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1、10申请公布号CN102058585A43申请公布日20110518CN102058585ACN102058585A21申请号201110003962922申请日20110110A61K31/426200601C07D277/54200601A61P35/0020060171申请人苏州大学地址215123江苏省苏州市苏州工业园区仁爱路199号72发明人乔春华74专利代理机构苏州创元专利商标事务所有限公司32103代理人陶海锋54发明名称罗丹宁衍生物作为抗肿瘤药物的应用57摘要本发明属于抗肿瘤药物领域，涉及一种以罗丹宁为母环的衍生物、其制备方法及其作为抗癌药物的应用，所述以罗丹宁为母环的衍生物的。
2、结构通式为，式中，R1选自L型天然氨基酸的侧链、D型非天然氨基酸的侧链、C1C8的开链脂肪烷基、C1C8的环状脂肪烷基、C6C8的芳香烷基；R2选自氢原子、卤素、苯基、联苯、C6C8的取代苯基、C1C8烷基；R3选自磺胺基、各种取代的磺酰基。所述以罗丹宁为母环的衍生物对肿瘤具有明显的抑制作用。51INTCL19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书2页说明书10页附图3页CN102058587A1/2页21一种以罗丹宁为母环的衍生物，其特征在于，所述以罗丹宁为母环的衍生物的结构通式为；式中，R1选自L型天然氨基酸的侧链、D型非天然氨基酸的侧链、C1C8的开链脂肪烷基、C1C8的。
3、环状脂肪烷基、C6C8的芳香烷基；R2选自氢原子、卤素、苯基、联苯、C6C8的取代苯基、C1C8烷基；R3选自磺胺基、各种取代的磺酰基。2根据权利要求1所述以罗丹宁为母环的衍生物，其特征在于，R1选自C1C4的脂肪烷基、C6C8的芳香烷基；R2选自联苯或单取代的C6C8的芳香烷基；R3为磺胺基。3根据权利要求1所述以罗丹宁为母环的衍生物，其特征在于，所述以罗丹宁为母环的衍生物的结构式为。4权利要求1所述以罗丹宁为母环的衍生物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤1将醛、罗丹宁、乙酸钠溶于乙酸，回流搅拌510H；然后冷却至室温，加入水并搅拌使反应产物A析出；其中，醛、罗丹宁与乙酸钠的摩尔比为112。
4、4；2将化合物A、二异丙基乙胺溶于无水乙醇中，搅拌下滴加碘甲烷；室温反应14后，加入水并搅拌使反应产物B析出；其中，化合物A、二异丙基乙胺和碘甲烷的摩尔比为12525；3将化合物B、二异丙基乙胺与L苯丙氨酸溶于乙醇，回流搅拌37H后，冷却减压除去乙醇，加入盐酸水解得反应产物C；其中，化合物B、二异丙基乙胺与L苯丙氨酸的摩尔比为11313；4将化合物C、对甲苯磺酰胺、13二甲氨基丙基3乙基碳二亚胺盐酸盐、4二甲氨基吡啶加入二氯甲烷中，室温搅拌反应824H得罗丹宁衍生物；其中，化合物C、对甲苯磺酰胺、13二甲氨基丙基3乙基碳二亚胺盐酸盐、4二甲氨基吡啶的摩尔比为1141515；其中A的结构式为；B。
5、的结构式为；C的结构式为权利要求书CN102058585ACN102058587A2/2页3；其中，R1选自L型天然氨基酸的侧链、D型非天然氨基酸的侧链、C1C8的开链脂肪烷基、C1C8的环状脂肪烷基、C6C8的芳香烷基；R2选自氢原子、卤素、苯基、联苯、C6C8的取代苯基、C1C8烷基；R3选自磺胺基、各种取代的磺酰基。5权利要求1所述以罗丹宁为母环的衍生物制备抗肿瘤药物的应用。6一种抗肿瘤药物，其主要活性成分为权利要求1所述以罗丹宁为母环的衍生物。7一种抗肿瘤药物，其主要活性成分为权利要求3所述以罗丹宁为母环的衍生物。权利要求书CN102058585ACN102058587A1/10页4罗。
6、丹宁衍生物作为抗肿瘤药物的应用技术领域0001本发明属于抗肿瘤药物领域，涉及一种以罗丹宁为母环的衍生物、其制备方法及其作为抗癌药物的应用。背景技术0002罗丹宁RHODANINE；绕丹宁、银试剂、2硫代4噻唑烷酮、2硫代2，4噻唑烷二酮，分子式C3H3NOS2，分子量13318，分子结构为0003以罗丹宁为母环的衍生物由于其特殊的性质及医药用途而得到全世界的广泛关注和研究，例如苄基取代绕丹宁衍生物在治疗炎症、炎性肠病下文中称IBD、关节炎、低血糖和肌肉营养不良以及预防局部缺血引起的细胞损伤方面具有活性，例如专利号5216002公开了用于治疗IBD的某些苄基取代绕丹宁衍生物；专利号5158966。
