一种植物挥发油在制备治疗糖尿病药物中的应用 技术领域 本发明涉及芸香科柑桔属植物柠檬油提取物的医学用途，尤其涉及其在制药领域的新用途，具体涉及其在制备治疗糖尿病的药物方面的新用途。背景技术柠檬油来源于芸香科植物柠檬Citrus limon(L.)Burm.f.及其栽培变种的新鲜成熟果实和果皮。
柠檬油主要用于食品、洗涤剂和化妆品等香精。
从芸香科柑桔属植物柠檬的果实、果皮和叶中提取挥发油的方法：
采用芸香科植物柠檬Citrus limon(L.)Burm.f.的新鲜成熟果皮，撕碎后直接冷榨，再经过离心或者过滤，得到挥发油。选用清洁的柠檬类果实送入不同的磨油机内取油。主要有FMC工艺和布朗工艺(BOE)，在一些地区和国家还有特殊的磨油机。
这种冷榨的方法可获得冷榨油和精油，也可以通过主要是以水蒸汽蒸馏所得到的与水不相混合的挥发性油状成份。
也可以采用市售品。获得自中国江西的吉水南方药物油厂，或美国的佛罗里达化学公司生产的柠檬油。
糖尿病是一种复杂的疾病，其特征为高血糖症。这个疾病可以分成两个主要的子集：胰岛素依赖型(IDDM)，也被称为1型糖尿病，和非胰岛素依赖型(NIDDM)，也被称为2型糖尿病。
1 型糖尿病在机体的免疫系统摧毁了胰岛β细胞时形成，这细胞是在机体中唯一的制造调节血糖的激素胰岛素的细胞。1型糖尿病可能占全部已诊断的糖尿病的5-10％
2 型糖尿病可能占全部已诊断的糖尿病的90-95％。它通常开始时有胰岛素抵抗，一种以细胞不能完全地利用胰岛素的紊乱。当需要胰岛素增加分泌时，胰腺逐渐丧失它生产胰岛素的能力。
1型和2型糖尿病都能够导致并发症微血管、大血管和神经病变。糖尿病能够影响机体的许多部分，并能够导致系列并发症例如失明、肾脏损伤、和截肢。
2003年，中国疾病预防和控制中心估计，中国大约有4000万糖尿病人。2005年，美国国家卫生部疾病预防中心估计，美国有2080万人有糖尿病，占人口的7.0％。2002年，在美国，糖尿病的总费用是1320亿美元(包括直接费和间接费)，直接的医疗费用是920亿美元，间接费用是400亿美元(包括伤残，丧失工作能力和过早死亡)。2005年欧盟估计，欧洲有大约2250万人患有2型糖尿病。2005年，世界卫生组织估计，全球糖尿病患者为1.8亿。
目前，治疗的2型糖尿病的药物主要有下面几类：
1.双胍类药物。疗效低，副作用较大，久用常产生乳酸酸中毒。
2.磺尿类药物。副作用较大，久用常产生低血糖症。并且，可使胰小岛发生疲劳，甚至衰竭，内源性的胰岛素分泌功能进一步减少，发生药物继发性失效。
3.阿卡波糖类药物。仅仅延迟葡萄糖在小肠的吸收，降低餐后血糖水平。它不能刺激胰岛素的分泌，也不能改变空腹胰岛素和C肽水平。
4.上述这些药物配合胰岛素或者单独使用胰岛素治疗2型糖尿病，最终内源性的胰岛素分泌功能将完全丧失，胰岛素的依赖性终究要来到(世界卫生组织糖尿病研究组。WHO技术系列报告844，1994)。
上述所有的药物都有比较强而持久的降低血糖的作用，但不能稳定地降低血糖水平。同时，病人将需要逐年加大这些药物的治疗剂量。英国糖尿病前瞻性研究指出，所有药物都不能制止空腹血浆葡萄糖水平持续性上升，表明胰岛细胞功能进行性衰竭。(英国糖尿病前瞻性研究组，英国糖尿病前瞻性研究，1977-1992)
显然，目前世界上有许多药物包括化学药物和天然草药，都有比较持久的降低血糖的作用，但是，它们都不能稳定地降低血糖，也不能停止用药，糖尿病人将终身用药。因此，可以说没有任何药物能够治疗痊愈糖尿病。
发明内容 本发明的目的在于提供柠檬油的医学新用途。即它们在制药领域、在制备治疗糖尿病的药物方面的应用。本发明通过动物实验和临床观察发现，柠檬油具有明显而强大的降低血糖的作用。并且可能治疗痊愈糖尿病。
通过动物实验，发现柠檬油有降低药物STZ-诱导的1型和和2型糖尿病模型大鼠血糖的明显作用，治疗效果显著。对健康大鼠无降糖的作用。
在本发明的动物实验中，本品对药物诱导的糖尿病大鼠表现出明显的降血糖作用。经口服给予实验动物柠檬油提取(2.4ml/kg/天)后0.5-2小时内，动物血浆葡萄糖最大降低幅度可达50％～100％，药物作用在用药2小时后逐渐消失。
