)中的N,N-二异丙胺(1.51g,2.1mL,15mmol)的溶液。逐滴添加n-丁基锂(2.5M,己烷中,5.6mL,14mmol)，并在-78℃下搅拌反应混合物30min。添加四氢呋喃(5mL)中的5-乙酰基-2,2-二甲基-[1,3]二恶烷-5-羧酸叔丁基酯(2.58g,10mmol)的溶液，并在-78℃下搅拌反应混合物15min。添加四氢呋喃(30mL)中的N-苯基-(双-三氯甲烷磺酰胺)(3.93g,11mmol)的溶液，并在-78℃下搅拌反应混合物15min。除去冷水浴，并在室温下搅拌反应混合物30min。蒸发溶剂，添加二乙醚(50mL)。将溶液冷却至5℃，用冷氢氧化钠溶液(1M,3x30mL)和盐水洗涤。分离有机溶液，通过无水硫酸镁干燥，过滤并蒸发溶剂，获得作为黄色油的2,2-二甲基-5-(1-三氯甲烷磺酰氧基-乙烯基)-[1,3]二恶烷-5-羧酸叔丁基酯(3.84g,10mmol)。在氮气下，室温下搅拌N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中的2,2-二甲基-5-(1-三氯甲烷磺酰氧基-乙烯基)-[1,3]二恶烷-5-羧酸叔丁基酯(3.84g,10mmol)和三-n-叔丁胺(5.55g,7mL,30mmol)的溶液。添加双(三苯基膦)氯化钯(350mg,0.5mmol)和甲酸(920mg,0.77mL,20mmol)，并在60℃下加热反应混合物90min。将反应混合物冷却至室温，并添加乙酸乙酯和水。用水(5x)和盐水洗涤有机提取物。有机溶液通过疏水性筛板过滤，并蒸发滤出液。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷/乙酸乙酯9:1，接着通过硅胶色谱纯化，使用异己烷/乙酸乙酯19:1至9:1的梯度，获得作为清澈油的标题化合物(1.09g,45％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ1.41(s,3H),1.45(s,3H),1.50(s,9H),3.82(d,J＝11.8Hz,2H),4.25(d,J＝11.8Hz,2H),5.25(d,J＝17.2Hz,1H),5.26(d,J＝10.7Hz,1H),5.73(dd,J＝17.2,11.7Hz,1H)。
化合物98d 2，2-双-羟甲基-丁-3-烯酸叔丁基酯
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将甲醇(10mL)中的2,2-二甲基-5-乙烯基-[1,3]二恶烷-5-羧酸叔丁基酯(969mg,4mmol)和4-甲苯磺酸一水合物(76mg,0.4mmol)在室温下搅拌30min。蒸发溶剂，残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷/乙酸乙酯4:1至1:1的梯度，获得作为白色固体的标题化合物(660mg,82％)。1H NMR(300MHz,d6-DMSO):δ1.38(s,9H),3.54-3.68(m,4H),4.56(t,J＝5.4Hz,2H),5.12(d,J＝10.5Hz,1H),5.14(d,J＝18.3Hz,1H),5.80(dd,J＝18.3,10.5Hz,1H).LCMS(m/z)225.2[M+Na],Tr＝1.47min。
化合物98e.2-氧-5-乙烯基-[1,3]二恶烷-5-羧酸叔丁基酯
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在氮气下，于-78℃搅拌二氯甲烷(5mL)中的2,2-双-羟甲基-丁-3-烯酸叔丁基酯(202mg,1mmol)和吡啶(0.5mL,6mmol)的溶液。逐滴添加二氯甲烷(2.5mL)中的三光气(150mg,0.5mmol)的溶液，并在-78℃下搅拌反应混合物1h。将反应混合物升温至室温，并在室温下搅拌15min，添加饱和的氯化铵溶液。分离有机层，用盐酸(1M)、饱和的碳酸氢钠溶液和盐水洗涤。有机溶液通过疏水性筛板过滤，并蒸发滤出液。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷/乙酸乙酯4:1至3:2的梯度，获得作为透明凝胶的标题化合物(204mg,89％)。1H NMR(300MHz,CDCl3):1.48(s,9H),4.38(d,J＝10.7Hz,2H),4.71(d,J＝10.7Hz,2H),5.39(d,J＝17.4Hz,1H),5.47(d,J＝10.7Hz,1H),5.77(dd,J＝17.4,10.7Hz,1H).LCMS(m/z)229.1[M+H],Tr＝2.04min。
化合物98f 2-氧-5-乙烯基-[1,3]二恶烷-5-羧酸
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在0℃下搅拌二氯甲烷(4mL)中的2-氧-5-乙烯基-[1,3]二恶烷-5-羧酸叔丁基酯(200mg,0.88mmol)的溶液。添加三氟乙酸(2mL)，并在0℃下搅拌反应混合物30min， 然后室温下搅拌3h。蒸发溶剂，用二乙醚/异己烷(1:1)研磨残留物，获得作为白色固体的标题化合物(135mg,90％)。1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ4.51(d,J＝10.5Hz,2H),4.67(d,J＝10.5Hz,2H),5.38(d,J＝17.6Hz,1H),5.43(d,J＝10.7Hz,1H),5.83(dd,J＝17.6,10.7Hz,1H),13.5-14.0(br s,1H).LCMS(m/z)173.2[M+H],Tr＝0.62min。
化合物98.
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1,4-二恶烷(10mL)中的(S)-1-[(S)-2-((S)-2-羟基-3-甲基-丁酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羧酸[(R)-1-(7-溴-喹啉-2-基)-乙基]-酰胺(164mg,0.3mmol)、2-氧-5-乙烯基-[1,3]二恶烷-5-羧酸(57mg,0.33mmol)、三(o-甲苯基)膦(18mg,0.06mmol)和三乙胺(91mg,0.13mL,0.9mmol)的搅拌溶液用氮气脱气15min。将溶液加热至50℃，并添加三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(28mg,0.03mmol)。将反应混合物在80℃下加热45min。将反应混合物冷却至室温，混合物通过疏水性筛板过滤，蒸发滤出液，获得作为黄色凝胶的粗的5-((E)-2-{2-[(R)-1-({(S)-1-[(S)-2-((S)-2-羟基-3-甲基-丁酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羰基}-氨基)-乙基]-喹啉-7-基}-乙烯基)-2-氧-[1,3]二恶烷-5-羧酸(0.3mmol)。LCMS(m/z)626.2[M+H],Tr＝1.67min。在氮气下，室温搅拌含有![]()
分子筛(200mg)的二氯甲烷(200mL)中的2-甲基-6-硝基苯甲酸酐(206mg,0.6mmol)和4-(二甲基氨基)-吡啶(146mg,1.2mmol)的溶液。4h逐滴添加二氯甲烷(5mL)中的粗的5-((E)-2-{2-[(R)-1-({(S)-1-[(S)-2-((S)-2-羟基-3-甲基-丁酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羰基}-氨基)-乙基]-喹啉-7-基}-乙烯基)-2-氧-[1,3]二恶烷-5-羧酸(0.3mmol)，并室温搅拌反应混合物16h。反应混合物通过硅藻土过滤，部分蒸发溶液到体积为～50mL。用冰冷的饱和氯化铵溶液、冰冷的饱和碳酸氢钠溶液和盐水洗涤溶液。有机溶液通过疏水性筛板过滤，并蒸发滤出液。残留物通过硅胶色谱进行纯化，用乙酸乙酯/甲醇1:0至5:1的梯度洗脱，然后通过反相制备性HPLC纯化，用乙腈/水7:13洗脱。合并含有产物的级分，并蒸发大部分有机溶剂。用二氯己烷提取得到的水溶液。合并有机提取物，通过疏水性筛板过滤，蒸发滤出液，获得作为白色固体的标题化合物(3.1mg,2％)。1H NMR(300MHz,CD3CN):δ0.96(d,J＝6.7Hz,3H),1.04(d,J＝6.7Hz,3H),1.41-1.49(m,2H),1.54(d,J＝6.7Hz,3H),1.55(d,J＝7.1Hz,3H),1.59-1.64(m,1H),1.88-1.93(m,1H),2.19-2.24(m,1H),2.56-2.64(m,1H),3.48-3.57(m,1H),4.19(d,J＝12.0Hz,1H),4.38-4.43(m,1H),4.59 (d,J＝10.9Hz,1H),4.71(d,J＝10.9Hz,1H),4.85-4.91(m,2H),5.06-5.10(m,1H),5.23(d,J＝7.8Hz,1H),5.73-5.79(m,1H),6.26(d,J＝16.5Hz,1H),6.83(d,J＝16.5Hz,1H),7.18(d,J＝8.0Hz,1H),7.48(d,J＝8.5Hz,1H),7.64(dd,J＝8.5,1.6Hz,1H),7.90(d,J＝8.5Hz,1H),7.99(br s,1H),8.28(d,J＝8.5Hz,1H),8.85(br d,J＝5.0Hz,1H).LCMS(m/z)608.2[M+H],Tr＝2.01min。
实施例99,化合物99.
