用于治疗由细胞活素引起的疾 病的苯甲酰胺衍生物 本发明涉及用作细胞活素引起的疾病的抑制剂的酰胺衍生物。本发明还涉及制备本发明酰胺衍生物的方法、含有该酰胺衍生物的药物组合物及其在通过抑制细胞活素引起的疾病的治疗方法中的应用。
本发明公开的酰胺衍生物为产生细胞活素的抑制剂，所述细胞活素如肿瘤坏死因子(下文称TNF)，如TNFα，以及各种白介素(下文称IL)科，如IL-1、IL-6和IL-8。因此，本发明化合物将用于治疗其中发生生成过多细胞活素(如生成过多TNFα或IL-1)的疾病。众所周知，细胞活素是由多种细胞(如单细胞和巨噬细胞)产生的，它们能够导致许多生理学作用，这些生理学作用被认为在疾病(如炎症和免疫调节)中非常重要。例如，TNFα和IL-1已经在细胞信号级联中受到影响，这被认为促成了病态的病理，所述病态如炎症和过敏症及由细胞活素引起的毒性。人们还知道，在某些细胞系中，TNFα地生成领先于或引起了其它细胞活素(如IL-1)的生成。
例如，通过刺激T-辅助细胞、活化导致钙再吸收的破骨细胞的活性、刺激蛋白聚糖从软骨中释放、刺激细胞增殖和促进血管生成素生成，在如生理活性类花生四烯酸(如前列腺素和白细胞三烯)的生成、蛋白水解酶(如胶原酶)释放的刺激、免疫系统的活化中也可影响细胞活素的非正常水平。
细胞活素也被认为影响着疾病的产生和发展，所述疾病例如炎症和过敏症，如关节炎症(特别是类风湿关节炎、骨关节炎和痛风)、胃肠道炎症(特别是肠炎、溃疡性大肠炎、节段性回肠炎和胃粘膜炎)、皮肤病(特别是牛皮癣、湿疹和皮肤炎)和呼吸道疾病(特别是哮喘、支气管炎、过敏性鼻炎和成年呼吸窘迫综合症)；以及影响各种心血管和脑血管疾病的产生和发展，这类疾病如充血性心衰竭、心肌梗塞、动脉粥样硬化斑块形成、高血压、血小板聚集、心绞痛、中风、再灌注受伤、血管受伤(包括再狭窄和末梢血管疾病)，以及各种骨代谢疾病，如骨质疏松症(包括老年性骨质疏松症和绝经后骨质疏松症)、变形性骨炎、骨转移、高钙血、甲状腺机能亢进、骨硬化、骨膜炎和牙周炎，还有可伴随类风温性关节炎和骨关节炎的骨代谢异常变化。过量细胞活素生成也可导致一些细菌、真菌和/或病毒感染的并发症，如内毒素休克、脓毒性休克和毒性休克综合症，以及导致一些CNS外科手术或受伤的并发症，如神经外伤和充血性休克。过量细胞活素产生还可导致或加剧疾病的发展，所述疾病包括软骨组织或肌肉再吸收、肺纤维变性、硬化、肾纤维变性、在某些慢性疾病中存在的恶变质(如恶性疾病和后天性免疫缺乏综合症(AIDS))、肿瘤侵袭和肿瘤转移及多发性硬化症。
通过TNFα抗体的临床研究，可提供TNFα在导致类风湿关节炎的细胞信号级联中所起主要作用的证据(The Lancet，1994，344，1125 and British Journal of Reheumatology，1995，34，334)。
由此，细胞活素(如TNFα和IL-1)被认为是许多疾病和重要介体。所以人们期望抑制这些细胞活素的生成和/或作用可有利于预防、控制或治疗这类疾病。
在不希望仅仅由于对单个生物过程的作用而暗示本发明公开的化合物具有药理活性的条件下，人们通过化合物可抑制酶p38激酶，从而相信该化合物可抑制细胞活素的作用。p38激酶(也被公知为细胞活素抑制结合蛋白(下文称为CSBP)和再活化激酶(下文称为RK))是酶的促细胞分裂剂活化蛋白(下文称为MAP)激酶科；人们公知它是由生理压力活化，所述生理压力由电离辐射、细胞毒素试剂和毒素(例如内毒素，如细菌脂多糖)引起，以及通过许多试剂引起，所述试剂包括细胞活素，如TNFα和IL-1。人们已知，p38激酶可使一些胞内蛋白质磷酸化，该蛋白质包含在酶解步骤的级联中，能够导致细胞活素(如TNFα和IL-1)的生物合成和排泄。p38激酶的已知吲唑基综述在G.J.Hanson in Expert Opinions on Therapeutic Patents，1997，7，729-733中。p38激酶公知以p38α和p38β异构重整形式存在。
本发明公开的化合物是产生细胞活素(如TNF，特别是TNFα)和各种白介素(特别是IL-1)的抑制剂。
人们从J.Med.Chem.，1996，39，3343-3356可以知道，一些苯甲酰胺衍生物可以升调节人体肝细胞中低密度脂蛋白(LDL)受体的表达。公开的化合物包括一些N-(2-甲氧基苯基)-和N-(2-卤代苯基)-苯甲酰胺衍生物。
J.Chem.Res.Synop.，1988，182-183，886-896(化学文摘，第129卷，摘要67538)公开了化合物N-(5-苯甲酰氨基-2-氯苯基)苯甲酰胺。
一方面，本发明提供了式I化合物或其可药用盐或体内可分解酯，
式I
其中：
R1和R2可相同或不同，选自羟基、C1-6烷氧基、巯基、C1-6烷硫基、氨基、C1-6烷氨基、二-(C1-6烷基)氨基、羧基、C1-6烷氧基羰基、氨基甲酰基、C1-6烷基氨基甲酰基、二-C1-6烷基氨基甲酰基、C1-6烷基亚硫酰基、C1-6烷基磺酰基、芳基亚硫酰基、芳基磺酰基、C1-6烷氨基磺酰基、二-(C1-6烷基)氨基磺酰基、硝基、氰基、氰基C1-6烷基、氰基C1-6烷基、氨基C1-6烷基、C1-6烷酰氨基、C1-6烷氧基羰基氨基、C1-6烷酰基、C1-6烷酰氧基、C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6烷炔基、卤素、三氟甲基、芳基、芳基C1-6烷基、芳基C1-6烷氧基、杂芳基、杂芳基C1-6烷基、杂环基和杂环基C1-6烷基；
m和p独立地为0-3，且当m和/或p为2或3时，R1和R2相同或不同；
R3为卤素、氰基或C1-6烷氧基；
q为0-4；以及
R4为芳基或环烷基，其中R4可任意地被至多3个取代基取代，所述取代基为各个R1基团定义的任何基团；
条件是：不包括
N-[5-(3-环己基丙酰氨基)-2-甲氧基苯基]-4-乙酰基苯甲酰胺，
N-[2-溴-5-(3-环己基丙酰氨基)苯基]-4-羟基苯甲酰胺，
N-[2-氯-5-(3-环己基丙酰氨基)苯基]-4-乙酰基苯甲酰胺，
N-[2-氯-5-(3-环己基丙酰氨基)苯基]-4-羟基苯甲酰胺，
N-[2-氟-5-(3-环己基丙酰氨基)苯基]-4-羟基苯甲酰胺，和
N-(5-苯甲酰氨基-2-氯苯基)苯甲酰胺。
术语如“芳基”、“芳基C1-6烷基”、“芳基硫基”、“芳基亚硫酰基”、“芳基磺酰基”和“芳基C1-6烷氧基”中的“芳基”典型地为苯基或萘基，优选苯基。术语“杂芳基”和“杂芳基C1-6烷基”中的“杂芳基”是指含有至多五个选自氮、氧和硫的环杂原子的芳族单-或双环5至10元环。“杂芳基”的实例包括噻吩基、吡咯基、呋喃基、咪唑基、噁唑基、噻唑基、吡唑基、异噁唑基、异噻唑基、哌嗪基、哒嗪基、嘧啶基、吡啶基、吲哚基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、喹啉基、异喹啉基、喹唑啉基、喹喔啉基和噌啉基。“杂环基”和“杂环基C1-6烷基”的“杂环基”是指含有至多五个选自氮、氧和硫的环杂原子的非芳族单-或双环5至10元环。“杂环基”的实例包括吡咯啉基、吡咯烷基、吗啉基、哌啶基、高哌啶基、哌嗪基、高哌嗪基、二氢吡啶基和二氢嘧啶基。“环烷基”是指非芳族单-或双环5-10元碳环。“环烷基”的实例包括环戊基、环己基、环庚基、二环[2.2.1]庚基和二环[4.4.0]癸基。
其它典型的-般性基团包括：C1-6烷氧基，如甲氧基和乙氧基；C1-6烷硫基，如甲硫基和乙硫基；C1-6烷氨基，如甲氨基和乙氨基；二-(C1-6烷基)氨基，如二甲氨基；C1-6烷氧基羰基，如甲氧基羰基和乙氧基羰基；C1-6烷基氨基甲酰基，如甲基氨基甲酰基；二-C1-6烷基氨基甲酰基，如二甲基氨基甲酰基；C1-6烷基亚硫酰基，如甲基亚硫酰基；C1-6烷基磺酰基，如甲基磺酰基；C1-6烷氨基磺酰基，如甲氨基磺酰基；二-(C1-6烷基)氨基磺酰基，如二甲氨基磺酰基；氰基C1-6烷基，如氰基甲基；羟基C1-6烷基，如羟甲基；氨基C1-6烷基，如氨基甲基；C1-6烷酰基氨基，如甲酰氨基和乙酰氨基；C1-6烷氧基羰基氨基，如甲氧基羰基氨基；C1-6烷酰基，如甲酰基和乙酰基；C1-6烷酰氧基，如乙酰氧基；C1-6烷基，如甲基、乙基、异丙基和叔丁基；C2-6链烯基，如乙烯基和烯丙基；C2-6炔基，如乙炔基和2-丙炔基；卤素，如氟、氯和溴；芳基C1-6烷基，如苄基；芳基C1-6烷氧基，如苄氧基。
R1或R2中的任何环或R4上的取代基中的任何环可任意地带有至多3个取代基。适当的取代基包括：羟基、C1-6烷氧基、巯基、C1-6烷硫基、氨基、C1-6烷氨基、二-(C1-6烷基)氨基、羧基、氨基甲酰基、C1-6烷基氨基甲酰基、二-C1-6烷基氨基甲酰基、C1-6烷基亚硫酰基、C1-6烷基磺酰基、芳基亚硫酰基、芳基磺酰基、C1-6烷氨基磺酰基、二-(C1-6烷基)氨基磺酰基、硝基、氰基、氰基C1-6烷基、羟基C1-6烷基、氨基C1-6烷基、C1-6烷酰基氨基、C1-6烷氧基羰基氨基、C1-6烷酰基、C1-6烷酰氧基、C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基、卤素和三氟甲基。
在本说明书中，一般性术语“烷基”包括直链和支链烷基。但对单独的烷基(如丙基)仅特指直链基团，而对单独的支链烷基仅特指支链基团。类似的规则可应用于其它一般性基团。
人们应当理解，上文定义的式I化合物可以以含有一个或多个非对称碳原子的旋光活性或外消旋形式存在，在其定义中，本发明包括具有抑制细胞活素(特别是TNF)性能的旋光活性或外消旋形式。旋光活性形式的化合物的合成可通过本领域公知的有机化学标准方法进行，例如由旋光活性起始原料合成或通过拆分外消旋形式合成。类似地，通过利用下文所述的标准实验室方法，可以评估对TNF的抑制性能。
优选地，R1为羟基、C1-6烷氧基、氨基、C1-6烷氨基、二-(C1-6烷基)氨基、羧基、C1-6烷氧基羰基、氨基甲酰基、C1-6烷基氨基甲酰基、氰基、C1-6烷酰氨基、C1-6烷酰基、C1-6烷酰氧基、C1-6烷基、卤素、三氟甲基或杂环基。进一步优选地，R1为氨基C1-6烷基。
更优选地，R1为羟基、C1-6烷氧基、氰基、卤素、吗啉代或4-甲基哌嗪-1-基。
优选地，m为1或2。
方便地，p为1且R2为C1-6烷氧基、羧基、C1-6烷氧基羰基、C1-6烷基或卤素。
优选地，p为0。
优选地，R3为卤素。
优选地，q为0、1或2。更优选地q为0。
优选地，R4为苯基、环己基或环戊基。
更优选地，R4为苯基。
