噻吩并嘧啶类 发明背景 本发明的目的是发现具有有价值的性质的新化合物，特别是能用于制备药物的化合物。 本发明涉及化合物和化合物的用途，其中激酶、特别是 TGF-β 受体激酶对信号 转导的抑制、调节和 / 或调控发挥作用，本发明还涉及包含这些化合物的药物组合物和 这些化合物用于治疗激酶诱导的疾病的用途。
转化生长因子 β 是 TGF-β 超家族 ( 一族高度保守的多效生长因子 ) 的原型， 其在胚胎发育和成年生物中发挥重要的功能。 在哺乳动物中，已经鉴定了 TGF-β 的三 种同工型 (TGFβ1、2 和 3)，TGF-β1 是最常见的同工型 (Kingsley(1994)Genes Dev 8 ： 133-146)。 TGF-β3 例如仅在间质细胞中被表达，而 TGF-β1 见于间质细胞和上皮细胞 中。 TGF-β 作为前蛋白原被合成并以无活性形式被释放到细胞外基质 (Derynck(1985) Nature 316 ：701-705 ；Bottinger(1996)PNAS 93 ：5877-5882)。 除 了 被 裂 解 开 的 原 区 (proregion)( 其也被称为潜性相关肽 (latency associated pepetide， LAP)，保持与成熟区的 联系 ) 之外，潜性 TGF-β 结合蛋白的 4 种同工型之一 (LTBP 1-4) 也可与 TGF-β 结合 (Gentry(1988)Mol Cell Biol 8 ：4162-4168， Munger(1997)Kindey Int 51 ：1376-1382)。 对于 TGF-β 的生物学作用的出现而言必需的无活性复合物的活化还没有被完全阐明。 然而，蛋白酶解加工、例如纤溶酶、血浆转谷氨酰胺酶或者血小板反应蛋白的蛋白酶解 加工当然是必需的 (Munger(1997)Kindey lnt 51 ：1376-1382)。 活化的配体 TGF-β 通 过膜上的三种 TGF-β 受体介导它的生物学作用，所述三种 TGF-β 受体是被广泛表 达的 I 型和 II 型受体以及 III 型受体 β 聚糖和内皮糖蛋白，后者仅在内皮细胞中被表 达 (Gougos(1990)J Biol Chem 264 ：8361-8364， Loeps-Casillas(1994)J Cell Biol 124 ： 557-568)。 两种 III 型 TGF-β 受体都缺少帮助信号传递到细胞中的细胞内激酶结构 域。 由于 III 型 TGF-β 受体以高亲和性与所有三种 TGF-β 同工型结合且 II 型 TGF-β 受体对于与 III 型受体结合的配体也具有较高的亲和性，生物学功能被认为在于 I 型和 II 型 TGF-β 受体的配体的可利用性的调节 (Lastres(1996)J Cell Biol 133 ：1109-1121 ； Lopes-Casillas(1993)Cell 73 ：1435-1344)。在胞质区域中，结构密切相关的 I 型和 II 型受 体具有负责信号传递的丝氨酸 / 苏氨酸激酶结构域。 II 型 TGF-β 受体与 TGF-β 结合， 之后 I 型 TGF-β 受体向该信号 - 传递复合物募集。 II 型受体的丝氨酸 / 苏氨酸激酶结构域 是组成型活性的，能在 I 型受体的所谓 GS 结构域中磷酸化该复合物中的丝氨酰残基。 这 种磷酸化活化 I 型受体的激酶，此刻它本身能磷酸化细胞内信号介质 -SMAD 蛋白，从而 启动细胞内信号传递 ( 总结于 Derynck(1997)Biochim Biophys Acta 1333 ：F105-F150)。
SMAD 家族的蛋白用作所有 TGF-β 家族受体激酶的底物。 迄今为止，已经 鉴 定 了 8 种 SMAD 蛋 白， 其 被 分 成 3 组 ：(1) 受 体 相 关 SMAD(R-SMAD) 是 TGF-β 受体激酶的直接底物 (SMAD 1、2、3、5、8) ；(2)co-SMAD，其在信号级联过程中与 R-SMAD 结合 (SMAD4) ；和 (3) 抑制性 SMAD(SMAD6、7)，其抑制上述 SMAD 蛋白 的活性。 在各种不同的 R-SMAD 中， SMAD2 和 SMAD3 是 TGF-β 特异性信号介质。
因此，在 TGF-β 信号级联中，SMAD2/SMAD3 被 I 型 TGF-β 受体磷酸化，使得它们与 SMAD4 结合。 得到的 SMAD2/SMAD3 与 SMAD4 的复合物此刻能被转移到细胞核中， 在那里它能直接或者通过其它蛋白启动 TGF-β 调节的基因的转录 ( 总结于 ltoh(2000)Eur J Biochern 267 ：6954-6967 ；Shi(2003)Cell 113 ：685-700 中 )。
TGF-β 的 功 能 谱 是 广 泛 的， 取 决 于 细 胞 类 型 和 分 化 状 态 (Roberts(1990) Handbook of Experimental Pharmacology ：419-472)。 被 TGF-β 影 响 的 细 胞 功 能 包 括 ：细胞凋亡、增殖、分化、运动和细胞粘附。 因此， TGF-β 在非常多种生物学过 程中发挥重要的作用。 在胚胎发育过程中，它在形态发生的位点、特别是在具有上 皮 - 间质相互作用的区域被表达，在那里它诱导重要的分化过程 (Pelton(4991)J Cell Biol 115 ：1091-1105)。 TGF-β 在自我更新和维持干细胞的未分化状态中发挥关键 作 用 (Mishra(2005)Science310 ：68-71)。 此 外， TGF-β 还 在 免 疫 系 统 的 调 节 中 发 挥重要的功能。 由于它尤其抑制淋巴细胞的增殖和限制组织巨噬细胞的活性，所以它 一般具有免疫抑制作用。 因此， TGF-β 使得炎性反应再消退，从而防止过度的免疫 反 应 (Bogdan(1993)Ann NY Acad Sci 685 ：713-739， 总 结 于 Letterio(1998)Annu Rev Immunol 16 ：137-461 中 )。 TGF-β 的 另 一 个 功 能 是 调 节 细 胞 增 殖。 TGF-β 抑 制 内皮、上皮和造血来源的细胞的生长，但促进间质来源的细胞的生长 (Tucker(1984) Science 226 ：705-707， Shipley(1986)CancerRes 46 ：2068-2071， Shipley(1985)PNAS 82 ：4147-4151)。 TGF-β 的 另 一 个 重 要 的 功 能 是 调 节 细 胞 粘 附 和 细 胞 - 细 胞 相 互 作用。 TGF-β 通过诱导细胞外基质的蛋白 ( 例如纤连蛋白和胶原蛋白 ) 促进细胞 外基质的积累。 此外， TGF-β 减少基质 - 降解金属蛋白酶和金属蛋白酶抑制剂的 表 达 (Roberts(1990)Ann NV Acad Sci 580 ：225-232 ；Ignotn(1986)J Biol Chem 261 ： 4337-4345 ；Overall(1989)J Biol Chem 264 ：1860-1869) ；Edwards(1987)EMBO J 6 ： 1899-1904)。
TGF-β 的作用的光谱说明 TGF-β 在许多生理情况例如伤口愈合中和在病理过 程例如癌症和纤维化中起重要的作用。 TGF-β 是伤口愈合中的关键生长因子之一 ( 总结 于 O′ Kane(1997)Int J Biochem Cell Biol 29 ：79-89 中 )。 在肉芽形成阶段中， TGF-β 在损伤部位处从血小板中被释放。 然后 TGF-β 调节它自己在巨噬细胞中的产生，诱导 其它生长因子的分泌，例如单核细胞的生长因子分泌。 在伤口愈合过程中，最重要的功 能包括刺激炎性细胞趋化、合成细胞外基质和调节伤口愈合过程所涉及的所有重要细胞 类型的增殖、分化和基因表达。
在病理条件下，这些 TGF-β 介导的作用、特别是调节细胞外基质 (ECM) 的产 生可导致皮肤的纤维化和疤痕 (Border(1994)N Engl J Med 331 ：1286-1292)。
对于纤维化疾病、糖尿病性肾病和肾小球肾炎，已经证明 TGF-β 促进肾脏 细胞过度生长和细胞外基质的病理性蓄积。 通过用抗 TGF-β 抗体处理阻断 TGF-β 信号传导途径可防止肾小球膜基质的扩张、肾功能的进行性降低和减轻糖尿病动物的 已 确 定 的 糖 尿 病 性 肾 小 球 病 损 伤 (Border(1990)346 ：371-374， Yu(2004)Kindney Int 66 ：1774-1784， Fukasawah(2004)Kindney Int 65 ：63-74， Sharma(1996)Diabetes 45 ： 522-530)。
TGF-β 在肝纤维化中也起重要作用。 TGF-β 刺激对于肝纤维化的发展必需的肝星形细胞 ( 肝硬化的发展过程中细胞外基质的主要生产者 ) 的活化。 此处也已经证 明， TGF-β 信号传导途径的阻断减少实验模型中的纤维化 (Yata(2002)Hepatology 35 ： 1022-1030 ；Arias(2003)BMCGastroenterol 3 ：29)。 TGF-β 在癌症的形成中也起关键作 用 ( 总 结 于 Derynck(2001)Nature Genetics ：29 ：117-129 ；Elliott(2005)J Clin Onc 23 ： 2078-2093 中 )。 在癌症发展的早期阶段， TGF-β 对抗癌症的形成。 这种肿瘤抑制作 用主要基于 TGF-β 抑制上皮细胞分裂的能力。 相反，TGF-β 在晚期肿瘤阶段促进癌症 生长和转移灶的形成。 这可归因于大多数上皮性肿瘤对 TGF-β 的生长抑制作用产生抗 性，TGF-β 同时通过其它机制支持癌症细胞的生长。 这些机制包括促进血管生成、支持 肿瘤细胞避免免疫系统的控制功能的免疫抑制作用 ( 免疫监视 ) 以及促进转移灶的侵袭和 形成。 肿瘤细胞的侵袭表型的形成对于转移灶的形成而言是首要的必要条件。 TGF-β 通过它的调节细胞粘附、运动和细胞外基质形成的能力促进该过程。 而且， TGF-β 诱 导从细胞的上皮表型到侵袭间质表型的转化 ( 上皮间质转化＝ EMT)。 一些研究也证明 了 TGF-β 在促进癌症生长中所发挥的重要作用，所述研究表明了强 TGF-β 表达与预 后不良之间的相关性。 尤其是在患有前列腺癌、乳腺癌、肠癌和肺癌的患者中已发现 TGF-β 水平增加 ( (1998)Prostate 37 ：19-29 ；Hasegawa(2001)Cancer 91 ： 964-971 ；Friedman(1995)， Cancer Epidemiol Biomarkers Prev.4 ：549-54)。 由于上述 TGF-β 的癌症 - 促进作用，抑制 TGF-β 信号传导途径 ( 例如通过 抑制 TGF-βI 型受体来抑制 TGF-β 信号传导途径 ) 是可能的治疗观念。 在大量的临 床前试验中已经证明阻断 TGF-β 信号传导途径确实抑制癌症生长。 因此，用可溶的 TGF-βII 型受体进行治疗减少转基因小鼠中随着时间的推移发展成侵袭性乳腺癌的转移 灶 的 形 成 (Muraoka(2002)J ClinInvest 109 ：1551-1559， Yang(2002)J Clin Invest 109 ： 1607-1615)。
表 达 有 缺 陷 的 TGF-βII 型 受 体 的 肿 瘤 细 胞 系 显 示 肿 瘤 和 转 移 灶 生 长 减 少 (Oft(I998)Curr Biol 8 ：1243-1252， McEachern(2001)Int J Cancer 91 ：76-82， Yin(1999) Jclin Invest 103 ：197-206)。
“特征在于 TGF-β 活性增加” 的情况包括其中 TGF-β 合成被刺激以至于 TGF-β 以增加的水平存在或者其中潜性 TGF-β 蛋白被不利地活化或被转化成活性 TGF-β 蛋白或者其中 TGF-β 受体被上调或者其中 TGF-β 蛋白对疾病部位的细胞或细 胞外基质表现出结合增强的那些。 因此，在各种情况中， “活性增加” 指其中 TGF-β 的生物活性不期望地高的任何情况，不管原因是什么。
许多疾病与 TGF-β1 过量产生有关。 细胞内 TGF-β 信号传导途径的抑制剂对 纤维增殖性疾病而言是合适的治疗。 具体而言，纤维增殖性疾病包括与 TGF-β 活性失 调有关的肾障碍和过度纤维化，包括肾小球肾炎 (GN)，如肾小球膜增殖性 GN、免疫性 GN 和新月体性 GN。 其它肾病症包括糖尿病性肾病、肾间质性纤维化和接受环孢菌素的 移植患者的肾纤维化、以及 HIV- 相关性肾病。 胶原血管障碍包括进行性系统性硬化病、 多肌炎、硬化性皮炎、皮肌炎、嗜酸细胞性筋膜炎 (eosinophilic fasciitis)、硬斑病或与出 现雷诺综合征 (Raynaud’s syndrome) 有关的那些。 过度的 TGF-β 活性导致的肺纤维化 包括成人型呼吸窘迫综合征、特发性肺纤维化和经常与自身免疫性障碍 ( 如系统性红斑 狼疮和硬化性皮炎 )、化学接触或变态反应有关的间质性肺纤维化。另一种与纤维增殖特
征有关的自身免疫性障碍是类风湿性关节炎。
与纤维增殖性病症有关的眼病包括伴有增殖性玻璃体视网膜病变的视网膜复置 术、具有眼内晶状体植入的白内障摘除术和青光眼滤过术后，并且与 TGF-β1 过度产生 有关。
