《环烯醚萜苷及其衍生物作为纤溶酶抑制剂的应用及其药物组合物.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《环烯醚萜苷及其衍生物作为纤溶酶抑制剂的应用及其药物组合物.pdf（15页珍藏版）》请在专利查询网上搜索。
1、10申请公布号CN102151282A43申请公布日20110817CN102151282ACN102151282A21申请号201110048422222申请日20110301A61K31/7048200601A61P7/04200601A61P9/14200601A61P35/00200601A61P35/02200601A61P1/16200601A61P9/0020060171申请人贾正平地址730000甘肃省兰州市七里河区兰州军区兰州总医院72发明人樊鹏程李茂星贾正平马慧萍景临林74专利代理机构北京中恒高博知识产权代理有限公司11249代理人夏晏平54发明名称环烯醚萜苷及其衍生物作为。
2、纤溶酶抑制剂的应用及其药物组合物57摘要本发明涉及环烯醚萜苷及其衍生物作为纤溶酶抑制剂的应用及其药物组合物，属于天然药物提取物的用途技术领域。如栀子苷，番木鳖苷或它们的药物可接受的盐或酯形式，其作为纤溶酶抑制剂的应用及其药物组合物。51INTCL19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书3页说明书11页CN102151282A1/3页21环烯醚萜苷及其衍生物作为纤溶酶抑制剂的应用；所述的环烯醚萜苷及其衍生物为式、化合物所能接受的盐或酯形式式R1是H、OH、NH2、NO2、COOH、COOCH3、COOCH2CH3、COOC1C8烷基、COO氟烷基、C1C8烷基、C3C6环烷基、。
3、C1C8羧酸、C1C8羧酸酯、吡啶基、苯基或苄基，苯基或苄基的环可以任选被13个独立自选卤素、C1C8烷基、全氟烷基、COOC1C8烷基，COO氟烷基、COOC3C6环烷基、OH、NH2和NO2的基团取代，HSCH2、CH3SCH2CH2、3吲哚基亚甲基、4咪唑基亚甲基；R2是H，OH，C1C8烷基，卤素，NH2，NO2；R3是H，OH，C1C8烷基，卤素，NH2，NO2；R4是H、OH、NH2、NO2、COOH、COOCH3、COOCH2CH3、COOC1C8烷基、COO氟烷基、C1C8烷基、C3C6环烷基、C1C8羧酸、C1C8羧酸酯、吡啶基、苯基或苄基，苯基或苄基的环可以任选被13个独立。
4、自选卤素、C1C8烷基、全氟烷基、COOC1C8烷基，COO氟烷基、COOC3C6环烷基、OH、NH2和NO2的基团取代，HSCH2、CH3SCH2CH2、3吲哚基亚甲基、4咪唑基亚甲基；式R1是H、OH、NH2、NO2、COOH、COOCH3、COOCH2CH3、COOC1C8烷基、COO氟烷权利要求书CN102151282A2/3页3基、C1C8烷基、C3C6环烷基、C1C8羧酸、C1C8羧酸酯、吡啶基、苯基或苄基，苯基或苄基的环可以任选被13个独立自选卤素、C1C8烷基、全氟烷基、COOC1C8烷基，COO氟烷基、COOC3C6环烷基、OH、NH2和NO2的基团取代，HSCH2、CH3S。
5、CH2CH2、3吲哚基亚甲基、4咪唑基亚甲基；R2是H、OH、NH2、NO2、COOH、COOCH3、COOCH2CH3、COOC1C8烷基、COO氟烷基、C1C8烷基、C3C6环烷基、C1C8羧酸、C1C8羧酸酯、吡啶基、苯基或苄基，苯基或苄基的环可以任选被13个独立自选卤素、C1C8烷基、全氟烷基、COOC1C8烷基，COO氟烷基、COOC3C6环烷基、OH、NH2和NO2的基团取代，HSCH2、CH3SCH2CH2、3吲哚基亚甲基、4咪唑基亚甲基；式R1是H、OH、NH2、NO2、COOH、COOCH3、COOCH2CH3、COOC1C8烷基、COO氟烷基、C1C8烷基、C3C6环烷基、。