R4上的优选取代基为羟基、C1-6烷氧基、氨基、C1-6烷氨基、二-(C1-6烷基)氨基、羧基、C1-6烷氧基羰基、硝基、氰基、C1-6烷酰氨基、C1-6烷酰基、C1-6烷酰氧基、C1-6烷基、卤素、三氟甲基、苯基、苯基C1-6烷氧基和杂环基。
进一步优选地，R4上的取代基选自羟基、氰基、二甲氨基、甲氧基、乙氧基、氟、氯和吗啉代。
本发明特别新的化合物包括如式I酰胺衍生物或其可药用盐，不包括上文定义的不包括的化合物，其中：
(a)R1为羟基、C1-6烷氧基、氨基、C1-6烷氨基、二-(C1-6烷基)氨基、羧基、C1-6烷氧基羰基、硝基、氰基、氰基C1-6烷基、羟基C1-6烷基、氨基C1-6烷基、C1-6烷酰基氨基、C1-6烷氧基羰基氨基、C1-6烷酰基、C1-6烷酰氧基、C1-6烷基、卤素或三氟甲基；以及m为1或2；R2、R3、R4、p和q具有上文定义的任何含义或具有涉及本发明特别新的化合物部分的任何含义；
(b)R1为含有1或2个选自氮、氧和硫的杂原子的非芳族饱和5-或6-元杂环；以及m为1或2；R2、R3、R4、p和q具有上文定义的任何含义或具有涉及本发明特别新的化合物部分的任何含义；
(c)R1为选自吡咯烷基、吗啉基、哌啶基、哌嗪基和4-(C1-6烷基)哌嗪基；以及m为1或2；R2、R3、R4、p和q具有上文定义的任何含义或具有涉及本发明特别新的化合物部分的任何含义；
(d)R2为羟基、C1-6烷氧基、氨基、C1-6烷氨基、二-(C1-6烷基)氨基、羧基、C1-6烷氧基羰基、硝基、氰基、C1-6烷基、卤素或三氟甲基；以及p为1；R1、R3、R4、m和q具有上文定义的任何含义或具有涉及本发明特别新的化合物部分的任何含义；
(e)p为0；R1、R3、R4、m和q具有上文定义的任何含义或具有涉及本发明特别新的化合物部分的任何含义；
(f)R3为卤素；以及R1、R2、R4、m、p和q具有上文定义的任何含义或具有涉及本发明特别新的化合物部分的任何含义；
(g)q为1、2、3或4；R4为环烷基；以及R1、R2、R3、m和p具有上文定义的任何含义或具有涉及本发明特别新的化合物部分的任何含义；
(h)q为1；R4为苯基，所述苯基可任意地被选自下列的至多3个取代基取代：羟基、C1-6烷氧基、氨基、C1-6烷氨基、二-(C1-6烷基)氨基、羧基、C1-6烷氧基羰基、硝基、氰基、C1-6烷氧基羰基氨基、C1-6烷酰基、C1-6烷酰氧基、C1-6烷基、卤素、三氟甲基、苯基、苄基或苄氧基；以及R1、R2、R3、m和p具有上文定义的任何含义或具有涉及本发明特别新的化合物部分的任何含义；
(i)q为0；R4为苯基，所述苯基被选自下列的1或2个取代基取代：杂芳基、杂芳基C1-6烷基、杂环基或杂环基C1-6烷基；以及R1、R2、R3、m和p具有上文定义的任何含义或具有涉及本发明特别新的化合物部分的任何含义；
(j)q为0；R4为苯基，所述苯基被含具有选自氮、氧和硫的1或2个杂原子的非芳族饱和5-或6-元杂环的1或2个杂环基团取代；以及R1、R2、R3、m和p具有上文定义的任何含义或具有涉及本发明特别新的化合物部分的任何含义；以及
(k)q为0；R4为苯基，所述苯基被选自吡咯烷基、吗啉基、哌啶基、哌嗪基和4-(C1-6烷基)哌嗪基的1或2个杂环基团取代；以及R1、R2、R3、m和p具有上文定义的任何含义或具有涉及本发明特别新的化合物部分的任何含义。
本发明优选的化合物为式I酰胺衍生物或其可药用盐，其中R1为羟基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、氨基、甲氨基、乙氨基、二甲氨基、二乙氨基、羧基、甲氧基羰基、乙氧基羰基、叔丁氧基羰基、氰基、乙酰氨基、乙酰基、乙酰氧基、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、叔丁基、氟、氯、三氟甲基、吡咯烷-1-基、吗啉代、哌啶子基、哌嗪-1-基或4-甲基哌嗪-1-基；
m为1或2；
p为0；
R3为氟、氯或溴；
q为1、2或3；以及
R4为环己基或环庚基。
本发明进一步优选的化合物为式I酰胺衍生物或其可药用盐，其中R1为羟基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、氨基、甲氨基、乙氨基、二甲氨基、二乙氨基、羧基、甲氧基羰基、乙氧基羰基、叔丁氧基羰基、氰基、乙酰氨基、乙酰基、乙酰氧基、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、叔丁基、氟、氯、三氟甲基、吡咯烷-1-基、吗啉代、哌啶子基、哌嗪-1-基或4-甲基哌嗪-1-基；
m为1或2；
p为0；
R3为氟、氯或溴；
q为0；以及
R4为苯基，所述苯基被选自下列的1或2个取代基取代：羟基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、氨基、甲氨基、乙氨基、丙氨基、二甲氨基、二乙氨基、羧基、甲氧基羰基、乙氧基羰基、硝基、氰基、乙酰氨基、乙酰基、乙酰氧基、甲基、乙基、氟、氯、溴、三氟甲基、苯基、苄氧基、吡咯烷-1-基、吗啉代、哌啶子基、哌嗪-1-基或4-甲基哌嗪-1-基。
本发明进一步优选的化合物为式I酰胺衍生物或其可药用盐，其中R1为羟基、甲氧基、乙氧基、氰基、氟、氯、吗啉代或4-甲基哌嗪-1-基；
m为1或2；
p为0；
R3为氟、氯或溴；
q为0；以及
R4为苯基，所述苯基被选自下列的1或2个取代基取代：羟基、甲氧基、二甲氨基、甲氧基羰基、氰基、氟、氯和吗啉代。
本发明进一步优选的化合物为式I酰胺衍生物或其可药用盐，其中R1为羟基、甲氧基、乙氧基、氨基、氰基、乙酰氧基、氟、氯、吗啉代或4-甲基哌嗪-1-基；
m为1或2；
p为0；
R3为氟、氯或溴；
q为0；以及
R4为苯基，所述苯基被选自下列的1或2个取代基取代：羟基、甲氧基、氨基、二甲氨基、甲氧基羰基、硝基、氰基、氟、氯和吗啉代。
本发明特别优选的化合物为下列化合物或其可药用盐：
N-[2-氯-5-(3-氰基苯甲酰氨基)苯基]-3，4-二甲氧基苯甲酰胺，
N-[2-氯-5-(3-二甲氨基苯甲酰氨基)苯基]-3，4-二甲氧基苯甲酰胺，
N-[2-氯-5-(4-氰基苯甲酰氨基)苯基]-3，4-二甲氧基苯甲酰胺，和
N-[2-氯-5-(4-氰基苯甲酰氨基)苯基]-3-(4-甲基哌嗪-1-基)苯甲酰胺。
本发明特别优选的化合物包括下列化合物或其可药用盐：
N-(5-苯甲酰氨基-2-氯苯基)-3，4-二甲氧基苯甲酰胺，
N-[2-氯-5-(3-吗啉代苯甲酰氨基)苯基]-3，4-二甲氧基苯甲酰胺，
N-[5-(4-乙酰氧基苯甲酰氨基)-2-氯苯基]-4-氰基苯甲酰胺，
N-(5-苯甲酰氨基-2-氯苯基)-2-氨基-4-甲氧基苯甲酰胺，和
N-[2-氯-5-(3-吗啉代苯甲酰氨基)苯基]-4-氰基苯甲酰胺。
式I化合物的适宜可药用盐为如具有足够碱性的式I化合物酸加成盐，例如与有机酸或无机酸(如盐酸、氢溴酸、硫酸、三氟乙酸、柠檬酸或马来酸)形成的酸加成盐；或具有足够酸性的式I化合物的盐，例如碱金属或碱土金属盐(如钙或镁盐)或铵盐或与有机碱(如甲胺、二甲胺、三甲胺、哌啶、吗啉或三-(2-羟乙基)胺)形成的盐。
各种前药形式是本领域公知的。这类前药衍生物可参见：
a)Design of Prodrugs，edited by H.Bundgaard，(Elsevier，1985)and Method in Enzymology，Vol.42，p.309-396，edited byK.widder，et al.(Academic Press，1985)；
b)A Textbook of Design and Development，edited byKrogsgaard-Larsen and H.Bundgaard，Chapter 5“Design andApplication of Produgs”，by H.Bundgaard，p.113-191(1991)；
c)H.Bundgaard，Advanced Drug Delivery Reviews，8，1-38(1992)；
d)H.Bundgaard，et al.，Journal of PharmaceuticalSciences，77，285(1998)；以及
e)N.Kakeya，et al.，Chem.Pharm.Bull.，32，692(1984)。
这类实例性前药可用于形成式I化合物的体内可分解酯。含羧基的式I化合物的体内可裂解酯为如在人或动物体中裂解生成母酸的可药用酯。适宜的含羧基的可药用酯包括C1-6烷氧基甲基酯(如甲氧基甲基酯)、C1-6烷酰氧基甲基酯(如戊酰氧基甲基酯)、2-苯并[c]呋喃酮基酯、C3-8烷环烷氧基羰基氧基C1-6烷基基酯(如1-环己基羰基氧基乙基酯)、1，3-二氧戊环-2-基甲基酯(如5-甲基-1，3-二氧戊环-2-基甲基酯)和C1-6烷氧基羰基氧基乙基酯(如1-甲氧基羰基乙基酯)，该可药用酯可在式I化合物的任何羧基上生成。
为了将式I化合物或其可药用盐或体内可分解酯用于治疗性处理(包括预防处理)哺乳动物(包括人)，通常需要根据标准药物方法，将药物组合物制成制剂。
根据本发明这一方面，本发明提供了一种药物组合物，该药物组合物包含上文定义的式I酰胺衍生物或其可药用盐或可体内分解酯以及可药用稀释剂或载体。
本发明组合物可以是适于经口使用的剂型(如片剂，锭剂，硬或软胶囊，水合或油悬浮液、乳液，可分散粉剂或颗粒剂，糖浆或酏剂)、适于局部使用的剂型(如膏剂，油剂，凝胶，或水或油溶液或悬浮液)、适于吸入给药的剂型(如细磨粉末或液体气雾剂)、适于吹入给药的剂型(如细磨粉末)或适于非肠道给药的剂型(如无菌水或油溶液，适于静内、皮下、肌内给药；或栓剂，适于直肠给药)。
本发明组合物可利用本领域公知的常规药物赋形剂，通过常规的方法制备。由此，用于经口使用的组合物可包含如一种或多种着色剂、甜味剂、矫味剂和/或防腐剂。
例如，适用于片剂剂型的适宜可药用赋形剂包括惰性稀释剂，如乳糖、碳酸钠、磷酸钙或碳酸钙；成粒剂和崩解剂，如玉米淀粉或藻酸；结合剂，如淀粉；润滑剂，如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石；保存剂，如对羟基苯甲酸乙酯或丙酯；以及抗氧化剂，如抗坏血酸。片剂剂型可以不包衣，或者可以利用常规的包衣剂和本领域公知的方法进行包衣，从而改进活性成分在胃肠道中的分解和吸收，改善其稳定性和/或外观。
