依达拉奉脂质体注射剂及其新应用.pdf

本发明公开了一种依达拉奉的脂质体剂型，所述依达拉奉的脂质体注射剂是由依达拉奉、磷脂、胆固醇、聚山梨酯80等赋形剂制成。进一步公开了依达拉奉脂质体注射剂在治疗血栓性静脉炎的新应用。

1、  一种依达拉奉脂质体注射剂，其特征在于包含如下重量份的组分：
依达拉奉                           1份
磷脂                               1-30份
胆固醇                             0.1-10份
聚山梨酯80                         0.5-15份。

2、  根据权利要求1所述的依达拉奉脂质体注射剂，其特征在于包含如下重量份的组分：
依达拉奉                          1份
磷脂                              5-20份
胆固醇                            0.5-5份
聚山梨酯80                        1-10份。

3、  根据权利要求1-2任一项所述的依达拉奉脂质体注射剂，其特征在于磷脂选自天然磷脂和合成磷脂，天然磷脂为蛋黄卵磷脂、氢化蛋黄磷脂、蛋黄磷脂酰甘油、蛋黄磷脂酰丝氨酸、蛋黄磷脂酰肌醇、大豆磷脂、氢化大豆磷脂、大豆磷脂酰甘油、大豆磷脂酰丝氨酸、大豆磷脂酰肌醇中的一种或几种；合成磷脂为二油酰磷脂酰胆碱、二硬脂酸磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、二月桂酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰甘油、二硬脂酸磷脂酰甘油、二棕榈酰磷脂酰甘油、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油、二月桂酰磷脂酰甘油中的一种或几种。

4、  根据权利要求1-3任一项所述的依达拉奉脂质体注射剂，其特征在于组分中还可包含：

1.  35-15重量份的渗透压调节剂，其选自氯化钠、葡萄糖、甘露醇、山梨醇、甘油、木糖醇等中的一种或几种；
pH值为5.0-6.0的缓冲盐溶液，其选自磷酸盐缓冲液、枸橼酸盐缓冲液、碳酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液、醋酸盐缓冲液中的一种或几种。

5、  根据权利要求1-4任一项所述的依达拉奉脂质体注射剂，其特征在于包含以下组分：
依达拉奉                    10g
二月桂酰磷脂酰胆碱                  200g
胆固醇                              5g
聚山梨酯80                          10g
氯化钠                              13.5g
pH值为5.0的醋酸-醋酸钠缓冲溶液      500ml。

6、  根据权利要求1-4任一项所述的依达拉奉脂质体注射剂，其特征在于包含以下组分：
依达拉奉                            15g
氢化大豆磷脂                        75g
胆固醇                              45g
聚山梨酯80                          150g
甘露醇                              225g
pH值为5.5的硼酸-硼砂缓冲溶液        800ml。

7、  根据权利要求1-4任一项所述的依达拉奉脂质体注射剂，其特征在于包含以下组分：
依达拉奉                            30g
蛋黄磷脂酰丝氨酸                    300g
胆固醇                              150g
聚山梨酯80                          120g
葡萄糖                              240g
pH值为6.0的磷酸-磷酸氢二钠缓冲溶液  1000ml。

8、  一种制备权利要求1-7的依达拉奉脂质体注射剂的方法，其特征在于包括如下步骤：
(1)将上述磷脂、胆固醇和聚山梨酯80溶于基于磷脂、胆固醇和聚山梨酯80三者总重量计的1∶3-6(g/ml)体积的有机溶剂中，缓慢注入0.01-0.15mol/L硫酸铵溶液，加热搅拌蒸除有机溶剂，超声10-20分钟，得空白脂质体；硫酸铵溶液的体积与有机溶剂的体积相同；
(2)将空白脂质体置于透析袋中，封口，将透析袋置于1.35-15重量份的渗透压调节剂的浓度0.9％-10％(g/ml)的水溶液的总量的2/3中，除去脂质体外相中的硫酸铵；
(3)将依达拉奉溶于基于依达拉奉重量计1∶30-60(g/ml)体积的水中，将透析好的空白脂质体60℃保温，在搅拌下缓慢加入依达拉奉的水溶液，继续保温20-30min，加入缓冲溶液和剩余的渗透压调节剂水溶液，混匀，即得依达拉奉脂质体。