6、C1C8羧酸、C1C8羧酸酯、吡啶基、苯基或苄基，苯基或苄基的环可以任选被13个独立自选卤素、C1C8烷基、全氟烷基、COOC1C8烷基，COO氟烷基、COOC3C6环烷基、OH、NH2和NO2的基团取代，HSCH2、CH3SCH2CH2、3吲哚基亚甲基、4咪唑基亚甲基；R2是H，OH，C1C8烷基，卤素，NH2，NO2；R3是H，OH，C1C8烷基，卤素，NH2，NO2；R4是H、OH、NH2、NO2、COOH、COOCH3、COOCH2CH3、COOC1C8烷基、COO氟烷基、C1C8烷基、C3C6环烷基、C1C8羧酸、C1C8羧酸酯、吡啶基、苯基或苄基，苯基或苄基的环可以任选被13个独立。
7、自选卤素、C1C8烷基、全氟烷基、COOC1C8烷基，COO氟烷基、COOC3C6环烷基、OH、NH2和NO2的基团取代，HSCH2、CH3SCH2CH2、3吲哚基亚甲基、4咪唑基亚甲基。2环烯醚萜苷及其衍生物作为纤溶酶抑制剂的应用；所述的环烯醚萜苷及其衍生物为以下之一的化合物1S,4AS,5R,7S,7AS1D葡萄糖5,7二氢7甲基1,4A,5,6,7,7A六氢环戊二烯C吡喃4羧酸及其盐或酯形式，4AR,7R,7AR1D葡萄糖5,7二氢7甲基1,4A,5,6,7,7A六氢环戊二烯C吡喃4羧酸及其盐或酯形式，8O乙酰山栀子苷甲酯，番木鳖苷或它们的药物可接受的盐或酯形式。权利要求书CN10215。
8、1282A3/3页43权利要求12所述的环烯醚萜苷及其衍生物在治疗哺乳动物纤溶亢进、出血及血管损伤的药物中的应用。4权利要求3所述的环烯醚萜苷及其衍生物在治疗哺乳动物原发性纤维蛋白溶解过度所引起的出血，包括急性和慢性、局限性或全身高纤溶性出血，肿瘤、白血病、妇产科致意外出血，严重肝病出血的药物中的应用。5权利要求12所述的环烯醚萜苷及其衍生物在治疗哺乳动物末梢动脉疾病的药物中的应用。6权利要求12所述的环烯醚萜苷及其衍生物在治疗哺乳动物慢性渗血的药物中的应用。7一种纤溶酶抑制剂药物组合物，该组合物包括含药物有效量的权利要求12任一项的化合物可接受的盐或酯形式和药物可接受的赋形剂或载体。权利要求。
9、书CN102151282A1/11页5环烯醚萜苷及其衍生物作为纤溶酶抑制剂的应用及其药物组合物技术领域0001本发明涉及环烯醚萜苷及其衍生物作为纤溶酶抑制剂的应用及其药物组合物，属于天然药物用途技术领域。背景技术0002血液凝固过程中形成的纤维蛋白，被分解液化的过程，叫纤维蛋白溶解（简称纤溶）。参与纤溶过程的一系列化学物质组成的系统称为纤溶系统。纤溶是体内重要的抗凝血过程。它和血凝过程一样，也是机体的一种保护性生理反应。对体内血液经常保持液体状态与管道畅通起着重要的作用。纤溶系统包括纤维蛋白溶解酶（简称纤溶酶）、纤溶酶的激活物与抑制物3个组成部分。纤维蛋白溶解（简称纤溶）的基本过程可分为两个阶。
10、段纤溶酶原的激活与纤维蛋白的降解。纤维蛋白溶解酶又称为纤溶酶,该酶通常以纤溶酶原的形式存在，在纤溶酶原激活物的作用下转变为纤溶酶才能降解纤维蛋白网。纤溶酶的活化在纤溶过程中起着重要的作用。纤溶系统功能亢进会导致多种疾病。其中原发性纤维蛋白溶解过度可引起出血，包括急性和慢性、局限性或全身性的高纤溶出血，后者常见于肿瘤、白血病，妇产科意外、严重肝病出血。因此，抑制纤溶酶的药物可以治疗因纤溶亢进引起的上述疾病。发明内容0003本发明要解决的技术问题是提供了环烯醚萜苷及其衍生物作为纤溶酶抑制剂的应用，及其药用组合物。0004为了解决上述技术问题，本发明提供了如下的技术方案1、环烯醚萜苷及其衍生物作为纤。
