山橙素类双吲哚化合物，其药物组合物及其制备方法和用途.pdf

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1、10申请公布号CN102050832A43申请公布日20110511CN102050832ACN102050832A21申请号201010182905722申请日20100511200910095137920091104CNC07D519/04200601C07D519/00200601A61P35/00200601A61P35/02200601A61K31/4375200601A61K31/474520060171申请人中国科学院昆明植物研究所地址650204云南省昆明市蓝黑路132号72发明人罗晓东冯涛李艳王媛媛蔡祥海刘亚平74专利代理机构云南协立专利事务所53108代理人马晓青54发明名。

2、称山橙素类双吲哚化合物，其药物组合物及其制备方法和用途57摘要本发明“山橙素类双吲哚化合物，其药物组合物及其制备方法和用途”，提供由式I所示的四种抗肿瘤活性成分山橙素甲、乙、丙、丁MELONINESAD，及利用有机酸酒石酸，柠檬酸，甲酸，乙二酸等或无机酸硫酸，盐酸，磷酸等制成的盐，以其为有效成分与药用常规载体组成的药物组合物，其制备方法取思茅山橙MELODINUSHENRYICRAIB全株为原料，通过干燥粉碎，酒精提取，酸碱处理，硅胶柱层析以及氯仿/甲醇混合溶剂洗脱及反相硅胶RP18洗脱。66本国优先权数据51INTCL19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书4页说明书17页。

3、附图2页CN102050837A1/4页21如式I所示的双吲哚化合物或其药学上可接受的盐，其中环A选自如下式、或的基团各R1独立的是氢、羟基或氧代基，其中羟基可以被C110烷氧基、C210烯基氧基、C210炔基氧基或双卤素原子取代；各R2独立的是氢、羟基、C110烷基、C110醛基或C110烷酰基，所述的羟基可以被C110烷氧基、C210烯基氧基、C210炔基氧基或卤素原子F、CL、BR、I取代；当式I中的虚线是键时R2不存在。各R3独立的是氢、羟基、C110烷氧基、C210烯基氧基、C210炔基氧基或C610芳基氧基；各R4独立的是氢、羟基、C110烷氧基、C210烯基氧基、C210炔基氧基。

4、或C610芳基氧基；各R5独立的是氢、羟基、C110烷氧基、C210烯基氧基、C110酰氧基；R6、R7、R8独立的是氢、羟基、C110烷氧基、C210烯基氧基、C210炔基氧基或C610芳基氧基，或者独立地，R5和R6、R7和R8分别代表氧代基团，或者R6和R7一起代表化学键；N是03的整数；且当式中的虚线是键时R2不存在。2如权利要求1所述的双吲哚化合物或其药学上可接受的盐，其中R1是氢。3如权利要求1所述的双吲哚化合物或其药学上可接受的盐，其中N是1。4如权利要求1所述的双吲哚化合物或其药学上可接受的盐，其中R2是氢或C16烷酰基。5如权利要求1所述的双吲哚化合物或其药学上可接受的盐，其。

5、中R3是羟基或C16烷氧基。6如权利要求15任一项所述的双吲哚化合物或其药学上可接受的盐，其具有式所示的结构权利要求书CN102050832ACN102050837A2/4页3其中R1、R2、R3和环A的定义同权利要求1。7如权利要求6所述的双吲哚化合物或其药学上可接受的盐，其具有式、或所示的结构其中R1、R2、R3、R5、R6、R7、R8和N的定义同权利要求1。8如权利要求7所述的双吲哚化合物或其药学上可接受的盐，其具有式、或所示的结构权利要求书CN102050832ACN102050837A3/4页4其中R1、R2、R3、R5、R6、R7、R8和N的定义同权利要求1。9如权利要求7或8所述。

6、的双吲哚化合物或其药学上可接受的盐，其中R6和R7一起代表化学键。10如权利要求7或8所述的双吲哚化合物或其药学上可接受的盐，其中R5和R6代表氧代基，R7和R8代表氧代基。11如权利要求10所述的双吲哚化合物或其药学上可接受的盐，其选自山橙素甲、山橙素乙、山橙素丙或山橙素丁。12如权利要求15任一项所述的双吲哚化合物或其药学上可接受的盐，其中所述的药学上可接受的盐选自盐酸盐、氢溴酸盐、硝酸盐、硫酸盐、磷酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、甲酸盐、乙酸盐、乙二酸盐。13制备如权利要求112任一项所述的双吲哚化合物或其药学上可接受的盐的方法，其特征在于从植物思茅山橙中提取分离而得，如果有必要，与适当的酸成。

