阿地米屈在上皮功能障碍治疗中的用途技术领域
本发明的目的是上皮功能障碍治疗中使用的阿地米屈(Adelmidrol)。
背景技术
十六酰胺乙醇(PEA)是一种内源的脂质N-丙烯酰胺物质，其对神经
性炎症和疼痛的作用已经被广泛证实[CalignanoA.etalEurop.J.
Pharmacol.2001；419:191-198；SkaperS.D.etalMolNeurobiol.
2013；48:340-352；SkaperS.D.etal.Inflammopharmacology.2014；22:79-94]。
在药学水平上，目前认为PEA内源水平的升高对确定由于不同发病机理
原因引起的神经性炎症和疼痛机制的控制是重要的，且与人类和动物两者
中的许多疾病相关[PetrosinoS.etalWSAVA/FECAVAWorldSmallAnimal
Congress2008；RichardsonD.etal.ArthritisResearch&Therapy2008；10
(2)；R43；GhafouriN.etalPLoSONE2011；6(11)；NaccaratoM.etalLipidsin
HealthandDisease2010；9:47]。目前已经提出了两种不同的药学方法来得
到该升高。
第一种方法是基于全身口腔或舌下给予PEA：在该情况中，由于脂质
分子在水中的高度不溶性，所以必须以微粒(粒径在2至10微米之间的
范围内)或超微粒(粒径在0.8至6微米之间的范围内)形式给予PEA[EP
1207870B1；WO2011/027373A1]。
另一方面，第二种方法是基于抑制特定PEA的活性-降低酶活性，即，
FAAH(脂肪酸酰胺水解酶)和NAAA(N-酰基乙醇胺酸酰胺酶)；该抑
制通过全身给予能够阻断PEA降解的所述水解酶的合成抑制剂[Piomelli
D.etalCNSDrugReviews2006；12:21-38；FiasellaA.ChemMedChem2014
EpubofPrint]得到。然而，由于通过阻断特定降解酶阻断PEA的降解对应
于防止需要返回至磷脂的PEA组分乙醇胺和十六酸的再利用(这是必要
的)，“根据要求”由该磷脂生物合成PEA至细胞，所以该方法蕴含着严
重的问题，还存在的问题是，虽然发现全身口腔给予微粒或超微粒形式的
PEA是有效且安全的[SkaperS.D.etalInflammopharmacol.2014；22:79-94；
EspositoE.etal.,MiniRevMedChem.2013；13:237-55]，但是因为由于该重
要脂质分子的高度疏水性，以该方式生产药学有效量的PEA的难度，所
以局部使用膏体或溶液形式是非常困难且无效的。
阿地米屈也是具有高度的水溶解性及良好的脂质溶解性的合成的N-
酰基酰胺分子(N,N′-双(2-羟基乙基)壬二酰胺)。
发明内容
本专利的发明人出人意料地发现，在使阿地米屈与上皮细胞(如角化
细胞)接触时，其能够导致PEA内源水平的重要升高，而不干扰PEA降
解酶(FAAH和/或NAAA)的活性。通过用于多种用途的合适药物形式，
该发现使得对外部(皮肤、粘膜与皮肤的生殖组织、口腔粘膜)和/或内部
上皮细胞(膀胱上皮、输尿管粘膜、精囊的粘膜、消化系统的粘膜、滑膜
的内皮细胞层、呼吸道的粘膜)，对人类和动物中的不同器官的上皮细胞
疾病的有效药理作用。
通过将相同的阿地米屈与能够调节(但不是阻断)PEA降解酶活性的
物质相结合增加十六酰胺乙醇的局部水平来增强阿地米屈的活性，它也是
有用的。具体地，可以使用国际申请公开号WO2013/121449A1中描述的
PEA噁唑啉。
因此，本发明的一个目的是用于治疗人类或动物中的上皮组织功能障
碍的阿地米屈。
本发明的进一步目的是用于治疗人类或动物中的上皮组织功能障碍
的药物制剂，该制剂包含阿地米屈，其可选地与选自由以下组成的组中的
活性成分结合：十六酰胺乙醇的噁唑啉衍生物、抗菌剂、反式创伤酸
(trans-traumaticacid)和透明质酸或它们的衍生物。