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化合物99a 5-乙酰基-2,2-二甲基-[1,3]二恶烷-5-羧酸乙酯
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使用乙酰乙酸乙酯代替3-氧-丁酸叔丁基酯，以与5-乙酰基-2,2-二甲基-[1,3]二恶烷-5-羧酸叔丁基酯相同的方式制备化合物99a，2步的产率为31％。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ1.29(t,J＝7.1Hz,3H),1.40(s,3H),1.44(s,3H),2.33(s,3H),4.23(q,J＝7.1Hz,2H),4.30(ABq,ΔδAB＝0.04,JAB＝11.9Hz,4H)。
化合物99b 2,2-二甲基-5-乙烯基-[1,3]二恶烷-5-羧酸乙酯
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使用5-乙酰基-2,2-二甲基-[1,3]二恶烷-5-羧酸乙酯代替5-乙酰基-2,2-二甲基-[1,3]二恶烷-5-羧酸叔丁基酯，以与2,2-二甲基-5-乙烯基-[1,3]二恶烷-5-羧酸叔丁基酯相同的方式制备化合物99b，2步的产率为50％。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ1.31(t,J＝7.1Hz,3H),1.41(s,3H),1.46(s,3H),4.10(ABq,ΔδAB＝0.44,JAB＝11.9Hz,4H),4.26(q,J＝7.1Hz,2H),5.24(d,J＝17.4Hz,1H),5.28(d,J＝10.9Hz,1H),5.24(dd,J＝17.4,10.9Hz,1H).LCMS(m/z)237.0[M+Na],Tr＝2.14min。
化合物99c 2,2-双-羟甲基-丁-3-烯酸乙酯
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使用2,2-二甲基-5-乙烯基-[1,3]二恶烷-5-羧酸乙酯代替2,2-二甲基-5-乙烯基-[1,3]二恶烷-5-羧酸叔丁基酯，以与2,2-双-羟甲基-丁-3-烯酸叔丁基酯相同的方式制备化合物99c，产率为78％。1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ1.17(t,J＝7.0Hz,3H),3.59-3.71(m,4H),4.06(q,J＝7.0Hz,2H),4.65(t,J＝5.6Hz,2H),5.13(d,J＝18.5Hz,1H),5.15(d,J＝10.5Hz,1H),5.80(dd,J＝18.5,10.5Hz,1H).LCMS(m/z)197.1[M+Na],Tr＝0.96min。
化合物99d 2,2-双-氯甲基-丁-3-烯酸
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在氮气下，于-78℃逐滴添加三氟甲烷磺酸酐(1.07g,0.66mL,3.8mmol)到二氯甲烷(10mL)中的2,2-双-羟甲基-丁-3-烯酸乙酯(338mg,1.9mmol)和2,6-卢剔啶(813mg,0.88mL,7.6mmol)的溶液中，将反应混合物升温至室温，并室温下搅拌30min。用冰冷的盐酸(1M)和盐水洗涤溶液。有机溶液通过疏水性筛板过滤，蒸发滤出液，获得作为橙色油的粗的2,2-双-三氟甲烷磺酰氧基甲基-丁-3-烯酸乙酯(1.9mmol)，其可以立即用于接下来的步骤。在氮气下，于0℃搅拌四氢呋喃(5mL)中的2,2-双-三氟甲烷磺酰氧基甲基-丁-3-烯酸乙酯(1.9mmol)的溶液。添加四-n-丁基氯化铵(1M,四氢呋喃中的,4.75mL,4.75mmol)，并在0℃下搅拌反应混合物30min，然后室温下搅拌2h。蒸发溶剂。残留物溶于二氯甲烷中，用饱和的碳酸氢钠溶液、水和盐水洗涤溶液。有机溶液通过疏水性筛板过滤，并蒸发滤出液。残留物通过硅胶色谱纯化，使用戊烷/二乙醚19:1至4:1的梯度，获得作为清澈油的2,2-双-氯甲基-丁-3-烯酸乙酯(1.9mmol)，其被溶剂污染。在氮气下，于0℃搅拌四氢呋喃(10mL)中的粗的2,2-双-氯甲基-丁-3-烯酸乙酯(1.9mmol)的溶液。添加水(2.5mL)中的氢氧化锂一水合物(240mg,5.7mmol)的溶液，在0℃下搅拌反应混合物1h，然后室温搅拌24h。用盐酸(2M)将反应混合物酸化到pH 2。添加水，用二乙醚提取混合物。合并有机提取物，用盐水洗涤。有机溶液通过疏水性筛板过滤，蒸发滤出液，获得作为清澈油的标题化合物(400mg)。1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ4.54-4.83(m,4H),5.33(d,J＝17.8Hz,1H),5.36(d,J＝10.7Hz,1H),5.81(dd,J＝17.8,10.7Hz,1H),13.0-13.5(br s,1H).LCMS(m/z)149.2[M-H],Tr＝1.45min。
化合物99e(S)-1-[(S)-2-((S)-2-{(E)-4-[2-((R)-1-叔丁氧基羰基氨基-乙基)-喹啉-7-基]-2,2-双-氟甲基-丁-3-丁烯酰氧基}-3-甲基-丁酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯-乙酯
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1,4-二恶烷(3mL)中的[(R)-1-(7-溴-喹啉-2-基)-乙基]-氨甲酸叔丁基酯(105mg,0.3mmol)、2,2-双-氟甲基-丁-3-烯酸(50mg,0.33mmol)、三(o-甲苯基)膦(18mg,0.06mmol)和三乙胺(91mg,0.13mL,0.9mmol)的溶液用氮气脱气15min。添加三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(28mg,0.03mmol)，然后1h将反应混合物加热至60℃。将反应混合物冷却至室温，混合物通过疏水性筛板过滤，蒸发滤出液，获得作为黄色凝胶的粗的(E)-4-[2-((R)-1-叔丁氧基羰基氨基-乙基)-喹啉-7-基]-2,2-双-氟甲基-丁-3-烯酸(0.3mmol)。LCMS(m/z)421.1[M+H],Tr＝2.27min。在氮气下，于0℃搅拌无水二氯甲烷(5mL)中的粗的(E)-4-[2-((R)-1-叔丁氧基羰基氨基-乙基)-喹啉-7-基]-2,2-双-氟甲基-丁-3-烯酸(0.3mmol)、N,N-二异丙基乙胺(96mg,0.13mL,0.75mmol)、4-(二甲基氨基)-吡啶(73mg,0.6mmol)和2-甲基-6-硝基苯甲酸酐(193mg,0.56mmol)的溶液。添加二氯甲烷(2mL)中的(S)-1-[(S)-2-((S)-2-羟基-3-甲基-丁酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯-乙酯(142mg,0.33mmol)的溶液，并在0℃下搅拌反应混合物30min，然后室温搅拌18h。用二氯甲烷稀释反应混合物，并用冰冷的饱和碳酸氢钠溶液、水、冰冷的盐酸(1M)、水和盐水洗涤溶液。有机溶液通过疏水性筛板过滤，蒸发滤出液。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷/乙酸乙酯2:1至0:1的梯度，获得作为黄色凝胶的部分纯化的标题化合物(26mg,10％)。LCMS(m/z)834.3,836.2[M+H],Tr＝3.39min。
化合物99
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在氮气下，于0℃搅拌四氢呋喃(3mL)中的(S)-1-[(S)-2-((S)-2-{(E)-4-[2-((R)-1-叔丁氧基羰基氨基-乙基)-喹啉-7-基]-2,2-双-氟甲基-丁-3-烯酰氧基}-3-甲基-丁酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯-乙酯(100mg,0.11mmol)的溶液。添加氢氧化钠(0.1M,1.1mL,0.11mmol)的冰冷水溶液，并在0℃脚本反应混合物20min。添加冷盐酸(1M)将混合物酸化到pH 2，蒸发溶剂。残留物与四氢呋喃/甲苯(1:1,3x)共蒸发，用二乙醚(2x)研磨残留物，干燥得到的固体获得作为黄色固体的(S)-1-[(S)-2-((S)-2-{(E)-4-[2-((R)-1-叔丁氧基羰基氨基-乙基)-喹啉-7-基]-2,2-双-氟甲基-丁-3-烯酰氧基}-3-甲基-丁酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羧酸(0.1mmol)，其可以粗产物用于接下来的反应。LCMS(m/z)704.3[M+H],Tr＝2.61min。将盐酸(4M,1,4-二恶烷中,2mL)中的粗(S)-1-[(S)-2-((S)-2-{(E)-4-[2-((R)-1-叔丁氧基羰基氨基-乙基)-喹啉-7-基]-2,2-双-氟甲基-丁-3-烯酰氧基}-3-甲基-丁酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羧酸(0.1mmol)的混合物在室温下搅拌30min。蒸发溶剂，残留物与二乙醚(2x)共蒸发，干燥得到的固体获得作为类白色固体的(S)-1-[(S)-2-((S)-2-{(E)-4-[2-((R)-1-氨基-乙基)-喹啉-7-基]-2,2-双-氟甲基-丁-3-烯酰氧基}-3-甲基-丁酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羧酸盐酸盐(0.1mmol)，其可以粗产物用于接下来的反应。LCMS(m/z)604.3[M+H],Tr＝1.53min。在氮气下，于0℃搅拌二氯甲烷(100mL)中的粗的(S)-1-[(S)-2-((S)-2-{(E)-4-[2-((R)-1-氨基-乙基)-喹啉-7-基]-2,2-双-氟甲基-丁-3-烯酰氧基}-3-甲基-丁酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羧酸盐酸盐(0.1mmol)的悬浮液。添加二氯甲烷(5mL)中的N,N-二异丙基乙胺(52mg,0.07mL,0.4mmol)的溶液，并在0℃下搅拌得到的溶液。添加2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲烷铵(76mg,0.2mmol)，并在0℃下搅拌反应混合物30min，然后室温下搅拌18h。部分蒸发溶剂到体积为～30mL。用冰冷的饱和碳酸氢钠溶液、冰冷的盐酸(1M)和盐水洗涤溶液。有机溶液通过疏水性筛板过滤，蒸发滤出液。残留物通过硅胶色谱进行纯化，用异己烷/乙酸乙酯1:1至0:1的梯度洗脱，接着用硅胶色谱纯化，用异己烷/丙酮3:2洗脱。用二乙醚研磨残留物，干燥得到的固体，获得作为白色固体的标题化合物(4mg,7％,3步)。1H NMR(300MHz,CD3OD)δ1.01(d,J＝6.5 Hz,3H),1.09(d,J＝6.9Hz,3H),1.49-1.55(m,2H),1.61(d,J＝6.9Hz,3H),1.64(d,J＝7.1Hz,3H),1.93-1.98(m,1H),2.15-2.28(m,2H),2.68-2.76(m,1H),3.59-3.63(m,1H),4.41-4.46(m,1H),4.70-5.13(m,5H),5.35(d,J＝8.9Hz,1H),5.84(q,J＝7.1Hz,1H),6.27(d,J＝16.5Hz,1H),6.81(d,J＝16.5Hz,1H),7.49(d,J＝7.9Hz,1H),7.70(dd,J＝8.5,1.6Hz,1H),7.82(br s,1H),7.88(d,J＝8.5Hz,1H),8.28(d,J＝8.5Hz,1H).LCMS(m/z)586.2[M+H],Tr＝2.48min。
