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作为 SMO 抑制剂的哒嗪衍生物
    发明背景
     Hedgehog(Hh) 信号最初在果蝇中作为胚胎图式形成的重要调节机制或者作为胚 细胞形成分化组织的有序立体排布的过程的重要调节机制被识别 (Nusslein-Volhard 等 人 (1980)Nature 287， 795-801)。在哺乳动物细胞中已经识别了三种 Hedgehog 基因， 即 Sonic Hedgehog(Shh)、 Indian Hedgehog(Ihh) 和 Desert Hedgehog(Dhh)。Hedgehog 基因 编码分泌性蛋白， 所述分泌性蛋白进行翻译后修饰、 包括自催化切割以及 N- 末端的脂修饰 ( 棕榈酰化 ) 和 C- 末端的胆甾醇修饰。
     N- 末端脂修饰的 Hedgehog 蛋白引发蛋白通路的信号传导活性， 并且细胞间通 讯通过由信号细胞发送可溶性 Hedgehog 蛋白和被应答细胞接收而引起。在应答细胞中， 12- 次跨膜受体 Patched(Ptch) 充当 Hh 信号的负调节物， 7- 次跨膜蛋白 Smoothened(Smo) 充当 Hh 信号的正调节物。在静止状态下， 游离的 Ptch( 即未与 Hh 结合 ) 以亚化学计量抑 制由 Smo 诱导的通路活性 (Taipale 等 (2002)Nature 418 ： 892) ； 但是， 一旦与配体 Hh 蛋白 结合， Smo 的抑制就被解除， 并且所产生的信号级联放大导致 Gli 转录因子 (Gli1、 Gli2 和 Gli3) 的活化和核易位。
     Hh 信号转录的下游靶基因包括 Wnts、 TGFβ、 Ptc 和 Gli1， 它们是正和负调节反馈 环的元件。多种细胞周期和增殖调节基因如 c-myc、 细胞周期蛋白 D 和 E 也是 Hh 信号的靶 基因。
     已知 Hh 信号以组织特异性和剂量依赖的方式调节多种生物学过程， 例如细胞增 殖、 分化和器官形成。在神经管的发育中， Shh 在底板中表达并指导神经元的特定亚型 ( 包 括运动神经元和多巴胺能神经元 ) 的分化。还已知 Hh 调节神经祖细胞如小脑颗粒细胞和 神经干细胞的增殖。在肠道的发育中， 低水平的 Hh 信号是胰脏发育所必需的， 而高水平的 Hh 信号阻断胰脏器官形成。还已知 Hh 在皮肤、 前列腺、 睾丸和骨髓的干细胞增殖和器官形 成中发挥重要作用。
     通常， 在细胞增殖、 分化和胚胎图式形成期间， Hh 信号受到严格的控制。但是， 例 如， 由组成性激活通路的突变所引起的 Hedgehog 信号传导通路的异常活性可产生病理性 后果。例如， 在 Gorlin’ s 综合征 ( 一种具有高的皮肤癌和脑癌患病风险的遗传性综合征， 还称为基底细胞痣综合征 (BCNS)) 中发现了 Patched 的失功能突变 ； 并且 Smo 和 Gli 的获 功能突变与基底细胞癌和成胶质细胞瘤相关。基底细胞癌 (BCC) 是皮肤癌的最常见形式， 每年有 90,000 以上的美国人患病。已发现， Hh 的组成性活化可促进 BCC、 成神经管细胞瘤 ( 最常见的儿童脑肿瘤 )、 横纹肌肉瘤、 胰癌、 小细胞肺癌、 前列腺癌和乳癌中的肿瘤发生。 除了在肿瘤发生中的作用外， Hh 信号还在前列腺癌的转移中有牵涉。Hh 信号可能在多种其 它肿瘤类型中有牵涉， 这种联系仍有待继续发现 ； 在世界范围的许多癌症中心， 这是一个活 跃的研究领域。
     这些癌细胞的增殖需要 Hh 通路的活化， 阻断 Hh 信号传导通路通常会抑制癌细胞 的增殖。确实， Hh 拮抗剂环杷明 (cyclopamine) 和 Gli1 siRNA 可有效地阻断这些癌细胞 的增殖并且在异种移植模型中可减小肿瘤的大小， 这表明新的 Hh 拮抗剂能够提供新的用
     于治疗这些癌症的化学治疗剂。 Hh 拮抗剂环杷明已经显示出在动物模型中可抑制前列腺癌 的转移。
     除了在癌症中有牵涉外， Hh 信号在正常组织的内稳态和再生中也起着重要作用。 在小鼠模型中， Hh 通路在视网膜、 胆管、 肺、 骨和前列腺受损后被激活。Hh 通路在毛囊、 骨髓 和中枢神经系统 (CNS) 的某些区域也是恒定有活性的， 并且良性前列腺增生和湿性黄斑变 性中的血管形成均需要 Hedgehog 通路活性。细胞再生过程可以被抗 -Shh 抗体和环杷明阻 断。因此， Hh 信号传导通路的小分子拮抗剂可能可用于治疗神经元增殖性疾病、 良性前列 腺增生、 湿性黄斑变性、 银屑病、 骨髓增殖性疾病和白血病、 骨硬化病和毛发去除。
     Smo 的组成性活化导致癌症 ( 例如 BCC) 的证据以及 Smo 脱离 Ptch 的抑制时可能具 有致癌性的证据提示了 Smo 拮抗剂在治疗这类疾病用作治疗剂的用处 (Stone 等人 (1996) Nature 384 ： 129)。因此， 调节 Hedgehog 信号传导通路的活性的分子、 例如调节 Smo 活性的 分子在治疗上是有用的。
     发明概述
     概括而言， 本发明涉及与诊断和治疗 Hedgehog 通路相关性病状有关的新化合物， 所述病状包括但不限于肿瘤形成、 癌症、 瘤形成和非恶性过度增殖性障碍。本发明包括新 化合物、 新组合物、 它们的使用方法和它们的制备方法， 其中所述化合物通常可以在其作用 机理涉及采用抑制 Hedgehog 和 Smo 信号传导通路的活性剂来抑制肿瘤发生、 肿瘤生长和 肿瘤生存的方法的治疗中用作活性剂。本发明的化合物和方法 ( 例如式 I 化合物 ) 涉及 抑制 Hedgehog 信号传导通路活化， 例如通过抑制由表型如 Ptc 失功能、 Hedgehog 获功能、 Smoothened 获功能或 Gli 获功能所引起的异常生长状态， 包括将细胞与足以激动正常 Ptc 活性、 拮抗正常 Hedgehog 活性或拮抗 Smoothened 活性的量的本发明的化合物 ( 例如式 I 化合物 ) 接触 ( 例如以逆转或控制异常的生长状态 )。
     本发明涉及式 (I) 化合物或其可药用盐 ：
     其中 ：
     R1 是 C6-14 芳基或 5-14 元杂芳基， 其可以是未取代的或者被一个或多个 C1-8 烷基、 C6-14 芳基、 C1-8 卤代烷基、 C1-8 烷氧基、 卤素、 NH2、 CN、 OCF3、 OH、 C(O)NR6R8、 C(O)R6、 NR6R8、 NHC(O)R6、 SO2R6 或 SO2NR6R8 取代 ；
     R2 和 R3 独立地是 C1-8 烷基、 C1-8 烷基 OH， 或者 R2 和 R3 形成稠合的 C3-14 环烷基 ；
     L 是 价 键、 C1-8 亚 烷 基、 -C(O)O-、 -C(O)NR9-、 -C1-8 烷 基 OH-、 -C1-8 卤 代 烷 基 -、 -C(O)-、 -NH- 或 -O- ；
     X 和 W 独立地是 N 或 CR5， 且 X 或 W 中至少一个是 N ；
     R7 是 C6-14 芳基、 5-14 元杂芳基或 3-14 元环杂烷基 ；
     R4 是 C1-8 烷基、 C2-8 烯基、 C3-14 环烷基、 C6-14 芳基、 5-14 元杂芳基、 3-14 元环杂烷 基、 C1-8 烷氧基、 卤素、 NR6R8、 C(O)OR6、 C(O)NR6R8、 C1-8 卤代烷基、 甲酰基、 烷酯基、 C1-8 烷基 OH、 C(O)R6、 SO2R6、 C(O)NHC1-8 烷基 R6、 NR6R8、 SO2NR6R8、 OCF3、 NHC(O)R6、 CH2OC(O)NR6R8、 CH2NR6R8、 NHC(O)OR6、 NHC(O)NR6R8、 CH2NHSO2R6、 CH2NHC(O)OR6、 OC(O)R6 或 NHC(O)R6， 其可 以是取代的或末取代的 ；
     Z 是 C1-8 烷基、 CN、 OH 或卤素 ；
     m 和 p 独立地是 0 至 3 ；
     Y 是价键、 C1-8 亚烷基、 -C(O)-、 -C(O)O-、 -CH(OH)- 或 -C(O)NR10 ；
     R5 是 H、 卤素、 CN、 低级烷基、 OH、 OCH3 或 OCF3 ；
     R9 和 R10 独立地是 C1-8 烷基或 H ； R6 和 R8 独立地是 H、 C1-8 烷基、 C2-8 烯基、 C3-14 环烷基、 C6-14 芳基、 5-14 元杂芳基、 3-14 元环杂烷基、 C1-8 卤代烷基、 C1-8 烷基 OH、 C1-8 烷氧基， 或者一个原子上的两个 R6 或 R6 和 R8 可以形成含杂原子的环 ； 且
     其中 R4、 R6 和 R8 可以是未取代的或者被一个或多个 C1-8 烷基、 C3-14 环烷基、 C6-14 芳基、 5-14 元杂芳基、 3-14 元环杂烷基、 C1-8 烷基 OH、 OH、 氧代基、 C1-8 卤代烷基、 羧基 C1-8 烷 基或 SO2C1-8 烷基、 卤素、 -OCH3、 -OCF3、 -OH、 -NH2 取代。
     在一项实施方案中， 本发明包括如下定义的式 (I) 化合物 ： 其中 R7 是
     在另一项实施方案中， 本发明包括权利要求 1 的式 (I) 化合物 ： 其中 R1 是
     在 另 一 项 实 施 方 案 中， 本 发 明 包 括 如 下 定 义 的 式 (I) 化 合 物 ： 其中8102143958 A CN 102143965说明书且 R1 是4/100 页R7
     在另一项实施方案中， 本发明包括如下定义的式 (I) 化合物 ： 其中 R4 是 C(O)OC1-8 烷基、 CF3、 C(O)OR6、 C(O)NR6R8、 C1-8 卤代烷基、 C1-8 烷基 OH、 C(O)R6、 SO2R6、 C(O)NHC1-8 烷基 R6、 C(CH3)(CH3)(OH)、 C(O)CH3、 C(CH2)CH3 或 C(CH3)(CH2OH)OH ； 且 R6 和 R8 独立地是 H、 C1-8 烷基、 C1-8 烯基、 C3-14 环烷基、 C6-14 芳基、 5-14 元杂芳基或 3-14 元环杂烷基。
     在另一项实施方案中， 本发明包括如下定义的式 (I) 化合物 ： 其中 R7 是
     R4 是 C1-8 烷基， 例如甲基、 乙基、 丙基或丁基 ； C2-8 烯基， 例如乙烯基或丙烯基 ； C3-14 环烷基， 例如环丙基、 环丁基、 环戊基或环己基 ； C6-14 芳基， 例如苯基 ； 5-14 元杂芳基， 例如吡 啶基或咪唑基 ； 3-14 元环杂烷基， 例如哌啶基、 吗啉基、 吡咯烷基或哌嗪基 ； C1-8 烷氧基， 例 如甲氧基、 乙氧基或丙氧基 ； 卤素， 例如 Cl、 F、 Br 或 I ； NR6R8， 例如 NHC1-8 烷基 ； C(O)OR6， 例 如 C(O)OC1-8 烷基或 C(O)OH ； C(O)NR6R8， 例如 C(O)NHC6-14 芳基、 C(O)NC6-14 芳基 C1-8 烷基或 C(O)-5-14 元杂芳基或 C(O)-3-14 元环杂烷基 ； C1-8 卤代烷基， 例如 CF3 ； 甲酰基 ； 烷酯基 ； C1-8 烷基 OH， 例如 CH2OH、 在任意位置上被 OH 取代的乙基、 在任意位置上被 OH 取代的丙基或在任 意位置上被 OH 取代的丁基 ； C(O)R6， 例如 C(O)C1-8 烷基 ； SO2R6， 例如 SO2C1-8 烷基或 SO2CF3 ； C(O)NHC1-8 烷基 R6， 例如 C(O)NHC1-8 烷基 OH 或 C(O)NHC1-8 烷基 CF3 ； SO2NR6R8， 例如 SO2NHC1-8 烷基 ； OCF3 ； NHC(O)R6， 例如 NHC(O)C1-8 烷基 ； CH2OC(O)NR6R8、 CH2NR6R8、 NHC(O)OR6、 NHC(O) NR6R8、 CH2NHSO2R6、 CH2NHC(O)OR6、 OC(O)R6 或 NHC(O)R6， 其中 R4 可以是未取代或取代的 ； 且 p 是 0， 1 或 2。
     在另一项实施方案中， R6 和 R8 独立地是 H ； C1-8 烷基， 例如甲基、 乙基、 丙基或丁基 ； C2-8 烯基， 例如烯基、 丙烯基 ； C3-14 环烷基， 例如环丙基、 环丁基、 环戊基或环己基 ； C6-14 芳基，
     例如苯基 ； 5-14 元杂芳基， 例如吡啶基或嘧啶基 ； 3-14 元环杂烷基， 例如吗啉基、 哌啶基、 吡 咯烷基或哌嗪基 ； C1-8 卤代烷基， 例如 CF3 ； C1-8 烷基 OH ； C1-8 烷氧基， 例如甲氧基或乙氧基 ； 或 一个原子上的两个 R6 或 R6 和 R8 可以形成含杂原子的环， 例如 5-14 元杂芳基或 3-14 元环 杂烷基。
     在本发明的另一项实施方案中， R4 可以是未取代的或者被一个或多个如下基团取 代： C1-8 烷基， 例如甲基、 乙基、 丙基、 丁基或戊基 ； C3-14 环烷基， 例如环丙基、 环丁基、 环戊基 或环己基 ； C6-14 芳基， 例如苯基 ； 5-14 元杂芳基， 例如吡啶基或嘧啶基 ； 3-14 元环杂烷基， 例 如吗啉基、 哌啶基、 吡咯烷基或哌嗪基 ； C1-8 烷基 OH， 例如 CH3OH ； OH ； 氧代基 ； C1-8 卤代烷基， 例如 CF3 ； 羧基 C1-8 烷基或 SO2C1-8 烷基 ； 卤素， 例如 Cl、 F、 Br 或 I ； -OCH3、 -OCF3 或 -NH2。
     在另一项实施方案中， R4 是甲基、 苯基、 吡啶基、 甲氧基、 Cl、 F、 C(O)OC1-8 烷基、 C(O) OH、 C(O)NHC6-14 芳基、 C(O)NC6-14 芳基 C1-8 烷基、 C(O)-5-14 元杂芳基、 C(O)-3-14 元环杂烷 基、 CF3、 CH2OH、 CH2CH2OH、 C(CH3)(CH3)OH、 C(O)CH3、 C(O)CH2CH3、 SO2C1-8 烷基、 SO2CF3、 C(O)NHC1-8 烷基 OH、 C(O)NHC1-8 烷基 CF3、 SO2NHC1-8 烷基、 OCF3、 NHC(O)CH3 或 CH2OC(O)NHCH3 ； 其各自可以 是未取代或取代的 ； 且 p 是 0、 1 或 2。
     在另一项实施方案中， R4 是 C(O)CH3、 C(O)NH- 苯基、 C(O)OH、 CF3、 C(CH3)(CH3)OH、 C(O)OCH3、 CF3、 C(O)OCH2CH3 或 C(O)NCH2CH3， 其任选被哌嗪基、 吗啉基或吡啶基取代。
     在优选的实施方 且案中， R7是R4 是 C(O)CH3、 C(O)NH- 苯基、 C(O)OH、 CF3、 C(CH3)(CH3)OH、 C(O)OCH3、 CF3 或 C(O) OCH2CH3。
     在另一项实施方案中， 本发明包括如下定义的式 (I) 化合物 ： 其中 R1 是
     其各自 可以是未取代的或者被一个或多个如下基团取代 ： C1-8 烷基， 例如甲基、 乙基、 丙基 ( 例如异 丙基 )、 丁基、 戊基或己基 ； C6-14 芳基， 例如苯基 ； C1-8 卤代烷基， 例如 CF3 ； C1-8 烷氧基， 例如 甲氧基或乙氧基 ； 卤素， 例如 Cl、 F、 Br 或 I ； NH2、 CN、 OCF3、 OH、 C(O)NR6R8、 C(O)R6、 NR6R8、 NHC(O)R6、 SO2R6 或 SO2NR6R8。
     在另一项实施方案中， R1 是
     其各自可以是未取代的或者被一个或多个甲氧基、 Cl、 F、 NH2、 CN、 OCF3 或 OH。在另一项实施方案中， 如下基团取代 ： 甲基、 乙基、 CF3、 R1 可以是未取代的或者被 CH3、 Cl、 F、 甲氧基或 CH 取代。
     在另一项实施方案中， 本发明包括如下定义的式 (I) 化合物 ： 其中 R7 是
     且 R1 是其可以是未取代的或者被一个或多个 如下基团取代 ： 甲基、 乙基、 异丙基、 Cl、 F、 CN、 甲氧基或 CF3。
     在另一项实施方案中， 本发明包括如下定义的式 (I) 化合物 ： 其中 R4 是 C(O)OC1-8 烷基、 CF3、 C(O)OR6、 C(O)NR6R8、 C1-8 卤代烷基、 C1-8 烷基 OH、 C(O)R6、 SO2R6、 C(O)NHC1-8 烷基 R6、 C(CH3)(CH3)(OH)、 C(O)CH3、 CH2-CH2-CH3 或 C(CH3)(CH2OH)OH。
     在一项实施方案中， R6 和 R8 独立地是 H、 甲基、 乙基、 环戊基、 环己基、 苯基、 吡啶 基、 吗啉基、 哌啶基、 吡咯烷基或哌嗪基、 CF3、 甲氧基， 一个原子上的两个 R6 或 R6 和 R8 可以 形成含杂原子的环， 例如 5-14 元杂芳基如吡啶基或嘧啶基 ； 或 3-14 元环杂烷基如哌啶基或 哌嗪基。
     在 另 一 项 实 施 方 案 中， 本 发 明 包 括 如 下 定 义 的 式 (I) 化 合 物 ： 其 中 R4 是其可以是未取代或取代的。在另一项实施方案中， 本发明包括如下定义的式 (I) 化合物 ： 其中 R2 和 R3 是 C1-8 烷基如甲基、 乙基， 或者与它们所连接的碳原子一起形成 C4-7 环烷基。 在另一项实施方案中， R2 和 R3 各自是甲基， 或者形成环戊基或环己基。
     在另一项实施方案中， 本发明包括如下定义的式 (I) 化合物 ： 其中 R2 和 R3 是 CH3。
     在另一项实施方案中， 本发明包括如下定义的式 (I) 化合物 ： 其中 L 是 -O-、 -NH-、 C(O)-、 -CH(OH)-、 -CH2-、 -CF2-、 -CHF-、 -C(OH)- 或价键。 在另一项实施方案中， 本发明包括其 中 L 是 -CH2- 的式 (I) 化合物。在另一项实施方案中， 本发明包括如下定义的式 (I) 化合 物： 其中 X 和 W 均是 N， Z 是 CH3， 且 m 是 1。
     在另一项实施方案中， p 是 0、 1 或 2。在另一项实施方案中， p 是 0 或 1。在另一项 实施方案中， p 是 1。
     在 另 一 项 实 施 方 案 中， Y 是 价 键、 C1-8 亚 烷 基 如 亚 甲 基、 亚 乙 基、 亚丙 基、 -C(O)-、 -C(O)O-、 -CH(OH)- 或 -C(O)NR10， 其中 R10 是 C1-8 烷基如甲基、 乙基、 丙基或丁 基或 H。在另一项实施方案中， Y 是价键、 亚甲基、 -C(O)O- 或 C(O)NH。在另一项实施方案 中， Y 是价键。
     在另一项实施方案中， 本发明包括式 (Ia) 化合物或其可药用盐 ：
     其中 ：
     R11 是 C1-8 烷基、 C2-8 烯基、 C3-14 环烷基、 C6-14 芳基、 5-14 元杂芳基、 3-14 元环杂烷基、 C1-8 烷氧基、 卤素、 NR13R14、 C(O)OR13、 C(O)NR13R14、 C1-8 卤代烷基、 甲酰基、 烷酯基、 C1-8 烷基 OH、 C(O)R13、 SO2R13、 C(O)NHC1-8 烷基 R13、 NR13R14、 SO2NR13R14、 OCF3、 NHC(O)R13、 CH2OC(O) NR13R14、 CH2NR13R14、 NHC(O)OR13、 NHC(O)NR13R14、 CH2NHSO2R13、 CH2NHC(O)OR13、 OC(O)R13 或 NHC(O)R13， 其可以是取代或未取代的 ；
     R12 是 H、 C1-8 烷基、 C6-14 芳基、 C1-8 卤代烷基、 C1-8 烷氧基、 卤素、 NH2、 CN、 OCF3、 OH、 C(O)NR13R14、 C(O)R13、 NR13R14、 NHC(O)R13、 SO2R13、 SO2NR13R14 ；
     R13 和 R14 独立地是 H、 C1-8 烷基、 C2-8 烯基、 C3-14 环烷基、 C6-14 芳基、 5-14 元杂芳基、 3-14 元环杂烷基、 C1-8 卤代烷基、 C1-8 烷基 OH、 C1-8 烷氧基， 或者一个原子上的 R13 和 R14 可 以形成含杂原子的环 ； 且