7、盐。14如权利要求13所述的方法，其中所述的适当的酸选自盐酸、氢溴酸、硝酸、硫酸、磷酸、酒石酸、柠檬酸、甲酸、乙酸、乙二酸。15如权利要求13所述的方法，其特征在于用有机溶剂回流提取或浸提。16如权利要求13所述的方法，其特征在于提取物经酸化后，用有机溶剂分配，水层碱化，再用有机溶剂萃取，分离有机溶剂层而得。17如权利要求15或16所述的方法，所述的有机溶剂选自C16醇、C36酮、C26醚、C36酯或C16卤代烃。18如权利要求16所述的方法，其特征在于还包括用柱层析进一步提高纯度。19如权利要求18所述的方法，其特征在于取思茅山橙植物全株，用4095乙醇于4080加热回流提取14次，浓缩，加。

8、入酸调节PH值至1050，用有机溶剂萃取，水层碱化调节PH值至80110，再用有机溶剂萃取，浓缩有机溶剂层，经硅胶柱层析，用氯仿/甲醇梯度洗脱，分配比例为氯仿/甲醇100，201，101，81，51，31，11。20一种思茅山橙提取物，其特征在于其由权利要求1319任一项的方法制备而得。21如权利要求20所述的思茅山橙提取物，其特征在于其中含有至少10的一种或多种如式I所示的双吲哚化合物或其盐，所述双吲哚化合物选自山橙素甲、山橙素乙、山橙素丙或山橙素丁。22药物组合物，其含有权利要求112任一项所述的双吲哚化合物或其药用盐作为有效成分，至少还包含一种药学上可接受的载体。23如权利要求112任一。

9、项所述的双吲哚化合物或其药用盐或如权利要求2021任一权利要求书CN102050832ACN102050837A4/4页5项所述的思茅山橙提取物在制备治疗或预防人或动物增生性疾病或病症的药物中的应用。24如权利要求23所述的应用，其中所述的增生性疾病或病症是癌症。25如权利要求24所述的应用，其中所述的癌症选自肝癌、白血病、胰腺癌、乳腺癌和肺癌。权利要求书CN102050832ACN102050837A1/17页6山橙素类双吲哚化合物，其药物组合物及其制备方法和用途0001技术领域本发明属于药物技术领域，具体地，涉及山橙素类双吲哚生物碱化合物BISINDOLEALKALOID、其衍生物、有机和。

10、无机酸盐，以其为药物有效成分的药物组合物，其制备方法以及它们在制备治疗或预防癌症药物中的应用。0002背景技术肿瘤是世界难题。在中国每年新增160万肿瘤病患者，每年有130万肿瘤病患者死亡。目前临床上使用的化疗药物虽然有一定疗效，但因其毒性大而给病人带来巨大的肉体痛苦和精神压力，新的疗效确切且毒副作用相对较小的抗肿瘤药物的发现迫在眉睫。山橙素甲、乙、丙、丁MELONINESAD及其衍生物是源于天然植物中的新化合物。此前没有关于此类化合物的结构以及药用活性报道。0003发明内容本发明的目的在于提供通式I的双吲哚生物碱类化合物，例如山橙素甲、乙、丙、丁MELONINESAD及其衍生物，以及利用有机。

11、酸酒石酸，柠檬酸，甲酸，乙酸，乙二酸等或无机酸盐酸，氢溴酸，硝酸，硫酸，磷酸等制成的盐；其制备方法；其作为有效成分与可药用载体或赋形剂组成的药物组合物；以及化合物山橙素类化合物及其药用盐在制备预防或治疗肝癌、白血病、胰腺癌、乳腺癌及肺癌的药物中的用途。0004本发明的上述目的是通过如下的技术方案得以实现的00051、式I所示的双吲哚类化合物或其药学上可接受的盐，00060007其中环A选自如下式II、III或IV的基团00080009各R1独立的是氢、羟基或氧代基，其中羟基可以被C110烷氧基、C210烯基氧基、C210炔基氧基或卤素原子取代；0010各R2独立的是氢、羟基、C110烷基、C1。