11、溶酶抑制剂的应用；所述的环烯醚萜苷及其衍生物为式、化合物所能接受的盐或酯形式式说明书CN102151282A2/11页6R1是H、OH、NH2、NO2、COOH、COOCH3、COOCH2CH3、COOC1C8烷基、COO氟烷基、C1C8烷基、C3C6环烷基、C1C8羧酸、C1C8羧酸酯、吡啶基、苯基或苄基，苯基或苄基的环可以任选被13个独立自选卤素、C1C8烷基、全氟烷基、COOC1C8烷基，COO氟烷基、COOC3C6环烷基、OH、NH2和NO2的基团取代，HSCH2、CH3SCH2CH2、3吲哚基亚甲基、4咪唑基亚甲基；R2是H，OH，C1C8烷基，卤素，NH2，NO2；R3是H，OH，。
12、C1C8烷基，卤素，NH2，NO2；R4是H、OH、NH2、NO2、COOH、COOCH3、COOCH2CH3、COOC1C8烷基、COO氟烷基、C1C8烷基、C3C6环烷基、C1C8羧酸、C1C8羧酸酯、吡啶基、苯基或苄基，苯基或苄基的环可以任选被13个独立自选卤素、C1C8烷基、全氟烷基、COOC1C8烷基，COO氟烷基、COOC3C6环烷基、OH、NH2和NO2的基团取代，HSCH2、CH3SCH2CH2、3吲哚基亚甲基、4咪唑基亚甲基；式R1是H、OH、NH2、NO2、COOH、COOCH3、COOCH2CH3、COOC1C8烷基、COO氟烷基、C1C8烷基、C3C6环烷基、C1C8羧。
13、酸、C1C8羧酸酯、吡啶基、苯基或苄基，苯基或苄基的环可以任选被13个独立自选卤素、C1C8烷基、全氟烷基、COOC1C8烷基，COO氟烷基、COOC3C6环烷基、OH、NH2和NO2的基团取代，HSCH2、CH3SCH2CH2、3吲哚基亚甲基、4咪唑基亚甲基；说明书CN102151282A3/11页7R2是H、OH、NH2、NO2、COOH、COOCH3、COOCH2CH3、COOC1C8烷基、COO氟烷基、C1C8烷基、C3C6环烷基、C1C8羧酸、C1C8羧酸酯、吡啶基、苯基或苄基，苯基或苄基的环可以任选被13个独立自选卤素、C1C8烷基、全氟烷基、COOC1C8烷基，COO氟烷基、CO。
14、OC3C6环烷基、OH、NH2和NO2的基团取代，HSCH2、CH3SCH2CH2、3吲哚基亚甲基、4咪唑基亚甲基；式R1是H、OH、NH2、NO2、COOH、COOCH3、COOCH2CH3、COOC1C8烷基、COO氟烷基、C1C8烷基、C3C6环烷基、C1C8羧酸、C1C8羧酸酯、吡啶基、苯基或苄基，苯基或苄基的环可以任选被13个独立自选卤素、C1C8烷基、全氟烷基、COOC1C8烷基，COO氟烷基、COOC3C6环烷基、OH、NH2和NO2的基团取代，HSCH2、CH3SCH2CH2、3吲哚基亚甲基、4咪唑基亚甲基；R2是H，OH，C1C8烷基，卤素，NH2，NO2；R3是H，OH，C。
15、1C8烷基，卤素，NH2，NO2；R4是H、OH、NH2、NO2、COOH、COOCH3、COOCH2CH3、COOC1C8烷基、COO氟烷基、C1C8烷基、C3C6环烷基、C1C8羧酸、C1C8羧酸酯、吡啶基、苯基或苄基，苯基或苄基的环可以任选被13个独立自选卤素、C1C8烷基、全氟烷基、COOC1C8烷基，COO氟烷基、COOC3C6环烷基、OH、NH2和NO2的基团取代，HSCH2、CH3SCH2CH2、3吲哚基亚甲基、4咪唑基亚甲基。0005进一步地，所述的环烯醚萜苷及其衍生物为以下之一的化合物1S,4AS,5R,7S,7AS1D葡萄糖5,7二氢7甲基1,4A,5,6,7,7A六氢环戊。
