一种制备皮肤长寿因子肽的工艺
技术领域
本发明涉及一种制备具有多种生理活性的皮肤长寿因子肽的工艺，尤其是，一种制备天然的促进皮肤健康长寿的新型肽类产品的工艺。
背景技术
追求健康也许是人类唯一没有时间与疆界藩篱的共同理想，对于无往而不胜的人来说，唯一无法征服的大概就是健康了。人体是一个有机的整体，要想拥有健康的身体，就必须要使人体的最大器官一一皮肤获得健康。
皮肤在身体的最外一层覆盖着，它直接接触外界各种物质，包括阳光、灰尘、空气中的化学物质、化妆品，感受温度及湿度的变化，因此，皮肤很容易受到外界的刺激或影响。而这些物质有些对身体有益，有些也会对身体机能造成一定危害。为了保持皮肤的健康长寿，人们正不断从各种化妆品成分的改进过程中寻求解决的办法。目前，国际市场销售的化妆品用的蛋白质类原料近50种。
作为化妆品原料，一种含有53个氨基酸的肽类物质——表皮生长因子是备受推崇的，然而它目前主要采用基因工程合成，100μg约为100美金，价格昂贵，极大地限制了它的应用。
因此，亟待提出一种新型的肽类物质的制造工艺，以解决现有技术中的缺点。
发明内容
有鉴于此，本发明的一个目的在于提供一种制备具有多种生理活性的皮肤长寿因子肽的工艺。
为达到上述目的，本发明采用的技术方案是：一种制备皮肤长寿因子肽的工艺，其包括有以下步骤。活化出发菌(CoL2-21)种子液15～30小时。配制发酵培养基“1.0～4.0％PTS多肽∶1.0～3.0％葡萄糖”。发酵培养基灭菌后降温至15～40℃，接入活化好的种子液。间歇搅拌，15～40℃培养1～4天后停止发酵，发酵液沸水浴10～40分钟破壁，离心收集上清液。上清液浓缩、喷雾干燥，制得成品。
进一步的，在不同实施方式中，活化出发菌(CoL2-21)种子液15～30小时。
进一步的，在不同实施方式中，配制的发酵培养基中的成分比例为：“1.0～4.0％PTS多肽∶1.0～3.0％葡萄糖”。
进一步的，在不同实施方式中，发酵培养基在发酵罐中灭菌后降温至15～40℃。
进一步的，在不同实施方式中，间歇搅拌，15～40℃培养1～4天后停止发酵。
进一步的，在不同实施方式中，发酵液沸水浴10～40分钟破壁。
进一步的，有本发明涉及的皮肤长寿因子肽的制备工艺获得的皮肤长寿因子肽，其具体属性如下：
物理性质：淡黄色，粉末，具有甜鲜口味，溶液澄清透明；
主要成分为：多肽含量≥85％，羟脯氨酸≥6.0％，GSH含量≥0.9％；多糖含量≥0.7％；
分子量范围为：200～1000Da。
为评估本发明涉及的皮肤长寿因子肽的制备工艺获得的皮肤长寿因子肽产品的性能，进行了以下实验。
1 体表保湿功能实验
按照1∶4的料液比配制受试物溶液，通过SK-II水分测定仪测定其体表保湿效果，结果证明皮肤长寿因子肽的体表保湿效果远强于市售多肽产品。
2 体外保湿功能实验
按照1∶4的料液比配制受试物溶液，通过干燥器模拟恒温恒湿环境；用3M胶布模拟人体皮肤涂抹受试物溶液；单位时间测量失水量，折算失水率；结果证明皮肤长寿因子肽的体外失水率远低于市售多肽产品，有良好的保湿效果。
3 清除自由基DPPH能力的测定方法
测定相同浓度的皮肤长寿因子肽和GSH的DPPH自由基清除率，结果如下：
表1皮肤长寿因子肽DPPH自由基清除率(![]()
n＝6)
名称
清除率％
RSD％
100mg/L GSH
69.85
2.66
50mg/L GSH
55.01
2.56
100mg/L皮肤长寿因子肽
67.56
1.80
50mg/L皮肤长寿因子肽
56.63
2.63
由表1可见皮肤长寿因子具有与GSH相当的DPPH自由基清除率。
相对于现有技术，本发明涉及的皮肤长寿因子肽制造工艺，利用发酵法对含多肽的溶液进行发酵，通过发酵过程中产生的GSH，可以有效地弥补PTS多肽抗氧化能力的不足，在使得皮肤长寿因子肽拥有优良的保湿效果的同时也具有了抗氧化能力。
附图说明
图1是本发明涉及皮肤长寿因子肽制造工艺的流程框图。
具体实施方式
化妆品原料中，最早广泛应用的是胶原蛋白，这类产品性能温和、功能多、使用安全、符合当代化妆品的潮流，成为高档化妆品的重要原料。如，美国CTFA化妆品原料手册录用的天然物质和日本《功能性化妆品原料》中选用的天然物质中都有胶原蛋白或其水解产物(羟脯氨酸。脯氨酸、丝氨酸)。