9、  根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于有机溶剂选自乙醇、甲醇、叔丁醇、正丁醇、异丙醇、丙酮、乙醚、苯甲醇、正己烷中的一种或几种。

10、  根据权利要求1-9所述的依达拉奉脂质体注射剂在治疗血栓性静脉炎的新应用。

依达拉奉脂质体注射剂及其新应用
技术领域
本发明涉及依达拉奉的一种新剂型和新应用，具体涉及依达拉奉的脂质体注射剂及其制备方法，进一步涉及其在治疗血栓性静脉炎的新应用。
背景技术
血栓性静脉炎，又称静脉血栓形成，指各种原因引起的静脉内腔炎症或伴静脉血栓形成，包括血栓性浅静脉炎和血栓性深静脉炎。临床以出现疼痛、肢体肿胀、前静脉曲张、皮下可扪及条索状肿物为特点，且下肢为多，临床属危重疑难病症。给病人带来长期痛苦，影响生活和工作能力，甚至残疾。常用的非手术疗法包括溶栓、抗凝等治疗，易引起出血，需检测凝血功能。
依达拉奉是由苯肼和丁酮酰胺合成的吡唑啉酮类化合物，具有强大的自由基清除作用，可有效减轻脑梗塞后脑组织损伤造成的神经症状和功能障碍，已于2001年在日本上市，临床上通过抑制脑水肿、脑梗塞、神经症状、迟发性神经细胞死亡等缺血性脑血管障碍的产生及进程恶化，从而发挥其脑保护作用，主要用于治疗急性脑梗塞，可减轻神经功能损害，降低病残率，促进康复，具有疗效高和副作用小的特点，
依达拉奉作为自由基捕获剂能抑制黄嘌呤氧化酶和次黄嘌呤氧化酶的活性，还能刺激前列环素(PGI2)的生成，减少炎症介质白三烯的生成。在生理状态下，血栓素A2(TXA2)和PGI2在体内保持一定的平衡，共同维护血液内环境的稳定，维持血管张力；当病变发生后，血管壁PGI2和血小板TXA2产生失衡，导致TXA2产生过多和PGI2减少，出现血小板聚集和血管收缩。血小板可粘附并损伤内皮细胞，进一步促进TXA2的释放；同时，损伤的内皮细胞使PGI2的合成减少，从而使病情进一步恶化，形成血栓。药理研究表明，依达拉奉能刺激PGI2的生成，减少炎症介质白三烯的生成，从而提高PGI2/TXA2的比值，抑制血小板聚集，降低血液粘度，使凝血过程受阻，血栓形成受抑；并能打破已形成的血栓与血液平衡关系。
固体状态的依达拉奉比较稳定，但其水溶液易发生氧化还原反应而降解。目前，临床大量应用的依达拉奉制剂为水针剂，通过在配方中加入L-半胱氨酸和亚硫酸氢钠作为抗氧剂，在制备过程中充入氮气，来提高其稳定性，但是长期放置后质量不能保证稳定，仍然会发生降解。专利文献CN1241565C、CN100358520C和CN101288650A分别描述了依达拉奉冻干粉针剂的制备方法，主要在溶解性方面进行了一些改进，虽然加入了一些稳定剂，但是其长期放置之后稳定性仍然不能满足临床要求，难以实现其预期的治疗效果。
发明人经过长期艰辛研究，发现将适用于靶向给药系统的脂质体制剂应用于依达拉奉制成的注射制剂，不仅可以解决依达拉奉的稳定性和溶解性问题，而且还有利于显著加强其治疗血栓性静脉炎的疗效，由此完成了本发明。
发明内容
本发明的目的在于提供一种稳定的依达拉奉注射剂，具体的说，采用一定含量的特定赋形剂和活性成分组合，通过pH值梯度法制成本发明的依达拉奉脂质体注射剂，很好的解决了上述指出的技术问题。
本发明解决的技术方案如下：
本发明提供一种依达拉奉脂质体注射剂，主要是由如下重量份的组分制成：
依达拉奉            1份
磷脂                1-30份
胆固醇              0.1-10份
聚山梨酯80          0.5-15份
作为本发明的一种优选实施方案，本发明的依达拉奉脂质体注射剂，主要是由如下重量份的组分制成：
依达拉奉            1份
磷脂                5-20份