由通过非限制性实施例的方式提供的其优选实施方式的以下描述，本
发明的进一步特征和优势将变得显而易见。
附图说明
图1示出了用10μM阿地米屈刺激24小时的HaCaT细胞中的AEA、
2-AG、PEA和OEA的内源水平；
图2示出了使用数显卡尺对膝盖水肿的评估-从左向右：非OA；OA+
盐水；OA+阿地米屈1.5微克/25微升；OA+阿地米屈15微克/25微升；
OA+阿地米屈150微克/25微升(ANOVA；Tukey测试)；
图3示出了滑液中的生物化学标记物TNF-α的评估(单向ANOVA
Tukey测试)。
具体实施方式
本发明涉及用于治疗人类或动物中的上皮组织功能障碍的阿地米屈。
阿地米屈是壬二酸的合成衍生物的国际非专利药品名称(INN)，壬二
酸是天然存在的饱和二羧酸。事实上，壬二酸已经在人体中发现且它的等
离子体水平在20-80ng/ml之间的范围内。
化学上，阿地米屈是N,N’-双(2-羟基乙基)壬二酰胺；由于其具有能够
促进在水和有机溶剂两者中的溶解的亲水性质和亲脂性质，所以该分子具
有两亲性行为。这些特征，与包含阿地米屈的热灭菌溶液的可能组合，使
该分子高度适用于外表面和内部上皮细胞的局部应用。
用根据本发明的阿地米屈治疗的上皮功能障碍优选地选自由以下组
成的组：具有不同病因的口咽和食管吞咽困难；胃食管反流；环咽肌失弛
缓症；食管失弛缓症；具有不同病因的口腔炎；老年人中的老年性吞咽困
难(Presbiphagia)；猫齿龈口炎；还与牙髓学/矫畸术以及牙齿移植干预相
关的牙周病；灼口综合征(BMS)；眼睑浮肿；睑炎；睑结膜炎；眼睑的
内转(睑内翻)和外翻(睑外翻)；具有不同病因的角膜炎和角结膜炎(例
如，表面点状角结膜炎)；具有不同病因的角膜损伤；泪液膜的质量-量改
变；泪囊炎；葡萄膜炎；青光眼；耳朵的耵聍腺疾病；狗和猫中的耳血肿；
狗和猫中的蝇蛆病发炎；蹄皮炎(Pododermatites)；鼻炎、鼻气管炎、急
性和慢性鼻咽炎(rhinopharyngites)；急性和慢性咽炎；急性和慢性支气管
炎；鼻窦炎、鼻炎鼻窦炎(Rinosinusites)；支气管哮喘；脱发；狗和猫中
的鼻皮肤病；急性和慢性涎腺炎(sialadenites)；神经性瘙痒；归因于尿路
上皮的改变，具体地间质性膀胱炎、由于全身化疗引起的膀胱炎、由于局
部化疗如表阿霉素或丝裂霉素引起的膀胱炎、由于盆腔放疗引起的膀胱炎
的具有不同病因的膀胱疼痛综合征；慢性和/或复发性膨大细胞；归因于上
皮细胞改变的胃肠功能紊乱；肛肠段疾病，特别是后脱肛、直肠炎
(proctites)、粘膜脱肛、痔疮、肛门皲裂、肛周瘙痒、狗的肛门囊疾病和
其他会阴功能障碍；中小型脉管炎以及具体地肉芽肿血管炎、由于免疫络
合物引起的血管炎；第二性腺体以及具体地精囊和输精管的炎症；人和兽
领域的颌面疼痛综合征；与类风湿关节炎和骨关节病相关的滑膜炎。
用于旨在用于人类和动物中的局部应用的药物形式(膏体、凝胶、贴
剂)中的阿地米屈的浓度在0.2％至7.0％之间的范围内。
在应用于内部上皮细胞的溶液(膀胱内灌注、精囊中的输液、关节腔
中的引入液、喷雾溶液)中，应当以0.3％至5.0％之间范围内的浓度使用
阿地米屈。
用于人类和动物两者中的局部应用的药物形式(膏体、凝胶、贴剂)
的量0.01至0.5ml/cm2上皮组织(例如，皮肤、粘膜)之间的范围内；从而，
阿地米屈的给予剂量不超过分子的LD50的大于10％，其是在实验动物中
以及通过以2-3g/kg体重口腔给予计算的。
以旨在用于内部上皮细胞(膀胱内灌注、精囊中的输液、关节腔中的
引入液、喷雾溶液)的溶液的形式给予的阿地米屈的量在0.5至20mg/Kg
体重之间的范围内。
应当认识到的是，可能需要根据患者的年龄和重量以及根据治疗病症
的临床严重度进行剂量的频繁改变。最后，将由治疗医生或兽判断准确剂
量和给予途径。
可以与选自由以下组成的组中的活性成分组合给予阿地米屈：十六酰
胺乙醇的噁唑啉衍生物、抗菌剂、反式创伤酸和透明质酸或它们的衍生物。
抗菌剂优选地选自松果菊提取物、须松萝提取物、地衣酸、植物鞘氨
醇、溴硝醇和它们的混合物。
