一种木香总内酯的提取物及其制备方法和应用 【技术领域】
本发明涉及一种从中药木香中提取分离的用于治疗胆囊炎、胆结石的木香总内酯的制备方法，以及用该方法制得的提取物及药物组合物。
背景技术
胆囊炎是临床常见病，多发病。在我国，随着人们生活水平的不断提高，饮食习惯的改变，胆囊炎和胆结石的发病率呈明显上升的趋势，在一些大城市中发病率已接近发达国家的水平。
西药主要通过抗炎、扩张胆囊和胆道扩约肌来治疗胆囊炎或胆结石，对严重的病人，靠手术解决问题。但西药的副作用大，长期服用病人难以耐受。并且临床实践证明，单纯使用西药治疗胆囊炎或胆结石效果不理想。目前中医药是我国治疗该病的主要方法之一，并且中药因其疗效独特、毒副作用小等优点越来越受到世人的瞩目。
木香为菊科植物木香Aucklandia lappa decne的干燥根。秋、冬季采挖，除去泥沙及须根，切段，大的再剖成瓣，干燥后除去粗皮。性味辛、苦、温。具有行气止痛，健脾消食的功效。主要用于胸脘胀痛，泻痢后重，食积不消，不思饮食。目前，在市场销售地主要是含木香的复方中药，但未见以木香单一提取物为主要活性成分的药品。
木香总内酯是从中药木香中提取分离得到的内酯类成分，其中的主要成分为木香烃内酯、去氢木香内酯等挥发油。已有报道，用水蒸气蒸馏法提取木香挥发油得率低，用二氧化碳超临界技术来提取木香挥发油，可使得率提高，但该方法仅用于实验室分析和研究(《中草药》，1997年第28卷第六期)，与本发明所述的适合工业化生产的制备方法有很大的差别。
【发明内容】
本发明的目的在于提供一种从木香中提取分离的木香总内酯的提取物。
本发明的另一目的是提供一种木香总内酯的提取物的制备方法，该方法能够选择性的富集活性成分，去除大量杂质，使活性成分的含量大大提高，同时本方法的重复性、稳定性好，并且原料的得率高，成本低，操作简便，特别适合工业化生产。
本发明进一步的目的是提供以上述木香总内酯提取物为原料在制备治疗和/或预防胆囊炎、胆结石药物方面的应用。
本发明采用的技术方案是：
取木香药材，粉碎成粗粉，加入醇类溶剂回流提取，合并提取液，减压浓缩，去除提取溶媒；浓缩液加入水混匀后，再加入醚类、烃类或酯类等有机溶剂中的一种或多种进行萃取，收集有机溶剂层，减压浓缩，得木香总内酯。
本发明优选的技术方案为：
取木香药材，粉碎成粗粉，加入乙醇回流提取2～3次，每次1.5小时，合并提取液，减压浓缩，去除提取溶媒；浓缩液加入水混匀后，再加入石油醚萃取2次，收集有机溶剂层，在0.09MP条件下60-80℃减压浓缩，得木香总内酯。
上述发明中所述的醇类溶剂优选为10％～100％的乙醇或10％～100％的甲醇，其中最好为90％～100％乙醇；上述发明中所述醚类溶剂优选为石油醚，烃类溶剂优选为氯仿、二氯甲烷、二氯乙烷，酯类溶剂优选为乙酸乙酯，其中最佳的萃取溶剂为石油醚。上述发明中其萃取的有机溶剂的浓缩条件为：在0.09MP条件下60-80℃减压浓缩，优选70℃减压浓缩，这样可以得到含量高、杂质少的木香总内酯。
以下以部分优选试验的数据来进一步说明本工艺的关键点：
1.不同浓度、不同性质的提取溶媒对所制备的木香总内酯的影响
取木香药材，粉碎，分别按下表中所列的提取溶媒进行提取、浓缩和萃取，减压浓缩，分别得到不同含量和得率的木香总内酯，见表1.