实施例100和101.化合物100和101
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化合物100a.2-烯丙氧基-2-甲基-丙酸乙酯
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在氮气下，于0℃下搅拌N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中的2-羟基-2-甲基-丙酸乙酯(2.64g,2.7mL,20mmol)。添加氢化钠(60％,分散在油中,880mg,22mmol)，并在0℃下搅拌反应混合物5min。添加烯丙基溴(2.18g,1.6mL,18mmol)，并在0℃下搅拌反应混合物30min，然后室温下搅拌18h。将反应混合物冷却至0℃，小心添加饱和氯化铵溶液将反应淬灭。添加二乙醚，分离有机层，用水(3x)和盐水洗涤。有机溶液通过疏水性筛板过滤，蒸发滤出液。残留物通过硅基色谱纯化，使用戊烷/二乙醚12:1至4:1的梯度，获得作为清澈油的标题化合物(2.33g,67％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ1.31(t,J＝7.1Hz,3H),1.47(s,6H),3.95-3.98(m,2H),4.21(q,J＝7.1Hz,2H),5.15-5.20(m,1H),5.27-5.39(m,1H),5.90-6.03(m,1H).LCMS(m/z)195.2[M+Na],Tr＝2.24min。
化合物100b(5,5-二甲基-[1,4]二恶烷-2-基)-甲醇
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在氮气下，室温下搅拌无水四氢呋喃(40mL)中的2-烯丙氧基-2-甲基-丙酸乙酯(1.72g,10mmol)的溶液。逐份添加硼氢化锂(44mg,20mmol)，并在室温下搅拌反应混合物20h。将反应混合物冷却至0℃，小心添加饱和氯化铵溶液，接着添加盐酸(2M)，将反应混合物酸化到pH 2。用二乙醚提取混合物，合并有机提取物，用盐水洗涤。有机 溶液通过疏水性筛板过滤，蒸发滤出液，获得2-烯丙氧基-2-甲基-戊-1-醇(10mmol)，其可以粗产物用于接下来的步骤。LCMS(m/z)153.2[M+Na],Tr＝1.16min。在0℃下搅拌二氯甲烷(40mL)中的2-烯丙氧基-2-甲基-戊-1-醇(10mmol)的悬浮液。添加间氯过苯甲酸(70％纯的,含有20％水和10％间氯苯甲酸,2.9g,12mmol)，在0℃下搅拌反应混合物30min，然后室温下搅拌24h。将反应混合物冷却至0℃，添加饱和的碳酸氢钠溶液和硫代硫酸钠溶液，并在0℃下搅拌混合物15min。分离有机层，用二氯甲烷(4x)萃取水层。合并有机提取物，用盐水洗涤。有机溶液通过疏水性筛板过滤，蒸发滤出液，获得2-甲基-2-环氧乙烷基甲氧基-戊-1-醇(10mmol)，其可以粗产物用于接下来的步骤。LCMS(m/z)169.2[M+Na],Tr＝0.72min。将二氯甲烷(50mL)中的2-甲基-2-环氧乙烷基甲氧基-戊-1-醇(10mmol)的溶液和外消旋樟脑-10-磺酸(765mg,3.3mmol)在室温下搅拌18h。添加饱和的碳酸氢钠溶液，分离有机层。用二氯甲烷萃取水层，合并有机提取物，通过疏水性筛板过滤，并蒸发滤出液。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用戊烷/二乙醚2:3至1:4的梯度，获得作为黄色油的标题化合物(826mg,57％,3步)。1H NMR(300MHz,d6-DMSO):δ1.02(s,3H),1.20(s,3H),3.23(d,J＝11.1Hz,1H),3.30-3.50(m,6H),4.68(t,J＝5.4Hz,1H).LCMS(m/z)169.2[M+Na],Tr＝0.72min。
化合物100c 5,5-二甲基-[1,4]二恶烷-2-羧酸苄基酯
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在5℃下搅拌1M氢氧化钾溶液中的(5,5-二甲基-[1,4]二恶烷-2-基)-甲醇(657mg,4.5mmol)的溶液。逐滴水(10mL)中的高锰酸钾(1.42g,9mmol)的溶液，同时保持内部温度低于10℃。将反应混合物在5℃下搅拌1h，然后室温下搅拌18h。反应混合物通过硅藻土过滤，然后用水和甲醇洗涤过滤板，并蒸发滤出液。用盐酸(2M)将残留物酸化到pH 2，用乙酸乙酯和氯仿提取混合物。合并有机提取物，用小体积的盐水洗涤。有机溶液通过疏水性筛板过滤，蒸发滤出液，获得作为蜡状固体的粗的5,5-二甲基-[1,4]二恶烷-2-羧酸(694mg,4.5mmol)。LCMS(m/z)159.1[M-H],Tr＝0.88min。在氮气下，将二氯甲烷(15mL)中的5,5-二甲基-[1,4]二恶烷-2-羧酸(750mg,4.7mmol)、草酰氯(600mg,0.4mL,4.7mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(2滴)的溶液在室温下搅拌2h。添加二氯甲烷(2mL)中的卞乙醇(508mg,0.5mL,4.7mmol)的溶液，并在室温下搅拌反应混合物20h。添加另外的卞乙醇(0.5mL,4.7mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌18h。蒸发溶剂，残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷/乙酸乙酯9:1至1:1的梯度，获得作为油的 标题化合物(870mg,74％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ1.19(s,3H),1.32(s,3H),3.43(d,J＝11.4Hz,1H),3.72(d,J＝11.4Hz,1H),3.88-3.92(m,2H),4.21(dd,J＝8.2,4.7Hz,1H),5.24(s,2H),7.34-7.39(m,5H).LCMS(m/z)273.1[M+Na],Tr＝2.41min。
化合物100d.2-(1-羟基-乙基)-5，5-二甲基-[1，4]二恶烷-2-羧酸苄基酯
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在氮气下，于-78℃搅拌无水四氢呋喃(4mL)中的N,N-二异丙胺(530mg,0.73mL,5.25mmol)的溶液。逐滴添加n-丁基锂(2.1mL,5.25mmol,2.5M,己烷中的溶液)，并在-78℃下搅拌反应混合物30min。添加5,5-二甲基-[1,4]二恶烷-2-羧酸苄基酯(870mg,3.5mmol)的溶液，并在-78℃下搅拌反应混合物20min。添加一份乙醛(462mg,0.6mL,10.5mmol)。除去冷水浴，并室温下搅拌反应混合物1h。将反应混合物冷却至0℃，并添加冰冷的盐酸(2M)将反应混合物酸化到pH 2。添加氯化钠以饱和水相，并用二乙醚提取混合物。合并有机提取物，用盐水洗涤。有机溶液通过疏水性筛板过滤，蒸发滤出液。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷/乙酸乙酯6:1至0:1的梯度，接着通过硅胶色谱纯化，使用异己烷/乙酸乙酯3:1至0:1的梯度，获得作为油和非对映异构体的2:1混合物的标题化合物(400mg,40％)。LCMS(m/z)295.1[M+H],Tr＝2.11min。
化合物100e 5,5-二甲基-2-乙烯基-[1,4]二恶烷-2-羧酸苄基酯
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在氮气下，于-78℃搅拌无水四氢呋喃(3mL)中的氯化钠(80mg,2mmol,60％,分散于矿物油中)的悬浮液。添加四氢呋喃中的2-(1-羟基-乙基)-5,5-二甲基-[1,4]二恶烷-2-羧酸苄基酯(400mg,1.36mmol)的溶液，并在-78℃下搅拌反应混合物30min。将反应混合物升温至室温，然后在室温下搅拌5h。将反应混合物冷却至5℃，小心添加饱和的氯化铵，用乙酸乙酯提取混合物。合并有机提取物，用盐水洗涤。有机溶液通过疏水性筛板过滤，并蒸发滤出液。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷/乙酸乙酯9:1至4:1的梯度，获得作为黄色油和非对映异构体的2:1混合物的粗的5,5-二甲基-2-(1-三氟甲烷磺酰氧基-乙基)-[1,4]二恶烷-2-羧酸苄基酯(833mg,1.3mmol)，其静置时变黑，而且可以立即用于接下来的步骤。LCMS(m/z)449.0[M+H],Tr＝3.29min。在氮气下，室温搅拌二氯甲烷(5mL)中的5,5-二甲基-2-(1-三氟甲烷磺酰氧基-乙基)-[1,4]二恶烷-2- 羧酸苄基酯(833mg,1.3mmol)的溶液。添加1,8-二氮杂双环十一碳-7-烯(790mg,0.8mL,5.2mmol)，并在室温下搅拌反应混合物72h。将反应混合物冷却至0℃，并用冰冷的盐酸(2M)酸化到pH 2。用二氯甲烷提取混合物。合并有机提取物，用盐水洗涤。有机溶液通过疏水性筛板过滤，并蒸发滤出液。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷/二乙醚9:1至3:1的梯度，获得作为无色油的标题化合物(189mg,52％,2步)。1H NMR(300MHz,CDCl3):δ1.13(s,3H),1.32(s,3H),3.53(d,J＝11.8Hz,1H),3.66(d,J＝11.8Hz,1H),3.72(d,J＝12.1Hz,1H),4.24(d,J＝12.1Hz,1H),5.19-5.35(m,3H),5.51(dd,J＝17.4,0.9Hz,1H),5.80(dd,J＝17.4,10.7Hz,1H),7.35-7.40(m,5H).LCMS(m/z)277.1[M+H],Tr＝2.81min。