7、的美国专利公开了某些苄基取代绕丹宁衍生物用于治疗I型糖尿病的用途，同时，该专利公开了一种制备苄基取代绕丹宁衍生物的方法，该方法包括使3，5二叔丁基4羟基苯甲醛与绕丹宁在乙酸中反应，形成53，5双1，1二甲基乙基4羟基苯基亚甲基2硫代4噻唑烷酮，并使用钯炭作为催化剂，用氢气还原生成物2硫代4噻唑烷酮。可选择通过与1，4二氢2，6二甲基3，5吡啶二甲酸二乙酯一起回流所述2硫代4噻唑烷酮的烯烃，然后用氢和钯炭还原所述硫代基。在另一个方法中，通过在锌存在下的乙酸混合物中加热甲基2硫代4噻唑烷酮，可以完成所述硫代基的还原。上述制备苄基取代绕丹宁衍生物的方法需要大量的贵金属催化剂，产生过量的对环境有害的锌。
8、废料。0004另外，授权公告号为CN1073094C的中国发明专利说明书也公开了一种制备苄基取代的绕丹宁衍生物的方法，其制备过程参见图1，具体包括以下步骤将化合物III溶解在液体介质中，然后，在胺的存在下与醛混合，形成化合物IIA，化合物IIA进一步与该醛反应形成化合物IIB，然后环合形成所需的化合物I；在另外一条反应途径中，式IIA化合物可以与所述醛和胺反应，直接形成化合物I，而不产生中间体化合物IIB。0005另外，史好新等人在化学通报，1991，8，P3638中名为苄叉绕丹宁及其类似物的NMANNICH碱合成的文献中也报道了利用绕丹宁母环进行MANNICH反应得到一系列绕丹宁衍生物，其具。
9、有杀菌、抗癌的效果，然而其并没有进行进一步的研究。发明内容0006本发明的发明目的是提供一种以罗丹宁为母环的衍生物，其制备方法及其作为抗癌药物的应用。0007为达到上述发明目的，本发明采用的技术方案是一种以罗丹宁为母环的衍生物，其结构通式为0008说明书CN102058585ACN102058587A2/10页50009式中，R1选自L型天然氨基酸的侧链、D型非天然氨基酸的侧链、C1C8的开链脂肪烷基、C1C8的环状脂肪烷基、C6C8的芳香烷基；优选地，R1选自C1C4的脂肪烷基、C6C8的芳香烷基；0010R2选自氢原子、卤素、苯基、联苯、C6C8的取代苯基、C1C8烷基；优选地，R2选自联。
10、苯或单取代的C6C8的芳香烷基；0011R3选自磺胺基、各种取代的磺酰基；优选地，R3为磺胺基。0012优选的技术方案中，上述以罗丹宁为母环的衍生物的结构式为00130014上述技术方案中，所述以罗丹宁为母环的衍生物的制备方法包括以下步骤00151将醛罗丹宁、乙酸钠溶于乙酸，回流搅拌510H；然后冷却至室温，加入水并搅拌使反应产物化合物A析出；其中，醛、罗丹宁与乙酸钠的摩尔比为1124；00162将化合物A、二异丙基乙胺溶于无水乙醇中，搅拌下滴加碘甲烷；室温反应14H后，加入水并搅拌使反应产物化合物B析出；其中，化合物A、二异丙基乙胺和碘甲烷的摩尔比为12525；00173将化合物B、二异丙基。
11、乙胺与L苯丙氨酸溶于乙醇，回流搅拌37H后，冷却减压除去乙醇，加入盐酸水解得反应产物化合物C；其中，化合物B、二异丙基乙胺与L苯丙氨酸的摩尔比为11313；00184将化合物C、对甲苯磺酰胺、13二甲氨基丙基3乙基碳二亚胺盐酸盐、4二甲氨基吡啶DMAP加入二氯甲烷中，室温搅拌反应824H得罗丹宁衍生物；其中，化合物C、对甲苯磺酰胺、13二甲氨基丙基3乙基碳二亚胺盐酸盐、4二甲氨基吡啶的摩尔比为1141515；0019其中A的结构式为B的结构式为C的结构式为说明书CN102058585ACN102058587A3/10页60020上述以罗丹宁为母环的衍生物具有抗肿瘤作用，因此可以用来制备抗肿瘤药。
12、物，因此本发明同时要求保护上述以罗丹宁为母环的衍生物制备抗肿瘤药物的应用，同时，本发明要求保护一种抗肿瘤药物，其主要活性成分为上述以罗丹宁为母环的衍生物；优选地，所述以罗丹宁为母环的衍生物的结构式为00210022由于上述技术方案运用，本发明与现有技术相比具有下列优点0023本发明所述以罗丹宁为母环的衍生物，经体内和体外实验可知，对肿瘤具有明显的抑制作用，以优选的化合物为例，在不具有明显的毒性的情况下，它对肿瘤的生长抑制率达到637；并且，药理实验表明，该优选化合物抗肿瘤的作用机制与目前上市抗肿瘤药物的机理不同，其作用靶点为对抗细胞凋亡的BCL2蛋白家族，而抗细胞凋亡的BCL2蛋白家族成员BC。