可以将与 TGF-β1 过度产生有关的纤维化疾病分成慢性病症如肾、肺和肝的纤 维化，以及更多的是急性病症如皮肤瘢痕形成和再狭窄 (Chamberlain， J.Cardiovascular Drug Reviews，19(4) ：329-344)。 如在患有侵袭性脑肿瘤或乳腺肿瘤的患者中看到的， 肿瘤细胞的 TGF-β1 合成和分泌也能导致免疫抑制 (Arteaga 等人 (I993)J.Clin.Invest.92 ： 2569-2576)。 小鼠中利什曼原虫感染的过程被 TGF-β1 极大地改变 (Barral-Netto 等人 (1992)Science 257 ：545-547)。 TGF-β1 使疾病加重，而 TGF-β1 抗体阻碍遗传上易 感性小鼠的疾病的进展。 施用 TGF-β1 后遗传上有抗性的小鼠变得对利什曼原虫感染易 感。
对细胞外基质沉积的深远影响已有综述 (Rocco 和 Ziyadeh(1991)，Contemporary Issues in Nephrology v.23， Hormones， autocoids and thekidney.Jay Stein 编 辑， Churchill Livingston， New Vork 第 391-410 页 ；Roberts 等 人 (1988)Rec.Prog.Hormone Res.44 ： 157-197)，包括刺激细胞外基质组分的合成和抑制细胞外基质组分的降解。 由于肾小球 的结构和过滤性质在很大程度上由肾小球膜决定，因此 TGF-β1 对肾具有深远影响不足 为奇。 增殖性肾小球肾炎 (Border 等人 (1990)Kidney Int.37 ：689-695) 和糖尿病性肾病 (Mauer 等人 (1984)J.Clin.Invest.74 ：1143-1155) 中肾小球膜基质的蓄积是所述疾病的清 楚且显著的病理学特征。 在人糖尿病性肾小球硬化 ( 晚期神经病 ) 中 TGF-β1 水平升 高 (Vamamolo 等人 (1993)Proc.Natl.Acad.Sci.90 ：1814-1818)。 TGF-β1 在许多动物模 型的肾纤维化的发生中是重要的介质 (Phan 等人 (1990)Kidney Int.37 ：426 ；Okuda 等人 (1990)J.Clin.Invest.86 ：453)。 已经用针对 TGF-β1 的抗血清 (Border 等人 (1990)Nature 346 ：371) 以及用能与 TGF-β1 结合的细胞外基质蛋白饰胶蛋白聚糖 (Border 等人 (1992) Nature 360 ：361-363) 在大鼠中证明了实验诱导的肾小球肾炎的抑制。
过量的 TGF-β1 导致皮肤瘢痕组织形成。 被注射到大鼠的愈合伤口边缘的中和 TGF-β1 抗体已经显示出对瘢痕形成的抑制，但不干扰伤口愈合速度或伤口的张力强度 (Shah 等人 (1992)Lancet 339 ：213-214)。 同时血管生成减少、伤口处巨噬细胞和单核细 胞数量减少、瘢痕组织中排列紊乱的胶原纤维沉积的数量减少。
TGF-β1 可能是由气囊血管成形术后动脉中平滑肌细胞增殖和细胞外基质的沉 积引起的动脉壁进行性变厚中的因子。 再狭窄的动脉的直径可以被这种增厚减小 90％， 由于大多数直径减小是由于细胞外基质而不是平滑肌细胞造成的，因此仅通过减少过度 的细胞外基质沉积使这些血管再打开至 50％是可能的。 在用 TGF-β1 基因体内转染的 未受损的猪动脉中，基因表达与细胞外基质合成和增生有关 (Nabel 等人 (1993)Proc.Natl. Acad.Sci USA 90 ：10759-10763)。 TGF-β1 诱导的增生不象 PDGF-BB 所诱导的增生 那样广泛，但是使用 TGF-β1 转染子细胞外基质更广泛。 在这种基因转移猪模型中， 细胞外基质沉积与 FGF-1(FGF 的分泌形式 ) 诱导的增生无关 (Nabel(1993)Nature 362 ： 844-846)。
存在各种不同类型的癌症，其中肿瘤产生的 TGF-β1 可能是有害的。 用表达小鼠 TGF-β1 的载体转染后， MATLyLu 大鼠前列腺癌细胞 (Steiner 和 Barrack(1992) Mol.Endocrinol 6 ：15-25) 和 MCF-7 人乳腺癌细胞 (Arteaga 等人 (1993)Cell Growth and Differ.4 ：193-201) 变得更具致瘤性和转移性。 TGF-β1 已经被与人前列腺癌和晚期肠癌 中的血管生成、转移和预后不良相关联 (Wikstrom， P. 等人 (1988)Prostate 337 ；19-29 ； Saito， H. 等 人 (1999)Cancer 86 ：1455-1462)。 在 乳 腺 癌 中， 预 后 不 良 与 TGF-β 升 高 有 关 (Dickson 等 人 (1987)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 84 ：837-841 ；Kasid 等 人 (1987) Cancer Res.47 ：5733-5738 ；Daly 等 人 (1990)J.Cell Biochem.43 ：199-211 ；Barreltt-Lee 等人 (1990)Br.J.Cancer 61 ：612-617 ；King 等人 (1989)J.Steroid Biochem.34 ：133-138 ； Welch 等 人 (1990)Proc.Natl.Acad.Sci USA 87 ：7678-7682 ；Walker 等 人 (1992)Eur. J.Cancer 238 ：641-644)， 他 莫 昔 芬 治 疗 对 TGF-β1 的 诱 导 (Butta 等 人 (1992)Cancer Res.52 ：4261-4264) 已经被与他莫昔芬治疗乳腺癌失败相关联 (Thompson 等人 (1991) Br.J.Cancer 63 ：609-614)。 抗 TGF-β1 抗体抑制无胸腺小鼠中 MDA-231 人乳腺癌细胞 的生长 (Arteaga 等人 (1993)J.Clin.Invest.92 ：2569-2576)，该治疗与脾中天然杀伤细胞 活性的增加有关。 在裸鼠中用潜性 TGF-β1 转染的 CHO 细胞也显示出 NK 活性下降和 肿瘤生长增加 (Wallick 等人 (1990)J.Exp.Med.172 ：177-1784)。 因此，乳腺肿瘤分泌的 TGF-β 可引起内分泌免疫抑制。 对于晚期乳腺癌患者而言，TGF-β1 的高血浆浓度表明 预后不良 (Anscher 等人 (1993)N.Engl.J.Med.328 ：1592-1598)。 在高剂量化疗和自体骨 髓移植之前具有高循环 TGF-β 的患者具有高的肝静脉阻塞性疾病 ( 所有患者中 15-50％ 的死亡率高达 50％ ) 和特发性间质性肺炎 ( 所有患者中 40-60％ ) 的风险。 这些发现表 明 1)TGF-β1 血浆水平升高可用于鉴别处于风险中的患者和 2)TGF-β1 的减少可降低这 些用于乳腺癌患者的常规治疗的发病率和死亡率。
许多恶性肿瘤细胞分泌转化生长因子 (TGF-β)- 一种强免疫抑制剂，这表明 TGF-β 产生可能代表一种重要的肿瘤逃避宿主免疫监视机制。 在荷瘤宿主中建立具有 中断的 TGF-β 信号传导途径的白细胞亚群提供了一种用于癌症免疫治疗的有效措施。 T 细胞中具有中断的 TGF-β 信号传导途径的转基因动物模型能根除通常致命的过度表达 TGF-β 的淋巴瘤 EL4(Gorelik 和 Flavell， (2001)Nature Medicine 7(10) ：1118-1112)。 肿瘤细胞中 TGF-β 分泌的下调导致宿主中免疫原性的恢复，而 T 细胞对 TGF-β 的不敏 感导致分化和自身免疫加速，其中的因素可能被需要以便在耐受宿主中对抗自体抗原表 达肿瘤。 根据他们的 CD4/CD8 T 细胞计数，TGF-β 的免疫抑制作用也参与到免疫应答 比预期低的 HIV 患者亚组中 (Garba 等人， J.Immunology(2002)168 ：2247-2254)。 中和 TGF-β 的抗体能逆转培养物中的该作用，这表明 TGF-β 信号传导途径抑制剂可能适合 于逆转这种 HIV 患者亚组中存在的免疫抑制。
在癌发生的最早阶段， TGF-β1 可作为强肿瘤抑制剂起作用并且可介导一些 化学预防剂的作用。 在恶性肿瘤的发生和进展过程中的某个点，肿瘤细胞似乎逃离 TGF-β- 依赖性生长抑制，同时在微环境中出现生物活性的 TGF-β。 已经在角质形成细 胞的过度表达 TGF-β 的转基因系统中最清楚地阐明了 TGF-β 的肿瘤抑制 / 肿瘤促进双 重作用。 尽管转基因系统对良性皮肤损伤的形成更有抵抗力，但是转基因系统中转移性 转化的速度大大增加 (Cui 等人，(1996)Cell 86(4) ：531-42)。 原发性肿瘤中恶性肿瘤细 胞的 TGF-β1 产生似乎随着肿瘤进展的阶段推进而增加。 许多主要的上皮癌研究表明人癌症的 TGF-β 产生增加在肿瘤进展过程中作为较迟的事件出现。而且，这种肿瘤相关性 TGF-β 使肿瘤细胞具有选择性优势并加速肿瘤进展。 TGF-β 对细胞 - 细胞和细胞 - 间 质相互作用的影响导致更大的侵袭和转移倾向。肿瘤相关性 TGF-β 可使得肿瘤细胞逃避 免疫监视，因为它是活化淋巴细胞克隆扩增的强抑制剂。还已经证明 TGF-β 抑制血管抑 素的产生。 癌症治疗方式如放射治疗和化学治疗诱导肿瘤中活化 TGF-β 的产生，从而 选择对 TGF-β 生长抑制作用具有抗性的恶性肿瘤细胞向外生长。 因此，这些抗癌治疗 增加风险并且促进具有增加的生长和侵袭的肿瘤的发展。 在这种情况中，靶向于 TGF-β 介导的信号转导的物质可能是非常有效的治疗策略。已经证明肿瘤细胞对 TGF-β 的抗性 否定了许多放射治疗和化学治疗的细胞毒性作用，间质中 TGF-β 的治疗依赖性活化甚至 可能是有害的，因为它使微环境更有助于肿瘤进展并促成导致纤维化的组织损伤。 开发 TGF-β 信号转导抑制剂可能有益于单独使用的和与其它疗法组合使用的晚期癌症治疗。
所述化合物适合用于通过给患者施用化合物来抑制需要它们的患者的 TGF-β 来 治 疗 癌 症 和 其 它 受 TGF-β 影 响 的 病 症。 TGF-β 还 适 合 用 于 对 抗 动 脉 粥 样 硬 化 (T.A.McCaffrey ：TGF-βs and TGF-β Receptors inAtherosclerosis ：Cytokine and Growth Factor Reviews 2000，11，103-114) 和 阿 尔 茨 海 默 病 (Masliah， E. ；Ho， G. ； Wyss-Coray，T. ：Functional Role ofTGF-βin Alzheimer′ s Disease Microvascular Injury ： Lessons fromTransgenic Mice ：Neurochemistry International 2001，39，393-400)。
已经发现本发明的化合物和其盐具有非常有价值的药理学性质，同时耐受性良 好。 具体而言，它们显示出 TGF-β 受体 I 激酶 - 抑制性质。
本发明的化合物优选表现出有利的生物学活性，能容易地在基于酶的测定例如 本文所述的测定中证明这种生物学活性。 在这类基于酶的测定中，本发明的化合物优选 表现出并引起抑制作用，该抑制作用通常是由在合适范围内、优选在微摩尔范围内并且 更优选在纳摩尔范围内的 IC50 值证明的。
如本文所讨论的，这些信号传导途径与多种疾病相关。 因此，本发明的化合物 通过与一种或多种所述信号传导途径相互作用而用于预防和 / 或治疗依赖于所述信号传 导途径的疾病。
因此，本发明涉及作为本文所述的信号传导途径的促进剂或抑制剂、优选作为 抑制剂的本发明的化合物。 因此，本发明优选涉及作为 TGFβ 信号传导途径的促进剂或 抑制剂、优选作为抑制剂的本发明的化合物。
本发明还涉及一种或多种本发明的化合物在治疗和 / 或预防由 TGFβ 活性增加 引起、介导和 / 或传播的疾病、优选本文所述的疾病中的用途。
因此，本发明涉及作为治疗和 / 或预防所述疾病的药物和 / 或药物活性化合物的 本发明的化合物和本发明的化合物在制备用于治疗和 / 或预防所述疾病的药物中的用途 以及用于治疗所述疾病的方法，所述方法包括给需要这类施用的患者施用一种或多种本 发明的化合物。
主体或患者可以属于任何哺乳动物种属，例如灵长类动物，特别是人 ；啮齿类 动物，包括小鼠、大鼠和仓鼠 ；兔 ；马、牛、狗、猫等。 动物模型对实验研究而言是重 要的，其为人类疾病的治疗提供了模型。
可以用体外测试来测定特定细胞对用本发明的化合物进行的治疗的敏感性。 通常将细胞培养物与各种不同浓度的本发明的化合物混合足以使活性剂诱导细胞死亡或抑 制迁移的一段时间，通常为约 1 小时至 1 周。 可以用来自活组织检查样品的培养的细胞 来进行体外测试。 然后对处理后存活的细胞进行计数。
剂量根据所用的特定化合物、特定疾病、患者状态等变化。 治疗剂量通常十分 充分地减少靶组织中不期望的细胞群，同时维持患者的生存力。 一般而言，治疗持续至 已经出现细胞负荷量的大幅度降低，例如细胞负荷量降低至少约 50％，并且可以持续至 体内基本上再也检测不到不期望的细胞。
对于信号转导途径的鉴定以及各种信号转导途径之间的相互作用的检测而言， 许多科学家已经开发了适合的模型或模型系统，例如细胞培养模型 ( 例如 Khwaja 等人， EMBO，1997，16，2783-93) 和转基因动物模型 ( 例如 White 等人， Oncogene，2001， 20，7064-7072)。 为了确定信号转导级联中的某些阶段，可以理由相互作用的化合物以 调控信号 ( 例如 Stephens 等人， Biochemical J.，2000，351，95-105)。 本发明的化合物 也能在动物和 / 或细胞培养模型中或在本申请中所提及的临床疾病中用作检测激酶依赖 性信号转导途径的试剂。