化合物100f 5,5-二甲基-2-乙烯基-[1,4]二恶烷-2-羧酸
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添加水(1.6mL)中的氢氧化锂一水合物的溶液到四氢呋喃(7mL)中的5,5-二甲基-2-乙烯基-[1,4]二恶烷-2-羧酸苄基酯(189mg,0.684mmol)的搅拌溶液中。将反应混合物在0℃下搅拌30min，并升温至环境温度，搅拌19h。用水稀释混合物，并用乙酸乙酯(2x)洗涤。用盐酸(2M)将水层酸化到pH 5，并用乙酸乙酯(2x)提取。有机提取物通过无水硫酸镁干燥，过滤，并蒸发，获得作为无色油的标题化合物(69mg,54％)。1H NMR(300MHz,CDCl3):δ1.19(s,3H),1.32(s,3H),3.58(d,J＝11.8Hz,1H),3.72(d,J＝11.8Hz,1H),3.75(d,J＝12.3Hz,1H),4.21(d,J＝12.3Hz,1H),5.39(dd,J＝10.7,0.9Hz,1H),5.60(dd,J＝17.4,0.9Hz,1H),5.84(dd,J＝17.4,10.7Hz,1H).LCMS(m/z)185.2[M-H],Tr＝1.32min。
化合物100g 2-((E)-2-{2-[(R)-1-({(S)-1-[(S)-2-((S)-2-羟基-3-甲基-丁酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羰基}-氨基)-乙基]-喹啉-7-基}-乙烯基)-5,5-二甲基[1,4]二恶烷-2-羧酸
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1,4-二恶烷中的(S)-1-[(S)-2-((S)-2-羟基-3-甲基-丁酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羧酸[(R)-1-(7-溴-喹啉-2-基)-乙基]-酰胺(198mg,0.371mmol)、5,5-二甲基-2-乙烯基-[1,4] 二恶烷-2-羧酸(69mg,0.371mmol)、三乙胺(112mg,155μL,1.11mmol)和三(o-甲苯基)膦(23mg,0.074mmol)的混合物用氮气脱气5min，然后在氮气下升温至50℃，同时搅拌。添加三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(34mg,0.037mmol)，并40min将混合物加热至80℃，然后冷却至室温。过滤悬浮液，并蒸发，获得粗的标题化合物(0.371mmol)，其可以直接用于接下来的阶段。LCMS(m/z)640.3[M+H],Tr＝1.94min。
化合物100和101
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在氮气下，通过注射泵，把二氯甲烷(5mL)中的2-((E)-2-{2-[(R)-1-({(S)-1-[(S)-2-((S)-2-羟基-3-甲基-丁酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羰基}-氨基)-乙基]-喹啉-7-基}-乙烯基)-5,5-二甲基[1,4]二恶烷-2-羧酸(0.371mmol)的溶液，2.5h添加到二氯甲烷(111mL)中的粉末状![]()
分子筛(～1g)、2-甲基-6-硝基苯甲酸酐(255mg,0.742mmol)和4-(二甲基氨基)-吡啶(181mg,1.48mmol)的搅拌混合物中。原始含有粗的酸的烧瓶用二氯甲烷(1mL)洗涤，并将该溶液30min添加到反应混合物中。添加结束后，搅拌反应混合物30min，通过硅藻土过滤，并依序用冰冷的饱和氯化铵溶液(2x)和冰冷的饱和碳酸氢钠溶液(2x)洗涤，通过疏水性筛板，并蒸发。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷/丙酮1:0至1:1的梯度，接着通过反相制备性HPLC，在Agilent Eclipse XDB/C187微米，250x21.2mm柱(流速20mL/min)上纯化，使用乙腈/水9:11，获得作为白色固体的第一洗脱的极性较强的非对映异构体(2.9mg,1％,2步)，和作为白色固体的第二洗脱的极性较弱的非对映异构体(6.6mg,3％,2步)。
第一洗脱的非对映异构体。化合物100。1H NMR(300MHz,CD3OD):δ1.07(d,J＝6.7Hz,3H),1.12(s,3H),1.13(d,J＝6.9Hz,3H),1.43(s,3H),1.52-1.78(m,2H),1.57(d,J＝7.5Hz,3H),1.59(d,J＝6.7Hz,3H),1.93-2.02(m,1H),2.18-2.39(m,2H),2.68-2.80(m,1H),3.55-3.64(m,2H),3.73(d,J＝11.8Hz,1H),3.92(d,J＝12.3Hz,1H),4.39(d,J＝12.3Hz,1H),4.41-4.50(m,1H),5.11(q,J＝6.7Hz,1H),5.39(d,J＝8.5Hz,1H),5.83(q,J＝6.9Hz,1H),6.31(d,J＝16.5Hz,1H),6.98(d,J＝16.5Hz,1H),7.49(d,J＝8.7Hz,1H),7.65(dd,J＝8.5,1.4Hz,1H),7.85(s,1H),7.89(d,J＝8.5Hz,1H),8.28(d,J＝8.5Hz,1H).LCMS(m/z)622.2[M+H],Tr＝2.48min。
第二洗脱的非对映异构体。化合物101。1H NMR(300MHz,CD3OD):δ1.08(d,J＝6.7Hz,3H),1.09(d,J＝6.5Hz,3H),1.13(s,3H),1.43(s,3H),1.52-1.76(m,2H),1.59(d,J＝6.7Hz,3H),1.64(d,J＝7.4Hz,3H),1.89-1.99(m,1H),2.19-2.28(m,2H),2.62-2.73(m,1H),3.55-3.71(m,3H),3.87(d,J＝12.0Hz,1H),4.30(d,J＝11.8Hz,1H),4.37-4.47(m,1H),5.09(q,J＝6.7Hz,1H),5.21(d,J＝8.9Hz,1H),5.79(q,J＝7.2Hz,1H),6.14(d,J＝16.3Hz,1H),6.89(d,J＝16.3Hz,1H),7.47(d,J＝8.5Hz,1H),7.65(dd,J＝8.5,1.6Hz,1H),7.86(d,J＝8.2Hz,1H),7.88(s,1H),8.26(d,J＝8.5Hz,1H).LCMS(m/z)622.3[M+H],Tr＝2.47min。
实施例102、103、104和105：化合物102、103、104和105。
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化合物102a 3-三异丙基硅氧基-环戊烷羧酸乙酯
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二氯甲烷(100mL)中的3-羟基-环戊烷羧酸乙酯(如PCT Int.Appl.2008131946中所述的制备,3.180g,20.1mmol)，接着用2,6-卢剔啶(4.7mL,40.2mmol)和三异丙基硅基三氟甲烷磺酸酯(8.1mL,30.15mmol)。搅拌3.5h后，用pH 4缓冲液将反应淬灭。用二氯甲烷萃取水层。合并有机物，通过相分离器过滤，并真空除去挥发物。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用100g Isolute筒，用异己烷/二乙醚1:0至9:1的连续梯度洗脱，获得作为浅黄色油和非对映异构体的3.5:1混合物的标题化合物(6.15g,97％)。1H NMR(300MHz,CDCl3):δ1.04-1.08(m,27H),1.27(t,J＝7.1Hz,4H),1.70-2.00(m,5.2H),2.04-2.21(m,2.6H),2.66-2.79(m,1H),2.97-3.10(m,0.3H),4.14(q,J＝7.1Hz,2.6H),4.29-4.39(m,1H),4.43-4.50(m,0.3H)。
化合物102b.1-(1-羟基-乙基)-3-三异丙基硅氧基-环戊烷羧酸乙酯
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用n-丁基锂(2.5M,己烷中的,11.7mL,29.329mmol)处理无水四氢呋喃(60mL)中的N,N-二异丙胺(4.4mL,31.285mmol)的冷(-78℃)溶液。在-78℃下搅拌30min后，用无水四氢呋喃(20mL)中的3-三异丙基硅氧基-环戊烷羧酸乙酯(6.15g,19.553mmol)的溶液处理反应混合物。在-78℃下搅拌40min后，用纯乙醛(3.3mL,58.659mmol)处理反应混合物。除去冷水浴，并在室温下搅拌反应50min，然后用饱和的氯化铵溶液(100mL)淬灭。用二氯甲烷(2x)萃取水层。合并有机物，通过相分离器过滤，并真空除去挥发物。残留物通过硅胶色谱纯化，使用100g Isolute筒，用异己烷/乙酸乙酯1:0至4:1的连续梯度洗脱，获得作为浅黄色油和非对映异构体的复杂混合物的标题化合物(6.61g,94％)。
化合物102c.3-三异丙基硅氧基-1-乙烯基-环戊烷羧酸
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用1-(1-羟基-乙基)-3-三异丙基硅氧基-环戊烷羧酸乙酯(6.61g,18.434mmol)的溶液处理无水四氢呋喃(60mL)中的氢化钠(1.474g,36.868mmol,60％,分散于矿物油中)的冷(-78℃)悬浮液。在-78℃下搅拌10min后，用无水四氢呋喃(20mL)中的N-(5-氯-2-吡啶基)双(三氟甲烷磺酰亚胺)(13.2g,33.615mmol)的溶液处理反应混合物。除去冷水浴，并室温下搅拌反应24h。添加另外的氢化钠(1.474g,36.868mmol,60％,分散于矿物油中)。室温下搅拌17.5h后，用饱和的氯化铵溶液(100mL)在0℃下将反应淬灭。用二氯甲烷(2x)萃取水层。用盐酸(2M)将水层酸化到pH 2，并用二氯甲烷提取。合并有机物，通过相分离器过滤，并真空除去挥发物。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用100g Isolute筒，用异己烷/乙酸乙酯1:0至4:1的连续梯度洗脱，获得作为浅黄色油和非对映异构体的3:1混合物的标题化合物(876.9mg,15％)。LCMS(m/z)311.2[M-H],Tr＝4.05min。
化合物102d.1-((E)-2-{2-[(R)-1-({(S)-1-[(S)-2-((S)-2-环丙基-2-羟基-乙酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羰基}-氨基)-乙基]-喹啉-7-基}-乙烯基)-3-三异丙基硅氧基-环戊烷羧酸