13、L2，BCLXL，BCLW，MCL1和A1在乳腺癌、前列腺癌、肝癌、B细胞淋巴瘤、肠腺癌及乳腺癌、和肺癌中会过度表达，因此，所述以罗丹宁为母环的衍生物具有广谱抗肿瘤作用；目前，欧美国家的大型制药公司，以及多家科研院所都在积极研发靶点为抗细胞凋亡BCL2蛋白家族的抑制剂，而我国在此领域的临床药物尚未见报道。附图说明0024图1是现有技术中制备苄基取代的绕丹宁衍生物过程的示意图；0025图2是实施例中制备以罗丹宁为母环的衍生物过程的示意图；0026图3是实施例中化合物SZ0104与蛋白的结合常数图；0027图4是实施例中化合物SZ0104MTT法测定结果图；0028图5是实施例中化合物SZ0104。
14、对接种MDA231裸鼠的抑制曲线。具体实施方式0029下面结合附图及实施例对本发明作进一步描述0030实施例一参见图1所示，制备以罗丹宁为母环的衍生物0031将醛10MMOL、罗丹宁10MMOL、乙酸钠2040MMOL和50ML乙酸加入反应瓶中，回流搅拌510H。反应液冷却至室温后，倾入100ML水中，搅拌10H。抽滤，水说明书CN102058585ACN102058587A4/10页7洗，干燥得粗品A。0032将A10MMOL、二异丙基乙胺2050MMOL和50ML无水乙醇加入反应瓶中，搅拌下滴加碘甲烷2050MMOL。室温反应2H后，反应液倾入100ML水中，剧烈搅拌1H。抽滤，水洗，干燥。
15、得粗品B。0033将B10MMOL，二异丙基乙胺1030MMOL与L苯丙氨酸1030MMOL和25ML乙醇加入反应瓶中，回流搅拌37H。反应液冷却，减压蒸除乙醇，加入HCL溶液150ML，10MOL/L，乙酸乙酯萃取，水洗至水层呈中性，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，柱层析石油醚乙酸乙酯得C0034将C10MMOL、对甲苯磺酰胺1040MMOL、EDC2NHCL1050MMOL、DMAP1050MMOL和25ML二氯甲烷加入反应瓶中，室温搅拌反应824H。反应毕，加入40ML二氯甲烷稀释，HCL溶液15ML，10MOL/L洗涤，水洗至中性，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，。
16、滤液浓缩，柱层析石油醚乙酸乙酯得最终罗丹宁衍生物0035其中A的结构式为B的结构式为C的结构式为以罗丹宁为母环的衍生物的结构通式为0036采用上述方法合成制备下表中的化合物，对应的所需醛，氨基酸，磺胺都是市售产品，纯度98。00370038说明书CN102058585ACN102058587A5/10页80039以化合物SZ0104为例，其仪器分析数据为1HNMR400MHZ，DMSOD6087D，J64HZ，3H，090D，J64HZ，3H，149164M，3H，238S，3H，468476M，1H，738742M，3H，747751M，2H，764768M，3H，772775M，2H，78。
17、1786M，4H，988D，J71HZ，1H；13CNMR100MHZ，DMSOD62122C，2302C，246，568，12693C，1275，12752C，1282，12923C，12973C，13032C，1330，1363，1391，1413，1445，1705，1740，1796；ESIMSCACLDFORC29H29N3O4S2MH5481678，FOUND5481680ERROR03PPM，上述分析结果说明得到目的化合物。0040化合物SZ12051HNMR400MHZ，DMSOD6240S，3H，284DD，J100HZ，140HZ，1H，314DD，J44HZ，140HZ，。
18、1H，489497M，1H，717726M，5H，739743M，3H，746752M，2H，762766M，3H，772776M，2H，780785M，4H，994D，J101HZ，1H；13CNMR100MHZ，DMSOD6213，368，595，12692C，1271，12752C，12772C，1282，1283，12852C，12923C，12932C，12982C，13032C，1330，1360，1362，1391，1413，1446，1693，1741，1795；ESIMSCACLDFORC32H27N3O4S2MH5821521，FOUND5821525ERROR06PPM，。