激 酶 活 性 的 测 定 是 本 领 域 技 术 人 员 公 知 的 一 种 技 术。 文 献 ( 例 如 Campos-González， R. 和 Glenney， Jr.， J.R.1992， J.Biol.Chem.267，第 14535 页 ) 描述了 使用底物例如组蛋白 ( 例如 Alessi 等人， FEBS Lett.1996，399，3，第 333-338 页 ) 或碱 性髓磷脂蛋白测定激酶活性的通用试验系统。 对于激酶抑制剂的鉴定而言，有多种测定系统可用。 在闪烁亲近测定法法 (Sorg 等人， J.of.Biomolecular Screening，2002，7，11-19) 和快速板测定法中，用 γATP 测 量作为底物的蛋白或肽的放射性磷酸化。 在存在抑制性化合物的情况下，可检测到放射 性信号降低或者根本检测不到放射性信号。 此外，均匀的时间分辨荧光共振能量转移 (HTR-FRET) 和荧光偏振 (FP) 技术也是适合的测定方法 (Sills 等人， J.of Biomolecular Screening，2002，191-214)。
其它非放射性 ELISA 测定方法使用特异性磷酸 - 抗体 ( 磷酸 -AB)。 该磷酸 -AB 仅与磷酸化底物结合。 可以使用过氧化物酶 - 轭合的抗 - 绵羊第二抗体通过化学发光来 检测这种结合 (Ross 等人，2002， Biochem.J.，即将出版，原稿 BJ20020786)。
现有技术
WO2007/084560 描述了用于抑制 TNF-α、 PDE4 和 B-RAF 的其它噻吩并嘧啶 发明概述 本发明涉及式 I 化合物 ：类。
其中
R1 是苯并呋喃基、苯并噻唑基、苯并噻吩基、咪唑并 [1，2a] 吡啶、喹啉基、异 喹啉基或呋喃基，其各自是未被取代的或者被 A 和 / 或 Hal 单 -、二 - 或三 - 取代，或者 是被 A 和 / 或 Hal 单 -、二 - 或三 - 取代的吡啶基，
R2 可 以 是 H、 Alk、 Het1、 Cyc、 AlkNH2、 AlkNHA、 AlkNAA’、 AlkOH、 AlkOA、 AlkCyc、 AlkHet1、 AlkOAlkOH、 AlkO(CH2)mNAA’、 AlkCHOH(CH2)m OH、 AlkO(CH2)mHet1、 AlkAr 或 AlkO(CH2)mAr，
X 可以是单键、 NH、 S 或 SO2，
Alk 可以是具有 1 至 6 个 C 原子的亚烷基，其中 1 至 4 个 H 原子可以被 F、Cl 和 / 或 Br 代替，
Cyc 可以是具有 3 至 7 个 C 原子的环烷基，其中 1 至 4 个 H 原子可以被 A、Hal、 OH 和 / 或 OA 代替，
Het1 可以是具有 1 至 4 个 N、O 和 / 或 S 原子的单环或二环的饱和的、不饱和的 或芳族的杂环，其可以被 A、 OH、 OA、 Hal、 SO2A 和 / 或＝ O( 羰基氧 ) 单 -、二 - 或 三 - 取代， Ar 可以是苯基，其是未被取代的或者被 A、 OH、 OA、 Hal、 SO2NH2、 SO2NA 和 / 或 SO2NAA’ 单 -、二 - 或三 - 取代，
A、A’可以各自彼此独立地是具有 1-10 个 C 原子的直链或支链烷基，其中 1、 2 或 3 个 CH2 基团可以彼此独立地被 -CH ＝ CH- 和 / 或 -C ≡ C- 基团代替和 / 或 1-5 个 H 原子可以被 F、 Cl 和 / 或 Br 代替，
Hal 可以是 F、 Cl、 Br 或 I，
m 可以是 1、2、3 或 4，
以及其可药用的衍生物、盐、溶剂合物、互变异构体和立体异构体，包括它们 所有比例的混合物。
本发明还涉及这些化合物的旋光活性形式 ( 立体异构体 )、对映体、外消旋物、 非对映体以及水合物和溶剂合物。 术语化合物的溶剂合物指的是由于惰性溶剂分子与化 合物之间的相互吸引力而形成的溶剂分子与化合物的加合物。 溶剂合物有例如单水合物 或二水合物或醇化物。
可药用的衍生物指的是例如本发明的化合物的盐，还有所谓的前药化合物。
前药衍生物指的是已经通过例如烷基或酰基、糖或寡肽修饰并且在生物体内迅 速裂解成本发明的有效化合物的本发明的化合物。 还包括本发明的化合物的生物可降解 的聚合物衍生物，例如在 Int.J.Pharm.115，61-67(1995) 中所述的那些。
表述 “有效量” 表示在组织、系统、动物或人中导致研究人员或医师所寻求或 期望的生物学或医学反应的药物或药物活性化合物的量。 此外，表述 “治疗有效量” 表 示与没有接受该量的相应个体相比具有下列结果的量 ：疾病、症状、病症、不适、障碍 或副作用的治疗得到改善、被治愈、被预防或被消除，或者还有疾病、不适或障碍的进 展被减少。 表述 “治疗有效量” 还包括有效增强正常生理学功能的量。
本发明还涉及本发明的化合物的混合物，例如两种非对映体的混合物，例如比 例为 1 ∶ 1、1 ∶ 2、1 ∶ 3、1 ∶ 4、1 ∶ 5、1 ∶ 10、1 ∶ 100 或 1 ∶ 1000 的两种非对映
体的混合物。 特别优选立体异构化合物的混合物。
本发明涉及式 I 的化合物及其盐和制备权利要求 1 至 7 的式 I 化合物及其可药用 的衍生物、溶剂合物、盐、互变异构体和立体异构体的方法，其特征在于 ：
为了制备式 I 化合物，将式 II 的化合物
其中 R1 具有式 I 中所示的含义， 与式 III 的化合物反应，
得到式 IV 的化合物，
将式 IV 的化合物与式 V 的化合物反应，
其中 X 和 R2 具有式 I 中所示的含义， 得到式 VI 的化合物，
其中 Z 是 OH， 任选将 OH 基团转化成反应性 OH 基团或将其用卤素代替， 将式 VI 的化合物与式 VII 的化合物反应，得到式 VIII 的化合物，其中 R1、 R2 和 X 具有式 I 中所示的含义，
然后将得到的式 VIII 的化合物环化，得到式 I 的化合物，
和/或
将式 I 的碱或酸转化成其盐之一。
对于所有出现一次以上的基团而言，它们的含义都是彼此独立的。
在上文和下文中，除非另有说明，否则基团 R1、 R2 和 X 具有式 I 所示的含义。
在一个优选的实施方案中， X 表示单键。
在第二个优选的实施方案中， X 表示 NH。
在第三个优选的实施方案中， X 表示 S。
在第四个优选的实施方案中， X 表示 SO2。
A、 A’ 彼此独立地表示烷基，其是直链 ( 线性 ) 或支链的，具有 1、2、3、 4、5、6、7、8、9 或 10 个 C 原子，其中 1、2 或 3 个 CH2 基团可以彼此独立地被 -CH ＝ CH- 和 / 或 -C ≡ C- 代替。 特别优选表示甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、 仲丁基或叔丁基，还表示戊基、1-、2- 或 3- 甲基丁基、1，1-、1，2- 或 2，2- 二甲基丙 基、1- 乙基丙基、己基、1-、2-、3- 或 4- 甲基戊基、1，1-、1，2-、1，3-、2，2-、 2，3- 或 3，3- 二甲基丁基、1- 或 2- 乙基丁基、1- 乙基 -1- 甲基丙基、1- 乙基 -2- 甲基 丙基、1，1，2- 或 1，2，2- 三甲基丙基。 还优选表示乙烯基、烯丙基、1- 丙烯 -1- 基、 1-、2- 或 3- 丁烯基、异丁烯基、1-、2-、3- 或 4- 戊烯基、2- 甲基 -1- 或 2- 丁烯基、 3- 甲基 -1- 丁烯基、1，3- 丁二烯基、2- 甲基 -1，3- 丁二烯基、2，3- 二甲基 -1，3- 丁 二烯基，还表示 1- 或 2- 丙炔基、1-、2- 或 3- 丁炔基或 3- 戊烯 -1- 炔基。
极特别优选地表示具有 1、2、3、4、5 或 6 个 C 原子的烷基，优选甲基、乙基、 丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、己基、三氟甲基、五氟乙基或 1，1，1- 三氟乙基，还优选氟甲基、二氟甲基或溴甲基。 独立于其它取代， Cyc 是环烷 基，优选表示环丙基、环丁基、环戊基、环己基或环庚基。 特别优选的是环丙基。
Alk 表示 C1-C10 亚烷基，优选亚甲基、亚乙基、亚丙基、亚丁基、亚戊基、亚 己基、亚庚基、亚辛基、亚壬基或亚癸基、亚异丙基、亚异丁基、亚仲丁基、1-、2- 或 3- 甲基亚丁基、1，1-、1，2- 或 2，2- 二甲基亚丙基、1- 乙基亚丙基、1-、2-、3- 或 4- 甲基 - 亚戊基、1，1-、1，2-、1，3-、2，2-、2，3- 或 3，3- 二甲基亚丁基、1- 或 2- 乙基亚丁基、1- 乙基 -2- 甲基亚丙基、1- 乙基 -2- 甲基亚丙基、1，1，2- 或 1，2， 2- 三甲基亚丙基。 优选的是 C1-C6 亚烷基，特别优选亚甲基、亚乙基、亚丙基、亚丁 基、亚戊基或亚己基。 另外优选的是 C1-C6 炔基，如甲炔基 (methynyl)、乙炔基、丁炔 基、戊炔基或己炔基。 特别优选的炔基是丙炔基。
Ar 表示例如苯基、邻 -、间 - 或对 - 甲苯基、邻 -、间 - 或对 - 乙基苯基、邻 -、 间 - 或对 - 丙基苯基、邻 -、间 - 或对 - 异丙基苯基、邻 -、间 - 或对 - 叔丁基苯基、 邻 -、间 - 或对 - 羟基苯基、邻 -、间 - 或对 - 甲氧基苯基、邻 -、间 - 或对 - 乙氧基苯 基、邻 -、间 - 或对 - 氟苯基、邻 -、间 - 或对 - 溴苯基、邻 -、间 - 或对 - 氯苯基、邻 -、 间 - 或对 - 磺酰氨基 (sulfonamido) 苯基、邻 -、间 - 或对 -(N- 甲基磺酰氨基 ) 苯基、 邻 -、间 - 或对 -(N，N- 二甲基磺酰氨基 ) 苯基、邻 -、间 - 或对 -(N- 乙基 -N- 甲基磺 酰氨基 ) 苯基、邻 -、间 - 或对 -(N， N- 二乙基 - 磺酰氨基 ) 苯基，还优选 2，3-、2， 4-、2，5-、2，6-、3，4- 或 3，5- 二氟苯基、2，3-、2，4-、2，5-、2，6-、3，4- 或 3，5- 二氯苯基、2，3-、2，4-、2，5-、2，6-、3，4- 或 3，5- 二溴苯基、2，3，4-、 2，3，5-、2，3，6-、2，4，6- 或 3，4，5- 三氯苯基、2，4，6- 三甲氧基苯基、2- 羟 基 -3，5- 二氯苯基、对 - 碘苯基、4- 氟 -3- 氯苯基、2- 氟 -4- 溴苯基、2，5- 二氟 -4- 溴 苯基、3- 溴 -6- 甲氧基苯基、3- 氯 -6- 甲氧基苯基或 2，5- 二甲基 -4- 氯苯基。
Ar 优选表示苯基，其是未被取代的或者被 A、OH、OA、Hal、SO2NH2、SO2NA 和 / 或 SO2NAA’ 单 -、二 - 或三 - 取代。 Ar 特别优选是苯基，其是未被取代的或者被 SO2NH2、 SO2NA 或 SO2NAA’ 单取代。
独立于其它取代，R1 表示例如 1-、2-、3-、4-、5-、6-、7- 或 8- 喹啉基或 - 异 喹啉基、2-、4-、5-、6- 或 7- 苯并噻唑基、苯并呋喃 -2-、3-、4-、5-、6- 或 7- 基、苯 并噻吩 -2-、3-、4-、5-、6- 或 7- 基、2-、3- 或 4- 呋喃基、咪唑并 [1，2-a] 吡啶 -2-、 3-、4-、5-、6- 或 7- 基或吡啶 -2-、3-、4- 或 5- 基，特别优选的是喹啉 -6- 基、苯并噻 唑 -2- 基、苯并呋喃 -2- 基、苯并噻吩 -2- 基、咪唑并 [1，2-a] 吡啶 -2- 基和呋喃 -2- 基。 特别优选 6- 甲基吡啶 -2- 基。
Het1 优选表示具有 1 至 2 个 N 和 / 或 O 原子的单环的饱和的或芳族的杂环，其 可以被 A、 OH、 OA、 Hal、 SO2A 和 / 或＝ O( 羰基氧 ) 单 - 或二 - 取代。
在另一个实施方案中， Het1 特别优选表示哌啶、哌嗪、吡咯烷、吗啉、呋喃、 四氢吡喃、吡啶、吡咯、吲哚、吲唑、异 唑或咪唑，其各自是未被取代的或者被 A、 OH、OA、Hal、SO2A 和 / 或＝ O( 羰基氧 ) 单 - 或二 - 取代，其中 A 优选表示甲基、乙 基、丙基、丁基、戊基、己基、异丙基或三氟甲基， Hal 优选表示 F、 Cl 或 Br， OA 优选 表示甲氧基、乙氧基或丙氧基， SO2A 中的 A 优选是甲基、乙基、丙基或丁基。
非常特别优选的是哌啶、哌嗪、吡咯烷、吗啉、呋喃、四氢吡喃、吲唑、异唑或咪唑，其各自是未被取代的或者被 A、 OH、 OA、 Hal、 SO2A 和 / 或＝ O( 羰基氧 ) 单 - 或二 - 取代，其中 A 表示甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基或三氟甲基，Hal 优选表 示 F 或 Cl， OA 优选表示甲氧基、乙氧基或丙氧基， SO2A 中的 A 优选是甲基、乙基、丙 基或丁基。
式 I 的化合物可以具有一个或多个手性中心，因此以各种立体异构形式存在。 式 I 包括所有这些形式。
因此，本发明特别涉及其中所述基团中至少一个具有上述优选含义之一的式 I 化 合物。 可以用下列子式 Ia 至 Ik 表示一些优选的化合物组，其符合式 I，并且其中没有更 详细给出的基团具有式 I 中所示的含义，但是其中
在 Ia 中， R1 表示苯并呋喃基、苯并噻唑基、苯并噻吩基、咪唑并 [1，2-a] 吡啶、喹啉基或呋喃基，其各自是未被取代的或者被 A 和 / 或 Hal 单 - 或二 - 取代，或者表 示被 A 和 / 或 Hal 单 - 或二 - 取代的吡啶基 ；
