真姬菇来源提取物的制造方法.pdf

本发明提供真姬菇来源提取物的制造方法，其为由真姬菇子实体或菌丝体制造真姬菇来源提取物的方法，作为提取溶剂使用碱性水性溶剂；通过该制造方法获得的真姬菇来源提取物；含有该提取物的食品和药品。

1.  一种真姬菇来源提取物的制造方法，其为从真姬菇子实体或菌丝体制造真姬菇来源提取物的方法，作为提取溶剂使用碱性的水性溶剂。

2.  权利要求1所述的制造方法，其包括通过酸中和所得提取物的步骤。

3.  权利要求1所述的制造方法，其还包括添加乳化剂的步骤。

4.  权利要求1所述的制造方法，其中碱性水性溶剂为碳酸钠水溶液、氢氧化钠水溶液或阴离子交换树脂混悬液。

5.  权利要求1所述的制造方法，其中利用提取溶剂的提取在40～120℃的温度下进行。

6.  通过权利要求1所述的制造方法获得的真姬菇来源提取物。

7.  权利要求6所述的真姬菇来源提取物，其以固体物换算计含有0.4重量％以上的萜化合物。

8.  一种食品，其含有权利要求6或7所述的真姬菇来源提取物。

9.  一种药品，其含有权利要求6或7所述的真姬菇来源提取物。

10.  一种萜化合物的制造方法，其含有下述(a)和(b)各步骤:
(a)利用碱性水性溶剂处理真姬菇子实体或菌丝体获得真姬菇来源提取物的步骤；
(b)由步骤(a)获得的提取物精制萜化合物的步骤。