19、上述分析结果说明得到目的化合物。0041SZ02201HNMR400MHZ，DMSOD6081D，J68HZ，3H，085D，J68HZ，说明书CN102058585ACN102058587A6/10页93H，205216M，1H，238S，3H，458467M，1H，738742M，3H，747751M，2H，763767M，3H，773775M，2H，782786M，4H，979D，J78HZ，1H；13CNMR75MHZ，DMSOD6176，186，211，305，630，12672C，12732C，12752C，1280，1284，12902C，1294，12952C，13012C，1。
20、330，1361，1390，1411，1444，1692，1743，1793；ESIMSCACLDFORC28H27N3O4S2MH5341521，FOUND5341513ERROR14PPM，上述分析结果说明得到目的化合物。0042SZ12131HNMR300MHZ，DMSOD6240S，3H，280DD，J96，135HZ，1H，312DD，J42，135HZ，1H，386S，3H，486496M，1H，704712M，2H，718726M，5H，735743M，4H，778785M，3H，992D，J78HZ，1H；13CNMR75MHZ，DMSOD6211，368，557，595，11。
21、17，1208，1225，1245，1268，12752C，1280，12832C，1284，12922C，12952C，1315，1361，1367，1440，1578，1695，1741，1793；ESIMSCACLDFORC27H25N3O5S2MH5361308，FOUND5361310ERROR03PPM，上述分析结果说明得到目的化合物。0043SZ12151HNMR400MHZ，DMSOD6085089M，6H，149162M，3H，238S，3H，388S，3H，467473M，1H，707713M，2H，737745M，4H，781D，J83HZ，2H，785S，1H，978D。
22、，J73HZ，1H；13CNMR75MHZ，DMSOD62112C，228，244，397，557，565，1117，1209，1225，1247，12742C，1280，1284，12962C，1316，1363，1443，1578，1703，1741，1793；ESIMSCACLDFORC24H27N3O5S2MH5021465，FOUND5021480ERROR29PPM，上述分析结果说明得到目的化合物。0044SZ12161HNMR300MHZ，DMSOD6078084M，6H，202211M，1H，238S，3H，388S，3H，459T，J69HZ，1H，706714M，2H，73。
23、9742M，4H，781784M，3H，972D，J77HZ，1H；13CNMR100MHZ，DMSOD6177，188，212，307，558，631，1118，1210，1226，1247，12772C，1281，1286，12972C，1317，1363，1446，1580，1696，1748，1796；ESIMSCACLDFORC23H25N3O5S2MH4881308，FOUND4881306ERROR04PPM，上述分析结果说明得到目的化合物。0045SZ01061HNMR400MHZ，DMSOD6240S，3H，283DD，J96，139HZ，1H，313DD，J42，138HZ。
24、，1H，379S，3H，489498M，1H，699702M，1H，709711M，2H，718726M，6H，739743M，2H，755S，1H，780783M，2H，992D，J75HZ，1H；13CNMR75MHZ，DMSOD6211，367，552，593，1147，1156，1216，1269，12752C，12832C，1286，12922C，12962C，1300，1303，1353，1359，1362，1444，1596，1691，1740，1791；ESIMSCACLDFORC27H25N3O5S2MH5361308，FOUND5361320ERROR22PPM，上述分析结。