表1.不同浓度、性质提取溶媒对木香总内酯得率和含量的影响
提取溶媒 50％乙醇 75％乙醇 95％乙醇 95％甲醇
总内酯得率(％) 2.3 2.6 3.3 2.7
总内酯含量(％) 53.9 64.1 70.2 56.4
以上表明，不同浓度、性质提取溶媒对木香总内酯得率和含量的影响很大，其中高浓度的乙醇提取为优选提取条件。
2.不同的萃取溶媒对所制备的木香总内酯的影响
取木香药材，粉碎，分别加95％乙醇回流提取、浓缩和混悬，再用下表中所列的萃取溶媒进行萃取，减压浓缩，分别得到不同含量和得率的木香总内酯，见表2.
表2.不同的萃取溶媒对木香总内酯得率和含量的影响
萃取溶媒 乙醚 石油醚(60～90℃) 乙酸乙酯 氯仿
总内酯得率(％) 3.2 3.2 3.5 3.0
总内酯含量(％) 66.1 71.5 54.2 67.2
以上表明，不同的萃取溶媒对木香总内酯得率和含量的影响很大，其中乙酸乙酯萃取所得的木香总内酯得率最高，但含量较低，氯仿、乙醚萃取所得的木香总内酯得率、含量虽然均较好，但由于在实际生产中存在毒性和易燃、易爆的性质，应尽量避免使用，石油醚(60～90℃)萃取所得的木香总内酯不但得率高，而且含量也最高，同时由于其沸点较高，毒性小，故在生产中应为首选的萃取溶媒。
3.不同的浓缩条件对所制备的木香总内酯的影响
取木香药材，粉碎，分别加95％乙醇回流提取、浓缩和混悬，用石油醚(60～90℃)的萃取，按下表所列的条件进行减压浓缩，分别得到不同含量和得率的木香总内酯，见表3.
表3.不同的浓缩条件对木香总内酯得率和含量的影响
浓缩条件 常压浓缩 0.09MP，60℃ 0.09MP，70℃ 0.09MP，80℃
总内酯得率(％) 3.5 3.3 3.2 3.1
总内酯含量(％) 51.3 65.4 71.9 67.9
以上表明，常压浓缩的得率虽高，但含量很低，0.09MP减压浓缩所得样品的含量明显升高，当温度为70℃时，木香总内酯的含量最高，同时得率也较高，因此选择0.09MP，70℃为最佳的浓缩条件。
按本发明方法制得的提取物，由于在其制备过程中选择性的富集活性成分的同时大量去除了杂质，使得其木香总内酯的含量可达50％以上，且得率大于3％；由于其制备工程中的操作温度低，也可使木香总内酯的含量和稳定性大大提高；同时工艺重复性好，简便易行，适合工业化生产。
本发明还提供含有本发明木香总内酯提取物的药物组合物，该组合物含有生理上有效量的木香总内酯提取物和药学上可接受的辅料，该组合物可以是任何一种可供服用的药物制剂形式。
本发明还包括用本发明木香总内酯提取物或其的药物组合物在制备治疗或预防胆囊炎、胆结石的药物中的应用。
本发明的药物组合物可制成的适合服用的制剂形式选自：片剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液注射剂、干燥的粉针剂等。
本发明的药物制剂，优选是软胶囊剂或滴丸剂，每一片/粒含有20-500mg本发明木香总内酯提取物，优选100mg本发明木香总内酯提取物，其余为药物可接受的载体。
下面通过木香总内酯的动物药效试验来进一步说明本发明的有益效果。
1.试验材料
木香总内酯(下称胆宁)，由中国药科大学中药分析教研室提供，以食用葵花籽油稀释至所需浓度，大鼠、小鼠的低、中、高剂量分别为50mg/kg，100mg/kg，200mg/kg。
胆舒胶囊(下称胆舒)，四川济生堂药业有限公司生产，国药准字Z20026078。以葵花籽油配制成所需浓度供实验用。人临床用量为50mg/kg，按人与动物等效剂量换算成小鼠剂量为500mg/kg，大鼠剂量为350mg/kg。