在 Ib 中， R2 表 示 H、 Alk、 Het1、 Cyc、 AlkNH2、 AlkNHA、 AlkNAA’、 AlkOH、 AlkOA、 AlkHet1、 AlkOAlkOH、 AlkO(CH2)mNAA’、 AlkO(CH2)mHet1、 AlkAr 或 AlkO(CH2)mAr ；
在 Ic 中， Alk 表示亚甲基、亚乙基、亚丙基、亚丁基、亚戊基或亚己基 ；
在 Id 中， Cyc 表示环丙烷、环丁烷、环戊烷或环己烷，其各自可以是未被取代 的或者被 OH 或 OA 单取代 ；
在 Ie 中， Het1 表示具有 1 至 3 个 N、 O 和 / 或 S 原子的单环的饱和的或芳族的 杂环，其可以被 A、 Hal、 SO2A 和 / 或＝ O( 羰基氧 ) 单 -、二 - 或三 - 取代 ；
在 If 中，Het1 表示具有 1 至 2 个 N 和 / 或 O 原子的单环的饱和的或芳族的杂环， 其可以被 A 和 / 或＝ O( 羰基氧 ) 单 - 或二 - 取代 ；
在 Ig 中， Het1 表示吡啶基、吡唑基、吗啉基，其各自可以是未被取代的或者被 A 单 - 或二 - 取代，或者 4- 乙磺酰基哌嗪基 ；
在 Ih 中， Ar 表示苯基，其是未被取代的或者被 SO2NH2、 SO2NA 或 SO2NAA’ 单取代 ；
在 Ii 中， A、 A’ 表示具有 1-6 个 C 原子的直链或支链的烷基，其中 1 或 2 个 CH2 基团可以被 -CH ＝ CH- 和 / 或 -C ≡ C- 基团代替和 / 或 1-5 个 H 原子可以被 F 和 / 或 Cl 代替 ；
在 Ij 中， A、 A’ 表示具有 1-6 个 C 原子的直链或支链的烷基，其中 1 个 CH2 基团可以被 -CH ＝ CH- 或 -C ≡ C- 基团代替和 / 或 1-5 个 H 原子可以被 F 和 / 或 Cl 代 替；
在 Ik 中， R1 表示苯并呋喃基、苯并噻唑基、苯并噻吩基、咪唑并 [1，2-a] 吡 啶、喹啉基或呋喃基，其各自是未被取代的或者被 A 和 / 或 Hal 单 - 或二 - 取代，或者表 示被 A 和 / 或 Hal 单 - 或二 - 取代的吡啶基，
R2 表 示 H、 Alk、 Het1、 Cyc、 AlkNH2、 AlkNHA、 AlkNAA’、 AlkOH、 AlkOA、 AlkHet1、 AlkOAlkOH、 AlkO(CH2)mNAA’、 AlkO(CH2)mHet1、 AlkAr 或 AlkO(CH2)mAr，
Alk 表示亚甲基、亚乙基、亚丙基、亚丁基、亚戊基或亚己基，
Cyc 表示环丙烷、环丁烷、环戊烷或环己烷，其各自可以是未被取代的或者被 OH 单取代，
Het1 表示具有 1 至 2 个 N 和 / 或 O 原子的单环的饱和的杂环，其可以被 A 和 / 或＝ O( 羰基氧 ) 单 - 或二 - 取代，
Ar 表示苯基，其是未被取代的或者被 SO2NH2、 SO2NA 或 SO2NAA’ 单取代，
A、 A’ 表示具有 1-6 个 C 原子的直链或支链的烷基，其中 1 或 2 个 CH2 基团 可以被 -CH ＝ CH- 和 / 或 -C ≡ C- 基团代替和 / 或 1-5 个 H 原子可以被 F 和 / 或 Cl 代 替，
Hal 表示 F、 Cl、 Br 或 I，
m 表示 1、2 或 3，以及其可药用的衍生物、溶剂合物、盐、互变异构体和立体异构体，包括它们 所有比例的混合物。
此外，本发明的化合物以及用于制备它们的起始原料通过本身已知的方法、如 在文献 ( 例如标准著作，如 Houben-Weyl， Methoden derorganischen Chemie[ 有机化学方 法 ]，Georg-Thieme-Verlag，Stuttgart) 中描述的方法来制备，更准确地说，在已知的和适 合所述反应的反应条件下制备。 此处也可以使用本身已知的本文未更详细提及的变体。
如果需要，起始原料也可以原位形成，不将它们从反应混合物中分离出，而是 立即将它们进一步转化成本发明的化合物。
一般而言，起始化合物是已知的。 如果它们是新的，则可以通过本身已知的方 法制备它们。
一般而言，式 II、 III、 V 和 VII 的化合物是已知的。 如果它们是未知的，则可 以通过本身已知的方法制备它们。
在式 VI 的化合物中， Z 优选表示 Cl、 Br、 I 或反应性修饰的 OH，例如具有 1-6 个 C 原子的烷基磺酰氧基 ( 优选甲基磺酰氧基 ) 或具有 6-10 个 C 原子的芳基磺酰氧基 ( 优选苯基 - 或对甲苯基 - 磺酰氧基 )。 Z 特别优选表示 Cl。
反应通过本领域技术人员已知的方法来进行。
反应优选在碱性条件下进行。 适合的碱优选是 ：金属氧化物，例如氧化铝，碱 金属氢氧化物，包括氢氧化钾、氢氧化钠和氢氧化锂 ；碱土金属氢氧化物，例如氢氧化 钡和氢氧化钙 ；碱金属醇盐，例如乙醇钾和丙醇钠 ；和各种有机碱，例如哌啶或二乙醇 胺。
反应在适合的惰性溶剂中进行。 适合的惰性溶剂是例如烃，如己烷、石油醚、 苯、甲苯或二甲苯 ；氯化烃，如三氯乙烯、1，2- 二氯乙烷、四氯化碳、氯仿或二氯甲 烷 ；醇，如甲醇、乙醇、异丙醇、正丙醇、正丁醇或叔丁醇 ；醚，如乙醚、二异丙醚、 四氢呋喃 (THF) 或二 烷 ；乙二醇醚，如乙二醇单甲醚或单乙醚、乙二醇二甲醚 ( 二 甘醇二甲醚 ) ；酮，如丙酮或丁酮 ；酰胺，如乙酰胺、二甲基乙酰胺或二甲基甲酰胺 (DMF) ；腈，如乙腈 ；亚砜，如二甲亚砜 (DMSO) ；二硫化碳 ；羧酸，如甲酸或乙酸 ； 硝基化合物，如硝基甲烷或硝基苯 ；酯，如乙酸乙酯，或上述溶剂的混合物。
溶剂特别优选是例如水和 / 或四氢呋喃。
在式 VI 的化合物与式 VII 的化合物的反应中，首先形成式 VIII 的化合物，它随 后环化，生成式 I 的化合物。 式 VIII 的化合物可以作为中间体被分离出来并用作例如制 备式 I 化合物的起始化合物。 取决于所采用的条件，反应时间在几分钟至 14 天之间，反应温度在约 -30°至 140°之间，通常在 -10°至 130°之间，特别是在约 30°至约 125°之间。
反应优选在如上所述的惰性溶剂中进行，特别优选的是丙酮、乙腈和 / 或乙 醇。
取决于所采用的条件，反应时间在几分钟至 14 天之间，反应温度在约 -30°至 140°之间，通常在 -10°至 130°之间，特别是在约 30°至约 125°之间。
药用盐和其它形式
本发明所述的化合物能以其最终的非盐形式使用。 另一方面，本发明还涵盖这
些化合物的可药用盐形式的用途，所述可药用盐能通过本领域已知的操作由各种有机和 无机酸和碱衍生得到。 式 I 化合物的可药用盐形式大部分是通过常规方法制备的。 如果 式 I 化合物含有羧基，则其适合的盐之一能通过使该化合物与适合的碱反应从而产生相应 的碱加成盐来形成。 这类碱有例如碱金属氢氧化物，包括氢氧化钾、氢氧化钠和氢氧化 锂 ；碱土金属氢氧化物，如氢氧化钡和氢氧化钙 ；碱金属醇盐，例如乙醇钾和丙醇钠 ； 和各种有机碱，如哌啶、二乙醇胺和 N- 甲基 - 谷氨酰胺。 也包括式 I 化合物的铝盐。 就 某些式 I 化合物而言，能通过用可药用的有机和无机酸处理这些化合物来形成酸加成盐， 例如卤化氢，如氯化氢、溴化氢或碘化氢 ；其它矿物酸及其相应的盐，如硫酸盐、硝酸 盐或磷酸盐等 ；和烷基 - 和单芳基 - 磺酸盐，如乙磺酸盐、甲苯磺酸盐和苯磺酸盐 ；和 其它有机酸及其相应的盐，如乙酸盐、三氟乙酸盐、酒石酸盐、马来酸盐、琥珀酸盐、 柠檬酸盐、苯甲酸盐、水杨酸盐、抗坏血酸盐等。 因此，式 I 化合物的可药用的酸加成盐 包括以下盐 ：乙酸盐、己二酸盐、藻酸盐、精氨酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸 盐 ( 苯基磺酸盐 )、硫酸氢盐、亚硫酸氢盐、溴化物、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、 辛酸盐、氯化物、氯苯甲酸盐、柠檬酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐 (digluconate)、 磷酸二氢盐、二硝基苯甲酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、富马酸盐、半乳糖二酸盐 ( 得自粘酸 )、半乳糠醛酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、谷氨酸盐、甘油磷酸盐、半琥珀 酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、马尿酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2- 羟基 乙磺酸盐、碘化物、羟乙基磺酸盐、异丁酸盐、乳酸盐、乳糖酸盐、苹果酸盐、马来酸 盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、偏磷酸盐、甲磺酸盐、甲基苯甲酸盐、磷酸一氢盐、2- 萘磺 酸盐、烟酸盐、硝酸盐、草酸盐、油酸盐、扑姆酸盐 (palmoate)、果胶酯酸盐、过硫酸 盐、苯基乙酸盐、3- 苯基丙酸盐、磷酸盐、膦酸盐、邻苯二甲酸盐，但这并不代表限于 此。
此外，本发明的化合物的碱盐包括铝盐、铵盐、钙盐、铜盐、铁 (III) 盐、铁 (II) 盐、锂盐、镁盐、锰 (III) 盐、锰 (II) 盐、钾盐、钠盐和锌盐，但这并不代表限于 此。 在上述盐中，优选铵盐 ；碱金属盐钠盐和钾盐，以及碱土金属盐钙盐和镁盐。 衍生 自可药用有机无毒碱的式 I 化合物的盐包括以下物质的盐 ：伯、仲和叔胺、被取代的胺， 还包括天然存在的被取代的胺、环状胺和碱性离子交换树脂，例如精氨酸、甜菜碱、咖 啡因、氯普鲁卡因、胆碱、 N， N ′ - 二苄基乙二胺 ( 苄星盐 (benzathine))、二环己基 胺、二乙醇胺、二乙胺、2- 二乙基氨基乙醇、2- 二甲基氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、 N- 乙基吗啉、 N- 乙基哌啶、葡糖胺、氨基葡糖、组氨酸、哈胺 (hydrabamine)、异丙 胺、利多卡因、赖氨酸、葡甲胺、 N- 甲基 -D- 葡糖胺、吗啉、哌嗪、哌啶、聚胺树脂、 普鲁卡因、嘌呤、可可碱、三乙醇胺、三乙胺、三甲胺、三丙胺和三 ( 羟基甲基 ) 甲基胺 ( 氨基丁三醇 )，但这不代表限于此。
能用诸如以下的物质将含有碱性含氮基团的本发明的化合物季铵化 ：(C1-C4) 烷 基卤化物，例如甲基、乙基、异丙基和叔丁基氯化物、溴化物和碘化物 ；硫酸二 (C1-C4) 烷基酯，例如硫酸二甲基、二乙基和二戊基酯 ；(C10-C18) 烷基卤化物，例如癸基、十二 烷基、月桂基、肉豆蔻基和硬脂基氯化物、溴化物和碘化物 ；以及芳基 (C1-C4) 烷基卤 化物，例如苄基氯和苯乙基溴。 能用该类盐来制备水溶性和油溶性的本发明的化合物。
优选的上述药用盐包括乙酸盐、三氟乙酸盐、苯磺酸盐、柠檬酸盐、富马酸盐、葡糖酸盐、半琥珀酸盐、马尿酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、羟乙基磺酸盐、扁桃酸 盐、葡甲胺、硝酸盐、油酸盐、膦酸盐、新戊酸盐、磷酸钠、硬脂酸盐、硫酸盐、磺基 水杨酸盐、酒石酸盐、硫代苹果酸盐、甲苯磺酸盐和氨基丁三醇，但这并不代表限于 此。
碱性式 I 化合物的酸加成盐是通过将游离碱形式与足够量的所需的酸接触、从而 以常规方式形成盐来制备的。 能通过将盐形式与碱接触并以常规方式分离出游离碱而再 生游离碱。 就某些物理性质而言游离碱形式在某些方面与其相应的盐形式不同，例如在 极性溶剂中的溶解度 ；然而，对于本发明的目的而言，盐在其它方面与其各自的游离碱 形式相当。
如上所述，式 I 化合物的可药用碱加成盐是用金属或胺如碱金属和碱土金属或有 机胺形成的。 优选的金属有钠、钾、镁和钙。 优选的有机胺有 N，N’- 二苄基乙二胺、 氯普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、乙二胺、 N- 甲基 -D- 葡糖胺和普鲁卡因。
本发明的酸性化合物的碱加成盐是通过将游离酸形式与足够量的所需的碱进行 接触、从而以常规方式形成盐来制备的。 能通过将盐形式与酸接触并以常规方式分离出 游离酸而再生游离酸。 就某些物理性质而言游离酸形式在某些方面与其相应的盐形式不 同，例如在极性溶剂中的溶解度 ；然而，对于本发明的目的而言，盐在其它方面与其各 自的游离酸形式相当。
如果本发明的化合物含有一个以上能形成这类可药用盐的基团，则本发明还涵 盖多重盐。 典型的多重盐形式包括例如酒石酸氢盐、二乙酸盐、二富马酸盐、二葡甲 胺、二磷酸盐、二钠盐和三盐酸盐，但这并不代表限于此。
就上述内容而言，可以看出，本文中的表述 “可药用盐” 意指包括其盐之一的 形式的式 I 化合物的活性化合物，特别是如果与活性化合物的游离形式或早期使用的活 性化合物的任何其它盐形式相比该盐形式赋予了活性化合物改进的药动学性质的话。 活 性化合物的可药用盐形式也能首次为该活性化合物提供之前其不具有的所需的药动学性 质，甚至能在其体内治疗效果方面对该活性化合物的药效学具有积极影响。
本发明的式 I 化合物由于它们的分子结构的原因可以是手性的，因此可以以各种 对映异构形式存在。 所以它们能以外消旋形式或旋光活性形式存在。
由于式 I 化合物的外消旋物或立体异构体的药学活性可以不同，因此可能需要使 用对映体。 在这些情况中，终产物或者乃至中间体可以通过本领域技术人员已知的化学 或物理方法被分离成对映异构化合物，或者甚至在合成中不经分离就如此使用。
