含有圣草次苷的材料、 含有圣草次苷的材料的制备方法以 及包括含有圣草次苷的材料的食品、 饮料、 药品和化妆品 【技术领域】
本发明涉及一种比较适合应用于诸如食品、 饮料、 药品以及化妆品中的， 源自柑橘 类植物的含有圣草次苷的材料以及其制备方法。背景技术
已知柑橘类水果富含抗氧化性物质， 例如属于多酚类的圣草次苷、 6， 8-C- 二 葡 萄 糖 基 香 叶 木 素 (6， 8-di-C-glucosyldiosmetin) 和 6-C- 葡 萄 糖 基 香 叶 木 素 (6-C-glucosyldiosmetin)。这些来自天然材料的抗氧化性物质能够很好地应用于各种工 业产品中， 例如食品、 饮料、 药品以及化妆品等中。根据在专利文献 1 ～ 3 中说明的以前已 经知道的一些方法， 这些抗氧化性物质可以从柑橘类水果中提取出来。
专利文献 1 和 2 分别公开了一种生产含多酚材料的方法， 其包括用反相树脂处理 或者液相色谱法对使用水、 有机溶剂或者它们的混合物从柑橘类原料中得到的提取物进行 提纯。 专利文献 3 公开了一种含有高浓度圣草次苷的食品材料的生产方法。其包括 ： 使 用提取剂从柑橘类水果的汁液、 果皮和压榨残渣 ( 其中至少一种 ) 中获得提取物 ； 将该提取 物加入至多孔性合成吸附树脂上， 使圣草次苷吸附在该树脂上 ； 用水洗吸附有圣草次苷的 合成吸附树脂以便除去杂质 ； 然后， 使用有机溶剂分离并回收吸附在合成吸附树脂上的圣 草次苷。
在专利文献 1 和 2 所述的生产方法中， 为了提高所得到的含多酚材料中的多酚的 纯度而采用高效液相色谱法进行分离。然而， 这种方法复杂且费时， 因而增加了含多酚材 料的生产成本。专利文献 3 涉及用水洗吸附有圣草次苷的多孔性合成吸附树脂， 以除去杂 质。 可是即便如此， 在添加了所得到的含有圣草次苷的材料的食品中， 尤其是在以高浓度添 加了含有圣草次苷的材料的食品中， 总会有苦味或其他令人不悦的味道， 咽下食品后也会 在口中残留有令人不快的后味。在采用专利文献 3 中所述的方法制备的含有圣草次苷的材 料中， 由于在提取、 浓缩、 纯化的步骤中进行了加热处理， 因此也有一种像中草药那样的独 特的气味 ( 生药味 )。 并且， 含有多酚的材料一般易于随时间变化而产生难闻气味或发生褐 变， 因而难以实现长期的品质维护。
专利文献 1 ： 日本专利特开平 9-48969 号公报
专利文献 2 ： 日本专利特开平 10-245552 号公报
专利文献 3 ： 日本专利特开平 2000-217560 号公报
发明内容 本发明的目的在于提供一种从柑橘类植物提取的含有圣草次苷的材料， 其所含的 使其品质下降的成分含量低的， 还提供一种生产该含有圣草次苷的材料方法， 以及提供一 种包括该含有圣草次苷的材料的食品或饮料、 药品和化妆品。
为了达到上述目的， 本发明的第一个方面提供一种含有圣草次苷的材料， 其通过 分离含有圣草次苷的柑橘类水果的提取物而得到， 其中， 该提取物是用提取剂从柑橘类水 果制备。通过如下方法从柑橘提取物分离圣草次苷 ： 将柑橘提取物与一种以酚醛树脂作为 主体骨架并且具有氨基和酚羟基的多孔性合成吸附树脂接触， 使柑橘提取物中的圣草次苷 吸附在该多孔性合成吸附树脂上 ； 然后， 使用洗脱溶剂将吸附在该多孔性合成吸附树脂上 的圣草次苷洗脱出来。
本发明的第二个方面在于提供一种包括根据第一方面的含有圣草次苷的材料的 食品或饮料产品。
本发明的第三个方面在于提供一种包括根据第一方面的含圣草次苷材料的药品。
本发明的第四个方面在于提供一种包括根据第一方面的含圣草次苷材料的化妆 品。
本发明的第五个方面在于提供一种制备含有圣草次苷的材料的方法， 其包括 ： 使 用提取剂从柑橘类水果制备含有圣草次苷的柑橘提取物 ； 然后， 从柑橘提取物中将圣草次 苷分离出来。将圣草次苷从柑橘提取物中分离出来的步骤包括 ： 将柑橘提取物与一种以酚 醛树脂为主体骨架并且具有氨基和酚羟基的多孔性吸附合成树脂接触， 使柑橘提取物中的 圣草次苷吸附在该多孔性吸附合成树脂上， 然后， 使用洗脱溶剂将吸附在该多孔性合成吸 附树脂上的圣草次苷洗脱出来。 具体实施方式