     其中 R11、 R13 和 R14 可以是未取代的或者被一个或多个 C1-8 烷基、 C3-14 环烷基、 C6-14 芳基、 5-14 元杂芳基、 3-14 元环杂烷基、 C1-8 烷基 OH、 OH、 氧代基、 C1-8 卤代烷基、 羧基 C1-8 烷基或 SO2C1-8 烷基、 卤素、 -OCH3、 -OCF3、 -OH、 -NH2 取代。
     在另一项实施方案中， 本发明包括选自如下的化合物 ：
     2-[(R)-4-(4， 5- 二 甲 基 -6- 苯 氧 基 - 哒 嗪 -3- 基 )-2- 甲 基 -3， 4， 5， 6- 四 氢 -2H-[1， 2′ ] 联吡嗪 -5′ - 基 ]- 丙烷 -2- 醇 ；
     2-{(R)-4-[6-( 羟基 - 苯基 - 甲基 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )-2- 甲基 -3， 4， 5， 6- 四氢 -2H-[1， 2] 联吡嗪 -5′ - 基 ]- 丙烷 -2- 醇 ；
     2-[(R)-4-(4， 5- 二甲基 -6- 吡啶 -4- 基甲基 - 哒嗪 -3- 基 )-2- 甲基 -3， 4， 5， 6- 四 氢 -2H-[1， 2′ ] 联吡嗪 -5′ - 基 ]- 丙烷 -2- 醇 ；
     2-[(R)-4-(4， 5- 二甲基 -6- 吡啶 -2- 基甲基 - 哒嗪 -3- 基 )-2- 甲基 -3， 4， 5， 6- 四 氢 -2H-[1， 2′ ] 联吡嗪 -5′ - 基 ]- 丙烷 -2- 醇 ；
     2-[(R)-4-(6- 苄基 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )-2- 甲基 -3， 4， 5， 6- 四氢 -2H-[1， 2′ ] 联吡嗪 -5′ - 基 ]- 丙烷 -2- 醇 ；
     2-[4-(6- 苄 基 -4， 5- 二 甲 基 - 哒 嗪 -3- 基 )-3， 4， 5， 6- 四 氢 -2H-[1， 2’ ] 联吡 嗪 -5′ - 基 ]- 丙烷 -2- 醇 ；
     2-[(S)-4-(6- 苄基 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )-2- 甲基 -3， 4， 5， 6- 四氢 -2H-[1， 2′ ] 联吡嗪 -5′ - 基 ]- 丙烷 -2- 醇 ；
     2-[(R)-4-(6- 苄基 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )-2- 乙基 -3， 4， 5， 6- 四氢 -2H-[1， 2′ ] 联吡嗪 -5′ - 基 ]- 丙烷 -2- 醇 ；
     2-[4-(4- 苄 基 -6， 7- 二 氢 -5H- 环 戊 二 烯 并 [d] 哒 嗪 -1- 基 )-3， 4， 5， 6- 四 氢 -2H-[1， 2′ ] 联吡嗪 -5′ - 基 ]- 丙烷 -2- 醇 ；
     2-[(R)-4-(4- 苄基 -6， 7- 二氢 -5H- 环戊二烯并 [d] 哒嗪 -1- 基 )-2- 甲基 -3， 4，
     5， 6- 四氢 -2H-[1， 2′ ] 联吡嗪 -5′ - 基 ]- 丙烷 -2- 醇 ；
     1-[(R)-4-(6- 苄基 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )-2- 甲基 -3， 4， 5， 6- 四氢 -2H-[1， 2′ ] 联吡嗪 -5′ - 基 ]- 乙酮 ； 和
     2-[(R)-4-(6- 苄基 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )-2- 甲基 -3， 4， 5， 6- 四氢 -2H-[1， 2′ ] 联吡嗪 -5′ - 基 ]- 丙烷 -1， 2- 二醇。
     本发明的一个方面提供了使用化合物来抑制 Smo- 依赖型通路活化的方法。本 发明的另一个方面提供了使用化合物来抑制 Hedgehog( 配体 )- 非依赖型通路活化的方 法。在一些实施方案中， 本发明的方法可用于抵抗 Hedgehog 通路的不希望的活化 ( 例如由 Hedgehog 获功能、 Ptc 失功能或 Smoothened 获功能突变引起 ) 的表型作用。例如， 本发明 的方法可涉及将细胞 ( 体外或体内 ) 与足以拮抗 Smoothened- 依赖型和 / 或 Hedgehog 非 依赖型活化通路的量的 Smo 拮抗剂、 例如本发明的化合物 ( 例如式 I 化合物 ) 或其它小分 子接触。
     本发明的化合物和方法可用于体外和 / 或体内调节细胞增殖和 / 或分化 ( 例如在 由干细胞形成组织的过程中 )， 或者用于阻止过度增殖性细胞的生长。 在另一项特定的实施 方案中， 将细胞与本发明的化合物 ( 例如式 I 化合物 ) 接触或将所述化合物引入细胞内引 起了细胞增殖的抑制、 肿瘤细胞生长和 / 或生存的抑制和 / 或肿瘤发生的抑制。因此， 另一 项特定的实施方案提供了通过在肿瘤细胞内应用本发明的化合物 ( 例如式 I 化合物 ) 来抑 制和 / 或拮抗 Hh 通路的方法。
     本发明的方法可以应用配制为包含可药用赋形剂或载体的药物制剂的本发明的 化合物 ( 例如式 I 化合物 )， 所述制剂可以施用于患者以治疗涉及不希望的细胞增殖的病症 如癌症和 / 或肿瘤 ( 例如成神经管细胞瘤、 基底细胞癌等 ) 和非恶性过度增殖性障碍。
     本发明的一项实施方案提供了用于在体外或体内抑制细胞内的 Smo 蛋白的合成、 表达、 产生、 稳定化、 磷酸化、 细胞内再定位和 / 或活性的化合物和方法， 该方法包括将所述 细胞与本发明的化合物 ( 例如式 I 化合物 ) 接触或将所述化合物引入所述细胞内。
     本发明的另一个方面提供了在特征为 Smo 基因或基因产物 ( 例如 Smo 蛋白 ) 的 存在和 / 或表达的哺乳动物中诊断、 预防和 / 或治疗细胞虚弱 (debilitations)、 紊乱和 / 或功能障碍 ； 增生性、 过度增殖性和 / 或癌性疾病状态 ； 和 / 或肿瘤细胞转移的化合物和方 法， 其包括式 (I) 化合物以及将其以治疗有效量施用于哺乳动物。
     发明详述
     在另一项实施方案中， 本发明包括包含治疗有效量的式 I 或 Ia 化合物的药物组合 物。在另一项实施方案中， 本发明包括治疗患有 Hedgehog 通路相关性病状的哺乳动物的方 法， 该方法包括给需要治疗的所述哺乳动物施用治疗有效量的式 I 或 Ia 化合物。
     在本说明书中， 术语 “治疗” 包括预防性或阻止性治疗以及治愈性或疾病抑制性治 疗， 包括对有风险罹患本发明的障碍 ( 例如 Hedgehog 相关性障碍 ( 例如癌症 )) 的患者以 及患病患者的治疗。该术语还包括延迟疾病进展的治疗。
     对于 “抑制和 / 或逆转” 例如 Hedgehog 相关性障碍 ( 例如癌症 )， 申请人是指消除 所述的 Hedgehog 相关性障碍 ( 例如糖尿病 ) 或者使所述病症的严重性低于治疗前或未治 疗的情况。
     本文所用的 “治愈” 指通过治疗使患者的 Hedgehog 相关性障碍 ( 例如癌症 ) 或其正在发生的发作减退。
     术语 “预防” 或 “阻止” 指阻抗代谢性障碍如糖尿病的发作或复发。
     “治疗” 或 “处置” 指疗法、 阻止和预防， 尤其指就患者而言为了预防 ( 阻止 ) 或者 在患者受侵扰的情况下治愈或减轻病况、 疾病或病症或事件的程度或其发生可能性而施用 药物或者实施药物操作。
     “诊断” 指诊断、 预测、 监测、 表征、 筛选患者 ( 包括临床试验的参与者 ) 以及识别有 风险患特定障碍或临床事件或者患有它们的患者或者最可能对特定治疗性处置有响应的 那些， 或者评价或监测患者对特定治疗性处置的响应。
     “受治疗者” 或 “患者” 指需要对病症、 障碍或疾病进行治疗的哺乳动物、 优选人。
     本文所用的 “本发明的化合物” 包括但不限于式 I 化合物 ( 例如包括其所有变体 在内的式 (I) 化合物 )。 本发明的化合物包括本文具体列出的化合物、 包括在本申请的实施 例中列出的那些化合物。
     本文所用的 “延迟 ...... 进展” 指将本发明的化合物 ( 例如式 I 化合物 ) 施用于 处于 Hedgehog 相关性障碍 ( 例如癌症 ) 的发病前阶段或早期的患者以防止疾病进一步发 展或者与未施用该活性化合物的疾病的发展相比减缓疾病发展。
     “Hedgehog 获功能” 指 Ptc 基因、 Hedgehog 基因或 Smoothened 基因的异常改变或突 变或者所述基因的表达水平的改变 ( 例如减少 )， 其产生了类似于将细胞与 Hedgehog 蛋白 接触、 例如 Hedgehog 通路异常激活的表型。获功能可以包括 Ptc 基因产物调节 Gli 基因如 Gli1、 Gli2 和 Gli3 的表达水平的能力损失或者调节 Gli 蛋白如 Gli1、 Gli2 和 Gli3 的加工、 稳定、 定位或活性的能力的损失。 术语 “Hedgehog 获功能” 在本文中还用于指由于 Hedgehog 信号转导通路的任意位置的改变 ( 包括但不限于 Hedgehog 自身的改变或突变 ) 而发生的 任何类似的细胞表型 ( 例如表现出过度增殖 )。例如， 由于 Hedgehog 信号传导通路的活化 而具有异常高的增殖速率的肿瘤细胞将具有 “Hedgehog 获功能” 表型， 即使 Hedgehog 在该 细胞内没有发生突变。
     “Patched 失功能” 指 Ptc 基因的异常改变或突变或者该基因表达水平的降低， 其 产生了类似于将细胞与 Hedgehog 蛋白接触、 例如 Hedgehog 通路异常激活的表型。失功能 可以包括 Ptc 基因产物调节 Gli 基因和蛋白如 Gli1、 Gli2 和 Gli3 的表达水平、 加工、 稳定、 定位、 调控或活性的能力的损失。
     “Gli 获功能” 指 Gli 基因的异常改变或突变或者该基因表达水平的增加， 其产生 了类似于将细胞与 Hedgehog 蛋白接触、 例如 Hedgehog 通路异常激活的表型。
     “Smoothened 获功能” 指 Smo 基因的异常改变或突变或者该基因表达水平的增加， 其产生了类似于将细胞与 Hedgehog 蛋白接触、 例如 Hedgehog 通路异常激活的表型。
     本文所用的 “有机小分子” 是分子量低于 3 千道尔顿、 优选低于 1.5 千道尔顿的有 机化合物 ( 或与无机化合物 ( 例如金属 ) 复合的有机化合物 )。
     本文所用的 “报道” 基因可与术语 “标记基因” 互换使用， 它是易于检测的和 / 或 编码易于检测的基因产物如荧光素酶的核酸。
     转录和翻译控制序列是为编码序列在宿主细胞中的表达而准备的 DNA 调节序列 如启动子、 增强子、 终止子等。在真核细胞中， 多腺苷酸化信号是控制序列。
     “启动子序列” 是能够在细胞内结合 RNA 聚合酶和启动下游 (3′方向 ) 编码序列的转录的 DNA 调节域。 为了定义本发明， 启动子序列通过转录起始位点在其 3′末端界定并 延伸上游 (5′方向 ) 以包括在可检测的高于背景的水平上引发转录所需的最少数目的碱 基或元件。在启动子序列内， 将发现转录起始位点 ( 例如通过用 S1 核酸酶绘图来方便地定 义 ) 以及负责结合 RNA 聚合酶的蛋白质结合结构域 ( 共有序列 )。
     当 RNA 聚合酶将编码序列转录成 mRNA( 其然后进行反式 -RNA 剪接并翻译成由编 码序列编码的蛋白质 ) 时， 编码序列处于细胞内的转录和翻译控制序列的 “控制之下” 。
     短语 “可药用” 指当施用于人时在生理学上是可耐受的并且通常不会产生过敏反 应或类似的不良反应如胃扰乱 (gastric upset)、 头晕等的分子实体和组合物。 本文所用的 术语 “可药用” 优选指被联邦或州政府的管理机构所批准或者在美国药典或其它通常认可 的药典中所列出的用于动物、 更特别是人的物质。
     术语 “载体” 指与化合物一起施用的稀释剂、 佐剂、 赋形剂或媒介物。该药用载 体可以是无菌液体如水和油， 包括石油、 动物油、 植物油或合成来源的油， 例如花生油、 豆 油、 矿物油、 芝麻油等。水或水性溶液盐水溶液和葡萄糖水溶液以及甘油溶液优选用作 载体、 尤其是用于注射溶液的载体。适宜的药用载体在 E.W.Martin 的 《雷氏药学科学》 (“Remington′ s Pharmaceutical Sciences” ) 中有记载。 短语 “治疗有效量” 在本文中用于指足以使宿主在活动、 功能和响应方面的临床上 显著的缺陷减少至少约 15％、 优选至少 50％、 更优选至少 90％、 最优选阻止所述缺陷的量。 或者， 治疗有效量足以引起宿主的临床上显著的病症 / 症状改善。
     “活性剂” 指可用于制备药物组合物和诊断组合物的所有物质， 或者可以是可以根 据本发明独立地用于所述目的的化合物、 核酸、 多肽、 片段、 同工型、 变体或其它物质。
     本文所用的 “类似物” 指这样的小有机化合物、 核苷酸、 蛋白质或多肽 ： 其具有与所 述化合物、 核苷酸、 蛋白质或多肽或者与具有本发明的预期活性和治疗作用 ( 例如抑制肿 瘤生长 ) 的化合物相似或相同的活性或功能， 但是不一定包含与优选实施方案的序列或结 构相似或相同的序列或结构。
     “衍生物” 指化合物、 包含已经通过引入氨基酸序列取代、 缺失或增加而改变的母 体蛋白质或多肽的氨基酸序列的蛋白质或多肽或者已经通过引入核苷酸取代或缺失、 增加 或突变而改变的核酸或核苷酸。 衍生的核酸、 核苷酸、 蛋白质或多肽具有与母体多肽相似或 相同的功能。
     “抑制剂” 或 “拮抗剂” 指采用关于 Hh 通路功能的体外和体内分析所识别的抑制性 分子， 例如 Smo 拮抗剂。具体而言， 抑制剂和拮抗剂指减少经由 Hh 通路而发生的信号的化 合物或活性剂。抑制剂可以是减少、 阻断或防止经由该通路的信号的化合物。
     本文所用的 “Hedgehog 相关性障碍”包括与 Hedgehog 通路的破坏或异常有关 的障碍以及与正常、 但是是涉及 Hedgehog 通路活化的不希望的生长状态有关的障碍。 “Hedgehog 相关性障碍” 包括但不限于肿瘤形成、 癌症、 瘤形成、 恶性过度增殖性障碍和非恶 性过度增殖性障碍。 “Hedgehog 相关性障碍” 还包括良性前列腺增生、 银屑病、 湿性黄斑变 性、 骨硬化病和不希望的毛发生长。
     本文所用的术语 “癌症” 包括哺乳动物实体瘤以及血液学恶性病。 “哺乳动物实 体瘤” 包括头颈、 肺、 间皮瘤、 纵隔、 食管、 胃、 胰脏、 肝胆系统、 小肠、 结肠、 结肠直肠、 直肠、 肛门、 肾、 尿道、 膀胱、 前列腺、 尿道、 阴茎、 睾丸、 妇科器官、 卵巢、 乳房、 内分泌系统、 皮肤、
     中枢神经系统、 包括脑的癌症 ； 软组织和骨的肉瘤 ； 以及皮肤和眼内来源的黑素瘤。术语 “血液学恶性病” 包括儿童白血病和淋巴瘤、 霍奇金病、 淋巴细胞和皮肤来源的淋巴瘤、 急 性和慢性白血病、 浆细胞瘤以及与 AIDS 有关的癌症。此外， 可以治疗处于任何发展阶段的 癌症， 例如初期、 转移性和复发的癌症。有关各种类型癌症的信息可参见例如美国癌症协 会 (American Cancer Society) 或例如 Wilson 等人 (1991)Harrison’ s Principles of Internal Medicine， 第 12 版， McGraw-Hill， Inc.。人用和兽用都包括在内。
     尤其可通过本发明的化合物和方法治疗的癌症包括但不限于神经胶质瘤、 成神经 管细胞瘤、 原始神经外胚层瘤 (PNETS)、 基底细胞癌 (BCC)、 小细胞肺癌、 大细胞肺癌、 胃肠 道肿瘤、 横纹肌肉瘤、 软组织肉瘤、 胰脏肿瘤、 膀胱肿瘤和前列腺肿瘤。
     本文所用的术语 “恶性过度增殖性障碍” 包括但不限于癌症、 神经元增殖性障碍、 骨髓增殖性疾病和白血病。
     本文所用的术语 “非恶性过度增殖性障碍” 包括但不限于非恶性和非瘤性的增殖 性障碍， 例如血管内平滑肌增生、 皮肤瘢痕和肺纤维化。
     本文所用的 “卤代” 或 “卤素” 指氟、 氯、 溴和碘。
     本文所用的 “烷基” 指直链或支链饱和烃基。在一些实施方案中， 烷基可以具有 1-10 个碳原子 ( 例如 1-8 个碳原子 )。烷基的实例包括甲基 (Me)、 乙基 (Et)、 丙基 ( 例如 正丙基和异丙基 )、 丁基 ( 例如正丁基、 异丁基、 仲丁基、 叔丁基 )、 戊基 ( 例如正戊基、 异戊 基、 新戊基 ) 等。低级烷基典型地具有至多 4 个碳原子。低级烷基的实例包括甲基、 乙基、 丙基 ( 例如正丙基和异丙基 ) 和丁基 ( 例如正丁基、 异丁基、 仲丁基、 叔丁基 )。 本文所用的 “烯基” 指具有一条或多条碳 - 碳双键的直链或支链烷基。在一些实 施方案中， 烯基可以具有 2-10 个碳原子 ( 例如 2-8 碳原子 )。烯基的实例包括乙烯基、 丙烯 基、 丁烯基、 戊烯基、 己烯基、 丁二烯基、 戊二烯基、 己二烯基等。所述的一条或多条碳 - 碳双 键可以在内部 ( 例如在 2- 丁烯中 ) 或末端 ( 例如在 1- 丁烯中 )。
     本文所用的 “炔基” 指具有一条或多条碳 - 碳三键的直链或支链烷基。在一些实 施方案中， 炔基可以具有 2-10 个碳原子 ( 例如 2-8 碳原子 )。炔基的实例包括乙炔基、 丙炔 基、 丁炔基、 戊炔等。所述的一条或多条碳 - 碳三键可以在内部 ( 例如在 2- 丁炔中 ) 或末 端 ( 例如在 1- 丁炔中 )。
     本文所用的 “烷氧基” 指 -O- 烷基。烷氧基的实例包括甲氧基、 乙氧基、 丙氧基 ( 例 如正丙氧基和异丙氧基 )、 叔丁氧基等。本文所用的 “烷硫基” 指 -S- 烷基。烷硫基的实例 包括甲硫基、 乙硫基、 丙硫基 ( 例如正丙硫基和异丙硫基 )、 叔丁硫基等。
     术语 “烷酯基” 指烷氧羰基， 其中通过羰基基 (C(O)) 与主链连接。实例包括但不 限于甲氧羰基、 乙氧羰基等。
     本文所用的 “氧代基” 指双键键合的氧 ( 即＝ O)。还应理解， 术语 C(O) 指 -C ＝ O 基团， 无论它是酮、 醛还是酸或酸衍生物。类似地， S(O) 指 -S ＝ O 基团。
     本文所用的 “卤代烷基” 指具有一个或多个卤素取代基的烷基。在一些实施方案 中， 卤代烷基可以具有 1-10 个碳原子 ( 例如 1-8 个碳原子 )。卤代烷基的实例包括 CF3、 C2F5、 CHF2、 CH2F、 CCl3、 CHCl2、 CH2Cl、 C2Cl5 等。全卤代烷基、 即其中所有氢原子被卤原子替 代的烷基 ( 例如 CF3 和 C2F5) 包括在 “卤代烷基” 的定义内。例如， C1-10 卤代烷基可以具有 式 -CiH2i+1-jXj， 其中 X 是 F、 Cl、 Br 或 I， i 是 1-10 的整数， 且 j 是 0-21 的整数， 条件是 j 小
     于或等于 2i+1。
     当本文所用的烷基后面存在官能团时 ( 例如烷基 OH)， 认可它指具有一个或多个 官能团取代基的烷基， 所述官能团取代基可以位于烷基链的任意位置。C1-8 烷基 OH 的实例 包括但不限于 CH2OH、 CH2CH2OH、 C(CH3)(CH3)OH、 C(CH3)(CH2OH)OH 等。
     本文所用的 “环烷基” 指非芳族碳环基， 包括环状烷基、 烯基和炔基。环烷基可以 是单环 ( 例如环己基 ) 或多环 ( 例如含有稠合、 桥连和 / 或螺环系 )， 其中碳原子位于环系 内侧或外侧。环烷基作为整体可以具有 3-14 个环原子 ( 例如就单环环烷基而言具有 3-8 个碳原子， 就多环环烷基而言具有 7-14 个碳原子 )。环烷基的任意适宜的环位置可以与 所定义的化学结构共价连接。环烷基的实例包括环丙基、 环丁基、 环戊基、 环己基、 环庚基、 环戊烯基、 环己烯基、 环己二烯基、 环庚三烯基、 降冰片基、 降蒎烷基 (norpinyl)、 降蒈烷基 (norcaryl)、 金刚烷基和螺 [4.5] 癸基及其同系物和异构体等。
     本文所用的 “杂原子” 指除碳或氢以外的任意元素的原子， 包括例如氮、 氧、 硫、 磷 和硒。