25、果说明得到目的化合物。0046SZ12221HNMR400MHZ，DMSOD6086D，J62HZ，3H，089D，J63HZ，3H，149162M，3H，237S，3H，380S，3H，465475M，1H，700702M，1H，712714M，2H，739744M，3H，760S，1H，781783M，2H，985D，J73HZ，1H；13CNMR75MHZ，DMSOD62112C，228，244，290，552，566，1146，1156，1216，12742C，1286，12962C，1300，1303，1353，1362，1443，1596，1702，1739，1792；ESIMSC。
26、ACLDFORC24H27N3O5S2MH5021465，FOUND5021477ERROR说明书CN102058585ACN102058587A7/10页1023PPM，上述分析结果说明得到目的化合物。0047SZ12251HNMR400MHZ，DMSOD6080D，J68HZ，3H，084D，J67HZ，3H，238S，3H，380S，3H，458462M，1H，700703M，1H，712715M，2H，739745M，3H，759S，1H，781783M，2H，976D，J79HZ，1H；13CNMR75MHZ，DMSOD6176，187，211，305，552，630，1146，11。
27、57，1216，12762C，1288，1296，12992C，1303，1354，1362，1445，1597，1693，1744，1793；ESIMSCACLDFORC23H25N3O5S2MH4881308，FOUND4881331ERROR47PPM，上述分析结果说明得到目的化合物。0048SZ02241HNMR400MHZ，DMSOD6085D，J64HZ，3H，088D，J64HZ，3H，145164M，3H，237S，3H，381S，3H，464472M，1H，708D，J88HZ，2H，740D，J84HZ，2H，751D，J88HZ，2H，758S，1H，781D，J84HZ。
28、，2H，983D，J72HZ，1H；13CNMR100MHZ，DMSOD62112C，229，245，555，565，11492C，1253，1263，12742C，1276，12962C，1301，13142C，1363，1444，1605，1704，1738，1796；ESIMSCACLDFORC24H27N3O5S2MH5021465，FOUND5021477ERROR23PPM，上述分析结果说明得到目的化合物。0049SZ03041HNMR400MHZ，DMSOD6080D，J68HZ，3H，083D，J67HZ，3H，205213M，1H，237S，3H，378386M，4H，708。
29、D，J87HZ，2H，740D，J82HZ，2H，751D，J87HZ，2H，757S，1H，782D，J82HZ，2H，969D，J78HZ，1H；13CNMR75MHZ，DMSOD6176，187，211，305，554，630，11482C，1256，1263，12752C，12952C，1299，13132C，1362，1444，1604，1693，1743，1795；ESIMSCACLDFORC23H25N3O5S2MH4881308，FOUND4881317ERROR18PPM，上述分析结果说明得到目的化合物。0050SZ03191HNMR300MHZ，DMSOD6115127M，。
30、5H，157170M，6H，239S，3H，277DD，J99，135HZ，1H，308DD，J39，138HZ，1H，481496M，1H，649D，J93HZ，1H，714726M，5H，741D，J81HZ，2H，780D，J81HZ，2H，978D，J76HZ，1H；13CNMR100MHZ，DMSOD6212，2492C，253，3102C，367，419，591，1270，12762C，12842C，12922C，12982C，1301，1360，1361，1386，1446，1693，1738，1783；ESIMSCACLDFORC26H29N3O4S2MH5121672，FOU。
