一种利用毕赤氏酵母生产调香液的方法.pdf

本发明公开了一种利用毕赤氏酵母生产调香液的方法，包括以下步骤：斜面培养：将毕赤氏酵母FBKL2.0008菌种接种于斜面培养基上，在28℃下培养24-48h，待菌丝长满试管；菌种活化；种子液制备；三角瓶固态发酵，得发酵品；调香液的制备：发酵品中按1g：1ml：1ml的26.47%食盐水和10%乙醇溶液，搅拌均匀，搅拌时间持续5min-10min，再置于50℃水浴锅中水浴30min；常压蒸馏，控制温度100℃，待有馏分馏出时计时，蒸馏时间为20-40min，收集馏分25-75ml于容量瓶中，置于4℃冰箱冷藏保存。本发明生产周期短、优质品率高、生产成本低。

1.  一种利用毕赤氏酵母生产调香液的方法，包括以下步骤：
（1）斜面培养：将毕赤氏酵母FBKL2.0008菌种接种于斜面培养基上，在28℃下培养24-48h，待菌丝长满试管；
（2）菌种活化：将斜面培养的菌种在麦芽汁琼脂培养基上划线活化，在28℃下培养24-48h；
（3）种子液制备：配制液体培养基，三角瓶盛装，115℃灭菌20min，然后在超净工作台接入活化的菌种到液体培养基中，在28℃摇床上培养24-48h；
（4）三角瓶固态发酵：采用高粱麦粒培养基，小麦1:1粉碎，高粱3:1粉碎，再以高粱：小麦质量比为1:1混料；接着90℃热水润粮4h，其中加水量40%-50%；将培养基盛装放入灭菌锅内121℃准确蒸煮20min；待培养基冷却到60±2℃加入200-250u/g糖化酶，调节pH4.0-4.5，在60±2℃水浴锅糖化4h；装瓶，灭菌；灭菌完成待培养基冷却至40±2℃后，往三角瓶中接入质量百分比为4-8%的种子液，搅拌均匀，在28℃下恒温培养7d，以后每隔8-12h扣瓶一次，得发酵品；
（5）调香液的制备：
（a）配制浓度为26.47%的食盐水溶液200ml，过滤备用，再配制体积浓度10%乙醇溶液200ml；
（b）准确称取50-150g发酵品置于圆底烧瓶中并加入玻璃珠和小碎瓷片；
（c）向圆底烧瓶中加入与发酵品按1g：1ml：1ml的食盐水和10%乙醇溶液，搅拌均匀，搅拌时间持续5min-10min，再将烧瓶置于50℃水浴锅中水浴30min；
（d）连接好蒸馏装置，在圆底烧瓶的顶部用封口膜密封，插入量程为0℃-100℃的温度计，常压蒸馏，控制温度100℃，待有馏分馏出时计时，蒸馏时间为20-40min，收集馏分25-75ml于容量瓶中，置于4℃冰箱冷藏保存。

2.  如权利要求1所述的一种利用毕赤氏酵母生产调香液的方法，其中斜面培养基为麦芽汁琼脂培养基：麦芽膏粉130g/L,氯霉素0.1g/L,琼脂15g/L,PH5.8-6.2。

3.  如权利要求1或2所述的一种利用毕赤氏酵母生产调香液的方法，其中第（2）步中液体培养基：麦芽膏粉130g/L,氯霉素0.1g/L,PH5.8-6.2。

一种利用毕赤氏酵母生产调香液的方法
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种利用毕赤氏酵母生产调香液的方法。
背景技术
