火焰兰的快速繁殖技术.pdf

本发明涉及火焰兰的无菌播种和组织培养技术。火焰兰属植物有15种，全部具有很高的观赏价值，目前国际上的火焰兰商品苗都要通过人工播种和组培繁殖进行生产，国内尚无火焰兰的种苗生产，火焰兰的繁殖多采用分株法，繁殖速度慢；而火焰兰种子由于胚发育不完全，自然状态下极难萌发。本发明提供火焰兰的无菌播种和组织培养繁殖的方法及所使用的培养基与现有技术相比，该技术具有种子萌发率高，试管苗培养时间短、生长健壮，可操作性强，应用价值高的优点。火焰兰的盆花和切花的市场需求大，本技术有很好的应用前景。

1、  一种火焰兰的快速繁殖技术，其特征在于该技术包括以下步骤：
1)、材料：开花时选取生长健壮的火焰兰母株进行人工授粉，产生自交和杂交果实，授粉后果实120天成熟时，做为外植体用于播种；
2)、无菌播种：外植体用75％的酒精浸泡30秒后置于0.1％的升汞溶液中消毒20分钟，无菌水漂洗4～5次后切开果实，用接种针将白色粉末状种子接种到种子萌发培养基上30天胚萌发，培养温度28±2℃，光照度1500～2000lx，光照12小时/天；60天形成完整小植株，及时将小植株转入壮苗培养基；
3)、增殖培养：为获得更多的种苗，将无菌播种产生的原球茎培养在增殖培养基上能形成类原球茎，培养温度28±2℃，光照度1500～2000lx，光照12小时/天；30天为一个继代周期；
4)、生根壮苗培养：原球茎在种子培养或增殖培养基上长时间培养60天可形成无根的小苗，及时将植株切分成单株，接种到生根壮苗培养基上培养，培养温度28±2℃，光照度1500～2000lx，光照12小时/天；4周可形成完整植株，6-8周的植株可进行炼苗移栽；
5)、试管苗移栽：当试管苗壮苗培养60天后，植株约有3-4片叶，转移到自然光下炼苗7-14天，然后将其从玻璃瓶中取出，洗净根部的培养基，用粗花水苔种植于1.5寸盆中，保持适当通风和足够的湿度。

2、  根据权利要求1中的火焰兰的快速繁殖技术，其特征在于1)中所述的火焰兰母株是云南火焰兰、豹斑火焰兰或桔黄火焰兰。

3、  根据权利要求1中的火焰兰的快速繁殖技术，其特征在于2)、中所述的种子萌发培养基为：复合花宝培养基1+ND培养基有机成份+6-苄基嘌呤0.5-2毫克/升+萘乙酸0.2-1毫克/升+10-20％的椰子汁+活性碳0.5-2克/升，含蔗糖20克/升，pH5.2-5.4，琼脂0.7％。

4、  根据权利要求1中的火焰兰的快速繁殖技术，其特征在于3)中所述的增殖培养基为：复合花宝培养基1+ND培养基有机成份+6-苄基嘌呤1-5毫克/升+萘乙酸0.2-0.5毫克/升+10-20％的椰子汁+活性碳0.5-2克/升，含蔗糖20克/升，pH5.2-5.4，琼脂0.7％。

5、  根据权利要求3或4中的火焰兰的快速繁殖技术，其特征在于所述的复合花宝培养基1为花宝一号2克、花宝2号1克。

6、  根据权利要求1中的火焰兰的快速繁殖技术，其特征在于4)中所述的生根壮苗培养基为：复合花宝培养基2+香蕉匀浆100克/升+6-苄基嘌呤0.1-0.5毫克/升+萘乙酸0.5-2毫克/升+活性碳0.5-2克/升，含蔗糖20克/升，pH5.2-5.4，琼脂0.7％。