在外消旋胺的情况中，通过与旋光活性拆分剂反应由混合物形成非对映体。 适 合的拆分剂的实例是旋光活性酸，例如酒石酸、二乙酰基酒石酸、二苯甲酰基酒石酸、 扁桃酸、苹果酸、乳酸、被适合地 N- 保护的氨基酸 ( 例如 N- 苯甲酰基脯氨酸或 N- 苯磺 酰基脯氨酸 ) 的 R 和 S 形式，或者各种旋光活性樟脑磺酸。 借助于旋光活性拆分剂 ( 例 如固定在硅胶上的二硝基苯甲酰基苯基甘氨酸、三乙酸纤维素或其它碳水化合物衍生物 或手性衍生化甲基丙烯酸酯聚合物 ) 的色谱对映体拆分也是有利的。 用于该目的的适合 的洗脱剂是水性或醇性溶剂混合物，例如己烷 / 异丙醇 / 乙腈，例如比例为 82 ∶ 15 ∶ 3 己烷 / 异丙醇 / 乙腈。
本发明还涉及所述化合物和 / 或其生理学上可接受的盐在制备药物 ( 药物组合物 ) 中的用途，特别是以非化学方法制备。 可以将它们与至少一种固体、液体和 / 或半 液体赋形剂或辅料 (adjuvant) 以及如果需要还有一种或多种其它活性化合物一起转化成适 合的剂型。
本发明还涉及包含至少一种式 I 化合物和 / 或其可药用的衍生物、溶剂合物和立 体异构体 ( 包括它们所有比例的混合物 ) 并任选包含赋形剂和 / 或辅料的药物。
药物制剂能以每个剂量单位包含预定量的活性化合物的剂量单位形式进行施 用。 该类单位能包含例如 0.1mg 至 3g、优选 1mg 至 700mg、特别优选 5mg 至 100mg 本 发明的化合物，这取决于所治疗的病症、施用方法以及患者的年龄、体重和情况，或者 药物制剂能以每个剂量单位包含预定量的活性化合物的剂量单位形式进行施用。 优选的 剂量单位制剂是包含上述日剂量或部分剂量或其相应分数的活性化合物的那些。 此外， 这类药物制剂能用药学领域广泛已知的方法来制备。
药物制剂能适用于经由任何所需的适合的方法进行施用，例如口服 ( 包括口含 或舌下 )、直肠、鼻、局部 ( 包括口含、舌下或透皮 )、阴道或胃肠外 ( 包括皮下、肌 内、静脉内或真皮内 ) 方法。 该类制剂能用药学领域中已知的所有方法例如通过将活性 化合物与赋形剂或辅料合并来制备。
适于口服施用的药物制剂能以独立单位的形式进行施用，所述的独立单位例如 胶囊或片剂 ；粉末或颗粒 ；位于水性或非水性液体中的溶液或混悬剂 ；可食用的泡沫或 泡沫食物 ；或水包油型液体乳剂或油包水型液体乳剂。
因此，例如，就以片剂或胶囊形式口服施用而言，能将活性成分组分与无毒的 可药用的口服惰性赋形剂例如乙醇、甘油、水等合并。 粉末是通过将化合物粉碎至适当 细的大小并将其与以相似方式粉碎的药用赋形剂例如可食用的碳水化合物例如淀粉或甘 露醇混合来制备的。 也可以存在矫味剂、防腐剂、分散剂和染料。
胶囊是通过如上所述制备粉末混合物并填充到成型的明胶胶囊壳中来制备的。 在进行填充操作前，能向粉末混合物中加入助流剂和润滑剂，如高度分散的硅酸、滑石 粉、硬脂酸镁、硬脂酸钙或固体形式的聚乙二醇。 也可以加入崩解剂或增溶剂如琼脂、 碳酸钙或碳酸钠以提高胶囊被使用后药物的利用度。
此外，如果需要或必要，也能向混合物中掺入适合的粘合剂、润滑剂和崩解剂 以及染料。 适合的粘合剂包括淀粉、明胶、天然的糖如葡萄糖或 β- 乳糖、由玉米制 得的甜味剂、天然和合成橡胶如阿拉伯胶、西黄蓍胶或藻酸钠、羧甲基纤维素、聚乙二 醇、蜡等。 这些剂型中所用的润滑剂包括油酸钠、硬脂酸钠、硬脂酸镁、苯甲酸钠、乙 酸钠、氯化钠等。 崩解剂非限制性地包括淀粉、甲基纤维素、琼脂、膨润土、黄原胶 等。 片剂是通过例如制备粉末混合物、将该混合物制粒或干压、加入润滑剂和崩解剂并 将整个混合物压成片剂来制备的。 粉末混合物是通过将以适当方式粉碎的化合物与上 述稀释剂或基质混合并任选地与粘合剂如羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶或聚乙烯吡咯烷 酮、溶出阻滞剂如石蜡、吸收促进剂如季盐和 / 或吸收剂如膨润土、高岭土或磷酸二钙 混合来制备的。 能通过用粘合剂如糖浆、淀粉糊、 acadia 胶浆或者纤维素或聚合物材料 的溶液润湿并将其过筛而将粉末混合物制粒。 作为制粒的一种替代选择，能使粉末混合 物通过压片机，得到形状不均匀形状的块状物，将其破碎从而形成颗粒。 能通过加入硬 脂酸、硬脂酸盐、滑石粉或矿物油对颗粒进行润滑以防止粘附在片剂铸模上。 然后将被润滑的混合物压成片剂。 也能将本发明的化合物与自由流动的惰性赋形剂合并，然后在 不进行制粒或干压步骤的情况下直接压成片剂。 可以存在由虫胶隔离层、糖或聚合物物 质层和蜡的光泽层组成的透明或不透明的保护层。 能向这些包衣中加入染料以便能区别 不同的剂量单位。
口服液体如溶液、糖浆和酏剂能被制备为剂量单位形式以便给定量包含预定量 的化合物。 糖浆能通过将化合物溶解于具有适合矫味剂的水性溶液中来制备，而酏剂是 用无毒的醇性媒介物制备的。 混悬剂能通过将化合物分散于无毒媒介物中来制备。 也能 加入增溶剂和乳化剂如乙氧基化的异硬脂醇和聚氧乙烯山梨醇醚、防腐剂、矫味添加剂 如薄荷油或天然甜味剂或糖精或其它人工甜味剂等。
如果需要，能将用于口服施用的剂量单位制剂包封于微囊中。 也能以释放被延 长或延缓的形式来制备制剂，如通过将粒状材料用聚合物、蜡等进行包衣或者包埋来制 备制剂。
式 I 化合物及其盐、溶剂合物和生理学功能衍生物也能以脂质体递送系统如单层 小囊泡、单层大囊泡和多层囊泡的形式进行施用。 脂质体能由各种磷脂如胆固醇、硬脂 胺或磷脂酰胆碱来形成。
式 I 化合物以及其盐、溶剂合物和生理学功能衍生物也能用单克隆抗体作为独立 载体而被递送，其中所述化合物分子与所述单克隆抗体偶联。 也能将化合物偶联到作为 靶向药物载体的可溶性聚合物上。 该类聚合物可包括聚乙烯吡咯烷酮、吡喃共聚物、聚 羟丙基甲基丙烯酰氨基苯酚、聚羟乙基天冬酰氨基苯酚或聚氧化乙烯聚赖氨酸，其被棕 榈酰基取代。 还可以将化合物偶联到一类适于实现药物控释的生物可降解的聚合物上， 例如聚乳酸、聚 -ε- 己内酯、聚羟基丁酸、聚原酸酯、聚缩醛、聚二羟基吡喃、聚氰基 丙烯酸酯和交联或两亲性嵌段共聚物水凝胶。
适于透皮施用的药物制剂能以与接受者的表皮长期紧密接触的独立硬膏剂的形 式施用。 因此，例如，如 Pharmaceutical Research，3(6)，318(1986) 中的通用术语中所 述，能通过离子电渗疗法使活性化合物从硬膏剂中递送。
适于局部施用的药用化合物能被配制成软膏剂、乳膏剂、混悬剂、洗剂、散 剂、溶液剂、糊剂、凝胶剂、喷雾剂、气雾剂或油。
对于眼或其它外部组织例如口和皮肤的治疗，制剂优选以局部用软膏剂或乳膏 剂的形式被应用。 在配制软膏剂的情况中，能将活性化合物与石蜡的或水可混溶的乳膏 基质一起应用。 或者，能用水包油型乳膏基质或油包水型基质将活性化合物配制成乳膏 剂。
适于局部应用于眼的药物制剂包括滴眼剂，其中活性化合物被溶解或混悬于适 合的载体、特别是水性溶剂中。
适于在口中局部应用的药物制剂包括锭剂、软锭剂和漱口剂。
适于直肠施用的药物制剂能以栓剂或灌肠剂的形式施用。
其中载体物质是固体的适于鼻施用的药物制剂包含具有例如 20-500 微米粒度的 粗粉末，其以嗅的方式施用，即经由鼻道从靠近鼻的含粉末容器中迅速吸入。 以具有液 体作为载体物质的鼻喷雾剂或滴鼻剂形式施用的适合的制剂包含活性成分在水或油中的 溶液。适于通过吸入施用的药物制剂包含细颗粒粉或雾，所述细颗粒粉或雾能通过各 种类型的含气雾剂的加压分配器、喷雾器或吹入器来产生。
适于阴道施用的药物制剂能以阴道栓、卫生栓、乳膏剂、凝胶剂、糊剂、泡沫 或喷雾制剂的形式施用。
适于胃肠外施用的药物制剂包括 ：水性和非水性无菌注射溶液，其包含抗氧化 剂、缓冲剂、抑菌剂和溶质，由此使得制剂与被治疗的接受者的血液等张 ；以及水性和 非水性的无菌混悬剂，其可以包含混悬介质和增稠剂。 制剂能位于单剂量或多剂量容 器、例如密封的安瓿和小瓶中施用，以冷冻干燥 ( 冻干 ) 状态储存，以便仅需在临用前加 入无菌载体液体例如注射用水。 按照处方制备的注射溶液和混悬液能由无菌粉末、颗粒 和片剂制备。
不言而喻的是，除了上面特定提及的组份外，制剂还可以包含本领域中就该特 定类型的制剂而言可使用的其它物质 ；因此，例如，适于口服施用的制剂可以包含矫味 剂。
式 I 化合物的治疗有效量取决于多种因素，包括例如人或动物的年龄和体重、需 要治疗的准确疾病情况及其严重程度、制剂的性质和施用方法，最终由主治医生或兽医 来决定。 然而，本发明的化合物用于治疗的有效量一般为 0.1 至 100mg/kg 接受者 ( 哺乳 动物 ) 体重 / 天，特别是通常为 1 至 10mg/kg 体重 / 天。 因此，对于体重为 70kg 的成年 哺乳动物而言，每天的实际量通常为 70 至 700mg，其中该量能作为每天单次剂量或者通 常以每天一系列部分剂量 ( 如二、三、四、五或六个部分剂量 ) 被施用，从而使得总日剂 量相同。 其盐或溶剂合物或生理学功能衍生物的有效量能以式 I 化合物本身的有效量的 分数来确定。 能认为相似的剂量适用于治疗上述其它病症。
本发明涉及包含至少一种式 I 化合物和 / 或其可药用的衍生物、溶剂合物和立体 异构体 ( 包括它们所有比例的混合物 ) 并任选包含赋形剂和 / 或辅料和至少一种另外的药 物活性化合物的药物。
本发明还涉及式 I 化合物以及其可药用的衍生物、盐、溶剂合物、互变异构体 和立体异构体 ( 包括它们所有比例的混合物 ) 在制备用于治疗和 / 或对抗癌症、肿瘤生 长、转移生长的药物中的用途，其中所述肿瘤选自鳞状上皮肿瘤、膀胱肿瘤、胃肿瘤、 肾肿瘤、头颈肿瘤、食管肿瘤、宫颈肿瘤、甲状腺肿瘤、肠肿瘤、肝肿瘤、脑肿瘤、前 列腺肿瘤、生殖泌尿道肿瘤、淋巴系统肿瘤、胃肿瘤、喉肿瘤、肺肿瘤、肺腺癌、小细 胞肺癌、胰腺癌、成胶质细胞瘤、结肠癌、乳腺癌、血液和免疫系统肿瘤、急性髓性白 血病、慢性髓性白血病、急性淋巴性白血病、慢性淋巴性白血病。
另外的药物活性化合物优选是化学治疗剂，特别是抑制血管生成从而抑制肿瘤 细胞的生长和扩散的那些化学治疗剂 ；本文优选的是 VEGF 受体抑制剂，包括针对 VEGF 受体的核酶 (robozyme) 和反义物 (antisense) 以及血管抑素和内皮抑素。
可以与本发明的化合物组合使用的抗肿瘤剂的实例一般包括烷化剂、抗代谢 物 ；epidophyllotoxin ；抗肿瘤酶 ；拓扑异构酶抑制剂 ；丙卡巴肼 ；米托蒽醌或铂配位络 合物。
抗肿瘤剂优选选自以下类别 ：蒽环类、长春花属药物、丝裂霉素类、博来霉素 类、细胞毒性核苷类、埃坡霉素类、 discodermolides、蝶啶类、烯二炔类 (diynenes) 和鬼臼毒素类。
在所述类别中特别优选的是例如洋红霉素、柔红霉素、氨基蝶呤、甲氨蝶呤、 甲基叶酸、二氯甲氨蝶呤、丝裂霉素 C、泊非霉素、5- 氟尿嘧啶、5- 氟脱氧尿苷单磷 酸、阿糖胞苷类、5- 氮杂胞苷、硫鸟嘌呤、硫唑嘌呤、腺苷、喷司他丁、红羟基壬基腺 嘌呤 (erythrohydroxynonyladenine)、克拉屈滨、6- 巯基嘌呤、吉西他滨、胞嘧啶阿拉伯 糖苷、鬼臼毒素或鬼臼毒素衍生物例如依托泊苷、磷酸依托泊苷或替尼泊苷、美法仑、 长春碱、长春新碱、异长春碱、长春地辛、环氧长春碱和紫杉醇。 其它优选的抗肿瘤剂 选自雌莫司汀、卡铂、环磷酰胺、博来霉素、吉西他滨、异环磷酰胺 (ifosamide)、美法 仑、六甲蜜胺、塞替派、阿糖胞苷、 idatrexate、三甲曲沙、达卡巴嗪、 L- 门冬酰胺酶、 喜树碱、 CPT-11、拓扑替康、阿拉伯糖胞嘧啶 (arabinosylcytosine)、比卡鲁胺、氟他 胺、亮丙立德、吡啶并苯并吲哚衍生物、干扰素类和白细胞介素类。
另外的药物活性化合物优选是抗生素。 优选的抗生素选自更生霉素、柔红霉 素、伊达比星、表柔比星、米托蒽醌、博来霉素、丝裂霉素。
另 外 的 药 物 活 性 化 合 物 优 选 是 酶 抑 制 剂。 优 选 的 酶 抑 制 剂 选 自 组 蛋 白 脱 乙 酰 化 抑 制 剂 ( 例 如 辛 二 酰 苯 胺 异 羟 肟 酸 [SAHA]) 和 酪 氨 酸 激 酶 抑 制 剂 ( 例 如 ZD 1839[Iressa])。 另外的药物活性化合物优选是核输出 (nuclear export) 抑制剂。 核输出抑制剂防 止来自细胞核的生物聚合物 ( 例如 RNA) 的表达。 优选的核输出抑制剂选自海绵多聚乙 酰 (callystatin)、来普霉素 B、 ratjadone。
另外的药物活性化合物优选是核输出抑制剂。 核输出抑制剂防止来自细胞核的 生物聚合物 ( 例如 RNA) 的表达。 优选的核输出抑制剂选自海绵多聚乙酰 (callystatin)、 来普霉素 B、 ratjadone。
另外的药物活性化合物优选是免疫抑制剂。 优选的免疫抑制剂选自雷帕霉素、 CCI-779(Wyeth)、 RAD001(Novartis)、 AP23573(AriadPharmaceuticals)。
本发明还涉及由如下的独立药包组成的套药包 ( 药盒 ) ：
(a) 有效量的式 I 化合物和 / 或其可药用的衍生物、溶剂合物和立体异构体，包 括它们所有比例的混合物 ；
和
(b) 有效量的另外的药物活性化合物。
该套药包包含适合的容器，如盒、单个瓶、袋或安瓿。 该套药包可以包含例如 单独的安瓿，每个安瓿各自含有有效量的式 I 化合物和 / 或其可药用的衍生物、溶剂合物 和立体异构体，包括它们所有比例的混合物 ；和有效量的溶解或冷冻干燥形式的另外的 药物活性化合物。
本发明的化合物以及其可药用的衍生物、盐、溶剂合物、互变异构体和立体异 构体 ( 包括它们所有比例的混合物 ) 适合作为用于哺乳动物、特别是人的药学活性化合物 用于制备药物，所述药物用于治疗和 / 或对抗癌症、肿瘤生长、转移生长、纤维化、再 狭窄、 HIV 感染、阿尔茨海默病、动脉粥样硬化和 / 或用于促进伤口愈合。
因此，本发明涉及式 I 化合物以及其可药用的衍生物、盐、溶剂合物、互变异构 体和立体异构体 ( 包括它们所有比例的混合物 ) 在制备药物中的用途，所述药物用于治疗