在阿地米屈与透明质酸和反式创伤酸组合的情况中，优选地，后两种
活性成分将以透明质酸钠反式创伤酸复盐(sodiumhyaluronate
trans-traumatatedoublesalt)的形式存在。
当与以上定义的活性物质组合给予阿地米屈时，可以提供组合(即，
在相同的药物制剂中)、单独或顺序给予。
根据本发明的药物制剂可以具有按重量计的以下组成，余量仅涉及活
性成分(因此，不包括载体和赋形剂)：
阿地米屈50-100％，
PEA的噁唑啉衍生物0-5％，
透明质酸或它的衍生物0-5％，
反式创伤酸0-5％，
抗菌剂0-1％。
用阿地米屈的治疗是局部的(在外部上皮细胞或内部上皮细胞上)。
本发明的制剂因此可以包含根据选择的药物形式选择的药用添加剂
和赋形剂，例如，溶剂、粘性载体、增粘剂(丙烯酸聚合物)、缓冲剂、
防腐剂、抗氧化剂、胶凝剂、增稠剂等。
适用于人和兽用途两者的药物制剂可以优选地选自：滴注溶液、包含
在接合胶囊(关节囊，jointcapsule)中的溶液、用于内部或外部用途的凝
胶、喷雾溶液、滴眼剂、膏体、软膏、贴剂和油膏。
根据本发明，还可以将化合物配制为例如包含常用栓剂的基本组分
(如可可脂或其他甘油酯)的直肠制剂如栓剂、保留灌肠剂或微灌肠剂。
除了以上描述的制剂之外，还可以将化合物配制为沉积制剂。可以通
过灌输(例如，皮下或通过经皮或肌内途径)给予这种长效制剂。因此，
例如，可以用适当的疏水或聚合物材料(例如，以合适的油中的乳液的形
式)或离子交换树脂或作为微溶的衍生物(例如作为微溶的盐)来配制根
据本发明的化合物。
可以根据常规方法制备本发明的制剂，如Remington’sPharmaceutical
SciencesHandbook,MackPub.Co.,N.Y.,USA中描述的那些。
实验部分
对分离细胞的体外测试
方法
在5％CO2存在下以及37℃下，使培养的人角化细胞HaCaT在补充
有谷氨酰胺(2mM)、青霉素(400U/ml)、链霉素(50mg/ml)、10％FBS
(胎牛血清)的DMEM(Dulbecco改良伊格尔培养基)中生长。之后，
一旦达到70％细胞覆盖，则在37℃下在5％CO2存在下用10μM阿地米
屈或载体(对照，0.05％甲醇)刺激放置在6孔多孔中的细胞(9x105/孔)
24小时。24小时之后，在包含10pmol[2H]8花生四烯乙醇胺(AEA)和
50pmol[2H]52-花生四烯酸甘油酯(2-AG)、[2H]4十六酰胺乙醇(PEA)以
及[2H]2油酰基乙醇酰胺(OEA)的5体积氯仿/甲醇TRIS-HCl50mMpH7.4
(2:1:1)溶液中均一化细胞和上清液(Bisogno等人，1997)。通过二氧化
硅柱层析纯化用氯仿四次提取得到的有机脂质相，通过增加氯仿中的甲醇
浓度洗脱。在大气压力下，使用化学电离通过结合至质谱分析仪的液相色
谱(LC-APCI-MS)分析包含AEA、2-AG、PEA和OEA的90:10分数的
氯仿/甲醇(Marsicano等人，2002)。使用的设备包括通过APCI界面与
Shimadzu质谱仪(LCMS-2010)结合的ShimadzuHPLC(LC-10ADVP)。
电离源温度是400℃并使用了Phenomenex反相HPLC柱(C-18，5微米，
150x4.6mm)。由甲醇/水/醋酸(85/15/0.1％)的混合物组成的流动相以1
ml/min的速率通过柱。根据选择性离子监测(SIM)进行质谱测定[DiMarzo
etal.Nature2001；410:822-825]。选择的离子对应于356和348(氘化和非
氘化AEA的分子离子)、384.35和379.35(氘化和非氘化2-AG的分子离
子)、304和300(氘化和非氘化PEA的分子离子)、328和326(氘化和
非氘化OEA的分子离子)的质量/电荷值(m/z)。使用ANOVA比较表达
为pmol/mg的脂质提取物的量，随后是Student-Newman-Keuls测试。
使用匀浆大鼠脑膜(homogenatesratbrainmembrane)还测量了十六