12、10醛基或C110烷酰基，所述的羟基可以被C110烷氧基、C210烯基氧基、C210炔基氧基或卤素原子F、CL、BR、I取代；当式I中的虚线是键时R2不存在。0011各R3独立的是氢、羟基、C110烷氧基、C210烯基氧基、C210炔基氧基或C610芳基氧说明书CN102050832ACN102050837A2/17页7基；0012各R4独立的是氢、羟基、C110烷氧基、C210烯基氧基、C210炔基氧基或C610芳基氧基；0013各R5独立的是氢、羟基、C110烷氧基、C210烯基氧基、C110酰氧基0014R6、R7、R8独立的是氢、羟基、C110烷氧基、C210烯基氧基、C210炔基氧基。

13、或C610芳基氧基，或者独立地，R5和R6、R7和R8分别代表氧代基团，或者R6和R7一起代表化学键；0015N是03的整数；0016且当式II中的虚线是键时R2不存在。0017优选具有式I所示结构的双吲哚化合物或其药学上可接受的盐00180019其中R1、R2、R3和环A的定义同上。0020更优选具有式V、VI或VII所示结构的双吲哚化合物或其药学上可接受的盐00210022其中R1、R2、R3、R5、R6、R7、R8和N的定义同上。0023进一步优选具有式VIII、IX或X所示结构的双吲哚化合物或其药学上可接受的盐0024说明书CN102050832ACN102050837A3/17页80。

14、025其中R1、R2、R3、R5、R6、R7、R8和N的定义同上。0026最优选山橙素甲、山橙素乙、山橙素丙或山橙素丁。0027本发明的另一方面涉及一种药物组合物，其中含有式I化合物或其药学上可接受的盐作为有效成分，并含有至少一种药学上可接受的载体。0028本发明的又一方面涉及式I化合物或其药学上可接受的盐在制备治疗或预防增生性疾病或病症的药物中的应用。0029所述的增生性疾病或病症优选为癌症，更优选肝癌、白血病、胰腺癌、乳腺癌及肺癌。0030所述的药学上可接受的盐是指其与有机酸或无机酸形成的盐，其中有机酸包括但不限于酒石酸、柠檬酸、甲酸、乙酸、乙二酸，无机酸包括但不限于盐酸、硫酸、磷酸、氢溴。

15、酸盐、硝酸盐。0031本说明书中，术语“烷基“是指直链或支链烃基，优选具有110个碳原子，更优选具有16个碳原子，更优选具有14个碳。代表性的例子包括甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、正戊基等。0032“烯基”是指具有至少一个碳碳双键，直链或支链的脂族烃基，优选具有210个碳原子，更优选具有26个碳原子，更优选具有24个碳。代表性的例子包括乙烯基、丙烯基、烯丙基、丁烯基、戊二烯基等。0033“炔基”是指具有至少一个碳碳三键，直链或支链的脂族烃基，优选具有210个碳原子，更优选具有26个碳原子，更优选具有24个碳。代表性的例子包括乙炔基、丙炔基、丁炔基等。0034“烷酰基”是指直。

16、链或支链的，环状或无环的脂族羧酸去掉羧基上的羟基形成的基团，优选具有110个碳原子，更优选具有16个碳原子，更优选具有14个碳，代表性的例子包括甲酰基、乙酰基、丙酰基、丁酰基。说明书CN102050832ACN102050837A4/17页90035“芳基”是指具有单环或双环的芳香性基团，它具有610个碳原子，可以含有03个选自O、S、N的杂原子，并且可与其他环稠合。代表性的例子包括苯基、萘基、呋喃基、喹啉基等。0036本发明的双吲哚类化合物的一般制备方法00371、来源于植物及衍生化0038山橙素甲、乙、丙、丁可按如下步骤制备0039从植物思茅山橙植物原料中溶剂提取，分离纯化而得。如果有必要。

17、，与适当的酸成盐，所述的适当的酸选自盐酸、氢溴酸、硝酸、硫酸、磷酸、酒石酸、柠檬酸、甲酸、乙酸、乙二酸或其他适合的有机酸或无机酸。0040所述溶剂提取优选有机溶剂回流提取或浸提，所述的有机溶剂选自C16醇、C36酮、C26醚、C36酯或C16卤代烃。其中所述的C16醇包括例如甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、异丁醇、叔丁醇、正戊醇、异戊醇、环戊醇、正己醇、环己醇等。所述的C36酮包括例如丙酮、甲乙酮、甲基异丁酮等。所述的C26醚包括例如甲醚、乙醚等。所述的C36酯包括例如甲酸乙酯、乙酸乙酯丙酸乙酯等。所述的C16卤代烃包括例如二氯甲烷、氯仿、二氯乙烷等。0041如果有必要的话，可对式I化合物。