31、ND5121687ERROR29PPM，上述分析结果说明得到目的化合物。0051SZ03111HNMR400MHZ，CD32CO092D，J61HZ，3H，094D，J60HZ，3H，167177M，3H，239S，3H，486490M，1H，726730M，2H，738D，J81HZ，2H，761765M，3H，790D，J83HZ，2H；13CNMR100MHZ，DMSOD62112C，229，245，566，1163，11652C，12742C，1281，1290，12972C，1306，1318，13192C，1362，1444，1703，1739，1793；ESIMSCACLDFOR。
32、C23H24FN3O4S2MH4901265，FOUND4901275ERROR20PPM，上述分析结果说明得到目的化合物。0052SZ03201HNMR300MHZ，DMSOD6079DD，J69HZ，3H，082DD，J69HZ，3H，204214M，1H，237S，3H，454464M，1H，740D，J81HZ，2H，756762M，5H，782D，J81HZ，2H，987D，J77HZ，1H；13CNMR75MHZ，说明书CN102058585ACN102058587A8/10页11DMSOD6176，186，211，305，631，1162，1164，12562C，1275，128。
33、7D，J46HZ，12932C，1295，1317D，J82HZ，1362，1414，1418，1444，1692，1743，1792；ESIMSCACLDFORC22H22FN3O4S2MH4761109，FOUND4761106ERROR06PPM，上述分析结果说明得到目的化合物。0053SZ03281HNMR300MHZ，DMSOD6240S，3H，282DD，J99，135HZ，1H，313DD，J36，138HZ，1H，482499M，1H，716724M，5H，733744M，4H，746754M，2H，761S，1H，782D，J81HZ，2H，1008D，J74HZ，1H；13。
34、CNMR75MHZ，DMSOD6212，368，595，1162D，J217HZ，1211D，J65HZ，1219D，J120HZ，1254，1270，12772C，12842C，1285，12932C，12982C，1310，1321D，J88HZ，1360D，J163HZ，1447，1589，1622，1691，1741，1790；ESIMSCACLDFORC26H22FN3O4S2MH5241108，FOUND5241117ERROR17PPM，上述分析结果说明得到目的化合物。0054SZ03241HNMR400MHZ，DMSOD6085D，J61HZ，3H，089D，J61HZ，3H，。
35、148160M，3H，237S，3H，467474M，1H，734743M，4H，748755M，2H，766S，1H，781D，J83HZ，2H，996D，J79HZ，1H；13CNMR75MHZ，DMSOD62112C，228，245，567，1162D，J213HZ，1209D，J67HZ，1219D，J120HZ，1254，12752C，1285，12962C，1311，1320D，J84HZ，1362，1444，1588，1622，1702，1738，1789；ESIMSCACLDFORC23H24FN3O4S2MH4901265，FOUND4901274ERROR18PPM，上述分。
36、析结果说明得到目的化合物。0055SZ03261HNMR400MHZ，DMSOD6079D，J68HZ，3H，082D，J64HZ，3H，203213M，1H，237S，3H，458462M，1H，733742M，4H，748755M，2H，765S，1H，782D，J84HZ，2H，992D，J79HZ，1H；13CNMR75MHZ，DMSOD6176，187，211，306，631，1160，1163，1208D，J58HZ，1219D，J118HZ，1254D，J21HZ，12762C，1285，12962C，1312，1320D，J93HZ，1362，1445，1692，1744，17。