16、二烯C吡喃4羧酸及其盐或酯形式，4AR,7R,7AR1D葡萄糖5,7二氢7甲基1,4A,5,6,7,7A六氢环戊二烯C吡喃4羧酸及其盐或酯形式，8O乙酰山栀子苷甲酯，番木鳖苷或它们的药物可接受的盐或酯形式。00062、环烯醚萜苷及其衍生物在治疗哺乳动物纤溶亢进、出血及血管损伤的药物中的应用，尤其是在治疗哺乳动物原发性纤维蛋白溶解过度所引起的出血，包括急性和慢性、局限性或全身高纤溶性出血，肿瘤、白血病、妇产科致意外出血，严重肝病出血的药物中的应用。说明书CN102151282A4/11页80007环烯醚萜苷及其衍生物在治疗哺乳动物末梢动脉疾病、哺乳动物慢性渗血的药物中的应用。00083、一种纤溶。
17、酶抑制剂药物组合物，该组合物包括含药物有效量的上述环烯醚萜苷及其衍生物可接受的盐或酯形式和药物可接受的赋形剂或载体。0009本发明中化合物的优选的盐形式非限定性地包括钠盐和钾盐。这些化合物其他有用的盐形式包括那些与本领域已知的药物可接受的无机和有机碱所形成的盐。使用无机碱制得的盐形式包括治疗上可接受的碱金属或碱土金属例如钠、钾、镁、钙等的氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐。可接受的有机碱包括胺，例如苄胺、单、二和三烷基胺，优选那些具有16个碳原子的烷基的胺，例如甲胺、二甲胺、三甲胺、乙胺、二乙胺、三乙胺、单、二和三乙醇胺。也可使用最多含6个碳原子的亚烷基二胺，例如己二胺；最多含有6个碳原子的环状饱和或。
18、不饱和碱，包括吡咯烷、哌啶、吗啉、哌嗪和它们的N烷基和N羟基烷基衍生物，例如N甲基吗啉和N（2羟乙基）哌啶或吡啶。也可形成季铵盐例如四烷基形式如四甲基形式、烷基链烷醇形式如甲基三乙醇或三甲基单乙醇形式，以及环状铵盐形式如N甲基吡啶鎓、N甲基N（2羟乙基）吗啉鎓、N,N二甲基吗啉鎓、N甲基2羟乙基吗啉鎓或N,N二甲基哌啶鎓盐形式。这些盐形式可以使用式的酸性化合物和本领域已知的方法制备。0010本发明化合物的酯形式包括具有16个碳原子的直链烷基酯或含有3或6个碳原子的支链烷基酯，包括甲基、乙基、丙基、丁基、2甲基丙基和1,1二甲基乙基酯。本发明化合物优选酯的形式包括C1C6烷基酯、C3C6支链烷基。
19、酯、苄基酯等。本发明使用的输入烷基包括直链和支链的碳链。优选，C1C3全氟烷基取代基是CF3；OC1C3全氟烷基取代基是OCF3和SC1C3全氟烷基取代基是SCF3。0011本发明使用的“芳基”是指具有614个碳原子的不饱和芳香族碳环基团，该基团具有单环例如苯基或缩合稠合环例如萘基或蔥基。本发明使用的“杂芳基”是指其中至少一个环如果存在一个以上的环居于16个碳原子和14个氧、氮和硫的杂原子的单环或双环芳香基团。这样的杂芳基可具有单环，例如吡啶基、吡咯基或呋喃基，或多缩合环，例如吲哚基、苯并呋喃基或苯并噻吩基。优选的杂芳基包括吡啶基、吡咯基和呋喃基。除非本发明对芳基或杂芳基的定义另有限定，所述基。
20、团可以任选被15个选自以下的取代基取代16个碳原子的酰氧基、羟基、16个碳原子的酰基、16个碳原子的烷基、16个碳原子的烷氧基、26个碳原子的烯基、26个碳原子的炔基、取代的烷基、取代的烷氧基、取代的烯基、取代的炔基、氨基、被一个或两个具有16个碳原子的烷基取代的氨基、16个碳原子的氨酰基、16个碳原子的酰胺基、叠氮基、氰基、卤基、硝基、具有16个碳原子的硫代烷氧基、具有16个碳原子的取代的硫代烷氧基以及三卤代甲基。以上提及的烷基、烯基、炔基、硫代烷氧基和烷氧基上的取代基包括卤素、CN、OH和氨基。本发明中芳基上优选的取代基包括16个碳原子的烷基、16个碳原子的烷氧基、卤素氰基、硝基、三卤代甲。
21、基以及16个碳原子的硫代烷氧基。0012本发明的化合物是纤溶酶及纤溶抑制剂，因此用于在哺乳动物、优选人体中治疗、抑制、防止或预防那些涉及纤溶酶的产生和/或作用及纤溶亢进的过程。因此，本发明化合物用于治疗或预防原发/继发性纤维蛋白溶解过度所引起的出血，包括急性和慢性、局限性或全身性的高纤溶出血，肿瘤、白血病、妇产科意外、严重肝病所致出血。因止血机制不说明书CN102151282A5/11页9同，本发明化合物可以与止血药物蛇毒凝血酶、卡巴克络联合使用。0013本发明化合物可局部给药用以促进创面愈合。0014治疗、抑制、防止或预防本发明所列出的不同动物每种疾病的方法是本发明的一部分。每种方法包括给予。