     本文所用的 “环杂烷基” 指含有至少一个 ( 例如 1、 2、 3、 4 或 5 个 ) 选自 O、 N和S的 环杂原子且任选含有一条或多条 ( 例如 1、 2 或 3 条 ) 双键或三键的非芳族环烷基。环杂烷 基作为整体可以具有 3-14 个环原子并且含有 1-5 个环杂原子 ( 例如就单环环杂烷基而言 具有 3-6 个环原子， 就多环环杂烷基而言具有 7-14 个环原子 )。环杂烷基可以在产生稳定 结构的任意杂原子或碳原子上与所定义的化学结构共价连接。 环杂烷基环上的一个或多个 N 或 S 原子可以被氧化 ( 例如吗啉 N- 氧化物、 硫吗啉 S- 氧化物、 硫吗啉 S， S- 二氧化物 )。 环杂烷基还可以含有一个或多个氧代基团， 例如邻苯二酰亚氨基、 哌啶酮基、 唑烷酮基、 2， 4(1H， 3H)- 二氧代 - 嘧啶基、 吡啶 -2(1H)- 酮基等。环杂烷基的实例还包括吗啉基、 硫吗 啉基、 吡喃基、 咪唑烷基、 咪唑啉基、 唑烷基、 吡唑烷基、 吡唑啉基、 吡咯烷基、 吡咯啉基、 四 氢呋喃基、 四氢噻吩基、 哌啶基、 哌嗪基等。
     本文所用的 “芳基” 指芳族单环烃环系或者其中环系中的至少一个环是芳族烃环 且环系中的任意其它环仅包括烃的多环环系。在一些实施方案中， 单环芳基可以具有 6-14 个碳原子， 多环芳基可以具有 8-14 个碳原子。芳基可以在产生稳定结构的任意碳原子上 与所定义的化学结构共价连接。在一些实施方案中， 芳基可以仅具有芳族碳环， 例如苯基、 1- 萘基、 2- 萘基、 蒽基、 菲基等。在其它实施方案中， 芳基可以是其中至少一个芳族碳环与 一个或多个环烷基或环杂烷基环稠合 ( 即与之共有键 ) 的多环环系。该芳基的实例还包括 环戊烷的苯并衍生物 ( 即茚满基， 其为 5， 6- 双环环烷基 / 芳族环系 )、 环己烷的苯并衍生 物 ( 即四氢萘基， 其为 6， 6- 双环环烷基 / 芳族环系 )、 咪唑啉的苯并衍生物 ( 即苯并咪唑 啉基， 其为 5， 6- 双环环杂烷基 / 芳族环系 ) 和吡喃的苯并衍生物 ( 即色烯基， 其为 6， 6- 双 环环杂烷基 / 芳族环系 )。芳基的其它实例包括苯并二 烷基、 苯并二氧杂环戊烯基、 色满 基、 二氢吲哚基等。
     本文所用的 “杂芳基” 指含有至少一个选自 O、 N 和 S 的环杂原子的芳族单环环系 或者其中环系中至少一个环是芳族的且含有至少一个环杂原子的多环环系。 杂芳基作为整 体可以具有 5-14 个环原子和包含 1-5 个环杂原子。在一些实施方案中， 杂芳基可以包括与 一个或多个芳族碳环、 非芳族碳环或非芳族环杂烷基环稠合的单环杂芳基环。杂芳基可以 在产生稳定结构的任意杂原子或碳原子上与所定义的化学结构共价连接。通常来说， 杂芳基环不含有 O-O、 S-S 或 S-O 键。但是， 杂芳基中的一个或多个 N 或 S 原子可以被氧化 ( 例 如吡啶 N- 氧化物、 噻吩 S- 氧化物、 噻吩 S， S- 二氧化物 )。该杂芳基环的实例包括吡咯基、 呋喃基、 噻吩基、 吡啶基、 嘧啶基、 哒嗪基、 吡嗪基、 三唑基、 四唑基、 吡唑基、 咪唑基、 异噻唑 基、 噻唑基、 噻二唑基、 异 唑基、 唑基、 二唑基、 吲哚基、 异吲哚基、 苯并呋喃基、 苯并噻 唑基、 苯并 二唑基、 苯并 唑基、 噌啉基、 1H- 吲唑基、 吩基、 喹啉基、 2- 甲基喹啉基、 异喹啉基、 喹喔啉基、 喹唑啉基、 苯并三唑基、 苯并咪唑基、 苯 并噻唑基、 苯并异噻唑基、 苯并异 2H- 吲唑基、 吲嗪基、 异苯并呋喃基、 萘啶基、 酞嗪基、 蝶啶基、 嘌呤基、 唑并吡啶基、 噻唑并 吡啶基、 咪唑并吡啶基、 呋喃并吡啶基、 噻吩并吡啶基、 吡啶并嘧啶基、 吡啶并吡嗪基、 吡啶 并哒嗪基、 噻吩并噻唑基、 噻吩并 唑基、 噻吩并咪唑基等。杂芳基的其它实例包括 4， 5， 6， 7- 四氢吲哚基、 四氢喹啉基、 苯并噻吩并吡啶基、 苯并呋喃并吡啶基等。
     当单独或组合使用时， 本文所定义的术语 “低级烷基” 指含有 1-6 个碳原子的烷 基。烷基可以是支链或直链的并且如上文所定义。
     术语 “低级烯基” 指含有 2-6 个碳原子的烯基。烯基是含有至少一条碳 - 碳双键的 烃基。 如本文所定义， 它可以是未取代的或者被本文所述的取代基所取代。 碳 - 碳双键可以 在烯基的任意两个碳原子之间。优选它含有 1 或 2 条碳 - 碳双键， 更优选含有 1 条碳 - 碳 双键。烯基可以是直链或支链的。其实例包括但不限于乙烯基、 1- 丙烯基、 2- 丙烯基、 1- 丁 烯基、 2- 丁烯基、 2- 甲基 -1- 丙烯基、 1， 3- 丁二烯基等。
     本文所用的术语 “低级炔基” 指含有 2-6 个碳原子的炔基。炔基是含有至少一条 碳 - 碳三键的烃基。 碳 - 碳三键可以在炔基的任意两个碳原子之间。 在一项实施方案中， 炔 基含有 1 或 2 条碳 - 碳三键， 更优选含有 1 条碳 - 碳三键。炔基可以是直链或支链的。其 实例包括但不限于乙炔基、 1- 丙炔基、 2- 丙炔基、 1- 丁炔基、 2- 丁炔基等。
     本发明包括所有可药用的同位素标记的本发明的化合物， 即式 (I) 化合物， 其中 一个或多个原子被具有相同原子数、 但原子质量或质量数不同于自然界常发现的原子质量 或质量数的原子所代替。
     适于包含在本发明的化合物中的同位素的实例包括 ： 氢的同位素， 例如 2H 和 3H ； 碳 11 13 14 36 18 的同位素， 例如 C、 C 和 C ； 氯的同位素， 例如 Cl ； 氟的同位素， 例如 F ； 碘的同位素， 例 123 125 13 15 I5 17 18 如 I和 I； 氮的同位素， 例如 N 和 N ； 氧的同位素， 例如 O、 O 和 O ； 磷的同位素， 例 32 35 如 P； 和硫的同位素， 例如 S。
     一些同位素标记的式 (I) 化合物、 例如掺入了放射性同位素的那些可用于药物 和 / 或底物组织分布研究。考虑到其易于掺入和容易检测， 放射性同位素氚 ( 即 3H) 和 碳 -14( 即 14C) 尤其可用于该目的。
     用较重同位素如氘 ( 即 2H) 取代由于较高的代谢稳定性可以提供一些治疗益处， 例如体内半衰期增加或剂量需求降低， 因此在一些情况中可以是优选的。 11 18 15
     用发射正电子的同位素如 C、 F、 O 和 13N 取代可用于正电子发射断层扫描 (PET) 研究， 以检验底物受体占有率。
     同位素标记的式 (I) 化合物通常可以通过本领域技术人员已知的常规技术或通 过与所附实施例和制备例中所述方法类似的方法、 采用适当的同位素标记的试剂代替以前 使用的未标记的试剂来制备。任意酸性的本发明的化合物的可药用盐是与碱形成的盐， 即阳离子盐， 例如碱金 属和碱土金属盐， 例如钠、 锂、 钾、 钙、 镁和铵盐， 例如铵、 三甲铵、 二乙铵和三 ( 羟基甲基 ) 甲 铵盐。
     类似地， 酸加成盐如矿物酸、 有机羧酸和有机磺酸如盐酸、 甲磺酸、 马来酸的酸加 成盐能够提供碱性基团如氨基或吡啶基， 构成结构的一部分。
     本发明涉及如下发现 ： 通过本发明的化合物能够调控受 Hh 和 / 或 Smo 调节的信号 转导通路。
     在一项实施方案中， 本发明的化合物和方法包含用于抑制 Smo- 依赖型通路活化 的式 (I) 化合物。本发明的另一方面包括用于抑制 Hedgehog( 配体 )- 非依赖型通路活化 的化合物和方法。在一些实施方案中， 本发明的化合物和方法可用于抵抗 Hedgehog 通路 的不希望的活化的表型作用， 例如产生自 Hedgehog 获功能、 Ptc 失功能或 Smoothened 获 功能突变的那些。例如， 本发明的化合物和方法可涉及将细胞 ( 体外或体内 ) 与足以拮抗 Smoothened- 依赖型和 / 或 Hedgehog 非依赖型活化通路的量的 Smo 拮抗剂如式 (I) 化合物 接触。
     在一项实施方案中， 本发明的化合物 ( 例如式 I 化合物 ) 通过将 Smo 蛋白的三维 结构锁定在非活性构象或防止 Smo 变成活性构象来抑制 Hh 信号。在另一项实施方案中， 本 发明的化合物 ( 例如式 I 化合物 ) 通过防止 Smo 的内源性激活配体与 Smo 结合或使 Smo 活 化 ( 即通过与内源性激动剂的负协同起作用 ) 来抑制 Hh 信号。在另一项实施方案中， 本发 明的化合物 ( 例如式 I 化合物 ) 通过增强 Smo 的内源性灭活配体与 Smo 结合或使 Smo 失活 ( 即通过与内源性拮抗剂的正协同起作用 ) 来抑制 Hh 信号。
     在另一项实施方案中， 本发明的化合物 ( 例如式 I 化合物 ) 通过防止 Smo 定位于 质膜来抑制 Hh 信号。在另一项实施方案中， 本发明的化合物 ( 例如式 I 化合物 ) 在存在或 不存在 Hh 配体的情况下通过防止从 Ptch 发信号至 Smo 来抑制 Hh 信号。在另一项实施方 案中， 本发明的化合物 ( 例如式 I 化合物 ) 通过防止 Smo 的稳定化来抑制 Hh 信号。在另一 项实施方案中， 本发明的化合物 ( 例如式 I 化合物 ) 通过防止 Smo 在活化位点上的磷酸化 来抑制 Hh 信号。在另一项实施方案中， 本发明的化合物 ( 例如式 I 化合物 ) 通过增强 Smo 在抑制位点上的磷酸化来抑制 Hh 信号。
     在另一项实施方案中， 本发明的化合物 ( 例如式 I 化合物 ) 通过防止 Smo 活化下 游靶点、 例如转录因子 Gli 来抑制 Hh 信号。在另一项实施方案中， 本发明的化合物 ( 例如 式 I 化合物 ) 通过实行 Smo 的灭活、 螯合和 / 或降解来抑制 Hh 信号。
     在另一项实施方案中， 本发明的方法可用于体外和 / 或体内调节细胞增殖和 / 或 分化 ( 例如在由干细胞形成组织的过程中 )， 或者用于阻止过度增殖性细胞的生长。 在另一 项特定的实施方案中， 将细胞与本发明的化合物 ( 例如式 I 化合物 ) 接触或将所述化合物 引入细胞内引起了细胞增殖的抑制、 癌 / 肿瘤细胞生长和 / 或生存的抑制和 / 或肿瘤发生 的抑制。因此， 另一项特定的实施方案提供了通过在肿瘤细胞内应用本发明的化合物 ( 例 如式 I 化合物 ) 来抑制和 / 或拮抗 Hh 通路的方法。
     在另一项实施方案中， 本发明的方法可以应用配制为包含可药用赋形剂或载体的 药物制剂的本发明的化合物 ( 例如式 I 化合物 )， 所述制剂可以施用于患者以治疗涉及不希 望的细胞增殖的病症如癌症和 / 或肿瘤 ( 例如成神经管细胞瘤、 基底细胞癌等 ) 和非恶性过度增殖性障碍。
     本发明的一项实施方案提供了用于在体外或体内抑制细胞内的 Smo 蛋白的合成、 表达、 产生和 / 或活性的方法， 该方法包括将所述细胞与本发明的化合物 ( 例如式 I 化合 物 ) 接触或将所述化合物引入所述细胞内。
     本发明的另一项实施方案提供了在特征为 Smo 基因或基因产物 ( 例如 Smo 蛋白 ) 的存在和 / 或表达的哺乳动物中诊断、 预防和 / 或治疗细胞虚弱、 紊乱和 / 或功能障碍 ； 增 生性、 过度增殖性和 / 或癌性疾病状态 ； 和 / 或肿瘤细胞转移的方法， 该方法包括给哺乳动 物施用治疗有效量的抑制或拮抗合成和 / 或表达和 / 或活性的活性剂本发明的化合物 ( 例 如式 I 化合物 )。
     因此， 特别认定 ： 与 Hh、 Ptc 或 Smoothened 信号转导活性相干扰的式 I 化合物将同 样能够抑制正常细胞和 / 或具有 Patched 失功能表型、 Hedgehog 获功能表型、 Smoothened 获功能表型或 Gli 获功能表型的细胞中的增殖 ( 或其它生物学结果 )。因此认定 ： 在一些 实施方案中， 这些化合物可用于抑制正常细胞 ( 例如， 不具有激活 Hedgehog 通路的基因突 变的细胞 ) 中的 Hedgehog 活性。在优选的实施方案中， 所述化合物能够抑制 Hedgehog 蛋 白的生物学活性中的至少一些， 优选特别是在靶细胞中。
     因 此， 本 发 明 的 方 法 包 括 激 动 Hedgehog 信 号 的 Ptc 抑 制 ( 例 如 通 过 抑 制 Smoothened 或该信号通路的下游组件的活化 ) 的式 I 化合物在调节各种细胞、 组织和器官 的修复和 / 或功能性能中的用途， 所述细胞、 组织和器官包括正常的细胞、 组织和器官以及 具有 Ptc 失功能、 Hedgehog 获功能、 Smoothened 获功能或 Gli 获功能表型的那些。例如， 本 发明的方法具有涵盖调节神经组织、 骨和软骨的形成和修复、 调节精子发生、 调节良性前列 腺增生、 调节湿性黄斑变性、 银屑病中的血管形成、 调节平滑肌、 调节肺、 肝和源自原肠的其 它器官、 调节造血功能、 调节皮肤和毛发生长等的治疗学和美容学应用。而且， 本发明的方 法还可在培养物所提供的细胞上 ( 体外 ) 或者在完整动物的细胞上 ( 体内 ) 进行。
     在一些实施方案中， 式 I 化合物可以通过与 Smoothened 或其下游蛋白结合来抑制 Hedgehog 通路的活化。
     在另一项实施方案中， 本发明提供了药物制剂的应用， 所述药物制剂包含作为活 性成分的 Hedgehog 信号调节剂如式 I 化合物、 Smoothened 拮抗剂如本文所述的那些， 它们 以足以在体内抑制 Ptc 失功能、 Hedgehog 获功能、 Smoothened 获功能或 Gli 获功能的增殖 或其它生物学结果的量进行配制。
     通过施用本发明的化合物 ( 例如式 I 化合物 ) 对受治疗者进行的治疗对于人和动 物受治疗者都是有效的。 本发明所适用的动物受治疗者包括作为宠物或为商业目的而饲养 的驯养动物和家畜。其实例有狗、 猫、 牛、 马、 绵羊、 猪、 山羊和美洲驼。
     本发明还提供了用于抑制 Hedgehog 信号传导通路活化的方法和化合物， 例如抑 制由 Hedgehog 信号传导通路的生理学活化所引起的正常、 但是是不希望的生长状态、 例如 良性前列腺增生或湿性黄斑变性中的血管形成， 其包括将细胞与足以拮抗 Smoothened 活 性或拮抗 Gli 活性的量的式 I 化合物接触， 例如为了逆转或控制正常的生长状态。
     本发明提供了用于抑制 Hedgehog 信号传导通路活化的方法和化合物， 例如抑制 由表型如 Ptc 失功能、 Hedgehog 获功能、 Smoothened 获功能或 Gli 获功能引起的异常生长 状态， 其包括将细胞与足以激动 Ptc 活性、 拮抗正常的 Hedgehog 活性、 拮抗 Smoothened 活性或拮抗 Gli 活性的量的式 I 化合物接触， 例如为了逆转或控制异常的生长状态。
     信号分子的 Hedgehog 家族的成员在脊椎动物的发育过程中介导多种重要的 短 - 和长 - 范围图式形成过程。图式形成是胚细胞形成分化组织的有序立体排列的活动。 高等生物体的身体复杂性在胚胎发育过程中通过细胞内谱系和细胞外信号的相互作用而 产生。 在由最早的身体计划建立至器官系统的图式形成至组织分化期间多种细胞类型产生 的脊椎动物发育中， 诱导相互作用对于胚胎图式形成而言是必要的。发育细胞相互作用的 作用是不同的 ： 应答细胞通过诱导与应答细胞的未诱导和诱导状态均不同的细胞由一种细 胞分化途径转向另一种细胞分化途径 ( 诱导 )。 有时， 细胞诱导与之相邻的细胞像它们自己 一样分化 ( 同源诱导 ) ； 在另一种情况下， 细胞抑制与之相邻的细胞像它们自己那样分化。 早期发育中的细胞相互作用可以是连续的， 以便两种细胞类型之间的最初诱导导致多样性 的逐渐放大。而且， 诱导相互作用不仅发生在胚胎中， 而且也发生在成人细胞中， 并且可以 起到建立和维持形态发生图式以及诱导分化的作用。
     Hedgehog 基 因 的 脊 椎 动 物 家 族 包 括 存 在 于 哺 乳 动 物 中 的 三 个 成 员， 称为 Desert(Dhh)、 Sonic(Shh) 和 Indian(Ihh)Hedgehogs， 它们均编码分泌性蛋白。这些各种 各样的 Hedgehog 蛋白由信号肽、 高度保守的 N- 末端区和更趋异的 C- 末端结构域组成。生 物化学研究已经表明 ： Hh 前体蛋白的自我蛋白酶解通过内部的硫代酸酯中间体进行， 该中 间体随后在亲核取代中裂解。亲核试剂是小的亲脂性分子是可能的， 其共价结合到 N- 肽的 C- 末端， 将其束缚到细胞表面。生物学意义是极深的。作为束缚的结果， 在产生 Hedgehog 的细胞的表面上生成了高局部浓度的 N- 末端 Hedgehog 肽。正是该 N- 末端肽对于短 - 和 长 - 范围 Hedgehog 信号活动而言既是必要的又是足够的。
     Smoothened(Smo) 编码充当 Hedgehog(Hh) 信号的转导物的 1024 个氨基酸的跨膜 蛋白。Smo 蛋白具有 7 个疏水性跨膜结构域、 一个细胞外氨基末端区和一个细胞内羧基末 端区。Smo 与 G 蛋白 - 偶联受体具有某些相似性， 并且与蛇形蛋白 (serpentine proteins) 的 Frizzled(Fz) 家族是最同源的 (Alcedo 等人 (1996)Cell 86 ： 221)。
     非活性 Hedgehog 信号传导通路是跨膜蛋白受体 Patched(Ptc) 抑制七次跨膜蛋白 Smoothened(Smo) 的活性的地方。转录因子 Gli( 为 Hh 信号的下游组件 ) 被阻止经由与胞 质蛋白、 包括 Fused 和 Suppressor of Fused(Sufu) 的相互作用进入核内。结果， Hedgehog 靶基因的转录活化被抑制。通过将三种哺乳动物配体 (Dhh、 Shh 或 Ihh) 中的任一种与 Ptc 结合而引起通路活化。配体结合导致了 Smo 抑制的逆转， 由此激活了导致转录因子 Gli 的 活性形式易位至核的级联。核 Gli 激活了靶基因表达， 包括 Ptc 和 Gli 自身。
     Hh 的配体结合改变了 Smo 和 Ptc 的相互作用， 逆转了 Smo 的抑制， 从而使 Smo 从 细胞内的内部结构移至质膜。Smo 定位至质膜以 Hh- 非依赖型的方式触发了 Hh 通路靶基 因的活化。(Zhu 等人 (2003)Genes Dev.17(10) ： 1240)。Smo 所激活的级联导致转录因子 Gli 的活性形式易位至核。经由易位的核 Gli 的 Smo 活化激活了 Hh 通路靶基因表达， 包括 Wnts、 TGFβ 以及 Ptc 和 Gli 自身的那些。
