硫酸酯化生漆多糖及其制备方法和用途 【技术领域】
本发明涉及一种生物活性硫酸酯化生漆多糖及其制备方法和用途。该硫酸酯化多糖具有抗凝血活性、抗病毒活性，作为一种药物在治疗心血管疾病及HIV等方面有应用前景。
背景技术
血栓栓塞可以通过抗凝血治疗得到解决。据估计，就深静脉血栓和肺栓塞而言，每年需要抗凝血治疗的人约占0.2-0.4％。最常用的抗凝血药物是肝素，一种硫酸酯化的天然多糖。目前，肝素已成为仅次于胰岛素的第二大天然治疗用药。然而尽管肝素具有非常好的抗凝血疗效，但由于部分病人先天缺乏和肝素作用的抗凝血酶以及肝素常引起血小板减少和出血而在一些临床条件下限制了使用。此外，从哺乳动物分离得到的肝素还会有被致病介质污染的危险。因此，从非哺乳动物途径，寻找新型硫酸酯化多糖来替代肝素是多糖研究开发领域的重要方向。
硫酸酯化反应是多糖中引入硫酸酯基的常用方法。然而，由于多糖结构的复杂性，用于某一确定多糖的可预期衍生物制备的硫酸酯化方法常常不能轻易应用于另一种多糖的修饰。从中国漆树生漆中分离提取得到的生漆多糖，是含D-半乳糖(～66mol％)，4-O-甲基-β-D-葡萄糖醛酸(～24mol％)，D-葡萄糖醛酸(～3mol％)，L-鼠李糖(～5mol％)和L-阿拉伯糖(～3mol％)的酸性杂多糖，其结构以1，3-β-D-吡喃半乳糖为主链，并具有4-O-甲基-β-D-葡萄糖醛酸位于末端的复杂支链。
生漆多糖的硫酸酯化有报道的也仅是用DMF-SO3在DMF中进行的方法。该方法所用硫酸酯化试剂量大，且反应过程中降解严重，产物分子量小(＜10000)，生物活性较差。
【发明内容】
本发明就是为了解决上述问题，提出一种生物活性硫酸酯化生漆多糖及其制备方法和用途，所得硫酸酯化多糖不仅具有较高的分子量，而且具有高地取代度，可替代肝素用于制备抗凝血药物。
本发明提供的技术方案是：一种硫酸酯化生漆多糖，由生漆多糖经硫酸酯化制得，硫酸酯化生漆多糖的硫酸酯化度在0.1～1.7之间，分子量在7.3×104～1.1×104之间。
本发明还提供了上述硫酸酯化生漆多糖的制备方法：将生漆多糖溶解或悬浮在50～100倍重量比的干燥溶剂中，在40～100℃下搅拌10～30min，接着加入生漆多糖残基1～4倍摩尔量的三氧化硫吡啶复合物或体积比为1∶2～4∶1的氯磺酸吡啶混合物反应0.5～4小时，反应混合物用冰浴冷却，加入溶剂体积的1/3～1/2倍的冰水，用5-20wt％NaOH中和，然后于蒸馏水中透析，透析内液在30-70℃减压蒸馏浓缩，接着用无水乙醇沉淀；沉淀用P2O5真空干燥即得所需硫酸酯化生漆多糖。
上述溶剂为二甲亚砜、二甲基甲酰胺、甲酰胺和吡啶中的一种或两种。
本发明重复性好，所得硫酸酯化多糖不仅具有较高的分子量，而且具有高的取代度和抗凝血活性、抗病毒活性，可替代肝素用于制备抗凝血药物。
【具体实施方式】
实施例1：486mg生漆多糖悬浮在48.6ml二甲亚砜中，在60℃下搅拌30min，接着加入三氧化硫吡啶复合物1.92g。反应1h后，反应混合物用冰水浴冷却到室温，加入30ml冰水，用15wt％NaOH中和，然后于蒸馏水中透析120小时。透析内液在45℃减压蒸馏浓缩，接着用无水乙醇沉淀；沉淀用P2O5真空干燥后得产品。所得产品分子参数和抗凝血性能列于表1。
实施例2：486mg生漆多糖悬浮在48.6ml二甲亚砜中，在60℃下搅拌30min，接着加入三氧化硫吡啶复合物1.92g。反应3h后，反应混合物用冰水浴冷却到室温，加入30ml冰水，用15wt％NaOH中和，然后于蒸馏水中透析120小时。透析内液在45℃减压蒸馏浓缩，接着用无水乙醇沉淀；沉淀用P2O5真空干燥后得产品。所得产品分子参数和抗凝血性能列于表1。