22、需要治疗的哺乳动物有效治疗剂量的本发明化合物或其药物可接受的盐或酯形式及各种药物载体赋形剂形式。0015本发明还包括本发明中所涉及的化合物结构式、相关的药物组合。这些组合单独含有有效治疗剂量的本发明化合物或其药物可接受的盐或酯形式，或者与一种或多种药物载体或赋形剂相混合形式。上述化合物式、组合物可以产生协同作用。本发明中化合物的药物或治疗有效量是指所述化合物的量能充分抑制需治疗的哺乳动物中纤溶亢进，从而在相当程度上对所述症状提供改善，进而防止、抑制或限制所述疾病或症状的病理基础。0016本发明化合物所使用的精确剂量取决于包括所给药对象、所治疗疾病的症状及严重程度、给药方法及所使用的赋形剂等因素。
23、。可以通过任何常规途径给予所述化合物、其盐或酯形式及含所述化合物、盐或酯形式的药物载体和赋形剂形式。给药形式包括口服给药、静脉给药、皮肤给药、经肠道给药、外用给药。所给予的化合物可以是游离的或以适当的药物盐或酯的形式。本发明化合物在治疗纤溶亢进和出血性疾病时，可以以任何同纤溶酶接触的方式起作用。它们可以以任何适用于给药的常规方式施用，或者作为单独的治疗剂型、或者以治疗制剂的组合形式施用。它们可以单独施用，但优选与合适的药物载体或赋形剂一起施用。药物载体是根据所选择的给药途径选择的，可使是固体、液体或固体和液体的混合物。0017固体包括散剂、片剂、胶囊及纳米制剂。固体载体可以是一种或多种可以作为。
24、调味剂、润滑剂、增溶剂、悬浮剂、粘合剂或片剂崩解剂的物质。在散剂中，所述载体是精细粉碎的固体，它与活性成分粉末混合。在片剂中，活性成分与具有必需的粘合特性载体以合适的比例混合并压制成所需的形状和大小。明胶胶囊含有活性成分和粉末载体，例知乳糖、淀粉、纤维素衍生物、硬脂酸镁和硬脂酸等。类似地，可以使用稀释剂压片。可以将片剂和胶囊制成缓释制剂，以持续数小时连续释放药物。压片可以用糖包衣或膜包衣，以掩盖令人不快的味造和使片芯与空气播离，或者进行肠溶包衣以在胃肠道中选择性崩解。口服液体剂型可以含有着色剂和矫味剂以增加患者的依从性。合适的固体载体是碳酸镁、硬脂酸镁、滑石粉、糖、乳糖、果胶、糊精、淀粉、明胶。
25、、黄芪胶、甲基纤维素、羟甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、低熔点蜡、可可脂等。薄膜衣、成囊材料、纳米材料也可以与本发明化合物及其盐或酯形式一起使用，术语“组合物”是指包括活性组分与成囊材料作为配方，有或没有其他载体。0018无菌液体组合物包括溶液、悬浮液、乳液、浆剂、酊剂和醑剂。本发明的化合物可溶于或悬浮在药物可接受的载体中，例如灭菌注射用水。当化合物充分可溶时，它们可直接溶于使用或不适用合适的有机溶剂如聚乙二醇的生理盐水中。如果需要，化合物可分散在淀粉溶液、羧甲基纤维素钠水溶液或合适的环糊精水溶液中。为无菌溶液或悬浮液的液体药物组合物，可以通过肌肉、皮下、皮内、腹腔、静脉注射使用。在许多情况下，可。
26、以使用液体组合物形式代替固体口服给药方式。0019优选配制所述化合物的单位剂型进行标准给药。可以将单位剂量配制成包装散剂、管形瓶或安瓿，并优选为胶囊或片剂形式。活性化合物的日剂量可以根据具体药物的药说明书CN102151282A6/11页10效特征、给药途径、患者的体重、年龄和性别、健康状况、疾病状态的性质和严重程度、同时治疗的其他药物、治疗的频率以及通过对血液药物浓度分析和患者恢复情况及对治疗的反应而做出相应调整。活性成分的日剂量是01至100MG/KG，优选的日剂量是约10至约10MG/KG。适于给药的组合物剂型包含约LMG至约10MG活性成分/单位。在这些药物组合物中，活性成分通常的含量。