爱活胆通(下称胆通)，德国汉堡爱活大药厂出品，中国进口药品注册证号：Z980042。配制方法及剂量换算均同胆舒。小鼠剂量为50mg/kg，大鼠剂量为40mg/kg。
熊去氧胆酸片(下称胆酸)，上海三维制药有限公司生产，沪卫药准字(1995)第002098号。配制方法及剂量换算均同胆舒。小鼠剂量为100mg/kg，大鼠剂量为70mg/kg。以上胆舒、胆通、胆宁在本试验中均用为阳性对照。
纯正葵花籽油，新疆北屯油脂化工公司生产，产品标准号GB/10464-2003。本试验中用作空白对照及各试药的溶媒。
2.试验方法与结果
2.1大鼠利胆试验——胆汁排泄量测定
SD大鼠，雄性，随机分为七组，每组5只，分别给药如下：胆宁低、中、高剂量组(50mg/kg、100mg/kg和200mg/kg)，胆舒300mg/kg组，胆通40mg/kg组，胆酸70mg/kg组，空白对照组给予等容积的葵花籽油。动物用25％的乌拉坦，1ml/kg ip麻醉，在十二指肠上部作1.5cm切口，沿十二指肠降部肠系膜找出输胆管，结扎远端，在输胆管上作一小切口，插入一连有10cm输液管的头皮针(针头磨钝)，并结扎头皮针。手术成功后稳定10min，开始计时，记录给药前30min的胆汁流量，十二指肠给药，给药后每30min记录一次胆汁流量，观察180min，计算胆汁分泌百分率(以给药后每30min的流量/给药前30min的流量×100％)。以t检验作统计学处理。结果见表1。
表1 胆宁对麻醉大鼠胆汁流量的影响( x±SD，n＝5)
给药后胆汁流量(与给药前的比率％)
剂量 组别
(mg/kg)
30min 60min 90min 120min 150min 180min
空白 94.5±8.17 82.2±11.2 77.2±15.8 68.0±19.4 68.5±14.2 64.0±21.7
对照
胆舒 300 110.7±14.2* 106.0±9.23** 96.3±13.6* 88.5±36.5* 70.8±11.1* 82.1±34.8*
胆通 40 95.2±12.6* 83.0±25.4* 78.2±21.4* 100.0±31.8* 91.4±21.9* 92.5±10.8*
胆酸 70 111.2±16.4* 105.4±24.6* 94.2±30.9* 80.4±30.1* 72.2±33.3* 78.8±26.8*
胆宁 50 111.2±11.1** 109.6±18.9** 117.8±23.2**110.0±28.0** 100.8±31.4* 97.4±37.6**
胆宁 100 132.6±28.7** 120.4±30.1** 108.3±9.4** 105.4±35.9* 101.2±17.5**108.7±12.5***
胆宁 200 111.7±5.7*** 116.8±13.2*** 123.5±27.5**120.8±34.8** 111.2±36.5* 99.7±31.8**
与空白对照组比较，*P＞0.05，**P＜0.05，***P＜0.01由表1可见，胆宁200mg/kg、100mg/kg、50mg/kg三个剂量组均能显著增加胆汁排泄量，给药后30min，100mg/kg剂量组排泄量比给药前增加33％，利胆作用维持3h以上。给药后0～30min、30～60min、60～90min3小时内各时间段胆汁流量变化率均显著高于葵花籽油对照组。胆舒作用时间较短，1h后药效便逐渐降低；胆通、胆酸的利胆作用在本次实验中，和空白对照组比较未见显著差异。以上结果表明，胆宁有较强的利胆作用，其作用强度及维持时间均优于胆舒、胆通及胆酸。