18、进一步分离纯化，其中包括将提取物经酸化，用有机溶剂分配，水层碱化，再用有机溶剂萃取，分离有机溶剂层而得。0042如果有必要的话，还可包括用柱层析进一步提高纯度。所述的柱层析可以是硅胶柱层析、C18柱层析、离子交换树脂柱层析、葡聚糖凝胶层析等。例如经硅胶柱层析，用氯仿/甲醇梯度洗脱，分配比例为氯仿/甲醇100，201，101，81，51，31，11。0043具体地，取植物思茅山橙全株，经干燥、粉碎后，用醇提取14次，每次14小时，得醇浸膏，然后通过酸碱处理，除去非生物碱类物质，在碱性条件下用有机溶剂萃取，浓缩有机溶剂提取层，浸膏利用硅胶柱层析，用氯仿/甲醇做为洗脱系统分离得到式I所示的四个化合物。

19、山橙素甲、乙、丙、丁。0044更具体的方法为取风干后的思茅山橙植物全株，用70乙醇70加热，回流提取3次，回收溶剂，浓缩到小体积，加入1HCL调节PH值至2，用乙酸乙酯萃取3次，水层用10氨水调节PH值至9，再用乙酸乙酯萃取3次，浓缩乙酸乙酯层，乙酸乙酯部分用硅胶拌样后，进行700G，200300目硅胶柱层析，划分为6段FRS16，用氯仿/甲醇梯度洗脱分段，分配比例为氯仿/甲醇100，201，101，81，51，31，11，FR2用石油醚/丙酮4/1为洗脱剂，硅胶200G柱层析分离得山橙素甲，FR3用氯仿/甲醇151为洗脱剂，硅胶250G柱层析分离得山橙素丁，FR4用氯仿/甲醇81为洗脱剂，硅。

20、胶300G柱层析分离得山橙素丙，FR6先用硅胶150G氯仿/甲醇51柱洗脱，再用反相硅胶RP18、100G甲醇/水2/8柱层析分离得山橙素乙。0045可选择地，可对例如山橙素甲、乙、丙、丁等式I化合物进行结构修饰和衍生化，例如在吲哚环上引入各种取代基团，或对其它环上的取代基进行变换和修饰。0046吲哚环上的取代基可通过例如中国专利CN101108859A的方法而引入。其中以式V1A例如山橙素丙为原料，在适当的温度2030下，在无水二氯甲烷及三氟乙酸的混合溶剂中与卤代试剂反应，得到卤素取代的通式V1B、C、D化合物，其中V1B和V1D可进一步转化为V1C，然后在过渡金属催化下加热40150进行反。

21、应最终得到说明书CN102050832ACN102050837A5/17页10式V化合物见附图1。0047吲哚环上的乙基可通过例如JACQUESY，JCJFLUORCHEM2006，127，14841487的方法而引入氟。其中例如山橙素丙为原料，在适当的温度下，在有机溶剂如无水二氯甲烷或三氯甲烷溶剂中与HF/SBF5试剂反应，得到氟取代的通式见附图2。004800490050吲哚环N上的取代基可通过例如KUBOYAMA等的方法PROCNATACADSCIUSA，2004，10133，1196611970而引入。其中例如以山橙素丙为原料，溶于乙酸酐甲酸115中，搅拌反应15H后用氨水终止反应，用。

22、二氯甲烷萃取，经蒸除溶剂、粗品纯化后得到N上H被酰化的衍生物见附图3。0051005200530054图解300552、化学合成方法0056将构成式I双吲哚化合物的两个吲哚单体分别通过前述方法在吲哚环或其他环上引入相应的取代基进行必要的修饰，然后在醇例如甲醇、乙醇溶液中经酸催化，在适当的温度下例如常温到回流的温度，具体地2080进行偶联，从而得到式I化合物见附图4。005700580059本发明的式I化合物山橙素类化合物，MELONINES或其盐可经口或不经过口给药，给药量因药物不同而各有不同，对成人来说，每天11000MG比较合适。0060经口服给药时，首先使化合物与常规的药用辅剂如赋形剂、。