经口使用的组合物可以以硬明胶形式存在，其中活性成分与惰性固体稀释剂混合，所述固体稀释剂如碳酸钙、磷酸钙或高岭土，或者以软明胶形式存在，其中活性成分与水或油(如花生油、液体石蜡或橄榄油)混合。
水悬浮液一般包含以细粉形式存在的活性成分和一种或多种悬浮剂及分散剂或湿润剂，所述悬浮剂如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、藻酸钠、聚乙烯基吡咯烷酮、黄蓍胶和阿拉伯树胶；所述分散剂或湿润剂如卵磷脂或烯化氧与脂肪酸的缩合产物(如聚氧乙烯硬脂酸酯)，或环氧乙烷与长链脂肪醇的缩合产物(如十七氧乙烯鲸蜡醇)，或环氧乙烷与由脂肪酸和己糖醇衍生的偏酯的缩合产物(如聚氧乙烯山梨糖醇单油酸酯)，或环氧乙烷与由脂肪酸和己糖醇酸酐衍生的偏酯的缩合产物(如聚乙烯山梨糖醇单油酸酯)。水悬浮液也可含义一种或多种保存剂(如对羟基苯甲酸乙酯或丙酯)、抗氧化剂(如抗坏血酸)、着色剂、矫味剂和/或甜味剂(如蔗糖、糖精或天冬甜素)。
油悬浮液可通过将活性成分悬浮在植物油(如花生油、橄榄油、芝麻油或椰子油)或矿物油(如液体石蜡)中而制成。油悬浮液也可包含增稠剂，如蜂蜡、固体石蜡或鲸蜡醇。也可加入如上所述的甜味剂和矫味剂，提供可口的口服制剂。这些组合物可通过加入抗氧化剂(如抗坏血酸)保存。
适用于通过添加水而制备水悬浮液的分散粉末和颗粒一般含有活性成分及分散剂或湿润剂、悬浮剂和一种或多种保存剂。适宜的分散剂或湿润剂及悬浮剂的实例已在上文提到过。也可存在另外的赋形剂，如甜味剂、矫味剂和着色剂。
本发明药物组合物也可以以水包油乳液形式存在。油相可以是植物油(如橄榄油或花生油)或矿物油(如液体石蜡)及其混合物。适宜的乳化剂可以是天然树胶，如阿拉伯树胶或黄蓍胶，天然磷脂，如大豆、卵磷脂、由脂肪酸和己糖醇酸酐衍生的酯或偏酯(如失水山梨醇单油酸酯)和所述偏酯与环氧乙烷的缩合产物(如聚氧乙烯失水山梨醇单油酸酯)。乳液也可包含甜味剂、矫味剂和保存剂。
糖浆和酏剂可利用甜味剂(如甘油、丙二醇、山梨糖醇、天冬甜素或蔗糖)制成，也可包含润滑剂、保存剂、矫味剂和/或着色剂。
药物组合物也可以以无菌注射水或油悬浮液形式存在，可利用上文所述的一种或多种适当的分散剂或湿润剂及悬浮剂，通过公知的方法制成。无菌注射制剂也可以是于无毒且可用于非肠道给药的稀释剂或溶剂中无菌注射溶液或悬浮液(如于1，3-丁二醇中的溶液)。
栓剂制剂可通过将活性成分与适当的非刺激性赋形剂混合制得，所述非刺激性赋形剂在常温下为固体，而在直肠温度下为液体，因而可在直肠道中熔化而释放药物。适宜的赋形剂包括如可可脂和聚乙二醇。
局部制剂(如膏剂、油剂、胶剂或油溶液或乳液)一般可通过本领域公知的常规方法，将活性成分与常规的可局部给药的载体或稀释剂混合制得。
适于吹入给药的组合物可以以细分的粉末形式存在，所述细分粉末包含平均直径为小于等于30μm的颗粒，该粉末本身可仅包含活性成分，或者还包含稀释剂及一种或多种可药用载体(如乳糖)。适于吹入给药的粉末可方便地包含在胶囊中，该胶囊包含如1至50mg活性成分和涡轮吸入器装置，如用于吹入公知试剂色甘酸钠的装置。
适于吸入给药的组合物可以以安排成可分散活性成分的常规压缩气溶胶形式存在，其中所述活性成分被分散成包含细分固体的气溶胶或液滴。可使用常规的气溶胶推进剂，如挥发性烃或氟化烃，气溶胶装置可方便地安排成可分散计量活性成分。
对于制剂的进一步信息，读者可参见Comprehensive MedicinalChemistry(Crowin Hansch；Chairman of Editorial Board，；Pergamon Press 1990)第5卷第25.2章。
与一种或多种赋形剂结合生成单个剂量形式的活性成分的量可有必要地根据受治疗主体及特殊给药路线而变化。例如，治疗人的经口给药的制剂一般可包含如：与适量赋形剂结合的0.5g至0.5g活性剂，所述赋形剂含量可在组合物总重量大约5至大约98％之间变化。剂量单元制剂一般包含大约1mg至大约500mg活性成分。对于进一步的给药路线和剂量规则，读者可参见Comprehensive MedicinalChemistry(Crowin Hansch；Chairman of Editorial Board，；Pergamon Press 1990)第5卷第25.3章。
根据公知的医学原理，本发明式I化合物用于治疗或预防目的的剂量大小实质上取决于疾病的性质和严重程度、动物或患者的年龄和性别以及给药路线。
在将式I化合物用于治疗或预防目的时，给药的日剂量范围一般为0.5mg至75mg/kg体重，可分次服用。一般地，如果采用非肠道给药路线，则可服用低剂量。由此例如，对于静内给药，一般使用的剂量范围为0.5mg至30mg/kg体重。类似地，对于吸入给药，所使用的剂量范围为0.5mg至25mg/kg体重。但优选经口给药，特别是以片剂形式给药。典型地，单位剂型含有大约1mg至500mg本发明化合物。
另一方面，本发明提供了将上文定义的式I酰胺衍生物或其可药用盐或体内可分解酯用于通过治疗处理人体或动物体的方法。
另一方面，本发明提供了上文定义的式I酰胺衍生物或其可药用盐或体内可分解酯(不包括本发明化合物定义中那些公知的任何化合物)用于制备药物的用途，所述药物用于治疗由细胞活素引起的医学疾病。
另一方面，本发明提供了治疗由细胞活素引起的医学疾病的方法，该方法包括对热血动物服用有效剂量的式I化合物或其可药用盐或体内可分解酯。
另一方面，本发明提供了式I化合物或其可药用盐或体内可分解酯用于制备药物的用途，所述药物用于治疗由TNF、IL-1、IL-6或IL-8引起的疾病。
另一方面，本发明提供了治疗由TNF、IL-1、IL-6或IL-8引起的疾病的方法，该方法包括对热血动物服用有效剂量的式I化合物或其可药用盐或体内可分解酯。
另一方面，本发明提供了式I化合物或其可药用盐或体内可分解酯用于制备药物的用途，所述药物用于治疗由TNF引起的疾病。
另一方面，本发明提供了治疗由TNF引起的疾病的方法，该方法包括对热血动物服用有效剂量的式I化合物或其可药用盐或体内可分解酯。
另一方面，本发明提供了式I化合物或其可药用盐或体内可分解酯用于制备药物的用途，所述药物用于抑制TNF、IL-1、IL-6或IL-8。
另一方面，本发明提供了抑制TNF、IL-1、IL-6或IL-8的方法，该方法包括对热血动物服用有效剂量的式I化合物或其可药用盐或体内可分解酯。
另一方面，本发明提供了式I化合物或其可药用盐或体内可分解酯用于制备药物的用途，所述药物用于抑制TNF。
另一方面，本发明提供了却制TNF的方法，该方法包括对热血动物服用有效剂量的式I化合物或其可药用盐或体内可分解酯。
另一方面，本发明提供了式I化合物或其可药用盐或体内可分解酯用于制备药物的用途，所述药物用于治疗由p38激酶引起的疾病。
另一方面，本发明提供了治疗由p38激酶引起的疾病的方法，该方法包括对热血动物服用有效剂量的式I化合物或其可药用盐或体内可分解酯。
另一方面，本发明提供了式I化合物或其可药用盐或体内可分解酯用于制备药物的用途，所述药物用于产生p38激酶抑制作用。
另一方面，本发明提供了提供p38激酶抑刺作用的方法，该方法包括对热血动物服用有效剂量的式I化合物或其可药用盐或体内可分解酯。
另一方面，本发明提供了式I化合物或其可药用盐或体内可分解酯用于制备药物的用途，所述药物用于治疗类风湿关节炎、哮喘、应急性肠疾病、多发性硬化症、AIDS、脓毒性休克、缺血性心脏病或牛皮癣。
另一方面，本发明提供了治疗类风湿关节炎、哮喘、应急性肠疾病、多发性硬化症、AIDS、脓毒性休克、缺血性心脏病或牛皮癣的方法，该方法包括对热血动物服用有效剂量的式I化合物或其可药用盐或体内可分解酯。
本发明化合物可与用于治疗疾病的其它药物和治疗方法一起使用，所述药物和治疗方法对抑制细胞活素(特别是TNF和IL-1)有利。例如，本发明式I化合物可与用于治疗本说明书上文所述的类风湿关节炎、哮喘、应急性肠疾病、多发性硬化症、AIDS、脓毒性休克、缺血性心脏病、牛皮癣及其它疾病的药物和治疗方法一起使用。
例如，鉴于其抑制细胞活素的能力，式I化合物可用于治疗某些炎症性和非炎症性疾病，这类疾病目前是利用环氧酶抑制非甾类抗炎药物(NSAID)治疗，这类药物如消炎痛、酮咯酸、乙酰水杨酸、布洛芬、舒林酸、托美丁和吡氧噻嗪。式I化合物与NSAID共同给药可导致需要产生治疗作用的后者的剂量降低。由此似乎可降低NSAID的副作用，如肠胃反应。因此，本发明的另一特征在于提供了与环氧酶抑制非甾类抗炎剂结合的药物组合物，该药物组合物包含式I化合物或其可药用盐或体内可分解酯以及可药用盐稀释剂或载体。
本发明化合物还可与5-脂氧合酶抑制剂类抗炎剂一起使用(如下列欧洲专利申请中所公开：、0351194、0375368、0375404、0375452、037547、0381375、0385662、0385663、0385679、0385680)。
在治疗如类风湿关节炎类疾病方面，式I化合物也可与抗关节炎药一起使用，所述抗关节炎药如金、氨甲喋呤、类固醇和青霉素胺；在治疗骨关节炎中可与类固醇一起使用。
在降解性疾病(如骨关节炎)方面，本发明化合物也可与软骨保护剂、抗降解剂和/或修补剂一起使用，所述软骨保护剂、抗降解剂和/或修补剂如双醋瑞因、玻璃糖醛酸制剂(如Hyalan、Rumalon、Arteparon)及葡萄糖胺盐(如Antril)。
在治疗哮喘方面，式I化合物可与抗哮喘剂一起使用，所述抗哮喘剂如支气管扩张药和白三烯拮抗剂。
如果是固定剂量的剂型，这类组合制品可在这里描述的剂量范围内使用本发明化合物，以及在所承认的剂量范围内使用其它药物活性剂。当组合制剂不适当时，可采用连续使用。
尽管式I化合物主要用作热血动物(包括人)的治疗剂，但本发明化合物也可根据需要起着抑制细胞活素的作用。由此，这些化合物可用作用于研制新的生物试验及寻找新药物制剂的药物标准。
式I酰胺衍生物或其可药用盐或其体内可分解酯可通过应用于制备相关化合物的公知方法制得。适宜的方法参见如下述文献所述的方法：J.Med.Chem.，1996，39，3343-3356。当将其应用于制备式I新酰胺衍生物时，该方法提供了本发明的另外特征，这可通过下述有代表性的方法说明，除非另外说明，其中的变量R1、R2、R3、R4、m、p和q具有上文定义的任何含义。必要的起始原料可由有机化学的标准方法获得。这些起始原料的制备在接着的实施例中与下述有代表性的方法一起描述。另外，必要的起始原料也可通过所述的类似方法获得，该类似方法属于有机化学工作者的普通技术范畴。
(a)式I化合物或其可药用盐或体内可分解酯可通过下述方法制备：在生成酰胺键的标准条件下，将式II苯胺，