酱香型白酒中呈香呈味物质有800-1000多种，其香味物质主要来源于酿酒原料、非酶化学反应、各种生物酶的作用、微生物代谢和次级代谢产物及贮存过程，主体香味物质争议颇多，但其中酯类物质作为提升香味、增加熟厚感必不可少。在白酒中酯的含量越高，酒的香味越浓郁，白酒的质量越好。众所周知，产香酵母可以提高白酒的含酯量，以改善白酒的风味,其香味的组分也是评价白酒风格和质量的一个重要指标。在酿造过程中酸类赋予白酒丰满和刺激感，酯类使白酒具有水果的香气，酯是白酒的重要香气之一，白酒除酯后则香气大减，普通白酒成分除酒精和水外，乙酸乙酯居于第三位，而其余产生的丁酸乙酯、醋酸异丁酯、乙酸苯乙酯、乙酸苄酯等，这些成分在白酒中呈现出一定的花香、果香等味道；此外在白酒酿造过程中，产生的醇类除乙醇外，产生的高级醇如异戊醇、异丁醇、苯乙醇等属于醇甜和助香剂的主要物质来源，赋予白酒一定魅力,如果白酒中无高级醇则无传统白酒的固有风味。白酒中的醇(乙醇除外)、醛、酸、酯等具有呈香呈味作用的有机微量成分,其含量及比例决定着白酒的品质及风格，酿造原料不同、生产工艺不同、发酵期不同、生产季节不同、贮存时间不同等都会造成白酒中微量香味成分的含量及量比不同。目前对于白酒酿造过程中生香酵母研究较多的有鲁氏接合酵母、多变假丝酵母、汉逊酵母清香型及球拟酵母等，此类研究均侧重于产香微生物的筛选，对于利用产香微生物来生产调香液应用于白酒生产和其余食品增香研究报道几乎没有，因此开展这方面的研究对实际生产具有很好的价值及实用性。
发明内容
本发明的目的在于克服上述缺点而提供的一种生产周期短、优质品率高、生产成本低的利用毕赤氏酵母生产调香液的方法。
本发明的一种利用毕赤氏酵母生产调香液的方法，包括以下步骤：
（1）斜面培养：将毕赤氏酵母FBKL2.0008(PichiakudriavzeviiFBKL2.0008)菌种接种于斜面培养基上，在28℃下培养24-48h，待菌丝长满试管；
（2）菌种活化：将斜面培养的菌种在麦芽汁琼脂培养基上划线活化，在28℃下培养24-48h；
（3）种子液制备：配制液体培养基（麦芽膏粉130g/L,氯霉素0.1g/L,PH5.8-6.2），三角瓶盛装，115℃灭菌20min，然后在超净工作台接入活化的菌种到液体培养基中，在28℃摇床上培养24-48h；
（4）三角瓶固态发酵：采用高粱麦粒培养基，小麦1:1粉碎，高粱3:1粉碎，再以高粱：小麦质量比为1:1混料；接着90℃热水润粮4h，其中加水量40%-50%；将培养基盛装放入灭菌锅内121℃准确蒸煮20min；待培养基冷却到60±2℃加入糖化酶（200u/g-250u/g），调节pH4.0-4.5，在60±2℃水浴锅糖化4h；装瓶，灭菌；灭菌完成待培养基冷却至40±2℃后，往三角瓶中接入质量百分比为4-8%的种子液，搅拌均匀，在28℃下恒温培养7d，以后每隔8-12h扣瓶一次，得发酵品；
（5）调香液的制备：
（a）配制浓度为26.47%的食盐水溶液200ml，过滤备用，再配制10%乙醇溶液（按90ml蒸馏水加10ml无水乙醇的配比）200ml；
（b）准确称取50-150g发酵品置于圆底烧瓶中并加入玻璃珠和小碎瓷片；
（c）向圆底烧瓶中加入与发酵品按1g：1ml：1ml的食盐水和10%乙醇溶液，搅拌均匀，搅拌时间持续5min-10min，再将烧瓶置于50℃水浴锅中水浴30min；
（d）连接好蒸馏装置，在圆底烧瓶的顶部用封口膜密封，插入量程为0℃-100℃的温度计，常压蒸馏，控制温度100℃，待有馏分馏出时计时，蒸馏时间为20-40min，收集馏分25-75ml于容量瓶中，置于4℃冰箱冷藏保存。
上述的一种利用毕赤氏酵母生产调香液的方法，其中斜面培养基为麦芽汁琼脂培养基：麦芽膏粉130g/L,氯霉素0.1g/L,琼脂15g/L,PH5.8-6.2。
毕赤氏酵母FBKL2.0008(PichiakudriavzeviiFBKL2.0008)已于2015年6月17日保藏到中国典型培养物保藏中心（地址：中国武汉武汉大学），保藏号：CCTCCNO：M2015380