27、占组合物总重量的0595。活性成分可以以固体剂型例如胶囊、片剂和粉末的形式，还可以以无菌液体制剂给药。00204、从含环烯醚萜苷类成份的中药材中分离纯化制备环烯醚萜苷单体化合物的方法是1环烯醚萜类化合物的提取富集取经粉碎并过60目筛的中药材粉末，加70乙醇浸泡24H，于80水浴加热提取2H或50HZ超声提取2H。回收提取液，60减压干燥。提取液浸膏加15倍量的蒸馏水溶解后先后分别注入聚酰胺色谱柱和大孔吸附树脂柱，蒸馏水洗脱后分别用75和50的乙醇解析附获得总环烯醚萜苷部分，60减压干燥，得总环烯醚萜苷浸膏。00212环烯醚萜化合物单体的制备色谱分离纯化取一定量总环烯醚萜苷浸膏溶解于适量甲醇后，。
28、进样制备反相液相色谱柱，分别收集不同时间洗脱液，以分离制备不同可能的活性化合物。制备RPHPLC色谱条件VANTAGEL型耐压玻璃柱500MM40MMID，ODSC18填料粒径4065M，湿法装柱，梯度洗脱07MIN，甲醇水3070,V/V，5ML/MIN；7100MIN，甲醇水3070,V/V，20ML/MIN；100180MIN，甲醇水4060,V/V，20ML/MIN。HPLC监测，检测波长238NM。分别收集不同时间的流出组分，60减压干燥，得到各环烯醚萜单体化合物。00225、本发明的化合物可通过下面的实验方法，确定本发明化合物抑制纤溶的能力（1毛细管凝血实验原理根据凝血时间长短可判。
29、断实验药物对于小鼠静脉给药后是否存在减少凝血时间促进凝血的作用。0023选取2025G雄性BALB/C小鼠随机分为5组生理盐水组，高、中、低剂量组，酚磺乙胺组，每组10只，尾静脉注射给药后10分钟，毛细管于眼眶静脉丛取血，于60S，90S，120S,150S,180S,210S,240S,270S先于毛细管远端处小心折断毛细管，每次折断约5MM，观察是否出现凝血丝，若出现肉眼可见凝血丝则于毛细管近端处折断观察有无凝血丝出现，若没有则每隔15S折断一次，观察有无凝血丝出现，直至有凝血丝出现为止。以两端均出现凝血丝时间平均值作为凝血时间。00248O乙酰山栀子苷甲酯注射液小鼠毛细管凝血时间实验说明。
30、书CN102151282A7/11页11P值同生理盐水组比较P001,P005（2全血浆凝块溶解试验原理纤维蛋白的溶解（纤溶）过程可分为两个阶段第一阶段为纤溶酶原被纤溶酶原致活因子激活后，转变为纤溶酶；第二阶段为纤溶酶将纤维蛋白原裂解，产生纤维蛋白原降解产物FDP。不同稀释度的被检血浆，加人凝血酶后，纤维蛋白凝块在37水浴中温育，根据凝块的溶解时间，可判断出纤维蛋白溶解程度。0025步骤取动物血18ML小鼠07ML，加人38枸橼酸钠溶液02ML小鼠加70L，混匀，以4000R/MIN离心5MIN，分离血浆。取血浆05ML小鼠血浆035ML，置小离心管内，并加入0025MOL/L氯化钙溶液05M。
31、L小鼠加030ML，放入37水浴中，待其凝固。每隔30MIN观察一次30MIN以后每隔10MIN观察一次，1H以后每隔5MIN观察一次，记录开始溶解时间、颠倒离心管后凝块随液体流动凝块掉落时间，凝块完全溶解时间仅有极少絮状不溶物。00268O乙酰山栀子苷甲酯小鼠全血浆凝块溶解时间实验P值同生理盐水组比较P001,P005（3血浆优球蛋白溶解实验原理血浆优球蛋白组分中含有纤维蛋白原、血浆素原及激活剂，而不含或很少含抗血浆素，故易于观察血浆素原及激活剂的活力。优球蛋白在PH45时可以沉淀。因此，将血浆稀释，优球蛋白组分被沉淀，上清中所含有的抗血浆素等被弃去，最后用中性溶液将优球蛋白溶解并加人钙或凝。