式II与式III酸或其活性衍生物反应，
式III
其中可变基团如上文定义，如果需要的话，则可对任何官能团进行保护，以及：
(i)除去任何保护基团；
(ii)任意地形成可药用盐或体内可分解酯。
适宜的式III酸的活性衍生物为如酰基卤，如通过酸与无机酰氯反应形成的酰氯，如亚硫酰氯；混合酸酐，如通过酸与氯甲酸酯(如氯甲酸异丁酯)反应形成的酸酐；活性酯，如通过酸与酚(五氟苯酚)或醇(如N-氰基苯并三唑)反应形成的酯，所述酯如三氟乙酸五氟苯基酯；酰基叠氮化物，如通过酸与叠氮化物反应形成的叠氮化物，如二苯基磷酰基叠氮化物；酰基氰化物，如通过酸与氰化物形成的氰化物，如二乙基磷酰基氰化物；或酸与碳化二亚胺的反应产物，如二环己基碳化二亚胺。
反应优选地在存在适当碱的条件下进行，所述碱如碱金属或碱土金属碳酸盐、醇盐、氢氧化物或氢化物，例如碳酸钠、碳酸钾、乙醇钠、丁醇钾、氢氧化钠、氢氧化钾、氢化钠或氢化钾；或有机金属碱，例如烷基锂(如正丁基锂)或二烷氨基锂(如二异丙基胺化锂)或有机胺(如吡啶、2，6-二甲基吡啶、可力丁、4-二甲氨基吡啶、三乙胺、吗啉或二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯)。反应也可优选地在适当惰性溶剂或稀料(如四氢呋喃、1，2-二甲氧基乙烷、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷-2-酮、二甲亚砜或丙酮)中于如-78℃至150℃的温度范围(可方便地在接近环境温度下)内进行。
典型地，碳化二亚胺偶合剂可在存在有机溶剂(优选无水极性非质子有机溶剂)的条件下，于非极端温度(如-10至40℃，典型地于大约20℃的环境温度)下使用。
保护基团一般可选自文献中描述或本领域技术人员公知的适用于所讨论的基团保护的任何基团，该保护基团可通过常规方法引入。保护基团可通过文献中描述或本领域技术人员公知的适用于去除所讨论的保护基团的方法去除，这类方法可选择成能够在对该分子的别处影响最小的条件下有效地去除保护基团。
为了简便起见，保护基团给出如下，其中这里所述的“低级”(如低级烷基)是指所使用的基团优选地含有1-4个碳原子。人们应当可以理解，这些实例是非穷尽的。去除保护基团方法的特例给出如下，它们也是非穷尽的。没有特别提到的保护基团的使用和脱保护的方法当然也在本发明的范围内。
羧基保护基团可以是成酯脂族或芳基脂族醇或成酯硅烷醇(所述醇或硅烷醇优选地包含1-20个碳原子)。
羧基保护基团的实例包括直链或支链C1-12烷基基团(如异丙基、叔丁基)；低级烷氧基低级烷基基团(如甲氧基甲基、乙氧基甲基、异丁氧基甲基)；低级脂族酰氧基低级烷基基团(如乙酰氧基甲基、丙酰氧基甲基、丁酰氧基甲基、戊酰氧基甲基)；低级烷氧基羰基氧基低级烷基基团(如1-甲氧基羰基氧基乙基、1-乙氧基羰基氧基乙基)；芳基低级烷基基团(如苄基、p-甲氧基苄基、o-硝基苄基、p-硝基苄基、二苯甲基和2-苯并[c]呋喃酮基)；三(低级烷基)甲硅烷基基团(如三甲基甲硅烷基和叔丁基二甲基甲硅烷基)；三(低级烷基)甲硅烷基低级烷基基团(如三甲基甲硅烷基乙基)；以及C2-6链烯基(如烯丙基和乙烯基乙基)。
特别适用于去除羧基保护基团的方法包括如酸-、碱-、金属-或酶-催化水解。
羟基保护基团的实例包括低级烷基基团(如叔丁基)，低级链烯基基团(如烯丙基)；低级烷酰基基团(如乙酰基)；低级烷氧基羰基基团(如叔丁氧基羰基)；低级烯氧基羰基基团(如烯丙氧基羰基)；芳基低级烷氧基羰基基团(如苯甲酰氧基羰基、p-甲氧基苄氧基羰基、o-硝基苄氧基羰基、p-硝基苄氧基羰基)；三低级烷基甲硅烷基(如三甲基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基)和芳基低级烷基基团(如苄基)。
氨基保护基团的实例包括甲酰基，芳烷基(如苄基和取代苄基、p-甲氧基苄基、硝基苄基、2，4-二甲氧基苄基和三苯基甲基)；二-p-茴香基甲基和呋喃基甲基基团；低级烷氧基羰基(如叔丁氧基羰基)；低级烯氧基羰基(如烯丙氧基羰基)；芳基低级烷氧基羰基基团(如苄氧基羰基、p-甲氧基苄氧基羰基、o-硝基苄氧基羰基、p-硝基苄氧基羰基)；三烷基甲硅烷基(如三甲基甲硅烷基和叔丁基二甲基甲硅烷基)；亚烷基(如亚甲基)；亚苄基和取代亚苄基。
适用于去除羟基和氨基保护基团的方法包括：例如，对于如p-硝基苄氧基羰基，可采用酸-、碱-、金属-或酶-催化水解；对于如苄基，可采用氢化反应；以及对于如o-硝基苄氧基羰基，可采用光解作用。
对于反应条件和试剂的一般性知识，读者可参见AdvancedOrganic Chemistry，4th Edition，by Jerry March，published byJohn Wiley & Sons，1992。对于保护基团的一般性知识，读者可参见Protective Groups in Organic Synthrsis，2nd Edition，byGreen et al.，published by John Wiley & Sons。式II苯胺可通过还原相应的式IV硝基化合物制得：
式IV
典型的反应条件包括在存在催化剂(如Pd/C)和有机溶剂(优选极性质子溶剂)条件下使用甲酸铵，优选在加热(如加热至大约60℃)下进行。如果需要的话，任何官能团均可以被保护和脱保护。
式IV化合物可在适当的生成酰胺键的条件下，将式V酸或其活性衍生物，
式V与式VI苯胺反应制得，
式VI
典型的反应条件包括如在环境温度下，于有机溶剂中，利用卤代试剂(如草酰氯)处理，活化式V羧基基团，生成酰基卤，然后将活化的化合物与式VI苯胺反应。如果需要的话，任何官能团均可以被保护和脱保护。
(b)式I化合物或其可药用盐或体内可分解酯可通过下述方法制备：在生成酰胺键的标准条件下，将上文定义的式V酸或其活性衍生物，
式V与式VII苯胺反应，
式VII
其中可变基团如上文定义，如果需要的话，则可对任何官能团进行保护，以及：
(i)除去任何保护基团；
(ii)任意地形成可药用盐或体内可分解酯。
式VII苯胺可利用如上文描述或实施例说明的常规方法，还原相应的硝基化合物而制得。
(c)其中R1或R4上的取代基为氨基基团的式I化合物可通过还原其中R1或R4上的取代基为硝基的式I化合物制得。
典型的反应条件包括在存在催化剂的条件下使用甲酸铵或氢气气体，所述催化剂如金属催化剂，例如Pd/C。另外，溶解金属的还原反应可通过如在存在酸的条件下使用铁进行，所述酸如无机酸或有机酸，例如盐酸、氢溴酸、硫酸或乙酸。反应可方便地在存在有机溶剂(优选极性质子溶剂)下进行，优选在加热(如大约60℃)下进行。如果需要的话，可对任何官能团进行保护和脱保护。
下列生物鉴定和实施例被用来说明本发明。生物鉴定
下列鉴定用来测定本发明化合物的p38激酶-抑制、TNF-抑制和治疗关节炎效果。体外酶测定
测定本发明化合物抑制酶p38激酶的能力。测定特定试验化合物对酶的各种p38α和p38β异构重整的活性。
利用与J.Han et al.，Journal of Biological Chemistry，1996，271，2886-2891中公开的类似方法，从图像克隆45578(Genomics，1996，33，151)分离人体重组体MKK6(GenBank Accesion NumberG1209672)，将其在pGEX媒介动物中用于制备GST融合蛋白质形式的蛋白质。通过文献(Han et al.，Biochemica et Biophysica Acta，1995，1265，224-227和Y.Jiang，et al.，Journal of BiologicalChemistry，1996，271，17920-17926)中描述的类似方法，利用指定为人体p38α和p38β基因5’和3’端的寡核苷酸，分别通过人体淋巴样干细胞cDNA(GenBank Accession Number G1416)和人体甲胎脑cDNA[利用Gibco标记cDNA合成器，由mRNA(Clontech，Catalogue no.6525-1)合成]的PCR放大，分离出p38α(GenBankAccession Number G529039)和p38β(GenBank Accession NumberG1469305)。
两种p38蛋白质异构重整均以PET载体中的e coli表达。人体重组体p38α和p38β异构重整以5’c-myc，6His标记蛋白质形式生成。MKK6和p38蛋白质均利用标准方法纯化：GST MKK6通过利用谷胱甘肽琼脂糖柱纯化，p38蛋白质通过利用镍螯合物柱纯化。
p38酶在使用前通过利用MKK6在30℃下孵育3小时活化。未活化的coli-表达MKK6保留的活性足以完全活化两种p38异构重整。活化孵育包含p38α(10μl，10mg/ml)和p38β(10μl，5mg/ml)以及MKK6(10μl，1mg/ml)、“激酶缓冲液”[100μl，pH7.4缓冲液，该缓冲液包含Tris(50mM)、EGTA(0.1mM)、原钒酸钠(0.1mM)和β-巯乙醇(0.1％)]和MgATP(30μl，50mM Mg(OCOCH3)2和0.5mMATP)。这就产生足够的活化p38用于3个微滴定板。
试验化合物溶解在DMSO中。将于“激酶缓冲液”中的10μl 1∶10稀释样品加到微滴定板的孔中。对于单剂量测试，化合物以30μM加入。在加入“标记ATP”[30μl；包含50μM ATP、0.1μCi33P ATP(Amersham International cat.no.BF1000)和50mM Mg(OCOCH3)2]之后，加入“激酶测定混合物”[30μl；包含Myelin碱性蛋白质(GibcoBRL cat.no.1322B-010；1ml，3.33mg/ml水溶液)、活化p38酶(50μl)和“激酶缓冲液”(2ml)]。在轻微搅拌条件下，微滴定板在室温下孵育。包含p38α的滴定板孵育90分钟，包含p38β的滴定板孵育45分钟。通过加入50μl 20％三氯乙酸(TCA)，使孵育停止。通过p38激酶磷酰化沉淀的蛋白质，测定试验化合物抑制这种磷酰化用作的能力。利用Canberra Packard Unifilter过滤滴定板，利用2％TCA洗涤，干燥过夜，在Top Count闪烁计数器上计数。
起初以单剂量测试试验化合物，再测试活性化合物，从而测定IC50值。基于体外细胞的测定(i)PBMC
利用人周围血单核细胞测定本发明化合物抑制TNFα生成的能力，所述人周围血单核细胞在由脂多糖刺激时可合成和分泌TNFα。