和 / 或对抗癌症、肿瘤生长、转移生长、纤维化、再狭窄、HIV 感染、阿尔茨海默病、动 脉粥样硬化和 / 或用于促进伤口愈合。
特别优选的是用于治疗疾病的用途，其中所述疾病是实体瘤。 所述实体瘤优选 选自鳞状上皮肿瘤、膀胱肿瘤、胃肿瘤、肾肿瘤、头颈肿瘤、食管肿瘤、宫颈肿瘤、甲 状腺肿瘤、肠肿瘤、肝肿瘤、脑肿瘤、前列腺肿瘤、生殖泌尿道肿瘤、淋巴系统肿瘤、 胃肿瘤、喉肿瘤和 / 或肺肿瘤。
本发明还涉及权利要求 1 的化合物和 / 或其可药用的盐和溶剂合物在制备用于治 疗实体瘤的药物中的用途，其中治疗有效量的式 I 化合物与选自下组的化合物组合施用 ： 1) 雌激素受体调节剂，2) 雄激素受体调节剂，3) 类视色素受体调节剂，4) 细胞毒物质， 5) 抗增殖剂，6) 异戊烯基蛋白转移酶抑制剂，7)HMG-CoA 还原酶抑制剂，8)HIV 蛋白 酶抑制剂，9) 逆转录酶抑制剂和 10) 其它血管生成抑制剂。
所述实体瘤还优选选自肺腺癌、小细胞肺癌、胰腺癌、成胶质细胞瘤、结肠癌 和乳腺癌。
此外，优选的是用于治疗血液和免疫系统肿瘤的用途，优选用于治疗选自下组 的肿瘤的用途 ：急性髓性白血病、慢性髓性白血病、急性淋巴性白血病和 / 或慢性淋巴 性白血病。
本发明的化合物也适于与已知抗癌剂组合。 这些已知抗癌剂包括下列抗癌剂 ： 雌激素受体调节剂、雄激素受体调节剂、类视色素受体调节剂、细胞毒物质、抗增殖 剂、异戊烯基蛋白转移酶抑制剂、 HMG-CoA 还原酶抑制剂、 HIV 蛋白酶抑制剂、逆转 录酶抑制剂和其它血管生成抑制剂。 本发明的化合物特别适于在进行放射治疗的同时施 用。 现有技术 ( 参见 WO00/61186) 中已经描述了与放射治疗组合使用抑制 VEGF 的协同 作用。
本发明还涉及权利要求 1 的化合物和 / 或其可药用的盐和溶剂合物在制备用于治 疗实体瘤的药物中的用途，其中治疗有效量的式 I 化合物与放射治疗和选自下组的化合物 组合施用 ：1) 雌激素受体调节剂，2) 雄激素受体调节剂，3) 类视色素受体调节剂，4) 细 胞毒物质，5) 抗增殖剂，6) 异戊烯基蛋白转移酶抑制剂，7)HMG-CoA 还原酶抑制剂， 8)HIV 蛋白酶抑制剂，9) 逆转录酶抑制剂和 10) 其它血管生成抑制剂。
“雌激素受体调节剂” 指的是干扰或抑制雌激素与受体的结合的化合物，无 论其机理如何。 雌激素受体调节剂的实例包括但不限于他莫昔芬、雷洛昔芬、艾多昔 芬、 LY353381、 LY 117081、托瑞米芬、氟维司群、2，2- 二甲基丙酸 4-[7-(2，2- 二甲 基 -1- 氧代丙氧基 -4- 甲基 -2-[4-[2-(1- 哌啶基 ) 乙氧基 ] 苯基 ]-2H-1- 苯并吡喃 -3- 基 ] 苯基酯、4，4’ - 二羟基二苯甲酮 -2，4- 二硝基苯基腙和 SH646。
“雄激素受体调节剂” 指的是干扰或抑制雄激素与受体的结合的化合物，无论 其机理如何。 雄激素受体调节剂的实例包括非那雄胺和其它 5α- 还原酶抑制剂、尼鲁米 特、氟他胺、比卡鲁胺、利阿唑和醋酸阿比特龙。
“类视色素受体调节剂” 指的是干扰或抑制类视色素与受体的结合的化合物， 无论其机理如何。 这类类视色素受体调节剂的实例包括贝沙罗汀、维甲酸、13- 顺式 - 视 黄酸、9- 顺式 - 视黄酸、α- 二氟甲基鸟氨酸、ILX23-7553、反式 -N-(4’ - 羟基苯基 ) 维甲酰胺和 N-4- 羧基苯基维甲酰胺。“细胞毒物质” 指的是主要通过直接作用于细胞功能或者抑制或干扰细胞减 数分裂而导致细胞死亡的化合物，包括烷化剂、肿瘤坏死因子、嵌入剂、微管蛋白抑制 剂和拓扑异构酶抑制剂。 细胞毒物质的实例包括但不限于 tirapazimine、 sertenef、恶 液质素、异环磷酰胺、他索纳明、氯尼达明、卡铂、六甲三聚氰胺、泼尼莫司汀、二溴 卫矛醇、雷莫司汀、福莫司汀、奈达铂、奥沙利铂、替莫唑胺、庚铂 (heptaplatin)、雌 莫司汀、甲苯磺酸英丙舒凡、曲磷胺、尼莫司汀、二溴螺氯铵、嘌嘧替派、洛铂、沙 铂、甲基丝裂霉素、顺铂、伊罗夫文、右旋异环磷酰胺、顺式 - 胺二氯 (2- 甲基吡啶 ) 铂、苄基鸟嘌呤、葡磷酰胺、 GPX100、 ( 反式，反式，反式 ) 二 -μ-( 己烷 -1，6- 二 胺 )-μ-[ 二胺铂 (II)] 二 [ 二胺 ( 氯 ) 铂 (II)] 四氯化物、 diarisidinylspermine、三氧化二 砷、1-(11- 十二烷基氨基 -10- 羟基十一烷基 )-3，7- 二甲基黄嘌呤、佐柔比星、伊达比 星、柔红霉素、比生群、米托蒽醌、吡柔比星、吡萘非特、戊柔比星、氨柔比星、抗瘤 酮、3’- 脱氨基 -3’- 吗啉代 -13- 脱氧 -10- 羟基洋红霉素、annamycin、加柔比星、依 利奈法德、 MEN10755 和 4- 脱甲氧基 -3- 脱氨基 -3- 吖丙啶基 -4- 甲基磺酰基柔红霉素 ( 见 WO 00/50032)。
微管蛋白抑制剂的实例包括紫杉醇、硫酸长春地辛、3′，4′ - 二脱氢 -4′ - 脱 氧 -8 ′ - 去甲长春碱、多西他赛 (docetaxol)、根霉素、多拉司他汀、羟乙基磺酸米 伏布林、 auristatin、西马多丁、 RPR109881、 BMS184476、长春氟宁、自念珠藻环肽 (cryptophycin)、2，3，4，5，6- 五氟 -N-(3- 氟 -4- 甲氧基苯基 ) 苯磺酰胺、脱水长春 碱 (anhydrovinblastine)、 N， N- 二甲基 -L- 缬氨酰基 -L- 缬氨酰基 -N- 甲基 -L- 缬氨酰 基 -L- 脯氨酰基 -L- 脯氨酸 - 叔 - 丁基酰胺、 TDX258 和 BMS188797。
拓扑异构酶抑制剂是例如拓扑替康、 hycaptamine、伊立替康、卢比替康、6- 乙 氧基丙酰基 -3′，4′ -O- 外亚苄基教酒菌素、9- 甲氧基 -N， N- 二甲基 -5- 硝基吡唑 并 [3，4，5-kl] 吖啶 -2-(6H) 丙胺、1- 氨基 -9- 乙基 -5- 氟 2，3- 二氢 -9- 羟基 -4- 甲 基 -1H，12H- 苯并 [de] 吡喃并 [3’，4’：b，7] 吲嗪并 [1，2b] 喹啉 -10，13(9H，15H) 二酮、勒托替康、7-[2-(N- 异丙基氨基 ) 乙基 ]-(20S) 喜树碱、 BNP1350、 BNPI1100、 BN80945、 BN80942、磷酸依托泊苷、替尼泊苷、索布佐生、2′ - 二甲基氨基 -2′ - 脱 氧依托泊苷、 GL331、 N-12-( 二甲基氨基 ) 乙基 ]-9- 羟基 -5，6- 二甲基 -6H- 吡啶并 [4，3-b] 咔唑 -1- 甲酰胺、 asulacrine、 (5a，5aB，8aa，9b)-9-[2-[N-[2-( 二甲基氨基 ) 乙基 ]-N- 甲基氨基 ] 乙基 ]-5[4- 羟基 -3，5- 二甲氧基苯基 ]-5，5a，6，8，8a，9- 六氢 呋喃并 (3 ′，4 ′ ：6，7) 萘并 [2，3-d]-1，3- 二氧杂环戊烯 -6- 酮、2，3-( 亚甲基二 氧基 )-5- 甲基 -7- 羟基 -8- 甲氧基苯并 [c] 菲啶鎓、6，9- 二 [(2- 氨基乙基 ) 氨基 ] 苯 并 [g] 异喹啉 -5，10- 二酮、5-(3- 氨基丙基氨基 )-7，10- 二羟基 -2-(2- 羟基乙基氨基 甲基 )-6H- 吡唑并 [4，5，1-de] 吖啶 -6- 酮、N-[1-[2( 二乙基氨基 ) 乙基氨基 ]-7- 甲氧 基 -9- 氧代 -9H- 噻吨 -4- 基甲基 ] 甲酰胺、 N-(2-( 二甲基氨基 ) 乙基 ) 吖啶 -4- 甲酰 胺、6-[[2-( 二甲基氨基 ) 乙基 ] 氨基 ]-3- 羟基 -7H- 茚并 [2，1-c] 喹啉 -7- 酮和地美司 纳。
“抗 增 殖 剂” 包 括 反 义 RNA 和 DNA 寡 核 苷 酸 如 G3139、 ODN698、 RVASKRAS、 GEM231 和 INX3001 以及抗代谢药如依诺他滨、卡莫氟、喃氟啶、喷司他 丁、脱氧氟尿苷、三甲曲沙、氟达拉滨、卡培他滨、加洛他滨、阿糖胞苷十八烷基磷酸钠 (cytarabine ocfosfate)、fosteabine 钠水合物、雷替曲塞、paltitrexid、乙嘧替氟、噻唑呋 林、地西他滨、诺拉曲塞、培美曲塞、奈拉滨 (nelarabine)、2′ - 脱氧 -2′ - 亚甲基胞 苷、2′ - 氟亚甲基 -2′ - 脱氧胞苷、N-[5-(2，3- 二氢苯并呋喃基 ) 磺酰基 ]-N′ -(3， 4- 二 氯 苯 基 ) 脲、 N6-[4- 脱 氧 -4-[N2-[2(E)，4(E)- 十 四 碳 二 烯 酰 基 ] 甘 氨 酰 基 氨 基 ]-L- 甘油 -B-L- 甘露庚糖吡喃糖基 (mannoheptopyranosyl)] 腺嘌呤、 aplidine、海鞘 素 (ecteinascidin)、曲沙他滨、4-[2- 氨基 -4- 氧代 -4，6，7，8- 四氢 -3H- 嘧啶并 [5， 4-b]-1，4- 噻嗪 -6- 基 -(S)- 乙基 ]-2，5- 噻吩酰基 -L- 谷氨酸、氨喋呤、5- 氟尿嘧啶、 阿拉诺新、11- 乙酰基 -8-( 氨基甲酰氧基甲基 )-4- 甲酰基 -6- 甲氧基 -14- 氧杂 -1， 11- 二氮杂四环 (7.4.1.0.0) 十四碳 -2，4，6- 三烯 -9- 基乙酸酯、八氢吲嗪三醇、洛美曲 索、右雷佐生、蛋氨酸酶、2′ - 氰基 -2′ - 脱氧 -N4- 棕榈酰基 -1-B-D- 阿拉伯呋喃糖 基胞嘧啶和 3- 氨基吡啶 -2- 甲醛缩氨基硫脲。 “抗增殖剂” 还包括在 “血管生成抑制 剂” 项下所列的那些以外的生长因子的单克隆抗体，如曲妥单抗，以及肿瘤抑制基因， 如 p53，其可以通过重组病毒介导基因转移被递送 ( 例如参见美国专利 No.6,069,134)。
用于检测 TGF-β 受体 I 激酶抑制剂的细胞测定法
作为实例，检测了抑制剂消除 TGF-β 介导的生长抑制的能力。
将肺上皮细胞系 Mv1Lu 的细胞以确定的细胞密度种于 96- 孔微量滴定板中并在 标准条件下培养超过 16 小时。 然后将培养基替换成包含 0.5 ％ FCS 和 1ng/ml TGF-β 的培养基，加入确定浓度的供试物质，一般以具有 5 倍步骤稀释系列的形式加入。 溶剂 DMSO 的浓度恒定为 0.5％。 48 小时后，对细胞进行结晶紫染色。 由固定的细胞提取结 晶紫后，用分光光度计在 550nm 处测量吸收。 可将其用作存在的粘附细胞的定量量度， 从而作为培养过程中细胞增殖的定量量度。
用于测定抑制剂对 TGF-β
促进作用的抑制效力的体外 ( 酶 ) 测定法
以 384- 孔 Flashplate 测定板进行激酶测定。 在存在或不存在供试物质 (5-10 个浓 度 ) 的情况下，将 31.2nM GST-ALK5、439nM GST-SMAD2 和 3mM ATP(0.3pCi 33P-ATP/ 孔 ) 以 35μl 总体积 (20mM HEPES、10mMMgCl、5mM MnCI、1mM DTT、0.1％ BSA， pH 7.4) 于 30℃孵育 45 分钟。 用 25μl 的 200mM EDTA 溶液使反应停止，30 分钟后室 温下抽滤，用 100μl 的 0.9％ NaCl 溶液洗涤孔 3 次。 在 TopCount 中测定放射性。 使用 RS1 计算 IC50 值。
表 1 ：TGF-β 的抑制
化合物号 “A1” “A8” “A10”IC50[nM] 48 97 4630CN 102015724 A CN 102015734 A说“A25” “A26” “A33” “A34” “A42” “A50” “A52” “A56”明87 77 74 36 67 22 54 79书23/45 页
在上文和下文中，所有温度均以℃表示。 在下面的实施例中， “常规后处理” 表示 ：如果必要，加入水，如果必要，将 pH 调到 2 至 10 的值，这取决于终产物的构成， 用乙酸乙酯或二氯甲烷萃取混合物，分离各相，用硫酸钠干燥有机相并蒸发，通过硅胶 色谱和 / 或结晶对产物进行纯化。 硅胶上的 Rf 值 ；洗脱剂 ：乙酸乙酯 / 甲醇 9 ∶ 1。
质谱 (MS) ：EI( 电子轰击电离 )M+
FAB( 快速原子轰击 )(M+H)+
ESI( 电喷雾电离 )(M+H)+
APCI-MS( 大气压化学电离 - 质谱 )(M+H)+
保留时间 Rt[ 分钟 ] ：用 HPLC 进行测定
柱 ：Merck 的 Chromolith SpeedROD，50×4.6mm2( 订货号 1.51450.0001)
梯度 ：5.0min，t ＝ 0min，A ∶ B ＝ 95 ∶ 5，t ＝ 4.4min ：A ∶ B ＝ 25 ∶ 75， t ＝ 4.5min 至 t ＝ 5.0min ：A ∶ B ＝ 0 ∶ 100
流速 ：3.00ml/min
洗脱剂 A ：水 +0.1％ TFA( 三氟乙酸 )，
洗脱剂 B ：乙腈 +0.08％ TFA
波长 ：220nm
LC-MS 条件
具有以下特征的 Hewlett Packard HP 1100 系列系统 ：离子源 ：电喷雾 ( 正模 式 ) ；扫描 ：100-1000m/e ；碎裂电压 ：60V ；气体温度 ：300℃， DAD ：220nm。
流速 ：2.4ml/min。 在 DAD 后所用的分流器将 MS 流速降低至 0.75ml/min。
柱 ：Chromolith SpeedROD RP-18e 50-4.6
溶剂 ：Merck KGaA 的 LiChrosolv 级
溶剂 A ：H2O(0.01％ TFA)