     Hedgehog 信号的水平增加足以引起癌症形成， 并且对于肿瘤生存是必需的。这 些癌症包括但不限于前列腺癌 (“Hedgehog signailing in prostate regeneration， neoplasia and metastasis” ， Karhadkar SS， Bova GS， Abdallah N， Dhara S， Gardner D， Maitra A， Isaacs JT， Berman DM， Beachy PA.， Nature.2004 年 10 月 7 日 ； 431(7009) ：707-12 “ ；Inhibition of prostate cancer proliferation by interference with SONIC HEDGEHOG-GLI1 signaling” ， Sanchez P， Hernandez AM， Stecca B， Kahler AJ， DeGueme AM， Barrett A， Beyna M， Datta MW， Datta S， Ruiz i Altaba A.,Proc Natl Acad Sci USA.2004 年 8 月 24 日 ； 101(34) ： 12561-6)， (“Cytotoxic effects induced by a combination of cyclopamine andgefitinib， the selective hedgehog and epidermal growth factor receptor signaling inhibitors， in prostate cancer cells， ” Mimeault M， Moore E， Moniaux N 等 人 (2006)， International Journal of Cancer ； 118(4) ： 1022-31)、乳 癌 “ ( Hedgehog signaling pathway is new therapeutic target for patients with breast cancer” ， Kubo M， Nakamura M， Tasaki A， Yamanaka N， Nakashima H， Nomura M， Kuroki S， Katano M.， Cancer Res.2004 年 9 月 1 日 ； 64(17) ： 6071-4)， (“Hedgehog signaling and Bmi-1regulate self-renewalof normal and malignant human mammary stem cells， ” Liu S， Dontu G， Mantle ID 等 人 (2006)Cancer Res ； 66(12) ： 6063-71)， (“Constitutive activation of smoothened(SMO)in mammary glands of transgenic mice leads to increased proliferation， altered differentiation and ductal dysplasia， ” Moraes RC， Zhang XM， Harrington N 等人 (2007)， Development ； 134(6) ： 1231-42)、 成神经管细胞 瘤 (“Medulloblastoma growth inhibition by hedgehog pathway blockade” ， Berman DM， Karhadkar SS， Hallahan AR， Pritchard JI， Eberhart CG， Watkins DN， Chen JK， Cooper MK， Taipale J， Olson JM， Beachy PA.， Science.2002 年 8 月 30 日 ； 297(5586) ： 1559-61)、 非黑素瘤皮肤癌 ( 即鳞状细胞癌 (SCC) 和基底细胞癌 (BCC))( “Identification of a small molecule inhibitor of the hedgehog signaling pathway ： effects on basal cell carcinoma-like lesions” ， Williams JA， Guicherit OM， Zaharian BI， Xu Y， Chai L， Wichterle H， Kon C， Gatchalian C， Porter JA， Rubin LL， Wang FY.， Proc Natl Acad Sci USA.2003 年 4 月 15 日 ； 100(8) ： 4616-21 ； “Activating Smoothened mutations in sporadic basal-cell carcinoma” ， Xie J， Murone M， Luoh SM， Ryan A， Gu Q， Zhang C， Bonifas JM， Lam CW， Hynes M， Goddard A， Rosenthal A， Epstein EH Jr， de Sauvage FJ.， Nature.1998 年 1 月 1 日 ； 391(6662) ： 90-2)、 胰癌、 食管癌、 胃癌和胆癌 (“Hedgehog is an early and late mediator of pancreatic cancer tumorigenesis” ， Thayer SP， di Magliano MP， Heiser PW， Nielsen CM， Roberts DJ， Lauwers GY， Qi YP， Gysin S， Fernandez-del Castillo C， Yajnik V， Antoniu B， McMahon M， Warshaw AL， Hebrok M.， Nature.2003 年 10 月 23 日 ； 425(6960) ： 851-6 ； “Widespread requirement for Hedgehog ligand stimulation in growth of digestive tract tumours” ， Berman DM， Karhadkar SS， Maitra A， Montes De Oca R， Gerstenblith MR， Briggs K， Parker AR， Shimada Y， Nature.2003 年 10 月 23 日 ； 425(6960) ： 846-51)， Eshleman JR， Watkins DN， Beachy PA.， ( “Nuclear factor-kappa B contributes to hedgehog signaling pathway activation through sonic hedgehog induction in pancreatic cancer， ” Nakashima H， Nakamura M， Yamaguchi H 等人 (2006)， Cancer Research ； 66(14) ： 7041-9)， (“Blockade of hedgehog signaling inhibits pancreatic cancer invasion and metastases ： Anew paradigm for combination therapy in solid cancers， ” Feldmann G， Dhara S， Fendrich V 等人 (2007) Cancer Research ； 67(5) ： 2187-96)， (“Oncogenic KRAS suppresses Gli1 degradationand activates Hedgehog signaling pathway in pancreatic cancer cells， ” Ji Z， Mei FC， Xie J 等人 (2007)， J Biol Chem ； 282(19) ： 14048-55) 和小细胞肺癌 (“Hedgehog signalling within airway epithelial progenitors and in small-cell lung cancer” ， Watkins DN， Berman DM， Burkholder SG， Wang B， Beachy PA， Baylin SB.， Nature.2003 年 3 月 20 日 ； 422(6929) ： 313-7)， (“Hedgehog signaling in small-cell lung cancer ： Frequent in vivo but a rare event in vitro， ” Vestergaard J， Pedersen MW， Pedersen N 等人 (2006)， Lung Cancer ； 52(3) ： 281-90)。
     Hedgehog 信号水平增加足以启动癌症形成并且是肿瘤生存所需的其它癌症包 括 但 不 限 于 结 肠 癌 (“Sonic Hedgehog-dependent proliferation in a series of patients with colorectal cancer， ” Douard R， Moutereau S， Pernet P 等 人 (2006) Surgery ； 139(5) ： 665-70)， (“Hedgehog signalling in colorectal tumour cells ： Induction of apoptosis with cyclopamine treatment， ” Qualtrough D， Buda A， Gaffield W 等 人 (2004)， International Journal of Cancer ； 110(6) ： 831-7)、 神经胶 质 瘤 (“Cyclopamine-mediated Hedgehog pathway inhibition depletes stem-like cancer cells in glioblastoma， ” Bar EE， Chaudhry A， Lin A 等 人 Neuro-Oncology ； 2007， 9(4) ： 594)， ( “HEDGEHOG-GLI1 signaling regulates human glioma growth， cancer stem cell selfrenewal， and tumorigenicity， ” Clement V， Sanchez P， de Tribolet N 等人 (2007)Current Biology 17(2) ： 165-72)， (“Ligand-dependent activation of the hedgehog pathway in glioma progenitor cells， ” Ehteshan M， Sarangi A， Valadez JG 等人 (2007)Oncogene ； 2007 年 3 月 12 日， 印刷前的电子版 )、 黑素瘤 ( “Melanomas require HEDGEHOG-GLI signaling reaulated by interactions between GLI1 and the RAS-MEK/ AKT pathways， ” Stecca B， Mas C， Clement V 等人 (2007)， Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America ； 104(14) ： 5895-900)、 非小细 胞肺癌 (NSCLC)(“Frequent requirement of hedgehog signaling in non-small cell lung carcinoma， ” Yuan Z， Goetz JA， Singh S 等人 (2007)， Oncogene ； 26(7) ： 1046-55)、 卵巢 (“Hedgehog signal pathway is activated in ovarian carcinomas， correlating with cell proliferation ： It ′ s inhibition leads to growth suppression and apoptosis， ” Chen XJ， Horiuchi A， Kikuchi N 等 人， Cancer Science ； (2007)98(1) ： 68-76)、 肝 (“Activation of the hedgehog pathway in human hepatocellular carcinomas， ” Huang SH， He J， Zhang XL 等人 (2006)， Carcinogenesis ； 27(7) ： 1334-40)， “ ( Dysregulation of the Hedgehog pathway in human hepatocarcinogenesis， ” Sicklick JK， Li YX， Jayaraman A 等人 (2006)， Carcinogenesis ； 27(4) ： 748-57)、 肾 (“Clear cell sarcoma of the kidney ： Up-regulation of neural markers with activation of the sonic hedgehog and Akt pathways， ” Cutcliffe C， Kersey D， Huang CC 等人 (2005)， Clinical Cancer Research ； 11(22) ： 7986-94)、横 纹 肌 肉 瘤 (“Rhabdomyosarcomas and radiation hypersensitivity in a mouse model of Gorlin syndrome， ” Hahn H， Wojnowski L， Zimmer AM 等人 (1998)， Nature Medicine ； 4(5) ： 619-22)， (“Deregulation of the hedgehog signalling pathway ： a possible role for the PTCH and SUFU genes in human rhabdomyoma and rhabdomyosarcoma development， ” Tostar U， MalmCJ， Meis-Kindblom JM 等人 (2006)， Journal of Pathology ； 208(1) ： 17-25) 和软骨肉瘤 (“Constitutive hedgehog signaling in chondrosarcoma up-regulates tumor cell proliferation， ” Tiet TD， Hopyan S， Nadesan P 等 人 (2006)， American Journal of Pathology ； 168(1) ： 321-30)。
     Hedgehog 通 路 抑 制 剂 ( 例 如 环 杷 明 ) 已 经 被 证 明 可 用 于 治 疗 银 屑 病 (“Cyclopamine ： inhibiting hedgehog in the treatment of psoriasis” Cutis， 2006， 78(3) ： 185-8 ； Br.J.Dermatology， 2006 年 4 月 ； 154(4) ： 619-23， “Psoriatic skin expresses the transcription factor Gli1 ： possible contribution of decreased neurofibromin expression” ， Endo H， Momota Y， Oikawa A， Shinkai H.)。
     恶性淋巴瘤 (ML) 牵涉淋巴系统细胞， 是美国第五最常见的癌症。ML 包括霍奇金 病和非霍奇金病， 霍奇金病和非霍奇金病是淋巴样增殖性疾病的不同组。霍奇金病占所 有恶性淋巴瘤的约 14％。非霍奇金淋巴瘤是不同组的恶性病， 其主要是 B- 细胞来源。在 Working Formulation 分类方案中， 这些淋巴瘤已经根据其天然史被分为低 -、 中 - 和高 - 级 别类型 ( 参见” The Non-Hodgkin′ s Lymphoma Pathologic Classification Project” ， Cancer 49 ： 2112-2135， 1982)。低级别淋巴瘤是无痛的， 存活中值为 5-10 年 (Horning 和 Rosenberg， N.Engl.J.Med.311 ： 1471-1475， 1984)。 尽管化学治疗可引起大部分无痛的淋巴 瘤消退， 但是治愈是罕见的， 并且大部分患者最终复发， 需要进一步治疗。中 - 和高 - 级别 淋巴瘤是更具有侵害性的肿瘤， 但是它们具有更大的用化学治疗治愈的机会。 然而， 这些患 者中显著比例的患者会复发并需要进一步治疗。
     多发性骨髓瘤 (MM) 是由通常在骨髓中发现的类型的浆细胞组成的恶性肿瘤。这 些恶性浆细胞在骨髓中蓄积， 通常产生单克隆 IgG 或 IgA 分子。恶性浆细胞归巢于骨髓中 并在其中扩展， 由于缺少正常血细胞生成而导致贫血和免疫抑制。患有多发性骨髓瘤的个 体通常发生贫血、 溶骨损害、 肾衰竭、 高钙血和复发性细菌感染。MM 代表了第二最常见的血 液学恶性病。
     本发明部分地基于如下发现 ： 采用从转基因 Eμ-Myc 小鼠和 Cdkn2a 敲除小鼠的淋 巴瘤和浆细胞瘤和发现 hedgehog 配体介导基质与淋巴瘤细胞之间的相互作用， 发明人发 现淋巴瘤和多发性骨髓瘤疾病依赖于 hedgehog(Hh) 信号传导通路。相同情况在从骨 ( 多 发性骨髓瘤 ) 或者来自非霍奇金淋巴瘤 (NHL) 患者的淋巴结、 骨髓或脾的患者样品中分离 的淋巴瘤和多发性骨髓瘤样品中发现。另外还发现 ： Hh 信号传导通路的抑制诱导了基质依 赖性淋巴瘤细胞的细胞凋亡， 并且 hedgehog 通路成员的过表达体外抑制了环杷明诱导的 淋巴瘤细胞的细胞凋亡。而且， 发明人还发现 ： 用 hedgehog 通路抑制剂治疗小鼠消除了体 内淋巴瘤扩散。最后， 发明人发现 ： 在脾 B- 细胞和大部分对环杷明有响应的淋巴瘤中没有 Gli3 的表达， 但是在所有对环杷明有抗性的淋巴瘤中有优势表达。
     这些数据显示 ： Hh 信号为通过 c-Myc 转化的初始步骤提供了重要的抗细胞凋亡信 号， 并且在淋巴瘤维持中发挥重要作用。因此， Hh 信号传导通路的破坏提供了治疗淋巴瘤 ( 例如 NHL)、 多发性骨髓瘤、 CLL 和其它血液学恶性病的新方式。另外， 淋巴瘤中 Gli3 的表 达提供了对 Hh 抑制的响应性的反向预测因子和患者分级的重要方式。
     根据这些发现， 本发明提供了抑制肿瘤细胞生长如淋巴瘤和骨髓瘤细胞生长的方 法。 本发明提供了在受治疗者中通过抑制肿瘤细胞生长来治疗淋巴瘤或骨髓瘤的方法和组合物。这些方法还可用于在受治疗者中防止肿瘤发生。一些方法针对于治疗相对于脾 B 细 胞而言不具有显著 Gli3 表达的淋巴瘤。这些方法涉及给需要治疗的受治疗者施用含有 Hh 信号拮抗剂 ( 例如式 I 化合物 ) 的药物组合物。本发明的化合物向下调节 Hh 信号传导通 路成员的细胞水平或抑制其生物活性。
     本发明提供了预防性或治疗性处置血液和淋巴系统癌症、 包括淋巴瘤、 白血病和 骨髓瘤的方法。这些方法采用 hedgehog 信号传导通路拮抗剂来抑制淋巴瘤细胞、 白血病细 胞或骨髓瘤细胞的生长和增殖。淋巴瘤是来源于 B 淋巴细胞的淋巴母细胞恶性肿瘤。骨髓 瘤是由在骨髓中常发现的类型的浆细胞组成的恶性肿瘤。 白血病是涉及血液形成器官的急 性或慢性疾病。NHL 的特征是身体组织中白细胞数异常增加且同时在循环血液中存在或不 存在相应的白细胞数增加， 其根据最主要涉及的白细胞类型进行分类。
     例如， 可以用本发明的方法治疗患有淋巴瘤 ( 例如 B- 细胞淋巴瘤、 胞浆母细胞瘤 (plasmoblastoma)、 浆细胞瘤或 CLL) 或有危险发生淋巴瘤的受治疗者。优选受治疗者是 人。该方法要求给受治疗者施用含有有效量式 I 化合物的药物组合物以抑制 hedgehog 信 号传导通路。受治疗者可以是被诊断患有淋巴瘤的、 有或无转移的、 处于该疾病任意阶段 ( 例如 I 至 IV 阶段， Ann Arbor Staging System) 的受治疗者。适于用本发明的方法治疗 的淋巴瘤包括但不限于霍奇金病和非霍奇金病。霍奇金病是人体淋巴组织的恶性障碍 ( 淋 巴瘤 )， 其显示在特定淋巴结中原发并随后扩散至脾、 肝和骨髓。它主要发生在 15-35 岁年 龄的个体中。其特征是淋巴结、 脾和全身淋巴组织进行性和无痛的扩大。典型的霍奇金病 被分成四个亚型 ： (1) 结节硬化性霍奇金病 (NSHD) ； (2) 混合细胞型霍奇金病 (MCHD) ； (3) 淋巴细胞消减型霍奇金病 (LDHD) ； 和 (4) 淋巴细胞丰富型典型霍奇金病 (cLRHD)。
