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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910469655.6 (22)申请日 2019.05.31 (71)申请人 北京石油化工学院 地址 102617 北京市大兴区黄村清源北路 19号 (72)发明人 靳海波郭晓燕何广湘叶飞飞 杨索和 (74)专利代理机构 北京众合诚成知识产权代理 有限公司 11246 代理人 张文宝 (51)Int.Cl. G01N 33/573(2006.01) (54)发明名称 一种定量测定-淀粉酶活性的多层膜干片 及其测定方法 (57)摘要 本发明公开了属于医学免疫体外检验技术 领域。
2、的一种定量测定-淀粉酶活性的多层膜干 片及其测定方法。 该多层膜干片为从上到下由多 功能层、 试剂层和支撑层组成， 主要用于血清或 尿液样品的测定； 其中多功能层能快速均匀地将 样品平铺到下面的试剂层上， 同时， 多功能层中 含有95以上高反射系数的白色反光物质； 试剂 层中的试剂含有反应显色所需要的物质； 支撑层 采用高分子聚合材料， 起着支持和固定的作用。 当样品通过多功能层渗透到试剂层， 在试剂层发 生化学反应， 并产生颜色改变， 从而定量测定人 体中的-淀粉酶活性。 本发明具有具特异性好， 抗干扰能力强、 操作简便、 能快速准确得到结果， 易于存储运输、 成本低， 适用于全自动化分析仪。
3、， 临床应用价值大。 权利要求书1页 说明书3页 附图2页 CN 110187106 A 2019.08.30 CN 110187106 A 1.一种定量测定 -淀粉酶活性的多层膜干片； 其特征在于， 所述定量测定 -淀粉酶活 性的多层膜干片为从上到下由多功能层、 试剂层和支撑层组成， 主要用于血清或尿液样品 的测定； 其中多功能层能快速均匀地将样品平铺到下面的试剂层上， 同时， 多功能层中含有 95以上高反射系数的白色反光物质； 试剂层中的试剂含有反应显色所需要的物质； 支撑 层采用高分子聚合材料， 起着支持和固定的作用。 2.根据权利要求1所述定量测定 -淀粉酶活性的多层膜干片； 其特征在。
4、于， 所述试剂层 中的试剂包括缓冲试剂、 底物、 激活剂、 防腐剂和增稠剂。 3.根据权利要求1所述定量测定 -淀粉酶活性的多层膜干片； 其特征在于， 所述高反射 系数的白色反光物质为硫酸钡、 二氧化钛或钛酸钡。 4.根据权利要求1所述定量测定 -淀粉酶活性的多层膜干片； 其特征在于， 所述支撑层 采用各种高分子聚合材料制成的透明塑料。 5.根据权利要求4所述定量测定 -淀粉酶活性的多层膜干片； 其特征在于， 所述高分子 聚合材料为聚乙烯、 聚氯乙烯、 聚苯二甲酸乙二醇酯。 6.根据权利要求4所述定量测定 -淀粉酶活性的多层膜干片； 其特征在于， 所述多功能 层由亲水性高分子材料的醋酸纤维素、。
5、 非离子型表面活性剂以及上述反光物质构成。 7.一种权利要求1所述定量测定 -淀粉酶活性的多层膜干片的 -淀粉酶活性测定方 法； 其特征在于， 所述定量测定 -淀粉酶活性的检测步骤是： 1)将待测样品血清或尿液滴定到多功能层上； 2)待测样品通过多功能层快速均匀地渗透、 平铺到试剂层上； 3)试剂层是主要发生化学反应的区域， 待测样品与试剂层中的试剂发生化学反应及颜 色变化， 通过颜色的深浅或者测定反应过程的光密度变化， 从而定量测定人体中的 -淀粉 酶活性； 具体是待测样品中的 -淀粉酶催化底物产生游离的2-氯-4-硝基苯酚(CNP)， 即一 种黄色颜料指示剂， 在37下， 用配套使用的反射。
6、分光光度计测量该干片在405nm下硝基苯 酚的生成速率， 采用两点速率法进行数据处理， 即可得出结论； 其生成速率与淀粉酶活性成 正比。 8.根据权利要求7所述定量测定 -淀粉酶活性的多层膜干片的 -淀粉酶活性测定方 法； 其特征在于， 所述待测样品与试剂层中的试剂发生化学反应及颜色变化主要是试剂中 包含： 使用的MES缓冲液是2-吗啉乙磺酸缓冲液， PH为6， 浓度为10-100mM； 采用的底物是人 工合成多糖衍生物2-氯-4-硝基苯酚(CNP)， 底物浓度为3-30Mm； 激活剂为氯化钙、 氯化镁， 其中氯化钙的浓度为50-130mM， 氯化镁的浓度为10-60mM； 采用的增稠剂为明胶。