胆固醇              0.5-5份
聚山梨酯80          1-10份
其中，磷脂选自天然磷脂和合成磷脂，天然磷脂为蛋黄卵磷脂、氢化蛋黄磷脂、蛋黄磷脂酰甘油、蛋黄磷脂酰丝氨酸、蛋黄磷脂酰肌醇、大豆磷脂、氢化大豆磷脂、大豆磷脂酰甘油、大豆磷脂酰丝氨酸、大豆磷脂酰肌醇中的一种或几种；合成磷脂为二油酰磷脂酰胆碱、二硬脂酸磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、二月桂酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰甘油、二硬脂酸磷脂酰甘油、二棕榈酰磷脂酰甘油、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油、二月桂酰磷脂酰甘油中的一种或几种，优选自二月桂酰磷脂酰胆碱、氢化大豆磷脂和蛋黄磷脂酰丝氨酸。
本发明所述的依达拉奉脂质体注射剂，其赋形剂中还可含有1.35-15重量份的渗透压调节剂，其为浓度0.9％-10％(g/ml)的水溶液，用于调节药液和血浆具有相同渗透压，不会引起血象的任何异常变化。常用的渗透压调节剂选自氯化钠、葡萄糖、甘油、甘露醇、山梨醇、氯化钾、乳酸钠、氨基酸类、右旋糖酐、明胶、聚维酮类、淀粉衍生物等，本发明中的渗透压调节剂优选自氯化钠、葡萄糖、甘露醇、山梨醇、甘油、木糖醇等中的一种或几种；最优选为0.9％(g/ml)氯化钠水溶液、10％(g/ml)甘露醇水溶液和5％(g/ml)葡萄糖水溶液。
进一步地，本发明所述的依达拉奉脂质体注射剂，其赋形剂还可含有pH值为5.0～6.0的药学上可接受的缓冲盐溶液，例如缓冲盐溶液选自磷酸盐缓冲液、枸橼酸盐缓冲液、碳酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液、醋酸盐缓冲液中的一种或几种，优选自醋酸-醋酸钠缓冲溶液、硼酸-硼砂缓冲溶液、磷酸-磷酸氢二钠缓冲溶液。
作为本发明最优选实施方案之一，主要是由如下组分制成1000支依达拉奉脂质体注射剂：
依达拉奉                            10g
二月桂酰磷脂酰胆碱                  200g
胆固醇                              5g
聚山梨酯80                          10g
氯化钠                              13.5g
pH值为5.0的醋酸-醋酸钠缓冲溶液      500ml
作为本发明最优选实施方案之二，主要是由如下组分制成1000支依达拉奉脂质体注射剂：
依达拉奉                            15g
氢化大豆磷脂                        75g
胆固醇                              45g
聚山梨酯80                        150g
甘露醇                            225g
pH值为5.5的硼酸-硼砂缓冲溶液      800ml
作为本发明最优选实施方案之三，主要是由如下组分制成1000支依达拉奉脂质体注射剂：
依达拉奉                                30g
蛋黄磷脂酰丝氨酸                        300g
胆固醇                                  150g
聚山梨酯80                              120g
葡萄糖                                  240g
pH值为6.0的磷酸-磷酸氢二钠缓冲溶液      1000ml