随着生物酶工程技术的发展，人们对由胶原蛋白降解得到的小分子肽有了深入地认识，并逐步热衷于开发含有小分子肽的外用及内服的化妆品。而化妆品原料市场中有些胶原肽就是从深海鱼皮、鱼鳞、鱼骨中提取的。而且国内很多知名的化妆品商家，在其生产的高档化妆品中都添加了水产胶原肽作为它的功效因子。经对比实验证明：皮肤原蛋白对皮肤具有良好的亲和性和保湿性。能滋润肌肤，赋予其平滑感觉，加入护肤类化妆品中，与其它原料配伍性佳。协同效应良好，能对受损肌肤有较好的修复效果.使用1个月后，使用者普遍反应肤感细腻、润滑、细小皱纹得到很好的舒展，肤色有所增白。
酵母是世界上研究最多的微生物之一，是当今生物技术产品研究开发的热点和现代生物技术发展、基因组研究的模式系统。由于酵母已传统地应用于食品工业的面包制作和酿造领域，它有着非常天然良好的标签形象，所以也把酵母抽提物作为水解植物蛋白和味精的替代品。国外的酵母抽提物应用非常广泛，市场也比较成熟，年产销量超过10万吨。欧洲和日本的抽提物产品有一定的差别。欧洲的产品除了普通的纯酵母抽提物以外，还有一些特殊的风味型产品，是采用酵母抽提物加上合适的香精制成，往往具有肉类、烟熏味等特有的风味特征。在应用上，欧洲通常将酵母抽提物作为酸水解植物蛋白和MSG的替代品。日本的产品一般颜色较浅、溶解性很好，并且在营养上作了强化，例如高谷胱甘肽含量的酵母抽提物。在国内，高纯度的谷胱甘肽主要用来做药品，国家的食品添加剂目录中并未明确将其列入，只称其为一种功效因子。然而，高谷胱甘肽含量的酵母抽提物已列入国家允许使用的食品添加剂目录。为皮肤长寿因子肽的应用铺平了道路。
而本发明就是利用发酵法对含多肽的溶液进行发酵来制备皮肤长寿因子肽，本发明涉及的流程框图请参阅图1所示。以下涉及的各实施例均是根据图1所示的流程完成的。而通过下述实施实例将有助于理解本发明，但不限制本发明的内容。
实施实例1：
500ml培养基(3.0％PTS多肽，2.0％葡萄糖)，分装到17个300ml三角瓶中(约30ml/瓶)灭菌降温后接入CoL2-21，30℃摇床培养活化20小时制备种子液。
135gPTS多肽∶90g葡萄糖∶3.5L水配制优化培养基，转入发酵罐121℃灭菌20分钟后降温至30℃左右，接入活化20小时的种子液，间歇搅拌发酵2天。
2天后，发酵罐夹套通入蒸汽升温至100摄氏度左右，维持10分钟后取出发酵液5300ml，离心收集上清液浓缩干燥，得产物169.2g。
所制备的皮肤长寿因子产品指标如下：
水分％
灰分％(干基)
多肽％(干基)
多糖％(干基)
HYP％(干基)
6.39
5.67
87.80
0.771
6.82
实施实例2：
500ml培养基(3.0％PTS多肽，3.0％葡萄糖)，分装到17个300ml三角瓶中(约30ml/瓶)灭菌降温后接入CoL2-21，30℃摇床培养活化24小时制备种子液。
135gPTS多肽∶135g葡萄糖∶3.5L水配制优化培养基，转入发酵罐121℃灭菌30min后降温至30℃左右，接入活化24小时的种子液，间歇搅拌发酵3天。
3天后发酵罐夹套通入蒸汽升温至100摄氏度左右，维持20分钟后取出发酵液5410ml，离心收集上清液浓缩干燥，得产物165.9g。
所制备的皮肤长寿因子产品指标如下：
水分％
灰分％(干基)
多肽％(干基)
多糖％(干基)
HYP％(干基)
6.25
5.97
88.00
0.775
6.76
实施实例3：
500ml优化培养基(2.0％PTS多肽，3.0％葡萄糖)，分装到17个300ml三角瓶中(约30ml/瓶)灭菌降温后接入CoL2-21，28℃摇床培养活化22h制备种子液。
90gPTS多肽∶135g葡萄糖∶3.5L水配制优化培养基，转入发酵罐121℃灭菌20分钟后降温至30℃左右，接入活化22小时的种子液，间歇搅拌发酵3天。
3天后发酵罐夹套通入蒸汽升温至100摄氏度左右，维持30分钟后取出发酵液5300ml，离心收集上清液浓缩干燥，得产物167.4g。
所制备的皮肤长寿因子产品指标如下：
水分％
灰分％(干基)
多肽％(干基)
多糖％(干基)
HYP％(干基)
6.74
5.39
87.52
0.764
6.90