下面， 将说明本发明的一种实施方式。本实施方式的含有圣草次苷的材料以高浓 度含有具有优良的抗氧化作用的圣草次苷。 这种含有圣草次苷的材料主要被添加应用到诸 如食品或饮料产品、 药品以及化妆品等产品中。将柑橘类水果作为原材料制备含有圣草次 苷的材料。含有圣草次苷的材料优选主要由圣草次苷组成。短语 “主要由圣草次苷组成” 是 指在含有圣草次苷的材料的可溶性固体成分中， 圣草次苷所占的百分含量最高。可溶性固 体成分中圣草次苷的质量百分含量优选大于等于 20％， 更优选大于等于 50％。
圣草次苷， 又称为圣草酚 -7- 芸香糖苷， 是一种结合了芸香糖 (L- 鼠李糖 -D- 葡萄 糖 ) 和圣草酚 (C15H12O6， 又称为 3′， 4′， 5， 7- 四羟基黄烷酮 ) 的黄酮苷， 属于黄烷酮类， 其 是类黄酮的一种。
作为用于制备含有圣草次苷的材料的柑橘类水果的例子包括 ： 香酸柑橘水果 ( 例 如柠檬、 酸橙 ( 来檬 )、 香檬、 酸桔、 蟹橙、 苦橙 ( 黄皮酸橙 ) 以及卡抱斯柑橘 )、 柚子 ( 葡萄 柚 )、 脐橙 ( 铃木脐橙 )、 夏橙 ( 伏令夏橙 )、 酸橙、 八朔橘、 宫川温州蜜柑、 宫内伊予柑、 芦柑、 日本夏橙和柚子 ( 处红柚或沙田柚 )。其中， 优选尤其富含圣草次苷的柠檬和酸橙由于。含 有圣草次苷的材料所含有的圣草次苷由这些柑橘类水果中的一种或几种提取而来。
柑橘类水果的果皮中含有大量的圣草次苷。 在这种情况下， 柑类水果包含果皮、 果 汁、 果肉部分、 汁囊、 种子。在柑橘类水果的果皮中， 除了含有圣草次苷以外， 还含有产生像 中草药 ( 生药材 ) 那样的独特气味的气味成分、 含有引起苦味或其它令人不快味道的滋味 成分以及产生混浊或者使外观新鲜度降低的颜色成分。 使用诸如水或醇等很容易使这些气 味成分、 滋味成分、 颜色成分与圣草次苷同时从柑橘类果实的果皮中提取出来。
在本实施方式的含有圣草次苷的材料中， 由提取、 浓缩、 纯化过程中加热引起的像中草药那样的独特气味和随时间变化而引起的难闻气味减少。因此， 含有圣草次苷的材料 适用于食品或者饮料产品、 化妆品和包括经口给药或者经鼻给药剂型在内的药品中。 并且， 所述含有圣草次苷的材料在口服时， 几乎没有苦味或其它不愉快的味道， 服用后也不会在 嘴里留下让人不愉快的后味。因此， 所述含有圣草次苷的材料特别适用于食品或者饮料产 品和口服药剂中。
制备含有圣草次苷的材料首先是从柑橘类水果 ( 或其一些部分 ) 中得到含有圣草 次苷的柑橘提取物。 在将柑橘类果实的部分作为原材料时， 优选它的果皮或压榨残渣， 这样 更容易提取富含圣草次苷的柑橘提取物。压榨残渣是指压榨柑橘类水果以后留下的残渣， 包含果皮、 果肉、 汁囊部分、 种子和很少量的未压榨出的果汁。 在将压榨残渣作为原材料时， 最好将果实的外皮 ( 黄皮层 ) 去掉。为了提高提取效率， 优选通过切割、 粉碎或者研磨等方 式预先把原材料变细， 例如， 可以使用食品加工设备来完成这项工作。
用有机溶剂或水作为提取剂从柑类水果中提取得到柑橘提取物。 有机溶剂可以是 极性溶剂， 例如， 醇 ( 如甲醇、 乙醇、 丁醇、 丙醇和异丙醇 )、 丙三醇或冰醋酸， 也可以是非极 性溶剂， 例如， 己烷或乙酸乙酯。提取溶剂可以单独使用， 也可以两种或多种同时使用。当 将含有圣草次苷的材料添加到食品饮料、 药品和化妆品来使用时， 从适用性、 生产成本和圣 草次苷提取效率角度综合考虑， 优选以水或乙醇作为提取剂。 对提取温度 ( 提取剂的温度 ) 并无特别限制， 可以为室温， 例如， 可以为 5 ～ 45℃。提取处理可以在静态或搅拌状态下进 行。提取时间优选为 30 分钟或者多于 30 分钟， 以便获得足够量的圣草次苷。为了提高圣 草次苷的提取效率和所得到的柑橘提取物的澄清度， 可以向提取剂里添加果胶酶以便在进 行圣草次苷提取的同时， 使原材料中所含有的果胶降解。 在按上述那样从柑橘类水果中得到柑橘提取物后， 为了除去所得到的柑橘提取物 中含有的固体成分， 对该柑橘提取物进行固液分离处理。