本发明解决的技术方案还包括：
一种制备上述依达拉奉脂质体注射剂的方法，包括如下步骤：
(1)将上述配方中的磷脂、胆固醇和聚山梨酯80溶于有机溶剂中，缓慢注入硫酸铵溶液，用量和有机溶剂相同，加热搅拌蒸除有机溶剂，超声10-20分钟，得空白脂质体；
(2)将空白脂质体置于透析袋中，封口，将透析袋置于渗透压调节剂水溶液总量的2/3溶液中，除去脂质体外相中的硫酸铵；
(3)将依达拉奉溶于水，将透析好的空白脂质体60℃保温，在搅拌下缓慢加入依达拉奉水溶液，继续保温20-30min，加入缓冲溶液和剩余的1/3渗透压调节剂溶液，混匀，即得依达拉奉脂质体。
上述制备方法中所述的硫酸铵溶液浓度为0.01-0.15mol/L，其用量和有机溶剂的量相同。
上述制备方法中所述的溶解依达拉奉的水的量为能够使依达拉奉完全溶解即可，优选自基于依达拉奉重量计1∶30-60(g/ml)体积的水。
上述制备方法中所述的有机溶剂，例如可以选自乙醇、甲醇、叔丁醇、正丁醇、异丙醇、丙酮、乙醚、苯甲醇、正己烷中的一种或几种。优选自异丙醇、叔丁醇和苯甲醇。有机溶剂的量根据加入的磷脂、胆固醇和聚山梨酯80的量进行选择，以完全溶解上述成分为最低量的要求，优选自基于磷脂、胆固醇和聚山梨酯80三者总重量计的1∶3-6(g/ml)体积的有机溶剂。
本发明进一步提供了一种制备上述依达拉奉脂质体注射剂的方法，包括如下步骤：
(1)将上述配方中的磷脂、胆固醇和聚山梨酯80溶于基于磷脂、胆固醇和聚山梨酯80三者总重量计的1∶3-6(g/ml)体积的有机溶剂中，缓慢注入0.01-0.15mol/L硫酸铵溶液，加热搅拌蒸除有机溶剂，超声10-20分钟，得空白脂质体；硫酸铵溶液的体积与有机溶剂的体积相同；
(2)将空白脂质体置于透析袋中，封口，将透析袋置于1.35-15重量份的渗透压调节剂的浓度0.9％-10％(g/ml)的水溶液的总量的2/3中，除去脂质体外相中的硫酸铵；
(3)将依达拉奉溶于基于依达拉奉重量计1∶30-60(g/ml)体积的水中，将透析好的空白脂质体60℃保温，在搅拌下缓慢加入依达拉奉的水溶液，继续保温20-30min，加入缓冲溶液和剩余的渗透压调节剂水溶液，混匀，即得依达拉奉脂质体。
本发明还提供了一种依达拉奉脂质体注射剂在治疗血栓性静脉炎中的应用，采用静脉滴注，每次30mg，每日2次，连用3天，随后每天一次，连用7天。
专利文献CN1557479A公开了一种干扰素脂质体乳膏产品，采用干扰素脂质体与乳化剂等赋形剂组成的基质制各成乳膏剂型，组分包括干扰素脂质体和基质，在基质中采用聚山梨酯80作为乳化剂。现有技术是发现在基质中加入了聚山梨酯80可以提高脂质体稳定性，本申请是在脂质体制备中即加入了特定重量比例的聚山梨酯，提高了脂质体的稳定性，这是现有技术未曾教导的。
专利文献CN1136841C公开了一种空白凝胶型脂质体制的方法，取豆磷脂120mg，胆固醇18mg，聚山梨酯80 20mg，先制备脂质膜，再加入明胶凝胶(明胶：0.067M pH7.2磷酸盐缓冲液重量比为40∶60)至5克，50℃水浴中水化1h，40℃水浴中水化20min，超声50min，40℃保温用0.45μm的微孔滤膜过滤，整粒。冷却至室温。现有技术属于凝胶型脂质体，制备过程中必需加入明胶凝胶来稳定其脂质体，本发明无需加入明胶凝胶也能获得优异效果。
Kronberg B等人，Preparation and evaluation of sterically stabilized liposomes：colloidal stability.serum stability，macrophage uptake and toxicity.J PharmSci，1990，79(8)：667中公开在由双肉豆蔻卵磷脂、双肉豆蔻酰钠磷酸盐和胆固醇组成的脂质体中加入非离了型表面活性剂聚山梨酯80(4％)制备了立体稳定的脂质体。本发明人发现至采用一定成分和含量配比的磷脂、胆固醇和聚山梨酯80的组合，通过一定的制备方法，无需加入双肉豆蔻酰钠磷酸盐也能获得稳定的脂质体。