周围血单核细胞(PBMC)是通过密度离心(LymphoprepTM；Nycomed)，从肝素化(10单位/ml肝素)人血中分离出来的。将单核细胞再悬浮在培养基[RPMI 1640培养物(Gibco)，该培养物补充有50单位/ml青霉素、50μg/ml链霉素、2mM谷酰胺和1％热灭活人AB血清(Sigma H-1513)]中。将化合物溶解在DMSO，浓度为50mM，在培养基中稀释1∶100，接着在含1％DMSO的培养基中制备系列稀释物。在增湿(5％CO2/95％空气)恒温箱(Falcon 3072；96孔平底组织培养板)中，在37℃下，利用20μl改变浓度的试验化合物(一式三份培养基)或μl包含1％DMSO的培养基(对照孔)孵育PBMCs(160μl培养基中包含2.4×105细胞)。将溶解在培养基中的20μl脂多糖[LPS E.Coli 0111：B4(Sigma L-4130)，最终浓度为10μg/ml]加入到适当的孔中。将20μl培养基加入到“只有培养基”的对照孔中。每个96孔板中包含六个“只有LPS”和四个“只有培养基”的对照组。在每个试验中，改变公知TNFα抑制剂的浓度，也就是PDE型IV酶抑制剂(参见如Semmler，J.Wachtel.H and Endres，S.，Int.J.Immunopharmac.(1993)，15(3)，409-413)或proTNFα转化酶抑制剂(参见如McGeehan，G.M.et al.，Nature(1994)370，558-561)。在从每个孔中去除100μl上清液并存放在-70℃(96孔圆底板；Corning 25850)下之后，将板在37℃下孵育7小时(增湿恒温箱)。利用人TNFαELISA(参见WO92/10190和CurrentProtocols in Molecular Biology，vol2，by Frederick M.Ausbelet al.，John Wiley & Sons Inc.)，测定每个样品的TNFα水平。
抑制％＝[(只有LPS-只有培养基)-(测试浓度-只有培养基)]/
(只有LPS-只有培养基)×100(ii)人全血
本发明化合物抑制TNFα的能力也可在人全血测定中测定。当利用LPS刺激时，人全血可分泌TNFα。血的这种性能构成了测定的基础，该测定是在PBMC试验中显示活性的化合物的第二种试验，
从自愿者身上取出肝素化(10单位/ml)人血。将160μl全血加入到96孔圆底板(Corning 25850)中。溶解化合物并顺序地在RPMI1640培养基(Gibco)中稀释，如上文细述，所述RPMI 1640培养基补充有50单位/ml青霉素、50μg/ml链霉素和2mM谷酰胺。将补充有抗生素和谷酰胺的20μl RPMI 1640培养基加入到对照孔中。在加入20μl LPS(最终浓度为10μg/ml)之前，将该板在37℃(增湿恒温箱)下孵育30分钟。将RPMI 1640培养基加入到对照孔中。每个板中包含六个“只有LPS”和四个“只有培养基”的对照组。在每个试验中均包含了公知的合成/分泌抑制剂。在37℃(增湿恒温箱)下，将板孵育6小时。离心(2000rpm，10分钟)该板，除去100μl血浆并存放在-70℃(Corning 25850板)下。通过ELISA(参见WO92/10190和Current Protocols in Molecular Biology，vol 2，by Frederick M.Ausbel et al.，John Wiley & Sons Inc.)，测定TNFα水平。ELISA中使用的成对抗体是从R&D System(cataloguenos.MAB610 anti-human TNFαcoating antibody，BAF210biotinylated anti-human TNFαdetect antibody)得到的。体外/体内测定
在大鼠或小鼠中测定本发明化合物作为体外TNFα抑制剂的能力。简单地，通过适当的给药路线，如经口(p.o.)、腹膜内(i.p.)或皮下(s.c.)，将一组雄性Wistar Alderley Park(AP)大鼠(180-210g)服用化合物(6只大鼠)或药物载体(10只大鼠).9分钟后升高CO2的浓度处死大鼠，通过尾部静脉取血，制成5单位肝素钠/ml血。将血样立即放置在冰上，在4℃下利用2000rpm离心10分钟，收集的血浆在-20℃下冷冻，用于接着的测定(对由LPS-刺激人血产生的TNFα的作用)。融化大鼠血浆，将175μl每份样品加入到96孔圆底板(Corning 25850)上的一组格式化结构中。然后向各个孔中加入50μl肝素人血并混合，该板在37℃(恒温箱)下孵育30分钟。向孔中加入LPS(25μl；最终浓度为10μg/ml)，再继续孵育5.5小时。利用25μl只含培养基的培养基孵育对照孔。然后在200rpm下离心该板，将200μl上清液转移至96孔板中并在-20℃下冷冻，用于在ELISA之后分析TNF浓度。
通过专用软件对各个化合物/剂量进行数据分析计算：TNFα抑制％＝[平均TNFα(对照组)-平均TNFα(测试组)]/[平均TNFα(对照组)]×100
另外，在上述方法中了利用小鼠代替大鼠。作为抗关节炎药的测试
化合物作为抗关节炎药的活性的测试如下。Trentham等人[1]指出，酸溶解天然II型胶原蛋白在大鼠中具有产生关节炎作用。现在人们知道，由胶原蛋白诱导的关节炎(CIA)或类似疾病可在小鼠和灵长目动物中诱导。最近的研究也表明，抗-TNF单核抗体[2]和TNF受体-IgG联合蛋白[3]能够改善移植生长的CIA，这就表明TNF在CIA病理中起着主要的作用。另有报道，在最近的类风湿关节炎临床试验中可显著有效地抵抗TNF单核抗体，这也表明TNF在慢性炎症性疾病中起着重要的作用。由此，正如参考文献2和3中描述的DAB/1小鼠中的CIA可以是用于说明化合物抗关节炎活性的第三模型。参见参考文献4。
1.Trentham，D.E.et al.，(1977)J.Exp.Med.，146，857.
2.Willams，R.O.et al.，(1992)Proc.Natl.Acad.Sci.，89，9784.
3.Willams，R.O.et al.，(1995)Immunology，84，433.
4.Badger，M.B.et al.，(1996)The Journal ofPharmacology and Experimental Therapeutics，279，1453-1461.
正如所预期，式I化合物的药物性能随着结构改变而变化，一般地，在浓度高达50μM的PBMC测试中，式I化合物能够抑制30％。在本发明试验化合物有效剂量范围内，没有观察到生理不适毒性。
本发明将通过下列非限定性实施例加以说明，除非另外说明，其中：
(i)除非另外说明，操作在环境温度(即17至25℃范围)下，于惰性气体(如氩气)气氛下进行；
(ii)蒸发通过真空旋转蒸发进行，收集步骤在通过过滤分离残留固体后进行；
(iii)(快速)柱色谱和中压液相色谱(MPLC)可在从E.Merck，Darmstadt，Germany得到的Merck Kieselgel硅胶(Art.9358)或Merck Lichroprep RP-18(Art.9303)反相硅胶上进行；高压液相色谱(HPLC)可在C18反相硅胶上进行，例如在Dynamax C-18 60制备反相柱上进行；
(iv)收率仅仅是为了说明，而不必是可能获得的最大值；
(v)一般地，式I最终产物具有满意的微量分析值，它们的结构可通过核磁共振(NMR)和/或质谱技术确定；利用Platform光谱仪可得到快速原子轰击(FAB)质谱数据，而且如果适当的话，可得到其正离子数据和负离子数据；NMR化学位移值可在δ-标度上测定[利用在场强为300MHz下工作的Varian Gemini 2000光谱仪或者利用在场强为250MHz下工作的Bruker AM250光谱仪测定质子磁共振光谱]；采用了下列缩略语：s，单峰；d，双蜂；t，三峰；q，四峰；m，多峰；br，宽峰；
(vi)中间体一般不完全表征，通过薄层色谱、HPLC、红外(IR)和/或NMR分析测定纯度；
(vii)熔点是未修正的，它可利用Mettler SP62自动熔点设备或油浴设备测定；式I最终产物的熔点可在从常规有机溶剂结晶后测定，所述常规有机溶剂包括乙醇、甲醇、丙酮、乙醚或己烷，可以是单独的溶剂，也可以是溶剂混合物；以及
(viii)采用下列缩略语：
DMF N，N-二甲基甲酰胺
HPLC 高压液相色谱
DMSO 二甲亚砜实施例1N-[2-氯-5-(3-二甲氨基苯甲酰氨基)苯基]-3，4-二甲氧基苯甲酰胺
在20℃下，将草酰氯(0.11ml)滴加到3-二甲氨基苯甲酸(0.18g)的二氯甲烷(10ml)搅拌悬浮液中。加入DMF(2滴)，搅拌反应混合物4小时。蒸发溶剂，得到固体。将该固体溶解在二氯甲烷(15ml)中，在5分钟内滴加到N-(5-氨基-2-氯苯基)-3，4-二甲氧基苯甲酰胺(0.306g)、三乙胺(0.4ml)、4-二甲氨基吡啶(0.005g)和二氯甲烷(5ml)的搅拌混合物中。反应混合物在20℃下搅拌18小时。利用水、饱和碳酸氢钠水溶液洗涤反应混合物，干燥(MgSO4)并蒸发。残留油状物通过硅胶柱色谱纯化，利用99∶1二氯甲烷和甲醇混合物作为洗脱液。由此得到标题化合物(0.19g)，m.p.98-99℃；
NMR光谱：(CDCl3)3.02(s，6H)，3.95(s，6H)，6.86 (m，1H)，6.93(d，1H)，7.1(d，1H)，
7.31(t，1H)，7.42(m，2H)，7.54(d，1H)，7.98(m，2H)，8.42(s，1H)，8.58(d，1H)；
质谱：M+H+454.
用作起始原料的N-(5-氨基-2-氯苯基)-3，4-二甲氧基苯甲酰胺可通过下列方法制备：
在20℃下，将3，4-二甲氧基苯甲酰氯(2g)加入到2-氯-5-硝基苯胺(1.72g)的吡啶(10ml)搅拌悬浮液中。反应混合物在100℃下加热1小时。在冷却至环境温度后，将反应混合物注入到水(100ml)中。收集所得沉淀，利用水洗涤并干燥。在二氯甲烷(20ml)中研磨固体，得到N-(2-氯-5-硝基苯基)-3，4-二甲氧基苯甲酰胺(1.2g)，m.p.231-231℃；
NMR光谱：(DMSOd6)3.82(s，6H)，7.08(d，1H)，7.62(m，1H)，7.82(d，1H)，8.08(m，1H)，8.54(d，1H)，10.07(m，1H)；
质谱：M+H+337.