固液分离可以采用在本领域中周 知的分离方法， 例如离心分离或膜分离。离心分离因为其方便性而更优选。在采用离心分 离或膜分离进行固液分离之前， 可以通过丝网过滤或倾析而预先除去果皮等较大的固体部 分。 根据需要， 可以对经过固液分离而除去了固体成分后的柑橘提取物 ( 提取液 ) 进行浓缩 或用水稀释。 浓缩柑橘提取物可以采用在本领域中周知的方法， 例如真空浓缩、 膜浓缩或冷 冻浓缩。 如果使用乙醇当作提取溶剂， 并且当乙醇在柑橘提取物中的体积浓度超过 20％时， 优选地， 对柑橘提取物进行浓缩或用水稀释， 以调节乙醇体积浓度到 20％或者低于 20％。
对经过上述固液分离除去固体成分后的柑橘提取液根据需要进行浓缩或用水稀 释， 然后， 用专门的多孔性合成吸附树脂进行圣草次苷的分离。具体而言， 使柑橘提取物与 以酚醛树脂作为主体骨架并且具有作为官能团的氨基和酚羟基的酚醛吸附树脂 ( 第一多 孔性合成吸附树脂 ) 相接触， 使柑橘提取物中的圣草次苷吸附在该酚醛吸附树脂上。然后， 使用洗脱溶剂洗脱吸附在酚醛吸附树脂上的圣草次苷， 以便得到圣草次苷组分。圣草次苷 不仅可以物理吸附在酚醛吸附树脂表面上， 而且在酸性和中性区域中， 通过酚醛吸附树脂 上的弱碱性氨基和弱酸性酚羟基的作用而进行化学吸附和离子交换吸附。 一般多孔性合成 吸附树脂的孔径 ( 数十到数百埃 ) 比活性炭的孔径大， 因此可以吸附分子尺寸相当大的物 质。作为酚醛类吸附树脂， 例如， 可以使用日本味之素精细化学株式会社生产的 HOKUETSU HS 或者 HOKUETSU KS。
使柑橘提取物与酚醛吸附树脂的接触是通过将柑橘提取物加入至填充在柱中的
酚醛吸附树脂上来进行的。优选地， 对上述与柑橘提取物接触的酚醛吸附树脂进行冲洗。
对酚醛吸附树脂进行冲洗旨在除去其上的除了圣草次苷以外的各种杂质， 冲洗过 程是将冲洗溶剂注入到塔中的与柑橘提取物接触的酚醛吸附树脂上。优选， 冲洗溶剂不要 将吸附在酚醛吸附树脂上的圣草次苷洗脱出来。 具体来说， 冲洗溶剂可以为水或有机溶剂， 其可以与用作洗脱溶剂的试剂相同。由于在冲洗溶剂存在的情况下， 酚醛吸附树脂上的一 些杂质对树脂的吸附能力比圣草次苷对树脂的吸附能力弱， 如果冲洗溶剂与酚醛吸附树脂 接触， 则一些杂质就被冲洗溶剂洗提出来而圣草次苷通过吸附作用仍然保持吸附在酚醛吸 附树脂上。对冲洗溶剂的温度并无特别限制， 可以为室温， 例如 5 ～ 40℃。但是， 为了更有 效的除去各种杂质， 冲洗溶剂的温度优选在 40 ～ 100℃。 如果将含水的醇用作冲洗溶剂， 为 了减轻吸附在酚醛吸附树脂上的圣草次苷溶解到冲洗溶剂中， 优选， 冲洗溶剂中的醇的体 积浓度不大于 20％。
使用圣草次苷洗脱溶剂对吸附在酚醛吸附树脂上的圣草次苷进行的洗脱是这样 进行的 ： 根据需要， 冲洗与柑橘提取物接触后的在柱内的酚醛吸附树脂， 然后将洗脱溶剂灌 注到酚醛吸附树脂上。 这样就得到圣草次苷组分， 即圣草次苷洗脱液。 洗脱溶剂可以是有机 溶剂， 如醇类 ( 如甲醇、 乙醇、 丁醇、 丙醇和异丙醇等 )、 丙酮、 己烷、 三氯甲烷、 丙三醇或冰醋 酸， 也可以是水。洗脱溶剂可以单独使用， 也可以两种或多种同时使用。在将含有圣草次苷 的材料添加到食品饮料、 药品和化妆品中而使用时， 从适用性、 生产成本和提取圣草次苷的 效率角度综合考虑， 优选采用水或乙醇作为洗脱溶剂。 当含水乙醇用作洗脱溶剂时， 洗脱溶 剂中的乙醇体积浓度优选在 20％到 90％之间， 更优选在 40％到 85％之间， 尤其优选在 60％ 到 80％之间。若洗脱溶剂中的乙醇体积浓度大于等于 20％时， 吸附在酚醛吸附树脂上的圣 草次苷更容易被洗脱出来， 若洗脱溶剂中的乙醇体积浓度小于等于 90％时， 则使含有圣草 次苷的材料风味变差的成分被洗脱到洗脱溶剂中的量就会少很多。
如此得到的圣草次苷洗脱液可以直接， 或者根据需要经过浓缩、 干燥或用水稀释 处理后， 作为含有圣草次苷的材料使用。对圣草次苷洗脱液进行浓缩和干燥可以采用在本 领域中周知的工艺方法， 例如真空浓缩、 膜浓缩、 冷冻浓缩、 真空干燥或冷冻干燥等。