本发明的脂质体制剂配方中，加入乳化剂聚山梨酯80，不仅对脂质体本身没有带来损坏，反而能促进脂质体的稳定，提高其包封率，减少脂质体的泄漏，提高其稳定性，进一步提高了脂质体的疗效，采用特定pH值渗透法获得了更佳的效果。
本发明提供的依达拉奉脂质体注射剂，进行稳定性试验考察，在高温60℃、光照4500Lx条件下放置10天，各项检测指标均无明显变化；在高温40℃、相对湿度75％±5％条件下加速试验6个月，各项检测指标没有明显变化；在高温25℃、相对湿度60％±10％条件下长期试验18个月，各项检测指标没有明显变化。
本发明提供的依达拉奉脂质体注射剂，进行急性毒性试验、异常毒性试验和热源检查，均符合规定，安全性得到证明。
本发明提供的依达拉奉脂质体注射剂，与现有技术相比，具有意想不到的效果，主要优点如下：
(1)依达拉奉被包裹于脂质体内，提高了水溶液中的溶解性和制剂的稳定性，保证了产品质量；
(2)依达拉奉脂质体注射剂显著增加治疗血栓性静脉炎的疗效；
(3)药物载体脂质体体内降解、无毒性和无免疫原性，而且可以提高药物治疗指数、降低药物毒性和减少药物副作用；
(4)采用常规的工艺设备，可工业规模、高效率生产，产品质量稳定，是一种独特和普遍适用的，低成本的工业化制备方法。
具体实施方式
以下通过实施例进一步说明本发明，但不应理解为对本发明的限制。
实施例1   依达拉奉脂质体的制备
处方(1000支)：
依达拉奉                10g
二月桂酰磷脂酰胆碱                200g
胆固醇                            5g
聚山梨酯80                        10g
氯化钠                            13.5g
pH值为5.0的醋酸-醋酸钠缓冲溶液    500ml
制备工艺
(1)将200g二月桂酰磷脂酰胆碱、5g胆固醇和10g聚山梨酯80溶于1000ml异丙醇中，搅拌下缓慢注入0.01mol/L硫酸铵溶液1000ml，加热搅拌蒸除异丙醇，置冰浴中超声10min，得空白脂质体；
(2)将空白脂质体置于透析袋中，封口，将透析袋置于0.9％氯化钠水溶液1000ml中透析20小时，除去脂质体外相中的硫酸铵；
(3)将10g依达拉奉溶于500ml水，将透析好的空白脂质体60℃保温，在搅拌下缓慢加入依达拉奉的水溶液，继续保温20min，加入0.9％氯化钠水溶液500ml 和pH值5.0的醋酸-醋酸钠缓冲溶液500ml，混匀，即得依达拉奉脂质体注射剂。
对比例1  依达拉奉脂质体的制备(比较成分不同的结果)
处方(1000支)：
依达拉奉                          10g
二月桂酰磷脂酰胆碱                310g
胆固醇                            0.8g
氯化钠                            13.5g
pH值为5.0的醋酸-醋酸钠缓冲溶液    500ml
制备工艺同实施例1，制得本发明处方配比不同的脂质体注射剂。
实施例2  依达拉奉脂质体的制备
处方(1000支)：
依达拉奉                15g
氢化大豆磷脂            75g
胆固醇                  45g
聚山梨酯80                        150g
甘露醇                            225g