本发明能降低药物(链脲佐菌素，streptozotocin)诱导所致的重度2型糖尿病模型大鼠的空腹血糖和糖尿病并发症症状。将柠檬油灌胃给予糖尿病大鼠，0.5-2小时后，实验大鼠的血糖明显下降。
在临床实验中，2型糖尿病病人在每日3餐后服用柠檬油，为期12周。结果表明，该药能明显降低用药者餐后的血糖水平。降低血糖的速度快速、稳定。
动物实验和临床实验结果显示，本发明柠檬油的新的医学用途，发现柠檬油具有较强而平稳的降低血糖的作用，而这种作用是从来没有报道过的。
本发明可以含有一种或者多种药学上可接受的载体，即药学领域常规的药物载体，如水、淀粉、纤维素、明胶、琼脂、β-糊精、豆磷脂或卵磷脂等，本发明的药物可通过口服和注射的方式给药。口服给药时，优选的形式是片剂、包衣片剂、颗粒剂、粉末、软胶囊和栓剂。
本发明的化合物d-柠檬烯的常用剂量可以根据用药途径、患者病情的严重程度，糖尿病的类型等变化，日剂量可以是柠檬油1.8-6.0ml，优选每日剂量3ml。每日进餐三次，分三次服用。或者服药的次数与进餐次数相同。在第一口食物入口后的1-10分钟内服用。
单独使用柠檬油时，部分患者用药后有轻度口干现象；少数患者可出现头昏、乏力、心悸、便秘或者腹泻、唇疱疹等，在减量或停药后反应可消失。健康人单独服用柠檬油，并不降低餐后或者空腹血糖水平。
具体实施方式 下面将描述本发明的几个实施例，但本发明的内容完全不局限于此。
发明的详细说明
实施例1
从上述新鲜果皮或者干燥果皮中提取柠檬油：
采用芸香科植物柠檬Citrus limon(L.)Burm.f.的新鲜成熟果皮，撕碎后直接送进压榨机内冷榨。
1.压榨
通过压榨机将果皮中的精油压出。
2.过滤或分离
从冷榨机或者压榨机出来的油水混合物，带有较多的果皮渣，具有不定的黏稠度，需要进行过滤和多次沉淀，以减轻离心分离机的压力。滤渣可经蒸馏器回收精油。
3.离心分离
油水的分离采用高速油水分离机，进行油水分离。分离完毕后，应让分离机空转2-3min，大量冲入清水，将残存的油冲出。为了促使精油从油乳液中分离，可以加入大约2％的氢氧化钠和少量硫酸钠于榨油用的水中。
4.精制和脱蜡
轻微混浊的粗精油，用无水硫酸钠脱水，然后静置澄清透明后滤去残渣，再离心分离。混浊的粗精油，先经静置沉淀，再用无水硫酸钠过滤。沉淀残渣，再离心分离。
将粗精油置于低温下静置，蜡质析出后，再用离心分离法除去。8℃条件下，6d左右即可析出。在-25℃下，2d可析出。
5.将挥发油制成可服用的药片
将挥发油与一定量的β—糊精以喷雾的方式混和，加入一定量的水，保持在一定的温度下，搅拌1h，冷藏放置24h，滤过、抽干，加少量乙醚洗涤2次，在50℃以下干燥为粉末，再加入足量的水。挥发油与β—CD的投料比为1：9(ml：g)，搅拌速度100r/min，包含温度为40℃，β—糊精与加入水的比例为1：7。
实施例2
2型糖尿病模型大鼠实验
2型糖尿病大鼠实验模型的建立。采用速发型类似NIDDM的模型。一次足量给予动物Wistar大鼠链尿佐菌素(STZ)，造成B细胞大量损伤，胰岛素的合成和分泌减少，引起糖代谢紊乱，导致糖尿病。将STZ用0.1mol/L无菌枸掾酸钠缓冲液新鲜配制成2％的溶液，调节PH值至4.5，滤菌器过滤除菌。大鼠禁食18小时按50-65mg/kg尾静脉一次注射溶液，24小时血糖大于等于16.7mmol/L，即可作为成功模型。
该速发型模型通常单剂量达到50mg/kg体重不出现自然缓解现象，第6-27天，胰岛有一定程度再生，功能部分恢复，但未达到正常，仍然处于高血糖状态，适合于NIDDM的相关研究。链尿佐菌素注射后10小时内应给予大鼠喂饲10％葡萄糖，以防止低血糖。
在相关的实验中，STZ溶解入0.1M柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液(PH4.2)以组成60-65mg/kg重量溶液，溶液立即注射入尾静脉。10天后，在确定检验血糖水平充分高后，实验材料被给予。治疗7天，使用正规方法从动物获得血，一个血糖监测系统强生公司的SureStep血糖机被利用于测量血糖水平。