7、  根据权利要求1或6中的火焰兰的快速繁殖技术，其特征在于所述的复合花宝培养基2为花宝一号1克、花宝2号2克。

火焰兰的快速繁殖技术
技术领域
本发明涉及火焰兰的无菌播种和组织培养技术。
背景技术
火焰兰属植物有15种，我国原产2种，全部具有很高的观赏价值，其杂交品种繁多，可以和多个属进行属间杂交，与蝴蝶兰、万代兰等杂交出许多高档地切花和盆栽品种，是世界兰花产业中新兴的珍奇种类。目前国际上的火焰兰商品苗都要通过人工播种和组培繁殖进行生产，国内尚无火焰兰的种苗生产，而火焰兰的盆花和切花的市场需求大，本技术有很好的应用前景。
火焰兰的繁殖多采用分株法，繁殖速度慢；而火焰兰种子由于胚发育不完全，自然状态下极难萌发，但在合适当人工培养基上可以进行。本专利采用无菌播种的方法能获得大量试管苗，利用无菌播种得到的原球茎可以进行大量增殖。
目前，国内没有火焰兰无菌播种和组织培养研究及大规模生产和专利申请的报道。本发明专利提供火焰兰的无菌播种和组织培养繁殖的方法及所使用的培养基与国际上的已有报道不同，种子萌发率高，试管苗培养时间短、生长健壮，具有可操作性强，应用价值高的优点。
发明内容
本发明的目的是提供火焰兰的快速繁殖技术配方和生产流程，该技术非常适合工业化生产，配方效果较佳，萌发率，增殖率高，植株生长旺盛。提供的火焰兰种苗的繁殖方法和所使用的培养基，成本低，可操作性强。
该技术的特点为：
1、本发明所述技术的供试材料为火焰兰(Renanthera coccinea)、云南火焰兰(Renantheraimschootiana)、豹斑火焰兰(Renanthera monachica)和桔黄火焰兰(Renanthera citrus)。
2、本发明技术内容为无菌播种及育苗，提供优化培养基配方，种子萌发率高达85％，种苗生长迅速，植株健壮。
3、试管苗移栽时，要在自然光下炼苗7-14天，移栽成活率高达95-100％。
4、火焰兰是珍稀观赏植物，繁殖主要采用分株繁殖，但繁殖速度慢，而火焰兰种子由于胚发育不完全，没有胚乳，自然状态下极难萌发。本专利采用无菌播种的方法能短期内获得大量试管苗，利用无菌播种产生的原球茎能进行增殖。
5、本发明技术能成功地进行火焰兰原种及其杂交种的无菌播种和组织培养快速繁殖，具有配方简单有效、投入少，产出高的特点。实施该专利只需有简单的植物组织培养设备即可进行。
本发明所述火焰兰的快速繁殖技术包括以下步骤：
1.材料：开花时选取生长健壮的火焰兰(Renanthera coccinea)、云南火焰兰(Renantheraimschootiana)、豹斑火焰兰(Renanthera monachica)和桔黄火焰兰(Renanthera citrus)母株进行人工授粉，产生自交和杂交果实，授粉后果实120天左右基本成熟时做为外植体用于播种。
2.无菌播种：用75％的酒精浸泡30秒后置于0.1％的升汞溶液中消毒20分钟，无菌水漂洗4～5次后切开果实，用接种针将白色粉末状种子接种到种子萌发培养基上30天左右胚萌发，60天左右形成完整小植株，及时将小植株转入壮苗培养基。
3.增殖培养：为获得更多的种苗，将无菌播种产生的原球茎培养在增殖培养基上能形成类原球茎，增殖率为5以上，30天为一个继代周期。
4.生根壮苗培养：原球茎在种子培养或增殖培养基上长时间培养60天左右可形成无根的小苗，及时将植株切分成单株，接种到生根壮苗培养基上培养，4周可形成完整植株，6-8周的植株可进行炼苗移栽。
5.试管苗移栽：当试管苗壮苗培养60天后(植株约有3-4片叶)，转移到自然光下炼苗7-14天，然后将其从玻璃瓶中取出，洗净根部的培养基，用粗花水苔种植于1.5寸盆中，保持适当通风和足够的湿度，移栽的成活率均可达95-100％。