pH值为5.5的硼酸-硼砂缓冲溶液      800ml
制备工艺
(1)将75g氢化大豆磷脂、45g胆固醇和150g聚山梨酯80溶于1500ml叔丁醇中，搅拌下缓慢注入0.1mol/L硫酸铵溶液1500ml，加热搅拌蒸除叔丁醇，置冰浴中超声20min，得空白脂质体；
(2)将空白脂质体置于透析袋中，封口，将透析袋置于10％甘露醇水溶液1500ml中透析22小时，除去脂质体外相中的硫酸铵；
(3)将15g依达拉奉溶于800ml水，将透析好的空白脂质体60℃保温，在搅拌下缓慢加入依达拉奉的水溶液，继续保温30min，加入10％甘露醇水溶液750ml和pH值5.5的硼酸-硼砂缓冲溶液800ml，混匀，即得依达拉奉脂质体注射剂。
对比例2  依达拉奉脂质体的制备(制备工艺不同)
处方(1000支)：
依达拉奉                            15g
氢化大豆磷脂                        75g
胆固醇                              45g
聚山梨酯80                          150g
甘露醇                              225g
pH值为5.5的硼酸-硼砂缓冲溶液        800ml
制备工艺
(1)将75g氢化大豆磷脂、45g胆固醇和150g聚山梨酯80溶于1500ml叔丁醇中；
(2)将15g依达拉奉和225g甘露醇溶于800mlpH值为5.5的硼酸-硼砂缓冲溶液中；
(3)将二者混合，搅拌，形成W/O型乳剂，加热搅拌蒸发，当混合物达到粘稠状态时，再加入1200ml水，继续加热搅拌蒸发除去残留叔丁醇，超声30min，转移至高速匀质搅拌机中，搅拌匀质30min，得依达拉奉脂质体注射剂。
实施例3  依达拉奉脂质体的制备
处方(1000支)：
依达拉奉                                30g
蛋黄磷脂酰丝氨酸                        300g
胆固醇                                  150g
聚山梨酯80                              120g
葡萄糖                                  240g
pH值为6.0的磷酸-磷酸氢二钠缓冲溶液      1000ml
制备工艺
(1)将300g蛋黄磷脂酰丝氨酸、150g胆固醇和120g聚山梨酯80溶于2000ml苯甲醇中，搅拌下缓慢注入0.15mol/L硫酸铵溶液2000ml，加热搅拌蒸除苯甲醇，置冰浴中超声10min，得空白脂质体；
(2)将空白脂质体置于透析袋中，封口，将透析袋置于5％葡萄糖水溶液3200ml中透析20小时，除去脂质体外相中的硫酸铵；
(3)将30g依达拉奉溶于1000ml水，将透析好的空白脂质体60℃保温，在搅拌下缓慢加入依达拉奉的水溶液，继续保温20min，加入5％葡萄糖水溶液1600ml和pH值6.0的磷酸-磷酸氢二钠缓冲溶液1000ml，混匀，即得依达拉奉脂质体注射剂。
试验例1  包封率的测定
取实施例和对比例制备的脂质体注射剂，高效液相色谱法检测依达拉奉的总含量为M，选用柱色谱法分离脂质体。
取1.5g葡聚糖凝胶G-50，用pH6.8磷酸盐缓冲液浸泡溶胀12h以上，装入层析柱内(200×10mm)，用上述磷酸盐缓冲液冲洗平衡，分别取实施例1-2和对比例1-2得到的依达拉奉脂质体注射剂1.1ml，加入层析住顶部，用磷酸盐缓冲液50ml洗脱，流速1.0ml/min，收集的洗脱液加入破膜剂(乙醇∶苯甲醇＝6∶1)50ml，混匀，高效液相色谱法检测依达拉奉的含量M₁。
包封率％＝M₁/M×100％。
表1  包封率测定结果