本发明与现有技术相比，具有明显的有益效果，从以上技术方案可知：该方法以贵州省珍酒酿酒有限公司的大曲为试验材料，经筛菌、分离、纯化、镜检、生理生化以及采用16SrDNA测序方法对菌株进行分子鉴定，并参照《酵母菌的特征与鉴定手册》，分离到毕赤氏酵母FBKL2.0008菌株，并将分离到的菌株为生产菌株，以高粱、小麦为发酵培养基，采用固态发酵，利用发酵所得的产物，提取其中的香味成分，制得调香液。该方法操作简单，工艺清晰，且不易污染，对生产环境要求不高，生产出的调香液除能较好的应用于白酒的勾兑外，还可作为其余食品调香剂。
从白酒酿造过程中分离到的毕赤氏酵母FBKL2.0008所制成的调香液经过GC-MS对成分分析具有安全性，且该菌株在发酵过程中高产芳香醇，香味突出，无明显刺激感。
具体实施方式
实施例1
一种利用毕赤氏酵母FBKL2.0008生产调香液的方法，包括以下步骤：
（1）菌种活化：麦芽汁琼脂培养基：麦芽膏粉130g/L,氯霉素0.1g/L,琼脂15g/L,PH5.8-6.2。将毕赤氏酵母FBKL2.0008菌种接种于斜面培养基上，在28℃下培养48h，待菌丝长满试管；
（2）种子液制备：配制液体培养基（麦芽膏粉130g/L,氯霉素0.1g/L,PH5.8-6.2），三角瓶盛装，115℃灭菌20min，然后在超净工作台接入活化的菌种到液体培养基中，在28℃摇床上培养48h，得种子液；
（3）三角瓶固态发酵：采用高粱麦粒培养基，小麦1:1粉碎，高粱3:1粉碎，再以高粱：小麦质量比为1:1混料；接着90℃热水润粮4h，其中加水量40%；将培养基盛装放入灭菌锅内121℃蒸煮20min；待培养基冷却到60℃加入糖化酶（200u/g），调节pH4.0—4.5，在60℃水浴锅糖化4h；装瓶，灭菌；灭菌完成待培养基冷却至40℃后，往三角瓶中接入质量百分比为4%的种子液，搅拌均匀，在28℃下恒温培养7d，以后每隔8h扣瓶一次，得发酵品；
（4）调香液的制备：
（a）配制浓度为26.47%（按36gNacl溶于100ml蒸馏水的配比）的食盐水溶液100ml，过滤备用，再配制10%乙醇溶液（按90ml蒸馏水加10ml无水乙醇的配比）100ml；
（b）准确称取50g发酵品置于250ml圆底烧瓶中并加入10粒玻璃珠和3块小碎瓷片；
（c）向圆底烧瓶中加已配制的食盐水50ml，再加10%乙醇50ml，搅拌均匀，搅拌时间持续5min，再将烧瓶置于50℃水浴锅中水浴30min；
（d）连接好蒸馏装置，在圆底烧瓶的顶部用封口膜密封，插入量程为0℃-100℃的温度计，常压蒸馏，控制温度100℃，待有馏分馏出时计时，蒸馏时间为20min，收集馏分25ml于容量瓶中，置于4℃冰箱冷藏保存；
感官评定：香气感官评定香气情况4，能较完整保留固态发酵品中的香气成分。
实施例2
一种利用毕赤氏酵母FBKL2.0008生产调香液的方法，包括以下步骤：
（1）菌种活化：麦芽汁琼脂培养基：麦芽膏粉130g/L,氯霉素0.1g/L,琼脂15g/L,PH5.8-6.2。将毕赤氏酵母FBKL2.0008菌种接种于斜面培养基上，在28℃下培养48h，待菌丝长满试管；
（2）种子液制备：配制液体培养基（麦芽膏粉130g/L,氯霉素0.1g/L,PH5.8-6.2），三角瓶盛装，115℃灭菌20min，然后在超净工作台接入活化的菌种到液体培养基中，在28℃摇床上培养48h，得种子液；