根据需要， 在用酚醛吸附树脂对柑橘提取液进行圣草次苷的分离之前可以利用另 外的多孔性合成吸附树脂对其进行圣草次苷分离。或者， 对经过酚醛吸附树脂分离得到的 圣草次苷洗脱液再通过另外的多孔性合成吸附树脂进行圣草次苷分离。 两种情况都可以得 到更高品质的含有圣草次苷的材料和圣草次苷含量更高的含有圣草次苷的材料。优选， 将 使用另外的多孔性合成吸附树脂进行的圣草次苷分离步骤在使用酚醛吸附树脂进行的圣 草次苷分离步骤之前进行。用于圣草次苷分离的、 不同于酚醛吸附树脂的另外的多孔性合 成吸附树脂 ( 第二多孔性合成吸附树脂 ) 包括苯乙烯和丙烯酸吸附树脂中的至少一种。具 体来说， 使柑橘提取物或圣草次苷洗脱液与第二多孔性合成吸附树脂接触， 使柑橘提取物 或圣草次苷洗脱液中的圣草次苷吸附在该第二多孔性合成吸附树脂上。然后， 用洗脱溶剂 将吸附的圣草次苷洗脱出来， 从而得到圣草次苷组分。
第二多孔性合成吸附树脂可以是罗门哈斯公司生产的 DUOLITES-861、 DUOLITE ES-865， 、 AMBERLITE XAD-4、 AMBERLITE XAD-7 和 AMBERLITE XAD-16 中 的 任 意 类 型， 也 可 以 是 三 菱 化 学 工 业 公 司 生 产 的 DIAION HP20、 DIAION HP2MG、 SEPABEADS SP207、 SEPABEADSSP700 和 SEPABEADS SP825 中的任意类型。将柑橘提取物或圣草次苷洗脱液与第二多孔性合成吸附树脂相接触是通过将柑 橘提取物或圣草次苷洗脱液添加到填充在柱中的第二多孔性合成吸附树脂上来进行的。 最 好对已与柑橘提取物或圣草次苷洗脱液接触的第二多孔性合成吸附树脂进行冲洗。
对第二多孔性合成吸附树脂进行冲洗旨在除去其上的除了圣草次苷以外的杂质。 冲洗是通过将冲洗溶剂注入到柱中的与柑橘提取物或圣草次苷洗脱液接触的第二多孔性 合成吸附树脂上进行的。优选地， 冲洗溶剂不要将吸附在第二多孔性合成吸附树脂上的圣 草次苷洗脱出来。 具体来说， 冲洗溶剂可以是水或有机溶剂， 其可以与用作洗脱剂的试剂相 同。对冲洗溶剂的温度并无特别限制， 可以是室温， 例如可以为 5 ～ 40℃。但是， 为了更有 效的除去各种杂质， 冲洗溶剂的温度优选在 40 ～ 100℃。 当将含水醇类用作冲洗溶剂时， 为 了减轻吸附在第二多孔性合成吸附树脂上的圣草次苷被洗脱到冲洗溶剂中， 冲洗剂中的醇 的体积浓度优选不大于 20％。
使用圣草次苷洗脱剂对吸附在第二多孔性合成吸附树脂上的圣草次苷的洗脱是 这样进行的 ： 根据需要冲洗在柱内的已与柑橘提取物接触的第二多孔性合成吸附树脂， 然 后将洗脱溶剂灌注到第二多孔性合成吸附树脂上。这样就得到圣草次苷组分， 即圣草次苷 洗脱液。洗脱溶剂可以是有机溶剂， 如醇 ( 例如乙醇 )、 丙酮、 正己烷、 三氯甲烷、 丙三醇或 冰醋酸， 也可以是水。洗脱剂可以单独使用， 也可以两种或多种同时使用。在将含有圣草次 苷的材料添加到食品饮料、 药品和化妆品中使用时， 从适用性、 生产成本和圣草次苷提取效 率角度综合考虑， 优选将水或乙醇作为洗脱溶剂。 当将含水乙醇用作洗脱溶剂时， 洗脱溶剂 中的乙醇体积浓度优选在 20％～ 50％之间， 更优选在 30％～ 40％之间。洗脱剂中的乙醇 体积浓度大于等于 20％时， 吸附在第二多孔性合成吸附树脂上的圣草次苷更容易被洗脱出 来， 洗脱溶剂中的乙醇体积浓度小于等于 50％时， 则会使含有圣草次苷的材料风味变差的 成分被洗脱到洗脱溶剂中的量少很多。
使用第二多孔性合成吸附树脂对柑桔提取物进行圣草次苷分离所得到的圣草次 苷洗脱液可以随后使用酚醛吸附树脂进行圣草次苷的分离。在这种情况下， 当待使用酚醛 吸附树脂进行圣草次苷分离的圣草次苷洗脱液的乙醇浓度超过 20％， 最好提前对圣草次苷 洗脱液进行稀释或浓缩， 调节乙醇的体积含量至 20％或更低。 或者， 使用酚醛吸附树脂对柑 桔提取物进行圣草次苷分离所得到的圣草次苷洗脱液可以接着使用第二多孔性合成吸附 树脂进行圣草次苷的分离处理。在这种情况下， 当待使用第二多孔性合成吸附树脂进行圣 草次苷分离的圣草次苷洗脱液的乙醇浓度超过 20％， 最好提前对圣草次苷洗脱液进行稀释 或浓缩， 以调节乙醇的体积含量至 20％或更低。