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通过鼓吹氮气5min，对1,4-二恶烷(20mL)中的(S)-1-[(S)-2-((S)-2-环丙基-2-羟基-乙酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羧酸[(R)-1-(7-溴-喹啉-2-基)-乙基]-酰胺(795.0mg,1.493mmol)、3-三异丙基硅氧基-1-乙烯基-环戊烷羧酸(466.6mg,1.493mmol)、三(o-甲苯基)膦(91.0mg,0.299mmol)和三乙胺(0.63mL,4.479mmol)的溶液脱氧。然后用三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(136.7mg,0.149mmol)处理反应混合物。在100℃下搅拌40min后，将反应冷却至室温，并通过硅藻土过滤。用乙酸乙酯漂洗固体，并真空除去挥发物，获得作为橙色泡沫的标题化合物(1.493mmol)。LCMS(m/z)764.4[M-H],Tr＝3.53min。
化合物102e
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通过注射泵，把干燥的二氯甲烷(20mL)中的粗的1-((E)-2-{2-[(R)-1-({(S)-1-[(S)-2-((S)-2-环丙基-2-羟基-乙酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羰基}-氨基)-乙基]-喹啉-7-基}-乙烯基)-3-三异丙基硅氧基-环戊烷羧酸(1.493mmol)的溶液4.5h添加到含有![]()
分子筛的干燥的二氯甲烷(500mL)中的2-甲基-6-硝基苯甲酸酐(771.0mg,2.239mmol)、4-二甲基氨基吡啶(547.1mg,4.479mmol)的溶液中。添加结束后，室温下搅拌反应2h，然后过滤，真空除去部分挥发物。用盐酸(0.5M,40mL)洗涤有机物。用二氯甲烷提取酸性含水层。用饱和的碳酸氢钠溶液洗涤合并的有机物。用二氯甲烷提取碱性含水层。合并的有机物在相分离器上过滤。真空除去挥发物，残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用50g Isolute筒，用异己烷/丙酮1:0至3:2的连续梯度洗脱，获得作为白色固体和非对映异构体的复杂混合物的标题化合物(459.6mg,41％)。LCMS(m/z)746.5[M+H],Tr＝4.35min。
化合物102、103、104和105
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用盐酸(48wt％,水中,1.3mL,30.8mmol)处理250mL圆底Teflon烧瓶中的乙腈/四氢呋喃(20mL,9:1)中的化合物102e(459.6mg,0.616mmol)的溶液。室温搅拌17h后，添加另外的盐酸(48wt％,水中,1.3mL,30.8mmol)。室温搅拌7h后，将反应混合物缓慢倒入饱和的碳酸氢钠溶液(100mL)中。鼓泡停止后，用二氯甲烷萃取水层(2x)。合并有机物，通过相分离器过滤，并真空除去挥发物。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用50g Isolute筒，用异己烷/丙酮1:0至2:3的连续梯度洗脱。混合物进一步通过反相制备性HPLC进行纯化，用水(用0.1％三氟乙酸修饰)/乙腈(用0.1％三氟乙酸修饰)9:1至3:2的连续梯度洗脱，收集2mL级分，蒸发挥发物后，获得作为三氟乙酸酯盐的4种不同的异构体。
作为浅黄色固体的化合物102(41.2mg,9.5％)。1H NMR(300MHz,CD3OD):δ0.46-0.56(m,1H),0.58-0.72(m,3H),1.23-1.36(m,1H),1.56-1.67(m,7H),1.69-1.85(m,3H),1.90-2.00(m,1H),2.01-2.12(m,1H),2.13-2.24(m,2H),2.46-2.54(m,1H),2.62-2.79(m,2H),3.58-3.66(m,1H),4.37-4.47(m,2H),4.94(d,J＝8.7Hz,1H),5.12(q,J＝6.7Hz,1H),5.78-5.91(m,1H),6.50(app d,J＝3.1Hz,2H),7.57(d,J＝8.5Hz,1H),7.73(d,J＝8.5Hz,1H),7.89(s,1H),7.93(d,J＝8.5Hz,1H),8.43(d,J＝8.5Hz,1H),8.66(d,J＝7.1Hz,1H).LCMS(m/z)590.2[M+H],Tr＝1.97min。
作为浅黄色凝胶的化合物103(31.2mg,7.2％)。1H NMR(300MHz,CD3OD):δ0.47-0.57(m,1H),0.60-0.74(m,3H),1.25-1.38(m,1H),1.54-1.79(m,9H),1.91-2.25(m,5H),2.48-2.90(m,3H),3.58-3.66(m,1H),4.37-4.47(m,2H),5.13(q,J＝6.7Hz,1H),5.78-5.91(m,1H),6.48,6.55(ABq,JAB＝16.3Hz,2H),7.57(d,J＝8.5Hz,1H),7.73(d,J＝8.5Hz,1H),7.83-7.96(m,2H),8.43(d,J＝8.5Hz,1H),8.66(d,J＝7.8Hz,1H).LCMS(m/z)590.2[M+H],Tr＝1.88min。
作为浅黄色固体的化合物104(13.5mg,3.1％)。1H NMR(300MHz,CD3OD):δ0.44-0.57(m,1H),0.61-0.71(m,3H),1.28-1.40(m,1H),1.54-1.81(m,9H),1.91-2.13(m,4H),2.17-2.29(m,1H),2.43-2.59(m,1H),2.66-2.78(m,2H),3.58-3.66(m,1H),4.30-4.38(m,1H),4.40-4.48(m,1H),5.05-5.15(m,1H),5.78-5.91(m,1H),6.47,6.54(ABq,JAB＝15.8Hz,2H),7.50(d,J＝8.5Hz,1H),7.63-7.74(m,1H),7.80(s,1H),7.88(d,J＝8.5Hz,1H),8.32(d,J＝8.5Hz,1H),8.69-8.76(m,1H).LCMS(m/z)590.2[M+H],Tr＝1.93min。
作为浅黄色凝胶的化合物105(6.0mg,1.4％)。1H NMR(300MHz,CD3OD):δ0.45-0.55(m,1H),0.59-0.72(m,3H),1.27-1.44(m,1H),1.54-1.84(m,9H),1.90-2.00(m,2H),2.01-2.27(m,4H),2.45-2.54(m,1H),2.62-2.81(m,2H),3.57-3.66(m,1H),4.37-4.47(m,2H),4.96(d,J＝8.9Hz,1H),5.11(q,J＝6.9Hz,1H),5.78-5.90(m,1H),6.39-6.62(m,2H),7.52(d,J＝8.5Hz,1H),7.70(d,J＝8.5Hz,1H),7.80-7.92(m,2H),8.35(d,J＝8.5Hz,1H),8.66-8.74(m,1H).LCMS(m/z)590.2[M+H],Tr＝1.97min。
实施例106，化合物106
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化合物106a.4-(1-羟基-乙基)-四氢-噻喃-4-羧酸甲酯
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在氮气下，于-78℃下搅拌无水四氢呋喃(10mL)中的N,N-二异丙胺(1.51g,2.1mL,15mmol)的溶液。逐滴添加n-丁基锂(6mL,15mmol,2.5M,己烷中的溶液)，并在-78℃下搅拌反应混合物30min。添加四氢呋喃(4mL)中的四氢-噻喃-4-羧酸甲酯(1.60g,10mmol)的溶液，并在-78℃下搅拌反应混合物20min。然后添加一份乙醛(1.32g,1.7mL,30mmol)。除去冷水浴，并在室温下搅拌反应混合物1h。将反应混合物冷却至0℃，并添加冰冷的盐酸(2M)将反应混合物酸化到pH 2。添加氯化钠以饱和水相，并用二乙醚提取混合物。合并有机提取物，用盐水洗涤。有机溶液通过疏水性筛板过滤，蒸发滤出液。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用戊烷/二乙醚3:1至1:3的梯度，获得作为黄色油的标题化合物(1.77g,87％)。1H NMR(300MHz,d6-DMSO):δ0.96(d,J＝6.5Hz,3H),1.46-1.73(m,2H),2.12-2.28(m,2H),2.43-2.57(m,4H),3.50-3.58(m,1H),3.63(s,3H),4.85(d,J＝5.8Hz,1H).LCMS(m/z)227.1[M+Na],Tr＝1.53min。
化合物106b 4-(1-羟基-乙基)-1，1-二氧-六氢-噻喃-4-羧酸甲酯
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在0℃下搅拌二氯甲烷(10mL)中的4-(1-羟基-乙基)-四氢-噻喃-4-羧酸甲酯(408mg,2mmol)的溶液。添加间氯过苯甲酸(70％纯的,含有20％水和10％间氯过苯甲酸,830mg,4.8mmol)，并在0℃下搅拌反应混合物3h。添加硫代硫酸钠溶液和饱和的碳酸氢钠溶液，用二氯甲烷提取混合物。合并有机提取物，用盐水洗涤。有机溶液通过疏水性筛板过滤，蒸发滤出液。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷/乙酸乙酯1:1至0:1的梯度，获得作为白色固体的标题化合物(281mg,60％)。1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ0.99(d,J＝6.5Hz,3H),1.90-2.30(m,4H),2.92-3.11(m,4H),3.64-3.71(m,4H),5.12(d,J＝5.8Hz,1H).LCMS(m/z)237.1[M+H],Tr＝0.76min。
化合物106c 1,1-二氧-4-乙烯基-六氢-噻喃-4-羧酸甲酯