     在一些优选实施方案中， 本发明的方法用于治疗非霍奇金淋巴瘤 (NHL)。 非霍奇金 病还称作淋巴肉瘤， 指在重要方面不同于霍奇金病并且根据癌细胞的微观外形进行分类的 一组淋巴瘤。非霍奇金淋巴瘤包括但不限于 ： (1) 生长缓慢的淋巴瘤和淋巴性白血病 ( 例 如慢性淋巴细胞白血病、 小淋巴细胞白血病、 淋巴浆细胞样淋巴瘤 (lymphoplasmacytoid lymphoma)、 滤泡型中心性淋巴瘤 (follicle center lymphoma)、 滤泡型小裂细胞性、 滤泡 型混合细胞性、 边缘区 B- 细胞淋巴瘤、 多毛细胞白血病、 浆细胞瘤、 骨髓瘤、 大颗粒淋巴细 胞白血病、 蕈样真菌病 (mycosis fungoides)、 szary 综合征 ) ； (2) 中度进展的淋巴瘤和淋 巴性白血病 ( 例如幼淋巴细胞白血病、 套细胞淋巴瘤、 滤泡型中心性淋巴瘤、 滤泡型小裂细 胞性、 滤泡型中心性淋巴瘤、 慢性淋巴细胞白血病 / 幼淋巴细胞白血病、 血管中心性淋巴瘤 (angiocentric lymphoma)、 血管免疫母细胞性淋巴瘤 (angioimmunoblastic lymphoma)) ； (3) 进展的淋巴瘤 ( 例如大 B- 细胞淋巴瘤、 外周 T- 细胞淋巴瘤、 肠 T- 细胞淋巴瘤、 间变 性大细胞性淋巴瘤 ) ； 和 (4) 高度进展的淋巴瘤和淋巴性白血病 ( 例如 B- 细胞前体 B- 原 始淋巴细胞性白血病 / 淋巴瘤、 伯基特淋巴瘤、 高级 B- 细胞淋巴瘤 (high-grade B-cell lymphoma)、 伯基特样 T- 细胞前体 T- 原始淋巴细胞性白血病 / 淋巴瘤 )。本发明的方法可 用于成人或儿童形式的淋巴瘤以及处于任意阶段如 I、 II、 III 或 IV 阶段的淋巴瘤。本文所 述的方法还可用于治疗其它形式的白血病如急性淋巴细胞白血病 (ALL)。
     本发明的一些治疗方法特别涉及治疗不表达 Gli3 的淋巴瘤或骨髓瘤。如下文实 施例中所公开的那样， 申请人观察到 ： 虽然 Gli1 和 Gli2 在所有淋巴瘤中有表达， 但是可检 测到的 Gli3 表达主要存在于对通过环杷明抑制 Hh 通路有抗性的淋巴瘤中。 在正常脾 B- 细胞和大多数对环杷明有响应的淋巴瘤中没有 Gli3 表达。因此， 在用 Hh 拮抗剂治疗之前， 可 以首先对淋巴瘤受治疗者检查获自该受治疗者的淋巴瘤细胞样品中的 Gli3 表达。可以将 样品中的 Gli3 表达水平与获自该受治疗者的正常 B 脾细胞中的 Gli3 表达水平进行比较。 淋巴瘤或骨髓瘤样品中以及对照细胞中的 Gli3 表达水平可以采用本领域熟知的方法、 例 如下文实施例中所述的方法来确定。对本文所述的 Hh 拮抗剂治疗的可能响应性通过如下 情况来指示 ： 淋巴瘤或骨髓瘤样品中缺少可检测到的 Gli3 表达， 或者不显著高于 ( 例如不 超过 25％、 50％或 100％以上 ) 正常 B 细胞中的 Gli3 表达水平的表达水平。除了作为本发 明的治疗方法的额外步骤外， 对缺少 Gli3 表达的预筛选可以独立地用作患者分级方法。
     除淋巴瘤外， 上述方法和组合物还适于治疗骨髓瘤。多发性骨髓瘤是一种致命性 的肿瘤， 其特征是浆细胞克隆蓄积， 经常伴有 Ig 链分泌。 肿瘤对骨髓的侵害涉及贫血、 低γ 球蛋白血症 (hypogammaglobinemia) 和粒细胞减少并伴随细菌感染。异常的细胞因子环境 ( 主要是升高的 IL-6 和 IL-1β 水平 ) 经常导致破骨增加， 引起骨痛、 骨折和高血钙。尽管 存在侵害性的化学治疗和移植， 但是多发性骨髓瘤通常是致命性的血浆增殖性疾病。
     本发明的化合物可用于治疗 Hedgehog 相关性障碍， 例如基底细胞痣综合征 ( 也称 作 Gorlin’ s 综合征和 / 或痣样基底细胞癌 )， 它是一种罕见的常染色体显性癌症遗传性综 合征。
     本发明的化合物可用于治疗基底细胞癌 (BCC 或侵蚀性溃疡 )、 源自皮质或肾上腺 髓质髓质部分的肾上腺肿瘤和卵巢肿瘤。
     本发明的化合物可用于治疗骨过度生长障碍， 包括但不限于肢端肥大症、 大头畸 形、 索托斯综合征、 进行性骨干发育不全 (PDD 或卡 - 恩病 )、 颅面骨干发育不全和骨内骨肥 厚障碍、 包括范布肯姆 (Van Buchem) 疾病 (I 型和 II 型 ) 和硬化性狭窄。
     本发明的化合物可用于治疗不想要的毛发生长如毛痣和在脱毛后美容性预防毛 发再生长。
     本发明的化合物可用于治疗肝纤维化。
     因 此， 本 发 明 的 方 法 包 括 激 动 Hedgehog 信 号 的 Ptc 抑 制 ( 例 如 通 过 抑 制 Smoothened 或该信号通路的下游组件的活化 ) 的本发明的化合物在调节各种细胞、 组织和 器官的修复和 / 或功能性能中的用途， 所述细胞、 组织和器官包括正常的细胞、 组织和器官 以及具有 Ptc 失功能、 Hedgehog 获功能、 Smoothened 获功能或 Gli 获功能表型的那些。例 如， 本发明的方法具有涵盖调节神经组织、 骨和软骨的形成和修复、 调节精子发生、 调节良 性前列腺增生、 调节湿性黄斑变性、 银屑病中的血管形成、 调节平滑肌、 调节肺、 肝和源自原 肠的其它器官、 调节造血功能、 调节皮肤和毛发生长等的治疗学和美容学应用。而且， 本发 明的方法还可在培养物所提供的细胞上 ( 体外 ) 或者在完整动物的细胞上 ( 体内 ) 进行。
     根据上文， 本发明还提供了在需要该治疗的受治疗者中预防或治疗任意所述疾 病或障碍的方法， 该方法包括给所述受治疗者施用有效量 ( 参见下文的 “施用和药物组合 物” ) 的式 I 化合物或其药学可接受的盐。 就任意上述应用而言， 所需剂量将根据施用方式、 所治疗的具体病症和预期效果而改变。
     施用和药物组合物
     本发明涉及包含式 (I) 化合物的药物组合物在治疗性处置 ( 以及在本发明的更宽 方面预防性处置 )Hedgehog 相关性障碍中的用途。一般而言， 可以经由本领域常用的和可接受的任意模式以治疗有效量单独或与一 种或多种治疗剂组合来施用本发明的化合物。治疗有效量可根据疾病严重性、 受治疗者的 年龄和相关健康、 所用化合物的效力和其它因素而宽泛地改变。一般而言， 全身约 0.03 至 2.5mg/kg 体重的日剂量被指示获得满意的结果。较大型哺乳动物如人的指示日剂量为约 0.5mg 至约 100mg， 方便地以例如一天至多四次的分开剂量或以缓释形式施用。适于口服施 用的单位剂量形式包含约 1mg 至 50mg 活性成分。
     本发明的化合物可以作为药物组合物通过任意常规途径施用， 特别是经肠内施 用， 例如口服 ( 如以片剂或胶囊形式 ) ； 或胃肠道外施用， 例如以可注射溶液或混悬液的形 式； 局部施用， 例如以洗液、 凝胶、 软膏或乳膏剂的形式， 或以经鼻施用或栓剂的形式。包含 游离形式或可药用盐形式的本发明的化合物以及至少一种可药用载体或稀释剂的药物组 合物可以以常规方式通过混合、 制粒或包衣方法来制备。例如， 口服组合物可以是包含活 性成分以及如下物质的片剂或明胶胶囊 ： a) 稀释剂， 例如乳糖、 葡萄糖、 蔗糖、 甘露醇、 山梨 醇、 纤维素和 / 或甘氨酸 ； b) 润滑剂， 例如二氧化硅、 滑石粉、 硬脂酸及其镁或钙盐和 / 或聚 乙二醇 ； 对于片剂还包含 c) 粘合剂， 例如硅酸镁铝、 淀粉糊、 明胶、 西黄蓍胶、 甲基纤维素、 羧甲基纤维素钠和 / 或聚乙烯吡咯烷酮 ； 如果期望的话， 还包含 d) 崩解剂， 例如淀粉、 琼脂、 海藻酸或其钠盐或泡腾合剂 ； 和 / 或 e) 吸收剂、 着色剂、 矫味剂和甜味剂。注射用组合物可 以是水性等张溶液或混悬液， 栓剂可以由脂肪乳剂或混悬剂来制备。 组合物可以是灭菌的和 / 或含有佐剂， 例如防腐剂、 稳定剂、 润湿剂或乳化剂、 溶 解促进剂、 调节渗透压的盐和 / 或缓冲剂。此外， 它们还可含有其它有治疗价值的物质。适 于透皮应用的制剂包含有效量的本发明的化合物和载体。 载体可以包含可吸收的药理学可 接受的溶剂以帮助穿过宿主皮肤。例如， 透皮装置是绷带剂的形式， 其包含背衬膜、 含有化 合物和任选的载体的储库、 任选的速率控制屏障 ( 历经延长了的时间以受控和预定的速率 递送化合物至宿主皮肤 ) 和确保该装置于皮肤上的手段。还可以使用基质透皮制剂。适于 局部应用、 例如用于皮肤和眼的制剂优选是本领域熟知的水性溶液、 软膏、 乳膏剂或凝胶。 这些制剂可含有助溶剂、 稳定剂、 张力增强剂、 缓冲剂和防腐剂。
     本发明的化合物可以以治疗有效量与一种或多种治疗剂组合施用 ( 药物组合产 品 )。例如， 与免疫调节物质、 抗炎物质、 其它抗肿瘤治疗剂、 化疗剂、 去除法或其它治疗激 素、 抗肿瘤剂和 / 或可用于对抗淋巴瘤或骨髓瘤的单克隆抗体一起可产生协同作用。本 领域记载了一些熟知的抗癌药， 例如 Cancer Therapeutics ： Experimental and Clinical Humana Press( 第 1 版， 1997) ； 和 Goodman and Gilman ′ s Agents， Teicher( 编 辑 )， The Pharmacological Basis of Therapeutics， Hardman 等 人 ( 编 辑 )， McGraw-Hill Professional( 第 10 版， 2001)。适宜抗癌药的实例包括 5- 氟尿嘧啶、 硫酸长春花碱、 磷酸 雌莫司汀、 舒拉明和锶 -89。适宜化疗剂的实例包括门冬酰胺酶、 硫酸博来霉素、 顺铂、 阿糖 胞苷、 磷酸氟达拉滨、 丝裂霉素和链佐星。
     当本发明的化合物与其它疗法组合施用时， 共同施用的化合物的剂量当然根据共 用药物的类型、 所用具体药物以及所治疗的病症等而变化。
     本发明的 Hh 抑制剂可以有用地与另一种药理学活性化合物或两种或多种其它药 理学活性化合物联用， 特别是用于治疗癌症。例如， 如上文所定义的式 (I) 化合物或可药用 盐可以与一种或多种选自如下的活性剂同时、 依次或分别施用 ： 化疗剂， 例如有丝分裂抑制
     剂， 例如紫杉烷、 长春花生物碱、 紫杉醇、 多西他赛、 长春花新碱、 长春花碱、 长春瑞滨或长春 氟宁 ； 和其它抗癌药， 例如顺铂、 5- 氟尿嘧啶或 5- 氟 -2-4(1H， 3H)- 嘧啶二酮 (5FU)、 氟他胺 或吉西他滨。
     该组合在治疗中可以提供显著的优势、 包括协同活性。式 (I) 化合物还可以有 利地与其它抗增殖化合物组合施用。这类抗增殖化合物包括但不限于 ： 芳香酶抑制剂 ； 抗 雌激素剂 ； 拓扑异构酶 I 抑制剂 ； 拓扑异构酶 II 抑制剂 ； 微管活性化合物 ； 烷化化合物 ； 诱导细胞分化过程的化合物 ； 环加氧酶抑制剂 ； MMP 抑制剂 ； mTOR 抑制剂 ； 抗肿瘤抗代谢 药； 铂化合物 ； 靶向于 / 降低蛋白或脂质激酶活性的化合物和其它抗血管生成化合物 ； 靶 向于、 降低或抑制蛋白或脂质磷酸酶活性的化合物 ； 戈那瑞林激动剂 ； 抗雄激素剂 ； 甲硫氨 酸氨肽酶抑制剂 ； 二膦酸化合物 ； 生物应答调节剂 ； 抗增殖抗体 ； 类肝素酶 (heparanase) 抑制剂 ； Ras 致癌同工型抑制剂 ； 端粒酶抑制剂 ； 蛋白酶体抑制剂 ； 用于治疗血液学恶性病 的化合物 ； 靶向于、 降低或抑制 Flt-3 活性的化合物 ； Hsp90 抑制剂， 例如 17-AAG(17- 烯 丙 基 氨 基 - 格 尔 德 霉 素， NSC330507)、 17-DMAG(17- 二 甲 基 氨 基 乙 基 氨 基 -17- 脱 甲 氧 基 - 格尔德霉素， NSC707545)、 IPI-504、 CNF1010、 CNF2024、 CNF1010， 来自康福玛治疗公司 (Conforma Therapeutics) ； 替莫唑胺 (TEMODAL) ； 驱动蛋白纺锤体蛋白抑制剂， 例如来自 GlaxoSmithKline 的 SB715992 或 SB743921 或来自 CombinatoRx 的喷他脒 / 氯丙嗪 ； PI3K 抑 制剂 ； RAF 抑制剂 ； EDG 结合剂、 抗白血病化合物、 核苷酸还原酶抑制剂、 S- 腺苷甲硫氨酸脱 羧酶抑制剂、 抗增殖抗体或其它化疗化合物。而且， 供选地或另外地， 它们可以与其它肿瘤 治疗手段、 包括手术、 电离放射、 光动力疗法、 植入物如含皮质类固醇、 激素的植入物联用， 或者它们可以用作放射致敏剂。而且， 在抗炎和 / 或抗增殖治疗中， 与抗炎药的组合被包括 在内。 与抗组胺药物物质、 支气管扩张药、 NSAID 或趋化因子受体拮抗剂的组合也是可能的。
     本发明还提供了药物组合产品， 例如药盒， 包含 a) 第一种药物， 它是如本文所公 开的游离形式或可药用盐形式的本发明的化合物， 和 b) 至少一种共用药物。该药盒可以包 含其施用说明书。
     本文所用的术语 “共同施用” 或 “组合施用” 等囊括对单独患者施用所选择的治疗 药物， 并且意欲包括其中药物不一定以同一施用途径或在同一时间施用的治疗方案。
     本文所用的术语 “药物组合产品” 指将多于一种活性成分混合或合并所得的产品， 包括活性成分的固定和非固定组合产品。术语 “固定组合” 指活性成分、 例如式 I 化合物和 共用药物以单一实体或剂量同时施用于患者。术语 “非固定组合” 指活性成分、 例如式 I 化 合物和共用药物以单独的实体同时、 共同或无特定时间限制地依次施用于患者， 其中这种 施用为患者体内提供了两种化合物的治疗有效水平。后者还用于鸡尾酒疗法， 例如施用 3 种或 3 种以上的活性成分。
     本发明的化合物的制备方法
     合成本发明的化合物如式 (I) 化合物的代表性实例可参见本申请的实施例部分。
     本发明的化合物可以通过使化合物的游离碱形式与可药用的无机或有机酸反应 以可药用酸加成盐的形式制得。或者， 本发明的化合物的可药用碱加成盐可通过使化合物 的游离酸形式与可药用的无机或有机碱反应来制得。
     或者， 本发明的化合物的盐形式可以采用原料或中间体的盐制得。
     本发明的化合物的游离酸或游离碱形式可以分别由相应的碱加成盐或酸加成盐形式制得。例如， 酸加成盐形式的本发明的化合物可通过用适宜的碱 ( 例如氢氧化铵溶液、 氢氧化钠等 ) 处理而转化成相应的游离碱。碱加成盐形式的本发明的化合物可通过用适宜 的酸 ( 例如盐酸等 ) 处理而转化成相应的游离酸。
     本发明的化合物的前药衍生物可通过本领域普通技术人员已知的方法制得 ( 例 如， 进 一 步 的 细 节 参 见 Saulnier 等 人 (1994)， Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters， 第 4 卷， 第 1985 页 )。
     本发明的化合物的被保护的衍生物可通过本领域普通技术人员已知的方法制备。 可用于产生保护基及其除去的技术的详细描述可参见 T.W.Greene， “Protecting Groups in Organic Chemistry” ， 第 3 版， John Wiley and Sons， Inc.， 1999。
     本发明的化合物可以方便地制成或在本发明的方法期间形成溶剂合物 ( 例如水 合物 )。本发明的化合物的水合物可以方便地通过用水性 / 有机溶剂混合物 ( 采用有机溶 剂如二氧芑、 四氢呋喃或甲醇 ) 重结晶而制得。
     本发明的化合物可以如下制备为它们的单一立体异构体 ： 使化合物的外消旋混 合物与具有旋光活性的拆分剂反应以形成一对非对映异构化合物， 分离非对映异构体， 并 回收旋光纯的对映异构体。虽然可以采用本发明的化合物的共价非对映异构衍生物进行 对映异构体拆分， 但是可离解的复合物是优选的 ( 例如结晶性非对映异构盐 )。非对映异 构体具有不同的物理性质 ( 例如熔点、 沸点、 溶解性、 反应活性等 )， 利用这些不同可以容 易地分离非对映异构体。非对映异构体可以通过色谱法或优选通过基于溶解性差异的分 离 / 拆分技术来分离。然后通过任意不会导致外消旋化的实用手段回收旋光纯的对映异 构体和拆分剂。可用于从外消旋混合物中拆分化合物的立体异构体的技术的更详细说明 可以参见 Jean Jacques， Andre Collet， Samuel H.Wilen， “Enantiomers， Racemates and Resolutions， ” John Wiley And Sons， Inc.， 1981。 实施例 本发明通过下文的代表性实施例非限制性地进行了进一步示例， 这些实施例是用 于解释本发明的， 而不能解释为对本发明的限制。本文所述终产物的结构可通过标准分析 方法如光谱法和分光镜法 ( 例如 MS、 NMR) 来确认。所用缩略语是本领域常规的那些。化合 物通过标准方法如结晶、 快速色谱法或反相 HPLC 纯化。
     以下缩略语将用于实施例通篇中 ：
     缩略语名单
     BINAP (±)-(1， 1’ - 联萘 -2-2’ 二基 ) 双 ( 二苯膦 )
     DAST 二乙氨基三氟化硫
     Deoxofluor 双 (2- 甲氧基乙基 ) 氨基三氟化硫
     DCM 二氯甲烷 t
     Di- bu X-Phos 2-( 二叔丁基膦基 )2’ ， 4’ ， 6’ - 三异丙基 -1， 1’ - 联苯
     DIEA 二乙胺
     DIPEA 二异丙基乙胺
     DMF 二甲基甲酰胺
     HPLC 高压液相色谱法
     HR MS HATU高分辨率质谱 1-[ 双 ( 二甲氨基 )- 亚甲基 ]-1H-1， 2， 3- 三唑并 [4， 5-b] 吡啶 -3- 氧化物六氟磷酸盐 O- 苯并三唑 -1- 基 -N， N， N′， N′ - 四甲基脲鎓六氟磷酸盐 1- 羟基 -1H- 苯并三唑 六甲基二硅胺烷 质谱 N- 溴代琥珀酰亚胺 N- 甲基吗啉 N- 甲基吗啉 -N- 氧化物 N- 甲基吡咯烷 核磁共振 未得到 未测定 室温 2-( 三甲基甲硅烷基 ) 乙氧基甲基 三氟乙酸 四氢呋喃 2-( 二环己基膦基 )-2’ ， 4’ ， 6’ - 三异丙基 -1， 1’ - 联苯化合物合鎓
     HBTU HOBt HMDS MS NBS NMM NMO NMP NMR n.a. n.d. RT， rt SEM TFA THF X-Phos成 哒嗪 - 芳基醚类和 - 苯胺类
     如流程 1 所示， 式 Ia 化合物可以由中间体 IIIa 制得 ( 如流程 6 所述的制备 )， 中 间体 IIIa 可以通过直接加热的亲核置换或钯催化的亲核置换与苯酚或苯胺反应。化合物 Ia 可以通过 R” 官能团操作转化为其它实施例。
     流程 1
     实施例 1-5 的合成
     实施例 1 ： (R)-4-(4， 5- 二甲基 -6- 苯氧基 - 哒嗪 -3- 基 )-2- 甲基 -3， 4， 5， 6- 四 氢 -2H-[1， 2′ ] 联吡嗪 -5′ - 甲酸甲酯
     在 2 鼓式螺旋盖小瓶中向 (R)-4-(6- 氯 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )-2- 甲基 -3， 4， 5， 6- 四氢 -2H-[1， 2′ ] 联吡嗪 -5′ - 甲酸甲酯 ( 化合物 54， 40mg， 0.106mmol) 在 2mL 甲苯中 的溶液中加入苯酚 (45mg， 0.48mmol)、 磷酸钾 (40.6mg， 0.19mmol) 和二 -tbu X-Phos(5.3mg， 0.014mmol)。 将小瓶抽真空， 充氮气， 然后添加乙酸钯 (II)(2mg， 0.01mmol)。 再向反应混合 物中充氮气， 加热至 100℃达 16 小时。通过硅藻土过滤混合物， 将滤液浓缩， 得到棕色油状 物。通过 HPLC、 用 15-95％乙腈水溶液洗脱 ( 两个流动相均用 3％ n-PrOH 改变 ) 纯化粗产 物， 得到预期产物， 为白色固体 (9mg， 22％ )。 1
     H NMR(400MHz， DMSO-d6)δ ＝ 8.69(s， 1H)， 8.39(s， 1H)， 7.40(t， J ＝ 7.5Hz， 2H)7.19(t， J ＝ 7.5Hz， 1H)， 7.10(d， J ＝ 7.5Hz， 2H)， 4.84-4.82(m， 1H)， 4.42-4.38(m， 1H)， 3.81(s， 3H)， 3.45-3.25(m， 3H)， 3.02-2.99(m， 1H)， 2.93-2.86(m， 1H)， 2.35(s， 3H)， 2.26(s， 3H)， 1.36(d， J ＝ 6.6Hz， 3H)。
     HR MS(m/z， MH+) 测定值 435.2157， 计算值 435.2145
     实施例 2 ： 2-[(R)-4-(4， 5- 二甲基 -6- 苯氧基 - 哒嗪 -3- 基 )-2- 甲基 -3， 4， 5， 6- 四氢 -2H-[1， 2′ ] 联吡嗪 -5′ - 基 ]- 丙烷 -2- 醇