由于圣草次苷在人体内表现出优良的抗氧化作用， 因此本实施方式的含有圣草次 苷的材料主要应用于食品或者饮料 ( 例如， 软饮料、 酒、 食品、 保健食品、 保健饮料、 营养补 充剂 )、 药品、 准药品、 动物药品、 饲料、 化妆品等产品中。
作为可以添加含有圣草次苷的材料的食品或者饮料的例子， 可以列举出 ： 软饮料， 例如红茶、 大麦茶、 绿茶、 乌龙茶、 混合茶、 野草茶、 草药茶、 咖啡、 果汁饮料、 蔬菜汁饮料、 可 可粉、 豆浆、 运动饮料、 碳酸饮料、 牛奶饮料等 ； 甜食类， 例如糖果、 饼干和点心等 ； 酒精饮 料， 例如鸡尾酒、 白鸡尾酒、 酸酒、 啤酒和葡萄酒等。 也可以将含圣草次苷材料添加到其他含 凝胶剂 ( 例如果胶、 卡拉胶 ) 的食品中或各种调味品中。在不损害本发明的优点的前提下， 上述添加了含有圣草次苷的材料的食品或饮料还可以适当地含有其他添加剂， 例如糖 ( 例如葡萄糖、 蔗糖、 果糖、 乳糖、 糊精、 膳食纤维、 多糖 )、 酸化剂、 香料、 甜味剂 ( 例如甜叶菊材 料、 阿斯巴甜、 糖醇 )、 着色剂、 稳定剂、 维生素、 氨基酸、 各种矿物质以及植物或动物油脂等。
当含有圣草次苷的材料作为药品使用时， 其不仅可以通过口服给药， 还可以通过 诸如透皮给药和血管内给药等其他各种方法给药。 对含有圣草次苷的材料作为药品时的剂 型没有特别限制， 可以是粉剂、 散布剂、 颗粒剂、 片剂、 胶囊剂、 丸剂、 栓剂、 溶液剂或针剂。 可 以进一步向用于药品的含有圣草次苷的材料添加辅料， 例如赋形剂、 基础剂、 乳化剂、 溶剂 或稳定剂。
根据本实施方式， 可以获得如下优点 ：
在本实施方式中， 使用以酚醛树脂作为主体骨架并且具有氨基和酚羟基的酚醛吸 附树脂从柑橘提取物中分离圣草次苷。因此， 从柑类水果的果皮等提取出来的使含有圣草 次苷的材料品质下降的诸如有气味的成分、 有苦味的成分和有颜色的成分等， 可以被有效 的去除。于是， 所得到的含有圣草次苷的材料的品质很高， 并且所含有的圣草次苷浓度较 高。 更具体而言， 本实施方式中的含圣草次苷材料几乎没有令人不快收的气味、 苦味和涩味 较低， 没有随时间推移产生的褐变， 具有极好的时间稳定性。
在本实施方式中， 对吸附在酚醛吸附树脂上的圣草次苷使用乙醇体积含量为 20％ -90％的含水乙醇进行洗脱。 因此， 这可以有效去除使含有圣草次苷的材料的风味和外 观品质下降的成分， 并且可以对圣草次苷进行高效地洗脱和回收。
在本实施方式中， 在使用酚醛吸附树脂进行分离圣草次苷的处理之前或之后， 优 选地使用了包含有苯乙烯和丙烯酸吸附树脂中的至少一种的第二多孔性合成吸附树脂进 行圣草次苷的分离步骤。 这可以更有效地分离或去除使含圣草次苷材料风味和外观品质下 降的成分， 并且可以使含有圣草次苷的材料中的圣草次苷的含量进一步提高。
在本实施方式中， 所得到的含有圣草次苷的材料能够用于食品、 饮料产品、 药品和 化妆品中， 尽管这些食品、 饮料产品、 药品和化妆品中的圣草次苷含量很高， 其仍然拥有高 品质的气味、 滋味和颜色， 因此， 易于连续摄取或使用这些产品。
当使用压榨柑橘类水果果汁后所得到的压榨残留物作为生产含有圣草次苷的材 料的原料时， 可以极其容易地得到大量的含有圣草次苷的柑橘提取物。由于在生产含有柑 橘类水果果汁的饮料产品时会产生大量的柑类水果的压榨残留物， 因此， 可以以较低的成 本得到该压榨残留物。 并且， 从食品回收再利用法的观点来说， 再次利用柑橘类水果压榨残 留物是很有益处的。
可以将实施方式作如下更改或修改 ：
不仅可以只进行一次用酚醛吸附树脂来分离圣草次苷的过程， 也可以进行两次或 更多次。同样， 不仅可以只进行一次用含有苯乙烯和丙烯酸吸附树脂中的至少一种的多孔 性合成吸附树脂来分离圣草次苷的过程， 而是可以进行两次或更多次。 在这种情况下， 可以 进一步除去杂质。