在10分钟内，将所得物质(1.12g)分批加入到温热至70-75℃的铁粉(3.0g)的乙酸(1ml)、水(10ml)和乙醇(60ml)混合物的搅拌悬浮液中。回流加热所得混合物1小时。允许冷却混合物并加入固体碳酸钠，直至混合物呈碱性(pH＝8-9)。过滤混合物，利用二氯甲烷洗涤固体物质。蒸发滤液，利用乙酸乙酯研磨残留物，过滤并蒸发滤液，得到所需起始原料，为有色膏状固体，m.p.146-149℃；
NMR光谱：(CDCl3)3.70(s，2H)，3.88(s，3H)，3.91(s，3H)，6.31(m，1H)，6.74(d，1H)，7.06(d，1H)，7.37(m，1H)，7.42(d，1H)，7.92(d，1H)，8.30(s，1H)；质谱：M+H+307.实施例2
利用实施例1描述的类似方法，将适当的苯甲酰氯与适当的苯胺反应，得到表I描述的化合物。
表I序号 R注释 NMR数据 质谱 1 3-氰基3.81(s，6H)，7.06(d，1H)，7.50(d，1H)，7.56(d，1H)，7.62(m，1H)，7.7(m，1H)，7.75(d，1H)，8.03(m，2H)，8.15(d，1H)，8.4(s，1H)，9.9(s，1H)10.56(s，1H)M+H436 2 4-氰基3.82(s，6H)，7.07(d，1H)，7.55(d，1H)，7.58(s，1H)，7.62(m，1H)，7.7(m，1H)，8.01(d，2H)，8.1(d，3H)，9.9(s，1H)，10.62(s，1H)M+H436 32-羟基 1.3.82(s，6H)，6.95(m，2H)，7.05(d，1H)，7.42(t，1H)，7.56(m，4H)，7.95(d，1H)，8.03(d，1H)，9.9(s，1H)，10.49(s，1H)M+H427 44-甲氧基 2.M-H439 52，4-二氯 2.M+H479 63，4-二氯 2.M+H479 74-甲氧基羰基 2.M+H469注释
1、使用Brown et al.在J.Med.Chem.，1985，28，143-146中描述的方法。
2、利用从5％至30％甲醇的二氯甲烷剂型渐增的梯度混合物，通过HPLC纯化反应混合物。实施例3N-[2-溴-5-(3-二甲氨基苯甲酰氨基)苯基]-3，4-二甲氧基苯甲酰胺
在20℃下，将草酰氯(0.24ml)滴加到3-二甲氨基苯甲酸(0.36g)的二氯甲烷(15ml)搅拌悬浮液中。加入DMF(2滴)，搅拌反应混合物4小时。蒸发溶剂，得到黄色固体。将该固体溶解在二氯甲烷(20ml)中，在5分钟内滴加到冷却至5-10℃的N-(5-氨基-2-溴苯基)-3，4-二甲氧基苯甲酰胺(0.7g)、三乙胺(0.8ml)、4-二甲氨基吡啶(0.005g)和二氯甲烷(20ml)的搅拌混合物中。反应混合物在环境温度下搅拌18小时。利用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤有机相，干燥(MgSO4)并蒸发。残留油状物通过硅胶柱色谱纯化，利用49∶1二氯甲烷和甲醇混合物作为洗脱液。所得固体由乙酸乙酯和甲基叔丁基醚的混合物结晶，得到标题化合物(0.564g)，m.p.184℃；NMR光谱：(CDCl3)3.02(s，6H)，3.97(s，6H)，6.84(m，1H)，6.95(d，1H)，7.08(d，1H)，7.30(m，2H)，7.51(m，3H)，7.95(m，1H)，8.02(s，1H)，8.45(s，1H)，8.56(d，1H).质谱：M+H+498；元素分析： 实测值C，55.8；H，4.5；N，7.9；C24H24N3BrO4H2O理论值C，55.8；H，4.9；N，8.0％.
用作起始原料的N-(5-氨基-2-溴苯基)-3，4-二甲氧基苯甲酰胺可通过下列方法制备：
在25℃下，将3，4-二甲氧基苯甲酰氯(2g)加入到2-溴-5-硝基苯胺(2.17g)的搅拌溶液中。反应混合物在100℃下加热5小时。在冷却后，加入水(25ml)和3M盐酸(100ml)。过滤所得固体，利用水(50ml)洗涤并干燥。在乙醚中研磨固体，得到N-(2-溴-5-硝基苯基)-3，4-二甲氧基苯甲酰胺(2.01g)，为有色砂状固体，m.p.183-184℃；
NMR光谱：(DMSOd6)3.92(s，6H)，7.08(d，1H)，7.56(d，1H)，7.65(m，1H)，8.0(s，2H)，8.4(s，1H)，10.09(s，1H).
在5分钟内，将所得物质(1.9g)分批加入到温热至70-75℃的铁粉(4.5g)的乙酸(1.5ml)、水(15ml)和乙醇(90ml)混合物的搅拌悬浮液中。回流加热所得混合物0.75小时。加入固体碳酸钠，直至混合物呈碱性(pH＝8-9)。过滤热混合物，利用热乙醇洗涤残留物。蒸发滤液，利用热乙酸乙酯提取所得残留物，过滤溶液并蒸发滤液，得到N-(5-氨基-2-溴苯基)-3，4-二甲氧基苯甲酰胺(1.43g)，m.p.154-155℃；
NMR光谱：(CDCl3)3.88(s，2H)，3.94(s，3H)，3.96(s，3H)，6.38(m，1H)，6.93(d，1H)，7.25(d，1H)，7.46(m，1H)，7.55(d，1H)，8.02(d，1H)，8.38(s，1H).实施例4N-[2-氯-5-(3-吗啉代苯甲酰氨基)苯基]-3，4-二甲氧基苯甲酰胺
将3-吗啉代苯甲酰氯(0.15g)加入到N-(5-氨基-2-氯苯基)-3，4-二甲氧基苯甲酰胺(0.17g)的吡啶(3ml)搅拌溶液中。反应混合物加热至115℃18小时。允许冷却混合物，将其注入到水中。利用二氯甲烷提取混合物。干燥(MgSO4)有机提取液并蒸发。利用甲苯共沸所得固体，在乙醚中研磨得到标题化合物(0.1g)，m.p.147.9-148.3℃；NMR光谱：(DMSOd6)3.19(s，4H)，3.78(s，4H)，3.85(s，6H)，7.07(d，1H)，7.17(d，1H)，7.38(s，2H)，7.43(s，1H)，7.5(d，1H)，7.58(s，1H)，7.63(d，1H)，7.7(d，1H)，8.07(s，1H)，9.88(s，1H)，10.29(s，1H)；
质谱：M+H+496；
元素分析： 实测值C，62.2；H，5.1；N，8.2；C26H26N30O5Cl0.25H2O理论值C，62.4；H，5.3；N，8.4％.
用作起始原料的3-吗啉代苯甲酰氯可通过下列方法制备：
在氢气气氛下搅拌3-溴苯甲酸乙酯(1.92ml)、吗啉(1.25ml)、2，2’-二(二苯基膦酰基)-1，1’-二萘基(0.336g)、叔丁醇钠(1.615g)、三(二亚苄基丙酮)二钯(O)(0.33g)和甲苯(25ml)的混合物，加热至90℃18小时。允许将反应混合物冷却至环境温度，利用1M盐酸提取。利用浓氢氧化钠溶液碱化水相，利用乙酸乙酯提取。干燥(MgSO4)有机相并蒸发。通过硅胶柱色谱纯化残留油状物，利用47∶3二氯甲烷和甲醇的混合物作为洗脱液。由此得到N-(3-吗啉代苯甲酰基)吗啉(0.45g)。
搅拌所得物质、5M氢氧化钠溶液(2.5ml)和丁醇(2ml)的混合物，加热至115℃18小时。蒸发混合物，通过加入1M盐酸溶液(12.5ml)酸化残留物。分离所得沉淀，利用水洗涤，得到3-吗啉代苯甲酸(0.15g)；
NMR光谱：(DMSOd6)3.1(t，4H)，3.73(t，4H)，7.19(d.1H)，7.32(d，1H)，7.38(t，1H)，7.42(s，1H).
将草酰氯(0.14ml)加入到含DMF(2滴)的3-吗啉代苯甲酸(0.28g)的二氯甲烷(10ml)溶液中。反应混合物在环境温度下搅拌18小时。蒸发混合物并利用甲苯共沸，得到3-吗啉代苯甲酰氯(0.3g)；质谱：M+H+222。实施例5N-[2-氯-5-(4-氰基苯甲酰氨基)苯基]-4-氰基苯甲酰胺
将4-氰基苯甲酰氯(0.25g)加入到N-(3-氨基-4-氯苯基)-4-氰基苯甲酰胺(0.39g)、三乙胺(0.51ml)、4-二甲氨基吡啶(0.01g)和二氯甲烷(25ml)的搅拌混合物中。混合物在环境温度下搅拌18小时。分别利用2M盐酸溶液和水洗涤混合物。干燥(MgSO4)有机相并蒸发。残留物通过硅胶柱色谱纯化，利用49∶1二氯甲烷和甲醇的混合物作为洗脱液。由此得到标题化合物(0.11g)；NMR光谱：(CDCl3)5.5(s，2H)，6.58(d，1H)，6.7(d，1H)，7.18(d，1H)，7.93(s，8H)；
质谱：M-H-399；
元素分析： 实测值C：65.4；H，3.7；N，13.1；C22H13N4O2Cl0.25H2O理论值C，65.2；H，3.4；N，13.8％.
用作起始原料的N-(3-氨基-4-氯苯基)-4-氰基苯甲酰胺可通过下列方法制备：
将4-氰基苯甲酰氯(11.92g)慢慢加入到4-氯-3-硝基苯胺(10.4g)的吡啶(20ml)搅拌溶液中，搅拌混合物并加热至115℃18小时。将混合物冷却至环境温度，注入到水(150ml)中并搅拌30分钟。分离所得沉淀，利用水洗涤并干燥，得到N-[4-氯-3-硝基苯基]-4-氰基苯甲酰胺(18g)，m.p.213℃；NMR光谱：(DMSOd6)7.78(d，1H)，8.05(m，3H)，8.1(d，2H)，8.58(s，1H)，10.93(s，1H).