23、崩解剂、黏合剂、润滑剂、抗氧化剂、包衣剂、着色剂、芳香剂、表面活性剂等混合，将其制成颗粒剂、胶囊、片剂等形式给药；非经口给药时可以注射液、输液剂或栓剂等形式给药。制备上述制剂时，可使用常规的制剂技术。附图说明图1为山橙素类化合物吲哚环上的取代基引入例子；图2为山橙素类化合物吲哚环上的乙基引入氟的例子；图3为山橙素类化合物吲哚环N上的取代基的引入例子；图4为本发明式I化合物最终合成步骤。具体实施方式0061下面的试验实施例、实施例和制剂实施例可更详细地说明本发明，但不以任何形式限制本发明。说明书CN102050832ACN102050837A6/17页110062试验实施例10063试验证明，本。

24、发明的通式I双吲哚化合物对人乳腺癌细胞株SKBR3，人肝癌细胞株SMMC7721，人白血病细胞株HL60，人胰腺癌细胞株PANC1，人肺癌细胞株A549生长的半数抑制浓度IC50在011000M之间，具有预防或治疗增生性疾病例如癌症的作用。实验方法和结果如下0064一、材料与方法00651样品及制备0066样品呈无色，二甲基亚砜DMSO溶解配制为10MG/ML浓度的贮存液避光保存备用。00672细胞株0068SKBR3，人乳腺癌细胞株0069SMMC7721，人肝癌细胞株0070HL60，人白血病细胞株0071PANC1，人胰腺癌细胞株0072A549，人肺癌细胞株00733实验方法00741。

25、接种细胞用含10胎牛血清的培养液DMEM或者RMPI1640配成单个细胞悬液，以每孔1000020000个细胞接种到96孔板，每孔体积100UL，贴壁细胞提前12小时接种培养。00752加入待测化合物溶液化合物单体固定浓度40UM初筛，粗提物100UG/ML初筛，在该浓度对肿瘤细胞生长抑制在50附近的化合物设5个浓度进入梯度复筛，每孔终体积200UL，每种处理均设3个复孔。00763显色37摄氏度培养48小时后，每孔加MTT溶液20UL。继续孵育4小时，终止培养，小心吸弃孔内培养上清液100UL以避免细胞丢失，每孔加20的SDS100UL，过夜孵育温度37，使结晶物充分融解。00774比色选择。

26、595NM波长，酶联免疫检测仪BIORAD680读取各孔光吸收值，记录结果，以浓度为横坐标，细胞存活率为纵坐标绘制细胞生长曲线，应用两点法REEDANDMUENCH法计算化合物的IC50值。00785阳性对照顺铂0079二、结果0080表1山橙素甲、乙、丙、丁MELONINESAD0081对人肿瘤细胞株生长的半数抑制浓度IC50，M0082说明书CN102050832ACN102050837A7/17页120083三、结论0084在本实验条件下，化合物山橙素甲、乙、丙、丁MELONINESAD对以上包括人乳腺癌细胞株SKBR3，人肝癌细胞株SMMC7721，人白血病细胞株HL60，人胰腺癌细胞。

27、株PANC1，人肺癌细胞株A549生长的半数抑制浓度IC50在0662341M之间，依据中国医药工业杂志1993，24455457，周建军等提出的评价抗肿瘤物质活性的改良MTT法得出结论上述数据显示了明显的抑制癌症的作用。0085实施例10086风干后的12KG植物全株思茅山橙MELODINUSHENRYICRAIB用70乙醇加热70回流提取3次，回收溶剂，浓缩到小体积，加入1HCL调节PH值至2，用乙酸乙酯萃取3次，水层用10氨水调节PH值至9，再用乙酸乙酯萃取3次，浓缩乙酸乙酯层后称重得77G。乙酸乙酯部分用适量硅胶拌样后，进行硅胶柱层析700G，200300目，青岛海洋化工厂划分为6段F。

28、RS16，用氯仿/甲醇梯度洗脱分段分配比例为氯仿/甲醇100，201，101，81，51，31，11。FR210G利用石油醚/丙酮4/1作为洗脱剂通过用硅胶200G柱层析分离得到山橙素甲MELONINEA10MG，FR38G利用硅胶250G柱层析分离，在氯仿/甲醇151作为洗脱剂的情况下分离得到山橙素丁MELONINED23MG，FR410G利用氯仿/甲醇81作为洗脱剂通过硅胶300G柱层析分离得到山橙素丙MELONINEC2G，FR64G先用硅胶150G柱洗脱氯仿/甲醇51，再用反相硅胶RP18，100G柱层析分离甲醇/水2/8，得山橙素乙MELONINEB18MG。0087山橙素甲MELO。