溶剂 B ：ACN(0.008％ TFA) 梯度 ： 20％ B → 100％ B ：0min 至 2.8min 100％ B ：2.8min 至 3.3min 100％ B → 20％ B ：3.3min 至 4min 下面实施例中所示的保留时间 Rf[min] 和 M+H+ 数据 MW 是 LC-MS 测定的测定结果。 实施例 1
5- 氨基 -2- 环丙基 -4-(5- 甲基呋喃 -2- 基 ) 噻吩并 [2，3-d] 嘧啶 -6- 甲酰胺 ( “A1” ) 的制备
用于 “A1” 合成的合成流程图
1.1 在三颈烧瓶中，将 9.1ml 5- 甲基 -2- 羧基呋喃甲醛 ( “E1” ) 溶于 70ml 二 氯甲烷中。 然后加入 8ml 氰基乙酸甲酯和 45g 氧化铝，将混合物在室温下搅拌 2h。
对于后处理，将氧化铝抽滤掉。 用二氯甲烷充分冲洗它。 蒸发黄色溶液直到仅 存在固体，得到 15.3g 2- 氰基 -3-(5- 甲基呋喃 -2- 基 ) 丙烯酸甲酯。
HPLC-MS ：[M+H]192
1.2 在制备中，在具有干燥管的圆底烧瓶中，将 460mg 元素钠溶于 8.0ml 干燥的 乙醇中。 然后在 100ml 圆底烧瓶中将 3.827g 2- 氰基 -3-(5- 甲基呋喃 -2- 基 ) 丙烯酸甲 酯和 2.49g 环丙基胍 ( “E2” ) 盐酸盐混悬于 35ml 1- 丁醇中。 加入无色乙醇钠溶液， 在 110-115℃ ( 浴温 ) 下搅拌得到的橙色混悬液几小时。
对于后处理，将反应冷却至 RT，倒入冰水中。 用少量冰乙酸将 pH 调至 5-6，使 乳剂通过抽滤器，然后用软化水冲洗。 用甲醇研磨油状粗产物，再次抽滤，得到 1.8418g 2- 环丙基 -4- 羟基 -6-(5- 甲基呋喃 -2- 基 ) 嘧啶 -5- 甲腈。
HPLC 含量 ：97.8％
HPLC-MS ：[M+H]242
1.3 在 100ml 圆底烧瓶中，将 1.841g 2- 环丙基 -4- 羟基 -6-(5- 甲基呋喃 -2- 基 ) 嘧啶 -5- 甲腈吸收于 10.3ml 磷酰氯中，加热至 120℃，搅拌 2h。 将 5ml 磷酰氯加入到该 过程中形成的黑棕色溶液中，在升高的温度下再将混合物搅拌 1 小时。
对于后处理，将该批次冷却至 RT，用 20ml 二氯甲烷稀释，倒至碎冰上以破坏 过量的 POCl3。 将乳液转移到分液漏斗中并再次充分混合。 分离二氯甲烷相，然后用 25ml 二氯甲烷萃取水相。 将硫酸钠加入到合并的二氯甲烷相中，放置 2 天。 过滤掉干 燥剂，将溶液蒸发至干。 将残余物混悬于乙腈中，抽滤，得到 507.9mg 4- 氯 -2- 环丙 基 -6-(5- 甲基呋喃 -2- 基 ) 嘧啶 -5- 甲腈浅粉色粉末。
HPLC 含量 ：97.5％
HPLC-MS ：[M+H]260
1.4 在具有磁力搅拌器的 100ml 圆底烧瓶中，将 250mg 4- 氯 -2- 环丙基 -6-(5- 甲 基呋喃 -2- 基 ) 嘧啶 -5- 甲腈溶于 10ml 二 烷中，加入 1.42g 氢氧化钾溶液，w ＝ 10％ ( 相当于 3 当量 )。 然后引入 115.5mg 巯基乙酰胺，在该过程中黄色溶液变成深棕色。 将反应混合物在 110 ℃下煮沸 4h，在室温下搅拌过夜。 对于后处理，将软化水加入到 反应混合物中，在该过程中沉淀出黄色结晶。 将沉淀物抽滤出，得到 165.4mg 2-[5- 氰 基 -2- 环丙基 -6-(5- 甲基呋喃 -2- 基 ) 嘧啶 -4- 基 - 硫基 ] 乙酰胺嫩黄色结晶。 HPLC 含量 ：97.8％
HPLC-MS ：[M+H]315
1 H - NMR (500 MHz ， DMSO - d 6) δ ( ppm ) ：7 . 41(1 H ， d ) ， 7 . 39(2 H ， br ， NH2)，7.22(2H， br， NH2)，6.47(1H， d)，3.57(2H， s， CH2)，2.48(3H， s， CH3)， 2.24(1H， m， CH)，1.09(4H， m)。
1.5 在具有磁力搅拌器的 900ml 圆底烧瓶中，将 165.4mg 2-[5- 氰基 -2- 环丙 基 -6-(5- 甲基呋喃 -2- 基 ) 嘧啶 -4- 基 - 硫基 ] 乙酰胺混悬于 2ml DMF 中，分份三次加 入 295mg 氢氧化钾， w ＝ 10％，将混合物在室温下搅拌 3h。
对于后处理，对混悬的产物进行抽滤，用软化水洗涤，得到 59.0mg 所期望的终 产物 (5- 氨基 -2- 环丙基 -4-(5- 甲基呋喃 -2- 基 ) 噻吩并 [2，3-d] 嘧啶 -6- 甲酰胺 ) 嫩 黄色细结晶。
HPLC 含量 ：100％
HPLC-MS ：[M+H]315
1 H - NMR (500 MHz ， DMSO - d 6) δ ( ppm ) ：7 . 42(1 H ， d ) ， 7 . 39(2 H ， br ， NH2)，7.24(2H， br， NH2)，6.47(1H， d)，2.47(3H， s， CH3)，2.24(1H， m， CH)， 1.09(4H， m)。 所有下面的 NMR 光谱用与 “A1” 相同的方法记录。
用下列化合物替换掉 “E1” 类似地得到了以下相应的化合物 ： 6- 甲基吡啶 -2- 甲醛 “A2”， 苯并呋喃 -2- 甲醛 “A3” 4，5- 二甲基呋喃 -2- 甲醛 “A4” 呋喃 -2- 甲醛 “A5” 咪唑并 [1，2-a] 吡啶 -2- 甲醛 “A6” 苯并噻唑 -2- 甲醛 “A7” 5- 氟吡啶 -2- 甲醛 “A55”
实施例 2 5- 氨基 -4- 呋喃 -2- 基 -2- 甲硫基噻吩并 [2，3-d] 嘧啶 -6- 甲酰胺 ( “A8” )的制备 2.1 将 13ml 糠醛和 13.3ml 氰基乙酸甲酯在烧瓶中合并，加入 60g 氧化铝，在该 过程中温度升至 53℃。 加入 50ml 二氯甲烷后，将反应混合物在室温下搅拌 2 小时。 对 于后处理，过滤掉氧化铝，蒸发滤液，得到 23.3615g 2- 氰基 -3- 呋喃 -2- 基丙烯酸甲酯 ( “E3” )。
HPLC 含量 ：97.7％
HPLC-MS ：[M+H]178
2.2 在制备中，将 1.3g 元素钠溶于 15ml 乙醇中。 然后在 250ml 圆底烧瓶中将 5g 2- 氰基 -3- 呋喃 -2- 基丙烯酸甲酯和 5.2g 硫脲 ( “E4” ) 混悬于 50ml 丁醇中，加入溶 解的乙醇钠。 在 110℃下搅拌混悬液 5.5 小时。
对于后处理，将该批次冷却至室温，倒在冰上，用乙酸将 pH 调至 3-4，抽滤出 沉淀物，得到 2.454g 4- 呋喃 -2- 基 -6- 羟基 -2- 甲硫基嘧啶 -5- 甲腈。
HPLC 含量 ：98％
HPLC-MS ：[M+H]234
2.3 在 250ml 圆底烧瓶中，将 1.4ml POCl3 加入到 2.454g 4- 呋喃 -2- 基 -6- 羟 基 -2- 甲硫基嘧啶 -5- 甲腈中，在搅拌下将该深棕色混悬液在 120℃下加热 5h。
对于后处理，将该批次冷却至室温，加入 25ml 二氯甲烷，将混合物加入冰中以 破坏残余的 POCl3。 用水和二氯甲烷进一步稀释两相，分离有机相，用二氯甲烷萃取水 相 3 次。 用水洗涤合并的有机相，干燥，过滤并蒸发至干，得到 2.0772g 粗产物。 用乙 醇研磨该粗产物，得到 1.4544g 4- 氯 -6- 呋喃 -2- 基 -2- 甲硫基嘧啶 -5- 甲腈。
HPLC 含量 ：94％
HPLC-MS ：[M+H]252
2.4 在 50ml 烧瓶中，将 4- 氯 -6- 呋喃 -2- 基 -2- 甲硫基嘧啶 -5- 甲腈混悬于
10ml 二烷中，首先加入 1.57g(3 当量 )10％ KOH 和 128mg 巯基乙酰胺。 将棕色溶液在 110℃下搅拌 4.5h，再加入 2eq KOH，将混合物在 RT 下搅拌过夜。
对于后处理，将冰加入到该批次中，抽滤出细小的沉淀产物，得到 88mg 所期望 的终产物 5- 氨基 -4- 呋喃 -2- 基 -2- 甲硫基噻吩并 [2，3-d] 嘧啶 -6- 甲酰 ( “A8” )。
HPLC 含量 ：92％
HPLC-MS ：[M+H]307
1H-NMR(500MHz， DMSO-d6)δ(ppm) ：8.12(1H， dd)，7.55(1H， dd)， 7.43(2H， br， NH2)，7.28(2H， br， NH2)，6.85(1H， m)，2.61(3H， s， SCH3)。
用下列化合物替换 “E3” 类似地得到以下相应的化合物 ： 苯并呋喃 -2- 甲醛 “A9” 5- 甲基呋喃 -2- 甲醛 “A10”实施例 3-37
进行实施例 1 的操作，但是用呋喃 -2- 甲醛作为 “E1”，用胍作为 “E2”，得 到 2，5- 二氨基 -4- 呋喃 -2- 基噻吩并 [2，3-d] 嘧啶 -6- 甲酰胺 ( “A11” )δ8.0(d， 1H)，7.3(d，1H)，7.2-6.8(BR，6H)，6.7(m，1H)，4.6(d，1H)。
进行实施例 1 的操作，但是用胍作为 “E2”，得到 2，5- 二氨基 -4-(5- 甲基呋 喃 -2- 基 ) 噻吩并 [2，3-d] 嘧啶 -6- 甲酰胺 ( “A11a” )δ7.2(m，3H)，7.0(s，2H)， 6.9(s，2H)，6.4(d，1H)，2.4(s，3H)。
进 行 实 施 例 1 的 操 作， 但 是 用 苯 并 呋 喃 -2- 甲 醛 作 为 “E1”， 用 胍 作 为 “E2”， 得 到 2，5- 二 氨 基 -4- 苯 并 呋 喃 -2- 基 噻 吩 并 [2，3-d] 嘧 啶 -6- 甲 酰 胺 ( “A12”)δ7.8(dd，2H)，7.7(s，1H)，7.5(t，1H)，7.4(t，1H)，7.2(s，2H)，7.1(s， 2H)，7.0(s，2H)。
进行实施例 1 的操作，但是用苯并呋喃 -2- 甲醛作为 “E1”，用吡啶 -2- 甲脒作 为 “E2”，得到 5- 氨基 -4- 苯并呋喃 -2- 基 -2- 吡啶 -3- 基噻吩并 [2，3-d] 嘧啶 -6- 甲 酰胺 ( “A13” )。
进行实施例 1 的操作，但是用 6- 甲基吡啶 -6- 甲醛作为 “E1”，用吡啶 -2- 甲 脒作为 “E2”，得到 5- 氨基 -4-(6- 甲基吡啶 -2- 基 )-2- 吡啶 -3- 基噻吩并 [2，3-d] 嘧 啶 -6- 甲酰胺 ( “A14” )。
进行实施例 1 的操作，但是用喹啉 -6- 甲醛作为 “E1”，用胍作为 “E2”，得到 2，5- 二氨基 -4- 喹啉 -6- 基噻吩并 [2，3-d] 嘧啶 -6- 甲酰胺 ( “A15” )。
进行实施例 1 的操作，但是用呋喃 -2- 甲醛作为 “E1”，用 4，5- 二甲基哒 嗪 -1- 甲脒作为 “E2”，得到 5- 氨基 -2-(3，5- 二甲基吡唑 -1- 基 )-4- 呋喃 -2- 基噻 吩并 [2，3-d] 嘧啶 -6- 甲酰胺 ( “A16” )。
进 行 实 施 例 1 的 操 作， 但 是 用 吡 啶 -2- 甲 脒 作 为 “E2”， 得 到 2，5- 二 氨 基 -4-(5- 甲基呋喃 -2- 基 ) 噻吩并 [2，3-d] 嘧啶 -6- 甲酰胺 ( “A17”)δ8.8(d，1H)， 8.5(d，1H)，8.0(t，1H)，7.6(d，1H)，7.5(t，1H)，7.4(s，2H)，7.3(s，2H)，6.5(d， 1H)，2.5(s，3H)。
进行实施例 1 的操作，但是用 6- 甲基吡啶 -2- 甲醛作为 “E1”，用吡啶 -2- 甲 脒作为 “E2”，得到 5- 氨基 -4-(6- 甲基吡啶 -2- 基 )-2- 吡啶 -2- 基噻吩并 [2，3-d] 嘧啶 -6- 甲酰胺 ( “A18” )δ8.8(m，1H)，8.6(d，1H)，8.47(s，2H)，8.45(d，1H)， 8.1-8.0(BR，2H)，7.6(m，2H)，7.4(s，2H)，2.7(s，3H)。
进行实施例 1 的操作，但是用吡唑 -1- 甲脒作为 “E2”，得到 5- 氨基 -4-(5- 甲 基呋喃 -2- 基 )-2- 吡唑 -1- 基噻吩并 [2，3-d] 嘧啶 -6- 甲酰胺 ( “A19” )δ8.8(d， 1 H ) ， 7 . 9( m ， 1 H ) ， 7 . 7( d ， 1 H ) ， 7 . 6( s ， 2 H ) ， 7 . 3( s ， 2 H ) ， 6 . 6( m ， 1 H ) ， 6 . 5( m ， 1H)，2.5(s，3H)。
进行实施例 1 的操作，但是用吗啉 -4- 甲脒作为 “E2”，得到 5- 氨基 -4-(5- 甲 基呋喃 -2- 基 )-2- 吗啉 -4- 基噻吩并 [2，3-d] 嘧啶 -6- 甲酰胺 ( “A51” )。
进行实施例 1 的操作，但是用 2- 吗啉 -4- 基乙基甲脒作为 “E2”，得到 5- 氨 基 -4-(5- 甲基呋喃 -2- 基 )-2-(2- 吗啉 -4- 基乙基氨基 ) 噻吩并 [2，3-d] 嘧啶 -6- 甲酰 胺 ( “A57” )δ7.2(d，1H)， /.13(s，2H)，6.9(s，1H)，6.6(s，2H)，6.4(d，1H)， 3.59-3.57(m，3H)，3.5(q，2H)，2.6(t，2H)，2.48-2.45(BR，8H)。
进行实施例 1 的操作，但是用 6- 甲基吡啶 -2- 甲醛作为 “E1”，用胍作为 “E2”，得到 2，5- 二氨基 -4-(6- 甲基吡啶 -2- 基 ) 噻吩并 [2，3-d] 嘧啶 -6- 甲酰胺 ( “A20” )δ8.07(s，2H)，8.05-7.94(BR，2H)，7.5(d，1H)，7.1(s，2H)，6.9(s， 2H)，2.6(s，3H)。