酰胺乙醇降解酶(NAAA和FAAH)活性的最大降低[UedaNetalChem
PhysLipids.2000Nov；108(1-2):107-21；TsuboiK.EtalJBiolChem.2005
Mar25；280(12):11082-92]。
结果
与基础值(31.6±5.6)相比，得到的结果示出，用10μM阿地米屈刺
激的HaCaT细胞中的大麻模拟物(cannabinomimetic)PEA的水平
(66.4±9.6)明显较高(图1)。
没有观察到内源性大麻素(AEA、2-AG)和其他大麻模拟物(OEA)
水平的明显变化(图1)。
阿地米屈不会抑制PEA的分解代谢酶(FAAH和NAAA)的活性。
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动物中的体内测试
单碘醋酸钠诱导的骨关节炎
方法
使用HarlanItaly供应的Wistar系成年雄性大鼠(重200-250克)，在
用于实验之前将其放在标准饮食和环境条件(温度21±1℃，湿度60±10％，
光照12小时/天以及水和食物任意)的围栏中1周，进行实验。基于Kolbhen
提出的方法，通过在右膝的髌下区以2mg/25μL的剂量关节内单次注射单
碘醋酸钠(MIA)诱导大鼠中的膝骨关节炎，然后将其放回原地。MIA通
过抑制糖酵解，破坏软骨细胞的代谢并产生软骨变性在局部起作用。在诱
导骨关节炎时，将MIA溶解在无菌盐水中。在进行关节内给予之前，以
60mg/kg的剂量、0.2ml/hg的给予体积用溶解在盐水中的戊巴比妥钠腹腔
(i.p.)麻醉大鼠。在它们的右膝接受MIA注射的动物代表骨关节炎(OA)
组。在相同的右膝仅经受关节内注射溶剂的第二组大鼠代替的是对照组。
疼痛的行为评估
机械性痛觉超敏的评估
为了测量机械性痛觉超敏(对正常无痛刺激的疼痛反应)，使用Von
Frey测试仪(UgoBasile，Varese，Italy)，由可以在底座有机玻璃平台上
移动的触觉刺激器、由放置在底座平台的角上的四个柱支撑的金属网格、
进一步细分为测量之前将动物放入至少15-30分钟的两个隔室以及电子微
处理器组成的仪器。将触觉刺激器定位在设置有允许操作者在平台上移动
它的把手的铝圆柱体的内侧。在圆柱体内侧，存在定位在圆柱体以上的导
致0.5mm直径的钢丝上升的电子触发器；该机制的启动按钮位于把手的
两侧。由于定位在圆柱体以上的镜子，沿着细丝，可以在跖面的正确点施
加刺激并可以监测脚部的移动。微处理器设置有示出直到从机械刺激除去
爪的等待时间(秒)和由细丝施加的爪上的力(克)的LCD显示器。为
了在老鼠中测量，设定20秒的最长等待时间和对应于5克的最大力。
通过数显卡尺评估膝盖水肿
为了评估MIA注射之后动物右膝中的水肿的形成，使用数字手动游
标卡尺(测量容量0-150mm；分辨率：0.01mm；符合ROHS的电子数显
卡尺-2BiologicalInstrumentsSNC,Italy)。通过评估每只动物膝盖骨处的左
膝和右膝的直径(表达为mm)进行手动测量。将水肿计算为右膝和左膝
体积之间的差。数据示于图2中。
生物化学标记物的评估
测定脊髓中的肿瘤坏死因子(TNF-α)水平
使用利用BiosourceInternationalInc的商业试剂盒(kit)的ELISA(酶
联免疫吸附测定法)免疫酶测定仪作出滑液中TNF-α水平的确定。该方法
使用抗原被捕获在两层抗体之间且出于该原因被称为ELISA夹层的步骤。
将样品和生物素化的抗体添加至用对TNF-α特异性的抗体涂覆的微量滴
定板的孔，并进行第一次温育，在此过程中，样品中的特异性细胞因子与
由板上的固定抗体暴露的抗原结合位点和存在于溶液中的生物素化的抗
体的位点两者相互作用。在用一系列洗涤除去未结合材料之后，添加酶抗
生蛋白链菌素-过氧化物酶(enzymestreptavidinperoxidase)，其结合至生
物素化的抗体。在第二次温育以及随后洗涤除去未结合的酶之后，添加包
含底物(稳定的色原)的溶液。酶反应之后，产物生成，用分光光度计测