37、90；ESIMSCACLDFORC22H22FN3O4S2MH4761108，FOUND4761116ERROR16PPM，上述分析结果说明得到目的化合物。0056SZ04161HNMR400MHZ，DMSOD6085D，J60HZ，3H，088D，J63HZ，3H，144162M，3H，237S，3H，462476M，1H，740D，J81HZ，2H，758S，4H，762S，1H，781D，J84HZ，2H，996D，J70HZ，1H13CNMR75MHZ，DMSOD62112C，229，245，404，567，12742C，1287，1292，12932C，12962C，13112C，1。
38、329，1343，1363，1443，1703，1737，1792；ESIMSCACLDFORC23H24CLN3O4S2MH5060970，FOUND5060976ERROR11PPM，上述分析结果说明得到目的化合物。0057SZ04171HNMR400MHZ，DMSOD6079D，J68HZ，3H，082D，J68HZ，3H，204213M，1H，237S，3H，456463M，1H，741D，J80HZ，2H，758S，4H，761S，1H，782D，J84HZ，2H，987D，J78HZ，1H；13CNMR100MHZ，DMSOD6176，187，212，306，632，12762C，。
39、1286，12933C，12962C，13112C，1329，1342，1362，1445，1693，1743，1793；ESIMSCACLDFORC22H22CLN3O4S2MH4920813，FOUND4920819ERROR12PPM，上述分析结果说明得到说明书CN102058585ACN102058587A9/10页12目的化合物。0058SZ05231HNMR300MHZ，DMSOD6240S，3H，281DD，J99，141HZ，1H，313DD，J42，141HZ，1H，485498M，1H，716730M，6H，742D，J84HZ，2H，748751M，2H，757S，1H，。
40、760S，1H，782D，J84HZ，2H，1002D，J77HZ，1H；13CNMR100MHZ，DMSOD6212，367，595，1269，12752C，1276，1283，12842C，12923C，1293，1294，12972C，1300，1311，1339，1359，1362，1444，1691，1738，1790；ESIMSCACLDFORC26H22CLN3O4S2MH5400813，FOUND5400836ERROR42PPM，上述分析结果说明得到目的化合物。0059SZ05191HNMR400MHZ，DMSOD6085D，J61HZ，3H，089D，J62HZ，3H，14。
41、9166M，3H，237S，3H，465479M，1H，738746M，2H，749758M，3H，760767M，2H，779790M，2H，991D，J70HZ，1H；13CNMR75MHZ，DMSOD62122C，229，245，292，567，12752C，1276，1285，1292，1294，12972C，1301，1311，1340，13622C，1444，1703，1738，1791；ESIMSCACLDFORC23H24CLN3O4S2MH5060970，FOUND5060972ERROR03PPM，上述分析结果说明得到目的化合物。0060SZ05211HNMR300MHZ，。
42、DMSOD6078D，J66HZ，3H，082D，J69HZ，3H，203215M，1H，237S，3H，454463M，1H，741D，J75HZ，2H，748758M，3H，762M，2H，781D，J78HZ，2H，986D，J69HZ，1H；13CNMR100MHZ，DMSOD6176，188，212，307，633，12772C，1278，1284，1292，1295，12972C，1304，1312，1340，1362，1363，1446，1694，1744，1793；ESIMSCACLDFORC22H22CLN3O4S2MH4920813，FOUND4920820ERROR14P。