29、NINEA的化学结构式为0088说明书CN102050832ACN102050837A8/17页130089山橙素甲0090II0091分子量590，分子式C38H46N4O2。旋光255D66。红色粉末。易溶于氯仿，丙酮，甲醇，微溶于水。0092山橙素甲MELONINEA的结构是基于它的紫外光谱、红外光谱、质谱和核磁共振谱特别是二维核磁共振谱而确定。0093紫外光谱数据UVMAXMEOH500362，354353，270438，2404590094红外光谱数据IRMAXKBR3440，2925，1637，1602，14550095质谱数据HRESIMSM/Z5913685MH00961HNM。

30、R和13CNMR数据见表2。0097以上数据结合2DNMR分析证实了山橙素甲MELONINEA的化学结构为式II所示。0098山橙素乙MELONINEB的化学结构式为00990100山橙素乙0101III0102分子量606，分子式C39H50N4O2。旋光255D237。无色油状物。易溶于甲醇，微溶于水、丙酮。0103山橙素乙MELONINEB的结构是基于它的紫外光谱、红外光谱、质谱和核磁共振谱特别是二维核磁共振谱而确定。0104紫外光谱数据UVMAXMEOH293360，2074490105红外光谱数据IRMAXKBR3418，2926，1624，1456，1384，1319，1180说明。

31、书CN102050832ACN102050837A9/17页140106质谱数据HRESIMSM/Z6074013MH01071HNMR和13CNMR数据见表3。0108以上数据结合2DNMR分析证实了山橙素乙MELONINEB的化学结构为式所示。0109山橙素丙MELONINEC的化学结构式为01100111山橙素丙01120113分子量576，分子式C38H48N4O。旋光255D19。无色粉末，易溶于甲醇，微溶于水、丙酮。0114山橙素丙MELONINEC的结构是基于它的紫外光谱、红外光谱、质谱和核磁共振谱特别是二维核磁共振谱而确定。0115紫外光谱数据UVMAXMEOH375288，2。

32、93375，286374，216456，2054580116红外光谱数据IRMAXKBR3416，3386，2941，1614，1454，12660117质谱数据HREIMSM/Z5773898MH01181HNMR和13CNMR数据见表4。0119以上数据结合2DNMR分析证实了山橙素丙MELONINEC的化学结构为式所示。0120山橙素丁MELONINED的化学结构式为01210122山橙素丁0123V说明书CN102050832ACN102050837A10/17页150124分子量574，分子式C38H46N4O。旋光255D177。无色油状物。易溶于甲醇，微溶于水、丙酮。0125山橙。

33、素丁MELONINED的结构是基于它的紫外光谱、红外光谱、质谱和核磁共振谱特别是二维核磁共振谱而确定。0126紫外光谱数据UVMAXMEOH375268，292357，284360，2044400127红外光谱数据IRMAXKBR3421，2927，1585，14540128质谱数据HRESIMSM/Z5753734MH01291HNMR和13CNMR数据见表5。0130以上数据结合2DNMR分析证实了山橙素丁MELONINED的化学结构为式V所示。0131实施例20132按实施例1的方法先制得山橙素甲、乙、丙、丁MELONINESAD，加入4的硫酸乙醇溶液，PH4，过滤，干燥，制成硫酸山橙素。

34、甲、乙、丙、丁MELONINESAD。0133实施例30134按实施例1的方法制得山橙素甲、乙、丙、丁MELONINESAD，加入4的盐酸酸溶液，PH4，过滤，干燥，制成盐酸山橙素甲、乙、丙、丁MELONINESAD。0135实施例40136按实施例1的方法制得山橙素甲、乙、丙、丁MELONINESAD，加入4的磷酸酸溶液，PH4，过滤，干燥，制成磷酸山橙素甲、乙、丙、丁MELONINESAD。0137实施例50138按实施例1的方法制得山橙素甲、乙、丙、丁MELONINESAD，加入4的酒石酸溶液，PH4，过滤，干燥，制成酒石酸山橙素甲、乙、丙、丁MELONINESAD。0139实施例601。