将所得部分物质(3.6g)加入到于乙醇(130ml)、水(30ml)和冰醋酸(4ml)混合物中的铁粉(10g)悬浮液中。混合物加热至75℃1小时，之后，趁热通过加入碳酸钠碱化。过滤混合物并蒸发滤液。残留物在水中搅拌3小时。分离固体并干燥，得到所需的起始原料(2.7g)，m.p.237.7℃；
NMR光谱：(DMSOd6)5.44(s，2H)，6.98(m，1H)，7.21(d，1H)，7.42(d，1H)，8.07(d，2H)，8.14(d，2H)，10.36(s，1H).实施例6
利用实施例5描述的类似方法，将适当的苯甲酰氯与适当的苯胺反应，得到表II描述的化合物。表II序号 (R1)m注释 NMR数据质谱 1 3，4，5-三甲氧基3.78(s，3H)，3.88(s，6H)，7.37(s，2H)，7.58(d，1H)，7.72(d，1H)，8.02(d，2H)，8.05(s，1H)，8.10(d，2H)，10.02(s，1H)，10.64(s，1H)M-H464 2 3，4-二乙氧基 1.1.38(t，6H)，4.09(m，4H)，9.83(s，1H)，10.62(s，1H)M-H462 3 2-羟基6.65(t，1H)，6.9(d，1H)，7.23(m，1H)，7.42(d，1H)，7.62(m，1H)，7.93(m，1H)，7.99(d，2H)，8.12(d，2H)，8.98(d，1H)，10.64(s，1H) M+H 392 4 2-羟基-4-甲氧基3.75(s，3H)，6.52(s，1H)，6.61(m，1H)，7.50(d，1H)，7.68(m，1H)，7.99(m，3H)，8.1(d，2H)，8.88(s，1H)，10.64(s，1H)，10.68(s，1H)，12.2(s，1H) M+H 422 5 4-(4-甲基哌嗪-1-基)2.8(s，3H)，3.4(m，4H)，4.0(m，2H)，7.08(d，2H)，7.52(d，1H)，7.72(d，1H)，7.91(d，2H)，8.0(d，2H)，8.12(m，3H)，9.8(s，1H)，10.68(s，1H) M+H 474 6 3-(4-甲基哌嗪-1-基)3.19(s，3H)，3.5(d，2H)，3.92(d，2H)，7.22(d，1H)，7.41(t，1H)，7.5(d，1H)，7.58(t，1H)，7.72(m，1H)，8.02(d，2H)，8.1(m，2H)，10.06(s，1H)，10.73(s，1H) M+H 474 7 4-吗啉代0.84(m，2H)，1.29(m，2H)，3.23(m，2H)，3.75(m，2H)，6.86(m，1H)，7.01(d，1H)，7.13(d，1H)，7.38(d，1H)，7.5(d，1H)，7.7(t，1H)，7.9(d，1H)，7.99(d，2H)，8.05(d，2H)，9.68(s，1H)，10.62(s，1H) M+H 461注释
1、将标准步骤应用到下述制备中：
将磷酰氯(0.03ml)滴加到冷却至-15℃的N-(3-氨基-4-氯苯基)-4-氰基苯甲酰胺(0.08g)、3，4-二乙氧基苯甲酸(0.062g)和吡啶(4ml)的搅拌混合物中。混合物在-15℃下搅拌3小时。允许将混合物温热至环境温度并搅拌16小时。利用水稀释混合物并搅拌过夜。分离所得沉淀，利用乙醚洗涤并在55℃下真空干燥，得到表中化合物(0.026g)。实施例7N-[2-氯-5-(4-氰基苯甲酰氨基)苯基]-3-氟-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯甲酰胺
将磷酰氯(0.11ml)滴加到冷却至-10℃的N-(3-氨基-4-氯苯基)-4-氰基苯甲酰胺(0.2g)、3-氟-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯甲酸(0.26g)和吡啶(2ml)的搅拌混合物中。反应混合物允许温热至环境温度并搅拌16小时。利用水稀释混合物并搅拌过夜。分离沉淀，利用乙醚洗涤并在55℃下真空干燥。由此得到标题化合物(0.212g)，为固体；质谱：(M-H)-490。
用作起始原料的3-氟-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯甲酸可通过下列方法获得：
搅拌3，4-二氟苄腈(8.65g)、N-甲基哌嗪(7.2ml)、三乙胺(9.1ml)和乙腈(12ml)的混合物并回流加热2小时。蒸发混合物，残留物通过柱色谱纯化，利用1∶5∶94三乙胺、甲醇和二氯甲烷的混合物作为洗脱液。由此得到3-氟-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苄腈，为油状物，将其慢慢结晶得到白色固体(12.47g)，m.p.60-63℃；
NMR光谱：(CDCl3)2.37(s，3H)，2.61
(t，4H)，3.24(t，4H)，6.89(m，1H)，7.27(m，1H)，7.35(m，1H).
将部分所得物质(3g)溶解在6N盐酸(30ml)中，回流加热溶液13小时。将混合物冷却至环境温度。分离沉淀，利用水洗涤并在空气中干燥，得到所需的起始原料(1.63g)。元素分析表明该晶体中包含大约6当量水。
NMR光谱：(DMSOd6)2.81(s，3H)，3.28(m，
8H)，7.17(m，1H)，7.62(m，1H)，7.71(m，1H)，10.9(s，1H).
用作起始原料的N-(3-氨基-4-氯苯基)-4-氰基苯甲酰胺可通过下列方法合成：
将三乙胺(6.7ml)加入到冷却至0℃的3-氨基-4-氯苯胺(3.44g)、4-氰基苯甲酰氯(4.0g)和二氯甲烷(50ml)的搅拌混合物中。允许将反应混合物温热至环境温度，搅拌5小时。将混合物浓缩至大约原始体积的三分之一，加入饱和碳酸氢钠水溶液。分离所得固体，分别利用水和甲醇洗涤并在55℃下真空干燥，得到所需的起始原料(5.23g)；
NMR光谱：(DMSOd6)5.37(s，2H)，6.9(m，1H)，7.14(d，1H)，7.35(d，1H)，7.98(d，2H)，8.08(d，2H)，10.28(s，1H).实施例8N-[5-(3-二甲氨基苯甲酰氨基)-2-氟苯基]-3，4-二甲氧基苯甲酰胺
将于二氯甲烷(5ml)中的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐(0.12g)加入到3，4-二甲氧基苯甲酸(0.91g)、N-(3-氨基-4-氟苯基)-3-二甲氨基苯甲酰胺(0.14g)、DMF(2ml)和4-二甲氨基吡啶(0.004g)的搅拌混合物中。反应混合物在环境温度下搅拌18小时。加入水(20ml)和二氯甲烷(10ml)。利用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤有机相，干燥(MgSO4)并蒸发。残留物通过硅胶柱色谱纯化，利用49∶1二氯甲烷和甲醇的混合物作为洗脱液。所得物质在乙醚中研磨。由此得到标题化合物(0.084g)，为无色固体，m.p.187-188℃；
NMR光谱：(CDCl3)3.02(s，6H)，3.97(s，6H)，6.86(m，1H)，6.93(d，1H)，7.09(d，1H)，7.16(t，1H)，7.25(m，1H)，7.32(t，1H)，7.41(m，1H)，7.5(d，1H)，7.88(m，1H)，7.97(s，1H)，8.04(s，1H)，8.42(m，1H)；
质谱：M+H+438；
元素分析：实测值C，65.4；H，5.5；N，9.5；C24H24NFO4理论值C，65.8；H，5.4；N，9.6％.
用作起始原料的N-(3-氨基-4-氟苯基)-3-二甲氨基苯甲酰胺可通过下列方法制备：
在20℃下于5分钟内，将草酰氯(1.2ml)滴加到3-二甲氨基苯甲酸(1.81g)的二氯甲烷(20ml)搅拌悬浮液中。加入DMF(2滴)，反应混合物在环境温度下搅拌4小时。蒸发溶剂，将残留物溶解在二氯甲烷(25ml)中在5分钟内较弱大-氟-3-硝基苯胺(1.56g)、三乙胺(4.1ml)和二氯甲烷(25ml)的搅拌混合物中。搅拌溶液18小时。分别利用3M盐酸和水洗涤有机层，干燥(MgSO4)并蒸发。残留固体先在甲基叔丁基醚中研磨，然后在二氯甲烷中研磨。由此得到N-(4-氟-3-硝基苯基)-3-二甲氨基苯甲酰胺(0.96g)，m.p.176-177℃；
NMR光谱：(DMSOd6)2.93(s，6H)，6.92(m，1H)，7.2(m，2H)，7.31(t，1H)，7.56(q，1H)，8.11(m，1H)，8.63(m，1H)，10.58(s，1H).
将10％Pd/C(0.09g)加入到所得硝基化合物(0.910g)的乙醇(90ml)搅拌悬浮液中。混合物在大气压力和环境温度下氢化，直至终止氢气摄取。通过过滤分离催化剂并蒸发滤液。固体残留物通过硅胶柱色谱纯化，利用49∶1二氯甲烷和甲醇的混合物作为洗脱液。由此得到所需的起始原料(0.74g)；NMR光谱：(CDCl3)3.0(s，6H)，3.78(s，2H)，6.7(m，1H)，6.92(m，2H)，7.05(d，1H)，7.30(m，2H)，7.37(m，1H)，7.68(s，1H).实施例9N-(5-苯甲酰氨基-2-氯苯基)-2-氨基-4-甲氧基苯甲酰胺
将铁粉(2.79g)加入到于乙醇(100ml)、水(20ml)和乙酸(4ml)的混合物中的N-(5-苯甲酰氨基-2-氯苯基)-4-甲氧基-2-硝基苯甲酰胺(2.13g)搅拌悬浮液中。回流加热反应混合物5小时。将混合物冷却至环境温度。加入水(50ml)，通过加入碳酸钠碱化所得混合物。过滤混合物并蒸发滤液。残留物在水中研磨。分离所得固体，在40℃下真空干燥。由此得到标题化合物(0.911g)；NMR光谱：(DMSOd6)3.72(s，3H)，6.09(d，1H)，6.27(s，1H)，6.62(s，2H)，7.45-7.61(m，4H)，7.66-7.72(m，2H)，7.95(d，2H)，8.07(s，1H)，9.52(s，1H)，10.37(s，1H)；
质谱：M+H+396和398.
用作起始原料的N-(5-苯甲酰氨基-2-氯苯基)-4-甲氧基-2-硝基苯甲酰胺可通过下列方法制备：
将苯甲酰氯(5.2ml)加入到冷却至0℃的2，4-二氨基氯苯(6.42g)、三乙胺(12.5ml)和二氯甲烷(10ml)的搅拌混合物中。允许将反应混合物温热至环境温度并搅拌16小时。蒸发混合物，残留物在饱和碳酸氢钠水溶液中研磨。分离所得固体，依次利用水和异己烷洗涤，在55℃下真空干燥。由此得到N-(3-氨基-4-氯苯基)苯甲酰胺(10.38g)，为固体；
NMR
光谱：(DMSOd6)5.32(s，2H)，6.9(m，1H)，7.1(d，1H)，7.37(d，1H)，7.52(m，3H)，7.9(d，2H)，10.05(s，1H).
将草酰氯(0.781ml)滴加到冷却至0℃的4-甲氧基-2-硝基苯甲酸(1.6g)、DMF(几滴)和二氯甲烷(30ml)的搅拌混合物中。允许将混合物温热至环境温度并搅拌4小时。蒸发混合物。将残留物溶解在二氯甲烷(10ml)中，滴加到N-(3-氨基-4-氯苯基)苯甲酰胺(2.0g)、三乙胺(2.49ml)和二氯甲烷(30ml)的搅拌混合物中。所得混合物在环境温度下搅拌16小时。分离沉淀，分别利用1N盐酸水溶液和甲醇洗涤，在40℃下真空干燥。由此得到所需的起始原料(2.49g)；NMR光谱(DMSOd6)3.9(s，3H)，7.39(d，1H)，7.47-7.62(m，5H)，7.72(d，1H)，7.78(d，1H)，7.97(d，2H)，8.14(s，1H)，10.28(s，1H)，10.46(s，1H)；质谱：M+H+426和428.实施例10N-(5-苯甲酰氨基-2-氯苯基)-3，4-二甲氧基苯甲酰胺
将磷酰氯(0.074g)加入到冷却至0℃的3，4-二甲氧基苯甲酸(0.088g)、N-(3-氨基-4-氯苯基)苯甲酰胺(0.1g)和吡啶(1ml)的搅拌混合物中。允许将混合物温热至环境温度并搅拌16小时。将混合物注入到1N盐酸水溶液中，在55℃下真空干燥。由此得到标题化合物(0.088g)；NMR光谱：(DMSOd6)3.83(m，6H)，7.09(d，1H)，7.55(m，6H)，7.72(d，1H)，7.95(d，2H)，8.08(s，1H)，9.8g(s，1H)，10.4(s，1H)；.