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在氮气下，于0℃搅拌二氯甲烷(10mL)中的4-(1-羟基-乙基)-1,1-二氧-六氢-噻喃-4-羧酸甲酯(281mg,1.2mmol)的溶液。添加吡啶(284mg,0.3mL,3.6mmol)，然后逐滴添加三氟甲烷磺酸酐(677mg,0.4mL,2.4mmol)，将反应混合物在0℃下搅拌30min。添加饱和的碳酸氢钠溶液，分离有机层，用盐水洗涤，通过疏水性筛板过滤。蒸发滤出液到体积为～5mL，粗的1,1-二氧-4-(1-三氟甲烷磺酰氧基-乙基)-六氢-噻喃-4-羧酸甲酯(1.2mmol)的溶液立即用接下来的步骤中。LCMS(m/z)368.9[M+H],Tr＝2.27min。在氮气下，室温搅拌粗的1,1-二氧-4-(1-三氟甲烷磺酰氧基-乙基)-六氢-噻喃-4-羧酸甲酯(1.2mmol)的溶液。添加1,8-二氮杂双环十一碳-7-烯(0.6mL,3.6mmol)，将反应混合物在室温下搅拌45min。将反应混合物冷却至0℃，并用冰冷的盐酸(2M)酸化到pH 2。用二氯甲烷提取混合物。合并有机提取物，用水和盐水洗涤。有机溶液通过疏水性筛板过滤，蒸发滤出液。残留物通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷/乙酸乙酯4:1至1:1的梯度，获得作为白色固体的标题化合物(182mg,70％,2步)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ2.25-2.34(m,2H),2.59-2.66(m,2H),3.05-3.13(m,4H),3.79(s,3H),5.23(d,J＝17.6Hz,1H),5.31(d,J＝10.7Hz,1H),5.82(dd,J＝17.6,10.7Hz,1H).LCMS(m/z)219.1[M+H],Tr＝1.33min。
化合物106e 1,1-二氧-4-乙烯基-六氢-噻喃-4-羧酸
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在氮气下，室温搅拌四氢呋喃(4mL)和甲醇(0.5mL)中的1,1-二氧-4-乙烯基-六氢-噻喃-4-羧酸甲酯(174mg,0.8mmol)的溶液。添加水(1mL)中的氢氧化锂一水合物(134mg,3.2mmol)的溶液，并将反应混合物在室温下搅拌1h。将反应混合物冷却至0℃，并用盐酸(2M)酸化到pH 2。添加氯化钠，用盐水洗涤。有机溶液通过疏水性筛板过滤，蒸发滤出液，获得作为白色固体的标题化合物(163mg,100％)。1H NMR(300MHz,d6-DMSO).2.03-2.12(m,2H),2.33-2.42(m,2H),2.96-3.13(m,4H),5.23(d,J＝17.6Hz,1H),5.25(d,J＝10.7Hz,1H),5.87(dd,J＝17.6,10.7Hz,1H),12.9-13.1(br s,1H).LCMS(m/z)227.1[M+Na],Tr＝0.96min。
化合物106
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用氮气将1,4-二恶烷(10mL)中的1-[(S)-2-((S)-2-羟基-3-甲基-丁酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羧酸[(R)-1-(7-溴-喹啉-2-基)-乙基]-酰胺(187mg,0.35mmol)、1,1-二氧-4-乙烯基-六氢-噻喃-4-羧酸(79mg,0.38mmol)、三(o-甲苯基)膦(21mg,0.07mmol)和三乙胺(106mg,0.15mL,1.05mmol)的搅拌溶液脱气15min。将溶液加热至50℃，并添加三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(32mg,0.035mmol)。将反应混合物在80℃下加热30min。将反应混合物冷却至室温，混合物通过疏水性筛板过滤，蒸发滤出液，获得作为橙色油的粗的4-((E)-2-{2-[(R)-1-({(S)-1-[(S)-2-((S)-2-羟基-3-甲基-丁酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羰基}-氨基)-乙基]-喹啉-7-基}-乙烯基)-1,1-二氧-六氢-噻喃-4-羧酸(0.35mmol)。LCMS(m/z)658.2[M+H],Tr＝1.57min。在氮气下，室温下搅拌含有![]()
分子筛(200mg)的二氯甲烷(200mL)中的2-甲基-6-硝基苯甲酸酐(241mg,0.7mmol)和4-(二甲基氨基)-吡啶(170mg,1.4mmol)的溶液。4h逐滴添加二氯甲烷(5mL)中的粗的4-((E)-2-{2-[(R)-1-({(S)-1-[(S)-2-((S)-2-羟基-3-甲基-丁酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羰基}-氨基)-乙基]-喹啉-7-基}-乙烯基)-1,1-二氧-六氢-噻喃-4-羧酸(0.35mmol)的溶液。反应混合物通过硅藻土过滤，蒸发溶液，到体积为～30mL。用冰冷的饱和氯化铵溶液、冰冷的饱和碳酸氢钠溶液和盐水洗涤溶液。有机溶液通过疏水性筛板过滤，蒸发滤出液。残留物通过硅胶色谱进行纯化，用异己烷/乙酸乙酯/甲醇1:1:0至0:1:0至0:9:1的梯度洗过，接着通过反相制备性HPLC纯化，用乙腈(含0.1％三氟乙酸)/水(含0.1％三氟乙酸)9:1至1:1的梯度洗脱。合并含有产物的级分，蒸发。残留物在二氯甲烷与饱和的碳酸氢钠 溶液之间分离。分离有机层，用盐水洗涤。有机溶液通过疏水性筛板过滤，蒸发滤出液，获得作为白色固体的标题化合物(14mg,7％,2步)。1H NMR(300MHz,CD3OD):δ1.05(d,J＝6.7Hz,3H),1.09(d,J＝6.7Hz,3H),1.59(d,J＝6.7Hz,3H),1.62(d,J＝7.1Hz,3H),1.63-1.71(m,2H),1.92-1.97(m,1H),2.17-3.25(m,11H),3.55-3.65(m,1H),4.40-4.46(m,1H),5.09(q,J＝6.7Hz,1H),5.33(d,J＝8.3Hz,1H),5.85(q,J＝7.1Hz,1H),6.36(d,J＝16.3Hz,1H),6.73(d,J＝16.3Hz,1H),7.47(d,J＝8.5Hz,1H),7.68(dd,J＝8.5,1.6Hz,1H),7.85(br s,1H),7.87(d,J＝8.5Hz,1H),8.28(d,J＝8.5Hz,1H).LCMS(m/z)640.2[M+H],Tr＝2.09min。
实施例107.化合物107.
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化合物107a 2,2-双-氟甲基-5-乙烯基-[1,3]二恶烷-5-羧酸乙酯
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把2,2-双-羟甲基-丁-3-烯酸乙酯(0.88g,5.05mmol)、1,3-二氟丙酮(0.95g,10.1mmol)和对甲苯-4-磺酸一水合物(0.96g,5.05mmol)装到小瓶中。密封小瓶，并在微波反应器中于100℃加热15min。得到的棕色油在二氯甲烷与含水碳酸氢钠溶液之间分离。有机层通过疏水性筛板过滤，蒸发，获得棕色油(0.98g)。将油通过硅胶色谱进行纯化，使用异己烷/乙酸乙酯3:1，获得作为无色油的标题化合物(0.619g,74％)。1H NMR(300MHz,CDCl3):δ1.31(t,J＝7.1Hz,3H),3.96(d,J＝12.0Hz,2H),4.27(q,J＝7.1Hz,2H),4.34-4.69(m,6H),5.22-5.35(m,2H),5.67-5.79(m,1H)。
化合物107b 2,2-双-氟甲基-5-乙烯基-[1,3]二恶烷-5-羧酸
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把水(8mL)中的氢氧化锂一水合物(311mg,7.42mmol)的溶液添加到四氢呋喃/甲醇(12mL,4:1)中的2,2-双-氟甲基-5-乙烯基-[1,3]二恶烷-5-羧酸乙酯(619mg,2.47mmol)的搅拌溶液中。将反应混合物在室温下搅拌1h，然后冷却至0℃，接着用盐酸(1 M)酸化到pH 4。用氯化钠饱和混合物，然后用二氯甲烷(3x10mL)提取。提取物通过疏水性筛板过滤，蒸发，获得作为无色凝胶的标题化合物(390mg,71％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ4.00(d,J＝12.0Hz,2H),4.35-4.73(m,6H),5.30-5.43(m,2H),5.68-5.81(m,1H)。
实施例107.化合物107.
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1,4-二恶烷(12mL)中的(S)-1-[(S)-2-((S)-2-羟基-3-甲基-丁酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羧酸[(R)-1-(7-溴-喹啉-2-基)-乙基]-酰胺(300mg,0.56mmol)、2,2-双-氟甲基-5-乙烯基-[1,3]二恶烷-5-羧酸(125mg,0.56mmol)、三乙胺(234μL,1.68mmol)和三(o-甲苯基)膦(34mg,0.112mmol)的溶液用氮气净化10min，接着添加三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(51mg,0.056mmol)。将搅拌的反应混合物在60℃下加热1h。将混合物冷却至室温，通过硅藻土过滤，然后蒸发，产生橙色泡沫。将泡沫溶于二氯甲烷(10mL)中，通过注射泵，将得到的溶液5h添加到含有粉末状![]()
筛的二氯甲烷(205mL)中的2-甲基-6-硝基苯甲酸酐(482mg,1.4mmol)和4-(二甲基氨基)吡啶(350mg,2.8mmol)的溶液中。添加结束后，搅拌溶液20min，过滤，用含水碳酸氢钠溶液(150mL)洗涤，然后通过疏水性筛板过滤，并蒸发，获得棕色凝胶，其通过反相制备性HPLC纯化，使用水/乙腈4:1至0:1的梯度，接着通过反相HPLC纯化，使用水(用0.1％甲酸铵修饰)/乙腈3:2，获得作为白色固体的标题化合物(39mg,10％)。1H NMR(300MHz,CD3OD):δ1.06(d,J＝6.7Hz,3H),1.12(d,J＝6.7Hz,3H),1.49-1.78(m,2H),1.61(d,J＝6.7Hz,3H),1.66(d,J＝7.1Hz,3H),1.92-2.02(m,1H),2.13-2.30(m,2H),2.64-2.78(m,1H),3.58-3.66(m,1H),4.12-4.25(m,3H),4.35-4.92(m,6H),5.07(q,J＝6.7Hz,1H),5.38(d,J＝9.1Hz,1H),5.82(q,J＝7.1Hz,1H),6.17(d,J＝16.5Hz,1H),6.65(d,J＝16.5Hz,1H),7.48(d,J＝8.5Hz,1H),7.67-7.76(m,2H),7.87(d,J＝8.5Hz,1H),8.27(d,J＝8.5Hz,1H).LCMS(m/z)658.2[M+H],Tr＝2.46min。
实施例108.化合物108.