35、40按实施例1的方法制得山橙素甲、乙、丙、丁MELONINESAD，加入4的柠檬酸溶液，PH4，过滤，干燥，制成柠檬酸山橙素甲、乙、丙、丁MELONINESAD。0141表1山橙素甲MELONINEA的1HNMR和13CNMR数据CD3OD0142说明书CN102050832ACN102050837A11/17页160143表2山橙素乙MELONINEB的1HNMR和13CNMR数据CD3OD0144说明书CN102050832ACN102050837A12/17页170145表3山橙素丙MELONINEC的1HNMR和13CNMR数据CD3OD0146说明书CN102050832ACN102。

36、050837A13/17页180147表4山橙素丁MELONINED的1HNMR和13CNMR数据CD3OD0148说明书CN102050832ACN102050837A14/17页190149实施例70150按实施例1的方法制得山橙素甲、乙、丙、丁MELONINESAD，加入4的甲酸溶液，PH4，过滤，干燥，制成甲酸山橙素甲、乙、丙、丁MELONINESAD。0151实施例8说明书CN102050832ACN102050837A15/17页200152按实施例1的方法制得山橙素甲、乙、丙、丁MELONINESAD，加入4的乙二酸溶液，PH4，过滤，干燥，制成乙二酸山橙素甲、乙、丙、丁MELO。

37、NINESAD。0153实施例90154将山橙素丙在适当的温度2030下溶于无水二氯甲烷及三氟乙酸的混合溶剂中，与NBS反应得到10溴代山橙素丙，然后将其溶于水，在过渡金属催化下加热至75进行反应得到10羟基山橙素丙。0155类似地，根据前述图解中吲哚衍生化方法，可以制备以下的化合物0156表5式I化合物的结构01570158说明书CN102050832ACN102050837A16/17页210159说明书CN102050832ACN102050837A17/17页220160制剂实施例10161按实施例1的方法先制得山橙素甲、乙、丙、丁MELONINESAD，以及利用有机酸酒石酸，柠檬酸，。

38、甲酸，乙二酸等或无机酸盐酸，硫酸，磷酸等制成的盐，按常规加注射用水，精滤，灌封灭菌制成注射液。0162制剂实施例20163按实施例1的方法先制得山橙素甲、乙、丙、丁MELONINESAD，以及利用有机酸酒石酸，柠檬酸，甲酸，乙二酸等或无机酸盐酸，硫酸，磷酸等制成的盐，将其溶于无菌注射用水中，搅拌使溶，用无菌抽滤漏斗过滤，再无菌精滤，分装于2安瓿中，低温冷冻干燥后无菌熔封得粉针剂。0164制剂实施例30165将所分离得到山橙素甲、乙、丙、丁MELONINESAD，以及利用有机酸酒石酸，柠檬酸，甲酸，乙二酸等或无机酸盐酸，硫酸，磷酸等制成的盐，与赋形剂重量比为91的比例加入赋形剂，制成粉剂。016。

39、6制剂实施例40167按实施例1的方法先制得山橙素甲、乙、丙、丁MELONINESAD，以及利用有机酸酒石酸，柠檬酸，甲酸，乙二酸等或无机酸盐酸，硫酸，磷酸等制成的盐，按其与赋形剂重量比为15110的比例加入赋形剂，制粒压片。0168制剂实施例50169按实施例1的方法先制得山橙素甲、乙、丙、丁MELONINESAD，以及利用有机酸酒石酸，柠檬酸，甲酸，乙二酸等或无机酸盐酸，硫酸，磷酸等制成的盐，按常规口服液制法制成口服液。0170制剂实施例60171按实施例1的方法先制得山橙素甲、乙、丙、丁MELONINESAD，以及利用有机酸酒石酸，柠檬酸，甲酸，乙二酸等或无机酸盐酸，硫酸，磷酸等制成的盐，按其与赋形剂重量比为51的比例加入赋形剂，制成胶囊或颗粒剂或冲剂。0172制剂实施例70173按实施例1的方法先制得山橙素甲、乙、丙、丁MELONINESAD，以及利用有机酸酒石酸，柠檬酸，甲酸，乙二酸等或无机酸盐酸，硫酸，磷酸等制成的盐，按其与赋形剂重量比为31的比例加入赋形剂，制成胶囊或颗粒剂或冲剂。说明书CN102050832ACN102050837A1/2页23图1图2说明书附图CN102050832ACN102050837A2/2页24图3图4说明书附图CN102050832A。