43、PM，上述分析结果说明得到目的化合物。0061SZ09091HNMR300MHZ，DMSOD6240S，3H，282DD，J99，138HZ，1H，313DD，J45，144HZ，1H，489499M，1H，715727M，5H，740762M，6H，775S，1H，782D，J84HZ，2H，1008D，J75HZ，1H；13CNMR100MHZ，DMSOD6212，367，595，1253，1270，12762C，1281，12842C，1287，12922C，12972C，1303，1313，1320，1321，1342，1358，1361，1446，1691，1741，1787；ESI。
44、MSCACLDFORC26H22CLN3O4S2MH5400813，FOUND5400824ERROR20PPM，上述分析结果说明得到目的化合物。0062SZ07061HNMR400MHZ，DMSOD6086D，J58HZ，3H，089D，J58HZ，3H，147163M，3H，238S，3H，467478M，1H，739761M，6H，775784M，3H，997D，J75HZ，1H；13CNMR75MHZ，DMSOD62112C，227，244，401，567，1252，12742C，1279，1285，12952C，1301，1311，1320，1321，1341，1362，1443，1。
45、701，1739，1786；ESIMSCACLDFORC23H24CLN3O4S2MH5060970，FOUND5060955ERROR29PPM，上述分析结果说明得到目的化合物。0063实施例二0064分析罗丹宁衍生物化合物SZ0104作为抗肿瘤化合物抑制肿瘤的效果00651、首先通过荧光偏振法测定化合物和靶蛋白的结合常数KI，荧光偏振可以表征小分子和结合蛋白的紧密程度，在药物体外筛选中广泛应用，使基因重组的BCL2蛋白说明书CN102058585ACN102058587A10/10页1310M与底物FLUBAK多肽在室温下混合，形成蛋白多肽的复合物，然后加入各种浓度的小分子药物罗丹宁衍生物。
46、，小分子化合物与蛋白结合后会置换出底物多肽，并引起溶液荧光偏振信号的改变，此变量由TECANGENIOSPRO多功能酶标仪96孔板检测。0066如图3所示，化合物SZ0104对BCL2的KI为067MOL/L，与已知的具有抗肿瘤活性的天然产物棉酚GOSSYPOL，KI101MOL/L比较，该罗丹宁衍生物和靶点酶的结合常数小，说明其结合能力更高。00672、进一步地，对结合常数小的化合物，通过MTT方法测定化合物的IC50MTT比色试验是一种检测细胞存活和生长的方法，广泛用于抗肿瘤药物的筛选，细胞毒性试验等。如MDA231细胞体外抑制实验使用MTT法，具体方法如下取对数生长期的肿瘤细胞90L孔接。
47、种于96孔微量培养板内，培养24小时后加入药液10L/孔，每个浓度均为三个复孔。另设无细胞调零孔。肿瘤在37、5CO2条件下培养48小时后，加入MTT购自SIGMA液5MG/ML，用生理盐水配制20L/孔；继续培养48小时后，加入三联液10SDS5异丁醇001NHCL50L/孔，于CO2培养箱中过夜。然后用酶标仪测OD570值。按照下列公式计算被测物对癌细胞生长的抑制率0068肿瘤抑制率对照组OD值给药组OD值/对照组OD值1000069将化合物SZ0104加入到MDA231细胞系中培养48小时后，细胞活性用上述MTT法评价，该化合物的IC50650MOL/L，结果如图4所示。00703、分析。
48、实施例一所得化合物的体内抗肿瘤效果首先培养乳腺癌细胞系MDA231，按200L/只含有1107个细胞接种于小鼠右腋皮下。接种五天后，瘤块形成一定体积后，每日一次腹腔给药。实验期间每日一次测定肿瘤长径A及与之相垂直的短径B，按公式1/2AB2计算瘤块体积，称量体重，并观测动物存活时间。结果标明，本发明中的化合物均有不同程度抑制肿瘤生长的作用。0071例如用50MG/KG和100MG/KG的化合物SZ0104腹腔注射裸鼠后，得到肿瘤的生长被抑制的曲线；如图5所示，在50MG/KG低剂量下，12天时肿瘤生长由空白组的856立方毫米降低到287立方毫米，下降到335；100MG/KG浓度下，肿瘤生长由空白对照组的856立方毫米降低到209立方毫米，下降到244。说明书CN102058585ACN102058587A1/3页14图1图2说明书附图CN102058585ACN102058587A2/3页15图3图4说明书附图CN102058585ACN102058587A3/3页16图5说明书附图CN102058585A。