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化合物108
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室温下添加n-丁酰氯(1滴)到吡啶(3滴)中的反应物74(7.5mg,0.012mmol)的溶液中。室温下1h后，用乙酸乙酯稀释混合物，用10％柠檬酸溶液(x1)和饱和的NaHCO3溶液(x1)洗涤。用乙酸乙酯(x1)提取含水级分后，合并两种有机级分，干燥(MgSO4)，并浓缩。残留物通过CombiFlash纯化，使用己烷-乙酸乙酯作为洗脱物，获得4.6mg(55％)产物化合物108。1H NMR(400MHz,甲醇-d4):δ8.23(d,J＝8.5Hz,1H),7.83(d,J＝8.4Hz,1H),7.78(s,1H),7.63(dd,J＝8.7,1.6Hz,1H),7.43(d,J＝8.5Hz,1H),6.60(d,J＝16.3Hz,1H),6.29(d,J＝16.4Hz,1H),5.80(q,J＝7.2Hz,1H),5.25(d,J＝8.5Hz,1H),5.07(q,J＝6.6Hz,1H),4.99(s,1H),4.41(d,J＝13.2Hz,1H),3.57(m,1H),2.75–2.59(m,1H),2.34(t,J＝7.3Hz,2H),2.31–2.06(m,3H),2.05–1.75(m,6H),1.75–1.62(m,3H),1.60(d,J＝7.0Hz,3H),1.57(d,J＝7.0Hz,3H),1.28(s,3H),1.06(d,J＝6.8Hz,3H),1.01(d,J＝6.8Hz,3H),0.98(t,J＝6.8Hz,3H)。
LCMS(m/z)676.4[M+H],Tr 1.77min(运行3min)。
实施例109.化合物109.
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化合物109
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室温下，添加丙酰氯(2滴)到吡啶(3滴)中的74(7.3mg,0.012mmol)的溶液中。5min后，添加乙酸乙酯(～1mL)，并超声处理使其成为悬浮液。20min后，用乙酸乙酯稀释混合物，用10％柠檬酸溶液(x1)和饱和的NaHCO3溶液(x1)洗涤。用乙酸乙酯(x1)提取含水级分后，合并两种有机级分，干燥(MgSO4)，并浓缩。残留物通过CombiFlash纯化，使用己烷-乙酸乙酯作为洗脱物，获得6.0mg(75％)产物化合物109。1H NMR(400MHz,甲醇-d4):δ8.46(d,J＝5.6Hz,1H),8.23(d,J＝8.5Hz,1H),7.83(d,J＝8.5Hz,1H),7.78(s,1H),7.63(dd,J＝8.5,1.7Hz,1H),7.43(d,J＝8.4Hz,1H),6.60(d,J＝16.3Hz,1H),6.29(d,J＝16.3Hz,1H),5.80(q,J＝7.2Hz,1H),5.25(d,J＝8.5Hz,1H),5.07(q,J＝6.5Hz,1H),4.98(s,1H),4.47–4.34(m,1H),3.57(dd,J＝11.8,3.0Hz,1H),2.68(td,J＝13.0,3.1Hz,1H),2.38(q,J＝7.6Hz,2H),2.28(dd,J＝24.6,13.3Hz,1H),2.20–2.07(m,1H),2.05–1.74(m,5H),1.74–1.63(m,1H),1.60(d,J＝7.3Hz,3H),1.57(d,J＝6.7Hz,3H),1.37–1.19(m,3H),1.15(t,J＝7.6Hz,3H),1.06(d,J＝6.8Hz,3H),1.01(d,J＝6.6Hz,3H),0.94–0.67(m,2H)。
LCMS(m/z)662.4[M+H],Tr 1.65min(运行3min)。
实施例110，化合物110
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化合物110
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室温下添加乙酸酐(2滴)到吡啶(3滴)中的反应物74(7.1mg,0.012mmol)的溶液中。21h后，用乙酸乙酯稀释混合物，用10％柠檬酸溶液(x1)和饱和的NaHCO3溶液(x1)洗涤。用乙酸乙酯(x1)提取含水级分后，合并两种有机级分，干燥(MgSO4)，并浓缩。残留物通过CombiFlash纯化，使用己烷-乙酸乙酯作为洗脱物，获得6.6mg(87％)产物化合物110。1H NMR(400MHz,甲醇-d4):δ8.23(d,J＝8.5Hz,1H),7.83(d,J＝8.4Hz,1H),7.78(s,1H),7.62(dd,J＝8.4,1.7Hz,1H),7.43(d,J＝8.5Hz,1H),6.61(d,J＝16.3Hz,1H),6.29(d,J＝16.3Hz,1H),5.80(q,J＝7.2Hz,1H),5.25(d,J＝8.5Hz,1H),5.07(q,J＝6.6Hz,1H),4.96(s,1H),4.41(dd,J＝13.5,4.3Hz,1H),3.57(dd,J＝11.8,2.9Hz,1H),2.68(td,J＝13.0,3.2Hz,1H),2.39–2.20(m,2H),2.20–2.09(m,1H),2.07(s,3H),2.05–1.75(m,6H),1.75–1.62(m,2H),1.60(d,J＝7.3Hz,3H),1.57(d,J＝6.7Hz,3H),1.06(d,J＝6.8Hz,3H),1.01(d,J＝6.6Hz,3H),0.98–0.69(m,2H)。
LCMS(m/z)648.5[M+H],Tr 1.54min(运行3min)。
实施例111，化合物111
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化合物111
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室温下添加丙酰氯(2滴)到吡啶(3滴)中的反应物75(7.1mg,0.012mmol)的溶液中。5min后，添加乙酸乙酯(～1mL)，并用超声处理使其成为悬浮液。20min后，用乙酸乙酯稀释混合物，用10％柠檬酸溶液(x1)和饱和的NaHCO3溶液(x1)洗涤。用乙酸乙酯(x1)提取含水级分后，合并两种有机级分，干燥(MgSO4)，并浓缩。残留物通过CombiFlash纯化，使用己烷-乙酸乙酯作为洗脱物，获得7.3mg(94％)产物化合物111。 1H NMR(400MHz,甲醇-d4):δ8.23(d,J＝8.5Hz,1H),7.82(d,J＝8.4Hz,1H),7.77(d,J＝1.7Hz,1H),7.61(dd,J＝8.5,1.7Hz,1H),7.43(d,J＝8.5Hz,1H),6.55(d,J＝16.4Hz, 1H),6.26(d,J＝16.4Hz,1H),5.80(q,J＝7.2Hz,1H),5.28(d,J＝8.6Hz,1H),5.06(q,J＝6.4Hz,1H),4.78(dt,J＝10.8,6.2Hz,1H),4.41(d,J＝13.3Hz,1H),3.58(dd,J＝11.7,3.1Hz,1H),2.68(td,J＝12.9,3.2Hz,1H),2.58(d,J＝14.1Hz,1H),2.42–2.11(m,4H),2.10–1.87(m,3H),1.80–1.63(m,3H),1.61(d,J＝7.2Hz,3H),1.57(d,J＝6.8Hz,3H),1.53–1.37(m,2H),1.17–1.06(m,6H),1.03(d,J＝6.6Hz,3H),0.96–0.69(m,2H)。
LCMS(m/z)662.5[M+H],Tr 1.66min(运行3min)。
实施例112.化合物112.
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化合物112
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室温下添加乙酸酐(2滴)到吡啶(3滴)中的反应物75(7.3mg,0.012mmol)的溶液中。18h后，用乙酸乙酯稀释混合物，用10％柠檬酸溶液(x1)和饱和的NaHCO3溶液(x1)洗涤。用乙酸乙酯(x1)提取含水级分后，合并两种有机级分，干燥(MgSO4)，并浓缩。残留物通过CombiFlash纯化，使用己烷-乙酸乙酯作为洗脱物，获得5.76mg(73％)产物化合物112。1H NMR(400MHz,甲醇-d4):δ8.23(d,J＝7.6Hz,1H),7.82(d,J＝8.5Hz,1H),7.76(s,1H),7.61(dd,J＝8.5,1.7Hz,1H),7.43(d,J＝8.5Hz,1H),6.55(d,J＝16.3Hz,1H),6.26(d,J＝16.3Hz,1H),5.80(q,J＝7.2Hz,1H),5.28(d,J＝8.6Hz,1H),5.06(m,1H),4.77(dt,J＝10.6,6.1Hz,1H),4.48–4.34(m,1H),3.64–3.51(m,1H),2.68(td,J＝13.0,3.3Hz,1H),2.58(d,J＝14.6Hz,1H),2.35(d,J＝12.8Hz,1H),2.29–2.21(m,1H),2.17(ddd,J＝13.0,7.9,6.4Hz,1H),2.02(s,3H),2.10–1.90(m,2H),1.80–1.63(m,3H),1.61(d,J＝7.2Hz,3H),1.57(d,J＝6.7Hz,3H),1.54–1.39(m,2H),1.07(d,J＝6.8Hz,3H),1.03(d,J＝6.6Hz,3H),0.89(m,2H)。
LCMS(m/z)648.4[M+H],Tr 1.53min(运行3min)。
实施例113.化合物113
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化合物113a 2,2-二甲基-5-乙烯基-[1,3]二恶烷-5-羧酸
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在氮气下，于5℃搅拌四氢呋喃(3mL)中的2,2-二甲基-5-乙烯基-[1,3]二恶烷-5-羧酸乙酯(150mg,0.7mmol)。添加水(1mL)中的氢氧化锂一水合物(59mg,1.4mmol)的溶液，将反应混合物在5℃下搅拌30min，然后室温下搅拌5h。添加甲醇(0.5mL)获得清澈溶液，将反应混合物在室温下搅拌22h。蒸发溶剂。添加水(2mL)到残留物中，用2M盐酸将溶液酸化到pH 2。添加盐水，用乙酸乙酯提取混合物。合并有机提取物，用盐水洗涤。分离有机提取物，用水(x5)和盐水洗涤。有机溶液通过疏水性筛板过滤，蒸发滤出液，获得作为无色油的标题化合物(117mg,90％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ1.44(s,3H),1.49(s,3H),3.91(d,J＝12.0Hz,2H),4.32(d,J＝12.0Hz,2H),5.30(d,J＝17.8Hz,1H),5.35(d,J＝10.7Hz,1H),5.76(dd,J＝17.8,10.7Hz,1H).LCMS(m/z)185.1[M-H],Tr＝1.26min。
化合物113.