2.2小鼠抗炎试验——鼠耳肿胀法
取健康小鼠71只，随机分为7组，即空白对照组，胆舒500mg/kg组，胆通50mg/kg组，胆酸100mg/kg组，胆宁50mg/kg，100mg/kg，200mg/kg剂量组，给药量均为0.1ml/10g体重，空白对照组ig等容积葵花籽油，每天给药一次，连续给药三天，末次给药后1h，各鼠右耳涂以50μl复合巴豆油致炎液，左耳不涂作为自身对照，致炎后4h，脱颈椎处死小鼠，剪下双耳，用6mm打孔器打下左、右耳片，电子天平称重，以下列公式计算肿胀率，数据进行组间t检验。结果见表2。
肿胀率(％)＝(右耳片重-左耳片重)/左耳片重×100
表2胆宁对巴豆油所致小鼠耳廓炎性肿胀的影响( x±SD)
组别 剂量(mg/kg) N 肿胀率(％)
空白对照 10 233.4±19.7
胆舒 500 10 193.5±50.3**
胆通 50 10 197.1±54.9*
胆酸 100 10 198.6±42.6**
胆宁 50 10 180.8±20.1***
胆宁 100 10 146.5±37.4***
胆宁 200 11 170.4±61.7***
与空白对照组比较，*P＞0.05，**P＜0.05，***P＜0.01由表2可见，小鼠口服胆宁3个剂量，使巴豆油刺激引起的耳廓炎性肿胀显著降低，表明胆宁总内酯具有较好的抗炎作用，胆舒、胆酸、胆通亦使耳廓肿胀降低，但抗炎作用的强度均低于胆宁。
【具体实施方式】
下列实施例旨在进一步举例描述本发明的实用性，而不是以任何方式限制本发明。
实施例1：
取木香药材100kg，粉碎成粗粉，加入4倍量的100％乙醇回流提取2次，每次1.5小时，合并提取液，减压浓缩去乙醇，加入100L水混匀后，再分别加入100L石油醚萃取2次，分离出石油醚层，在0.09MP条件下60℃减压浓缩，得木香总内酯3.3kg，含量69.6％。
实施例2：
取木香药材100kg，粉碎成粗粉，加入4倍量的90％的乙醇回流提取2次，每次1.5小时，合并提取液，减压浓缩去乙醇，加入100L水混匀后，再分别加入100L乙酸乙酯萃取2次，分离出乙酸乙酯层，在0.09MP条件下70℃减压浓缩，得木香总内酯3.1kg，含量56.3％。
实施例3：
取木香药材100kg，粉碎成粗粉，加入4倍量的10％乙醇回流提取2次，每次1.5小时，合并提取液，减压浓缩去乙醇，加入100L水混匀后，再分别加入100L石油醚萃取2次，分离出石油醚层，在0.09MP条件下75℃减压浓缩，得木香总内酯3.2kg，含量71.3％。
实施例4：
取木香药材100kg，粉碎成粗粉，加入4倍量的95％乙醇回流提取2次，每次1.5小时，合并提取液，减压浓缩去乙醇，加入100L水混匀后，再分别加入100L石油醚萃取2次，分离出石油醚层，在0.09MP条件下70℃减压浓缩，得木香总内酯3.3kg，含量72.6％。
实施例5：
取木香药材100kg，粉碎成粗粉，加入5倍量的90％的甲醇回流提取2次，每次1.5小时，合并提取液，减压浓缩去乙醇，加入100L水混匀后，再分别加入100L氯仿萃取2次，分离出氯仿层，在0.09MP条件下80℃减压浓缩，得木香总内酯3.5kg，含量67.5％。
实施例6
分别取木香总内酯100g和植物油100g，充分搅拌使混合均匀，将配好的药液倒入软胶囊机中，调节装量为0.3g，压制成软胶囊，定型，干燥，包装，即得胆宁软胶囊。
实施例7
分别取木香总内酯100g和PEG6000各100g，加热至熔融后充分搅拌使混合均匀，将混匀的药液倒入滴丸机中，调节装量为0.1g，滴制成滴丸，定型，干燥，包装，即得胆宁滴丸。