质谱：M-H-409.实施例11N-[2-氯-5-(2-硝基苯甲酰氨基)苯基]-3，4-二甲氧基苯甲酰胺
将3，4-二甲氧基苯甲酰氯(1.55g)加入到N-(3-氨基-4-氯苯基)-2-硝基苯甲酰胺(1.5g)和吡啶(20ml)的搅拌混合物中，搅拌混合物并加热至80℃16小时。将混合物冷却至环境温度并蒸发。将残留物分配在二氯甲烷和1N盐酸溶液之间。利用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤有机相并蒸发。残留物在乙酸乙酯中研磨。分离所得固体，利用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤并在40℃下真空干燥。由此得到标题化合物(1.63g)；NMR光谱：(DMSOd6)7.08(d，1H)，7.52-7.57(m，3H)，7.62(d，1H)，7.74-7.8(m，2H)，7.86(t，1H)，7.87(s，1H)，8.13(d，1H)；
质谱：M+H+456和458.
用作起始原料的N-(3-氨基-4-氯苯基)-2-硝基苯甲酰胺可通过下列方法制备：
将2-硝基苯甲酰氯(4.64ml)加入到3-氨基-4-氯苯胺(5g)、三乙胺(9.78ml)和二氯甲烷(300ml)的搅拌混合物中，反应混合物在环境温度下搅拌16小时。将混合物分配在二氯甲烷和饱和碳酸氢钠水溶液之间。蒸发有机相，残留物通过硅胶柱色谱纯化，得到所需的起始原料(3.02g)；
NMR光谱：(DMSOd6)5.38(s，2H)，6.74(d，1H)，7.11(d，1H)，7.27(s，1H)，7.7-7.75(m，2H)，7.84(t，1H)，8.1(d，1H)，10.5(s，1H)；质谱：M+H+292和294.实施例12N-[5-(2-氨基苯甲酰氨基)-2-氯苯基]-3，4-二甲氧基苯甲酰胺
利用实施例9描述的类似方法，在存在乙酸条件下，通过铁粉还原N-[2-氯-5-(2-硝基苯甲酰氨基)苯基]-3，4-二甲氧基苯甲酰胺，得到标题化合物，收率为43％；NMR光谱：(DMSOd6)3.82(s，6H)，6.32(s，2H)，6.58(t，1H)，7.74(d，1H)，7.08(d，1H)，7.19(t，1H)，7.47(d，1H)，7.52-7.64(m，4H)，8.04(s，1H)，9.88(s，1H)，10.13(s，1H)；
质谱：M+H+426.实施例13N-[2-氯-5-(3-二甲氨基苯甲酰氨基)-4-氟苯基]-3，4-二甲氧基苯甲酰胺
将3，4-二甲氧基苯甲酰氯(0.5g)、N-(5-氨基-4-氯-2-氟苯基)-3-二甲氨基苯甲酰胺(0.781g)和吡啶(8ml)的混合物在环境温度下搅拌18小时。蒸发混合物，将残留物分配在二氯甲烷和饱和碳酸氢钠水溶液之间。依次利用水和饱和氯化钠水溶液洗涤有机相，干燥(MgSO4)并蒸发。残留物通过硅胶柱色谱纯化，利用99∶1二氯甲烷和水的混合物作为洗脱液。由此得到标题化合物(0.328g)，为固体；NMR光谱：(CDCl3)3.02(s，6H)，3.98(s，6H)，6.96(m，2H)，7.06(m，1H)，7.06-7.47(m，3H)，7.47(m，1H)，7.6(m，1H)，8.01(s，1H)，8.2(s，1H)，9.53(m，1H)；
质谱：M+H+472知474.
用作起始原料的N-(5-氨基-4-氯-2-氟苯基)-3-二甲氨基苯甲酰胺可通过下列方法制备：
将邻苯二甲酸酸酐(11.83g)加入到2-氯-4-氟苯胺(11.08g)的冰醋酸(150ml)溶液中，搅拌混合物并加热至100℃2小时。允许将混合物冷却至环境温度，分离沉淀，利用水洗涤，真空干燥。由此得到N-(2-氯-4-氟苯基)邻苯二甲酰亚胺，该化合物可在无需进一步纯化的条件下使用。
将硝酸(4.6ml)和硫酸(5ml)的混合物渐渐地加入到在冰水浴中冷却的所得的N-(2-氯-4-氟苯基)邻苯二甲酰亚胺和硫酸(30ml)的混合物中，加料速率控制在使得内部反应温度不超过30℃。所得清亮溶液在环境温度下搅拌1小时。加入冰水混合物(250ml)，分离固体沉淀并真空干燥。由此得到N-(2-氯-4-氟-5-硝基苯基)邻苯二甲酰亚胺(17.9g)，为固体；NMR光谱：(CDCl3)：7.58(d，1H)，7.88(m，2H)，8.01(m，2H)，8.16(d，1H)；质谱：M-H-319和321.
搅拌乙醇(450ml)、水(65ml)和乙酸(6.5ml)的混合物并加热至50℃。加入铁粉(9g)，接着在10分钟内分批加入N-(2-氯-4-氟-5-硝基苯基)邻苯二甲酰亚胺(8.98g)。搅拌所得混合物并回流加热2小时。冷却混合物至环境温度，通过加入固体碳酸钠碱化。过滤混合物，蒸发滤液。将残留物分配在二氯甲烷和饱和碳酸氢钠水溶液之间。利用饱和氯化钠水溶液洗涤有机提取液，在硫酸钠上干燥并蒸发。由此得到N-(5-氨基-2-氯-4-氟苯基)邻苯二甲酰亚胺(6.3g)，为固体；NMR光谱：(CDCl3)3.87(s，2H)，6.74(d，1H)，7.2(d，1H)，7.81(m，2H)，7.96(m，2H)；
质谱：M-H-289和291.
向N-(5-氨基-2-氯-4-氟苯基)邻苯二甲酰亚胺(2.9g)、3-二甲氨基苯甲酰氯盐酸盐(3.06g)和二氯甲烷(20ml)的混合物中加入吡啶(2.0ml)，混合物在环境温度下搅拌18小时。利用二氯甲烷(200ml)稀释反应混合物，依次利用饱和硫酸铜水溶液和水洗涤。干燥(MgSO4)有机相并蒸发。残留物在乙酸乙酯中研磨。由此得到N-(4-氯-2-氟-5-邻苯二甲酰亚氨基苯基)-3-二甲氨基苯甲酰胺(2.46g)，为固体；
NMR光谱：(DMSOd6)2.94(s，6H)，6.94(m，1H)，7.28(m，3H)，7.8-7.92(m，2H)，7.94(m，2H)，8.02(m，2H)；质谱：M+H+438和440.
在环境温度下搅拌所得物质、乙醇胺(0.68ml)和二氯甲烷(40ml)的混合物4小时。利用二氯甲烷(200ml)稀释混合物，所得溶液分别利用水和饱和氯化钠水溶液洗涤，在硫酸钠上干燥并蒸发。由此得到N-(5-氨基-4-氯-2-氟苯基)-3-二甲氨基苯甲酰胺(1.26g)，为固体；
NMR光谱：(CDCl3)3.02(s，6H)，3.94(s，2H)，4.0(宽s，2H)，6.88(m，1H)，7.04(m，1H)，7.07(s，1H)，7.25(m，1H)，7.32(t，1H)，7.98(宽s，1H)，8.08(d，1H)；质谱：M+H+308和310.实施例14N-[5-(4-乙酰氧基苯甲酰氨基)-2-氯苯基]-4-氰基苯甲酰胺
将草酰氯(0.35ml)加入到冷却至0℃的4-乙酰氧基苯甲酸(0.57g)的二氯甲烷(15ml)搅拌悬浮液中。加入DMF(2滴)，混合物在环境温度下搅拌4小时。蒸发混合物，得到4-乙酰氧基苯甲酰氯，该化合物可在不进行进一步纯化的条件下使用。搅拌所得酰氯、N-(3-氨基-4-氯苯基)-4-氰基苯甲酰胺(0.813g)和吡啶(15ml)的混合物，加热至100℃16小时。将混合物冷却至环境温度，注入到2N盐酸溶液(175ml)中。分离沉淀，利用水洗涤并干燥。所得物质通过硅胶柱色谱纯化，利用7∶3异己烷和乙酸乙酯的混合物作为洗脱液。由此得到标题化合物(0.74g)，m.p.195-196℃；NMR光谱：(DMSOd6)2.3(s，3H)，7.28(d，2H)，7.51(d，1H)，7.73(m，1H)，7.81(m，4H)，8.12(m，3H)，10.08(s，1H)，10.64(s，1H)；
质谱：M+H+434.实施例15N-[2-氯-5-(3-吗啉代苯甲酰氨基)苯基]-4-氰基苯甲酰胺
利用实施例14描述的类似方法，将3-吗啉代苯甲酰氯与N-(3-氨基-4-氯苯基)-4-氰基苯甲酰胺反应，得到标题化合物，收率为42％；NMR光谱：(DMSOd6)3.13(t，4H)，3.73(t，4H)，7.17(s，1H)，7.43(m，1H)，7.6(d，1H)，7.8(m，1H)，8.06(m，3H)，8.1(m，3H)，8.17(m，1H)；
质谱：M+H+461.实施例16药物组合物
下列实施例说明了用于在人中治疗或预防的本发明定义(活性成分用“化合物X”表示)的有代表性的剂量形式：(a)片剂I Mg/片化合物X 100乳糖Ph.Eur. 182.75Croscarmellose sodium 12.0玉米淀粉糊(5％w/v糊) 2.25硬脂酸镁 3.0(b)片剂II Mg/片化合物X 50乳糖Ph.Eur. 223.75Croscarmellose sodium 6.0玉米淀粉 15.0聚乙烯基吡咯烷酮(5％w/v糊) 2.25硬脂酸镁 3.0(c)片剂III Mg/片化合物X 1.0乳糖Ph.Eur. 93.25Croscarmellose sodium 4.0玉米淀粉糊(5％w/v糊) 0.75硬脂酸镁 1.0(d)胶囊剂 Mg/胶囊化合物X 10乳糖Ph.Eur. 488.5镁 1.5(e)注射剂I (50mg/ml)化合物X 5.0％w/v1M氢氧化钠溶液 15.0％w/v0.1M盐酸(调节至pH7.6)聚乙二醇400 4.5％w/v注释用水至100％(f)注射剂II (10mg/ml)化合物X 1.0％w/v磷酸钠BP 3.6％w/v0.1M氢氧化钠溶液 15.0％w/v注释用水至100％(g)注射剂III(1mg/ml，缓冲至pH6)化合物X 0.1％w/v磷酸钠BP 2.26％w/v柠檬酸 0.38％w/v聚乙二醇400 3.5％w/v注释用水至100％(h)气雾剂I mg/ml化合物X 10.0三油酸山梨醇酯 13.5三氯氟甲烷 910.0二氯二氟甲烷 490.0(i)气雾剂II mg/ml化合物X 0.2三油酸山梨醇酯 0.27三氯氟甲烷 70.0二氯二氟甲烷 280.0二氯四氟乙烷 1094.0(j)气雾剂III mg/ml化合物X 2.5三油酸山梨醇酯 3.38三氯氟甲烷 67.5二氯二氟甲烷 1086.0二氯四氟乙烷 191.6(k)气雾剂IV mg/ml化合物X 2.5大豆卵磷脂 2.7三氯氟甲烷 67.5二氯二氟甲烷 1086.0二氯四氟乙烷 191.6(1)油膏剂 M1化合物X 40mg乙醇 300ul水 300ul1-十二烷基氮杂环庚烷-2-酮 50ul丙二醇 至1ml注释：
上述制剂可通过药物领域公知的常规方法制得。片剂(a)-(c)可通过常规的方法带有肠衣，如提供纤维素乙酸间苯二甲酸酯包衣。气雾剂(h)-(k)可与步骤测定剂量的气雾分散器结合，悬浮剂三油酸山梨醇酯和大豆卵磷脂可由另外的悬浮剂替代，如单油酸山梨醇酯、一倍半油酸山梨醇酯、多乙氧基醚80、聚乙二醇油酸酯或油酸。