11.  权利要求10所述的制造方法，其中碱性水性溶剂为碳酸钠水溶液、氢氧化钠水溶液或阴离子交换树脂混悬液。

12.  权利要求10或11所述的制造方法，其中利用碱性水性溶剂的处理在40～120℃的温度下进行。

真姬菇来源提取物的制造方法
技术领域
本发明涉及真姬菇来源提取物的制造方法、通过该制造方法获得的真姬菇来源提取物、含有该提取物的食品及含有该提取物的药品。本发明还涉及真姬菇来源的萜化合物的制造方法。
背景技术
近年来，由担子菌类探索生物活性物质正在盛行，有各种报告。作为真姬菇来源的生物活性成分，已知所谓SBS的物质具有抑制血小板凝聚作用和抗癌启动子作用(例如专利文献1)。该SBS为作为苦味成分的萜化合物(萜类)的一种，在真姬菇中也含有其它的各种萜化合物(例如非专利文献1)。
萜化合物为存在于多种植物的有机化合物，碳数为5的倍数、来源于由n个异戊二烯或异戊烷构成的前体物质。n＝2者为单萜、n＝3者为倍半萜、n＝4者为二萜、n＝5者为二倍半萜、n＝6者为三萜、n＝8者为四萜、更多者称为多萜。已知萜化合物还具有诱导凋亡的作用，例如，存在很多三萜对凋亡诱导作用的报告等。
已知真姬菇来源的萜化合物难溶于水中(例如专利文献1)，作为提取该萜化合物的方法已知有利用乙酸乙酯等有机溶剂等由真姬菇子实体进行提取的方法(例如专利文献1)、利用70％乙醇提取热处理的真姬菇子实体的方法(例如非专利文献1)。
专利文献1:日本特开平4-104795号公报
非专利文献2:Sawabe A等3人，Journal of Mass Spectrometry，1996年，Vol.31，P921-925
发明内容
发明所要解决的技术问题
通过上述现有方法由真姬菇提取萜化合物时，必须使用大量的有机溶剂，例如乙醇、乙酸乙酯。然而，乙醇或乙酸乙酯作为危险物被对待，在进行工业化时，从安全性的观点出发需要充分注意其处理、保管、管理、使用等。另外，还必需用于它们的保管、管理的设备。这些情况成为提高富含萜化合物的真姬菇来源提取物制造成本的要因，在工业化时成为很大的课题。
另外，当在食品中使用通过上述现有方法获得的真姬菇来源提取物时，具有有机溶剂残留于提取物中有损食品风味的问题，当有机溶剂为毒性物质时具有给人体造成不良影响的危险。即便为了回避这些问题而加以除去残留有机溶剂的步骤，也难以完全地除去残留有机溶剂。另外，由于加入除去有机溶剂的步骤，制造成本还会进一步提高。
因此，本发明的目的在于在不使用有机溶剂的情况下高效地从真姬菇中提取萜化合物，以低成本提供大量含有萜化合物的真姬菇来源提取物。
用于解决技术问题的方法
本发明人等发现通过利用碱性提取溶剂处理真姬菇，可以在不使用有机溶剂的情况下制造富含萜化合物的真姬菇来源提取物，进而完成了本发明。
即，概括地说，本发明的第1发明涉及真姬菇来源提取物的制造方法，其为由真姬菇子实体或菌丝体制造真姬菇来源提取物的方法，作为提取溶剂使用碱性的水性溶剂。第1发明中，还可以包括利用酸中和所得提取物的步骤。另外，在第1发明中，还可以进一步包括添加乳化剂的步骤。
第1发明中所用的碱性水性溶剂可以举出碳酸钠水溶液、氢氧化钠水溶液或阴离子交换树脂混悬液。
在第1发明中，作为利用提取溶剂的提取可以举出在40～120℃的温度下进行提取的例子。
本发明的第2发明涉及真姬菇来源提取物，其通过第1发明的制造方法获得。作为第2发明的真姬菇提取物可以举出以固体换算含有0.4重量％以上萜化合物的提取物。
本发明的第3发明涉及含有第2发明的真姬菇来源提取物的食品。
本发明的第4发明涉及含有第2发明的真姬菇来源提取物的药品
本发明的第5发明涉及萜化合物的制造方法，其包括以下步骤:(a)利用碱性提取溶剂处理真姬菇子实体或菌丝体获得真姬菇来源提取物的步骤、及
(b)由通过步骤(a)获得的提取物精制萜化合物的步骤。
第5发明所用的碱性水性溶剂可以举出碳酸钠水溶液、氢氧化钠水溶液或阴离子交换树脂混悬液。
在第5发明中，利用碱性水性溶剂的处理可以举出在40～120℃的温度下进行提取的例子。
发明的效果
本发明提供富含萜化合物的真姬菇来源提取物的制造方法。该制造方法由于在制造中并非必需有机溶剂，因此可以制造适于食品的提取物。而且，与现有的制造方法相比，可以降低制造成本。另外，通过该制造方法可以提供富含萜化合物、适于食品的真姬菇来源提取物。另外，通过本发明可以提供含有该真姬菇来源提取物的食品及药品。而且，可以提供廉价的萜化合物的制造方法。