     于 -78℃、 在氮气氛围中在 2 鼓式隔片盖小瓶中向 (R)-4-(4， 5- 二甲基 -6- 苯氧 基 - 哒嗪 -3- 基 )-2- 甲基 -3， 4， 5， 6- 四氢 -2H-[1， 2 ′ ] 联吡嗪 -5 ′ - 甲酸甲酯 (98mg， 0.226mmol) 在 2mL 无水 THF 中的溶液中加入 3M 甲基溴化镁 (600μL， 1.8mmmol)。 将反应混 合物于 -78℃搅拌 1.5 小时， 然后温至 0℃， 再搅拌 2 小时。于 -78℃用饱和 NH4Cl 水溶液使 反应混合物淬灭， 用 DCM 稀释。用盐水洗涤有机溶液， 经 Na2SO4 干燥， 浓缩， 得到粗物质。通 过制备型 HPLC 用 10％ -100％乙腈水溶液洗脱纯化所得固体 ( 两个流动相均用 3％ n-PrOH 改变 )。合并包含预期产物的级分， 冷冻干燥， 得到白色固体 (58mg， 59％ )。 1
     H NMR(400MHz， DMSO-d6)δ ＝ 8.33(s， 1H)， 8.19(s， 1H)， 7.41(t， J ＝ 7.6Hz， 2H)7.20(t ，J ＝ 7.6Hz ， 1H) ， 7.11(d ，J ＝ 7.6Hz ， 2H) ， 5.09(s ， 1H) ， 4.64(m ， 1H) ， 4.16-4.13(m， 1H)， 3.44-3.41(m， 2H)， 3.02-2.99(m， 1H)， 2.89-2.85(m， 1H)， 2.34(s， 3H)， 2.25(s， 3H)， 1.41(s， 6H)， 1.28(d， J ＝ 6.6Hz， 3H)。
     HR MS(m/z， MH+) 测定值 435.2508， 计算值 435.2508
     实施例 3 ： (R)-4-(4， 5- 二甲基 -6- 苯基氨基 - 哒嗪 -3- 基 )-2- 甲基 -3， 4， 5， 6- 四 氢 -2H-[1， 2′ ] 联吡嗪 -5′ - 甲酸甲酯
     和实施例 4 ： (R)-4-(4， 5- 二甲基 -6- 苯基氨基 - 哒嗪 -3- 基 )-2- 甲基 -3， 4， 5， 6- 四 氢 -2H-[1， 2′ ] 联吡嗪 -5′ - 甲酸苯基酰胺在 微 波 试 管 内 向 (R)-4-(6- 氯 -4， 5- 二 甲 基 - 哒 嗪 -3- 基 )-2- 甲 基 -3， 4， 5， 6- 四氢 -2H-[1， 2′ ] 联吡嗪 -5′ - 甲酸甲酯 ( 化合物 54， 250mg， 0.663mmol) 中加入苯胺 (2.4mL， 26.5mmol)。将反应混合物在 190℃在微波反应器中加热 30 分钟。将反应混合物上 硅胶， 通过快速色谱法纯化， 用 50％ -100％ EtOAc ∶庚烷洗脱 6 个柱体积， 然后用 3％ -10％ MeOH 的 DCM 溶液洗脱。收集实施例 3 和 4， 浓缩， 得到白色固体。
     实施例 3 ： 130mg， 45％ . 1
     H NMR(400MHz ， CDCl 3) δ ＝ 8.83(s ， 1H) ， 8.16(s ， 1H) ， 7.41-7.32(m ， 4H) ， 7.14-7.10(m， 1H)， 4.79-4.77(m， 1H)， 4.39-4.35(m， 1H)， 3.96(s， 3H)3.52-3.45(m， 2H)， 3.35-3.42(m， 1H)， 3.24-3.21(m， 1H)， 3.12-3.07(m， 1H)， 2.38(s， 3H)， 2.15(s， 3H)， 1.44(d， J ＝ 6.7Hz， 3H)。
     MS(m/z， MH+) 测定值 434.4， 计算值 434.2
     实施例 4 ： 30mg， 9％
     MS(m/z， MH+) 测定值 495.6， 计算值 495.2
     实施例 5 ： 2-[(R)-4-(4， 5- 二甲基 -6- 苯基氨基 - 哒嗪 -3- 基 )-2- 甲基 -3， 4， 5， 6- 四氢 -2H-[1， 2′ ] 联吡嗪 -5′ - 基 ]- 丙烷 -2- 醇
     于 -78℃、 在氮气氛围中在 2 鼓式隔片盖小瓶中向 (R)-4-(4， 5- 二甲基 -6- 苯基氨 基 - 哒嗪 -3- 基 )-2- 甲基 -3， 4， 5， 6- 四氢 -2H-[1， 2′ ] 联吡嗪 -5′ - 甲酸甲酯 ( 实施例 3， 360mg， 0.14mmol) 在 2mL 无水 THF 中的溶液中加入 3M 甲基溴化镁 (554μL， 1.7mmmol)。 将反应混合物于 -78℃搅拌 1.5 小时， 然后温至 0℃， 再搅拌 1 小时。于 -78℃用饱和 NH4Cl 水溶液使反应混合物淬灭， 用 DCM 稀释。用盐水洗涤有机溶液， 经 Na2SO4 干燥， 浓缩， 得到粗 物质。通过制备型 HPLC 纯化所得固体， 用 10％ -100％乙腈水溶液洗脱 ( 两个流动相均用 3％ n-PrOH 改变 )。合并包含预期产物的级分， 冻干， 得到白色固体 (25mg， 42％ )。 1
     H NMR(400MHz， CDCl3)δ ＝ 8.25(s， 1H)， 8.04(s， 1H)， 7.49(d， J ＝ 7.5Hz， 2H)， 7.31(t， J ＝ 7.5Hz， 2H)， 7.02(t， J ＝ 7.5Hz， 1H)， 6.59(b， 1H)， 4.63-4.61(m， 1H)， 4.16-4.12(m， 1H)， 3.44-3.09(m， 5H)， 2.36(s， 3H)， 2.18(s， 3H)， 1.56(s， 6H)， 1.39(d， J ＝ 7.1Hz， 3H)。
     HR MS(m/z， MH+) 测定值 434.2667， 计算值 434.2668
     芳基 - 哒嗪类
     如流程 2 所示， 式 Ib 化合物可以例如如下制得 ： 由 1， 4- 二氯哒嗪 II 用哌嗪进行 氯置换， 得到中间体 III， 中间体 III 与硼酸或酯以 Suzuki 偶联进行反应， 得到化合物 IV。
     用例如芳基氯在碱性条件下进行亲核芳香取代， 得到实施例 Ib( 路径 A)。或者， 中间体 II 可以与取代的胺反应， 得到化合物 IIIa， 化合物 IIIa 是与硼酸或酯类进行 Suzuki 偶联反应 生成实施例 Ib 的底物 ( 路径 B， X ＝ N、 CH)。化合物 Ib 可以通过 R” 的官能团操作、 例如通 过酯水解和酰胺形成或 Grignard 加成至酯官能团而转化为其它实施例。
     流程 2 中间体的合成 ： 3-(4- 氟 - 苯基 )-4， 5- 二甲基 -6-((R)-3- 甲基 - 哌嗪 -1- 基 )- 哒嗪 ( 化合物1)
     向圆底烧瓶中加入 3- 氯 -4， 5- 二甲基 -6-((R)-3- 甲基 - 哌嗪 -1- 基 )- 哒嗪 (500mg， 2.07mmol)、 4- 氟 苯 基 硼 酸 (580mg， 4.15mmol)、 碳 酸 钠 (440mg， 4.15mmol)、 甲苯 (16mL) 和水 (8mL)。 给反应混合物充氮气 20 分钟。 加入四 ( 三苯膦 ) 钯 (50mg， 0.103mmol)， 将混合物加热至 110℃达 18 小时。浓缩反应混合物， 使其在乙酸乙酯与水之间分配。用乙 酸乙酯萃取两次， 经硫酸钠干燥合并的有机相， 浓缩。通过柱色谱法纯化 (0-25％甲醇 / 二 氯甲烷 )， 得到 480mg 3-(4- 氟 - 苯基 )-4， 5- 二甲基 -6-((R)-3- 甲基 - 哌嗪 -1- 基 )- 哒 嗪 (83％ )。 1
     H NMR(400MHz， CDCl3)δ ＝ 7.34-7.49(m， 2H)7.07(t， J ＝ 8.8Hz， 2H)3.35(m， 2H)2.84-3.13(m， 4H)2.63(dd， J ＝ 12.0Hz， 10.0Hz， 1H)2.20(s， 3H)2.14(s， 3H)1.67(brs， 1H)1.05(d， J ＝ 6.5Hz， 3H)。
     HR MS(m/z， MH+) 测定值 301.1824， 计算值 301.1829 3-(4- 三氟甲基 - 苯基 )-4， 5- 二甲基 -6-((R)-3- 甲基 - 哌嗪 -1- 基 )- 哒嗪 ( 化合物 2)
     按照与化合物 1 类似的方式制得化合物 2。 1
     H NMR(400MHz， CDCl3)δ ＝ 7.69-7.80(m， 2H)7.60-7.70(m， 2H)3.38-3.52(m， 3H)2.98-3.22(m， 4H)2.69-2.83(m， 1H)2.30(s， 3H)2.23(s， 3H)1.15(d， J ＝ 6.4Hz， 3H)。
     HR MS(m/z， MH+) 测定值 351.1806， 计算值 351.1797
     3- 氯 -4， 5- 二甲基 -6-[4-(5- 三氟甲基 - 吡啶 -2- 基 )- 哌嗪 -1- 基 ]- 哒嗪 ( 化 合物 3)
     将 1-(5- 三氟甲基 - 吡啶 -2- 基 )- 哌嗪 (10g， 43.3mmol) 与 3， 6- 二氯 -4， 5- 二 甲基 - 哒嗪 (14.4g， 84.3mmol)、 三乙胺 (8.25mL) 和 NMP(40mL) 合并。将反应混合物加热 至 180 ℃温度达 25 分钟， 然后真空浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化残余物 (0-8 ％ MeOH/ CH2Cl2)， 得到标题化合物 (13.2g， 82％ )。 1
     H NMR(400MHz， DMSO-d6)δ ＝ 8.48-8.41(m， 1H)7.84(dd， J ＝ 9.1Hz， 2.4Hz， 1H)7.03(d， J ＝ 9.1Hz， 1H)3.88-3.76(m， 4H)3.28-3.20(m， 4H)2.31(s， 6H)。
     2-[4-(6- 氯 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )- 哌嗪 -1- 基 ]-4- 三氟甲基 - 嘧啶 -5- 甲 酸甲酯 ( 化合物 4)
     向圆底烧瓶中加入 3- 氯 -4， 5- 二甲基 -6- 哌嗪 -1- 基 - 哒嗪 (1g， 4.41mmol)、 2- 氯 -4- 三 氟 甲 基 - 嘧 啶 -5- 甲 酸 甲 酯 (2.12g， 8.82mmol) 和 二 异 丙 基 乙 胺 (2.3mL， 13.23mmol) 在二 烷 (9mL) 中的溶液， 于室温搅拌 18 小时。过滤反应混合物， 用水和乙酸乙酯冲洗， 得到 1.35g 2-[4-(6- 氯 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )- 哌嗪 -1- 基 ]-4- 三氟甲 基 - 嘧啶 -5- 甲酸甲酯 (71％ )。 1
     H NMR(400MHz， CDCl3)δ ＝ 8.96(s， 1H)， 4.09-4.22(m， 4H)， 3.93(s， 3H)， 3.35(m， 4H)， 2.39(s， 3H)， 2.35(s， 3H)。
     HR MS(m/z， MH+) 测定值 431.1206， 计算值 431.1210
     通过路径 A 合成实施例 6-9
     实施例 6 ： (R)-4-[6-(4- 氟 - 苯基 )-4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 ]-2- 甲基 -3， 4， 5， 6- 四氢 -2H-[1， 2’ ] 联吡嗪 -5’ - 甲酸甲酯
     在 圆 底 烧 瓶 中 合 并 3-(4- 氟 - 苯 基 )-4， 5- 二 甲 基 -6-((R)-3- 甲 基 - 哌 嗪 -1- 基 )- 哒 嗪 (522mg， 1.73mmol)、 5- 氯 - 吡 嗪 -2- 甲 酸 甲 酯 (360mg， 2.07mmol)、 二
     异丙基乙胺 (900μl， 5.19mmol) 和二烷 (3mL)。加热至 110 ℃达 18 小时。浓缩反应混合物， 通过柱色谱法纯化 (0-100 ％乙酸乙酯 / 庚烷梯度 )。将产物与乙腈一起研磨， 得到 480mg(R)-4-[6-(4- 氟 - 苯基 )-4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 ]-2- 甲基 -3， 4， 5， 6- 四 氢 -2H-[1， 2’ ] 联吡嗪 -5’ - 甲酸甲酯 (63％ )。 1
     H NMR(400MHz， CDCl3)δ ＝ 8.87(s， 1H)8.21(s， 1H)7.46-7.60(m， 2H)7.19(t， J ＝ 8.5Hz， 2H)4.84(br s， 1H)4.43(d， J ＝ 13.0Hz， 1H)3.99(s， 3H)3.68(d， J ＝ 12.5Hz， 1H)3.49-3.63(m ， 2H)3.39(dd ，J ＝ 12.8Hz ， 3.8Hz ， 1H)3.15-3.31(m ， 1H)2.41(s ， 3H)2.29(s， 3H)1.50(d， J ＝ 6.5Hz， 3H)。
     HR MS(m/z， MH+) 测定值 437.2097， 计算值 437.2101
     实施例 7 ： (R)-4-[6-(4- 三氟甲基 - 苯基 )-4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 ]-2- 甲 基 -3， 4， 5， 6- 四氢 -2H-[1， 2’ ] 联吡嗪 -5’ - 甲酸甲酯
     按照与实施例 6 类似的方式由化合物 2 制得实施例 7。 1
     H NMR(400MHz， CDCl3)δ ＝ 8.87(s， 1H)， 8.21(d， J ＝ 1.3Hz， 1H)， 7.72-7.82(m， 2H) ， 7.68(d ， J ＝ 8.1Hz ， 2H) ， 4.85(br s ， 1H) ， 4.44(d ， J ＝ 13.3Hz ， 1H) ， 4.00(s ， 3H)， 3.70(d， J ＝ 14.1Hz， 1H)， 3.50-3.64(m， 2H)， 3.41(dd， J ＝ 12.6Hz， 3.6Hz， 1H)， 3.18-3.31(m， 1H)， 2.42(s， 3H)， 2.29(s， 3H)， 1.50(d， J ＝ 6.7Hz， 3H)。
     HR MS(m/z， MH+) 测定值 487.2050， 计算值 487.2069
     实施例 8 ： (R)-4-[6-(4- 三氟甲基 - 苯基 )-4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 ]-2- 甲 基 -3， 4， 5， 6- 四氢 -2H-[1， 2’ ] 联吡嗪 -5’ - 甲酸
     向 实 施 例 7(0.26g， 0.53mmol) 和 甲 醇 (10mL) 的 溶 液 中 加 入 50 ％ LiOH 水 溶 液 (10mL)。将混合物于室温搅拌过夜。除去溶剂， 将残余物溶于水， 用 3N HCl 酸化至 pH 约 7， 用乙酸乙酯萃取。浓缩乙酸乙酯层， 得到标题化合物 (0.25g， 98％ )， 为黄色固体。 1
     H NMR(400MHz， CD2Cl2)δ ＝ 8.90(s， 1H)， 8.12(s， 1H)， 7.81(d， J ＝ 8.0Hz， 2H)， 7.69(d， J ＝ 8.0Hz， 2H)， 4.88(m， 1H)， 4.48(d， J ＝ 13.0Hz， 1H)， 3.66(m， 3H)， 3.40(m， 1H)， 3.23(m， 1H)， 2.43(s， 3H)， 2.27(s， 3H)， 1.53(d， J ＝ 6.5Hz， 3H)。
     HR MS(m/z， MH+) 测定值 473.1900
     实施例 9 ： (R)-4-[6-(4- 氟 - 苯基 )-4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 ]-2- 甲基 -3， 4， 5， 6- 四氢 -2H-[1， 2’ ] 联吡嗪 -5’ - 甲酸
     向实施例 6(0.74g， 1.31mmol) 和甲醇 (10mL) 的溶液中加入氢氧化钠 (100mg)。 将 混合物于室温搅拌过夜。除去溶剂， 将残余物溶于水， 用 3NHCl 酸化至 pH 约 7， 用乙酸乙酯 萃取。浓缩乙酸乙酯层， 得到标题化合物 (0.68g， 96％ )， 为黄色固体。 1
     H NMR(400MHz， CD2Cl2)δ ＝ 8.90(s， 1H)， 8.11(s， 1H)， 7.52(m， 2H)， 7.22(m， 2H)， 4.67(m， 1H)， 4.48(d， J ＝ 12.0Hz， 1H)， 3.65(m， 3H)， 3.40(m， 1H)， 3.26(m， 1H)， 2.46(s， 3H)， 2.32(s， 3H)， 1.53(d， J ＝ 6.5Hz， 3H)。
     HR MS(m/z， MH+) 测定值 423.1941
     通过路径 B 合成实施例 10-40
     硼酸与哒嗪基氯 IIIa 的 SUZUKI 偶联的通用方法
     方法 A
     在圆底烧瓶中， 在 1mL 水和 1.8mL THF 中合并 3- 氯 - 哒嗪 (0.268mmol)、 硼酸 (0.537mmol) 和碳酸钠 (57mg， 0.537mmol)。用氮气将反应混合物净化 20 分钟， 然后加入四 ( 三苯膦 ) 钯 (10mg)， 加热至 110℃达 18 小时。通过硅胶柱色谱法使用 0％ -70％乙酸乙酯 / 庚烷梯度进行纯化。将产物与甲醇和乙腈一起研磨以除去其它杂质， 得到预期产物。
     方法 B
     在 圆 底 烧 瓶 中， 在 2mL 1， 4- 二烷 中 合 并 3- 氯 - 哒 嗪 (0.268mmol)、 硼酸(0.536mmol) 和碳酸铯 (175mg， 0.536mmol)。用氮气将反应混合物净化 1 分钟， 然后加入四 ( 三苯膦 ) 钯 (30mg， 0.026mmol)， 加热至 115℃达 18 小时。通过硅藻土过滤反应混合物， 浓 缩。在乙酸乙酯与水之间分配， 收集有机层。再用乙酸乙酯萃取， 合并有机层。经硫酸钠干 燥， 过滤， 浓缩。将物质与乙腈一起研磨， 然后从热乙腈中重结晶， 得到预期产物。 方法 C
     在微波小瓶中， 在正丁醇溶液 (1.5mL) 中合并 3- 氯 - 哒嗪 (0.080mmol)、 硼酸 (0.096mmol)、 磷酸钾 (34mg， 0.161mmol) 和 X-Phos(1.3mg)。用氮气净化 1 分钟， 加入乙酸 钯 (1mg)， 然后在微波反应器中于 150℃加热 45 分钟。将反应混合物过滤和浓缩， 然后用制 备型 HPLC 纯化 ( 含 1％氢氧化铵的水 / 乙腈 )， 得到预期产物。
     方法 D
     在微波小瓶中， 在正丁醇溶液 (2.5mL) 中合并 3- 氯 - 哒嗪 (0.268mmol)、 硼酸 (0.322mmol)、 磷酸钾 (110mg， 0.537mmol) 和 X-Phos(5mg)。用氮气净化 1 分钟， 加入乙酸 钯 (3.5mg,)， 然后在微波反应器中于 150℃加热 45 分钟。将反应混合物过滤和浓缩， 在乙 酸乙酯与水之间分配， 收集有机层。再次萃取， 合并有机层， 经硫酸钠干燥， 浓缩。通过柱色 谱法用 0-100％乙酸乙酯 / 庚烷梯度进行纯化， 得到预期产物。
     实施例 10-31 ： 下表 ( 表 1) 列出了通过路径 B、 使用上述通用方法 A-D 制得的实施 例化合物 ：
     表1
     通过 Grignard 加成至酯来合成实施例 32-34
     Grignard 加成的通用方案
     向含有酯 (1mmol) 在无水 THF(4mL) 中的溶液的冷却至 -78℃的圆底烧瓶中滴加甲 基溴化镁 (8mmol) 在乙醚中的 3M 溶液。使其温至 0℃， 搅拌 20 分钟后用饱和氯化铵水溶液 淬灭。用乙酸乙酯萃取两次， 收集有机层。经硫酸钠干燥， 浓缩。通过柱色谱法用 0-100％ 乙酸乙酯 / 庚烷梯度进行纯化。将产物与乙腈一起研磨， 过滤， 得到 2- 丙醇。