由以上结果可知，本发明范围内的实施例处方配比制得的脂质体包封率很高，符合实际生产要求；而本发明范围外的对比例处方配比制得的脂质体包封率很低，和实施例相比有明显的差距，不适合生产要求。
试验例2  粒径的检测
取实施例1-3和对比例1-2制备的脂质体制剂，采用显微图像分析仪测定脂质体的粒径分布，结果如表2：
表2  粒径检测结果

由以上结果可知，实施例1-3制得的脂质体显球状，粒径均匀，范围为100-200nm；对比例1-2制得的脂质体形状不定，杂乱无章，大小不一，粒径不均匀，范围为400-800nm。
试验例3  稳定性考察
将以上各实施例和对比例制备的样品与上市的依达拉奉注射液(南京先声东元药业有限公司生产，批号20071119)在高温60℃、光照4500Lx条件下放置10天进行影响因素试验考察，结果见表3；在高温40℃、相对湿度75％±5％条件下6个月，进行加速试验考察，结果见表4；在高温25℃、相对湿度60％±10％条件下18个月，进行长期试验考察，检测各项质量指标的变化，结果见表5。
表3  影响因素结果


表4  加速试验结果


表5  长期试验结果


由以上结果发现加速3月、6月，长期12月、18月时对比例和上市的依达拉奉注射液澄明度不符合规定，pH值下降较大，含量降低明显，有关物质升高；而本发明范围内原辅料配比制备的样品外观性状没有明显变化，为无色澄明液体，澄明度、pH值、含量和有关物质也没有明显的变化。说明本发明制备的样品长期贮存质量稳定性更好。
试验例4  临床资料
观察急发期病例共109例，符合《中药新药临床指导原则》中有关血栓性静脉炎的诊断标准，均采用患肢静脉压测定及彩色多普勒血管超声或肢体静脉造影诊断为下肢静脉血栓。按照随机表法分为3组。治疗组37例，男24例，女13例，年龄(55.2±16.8)岁，其中血栓性浅静脉炎25例，血栓性深静脉炎12例。对照组36例，男21例，女15例，年龄(48.2±15.4)岁，其中血栓性浅静脉炎23例，血栓性深静脉炎13例。上市产品组36例，男22例，女14例，年龄(49.75±14.8)岁，其中血栓性浅静脉炎24例，血栓性深静脉炎12例。3组临床资料经统计学处理，差异无显著性意义(P＞0.05)，具有可比性。
试验例5  治疗方法
治疗组：静脉滴注依达拉奉脂质体注射剂，每次30mg，每日2次，连用3天，随后每天一次，连用7天；尿激酶15～25万U经患肢静脉滴入，每天2次。另配合皮下注射肝素针、静滴抗生素、口服华法令等作为辅助治疗；对照组：仅用上述的除依达拉奉外的其他药物治疗，药物的用法用量和治疗组相同。上市产品组：静脉滴注南京先声东元药业有限公司生产的依达拉奉注射液(批号20071119)，每次30mg，每日2次，连用3天，随后每天一次，连用7天。
3组均以10天为1疗程，重者可连续治疗2～3疗程。并嘱患者抬高患肢，卧床休息至少2周。治疗期间每3天复查1次凝血时间、凝血酶原时间及活动度，如凝血时间达正常值2倍以上或有明显出血倾向者，应停用尿激酶。
每3天观察记录1次病情变化(包括体温及患肢肿胀、疼痛等)，疗程结束后行彩色多普勒血管超声复查。
试验例6  疗效标准与治疗结果
1.治疗后疗效的标准：参照《中药新药临床研究指导原则》中有关血栓性静脉炎的疗效标准制定。临床治愈：症状和体征消失，功能活动恢复正常；显效：主要症状和体征消失，功能活动基本恢复正常；未愈：症状和体征无改善。
2.治疗结果
三两组临床疗效比较结果见表6，治疗组、对照组和上市产品组。临床治愈率、总有效率治疗组分别为67.57％、97.30％，对照组分别为47.228％、77.78％，上市产品组分别为52.78％、86.11％。治疗组与对照组及上市产品组临床治愈率、总有效率比较，差异有显著性意义(P＜0.05)。1年后随访，治疗组仅1例复发，上市产品组有2例复发，对照组有5例复发。
表6三组临床疗效比较例(％)


与对照组比较，^＊P＜0.05。与上市产品组比较，^△P＜0.05
三组各项观察指标变化比较结果见表7，与对照组比较，治疗组肿胀消退、疼痛消失时间均显著缩短，差异有显著性或非常显著性意义(P＜0.05，P＜0.01)，与上市产品组比较差异没有显著性(P＞0.05)。
表7三组各项观察指标变化比较(x±s)天

与对照组比较，^＊P＜0.05，^＊＊P＜0.01。
综上所述，依达拉奉脂质体注射剂与上市产品虽然在治疗血栓性静脉炎各项观察指标变化比较中差异性不是很明显，但是临床疗效比较中有显著的差异性，可见依达拉奉脂质体注射剂的疗效确切。
无需进一步详细阐明，相信采用前面所公开的内容，本领域技术人员可最大限度的应用。因此，前面优选具体实施方案应被理解为仅是举例说明，而非以任何方式限制本发明的范围。