附图说明
图1为表示真姬菇来源提取物的反相色谱结果的图。图中A、B、C、D分别表示利用碱性溶剂进行提取的结果、利用蒸馏水进行提取的结果、利用KCl水溶液进行提取的结果和利用酸性溶剂进行提取的结果。
具体实施方式
真姬菇在自然界中于秋天会丛生或离生于各种阔叶树的枯树上，与其它的蘑菇相比，由于外形良好、易于咬断的肉质，因此作为美味的蘑菇被采摘食用。另外，近年来确立了使用在锯末中混合有米糠或其它营养源的培养基，利用瓶子或箱子进行栽培的菌床人工栽培法，可以与季节无关地在一年中稳定地收获蘑菇。即，成为本发明提取物原料的真姬菇可以廉价地获得，作为药品或健康食品原料也适用。
作为原料使用的真姬菇可以是天然品也可以是人工栽培品，优选可以举出榆干离褶伞M-8171(FERM BP-1415、保藏日:1986年8月23日)或榆干离褶伞K-0259(FERM P-12981、保藏日:1992年6月2日)(这些菌株均保藏于独立行政法人产业技术综合研究所专利生物保藏中心(305-8566日本国茨城县筑波市东1丁目1号1中央第6))。另外，这些菌株作为商品名“やまびこほんしめじ(注册商标)”或“Superやまびこほんしめじ(注册商标)”而流通于市场。作为真姬菇，使用人工栽培品时，优选使用可以提高所制造的真姬菇来源提取物中的萜化合物含量的物质，例如用含有豆皮(マメカワ)的培养基培养的真姬菇的子实体。子实体可以以株的形式直接作为原料使用，还可以粉碎后作为原料使用，未处理的物质可以作为原料使用，经加热干燥、日光干燥、冷冻干燥等干燥的子实体干燥物也可以作为原料使用。另外，作为原料还可以使用真姬菇的菌丝体或其冷冻干燥物。另外，通过热水洗涤上述子实体或菌丝体后也可以作为原料使用。
本发明人等通过使用碱性水性溶剂作为提取溶剂，成功地在不使用有机溶剂的情况下制造了富含难溶于水的萜化合物的真姬菇来源提取物。予以说明，本发明中，作为萜化合物可以举出上述非专利文献1所记载的真姬菇来源的多萜。
作为本发明真姬菇来源提取物的制造方法中使用的提取溶剂，只要是不含有机溶剂的碱性水性溶剂即没有特别限定，例如可以使用含有无机碱(例如氢氧化钠、氢氧化钾等碱金属的氢氧化物；氢氧化镁、氢氧化钡等碱土类金属的氢氧化物；碳酸钠、碳酸钾等碱金属的碳酸盐；碳酸镁、碳酸钡等碱土类金属的碳酸盐；碳酸氢钠、碳酸氢钾等碱金属的烃盐；碳酸铵；氨等)的碱性水溶液、含有有机碱(例如醋酸钠、丙酸钾等的碱金属有机酸盐；甲酸镁、醋酸镁等碱土类金属的有机酸盐；三甲胺、乙胺、二乙胺、三乙胺、丙胺、丁胺、哌啶等胺类；吡啶等含氮杂环化合物等)的碱性水溶液以及含有阴离子交换树脂的碱性混悬液，其中可以优选使用碳酸钠水溶液、氢氧化钠水溶液或阴离子交换树脂混悬液。
而且，在中和提取物时难以产生来自提取物的沉淀物，中和后的提取液难以发泡，因此可以更为优选地使用阴离子交换树脂混悬液。
提取溶液中的无机碱、有机碱或阴离子交换树脂的含量没有特别限定，可以按照提取溶剂的pH达到后述范围内进行调整。
另外，只要提取溶剂的pH为碱性，则没有特别限定，优选为8～12、更优选为9～12。
利用提取溶剂的处理温度只要是可以提取规定量的萜化合物的温度则没有特别限定，例如可以在4～120℃下处理，从可以在短时间内提取更多萜化合物的方面出发，优选在高温下进行处理。作为这种处理温度，优选为40～120℃、更优选为80～110℃、进一步优选为85～105℃、最优选为90～100℃。
利用提取溶剂的处理时间随着处理温度而不同，例如为4～60℃的处理温度时优选为16～24小时，为90～105℃的处理温度时优选为0.5～5小时。
进一步包括利用酸中和通过上述制造方法获得的提取物的步骤的真姬菇来源提取物的制造方法也包含在本发明的真姬菇来源提取物的制造方法中。作为中和所用的酸，当将提取物用于食品中时，优选作为食品添加剂使用的酸。作为食品添加剂使用的酸，例如可以举出己二酸、柠檬酸、葡萄糖酸、琥珀酸、醋酸和酒石酸。其中最优选柠檬酸。