    [3234] ： 下表 ( 表 2) 列出了通过上述通用方法制得的实施例化合物 ：

    [3235] 表2
     通过酰胺形成来合成实施例 35-40

    [3238] 酰胺形成的通用方案

    [3239] 将 实 施 例 8(40.0mg， 0.08mmol)、 HATU(64.0mg， 0.17mmol)、二 异 丙 基 乙 胺 (44.0mg， 0.34mmol)、 二甲基乙酰胺 (1.5mL) 和胺 (0.13mmol) 的混合物于室温搅拌 10 小 时。通过 HPLC 纯化粗产物 (C18 柱， 乙腈 / 水 (3 ％丙醇 )， 30 ％～ 100 ％ )， 得到实施例 35-40(74％～ 82％ )。

    [3240] 实施例 35-40 ： 下表 ( 表 3) 列出了通过上述通用方法制得的实施例化合物 ：

    [3241] 表3

    [3237] 哌啶 -4- 基 - 哒嗪类

    [3244] 如 流 程 3 所 示， 式 Ic 的 化 合 物 可 以 如 下 制 得 ： 使 被 保 护 的 1， 2， 3， 6- 四 氢 吡 啶 -4- 硼酸与哒嗪氯 V 进行 Suzuki 偶联， 得到中间体 VI， 中间体 VI 在除去保护基和亲核置 换后得到中间体 VII。氢化得到实施例 Ic。

    [3243] 流程 3 中间体的合成 ： 4-(6- 苄基 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )-3， 6- 二氢 -2H- 吡啶 -1- 甲酸叔丁酯 ( 化合物 5)在 圆 底 烧 瓶 中 向 3- 苄 基 -6- 氯 -4， 5- 二 甲 基 哒 嗪 (800mg， 3.44mmol) 在 20mL DMF 中的溶液中加入 4-(4， 4， 5， 5- 四甲基 -1， 3， 2- 二氧杂硼杂环戊烷 -2- 基 )-5， 6- 二 氢 吡 啶 -1(2H)- 甲 酸 叔 丁 酯 (1.3g， 4.1mmol)， 然 后 加 入 碳 酸 钾 (1.43g， 10.3mmol) 和 Pd(PPh3)4(397mg， 0.344mmol)。 将小瓶抽真空， 充氮气。 将反应混合物加热至 100℃达 16 小 时。通过硅藻土过滤混合物， 将滤液浓缩， 得到粗物质。通过硅胶快速色谱法用 3％ -15％ MeOH ∶ DCM 洗脱纯化混合物。 合并包含预期产物的级分， 浓缩， 得到棕色固体 (1.0g， 77％ )。 1

    [3251] H NMR(400MHz， CD2Cl2)δ ＝ 7.30-7.21(m， 5H)， 5.84-5.82(s， 1H)， 4.43(s， 2H)， 4.13-4.11(m， 2H)， 3.69(t， J ＝ 5.5Hz， 1H)， 2.56-2.54(m， 2H)， 2.26(s， 3H)， 2.20(s， 3H)， 1.49(s， 9H)。

    [3252] MS(m/z， MH+) 测定值 380.7， 计算值 380.23

    [3253] 5-(4-(6- 苄基 -4， 5- 二甲基哒嗪 -3- 基 )-5， 6- 二氢吡啶 -1(2H)- 基 ) 吡嗪 -2- 甲 酸甲酯 ( 化合物 6)

    [3250] 向 4-(6- 苄基 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )-3， 6- 二氢 -2H- 吡啶 -1- 甲酸叔丁酯 (170mg， 0.358mmol) 中加入 TFA 在 DCM 中的 50％溶液。将反应混合物搅拌 10 分钟， 浓缩， 得到 3- 苄基 -4， 5- 二甲基 -6-(1， 2， 3， 6- 四氢吡啶 -4- 基 ) 哒嗪， 为黄色粘稠固体 (125mg， 100 ％ )。在微波试管中向 3- 苄基 -4， 5- 二甲基 -6-(1， 2， 3， 6- 四氢吡啶 -4- 基 ) 哒嗪

    [3255] (180mg， 0.644mmol) 在二烷中的溶液中加入 5- 氯吡嗪 -2- 甲酸甲酯 (222mg， 1.29mmol)和 TEA(0.45mL， 3.22mmol)。在微波反应器中将反应混合物在 160℃加热 40 分钟。浓缩混 合物， 得到棕色油状物， 通过制备型 HPLC 用 10 ％ -100 ％乙腈∶水 ( 两个流动相均被 3 ％ n-PrOH 改变 ) 洗脱纯化。 合并包含预期产物的级分， 冷冻干燥， 得到白色固体 (80mg， 30％ )。 MS(m/z， MH+) 测定值 416.5， 计算值 416.2

    [3256] 3- 苄 基 -4， 5- 二 甲 基 -6-(1-(5-( 三 氟 甲 基 ) 吡 啶 -2- 基 )-1， 2， 3， 6- 四 氢 吡 啶 -4- 基 ) 哒嗪 ( 化合物 7)

    [3257] 在 微 波 试 管 中 向 3- 苄 基 -4， 5- 二 甲 基 -6-(1， 2， 3， 6- 四 氢 吡 啶 -4- 基 ) 哒 嗪 烷 中 的 溶 液 中 加 入 2- 氯 -5-( 三 氟 甲 基 ) 吡 啶 (64mg，(70mg， 0.175mmol) 在 2mL 二0.35mmol) 和 TEA(0.122mL， 0.88mmol)。在微波反应器中将反应混合物在 160℃加热 40 分 钟。浓缩混合物， 得到棕色油状物， 通过制备型 HPLC 用 10％ -100％乙腈∶水 ( 两个流动 相均被 3％ n-PrOH 改变 ) 洗脱纯化。合并包含预期产物的级分， 冷冻干燥， 得到白色固体(33mg， 42％ )。 1

    [3259] H NMR(400MHz， DMSO-d6)δ ＝ 8.44(s， 1H)， 7.83(dd， J ＝ 2.5Hz， 9.1Hz， 2H)， 7.30-7.26(m， 2H)， 7.20-7.16(m， 3H)， 6.99-6.97(d， J ＝ 9.1Hz， 1H)， 5.96-5.94(m， 1H)， 4.32(s， 2H)， 4.27-4.26(m， 2H)， 3.97(t， J ＝ 5.6Hz， 2H)， 2.60-2.58(m， 2H)， 2.22(s， 3H)， 2.16(s， 3H)。