对含有圣草次苷的材料的形式并没有特别限制， 例如， 可以是液体或者粉末形式。
接下来， 将参照实施例和比较例对本发明进行进一步的具体说明。
< 含有圣草次苷的材料的制备 >
实施例 1
将 2kg 柠檬压榨残渣粉碎， 将粉碎物料浸入到作为提取剂的 10L 水中， 在室温下静置 30 分钟时间， 得到柠檬提取液。将得到的柠檬提取液进行了丝网过滤 ( 网眼尺寸 ： 500μm/32 目 )， 然后以 9000rpm 的转速对滤液进行 20 分钟的离心分离。对离心后上清液 进行超滤 ( 截留分子量 20,000)， 得到透明的滤出液 ( 粗提取液 )。
将得到的滤出液添加到填充有 200ml 酚醛吸附树脂 (HOKUETSU HS， 味之素精细技 术公司生产 ) 的柱中。然后， 将以 600ml 水和 600ml 乙醇体积浓度为 10％的含水乙醇作为 冲洗溶剂依次注入到柱中， 以冲洗酚醛吸附树脂。随后， 将 1L 乙醇体积浓度为 80％的含水 乙醇作为洗脱溶剂注入柱中， 以洗脱吸附在酚醛吸附树脂上的圣草次苷。对这样得到的洗 脱液进行真空浓缩以除去乙醇， 得到实施例 1 的含有圣草次苷的材料。
实施例 2
将水添加至在实施例 1 中制备的含圣草次苷的材料中配成 2L 溶液， 将此溶液再加 入到填充有 200ml 苯乙烯吸附树脂 (AMBERLITE XAD-16， 罗门哈斯公司生产 ) 的柱中。然 后， 将 600ml 水和 600ml 乙醇体积浓度为 10％的含水乙醇作为冲洗溶剂依次注入到柱中来 冲洗苯乙烯吸附树脂。 随后， 以 1L 乙醇体积浓度为 40％的含水乙醇作为洗脱溶剂注入到柱 中来洗脱吸附在苯乙烯吸附树脂上的圣草次苷。 对这样得到的洗脱液进行真空浓缩除去乙 醇， 得到实施例 2 的含有圣草次苷的材料。 实施例 3
将 2kg 柠檬压榨残渣粉碎， 将此粉碎物料浸入到作为提取剂的 10L 水中， 在室温 下静置 30 分钟时间， 得到柠檬提取液。将得到的柠檬提取液进行丝网过滤 ( 网目尺寸 ： 500μm/32 目 )， 然后以 9000rpm 的转速对滤液进行 20 分钟的离心分离。对离心上清液进 行超滤 ( 截留分子量 20,000)， 从而得到透明的滤出液 ( 粗提取液 )。
将所得到的滤出液添加到填充有 200ml 酚醛吸附树脂 (HOKUETSUHS， 味之素精细 技术公司生产 ) 的柱中， 然后， 将 600ml 水和 600ml 乙醇体积浓度为 10％的含水乙醇作为冲 洗溶剂依次注入到柱中来冲洗酚醛吸附树脂。 随后， 以 1L 乙醇体积浓度为 40％的含水乙醇 作为洗脱溶剂注入到柱中来洗脱吸附在酚醛吸附树脂上的圣草次苷。 对这样得到的洗脱液 进行真空浓缩除去乙醇， 得到实施例 3 的含有圣草次苷的材料。
实施例 4
将水添加至在实施例 3 中制备的含圣草次苷的材料中配成 2L 溶液， 将此溶液再加 入到填充有 200ml 苯乙烯吸附树脂 (AMBERLITE XAD-16， 罗门哈斯公司生产 ) 的柱中。然 后， 将 600ml 水和 600ml 乙醇体积浓度为 10％的含水乙醇作为冲洗溶剂依次注入到柱中来 冲洗苯乙烯吸附树脂。 随后， 以 1L 乙醇体积浓度为 40％的含水乙醇作为洗脱溶剂注入到柱 中来洗脱吸附在苯乙烯吸附树脂上的圣草次苷。 对这样得到的洗脱液进行真空浓缩除去乙 醇， 得到实施例 4 的含有圣草次苷的材料。
比较例 1
除了用苯乙烯吸附树脂 (AMBERLITE XAD-16， 罗门哈斯公司生产 ) 代替酚醛吸附 树脂， 并且用作洗脱溶剂的含水乙醇中的乙醇体积浓度由 80％变为 40％以外， 采用和实施 例 1 相同的步骤制备含有圣草次苷的材料。
实施例 5
将水添加至在比较例 1 中制备的含有圣草次苷的材料中以配成 2L 溶液， 将此溶液 再加入至填充有 200ml 酚醛吸附树脂 (HOKUETSU HS， 味之素精细技术公司生产 ) 的柱中。