进行实施例 1 的操作，但是用 6- 甲基吡啶 -2- 甲醛作为 “E1”，用烯丙基脲 作为 “E2”，得到 2- 烯丙基氨基 -5- 氨基 -4-(6- 甲基吡啶 -2- 基 ) 噻吩并 [2，3-d] 嘧 啶 -6- 甲酰胺 (“A50”)δ8.1(s，2H)，8.0(m，2H)，7.9(s，1H)，7.5(d，1H)，7.0(s， 2H)，6.0(m，1H)，5.2(d，1H)，5.1(d，1H)，4.0(s，2H)，2.6(s，3H)。
进行实施例 1 的操作，但是用 6- 甲基吡啶 -2- 甲醛作为 “E1”，用丙 -2- 炔基 胍作为 “E2”，得到 5- 氨基 -4-(6- 甲基吡啶 -2- 基 )-2- 丙 -2- 炔基氨基噻吩并 [2， 3-d] 嘧啶 -6- 甲酰胺 ( “A52”)δ8.4-8.8(BR，8H)，7.5(d，1H)，7.0(s，2H)，2.6(s， 3H)。
进行实施例 1 的操作，但是用 6- 甲基吡啶 -2- 甲醛作为 “E1”，用丁 -3- 炔基 胍作为 “E2”，得到 5- 氨基 -2-(2- 氰基乙基氨基 )-4-(6- 甲基吡啶 -2- 基 ) 噻吩并 [2， 3-d] 嘧啶 -6- 甲酰胺 ( “A56” )。
进行实施例 1 的操作，但是用 6- 甲基吡啶 -2- 甲醛作为 “E1”，用吗啉 -4- 甲 脒作为 “E2”，得到 5- 氨基 -4-(6- 甲基吡啶 -2- 基 )-2- 吗啉 -4- 基噻吩并 [2，3-d] 嘧 啶 -6- 甲酰胺 ( “A53” )。
进行实施例 1 的操作，但是用 6- 甲基吡啶 -2- 甲醛作为 “E1”，用 3- 苄氧基 丙基胍作为 “E2”，得到 5- 氨基 -2-(3- 苄氧基丙基氨基 )-4-(6- 甲基吡啶 -2- 基 ) 噻 吩并 [2，3-d] 嘧啶 -6- 甲酰胺 ( “A54” )。
进行实施例 1 的操作，但是用苯并呋喃 -2- 甲醛作为 “E1”，用吗啉 -4- 甲脒作 为 “E2”，得到 5- 氨基 -4- 苯并呋喃 -2- 基 -2- 吗啉 -4- 基噻吩并 [2，3-d] 嘧啶 -6- 甲 酰胺 ( “A21” )。
进行实施例 1 的操作，但是用 4，5- 二甲基呋喃 -2- 甲醛作为 “E1”，用胍作为 “E2”，得到 2，5- 二氨基 -4-(4，5- 二甲基呋喃 -2- 基 ) 噻吩并 [2，3-d] 嘧啶 -6- 甲 酰 胺 ( “A22” )δ7.3(s，2H)，7.1(s，1H)，7.0(s，2H)，6.9(s，2H)，2.4(s，3H)， 2.0(s，3H)。
进行实施例 1 的操作，但是用 4，5- 二甲基呋喃 -2- 甲醛作为 “E1”，用吡 啶 -2- 甲脒作为 “E2”，得到 5- 氨基 -4-(4，5- 二甲基呋喃 -2- 基 )-2- 吡啶 -2- 基噻 吩并 [2，3-d] 嘧啶 -6- 甲酰胺 ( “A23” )。
进行实施例 1 的操作，但是用苯并呋喃 -2- 甲醛作为 “E1”，用吡啶 -2- 甲脒作 为 “E2”，得到 5- 氨基 -4- 苯并呋喃 -2- 基 -2- 吡啶 -2- 基噻吩并 [2，3-d] 嘧啶 -6- 甲 酰胺 ( “A24” )。
进行实施例 1 的操作，但是用呋喃 -2- 甲醛作为 “E1”，用 2，2- 二甲基丙脒 作为 “E2”，得到 5- 氨基 -2- 叔丁基 -4- 呋喃 -2- 基噻吩并 [2，3-d] 嘧啶 -6- 甲酰胺 (“A25”)δ8.0(s，1H)，7.5(d，1H)，7.4(s，2H)，7.3(s，2H)，6.8(m，1H)，1.4(s， 9H)。
进行实施例 1 的操作，但是用 2，2- 二甲基丙脒作为 “E2”，得到 5- 氨基 -2- 叔 丁基 -4-(5- 甲基呋喃 -2- 基 ) 噻吩并 [2，3-d] 嘧啶 -6- 甲酰胺 (“A26”)δ7.6-7.3(BR， 3H)7.2(s，2H)，6.5(s，1H)，2.5(s，3H)，1.4(s，9H)。
进 行 实 施 例 1 的 操 作， 但 是 用 苯 并 呋 喃 -2- 甲 醛 作 为 “E1”， 用 乙 脒 (azetamidine) 作为 “E2”，得到 5- 氨基 -4- 苯并呋喃 -2- 基 -2- 甲基噻吩并 [2，3-d] 嘧 啶 -6- 甲 酰 胺 ( “A27” )δ7.9(s，1H)，7.85(s，1H)，7.84(s，1H)，7.5(t，1H)， 7.4(t，1H)，7.3(s，4H)，2.8(s，3H)。
进行实施例 1 的操作，但是用呋喃 -2- 甲醛作为 “E1”，用 N- 甲基胍作为 “E2”， 得 到 5- 氨 基 -4- 呋 喃 -2- 基 -2- 甲 基 氨 基 噻 吩 并 [2，3-d] 嘧 啶 -6- 甲 酰 胺 ( “A28” )δ8.0(s，1H)，7.6-7.0(BR，5H)，7.0(s，1H)，6.8(m，1H)，2.9(s，3H)。
进行实施例 1 的操作，但是用苯并呋喃 -2- 甲醛作为 “E1”，用 N- 甲基胍作为 “E2”，得到 5- 氨基 -4- 苯并呋喃 -2- 基 -2- 甲基氨基噻吩并 [2，3-d] 嘧啶 -6- 甲酰胺 ( “A29” )δ7.8(s，4H)，7.8-7.78(BR，3H)，7.5(t，1H)，7.4(t，1H)，7.0(s，4H)， 2.5(m，3H)。
进行实施例 1 的操作，但是用 4，5- 二甲基呋喃 -2- 甲醛作为 “E1”，用乙脒作 为 “E2”，得到 5- 氨基 -4-(4，5- 甲基呋喃 -2- 基 )-2- 甲基噻吩并 [2，3-d] 嘧啶 -6- 甲 酰胺 ( “A30” )δ7.4(s，1H)，7.2(s，4H)，2.7(s，3H)，2.4(s，3H)，2.0(s，3H)。
进行实施例 1 的操作，但是用呋喃 -2- 甲醛作为 “E1”，用乙脒作为 “E2”， 得到 5- 氨基 -4- 呋喃 -2- 基 -2- 甲基噻吩并 [2，3-d] 嘧啶 -6- 甲酰胺 (“A31”)δ8.1(s， 1H)，7.5(d，1H)，7.3(s，2H)，7.2(s，2H)，6.8(m，1H)，2.7(s，3H)。
用本领域技术人员已知的方法对 “A10” 进行氧化，得到 5- 氨基 -2- 甲磺酰 基 -4-(5- 甲基呋喃 -2- 基 ) 噻吩并 [2，3-d] 嘧啶 -6- 甲酰胺 ( “A32”)δ7.7(d，1H)， 7.6-7.4(BR，4H)，6.6(m，1H)，3.5(s，3H)，2.5(s，3H)。
一个标准方法是于室温下在四氢呋喃中与间氯过苯甲酸一起搅拌 1h 进行氧化。
进行实施例 1 的操作，但是用 6- 甲基吡啶 -2- 甲醛作为 “E1”，用 2，2- 二甲 基丙脒作为 “E2”，得到 5- 氨基 -2- 叔丁基 -4-(6- 甲基吡啶 -2- 基 ) 噻吩并 [2，3-d] 嘧 啶 -6- 甲酰胺 (“A33”)δ8.4(s，2H)，8.3(d，1H)，8.0(t，1H)，7.5(d，1H)，7.3(s， 2H)，2.6(s，3H)，1.4(s，9H)。
进行实施例 1 的操作，但是用 N- 甲基胍作为 “E2”，得到 5- 氨基 -2- 甲基氨 基 -4-(5- 甲基呋喃 -2- 基 ) 噻吩并 [2，3-d] 嘧啶 -6- 甲酰胺 ( “A34”)δ7.3-7.1(BR， 3H)，7.0(s，3H)，6.4(s，1H)，2.9(s，3H)，2.5(s，3H)。
进行实施例 1 的操作，但是用 N-(3- 二甲基氨基丙基 ) 胍作为 “E2”，得到 5- 氨基 -2-(3- 二甲基氨基丙基氨基 )-4-(5- 甲基呋喃 -2- 基 ) 噻吩并 [2，3-d] 嘧啶 -6- 甲 酰胺 ( “A35” )。
进行实施例 1 的操作，但是用 4- 乙基磺酰哌嗪 -1- 甲脒作为 “E2”，得到 5- 氨 基 -2-(4- 乙磺酰基哌嗪 -1- 基 )-4-(5- 甲基呋喃 -2- 基 ) 噻吩并 [2，3-d] 嘧啶 -6- 甲酰 胺 ( “A36” )。 如实施例 “A32” 所述进行氧化。
进行实施例 1 的操作，但是用 6- 甲基吡啶 -2- 甲醛作为 “E1”，用 N-(3- 羟基 丙基 ) 胍作为 “E2”，得到 5- 氨基 -2-(3- 羟基丙基氨基 )-4-(6- 甲基吡啶 -2- 基 ) 噻 吩并 [2，3-d] 嘧啶 -6- 甲酰胺 ( “A37” )。
进行实施例 1 的操作，但是用 N-(4- 二甲基氨基丁基 ) 胍作为 “E2”，得到 5- 氨基 -2-(4- 二甲基氨基丁基氨基 )-4-(5- 甲基呋喃 -2- 基 ) 噻吩并 [2，3-d] 嘧啶 -6- 甲 酰胺 ( “A38” )。
进行实施例 1 的操作，但是用苯并噻唑 -2- 甲醛作为 “E1”，用 N- 甲基胍作为 “E2”，得到 5- 氨基 -4- 苯并噻唑 -2- 基 -2- 甲基氨基噻吩并 [2，3-d] 嘧啶 -6- 甲酰胺 ( “A39” )。
进行实施例 2 的操作，但是用苯并呋喃 -2- 甲醛作为 “E3”，用 N-(2- 二乙基 氨基乙基 ) 胍作为 “E4”，得到 5- 氨基 -4- 苯并呋喃 -2- 基 -2-(2- 二乙基氨基乙基氨 基 ) 噻吩并 [2，3-d] 嘧啶 -6- 甲酰胺 ( “A40” )。
进行实施例 1 的操作，但是用苯并 [b] 噻吩 -2- 甲醛作为 “E1”，用吗啉 -4- 甲 酰胺作为 “E2”，得到 5- 氨基 -4- 苯并 [b] 噻吩 -2- 基 -2- 吗啉 -4- 基噻吩并 [2，3-d] 嘧啶 -6- 甲酰胺 ( “A41” )。
进 行 实 施 例 1 的 操 作， 但 是 用 N- 烯 丙 基 胍 作 为 “E2”， 得 到 2- 烯 丙 基 氨 基 -5- 氨基 -4-(5- 甲基呋喃 -2- 基 ) 噻吩并 [2，3-d] 嘧啶 -6- 甲酰胺 ( “A42” )。
进行实施例 1 的操作，但是用 4，5- 二甲基呋喃 -2- 甲醛作为 “E1”，用 4， 5- 二甲基哒嗪 -1- 甲脒作为 “E2”，得到 5- 氨基 -4-(4，5- 二甲基呋喃 -2- 基 )-2-(3， 5- 二甲基吡唑 -1- 基 ) 噻吩并 [2，3-d] 嘧啶 -6- 甲酰胺 ( “A43” )。
进行实施例 1 的操作，但是用 N-(3- 苄氧基丙基 ) 胍作为 “E2”，得到 5- 氨 基 -2-(3- 苄氧基丙基氨基 )-4-(5- 甲基呋喃 -2- 基 ) 噻吩并 [2，3-d] 嘧啶 -6- 甲酰胺 ( “A44”)δ7.6-7.5(BR，1H)，7.3(m，5H)，7.3-7.1(BR，3H)，6.9(s，2H)，6.4(d， 1H)，4.5(s，2H)，3.57(t，2H)，3.49(t，2H)，2.5(s，3H)，1.9(m，2H)。
进行实施例 1 的操作，但是用 N-[3-(4- 甲基哌嗪 )-1- 基 ] 丙基 ] 胍作为 “E2”， 得到 5- 氨基 -4-(5- 甲基呋喃 -2- 基 )-2-[3-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 丙基氨基 ] 噻吩并 [2， 3-d] 嘧啶 -6- 甲酰胺 ( “A45” )。
通过对 “A44” 进行氢化得到 “A46”。
进 行 实 施 例 1 的 操 作， 但 是 用 5- 甲 基 -2- 羧 基 呋 喃 甲 醛 作 为 “E1”， 用 N-[3-(2- 二甲基氨基乙氧基 ) 丙基胍作为 “E2”，得到 5- 氨基 -2-[3-(2- 二甲基氨基乙 氧基 ) 丙基氨基 ]-4-(5- 甲基呋喃 -2- 基 ) 噻吩并 [2，3-d] 嘧啶 -6- 甲酰胺 (“A47”)。
用 本 领 域 技 术 人 员 已 知 的 方 法 对 “A8” 进 行 氧 化， 得 到 5- 氨 基 -4- 呋 喃 -2- 基 -2- 甲磺酰基噻吩并 [2，3-d] 嘧啶 -6- 甲酰胺 (“A48”)。 如实施例 “A32”中 所述进行氧化。 δ8.2(s，1H)，7.8(d，1H)，7.6-7.5(BR，4H)，7.0(m，1H)，3.5(s， 3H)。
实施例 A ：注射小瓶使用 2N 盐酸将 100g 本发明的活性化合物和 5g 磷酸氢二钠在 3l 重蒸馏水中的溶 液调节至 pH 6.5，无菌过滤，转移至注射小瓶中，在无菌条件下冷冻干燥，在无菌条件 下密封。 每个注射小瓶含有 5mg 活性化合物。
实施例 B ：栓剂
将 20g 本发明的活性化合物与 100g 大豆卵磷脂和 1400g 可可脂的混合物熔化， 倒入模具中，使其冷却。 每枚栓剂含有 20mg 活性化合物。
实施例 C ：溶液
制备 1g 本发明的活性化合物、9.38g NaH2PO4 ·2H2O、28.48gNa2HPO4 ·12H2O 和 0.1g 苯扎氯铵在 940ml 重蒸馏水中的溶液。 将 pH 调节至 6.8，将溶液补足至 1l，通过 照射灭菌。 该溶液能以滴眼剂的形式使用。
实施例 D ：软膏剂
将 500mg 本发明的活性化合物与 99.5g 凡士林在无菌条件下混合。 实施例 E ： 片剂
以常规方式将 1kg 活性化合物、4kg 乳糖、1.2kg 马铃薯淀粉、0.2kg 滑石粉和 0.1kg 硬脂酸镁的混合物压制成片剂，使得每片含有 10mg 活性化合物。
实施例 F ：糖锭剂 (dragee)
按照与实施例 E 类似的方式压制片剂，然后以常规方式用蔗糖、马铃薯淀粉、 滑石粉、西黄蓍胶和染料的包衣层包衣。实施例 G ：胶囊剂
以常规方式将 2kg 活性化合物装入硬明胶胶囊中，使得每粒胶囊含有 20mg 活性 化合物。
实施例 H ：安瓿剂
将 1kg 本发明的活性化合物在 60l 重蒸馏水中的溶液无菌过滤，转移至安瓿中， 在无菌条件下冷冻干燥，在无菌条件下密封。 每支安瓿含有 10mg 活性化合物。53