另外，在上述制造方法中，优选进一步包括添加适当乳化剂的步骤。通过利用乳化剂的稳定化，可以抑制难溶于水的萜化合物的沉淀，另外，还可以抑制吸附于制造步骤中的机械器具、副材料上。乳化剂的添加时期可以是利用碱性水性溶剂的提取前、提取后或提取中的任何时期，例如后述实施例4所述，优选在提取后添加。另外，优选在乳化剂的添加后实施上述的中和步骤。作为本发明中使用的乳化剂并无特别限定，例如可以使用聚甘油脂肪酸酯、山梨醇酐脂肪酸酯、丙二醇脂肪酸酯、硬脂酰乳酸钙、大豆来源卵磷脂、蛋黄来源卵磷脂等。
乳化剂的添加量并无特别限定，例如相对于100重量份提取物优选为0.1～3重量份。
通过进一步从利用上述制造方法获得的提取物中除去提取残渣，可以获得本发明的真姬菇来源提取物。作为除去提取残渣的步骤，可以举出离心分离、过滤、抽滤，但更优选使用适于大规模生产的过滤法。在进行过滤时，可以使用过滤助剂，作为过滤助剂可以使用Celite#545。
本发明中的提取物是指通过使用提取溶剂进行提取操作的步骤而获得的物质。另外，对该物质进一步实施过滤、离心分离、浓缩、抽滤、分子筛、中和等处理而获得的物质也包含在本发明的提取物中。另外，通过利用公知的方法分离上述物质而获得的馏分或反复进行数次分离操作而获得的馏分也包含在本发明的提取物中。作为上述分离方法，可以举出提取、分别沉淀、柱层析、薄层层析等。
本发明中，本发明提取物的形状没有特别限定，可以是粉状、固体状、液体状的任何形状。制成粉状时，没有特别限定，可以将利用碱性水性溶剂从原料提取出的提取物浓缩，进而添加糊精、蔗糖脂肪酸酯、乳糖等赋形剂，进行干燥、粉碎从而获得本发明的提取物。另外，还可以使用利用公知方法对该提取物进行制粒而获得的粒状固体物作为本发明的提取物。作为制粒方法并无特别限定，可以举出转动制粒、搅拌制粒、流化床制粒、气流制粒、挤出制粒、压缩成型制粒、粉碎制粒、喷射制粒或喷雾制粒等。另外，作为液体状的提取物除了可以举出通过上述提取物的制造方法获得的液体本身、其浓缩物或稀释物之外，还可以举出将上述粉状提取物溶解于液体、例如水或醇等中制成的液体状物质。
本发明的真姬菇来源提取物为特征在于大量含有作为真姬菇来源生理活性成分的SBS等萜化合物，例如以固体换算含有0.4重量％以上萜化合物的提取物，更具体地说，为以固体换算含有0.4重量％～1.0重量％萜化合物的提取物。以固体换算的重量％是指以百分率表示目标成分的重量占利用旋转蒸发仪等干燥液体时而获得的整个干燥物重量比重的值。
本发明的食品含有上述真姬菇来源提取物。本发明的食品由于大量含有SBS等真姬菇来源的萜化合物，因此可以期待具有血小板凝聚抑制作用、抗癌启动子作用及抗癌作用。作为该食品还可以制成带有用于表现例如血小板凝聚抑制作用、抗癌启动子作用或抗癌作用所产生所需效果的标识的健康食品(特定保健用食品)。
本发明的食品制造方法没有特别限定。例如配合、烹饪、加工等按照一般食品的方法进行即可，可以通过它们的制造方法制造，只要所得食品中含有本发明上述提取物即可。另外，还可以将本发明的真姬菇来源提取物本身制成食品。
予以说明，本发明食品中的“含有”是指含有、添加和/或稀释。这里，“含有”是指食品中含有本发明所用提取物的状态，“添加”是指向食品的原料中添加本发明中所用提取物的状态，“稀释”是指向本发明所用提取物中添加食品原料的状态。
本发明的食品没有特别限定，例如可以举出谷物加工品(例如小麦粉加工品、淀粉类加工品、预混合加工品、面类、通心粉类、面包类、黄豆酱类、荞麦类、面筋、米粉、粉条、包装年糕等)、油脂加工品(例如增塑性油脂、天妇罗油、色拉油、蛋黄酱、调味品等)、大豆加工品(例如豆腐类、豆汁、纳豆等)、肉类加工品(例如火腿、咸肉、压缩火腿、香肠等)、水产制品(例如冷冻鱼糜、蒲牟、竹轮、半片、油炸鱼丸、汆鱼丸、咸鲑鱼、鱼肉火腿、香肠、鲣鱼块、鱼籽加工品、水产罐头、佃煮等)、乳制品(例如原料奶、奶油、乳酪、黄油、干酪、浓缩奶、奶粉、冰淇淋等)；蔬菜和水果加工品(例如糊类、果酱类、咸菜类、水果饮料、蔬菜饮料、混合饮料)；糕点类(例如巧克力、饼干类、带馅面包、蛋糕、年糕点心、米果类)；酒类(例如日本酒、中国白酒、葡萄酒、威士忌、烧酒、伏特加酒、白兰地、杜松子酒、罗姆酒、啤酒、清凉醇饮料、水果酒、利久酒)；喜好饮料(例如绿茶、红茶、乌龙茶、咖啡、健康饮料、清凉饮料、乳酸饮料等)；调味品(例如酱油、酱汁、醋、料酒)；罐头、瓶装或袋装食品；半干燥或浓缩食品(例如肝酱及其它涂抹酱、荞麦及面条的汁、浓缩汤类等)；干燥食品(例如方便面、速食咖喱、速溶咖啡、果汁粉、汤料粉、速食豆汁、半成品食品、半成品饮料、已烹制的汤等)；冷冻食品等。