7、。 9.根据权利要求7所述定量测定 -淀粉酶活性的多层膜干片的 -淀粉酶活性测定方 法； 其特征在于， 所述多功能层能够过滤掉一些大分子量物质和使样品快速均匀地多功能 到下面试剂层中， 从而使样品能与试剂层中试剂充分反应， 显色更加均匀； 同时多功能层还 起到反射光的作用， 减少有色物质对反射光的干扰， 减少检测误差。 权利要求书 1/1 页 2 CN 110187106 A 2 一种定量测定 -淀粉酶活性的多层膜干片及其测定方法 技术领域 0001 本发明属于医学免疫体外检验技术领域， 特别涉及一种定量测定 -淀粉酶活性的 多层膜干片及其测定方法。 背景技术 0002 血清和尿液淀粉酶测定可。
8、作为急性胰腺炎的诊断指标， 当发生急性胰腺炎时， 胰 腺中的淀粉酶进入血液中， 引起血液淀粉酶活性显著升高， 尿淀粉酶在发病后12-24小时也 会升高。 某些慢性胰腺疾病， 如慢性胰腺炎以及流行腮腺炎等， 血清淀粉酶也会有所升高。 因此， 可通过对a-淀粉酶活性的监测实现急性胰腺炎等疾病的诊断。 0003 用于淀粉酶测定的底物种类繁多， 早期的测定底物是淀粉， 由于淀粉结构的不确 定性， 使酶促反应不能按化学试量进行计算。 后来又出现染色淀粉法， 即染料与不溶性淀粉 结合成色原底物， 但染色淀粉中色素加入量不易控制且该方法应用繁琐， 该底物不常用。 随 着对 -淀粉酶活性测定方法的不断深入研究。
9、， 采用人工合成的底物， 即组成确定的淀粉酶 底物， 可实现化学计量关系的计算。 0004 检测血清和尿液中的 -淀粉酶活性的方法有很多， 主要有粘度测定法、 糖化法、 比 浊法、 酶速率法等。 粘度测定法和比浊法的特异性、 灵敏性差。 糖化法操作复杂， 不利于临床 的常规检测。 而酶速率法常常由于需要配用各种大型全自动生化分析仪， 价格昂贵， 且需要 专门的培训人员， 操作复杂， 因此个人家庭和基层医院都没有条件购买和使用。 0005 针对上述缺点， 采用干化学检测方法。 干化学诊断方法是将反应所需要的部分或 全部的试剂固定在具有特殊结构的试剂载体上， 这样就避免了配制液体试剂， 具有操作简。
10、 单、 检测工作能随时随地进行、 污染小、 准确度和精密度较高等优点， 因而受到检测人员和 受试者的青睐。 发明内容 0006 本发明的目的是提供一种定量测定 -淀粉酶活性的多层膜干片及其测定方法； 其 特征在于， 所述定量测定 -淀粉酶活性的多层膜干片为从上到下由多功能层、 试剂层和支 撑层组成， 主要用于血清或尿液样品的测定； 其中多功能层能快速均匀地将样品平铺到下 面的试剂层上， 同时， 多功能层中含有95以上高反射系数的白色反光物质； 试剂层中的试 剂含有反应显色所需要的物质； 支撑层采用高分子聚合材料， 起着支持和固定的作用。 0007 所述试剂层中的试剂包括缓冲试剂、 底物、 激活。
11、剂、 防腐剂和增稠剂。 0008 所述高反射系数的白色反光物质为硫酸钡、 二氧化钛或钛酸钡。 0009 所述支撑层采用各种高分子聚合材料制成的透明塑料。 0010 所述高分子聚合材料为聚乙烯、 聚氯乙烯、 聚苯二甲酸乙二醇酯。 0011 所述多功能层由亲水性高分子材料的醋酸纤维素、 非离子型表面活性剂以及上述 反光物质构成。 0012 一种定量测定 -淀粉酶活性的多层膜干片的 -淀粉酶活性测定方法； 其特征在 说明书 1/3 页 3 CN 110187106 A 3 于， 所述定量测定 -淀粉酶活性的检测步骤是： 0013 1)将待测样品血清或尿液滴定到多功能层上； 0014 2)待测样品通过。
12、多功能层快速均匀地渗透、 平铺到试剂层上； 0015 3)试剂层是主要发生化学反应的区域， 待测样品与试剂层中的试剂发生化学反应 及颜色变化， 通过颜色的深浅或者测定反应过程的光密度变化， 从而定量测定人体中的 - 淀粉酶活性； 具体是待测样品中的 -淀粉酶催化底物产生游离的2-氯-4-硝基苯酚(CNP)， 即一种黄色颜料指示剂， 在37下， 用配套使用的反射分光光度计测量该干片在405nm下硝 基苯酚的生成速率， 采用两点速率法进行数据处理， 即可得出结论； 其生成速率与淀粉酶活 性成正比。 0016 所述待测样品与试剂层中的试剂发生化学反应及颜色变化主要是试剂中包含： 使 用的MES缓冲液。