在相关的饲养方法中，使用7周大的雄性Wistar大鼠(重量210，+-.10g)每组12个。老鼠在房间温度摄氏22度下饲养，湿度50％和光照-黑暗各12小时(7:00大约19:00)。自由进食和饮水。每天在禁食4小时后，以灌胃的方式加入挥发油提取物以2.4ml/kg身体重量进入老鼠体内。灌胃后2小时，从大鼠尾静脉抽血，检验其血糖水平。
实验结果如表2显示，P<0.01，有非常显著的差异，疗效非常显著。说明柠檬油能够明显降低2型糖尿病模型大鼠的空腹血糖。
表1:2型糖尿病模型大鼠治疗前后比较(x±S)
动物数空腹血糖药物(ml/kg)治疗前1027.14±1.154治疗后1019.39±6.064柠檬油2.4t3.970p<0.01
实施例3：
1型糖尿病大鼠实验
1型糖尿病大鼠实验模型的建立。最近几年，更多的人们已经明确表达观察到了STZ-诱导的实验糖尿病模型，虽然，原则上它是1型模型，可能用于如同一个2型模型。无论如何，因为STZ-诱导的实验糖尿病模型老鼠在发病后的第1-6天，类似依赖于胰岛素的1型糖尿病，进一步的研究是必须小心地去检测血糖水平。
STZ-诱导的糖尿病大鼠，在注射STZ后的第3-6天中，每天在禁食4小时后，以灌胃的方式加入挥发油提取物以2.4ml/kg身体重量进入老鼠体内。灌胃后2小时，从大鼠尾静脉抽血，检验其血糖水平。
实验结果表明，柠檬油对1型糖尿病模型大鼠有明显治疗效果。(见下面的表2)
表2 IDDM组和柠檬油提取物治疗组血糖水平的比较(x±S)
实施例4
一男性患者，56岁，2型糖尿病。空腹血糖在正常范围内，餐后血糖在15.6mmol/L(281mg/dl)范围内。餐后4-6小时后，无进食，常发生低血糖。治疗前15天内不使用任何药物，通过7天的治疗，每天三餐，在第一口饭后5-10分钟内，口服给予柠檬油1ml，早餐后血糖最高峰值11.8mmol/L(212mg/dl)在1.25h。继续治疗12周，早餐后血糖最高峰值10.4mmol/L(212mg/dl)前移到0.75h。有时，晚餐后，不服任何药物，餐后血糖在正常范围内，午餐后，不服药，餐后血糖或者在正常范围内，或者血糖水平稍高。但早餐仍然不能停药。餐后6-8小时后，无进食，无低血糖反应。病人在此期间保持适度的中等饮食。
实施例5
一妇女，58岁，糖尿病历史15年，空腹血糖在8.6-13mmol/L(155-234mg/dl)之间，餐后血糖最高为23mmol/L(414mg/dl)。通过7天的治疗，每天三餐，在第一口饭后5-10分钟内，口服给予柠檬油1ml，早餐后血糖最高峰值18.7mmol/L(337mg/dl)在1.25h。治疗前后对比，血糖平均降低6.99mmol/L(126mg/dl)病人在此期间保持适度的中等饮食。
实施例6
健康志愿者的实验
一男性，24岁，健康无任何疾病。空腹血糖在4.4-5.3mmol/L(79-96mg/dl)波动，餐后血糖在6-7mmol/L(108-126mg/dl)之间。通过7天的治疗，每天三餐，在第一口饭后5-10分钟内，口服给予柠檬油1ml，早餐后血糖最高峰值5.6-8.0mmol/L(101-144mg/dl)在0.5h。治疗前后对比，血糖基本无变化。受试者在此期间保持适度的中等饮食。
实施例7
健康志愿者的实验
一妇女，46岁，健康无任何疾病。空腹血糖在5.0-5.4mmol/L(79-96mg/dl)波动，餐后血糖在8-12.2mmol/L(144-202mg/dl)之间。糖耐量实验异常。通过7天的治疗，每天三餐，在第一口饭后5-10分钟内，口服给予柠檬油1ml，早餐后血糖最高峰值10.3-11.7mmol/L(185-211mg/dl)在0.5h。治疗前后对比，血糖基本无变化。受试者在此期间保持适度的中等饮食。
工业应用性
柠檬油原料主要来自芸香科植物柠檬Citrus limon(L.)Burm.f.及其栽培变种的新鲜成熟果实和果皮(Pericarp)，产地包括欧洲、亚洲、非洲、澳洲、北美和南美洲。其中产量最高的是南美洲的巴西和美国的佛罗里达州，其次是澳大利亚和南非。原料产地遍及全世界，价格低廉。
其次，柠檬油的加工方法简单，最简单的加工方法是通过压榨的方式获得柠檬油。
上述精油可以方便地通过高剪切乳化机进行油水混合，制成注射针剂；或者以喷雾方式加入β-糊精中制成片剂，也可以直接制成油剂软胶囊。因此，适合于工业化生产。