本发明的食品只要含有上述提取物则其形状没有特别限定，还包括片状、颗粒状、胶囊状等形状的可口服的形状物。另外，还可以向上述提取物中添加甘油等制成将上述提取物浓缩的健康食品。
本发明食品中的上述提取物的含量并无特别限定，可以从其官能和活性表现的观点出发进行适当设定，例如以食品中的上述提取物的干燥重量计为0.1～100重量％、优选为0.5～95重量％、更优选为1～90重量％。
本发明的食品可以抑制真姬菇来源提取物的苦味、使味道醇和，因此在上述提取物的制造方法中可以使用添加乳化剂获得的真姬菇来源提取物。
予以说明，作为本发明的食品，从萜化合物在体内的吸收良好的方面出发，特别优选实施例4所记载的饮料。
本发明的药品含有上述真姬菇来源提取物。作为本发明的药品，可以举出将本发明上述提取物与公知的药用载体相组合制成制剂的产物。
本发明的药品通常通过将上述提取物与可药用的液体状或固体状载体相配合而制造，根据需要加入溶剂、分散剂、乳化剂、缓冲剂、稳定剂、赋形剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂等，可以制成片剂、颗粒剂、散剂、粉末剂、胶囊剂等固体剂或通常液剂、混悬剂、乳剂等液体剂。另外，还可以制成通过在使用前添加适当载体而成为液体状所获得的干燥品、其它的外用剂。
药用载体可以根据本发明药品的给药方式和剂型而选择。当制成含有固体组合物的口服剂时，可以制成片剂、丸剂、胶囊剂、散剂、细粉剂、颗粒剂等，例如利用淀粉、乳糖、白糖、甘露醇、羧甲基纤维素、玉米淀粉、无机盐等作为载体。另外，在制备口服剂时，还可以进一步配合粘合剂、崩解剂、表面活性剂、润滑剂、流动性促进剂、矫味剂、着色剂、香料等。例如，当制成片剂或丸剂时，还可以根据需要用蔗糖、明胶、羟丙纤维素等糖衣或胃溶性或肠溶性物质的薄膜包衣。当制成含有液体组合物的口服剂时，可以制成可药用的乳浊液、溶液剂、混悬剂、糖浆剂等，例如可以利用精制水、乙醇等作为载体。另外，还可以根据需要添加湿润剂、混悬剂等辅助剂、甜味剂、风味剂、防腐剂等。予以说明，由于本发明的提取物即便口服也可以发挥充分的效果，因此从其给药简单性的观点出发，优选制成口服用的药品。
另一方面，当制成非口服制剂时，可以按照常规方法将本发明上述提取物溶解或混悬于作为稀释剂的注射用蒸馏水、生理盐水、葡萄糖水溶液、注射用植物油、芝麻油、花生油、大豆油、玉米油、丙二醇、聚乙二醇等中，根据需要加入杀菌剂、稳定剂、等渗剂、无痛剂等而制备。另外，还可以制造固体组合物，在使用前溶解于无菌水或无菌的注射用溶剂而使用。
作为外用剂，包括经皮给药用或经粘膜(口腔内、鼻腔内)给药用的固体、半固体状或液体状的制剂。另外，还包括栓剂等。例如，可以制成乳剂、洗剂等乳浊液，外用酊剂、经粘膜给药用液剂等液状制剂、油性软膏、亲水性软膏等软膏剂、膜剂、带剂、泥敷剂等经皮给药用或经粘膜给药用的贴剂。
以上的各种制剂可以利用公知的药品用载体等通过常规方法适当地制造。另外，该制剂中提取物的含量，考虑到其给药方式、给药方法等，只要是优选可以在后述给药量范围对该提取物进行给药的量则没有特别限定。本发明药品中的上述提取物的含量以干燥重量计为0.1～100重量％左右。
本发明药品的给药量根据其制剂形态、给药方法、使用目的和作为该药品给药对象的患者的年龄、体重、症状适当设定，并非一定。一般来说，以干燥重量表示制剂中所含上述提取物量时的给药量为成人每日1μg～100mg/kg体重、优选为5μg～50mg/kg体重、更优选为10μg～10mg/kg体重。当然，由于给药量随着各种条件而改变，因此既有少于上述给药量的量即充分的情况，也有必须超过范围的情况。给药可以在所需给药量范围内在1日内单次或分为数次进行给药。给药期间也任意。另外，本发明的药品除了直接口服之外，还可以添加到任意饮食品中日常摄取。