实施例3：162mg生漆多糖悬浮在16.2ml二甲亚砜中，在40℃下搅拌30min，接着加入三氧化硫吡啶复合物0.64g。反应3h后，反应混合物用冰水浴冷却到室温，加入10ml冰水，用15wt％NaOH中和，于蒸馏水中透析。透析内液减压蒸馏浓缩，接着用无水乙醇沉淀，真空干燥后得产品。所得产品分子参数和抗凝血性能列于表1。
实施例4：162mg生漆多糖悬浮在16.2ml二甲亚砜中，在70℃下搅拌30min，接着加入三氧化硫吡啶复合物0.324g。反应3h后，反应混合物用冰水浴冷却到室温，加入10ml冰水，用15wt％NaOH中和，于蒸馏水中透析。透析内液减压蒸馏浓缩，接着用无水乙醇沉淀，真空干燥后得产品。所得产品分子参数和抗凝血性能列于表1。
实施例5：162mg生漆多糖悬浮在16.2ml二甲基甲酰胺中，在80℃下搅拌30min，接着加入三氧化硫吡啶复合物0.64g。反应3h后，反应混合物用冰水浴冷却到室温，加入10ml冰水，用15wt％NaOH中和，于蒸馏水中透析。透析内液减压蒸馏浓缩，无水乙醇沉淀，真空干燥后得产品。所得产品分子参数和抗凝血性能列于表1。
实施例6：162mg生漆多糖溶解在16.2ml甲酰胺中，在100℃下搅拌30min，接着加入三氧化硫吡啶复合物0.64g。反应3h后，反应混合物用冰水浴冷却到室温，加入10ml冰水，用15wt％NaOH中和，于蒸馏水中透析。透析内液减压蒸馏浓缩，无水乙醇沉淀，真空干燥后得产品。所得产品分子参数和抗凝血性能列于表1。
实施例7：486mg生漆多糖溶解在48.6ml甲酰胺中，在90℃下搅拌30min，接着加入硫酸酯化试剂(氯磺酸1ml+吡啶2ml)。反应4h后，反应混合物用冰水浴冷却到室温，加入乙醇沉出多糖。离心收集沉淀，接着溶沉淀于蒸馏水中，用5wt％NaOH中和，并于蒸馏水中透析。透析内液减压蒸馏浓缩，无水乙醇沉淀，真空干燥后得产品。所得产品分子参数和抗凝血性能列于表1。
表1硫酸酯化生漆多糖的分子参数和抗凝血活性
重均分子量 硫酸酯化度 抗凝血活性
(×104) (unit/mg)
实施例1 3.50 1.15 30.2
实施例2 2.58 1.57 11.8
实施例3 6.86 0.52 -
实施例4 4.00 0.81 1.32
3.39 0.73 -
实施例5 7.29 0.12 -
实施例6 5.85 0.92 10.4
实施例7 4.49 1.22 9.7
实施例8：162mg生漆多糖在16.2ml甲酰胺和二甲亚砜的混合溶液(体积比为1∶1)中，在70℃下搅拌30min，接着加入三氧化硫吡啶复合物0.64g。反应2h后，反应混合物用冰水浴冷却到室温，加入10ml冰水，用20wt％NaOH中和，于蒸馏水中透析。透析内液减压蒸馏浓缩，无水乙醇沉淀，真空干燥后得产品。
实施例9：486mg生漆多糖悬浮在25ml吡啶中，在60℃下搅拌15min，接着加入氯磺酸4ml+吡啶1ml。反应4h后，反应混合物用冰水浴冷却到室温，加入30ml冰水，用15wt％NaOH中和，然后于蒸馏水中透析120小时。透析内液在45℃减压蒸馏浓缩，接着用无水乙醇沉淀；沉淀用P2O5真空干燥后得产品。
实施例10：486mg生漆多糖悬浮在48.6ml二甲亚砜和二甲基甲酰胺的混合溶液(体积比为2∶1)中，在60℃下搅拌30min，接着加入三氧化硫吡啶复合物1.92g。反应3h后，反应混合物用冰水浴冷却到室温，加入30ml冰水，用15wt％NaOH中和，然后于蒸馏水中透析120小时。透析内液在45℃减压蒸馏浓缩，接着用无水乙醇沉淀；沉淀用P2O5真空干燥后得产品。
实施例11：486mg生漆多糖悬浮在48.6ml二甲亚砜和吡啶的混合溶液(体积比为4∶1)中，在60℃下搅拌30min，接着加入三氧化硫吡啶复合物1.92g。反应3h后，反应混合物用冰水浴冷却到室温，加入30ml冰水，用15wt％NaOH中和，然后于蒸馏水中透析120小时。透析内液在45℃减压蒸馏浓缩，接着用无水乙醇沉淀；沉淀用P2O5真空干燥后得产品。