然后， 将 600ml 水和 600ml 乙醇体积浓度为 10％的含水乙醇作为冲洗溶剂依次注入到柱中 来冲洗酚醛吸附树脂。 随后， 以 1L 乙醇体积浓度为 40％的含水乙醇作为洗脱溶剂注入到柱 中来洗脱吸附在酚醛吸附树脂上的圣草次苷。 对这样得到的洗脱液进行真空浓缩以除去乙 醇， 得到实施例 5 的含有圣草次苷的材料。
实施例 6
将水添加至在比较例 1 中制备的含有圣草次苷的材料中来配成 2L 溶液， 将此溶液 再加入至填充有 200ml 酚醛吸附树脂 (HOKUETSU HS， 味之素精细技术公司生产 ) 的柱中。 然后， 将 600ml 水和 600ml 乙醇体积浓度为 10％的含水乙醇作为冲洗溶剂依次注入到柱中 以冲洗酚醛吸附树脂。 随后， 将 1L 乙醇体积浓度为 80％的含水乙醇作为洗脱溶剂注入到柱 中以洗脱吸附在酚醛吸附树脂上的圣草次苷。 对这样得到的洗脱液进行真空浓缩以除去乙 醇， 得到实施例 6 的含有圣草次苷的材料。
比较例 2
将水添加至在比较例 1 中制备的含有圣草次苷的材料中来制成 2L 溶液， 将此溶液 再加入至填充有 200ml 苯乙烯吸附树脂 (AMBERLITEXAD-16) 的柱中。然后， 将 600ml 水和 600ml 乙醇体积浓度为 10％的含水乙醇作为冲洗溶剂依次注入到塔中以冲洗苯乙烯吸附 树脂。 随后， 将 1L 乙醇体积浓度为 40％的含水乙醇作为洗脱溶剂注入到柱中以洗脱吸附在 苯乙烯吸附树脂上的圣草次苷。对这样得到的洗脱液进行真空浓缩以除去乙醇， 得到比较 例 2 的含有圣草次苷的材料。 比较例 3
将在实施例 1 中得到的透明滤液 ( 粗提取液 ) 加入到填充有 200ml 酚醛吸附树脂 (AMBERLITE XAD-761， 罗门哈斯公司生产 ) 的柱中。然后， 将 1L 乙醇体积浓度为 40％的含 水乙醇作为洗脱溶剂注入到柱中来洗脱吸附在酚醛吸附树脂上的圣草次苷。 对这样得到的 洗脱液进行了真空浓缩以除去乙醇， 得到比较例 3 的含有圣草次苷的材料。在这里所使用 的 AMBERLITE XAD-761 是以酚醛树脂作为主体骨架， 以酚羟基和羟甲基作为离子交换基团， 其平均孔径为 600 埃。
< 对含有圣草次苷的材料进行品质评价 >
将实施例 1-6 和比较例 1-3 的含有圣草次苷的材料调节至使圣草次苷浓度均为 1,800ppm( 采用高效液相色谱法 (HPLC) 测定 )。分别测量了它们在 420nm 波长处的吸光 度和可溶性固体物质浓度的 Brix 值， 并进一步对风味进行了评价。使用日立公司生产的 U-2000 型双光束分光光度计进行了吸光度测定。关于风味评价， 以 -， ±， +， ++， +++， ++++， 和 +++++7 个等级对生药味和苦味进行了感官评定。+ 数量越多， 表示生药味或者苦味越强 烈。测量和评价结果如表 1 所示。
表1
由表 1 结果可知 ：
- 使用酚醛吸附树脂 (HOKUETSU HS) 得到的实施例 1 的含有圣草次苷的材料比仅 使用苯乙烯吸附树脂 (AMBERLITE XAD-16) 得到的比较例 1 和 2 的含有圣草次苷的材料具 有更好的风味和更少的着色。
- 使用酚醛吸附树脂再使用苯乙烯吸附树脂 (AMBERLITE XAD-16) 得到的实施例 2 的含有圣草次苷的材料具有更好的风味和更少的着色。
- 从实施例 2 的含有圣草次苷的材料的圣草次苷 /BRIX 值较大可以看出， 由于除去 了杂质而提高了圣草次苷的含量。
- 在实施例 3 和 4 中采用乙醇浓度比较低的洗脱溶剂来洗脱吸附在酚醛吸附树脂 (HOKUETSU HS) 上的圣草次苷， 而在实施例 1 和 2 中采用了乙醇浓度较高的洗脱溶剂进行洗 脱， 前者得到的含有圣草次苷的材料的风味更好， 着色更少， 并且圣草次苷 /BRIX 值更大。
- 使用了酚醛吸附树脂 (AMBERLITE XAD-761)( 其不同于具有氨基和酚羟基的酚 醛吸附树脂 ) 得到的比较例 3 的含有圣草次苷的材料的着色未得到充分地抑制。