本发明的萜化合物的制造方法包括以下步骤:(a)利用碱性水性溶剂处理真姬菇子实体或菌丝体获得真姬菇来源提取物的步骤、(b)由通过步骤(a)获得的提取物精制萜化合物的步骤。该制造方法中，作为通过(a)步骤获得的提取物可以举出上述本发明真姬菇来源提取物。另外，在该萜化合物的制造方法中，与本发明的真姬菇来源提取物的制造方法相同，作为碱性水性溶剂，可以优选使用碳酸钠水溶液、氢氧化钠水溶液或阴离子交换树脂混悬液，利用提取溶剂的处理温度只要是能够规定量地提取萜化合物的温度则没有特别限定，例如可以在4～120℃下处理。本发明的真姬菇来源本发明萜化合物的制造方法由于在从真姬菇子实体或菌丝体中提取富含萜化合物的提取物的步骤中并非必需有机溶剂，因此可以廉价地制造萜化合物。
作为可以通过本发明萜化合物制造方法制造的真姬菇来源萜化合物，可以举出日本特开平4-104795号所记载的物质SBS。予以说明，该物质记载于沢边等文献(Sawabe A等3人，Journal of Mass Spectrometry，1996年，Vol.31，P921-925)，与hypsiziprenol A₉为同一物质。另外，作为SBS以外可以通过本发明萜化合物制造方法制造的萜化合物，可以举出上述沢边等文献记载的hypsiziprenol A₈、A₁₀、A₁₁、A₁₂、A₁₃、A₁₄、B₈、B₉、B₁₀、B₁₂、C₉等真姬菇来源萜化合物。
作为从通过碱性水性溶剂处理真姬菇而获得的提取物精制萜化合物的方法，可以使用公知的方法，可以举出提取、分别沉淀、柱层析、薄层层析和这些方法的组合。作为柱层析，可以举出高效液相，本发明中可以优选使用反相高效液相。
实施例
以下举出实施例详细地说明本发明，但本发明并非局限于这些实施例。
制备例1 标准物质的制备
根据日本特开平4-104795号实施例1所记载的方法进行真姬菇来源提取物的提取、利用硅胶柱的精制以及利用反相高效液相的分离操作。所得的馏分中，使用HPLC/MS法分析馏分G和含有SBS的馏分，确认这两个馏分的精制物为具有分别不同结构的萜化合物。予以说明，馏分G记载于沢边等文献(Sawabe A等3人，Journal of Mass Spectrometry，1996年，Vol.31，P921-925)，与hypsiziprenol A₈为同一物质。另外，SBS为与上述沢边等文献记载的hypsiziprenol A₉相同的物质。将如此获得的馏分G和SBS的精制物分别作为真姬菇来源萜化合物的标准物质hypsiziprenol A₈和SBS。
实施例1  利用碱性溶剂的提取1
利用恒温箱(Yamato公司制)充分干燥真姬菇(榆干离褶伞M-8171)的子实体后，通过cooking mill(NATIONAL公司制)粉碎干燥物，获得真姬菇干燥粉碎物。接着，向该真姬菇干燥粉碎物5g加入1％Na₂CO₃水溶液(pH11.93)0.1L，在95℃下热处理3小时。热处理后，利用10000r/min、10分钟的离心分离操作(离心分离装置(TOMY公司制))除去不溶物，将所得的提取物上样于反相高效液相(柱＝μBondapakC18 Φ0.39×300mm(Waters公司制)、溶剂＝甲醇:乙醇:水＝3:4:4(体积比)、流速＝0.7mL/min、柱温箱＝40℃、检测波长＝210nm)，定量该提取物所含的萜化合物量。定量时使用在上述制备例中制备的2种萜化合物作为标准物质。通过反相高效液相获得的色谱图示于图1A。图1A的纵轴表示吸光度(210nm)、横轴表示洗脱时间(分钟)。
比较例1 利用蒸馏水的提取
除了使用蒸馏水(pH6.78)代替1％Na₂CO₃水溶液之外，通过与实施例1同样的方法制备提取物，定量提取物中的萜化合物。将通过反相高效液相获得的色谱图示于图1B。图1B的纵轴表示吸光度(210nm)、横轴表示洗脱时间(分钟)。
比较例2 利用KCl的提取
除了使用0.15M KCl(pH6.54)代替1％Na₂CO₃水溶液之外，通过与实施例1同样的方法制备提取物，定量提取物中的萜化合物。将通过反相高效液相获得的色谱图示于图1C。图1C的纵轴表示吸光度(210nm)、横轴表示洗脱时间(分钟)。
比较例3 利用酸性溶剂的提取
除了使用1％柠檬酸水溶液(pH2.46)代替1％Na₂CO₃水溶液之外，通过与实施例1同样的方法制备提取物，定量提取物中的萜化合物。将通过反相高效液相获得的色谱图示于图1D。图1D的纵轴表示吸光度(210nm)、横轴表示洗脱时间(分钟)。
将实施例1和比较例1～3的萜化合物量的定量结果综合示于表1中。
      表1