量其染色强度且该染色强度直接与样品中的TNF-α的浓度成正比。
结果
治疗
第0天(T0)关节内给予MIA。
第1、8、15天关节内给予阿地米屈。采用三种剂量：1.5；15和150μg/
注射。
炎症和疼痛参数的评估
相对于参数本身在不同时间测量多个参数(例如，仅在MIA之后的
第一周评估炎症参数，在给予阿地米屈之前以及60min之后总是评估疼
痛)。
得到的结果示出阿地米屈具有强抗炎症效果，该效果是直接剂量依赖
性的且在所有分析时间是显著的。为了评估剂量响应，利用对于使用的每
个剂量的曲线下的面积进行回归分析。
滑液中的生物化学标记物TNF-α的评估
对水肿的作用伴随着滑液中的TNF-α水平的降低(图3)。
人类的体内测试
膀胱疼痛综合征(BPS)患者的膀胱内灌注
方法
在完全排空膀胱本身之后，通过导管将包含2％阿地米屈和0.1％透
明质酸钠盐的无菌溶液灌注至第7号女性患者的膀胱中。所有患者具有确
诊的BPS(膀胱疼痛综合征)。大多数时间，患者具有与其他盆腔疾病(外
阴前庭4/7；IBS(肠易激综合征)2/7；纤维肌痛综合征1/7、反复尿路感
染(RUTI)3/7)的合并症。
作为攻击疗法(每周一次膀胱内灌注，持续8周)进行治疗，随后是
持续疗法(每月一次灌注，持续6个月)。
使用专用日志，控制白天和晚上过程中的排尿频率(测量为12小时
内的排尿次数)和膀胱充满的不适，分析疼痛、盆腔区的重量和灼热感(通
过数值等级VAS测量治疗前、攻击疗法结束后和持续疗法结束后的所有
三组参数)。
结果
结果示于下表中。
评估的所有参数示出在用阿地米屈治疗之后的显著改善。
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制剂的实施例
实施例1-用于膀胱内灌注的无菌溶液
每50ml小瓶包含：
‐阿地米屈1000mg，
‐十六酰胺乙醇噁唑啉500mg，
‐透明质酸钠盐50mg，
‐反式创伤酸50mg，
‐蒸馏水根据需要至50ml。
实施例2-用于内部用途的无菌防粘连凝胶
500ml管包含：
‐阿地米屈15,000mg，
‐透明质酸钠盐2,500mg，
‐无热源蒸馏水根据需要至500ml。
实施例3-用于直肠用途的浓溶液
10ml微灌肠剂包含：
‐阿地米屈200mg，
‐醋酸维生素E5,000mg，
‐卡必醇5,000mg，
实施例4-粘性尿道内溶液
10ml单剂量可压缩容器包含：
‐阿地米屈200mg，
‐透明质酸钠盐10mg，
‐反式创伤酸10mg，
‐植物鞘氨醇10mg
‐地衣酸10mg，
‐聚乙烯醇20mg，
‐NoveonAA115mg，
‐生物素1mg。
实施例5-用于关节内浸润的无菌溶液
2ml小瓶包含：
‐阿地米屈30mg，
‐十六酰胺乙醇噁唑啉15mg，
‐透明质酸钠盐10mg，
‐磷酸盐缓冲液pH7.0根据需要至2ml，
实施例6-用于兽用途的神经性止痒喷雾溶液
每100ml喷雾瓶包含：
‐阿地米屈2000mg，
‐植物鞘氨醇20mg，
‐反式创伤酸15mg，
‐卡必醇根据需要至100ml。
实施例7-用于角膜擦伤应用的滴眼剂
每1ml单剂量可压缩容器包含：
‐阿地米屈25mg，
‐透明质酸钠盐2.0mg，
‐反式创伤酸2.5mg，
‐氯化钠3.5mg，
‐磷酸二氢钾0.5mg，
‐水根据需要至1ml。
实施例8-用于咽腔粘膜应用的凝胶
每250ml容器包含：
‐阿地米屈6,000mg，
‐十六酰胺乙醇噁唑啉2,500mg，
‐羧甲基纤维素钠5,000mg，
‐NoveonAA1500mg，
‐具有添加的防腐剂的水，根据需要至250ml。
‐实施例9-用于角膜应用的凝胶
每10ml管包含：
‐阿地米屈100mg，
‐透明质酸钠盐100mg，
‐反式创伤酸10mg，
‐NoveonAA1100mg，
‐卡波姆Ultrez10NF20mg，
‐磷酸二氢钾5mg，
‐硫汞撒1mg，
‐蒸馏水根据需要至10ml。
‐实施例10-用于喷射气雾剂的溶液
‐每5ml无菌小瓶包含：
‐阿地米屈150mg，
-蒸馏水根据需要至5ml。