- 使用苯乙烯吸附树脂代替酚醛吸附树脂得到的比较例 1 和 2 的含有圣草次苷的 材料风味不好， 着色也未得到充分地抑制， 圣草次苷 /BRIX 值较小。与其相反， 先用苯乙烯 吸附树脂再用酚醛吸附树脂 (HOKUETSU HS) 得到的实施例 5 和 6 的含有圣草次苷的材料的 风味更好， 着色较少， 并且圣草次苷 /BRIX 值较高。
- 从上述可以看出， 通过使用具有氨基和酚羟基的酚醛吸附树脂可以得到具有良 好风味和颜色的高品质的含有圣草次苷的材料。
< 添加了含有圣草次苷的材料的柠檬味饮料的生产方法 >
实施例 7
将 70g 蔗糖和 2g 柠檬酸钠添加到 20g 透明浓缩柠檬汁 (Brix 40) 中。向其中添 加实施例 2 中制备的含有圣草次苷的材料， 使圣草次苷最终浓度为 600ppm， 添加水配制成 1 升溶液。将该溶液在 85℃下进行 30 秒的杀菌， 然后以每瓶 100ml 的量热灌装至瓶中， 从而 得到实施例 7 的柠檬风味饮料。为了加速其随时间的变化， 将制得的柠檬风味饮料在 60℃ 下静置 3 天时间。然后， 对 3 天后的柠檬风味饮料测量其在 420nm 波长处的吸光度， 并进一
步对风味进行了评价。关于风味测定， 以 -、 ±、 +、 ++、 +++、 ++++ 和 +++++7 个等级对生药味 和苦味进行了感官评定。+ 数量越多， 表示生药味或者苦味越强烈。测量和评价结果如表 2 所示。
比较例 4
将 70g 蔗糖和 2g 柠檬酸钠添加到 20g 透明浓缩柠檬果汁 (Brix 40) 中。向其中 添加比较例 2 中制备的含有圣草次苷的材料， 使圣草次苷最终浓度为 600ppm， 添加水配制 成 1 升溶液。将该溶液在 85℃下进行 30 秒的杀菌， 然后以每瓶 100ml 的量热灌装至瓶中， 从而得到了比较例 4 的柠檬风味饮料。为了加速其随时间的变化， 将制得的柠檬风味饮料 在 60℃下静置 3 天时间。然后， 对 3 天后的柠檬风味饮料， 按照与实施例 7 同样的方法， 进 行了吸光度测定与风味评价。测量和评价结果如表 2 所示。
表2
如表 2 所示， 实施例 7 的柠檬味饮料与比较例 4 的柠檬味饮料相比， 随时间变化而 引起的着色和风味下降较少。
< 洗脱溶剂的研究 >
在制备实施例 1 中的含有圣草次苷的材料时， 代替将乙醇体积浓度为 80％的含水 乙醇用作洗脱溶剂， 使用了乙醇体积浓度逐次增加的含水乙醇作为洗脱溶剂来洗脱酚醛吸 附树脂上所吸附的圣草次苷， 即逐次使用乙醇体积浓度为 10％的含水乙醇、 乙醇体积浓度 为 20％的含水乙醇、 乙醇体积浓度为 30％的含水乙醇、 乙醇体积浓度为 40％的含水乙醇、 乙醇体积浓度为 60％的含水乙醇、 乙醇体积浓度为 80％的含水乙醇以及 100％的乙醇作为 洗脱溶剂。 将使用乙醇浓度不同的各洗脱溶剂所得到的含有圣草次苷的材料的圣草次苷浓 度调整为 1800ppm。然后， 对它们分别测量了其在 420nm 波长处的吸光度和可溶性固体物 质浓度的 Brix 值， 并进一步对其风味进行了评价。此外， 在将每份清滤液 ( 粗提取液 ) 添 加到填充有酚醛吸附树脂 (HOKUETSU HS) 的柱中之前均采用高效液相色谱法测量了清滤液 中的圣草次苷含量， 根据该含量， 求出了圣草次苷的回收率。关于风味测定， 以 -、 ±、 +、 ++、 +++、 ++++ 和 +++++7 个等级对生药味和苦味进行了感官评定。+ 数量越多， 表示生药味或者 苦味越强烈。测量和评价结果如表 3 所示。
表3
如表 3 所示， 可以确认， 洗脱溶剂里的乙醇浓度越低， 得到的含有圣草次苷的材料 的着色越少， 风味越好。 此外， 可以确认， 洗脱溶剂里的乙醇浓度越高， 圣草次苷的回收率往 往越高。然而， 同样可以确认， 若洗脱溶剂里的乙醇浓度过低或过高， 从圣草次苷 /Brix 值 较小可以看出， 将导致杂质去除不充分。综合各种因素， 可以得知， 洗脱溶剂里的乙醇体积 浓度尤其优选在 60％～ 80％之间。另外， 使用味之素精细技术公司生产的 HOKUETSU KS 代 替 HOKUETSU HS 作为酚醛吸附树脂， 得到了同样的结果 ( 数据未给出 )。14