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1,4-二恶烷(9mL)中的(S)-1-[(S)-2-((S)-2-羟基-3-甲基-丁酰氨基)-丙酰基]-六氢-哒嗪-3-羧酸[(R)-1-(7-溴-喹啉-2-基)-乙基]-酰胺(228mg,0.426mmol)、2,2-二甲基-5-乙烯基-[1,3]二恶烷-5-羧酸(79mg,0.426mmol)、三乙胺(178μL,1.28mmol)和三(o-甲苯基)膦(26mg,0.085mmol)的溶液用氮气净化10min，接着添加三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(39mg,0.042mmol)。将搅拌的反应混合物在60℃下加热1h。过滤混合物，并蒸发，产生橙色固体。将固体溶于二氯甲烷(8mL)中，并使用注射泵，4.25h将得到的溶液添加到含有 粉末状![]()
筛的二氯甲烷(156mL)中的2-甲基-6-硝基-苯甲酸酐(366mg,1.07mmol)和4-(二甲基氨基)吡啶(266mg,2.13mmol)的溶液中。添加结束后，将混合物搅拌30min，过滤，然后用含水碳酸氢钠溶液(75mL)洗涤，通过疏水性筛板过滤，蒸发，获得黄色凝胶。将黄色凝胶通过反相制备性HPLC进行纯化，用水/乙腈3:2洗脱，获得作为白色固体的113(53mg,20％)。1H NMR(300MHz,CD3OD)δ1.06(d,J＝6.7Hz,3H),1.11(d,J＝6.7Hz,3H),1.35(s,3H),1.55(s,3H),1.58-1.77(m,2H),1.60(d,J＝6.7Hz,3H),1.64(d,J＝7.4Hz,3H),1.90-2.00(m,1H),2.14-2.29(m,2H),2.65-2.80(m,1H),3.56-3.64(m,1H),4.03-4.16(m,2H),4.29-4.37(m,1H),4.39-4.51(m,2H),5.01-5.12(m,1H),5.38(d,J＝9.1Hz,1H),5.75-5.87(m,1H),6.17(d,J＝16.7Hz,1H),6.64(d,J＝16.7Hz,1H),7.46(d,J＝8.7Hz,1H),7.66-7.74(m,2H),7.84(d,J＝8.5Hz,1H),8.24(d,J＝8.5Hz,1H).LCMS(m/z)622.3[M+H],Tr＝2.38min。
实施例114,化合物114
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制备甲醇(1mL)中的化合物113(20mg,0.032mmol)的溶液，并添加盐酸(1M,3mL)。室温下搅拌反应混合物1h，然后通过添加饱和的碳酸氢钠溶液中和。添加氯化钠来饱和溶液。用二氯甲烷萃取水层，通过疏水性筛板过滤，蒸发，产生作为白色固体的114(14mg,75％)。1H NMR(300MHz,CD3OD)δ1.01(d,J＝6.7Hz,3H),1.04(d,J＝6.7Hz,3H),1.49-1.77(m,2H),1.60(d,J＝6.9Hz,3H),1.65(d,J＝7.4Hz,3H),1.84-1.96(m,1H),2.08-2.28(m,2H),2.64-2.77(m,1H),3.56-3.64(m,1H),3.93-4.16(m,4H),4.37-4.46(m,1H),5.06(q,J＝6.7Hz,1H),5.32(d,J＝9.1Hz,1H),5.81(q,J＝7.3Hz,1H),6.31(d,J＝16.7Hz,1H),6.63(d,J＝16.7Hz,1H),7.45(d,J＝8.5Hz,1H),7.65-7.74(m,2H),7.84(d,J＝8.5Hz,1H),8.24(d,J＝8.5Hz,1H).LCMS(m/z)582.5[M+H],Tr＝1.60min。
生物学实施例
肽酰-脯氨酰异构酶(PPIase)活性的抑制
PPIase试验是基于Janowski等(Anal.Biochem.1997，252，299)报道的程序。在装备有顶部搅拌器的石英比色皿中，将试验缓冲液(1980L的含有35mM HEPES pH 7.8， 50mM DTT和0.01％NP40的溶液)预先平衡至10℃。向该溶液中加入DMSO中的10L化合物(终浓度：0.5％DMSO)，接着加入5L的亲环蛋白A的2M储液(终浓度：5nM)。加入溶解于三氟乙醇中的0.5M LiCl溶液中的5L 40mM的四肽Succ-AAPF-pNA(100M终浓度)来启动反应。在反应启动时，使用Beckman Coulter DU800分光光度计在330nm处监控肽底物的吸光度五分钟。用单-指数衰减模型来拟合发展曲线，以计算速率。使用GraphPad Prism软件，用四-参数逻辑拟合计算了IC50值。
亲环蛋白A TR-FRET竞争性结合试验
使用竞争性结合试验，使用时间分辨共振能量转移(TR-FRET)读出器，测量了抑制剂功效。向由35mM HEPES pH 7.8、100mM NaCl、0.01％NP-40(Pierce)、1mM DTT和1％DMSO组成的反应缓冲液中加入以下物质：5nM在N-端用8×组氨酸亲和性标记物修饰的亲环蛋白A(CypA)；150nM用连接Cy5荧光团的连接物修饰的亲环蛋白A(CsA-Cy5)；1nM EU-标记的抗(6×His)抗体(Perkin-Elmer)；各种浓度之一的测试化合物。试验溶液的总体积为100L。两小时培养后，使用Perkin Elmer平板阅读器测量了TR-FRET(在340nm下激发，在590nm和665nm下测量发射)。将信号计算为665nm发射与590nm发射的比值。使用四参数逻辑拟合计算了IC50值。
测试时，发现本发明的特定化合物抑制亲环蛋白结合，如以下表1中所示。将IC50’s(TR-FRET)呈现为范围，其中A≤100nM，B是101至1000nM，而C是1001至10,000nM。
抗病毒活性
可以使用标准筛选实验方案来测量化合物的抗病毒活性：例如，基于细胞的黄病毒免疫检测试验和基于细胞的黄病毒细胞病变作用试验，如美国专利公开号US/20130022573中所述的，通过引用将其全部内容并入。
本发明的一个方面涉及抑制病毒感染的方法，包括用本发明的组合物治疗怀疑需要这样的抑制的样品或患者的步骤。可以使用已知的标准筛选实验方案来测量本发明的化合物的抗病毒活性。
在带有HCV复制子的人肝细胞瘤Huh-7细胞系中测试本发明的化合物的抗-HCV活性。该试验包括以下步骤：
步骤1(化合物制备和连续稀释)：在384-孔平板中的100％DMSO中进行了连续稀释。在100％DMSO中制备了含有起始最终连续稀释浓度的225倍浓度的化合物的溶液，并将15μL添加到聚丙烯384-孔平板的第3或13栏的预先指定的孔中。将剩余的384-孔平板装满10μL 100％DMSO，除了第23和24栏，其中加入100％DMSO中的10μL 500uM HCV蛋白酶抑制剂(ITMN-191)。将HCV蛋白酶抑制剂用作HCV复制100％抑制的对照。然后将平板置于Biomek FX工作台上来启动连续稀释。从第3至12栏，或从第13至22栏，将连续稀释进行了10个3-倍稀释的循环。
步骤2(细胞培养平板制备和化合物添加)：向黑色聚丙烯384-孔平板的每个孔中，用Biotek uFlow工作台加入90μL含有1600个悬浮的Huh-7HCV复制子细胞的细胞培养基。在Biomek FX工作台上将0.4μL体积的化合物溶液从连续稀释平板转移至细胞培养平板中。最终试验条件中的DMSO浓度为0.44％。将平板在37℃、5％CO2和85％湿度下培养3天。
步骤3(细胞毒性的检测和病毒复制的抑制)：a)细胞毒性的测定：用Biotek EL405平板-洗涤器吸出384-孔细胞培养平板中的培养基。用Biotek uFlow工作台将50μL体积的在100％PBS中含有400nM Calcein AM的溶液加入平板的每个孔中。将平板在室温下培养30分钟，然后用Perkin Elmer Envision平板阅读器测量荧光信号(发射490nm，激发520nm)。
b)病毒复制抑制的测定：用Biotek EL405平板-洗涤器吸出384-孔细胞培养平板中的钙黄绿素-PBS溶液。用Biotek uFlow工作台将20μL体积的Dual-Glo荧光素酶缓冲液(Promega，Dual-Glo荧光素酶试验试剂，cat.#E298B)加入平板的每个孔中。将平板在室温下培养10分钟。然后用Biotek uFlow工作台将20μL体积的含有1:100Dual-Glo Stop&Glo底物(Promega，Dual-Glo荧光素酶试验试剂，cat.#E313B)和Dual-Glo Stop&Glo缓冲液(Promega，Dual-Glo荧光素酶试验试剂，cat.#E314B)混合物的溶液加入平板的每个孔中。将平板在室温下培养10分钟，接着用Perkin Elmer Envision平板阅读器测量发光信号。
步骤4(计算)：通过钙黄绿素AM转化成荧光产物来测定百分比细胞毒性。将来自DMSO对照孔的平均荧光信号限定为100％无毒。将来自测试化合物处理的孔的单独荧光信号除以来自DMSO对照孔的平均信号，然后乘以100％，来获得百分比生活力。通过将来自测试孔的发光信号与DMSO对照孔的相比来测定百分比抗-HCV复制活性。通过来自HCV蛋白酶抑制剂处理的孔的平均发光信号来测定背景信号，并从来自测试孔以及DMSO对照孔的信号中减去。3-倍连续稀释后，通过将每个浓度的％抑制与以下等式拟合来计算EC50和CC50值：
％抑制＝100％/[(EC50/[I])b+1]
其中b是Hill’s系数。用于参考，参见Hill,A.V.，血红蛋白分子的聚集对其解离曲线的可能影响(The Possible Effects of the Aggregation of the Molecules of ![]()
on its Dissociation Curves)，J.Physiol.40:iv-vii.(1910)。还可以从以上的公式产生特定浓度，例如2M，下的％抑制值。
测试时，发现本发明的特定化合物能抑制病毒复制，如表1中所列。A≤1M，B是1.1到10M，而且C是10.1到100M。
测试时，发现本发明的特定化合物能抑制病毒复制，如表1中所列。EC50’s表示为对1b复制子的％抑制。
表1
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所观察到的特定药理学和生物化学应答可以根据以下因素而改变并取决于以下因素：选定的特定活性化合物或是否存在药物载体，以及制剂类型和所用的给药方式，并且根据本发明的时间考虑了这些预期的结果中的变化或差异。
虽然本文解释并详细描述了本发明的特定实施方案，但是本发明不局限于此。提供以上详细的描述作为本发明的示例，并且不应当解释为构成本发明的任何限定。