（3）三角瓶固态发酵：采用高粱麦粒培养基，小麦1:1粉碎，高粱3:1粉碎，再以高粱：小麦质量比为1:1混料；接着90℃热水润粮4h，其中加水量45%；将培养基盛装放入灭菌锅内121℃蒸煮20min；待培养基冷却到60℃加入糖化酶（225u/g），调节pH4.0-4.5，在60℃水浴锅糖化4h；装瓶，灭菌；灭菌完成待培养基冷却至40℃后，往三角瓶中接入质量百分比为6%的种子液，搅拌均匀，在28℃下恒温培养7d，以后每隔10h扣瓶一次，得发酵品；
（4）调香液的制备：
（a）配制浓度为26.47%（按36gNacl溶于100ml蒸馏水的配比）的食盐水溶液200ml，过滤备用，再配制10%乙醇溶液（按90ml蒸馏水加10ml无水乙醇的配比）200ml；
（b）准确称取100g发酵品置于500ml圆底烧瓶中并加入15粒玻璃珠和6块小碎瓷片；
（c）向圆底烧瓶中加已配制的食盐水100ml，再加10%乙醇100ml，搅拌均匀，搅拌时间持续5min，再将烧瓶置于50℃水浴锅中水浴30min；
（d）连接好蒸馏装置，在圆底烧瓶的顶部用封口膜密封，插入量程为0℃-100℃的温度计，常压蒸馏，控制温度100℃，待有馏分馏出时计时，蒸馏时间为30min，收集馏分50ml于容量瓶中，置于4℃冰箱冷藏保存；
感官评定：香气感官评定香气情况5，能较完整保留固态发酵品中的香气成分，香味较浓。
实施例3
一种利用毕赤氏酵母FBKL2.0008生产调香液的方法，包括以下步骤：
（1）菌种活化：麦芽汁琼脂培养基：麦芽膏粉130g/L,氯霉素0.1g/L,琼脂15g/L,PH5.8-6.2。将毕赤氏酵母FBKL2.0008菌种接种于斜面培养基上，在28℃下培养48h，待菌丝长满试管；
（2）种子液制备：配制液体培养基（麦芽膏粉130g/L,氯霉素0.1g/L,PH5.8-6.2），三角瓶盛装，115℃灭菌20min，然后在超净工作台接入活化的菌种到液体培养基中，在28℃摇床上培养48h，得种子液；
（3）三角瓶固态发酵：采用高粱麦粒培养基，小麦1:1粉碎，高粱3:1粉碎，再以高粱：小麦质量比为1:1混料；接着90℃热水润粮4h，其中加水量50%；将培养基盛装放入灭菌锅内121℃蒸煮20min；待培养基冷却到60℃加入糖化酶（250u/g），调节pH4.0-4.5，在60℃水浴锅糖化4h；装瓶，灭菌；灭菌完成待培养基冷却至40℃后，往三角瓶中接入质量百分比为8%的种子液，搅拌均匀，在28℃下恒温培养7d，以后每隔12h扣瓶一次，得发酵品；
（4）调香液的制备：
（a）配制浓度为26.47%（按36gNacl溶于100ml蒸馏水的配比）的食盐水溶液200ml，过滤备用，再配制10%乙醇溶液（按90ml蒸馏水加10ml无水乙醇的配比）200ml；
（b）准确称取150g发酵品置于500ml圆底烧瓶中并加入20粒玻璃珠和9块小碎瓷片；
（c）向圆底烧瓶中加已配制的食盐水150ml，再加10%乙醇150ml，搅拌均匀，搅拌时间持续5min，再将烧瓶置于50℃水浴锅中水浴30min；
（d）连接好蒸馏装置，在圆底烧瓶的顶部用封口膜密封，插入量程为0℃-100℃的温度计，常压蒸馏，控制温度100℃，待有馏分馏出时计时，蒸馏时间为40min，收集馏分75ml于容量瓶中，置于4℃冰箱冷藏保存；
感官评定：香气感官评定香气情况5，能较完整保留固态发酵品中的香气成分，香味浓。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，任何未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明技术方案的范围内。