该方法所用培养基的成分为：
种子萌发培养基：复合花宝培养基1(花宝一号2克、花宝2号1克)+ND培养基有机成份+6-苄基嘌呤0.5-2毫克/升+萘乙酸0.2-1毫克/升+10-20％的椰子汁+活性碳0.5-2克/升。
增殖培养基：复合花宝培养基1+ND培养基有机成份+6-苄基嘌呤1-5毫克/升+萘乙酸0.2-0.5毫克/升+10-20％的椰子汁+活性碳0.5-2克/升。
生根壮苗培养基：复合花宝培养基2(花宝一号1克、花宝2号2克)+香蕉匀浆100克/升+6-苄基嘌呤0.1-0.5毫克/升+萘乙酸0.5-2毫克/升+活性碳0.5-2克/升。
以上培养基均含蔗糖20克/升，pH5.2-5.4，琼脂0.7％。培养温度(28±2)℃，光照度1500～2000lx，光照12小时/天。
本发明所火焰兰的快速繁殖技术与现有技术相比具有萌发率高，出苗快，增殖率高，苗壮，种苗品质好、生长良好等优势。同时本发明供试材料有广泛代表性，可做为火焰兰属其它种、属内或与其它属间杂种的无菌播种和组织培养的方法。
具体实施方式：
实例1：
1、获得种子材料：选取温室栽培的火焰兰(renanthera coccinia)、豹斑火焰兰(renantheramonachita)开花的健壮植株，以火焰兰为母本，豹斑火焰兰为父本进行杂交，授粉2天后可见柱头闭合，子房开始发育，授粉130天后，可见果实转黄色，取下果实供播种使用。
2、果实的消毒方法：将从母株上取下的果实用75％的酒精浸泡30秒后置于0.1％的升汞溶液中消毒20分钟，无菌水冲洗4～5次后切开果实。
3、种子萌发：用接种针将白色粉末状胚接种到萌发培养基：复合花宝培养基1(花宝一号2克、花宝2号1克)+加ND培养基有机成份+6-苄基嘌呤0.5毫克/升+萘乙酸0.5毫克/升+10％的椰子汁+活性碳0.5克/升。30天左右胚萌发，萌发率约85％。
4、增殖培养：将种子萌发产生的PLB转接到增殖培养基：复合花宝培养基1+ND培养基有机成份+10％的椰子汁+6-苄基嘌呤2毫克/升+萘乙酸0.2毫克/升+活性碳0.5克/升。加入活性炭有利于防止褐化，增殖率为6以上，继代周期为30天。
5、生根壮苗培养：在增殖培养基或种子萌发培养基上的类原球茎培养到60天左右可形成无根的小苗，将这些小苗切分成单株接种到壮苗培养基：复合花宝培养基2(花宝一号1克、花宝2号2克)+香蕉匀浆100克/升+6-苄基嘌呤0.1毫克/升+萘乙酸1毫克/升+活性碳1克/升。培养2周即可见根长出，培养6周后可形成带有3-5片叶的可移栽种苗。
6、试管苗炼苗与移栽：将可移栽的试管苗整瓶放置于70％遮光的温室中炼苗1周，取出小苗，将培养基洗净，500倍多菌灵水溶液浸泡后晾干菌液，用特级水苔种植于2.5寸小盆中，保持适当通风和足够的湿度，移栽的成活率可达100％。
以上培养基均含蔗糖20克/升，pH 5.2-5.4，琼脂0.7％。培养温度(28±2)℃，光照度1500～2000lx，光照12小时/天。
实例2：
选取温室栽培的云南火焰兰(renanthera imschootiana)健壮植株的不同个体为亲本来源，于开花后2天进行自交，授粉2天后可见柱头闭合，子房开始发育，授粉120天后，可见果实转黄色，取下果实供播种使用。其他基本操作方法同实施例1一致。但其种子萌发培养基为：复合花宝培养基1(花宝一号2克、花宝2号1克)+加ND培养基有机成份+6-苄基嘌呤0.5毫克/升+萘乙酸0.5毫克/升+20％的椰子汁+活性碳0.5克/升，其萌发率最高约60％。生根壮苗培养基为复合花宝培养基2(花宝一号1克、花宝2号2克)+香蕉匀浆100克/升+6-苄基嘌呤0.5毫克/升+萘乙酸1毫克/升+活性碳2克/升。试管苗移栽的成活率可达95％。