32、血酶，可使其中的纤维蛋白原变为纤维蛋白凝块，37温育，观察记录凝块溶解时间，即为其终点。0027步骤取动物全血，38枸橼酸钠抗凝，放入37水浴，待第二管采血完毕，一起4000R/MIN离心5MIN，分离出去血小板血浆。取血浆05ML小鼠血浆030ML加入9ML小鼠53ML蒸馏水，再加入1醋酸溶液01ML小鼠加60L，使PH成说明书CN102151282A8/11页12为45，充分混合后，将混合液置于4的冰箱中10MIN，使优球蛋白充分析出。2000R/MIN离心5MIN，将优球蛋白沉淀分出。倾去上清液，将试管倒立在滤纸上，使管内水流干。加37硼酸缓冲液预先放入37水浴中PH9005ML小鼠加0。
33、30ML于试管中，用移液器轻轻吹打至全部溶解约LMIN，吸05ML小鼠03ML至离心管。加入0025MOL/LCACL2溶液05ML小鼠加030ML，将试管放人37水浴中，待其凝固约需3MIN。每隔10MIN观察一次30MIN以后每隔5MIN观察一次，记录开始溶解时间、颠倒离心管后凝块随液体流动凝块掉落时间，凝块完全溶解时间仅有极少絮状不溶物。00288O乙酰山栀子苷甲酯血浆优球蛋白溶解实验P值同生理盐水组比较P001,P010由上述结果可以看出本发明化合物不同剂量组可使毛细管凝血时间缩短，全血凝块及血浆优球蛋白溶解时间显著性延长，且本发明化合物给药组呈剂量依赖关系，提示本发明化合物具有抑制纤。
34、溶促进凝血作用。该作用可通过特意性抑制纤溶酶的活性实现，该抑制作用是可逆的，化合物给药组纤溶酶仍然具有活性，可溶解凝固了的纤维蛋白，故其对纤溶系统的抑制是生理性的。具体实施方式0029以下对本发明的优选实施例进行说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用于说明和解释本发明，并不用于限定本发明。0030尿激酶为一种高效血栓溶解蛋白质酶，其作为机制为直接激活人体内无活性的纤溶酶原变为有活性的纤溶酶，使组成的血栓纤维蛋白水解，而渗入新鲜血栓内，更易激活附着在纤维蛋白网上的纤维酶原，促使新鲜血栓溶解。通过静脉给予尿激酶可使机体出于纤溶亢进状态，从而为研究纤溶亢进治疗药物提供模型。0031实例18O乙酰。
35、山栀子苷甲酯注射液缩短纤溶亢进小鼠凝血时间的作用药物名称8O乙酰山栀子苷甲酯化学名称1D葡萄糖5,7二氢7甲基1,4A,5,6,7,7A六氢环戊二烯C吡喃4羧酸药物结构说明书CN102151282A9/11页13剂型注射剂、粉针剂给药途径静注、静滴实验动物雄性BALB/C小鼠根据药物对纤溶亢进模型动物凝血时间影响可判断实验药物对于纤溶亢进小鼠静脉给药后是否存在缩短凝血时间促进凝血的作用。0032选取2025G雄性BALB/C小鼠随机分为5组生理盐水组，尿激酶组15W单位/KG，8O乙酰山栀子苷甲酯100MG/KG组，200MG/KG组，400MG/KG组组，每组10只，尾静脉注射尿激酶15W单。
36、位/KG，10MIN后再次尾静脉注射给药，20分钟后摘除眼球毛细管采血，于60S，90S，120S,150S,180S,210S,240S,270S先于毛细管远端处小心折断毛细管，每次折断约5MM，观察是否出现凝血丝，若出现肉眼可见凝血丝则于毛细管近端处折断观察有无凝血丝出现，若没有则每隔15S折断一次，观察有无凝血丝出现，直至有凝血丝出现为止。毛细管一端出现肉眼可见凝血丝作为一个记录时间，以毛细管两端均出现肉眼可见凝血丝时间的平均值作为其凝血时间。0033药效结果8O乙酰山栀子苷甲酯缩短纤溶亢进小鼠毛细管凝血时间P值同生理盐水组比较P010,P005由实验结果可以看出，纤溶亢进小鼠较正常小鼠。