^*hypsiziprenol A₈的定量下限为5μg/mL、SBS的定量下限为5μg/mL。
如表1所示，使用蒸馏水、0.15M KCl、1％柠檬酸水溶液作为提取溶剂时的提取物(比较例1～3)的萜化合物含量为定量限以下，相反，实施例1的使用1％Na₂CO₃水溶液作为提取溶剂时的提取物含有142μg/mL的萜化合物。
实施例2 利用各种碱性溶剂的提取及提取物的中和
实施例2-1 利用Na₂CO₃水溶液的提取
通过用实施例1相同的方法制备提取物，定量提取物中的SBS。接着，为了将该提取物用于食品或饮料中，加入柠檬酸粉末对该提取物进行中和。对于该中和后的提取物，使用数字糖度计Palette(ATAGO公司制)测定糖度。另外，目视确认色调、有无发泡和有无沉淀。予以说明，除了目视确认色调之外，利用分光光度计UV-160A(岛津制作所(株)制)进行测定。
实施例2-2 利用NaOH水溶液的提取
除了使用0.1N NaOH水溶液(pH11.52)代替1％Na₂CO₃水溶液以外，通过用实施例1相同的方法制备提取物，通过与实施例2-1同样的方法测定SBS含量，进行中和、测定糖度，观察色调、发泡、沉淀。
实施例2-3 利用阴离子交换树脂的提取
除了使用5％离子交换树脂DIAION SA101AOH(日本炼水公司制)悬浊水(pH10.54)代替1％Na₂CO₃水溶液以外，通过用实施例1相同的方法制备提取物，通过与实施例2-1同样的方法测定SBS含量，进行中和、测定糖度，观察色调、发泡、沉淀。将实施例2-1～实施例2-3的结果一并示于表2。
 表2

由表2所示可知，在使用任何碱性提取溶剂时，可以获得大量含有SBS的提取物。另外，提取中使用阴离子交换树脂时，与使用其它碱的情况相比，提取物的糖含量少、可以获得纯度比较高的SBS。而且，提取中使用阴离子交换树脂时，在中和提取物后不会发生发泡或沉淀。这在提取物的浓缩等之后处理容易的方面上有利。
实施例3利用冷碱进行提取
除了对使用5％离子交换树脂DIAION SA10AOH(日本炼水公司制)悬浊水在低温条件下(5℃、24小时)提取的提取物进行5℃、24小时的处理之外，通过与实施例2-3同样的方法制备，测定SBS的含量。结果示于表3中。
表3