13、是2-吗啉乙磺酸缓冲液， PH为6， 浓度为10-100mM； 采用的底物是人工合成多 糖衍生物， 标记有2-氯-4-硝基苯酚(CNP)， 底物浓度为3-30Mm； 激活剂为氯化钙、 氯化镁， 其 中氯化钙的浓度为50-130mM， 氯化镁的浓度为10-60mM； 采用的增稠剂为明胶。 0017 所述多功能层能够过滤掉一些大分子量物质和使样品快速均匀地扩散到下面试 剂层中， 从而使样品能与试剂层中试剂充分反应， 显色更加均匀； 同时多功能层还起到反射 光的作用， 减少有色物质对反射光的干扰， 减少检测误差。 0018 本发明有益效果是一种可减少测量干扰， 能快速简便定量测定人体 -淀粉酶活性 。
14、的多层膜干片技术。 该方法具有操作简便、 能快速准确得到结果、 低需血量、 容易使用和小 型化、 易于存储运输、 成本低等优点； 特异性好， 抗干扰能力强， 可以抗血红蛋白、 抗胆红素， 抗坏血酸的干扰， 适用于全自动化分析仪， 有较大的临床应用价值； 本发明设计合理， 实用 性强， 适用范围广。 附图说明 0019 图1为测 -淀粉酶含量的检测结果图。 0020 图2为测 -淀粉酶含量的重复结果图。 0021 图3为多层膜干片结构示意图。 具体实施方式 0022 本发明提供一种定量测定 -淀粉酶活性的多层膜干片及其测定方法； 所述定量测 定 -淀粉酶活性的多层膜干片为从上到下由多功能层、 试。
15、剂层和支撑层组成(如图3所示的 多层膜干片结构)， 主要用于血清或尿液样品的测定； 为了使本发明的内容更容易的清楚理 解， 下面根据具体实施案例并结合附图， 对本发明作进一步详细的说明， 其中 0023 下面结合图1、 图2和表格对本发明测 -淀粉酶含量的多层膜干片进行比较分析。 图1、 图2的标准曲线图横坐标为所测样品的浓度， 单位为U/L； 纵坐标为所测得的响应值。 0024 实施例 0025 采用如图3所示的多层膜干片； 具体操作步骤为： 0026 1)将待测样品血清或尿液滴定到多功能层上； 0027 2)待测样品通过多功能层快速均匀地渗透、 平铺到试剂层上； 0028 3)试剂层是主要。
16、发生化学反应的区域， 待测样品与试剂层中的试剂发生化学反应 说明书 2/3 页 4 CN 110187106 A 4 及颜色变化， 通过颜色的深浅或者测定反应过程的光密度变化， 其中表1所示为酶促反应试 剂层配方； 表2所示为多功能层配比： 从而定量测定人体中的 -淀粉酶活性； 具体是待测样 品中的 -淀粉酶催化底物产生游离的2-氯-4-硝基苯酚(CNP)， 即一种黄色颜料指示剂， 在 37下， 用配套使用的反射分光光度计测量该干片在405nm下硝基苯酚的生成速率， 采用两 点速率法进行数据处理， 即可得出结论； 其生成速率与淀粉酶活性成正比。 0029 表1酶促反应试剂层配方 0030 试剂。
17、浓度 MES缓冲溶液(PH6)10-200mM 底物5-50mM 氯化钙20-220mM 氯化镁10-100mM 0031 表2多功能层配比： 0032 试剂用量 硫酸钡、 二氧化钛、 钛酸钡0.1-5g/mL 醋酸纤维素0.1-5g/mL 丙酮0.1-5g/mL 非离子型表面活性剂0.001g-0.01g/mL 0033 支撑层采用透明塑料片， 试剂层的涂抹量为10 l， 多功能层试剂量为50 l。 将不同 浓度的血清滴加到上述干片上， 在在37下， 用该光度计连续监测干片在405nm下的反射光 密度的变化， 即在405nm下检测硝基苯酚的生成速率， 可计算 -淀粉酶的浓度。 其中， 非离子。
18、 表面活性剂是指在水溶液中不电离， 其亲水基主要是由具有一定数量的含氧基团(一般为 醚基和羟基)构成。 非离子表面活性剂在某些方面比离子表面活性剂更优越； 因为在溶液中 不是离子状态， 所以稳定性高， 不易受强电解质无机盐类的影响； 一般采用环氧乙烷、 乙二 醇、 甘油季戊四醇、 失水山梨醇或蔗糖。 0034 (1)检测结果 0035 如图1所示， 在31.251000U/L范围内， 滴加10 L不同浓度血清标准品， 于37反 应5min， 在405nm下检测并记录结果。 结果表明， 随着血清浓度的增大， 曲线呈现下降趋势， 响应值为0.3270.129。 0036 (2)重复性结果 0037 如图2所示， 将制备的干片于冷冻条件下放置47天， 之后再进行检测的结果。 说明书 3/3 页 5 CN 110187106 A 5 图1 图2 说明书附图 1/2 页 6 CN 110187106 A 6 图3 说明书附图 2/2 页 7 CN 110187106 A 7 。