37、其毛细管凝血时间约延长135，8O乙酰山栀苷甲酯在400MG/KG剂量时对于纤溶亢进小鼠具有较为显著的缩短毛细管凝血时间作用。0034实例28O乙酰山栀子苷甲酯注射液减少纤溶亢进小鼠摘眼创伤出血疗效实验说明书CN102151282A10/11页14实验动物雄性BALB/C小鼠根据药物对纤溶亢进动物创伤损伤致出血时间及出血量多少可判断实验药物对纤溶亢进所致出血是否存在缩短出血时间降低出血量的作用。0035选取2025G雄性BALB/C小鼠随机分为5组生理盐水组，尿激酶组15W单位/KG，8O乙酰山栀子苷甲酯100MG/KG组，200MG/KG组，400MG/KG组组，每组10只，尾静脉注射尿激酶。
38、15W单位/KG，10MIN后尾静脉注射给药，5MIN腹腔注射戊巴比妥钠生理盐水溶液麻醉国产，100MG/KG，约4分钟后进入深麻醉状态。给药后20MIN用眼科镊摘取小鼠左眼，用盛装50ML注射用水烧杯盛接收集滴出血液，观察出血时间，记录滴数，分光光度计测定吸收度值，计算出血量。观察标准出血时间观察标准，静置小鼠，保持实验小鼠头部水平，小心收集流出血液，以血液凝固不再出血作为出血时间结束点。0036药效结果8O乙酰山栀子苷甲酯注射液治疗纤溶亢进小鼠创伤出血实验P值同生理盐水组比较P010,P005P值模型组同生理盐水组比较P010,P005由实验结果可以看出，纤溶亢进小鼠创伤致出血量较正常小鼠。
39、创伤致出血量明显增多。8O乙酰山栀子苷甲酯注射液具有降低纤溶亢进小鼠创伤致出血的效果。0037实例38O乙酰山栀子苷甲酯注射液对纤溶亢进小鼠优球蛋白溶解时间缩短作用实验动物雄性BALB/C小鼠纤维蛋白的溶解（纤溶）过程可分为两个阶段第一阶段为纤溶酶原被纤溶酶原致活因子激活后，转变为纤溶酶；第二阶段为纤溶酶将纤维蛋白原裂解，产生纤维蛋白原降解产物FDP。血浆优球蛋白组分中含有纤维蛋白原、血浆素原及激活剂，而不含或很少含抗血浆素，故易于观察血浆素原及激活剂的活力。优球蛋白在PH45时可以沉淀。因此，将血浆稀释，优球蛋白组分被沉淀，上清中所含有的抗血浆素等被弃去，最后用中性溶液将优球蛋白溶解并加人钙。
40、或凝血酶，可使其中的纤维蛋白原变为纤维蛋白凝块。尿激酶为一种高效血栓溶解蛋白质酶，可直接激活人体内无活性的纤溶酶原变为有活性的纤溶酶，促使新鲜血栓溶解。通过静脉给予尿激酶可使机体出于纤溶亢进状态，研究纤溶亢进状态下血浆优球蛋白溶解时间可以阐明药物对纤溶的影响及对纤溶亢进状态的治疗作用。37温育水浴中观察纤维蛋白凝快的凝块溶解时间，即为其终点。说明书CN102151282A11/11页150038取动物全血，38枸橼酸钠抗凝，放入37水浴，待第二管采血完毕，一起4000R/MIN离心5MIN，分离出去血小板血浆。取小鼠血浆030ML加入53ML蒸馏水，再加入1醋酸溶液60L，使PH成为45，充分。
41、混合后，将混合液置于4的冰箱中10MIN，使优球蛋白充分析出。2000R/MIN离心5MIN，将优球蛋白沉淀分出。倾去上清液，将试管倒立在滤纸上，使管内水流干。加37硼酸缓冲液PH90030ML于试管中，用移液器轻轻吹打至全部溶解，吸03ML至离心管。加入0025MOL/LCACL2溶液030ML，将试管放人37水浴中，待其凝固约需3MIN。每隔10MIN观察一次30MIN以后每隔5MIN观察一次，记录开始溶解时间、颠倒离心管后凝块随液体流动凝块掉落时间，凝块完全溶解时间仅有极少絮状不溶物。0039药效结果8O乙酰山栀子苷甲酯对纤溶亢进小鼠优球蛋白溶解时间实验P值P010,P005,P001同模型组比较P010,P005,P001同生理盐水组比较由实验结果可以看出，8O乙酰山栀子苷甲酯注射液对纤溶亢进状态存在治疗作用，且高剂量疗效显著。0040最后应说明的是以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。说明书。