    [3260] HR MS(m/z， MH+) 测定值 425.1958， 计算值 425.1953

    [3261] 实施例 41-44 的合成

    [3262] 实施例 41 ： 5-(4-(6- 苄基 -4， 5- 二甲基哒嗪 -3- 基 ) 哌啶 -1- 基 ) 吡嗪 -2- 甲酸 甲酯

    [3263] 向 5-(4-(6- 苄 基 -4， 5- 二 甲 基 哒 嗪 -3- 基 )-5， 6- 二 氢 吡 啶 -1(2H)- 基 ) 吡 嗪 -2- 甲 酸 甲 酯 (60mg， 0.144mmol) 在 20mL EtOH 中 的 溶 液 中 加 入 10 ％ Pd-C(77mg， 72mmol)。将反应混合物在氢气氛围中搅拌 16 小时。通过硅藻土过滤混合物， 浓缩滤液， 得 到黄色固体 (60mg， 100％ )。 1

    [3265] H NMR(400MHz， DMSO-d6)δ ＝ 8.66(s， 1H)， 8.43(s， 1H)， 7.28-7.26(m， 2H)， 7.19-7.15(m ， 3H) ， 4.67-4.64(m ， 2H) ， 4.27(s ， 2) ， 3.81(s ， 3H) ， 3.43-3.39(m ， 1H) ， 3.26-3.17(m， 2H)， 2.27(s， 3H)， 2.14(s， 3H)， 1.92-1.86(m， 4H)。

    [3266] HR MS(m/z， MH+) 测定值 418.2247， 计算值 418.2243

    [3267] 实 施 例 42 ： 2-{5-[4-(6- 苄 基 -4， 5- 二 甲 基 - 哒 嗪 -3- 基 )- 哌 啶 -1- 基 ]- 吡 嗪 -2- 基 }- 丙烷 -2- 醇

    [3264] 和

    [3270] 实施例 43 ： 3- 苄基 -6-{1-[5-(1- 甲氧基 -1- 甲基 - 乙基 )- 吡嗪 -2- 基 ]- 哌 啶 -4- 基 }-4， 5- 二甲基 - 哒嗪

    [3269] 于 -78℃、 在氮气氛围中向 5-(4-(6- 苄基 -4， 5- 二甲基哒嗪 -3- 基 ) 哌啶 -1- 基 ) 吡嗪 -2- 甲酸甲酯 (30mg， 0.07mmol) 在 2mL 无水 THF 中的溶液中加入 3MCH3MgBr(287μL， 0.862mmol)。将反应混合物于 -78℃搅拌 1 小时， 于 0℃再搅拌 1 小时。于 -78℃用饱和氯 化铵水溶液使混合物淬灭， 使混合物在 DCM 与盐水之间分配。经 Na2SO4 干燥有机层， 浓缩， 得到棕色油状物。通过制备型 HPLC 用 10％ -100％乙腈∶水 ( 两个流动相均被 3％ n-PrOH 改变 ) 洗脱纯化混合物。收集实施例 42 和 43， 为白色固体。

    [3272] 1 实施例 42(8mg， 27％ ) ： H NMR(400MHz， DMSO-d6)δ ＝ 8.33(s， 1H)， 8.26(s， 1H)， 7.28-7.24(m， 2H)， 7.19-7.15(m， 3H)， 5.08(s， 3H)， 5.08(s， 1H)， 4.45-4.41(m， 2H)， 4.27(s， 2H)， 3.34-3.24(m， 2H)， 2.27(s， 3H)， 2.15(s， 3H)， 1.92-1.83(m， 4H)， 1.42(s， 6H)。

    [3274] HR MS(m/z， MH+) 测定值 418.2625， 计算值 418.2607 1

    [3275] 实施例 43(6mg， 20％ ) ： H NMR(400MHz， DMSO-d6)δ ＝ 8.30(s， 1H)， 8.20(s， 1H)， 7.28-7.25(m， 2H)， 7.19-7.15(m， 3H)， 4.49-4.45(m， 2H)， 4.27(s， 2H)， 3.34-3.26(m， 1H)， 3.09-3.03(m， 2H)， 3.05(s， 3H)， 2.27(s， 3H)， 2.14(s， 3H)， 1.91-1.84(m， 4H)， 1.45(s， 6H)。 +

    [3276] HR MS(m/z， 2M+H ) 测定值 863.5453， 计算值 863.5448

    [3277] 实施例 44 ： 3- 苄基 -6-{1-[5-( 三氟甲基 ) 吡啶 -2- 基 ]- 哌啶 -4- 基 }-4， 5- 二 甲基 - 哒嗪

    [3278] 向 3- 苄基 -4， 5- 二甲基 -6-(1-(5-( 三氟甲基 ) 吡啶 -2- 基 )-1， 2， 3， 6- 四氢吡 啶 -4- 基 ) 哒嗪 (20mg， 0.047mmol) 在 8mL EtOH 中的溶液中加入 10％ Pd-C(25mg， 19mmol)。 将反应混合物在氢气氛围中搅拌 16 小时。通过硅藻土过滤混合物， 浓缩滤液， 得到灰白色 固体。通过制备型 HPLC 用 10％ -100％乙腈∶水 ( 两个流动相均被 3％ n-PrOH 改变 ) 洗脱 纯化混合物。合并包含预期产物的级分， 冷冻干燥， 得到白色固体 (8mg， 40％ )。

    [3279] MS(m/z， MH+) 测定值 427.4， 计算值 427.48

    [3281] 芳基酰基 -、 芳基羟基甲基 - 和芳基甲基 - 哒嗪类

    [3282] 如流程 4 所示， 二氯 - 哒嗪 II 可以与芳基 - 取代的乙腈在脱质子化和随后氧化 ( 例如用空气 ) 后反应生成芳基酰基化合物 VIII。 用胺对氯进行亲核置换， 得到实施例 Id， 其可以用例如 NaBH4 进一步还原成实施例 Ie( 路径 A)。中间体 VIII 与哌嗪反应， 生成化合 物 IX， 然后化合物 IX 进行 Wolf-Kishner 还原， 生成中间体 X， 然后中间体 X 进行亲核置换 反应， 得到实施例 If( 路径 B)。在 R” 进一步进行官能团转化可以提供其它实施例。

    [3283] 实 施 例 Id 和 Ie 还 可 以 通 过 氧 - 氟 交 换 而 转 化 为 在 Ar 与 哒 嗪 部 分 之 间 具 有 -CF2- 和 -CHF- 连接基的实施例。

    [3280] 流程 4 中间体的合成 ： (R)-2- 甲基 -4-boc-3， 4， 5， 6- 四氢 -2H-[1， 2′ ] 联吡嗪 -5′ - 甲酸甲酯 ( 化合物 8)

    [3288] 向 在 DMF(20mL) 中 的 (R)-1-boc- 甲 基 哌 嗪 (1g， 5.0mmol) 中 加 入 5- 氯 - 吡 嗪 -2- 甲酸甲酯 (862mg， 5.0mmol) 和 Na2CO3(2.1g， 20.0mmol)。将反应混合物在微波反应 器中于 140℃搅拌 3 小时。 然后将混合物冷却至室温， 真空除去有机溶剂， 得到棕色固体， 为 产物 (1.7g， 定量 )。

    [3290] MS(m/z， MH+) 测定值 337

    [3291] (R)-2- 甲基 -3， 4， 5， 6- 四氢 -2H-[1， 2′ ] 联吡嗪 -5′ - 甲酸甲酯 ( 化合物 9)

    [3289] 向 (R)-2- 甲基 -4-boc-3， 4， 5， 6- 四氢 -2H-[1， 2′ ] 联吡嗪 -5′ - 甲酸甲酯 (2g， 烷溶液， 4.5mL， 18mmol)。将反应5.94mmol) 在 MeOH(17mL) 中的溶液中加入 HCl(4M 的二混合物于 70℃搅拌 1 小时。浓缩反应溶液， 溶于 DCM， 用 Na2CO3 洗涤有机层， 将 pH 值调整至 8.0。减压除去溶剂， 得到棕色油状物 (1.2g， 77％ )。

    [3294] 1H NMR(400MHz， DMSO-d6)δ ＝ 8.81(s， 1H)， 8.11(s， 1H)， 4.58(m， 1H)， 4.22(d， J＝ 13.1Hz， 1H)， 3.96(s， 3H)， 3.21(m， 2H)， 3.17(m， 1H)， 3.07(m， 1H)， 2.18(m， 1H)， 1.35(d， J ＝6.5Hz， 3H)。

    [3295] MS(m/z， MH+) 测定值 237

    [3296] 2-((R)-2- 甲基 -3， 4， 5， 6- 四氢 -2H-[1， 2’ ] 联吡嗪 -5’ - 基 )- 丙烷 -2- 醇 ( 化 合物 10)

    [3297] 于 -78 ℃向 (R)-2- 甲基 -3， 4， 5， 6- 四氢 -2H-[1， 2 ′ ] 联吡嗪 -5 ′ - 甲酸甲酯 (60mg， 0.24mmol) 在 THF(3mL) 中的溶液中加入 MeMgBr(3M 的 Et2O 溶液， 640μl， 1.9mmol)。 将反应混合物于 0℃搅拌 2 小时。用饱和 NH4Cl 水溶液 (3mL) 使反应混合物淬灭。再加入 水， 用 EtOAc 萃取混合物 ； 用 NaHCO3 洗涤有机层。通过在 220nm 检测波长处用乙腈的水溶 液 ( 含 3％ 1- 丙醇的 5％ -80％ ) 对粗产物进行 HPLC 纯化， 得到预期产物， 为黄色油状物 (20mg， 35％ )。 1

    [3299] H NMR(400MHz， DMSO-d6)δ ＝ 8.30(s， 1H)， 8.10(s， 1H)， 5.06(s， 1H)， 4.40(m， 1H)， 3.91(m， 1H)， 3.98(m， 2H)， 2.85(m， 2H)， 2.65(m， 1H)， 1.40(s， 6H)， 1.13(d， J ＝ 6.6Hz， 3H)。

    [3298] MS(m/z， MH+) 测定值 237 (6- 氯 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )- 苯基 - 甲酮 ( 化合物 11)将 3， 6- 二 氯 -4， 5- 二 甲 基 - 哒 嗪 (1.00g， 5.65mmol) 和 苯 基 乙 腈 (652mL， 5.65mmol) 溶 于 甲 苯 (17.5mL)，冷 却 至 0 ℃，加 入 NaHMDS(5.65mL， 2M 的 THF 溶 液， 11.3mmol)。将反应混合物搅拌 16 小时， 同时从 0℃缓慢温至室温。将混合物在开放空气 中剧烈搅拌另外 24 小时。通过添加 NaHCO3 水溶液使混合物淬灭， 分离各层， 用 DCM 萃取水 相。浓缩合并的有机相， 得到标题化合物， 为棕色固体 (1.4g， 定量 )。 1

    [3304] H NMR(400MHz， CDCl3)δ ＝ 7.82(m， 2H)， 7.55(m， 1H)， 7.40(m， 2H)， 2.39(s， 3H)， 2.28(s， 3H)。

    [3305] MS(m/z， MH+) 测定值 247.4

    [3306] (6- 氯 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )- 吡啶 -4 基 - 甲酮 ( 化合物 12)

    [3303] 根据下述方案， 由 3， 6- 二氯 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 (1.00g， 5.65mmol) 和 4- 吡啶基 乙腈盐酸盐 (1.05g， 6.79mmol) 得到标题化合物， 为白色固体 (822mg， 59％ )。

    [3309] (6- 氯 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )- 吡啶 -3- 基 - 甲酮 ( 化合物 13)

    [3308] 在 N2 氛围中将 3， 6- 二氯 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 (1.00g， 5.65mmol) 加入到烘干的 250-mL 圆底烧瓶中， 然后加入 THF(50mL) 和吡啶 -3- 基 - 乙腈 (800mg， 7.68mmol)。用 N2 气 流使反应物脱气 30 分钟。 加入 NaHMDS(14.13mL， 1.0M， 14.13mmol)， 将反应物搅拌 16 小时。 然后将反应混合物转入烧杯中， 在开放气氛下剧烈搅拌数小时。用饱和碳酸氢钠溶液使反 应物淬灭， 用二氯甲烷萃取有机相。 用盐水洗涤合并的有机层， 经 Na2SO4 干燥， 过滤， 减压浓 缩。 通过硅胶快速色谱法纯化粗物质 (0-20％甲醇的 CH2Cl2 溶液 )， 得到标题化合物 (1.3g， 93％ )。 1

    [3312] H NMR(400MHz， DMSO-d6)δ ＝ 8.97(s， 1H)， 8.80(d， J ＝ 4.5Hz， 1H)， 8.25(d， J＝ 8.0Hz， 1H)， 7.60-7.64(m， 1H)， 2.44(s， 3H)， 2.33(s， 3H)。

    [3313] (6- 氯 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )- 吡啶 -2- 基 - 甲酮 ( 化合物 14)

    [3311] 在 N2 氛围中将 3， 6- 二氯 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 (1.00g， 5.65mmol) 加入到干燥的 250-mL 圆底烧瓶中， 然后加入 THF(50mL) 和吡啶 -3- 基 - 乙腈 (800mg， 7.68mmol)。使反应 物脱气 30 分钟。加入 NaHMDS(1.0M， 14.13mL， 14.13mmol)， 将反应物搅拌过夜。然后将反应 混合物转入烧杯中， 在空气中剧烈搅拌数小时。 用饱和碳酸氢钠溶液使反应物淬灭， 用二氯 甲烷萃取有机相。用盐水洗涤合并的有机层， 经 Na2SO4 干燥， 过滤， 减压浓缩。通过硅胶快 速色谱法纯化粗物质 (0-20％甲醇的 CH2Cl2 溶液 )， 得到标题化合物 (616mg， 44％ )。 1

    [3316] H NMR(400MHz， DMSO-d6)δ ＝ 8.68(m， 1H)， 8.26(m， 1H)， 8.16(m， 1H)， 7.76(m， 1H)， 2.45(s， 3H)， 2.21(s， 3H)。

    [3317] [4， 5- 二甲基 -6-((R)-3- 甲基 - 哌嗪 -1- 基 )- 哒嗪 -3- 基 ]- 吡啶 -4- 基 - 甲酮 ( 化合物 15)

    [3315] 根据下述方案， 由 (6- 氯 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )- 吡啶 -4- 基 - 甲酮 (750mg， 3.03mmol) 和 (R)-2- 甲 基 - 哌 嗪 (364mg， 3.63mmol) 得 到 标 题 化 合 物， 为浅褐色固体 (778mg， 83％ )。

    [3320] [4， 5- 二甲基 -6-((R)-3- 甲基 - 哌嗪 -1- 基 )- 哒嗪 -3- 基 ]- 吡啶 -3- 基 - 甲酮 ( 化合物 16)

    [3319] 将 (6- 氯 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )- 吡啶 -3- 基 - 甲酮 (1.2g， 4.84mmol) 和(R)-2- 甲基 - 哌嗪 (485mg， 4.84mmol) 加入到微波小瓶中， 然后加入 NMP(17mL) 和三乙胺 (2.01mL， 14.49mmol)。密封小瓶， 在 170℃用微波照射 30 分钟。直接通过硅胶快速色谱法 (0-20％甲醇的 CH2Cl2 溶液 ) 纯化粗物质。将所得油状物与 CH2Cl2 和庚烷一起共蒸发， 得到 标题化合物， 为粉末 (1350mg， 90％ )。 1

    [3323] H NMR(400MHz ， DMSO-d 6) δ ＝ 9.56(br s ， 1H) ， 8.96(s ， 1H) ， 8.84-8.86(m ， 1H)， 8.21-8.24(m， 1H)， 7.60-7.63(m， 1H)， 3.72(s， 1H)， 3.69(s， 1H)， 3.45-3.50(m， 1H)， 3.26-3.31(m， 4H)， 2.30(s， 6H)， 1.32(d， J ＝ 6.5Hz， 3H)。

    [3324] [4， 5- 二甲基 -6-((R)-3- 甲基 - 哌嗪 -1- 基 )- 哒嗪 -3- 基 ]- 吡啶 -2- 基 - 甲酮 ( 化合物 17)

    [3325] 将 (6- 氯 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )- 吡啶 -2- 基 - 甲酮 (550mg， 2.22mmol)、 (R)-2- 甲基 - 哌嗪 (320mg， 3.20mmol) 加入到微波小瓶中， 然后加入 NMP(6mL) 和三乙胺 (0.92mL， 6.66mmol)。密封小瓶， 在 180 ℃用微波照射 1 小时。直接通过硅胶快速色谱法 得到标题化合物 (671mg， 97％ )。 (20-70％甲醇的 CH2Cl2 溶液 ) 纯化粗物质， 1

    [3327] H NMR(400MHz ， DMSO-d 6) δ ＝ 9.57(br s ， 1H) ， 8.66(d ， J ＝ 5.0Hz ， 1H) ， 8.10-8.17(m ， 2H) ， 7.69-7.73(m ， 1H) ， 3.65(m ， 1H) ， 3.62(m ， 1H) ， 3.45-3.50(m ， 1H) ， 3.12-3.33(m， 4H)， 2.29(s， 3H)， 2.15(s， 3H)， 1.32(d， J ＝ 6.5Hz， 3H)。

    [3328] 4， 5- 二甲基 -3-((R)-3- 甲基 - 哌嗪 -1- 基 )-6- 吡啶 -4- 基甲基 - 哒嗪 ( 化合物 18)

    [3326] 根据下述方案， 由 4， 5- 二甲基 -6-((R)-3- 甲基 - 哌嗪 -1- 基 )- 哒嗪 -3- 基 ]- 吡 啶 -4- 基 - 甲 酮 (550mg， 1.77mmol)、 一 水 合 肼 (0.43mL， 8.84mmol) 和 KOH 颗 粒 (495mg， 8.82mmol) 得到标题化合物 (372mg， 71％ )。

    [3331] 4， 5- 二甲基 -3-((RR)-3- 甲基 - 哌嗪 -1- 基 )-6- 吡啶 -3- 基甲基 - 哒嗪 ( 化合 物 19)

    [3330] 在圆底烧瓶中加入 4， 5- 二甲基 -6-((R)-3- 甲基 - 哌嗪 -1- 基 )- 哒嗪 -3- 基 ]- 吡 啶 -3- 基 - 甲酮 (1300mg， 4.17mmol)、 一水合肼 (1045mg， 20.88mmol)、 KOH 颗粒 (1171.4mg， 20.88mmol) 和二甘醇 (26mL)， 将反应物在 190℃加热 4 小时。将反应混合物温至室温， 倾 入水中。用二氯甲烷萃取有机相。用盐水洗涤合并的有机层， 经 Na2SO4 干燥， 过滤， 减压 浓缩。通过硅胶快速色谱法 (50/40/10CH2Cl2/MeOH/NH4OH)) 纯化粗物质， 得到标题化合物

    [3333] (1.17g， 94％ )。 1

    [3334] H NMR(400MHz， DMSO-d6)δ ＝ 8.47(s， 1H)， 8.41-8.42(m， 1H)， 7.54-7.56(m， 1H)， 7.29-7.32(m， 1H)， 4.25(s， 2H)， 4.12(br s， 1H)， 3.17-3.22(m， 3H)， 2.72-2.94(m， 4H)， 2.17(s， 3H)， 2.13(s， 3H)， 0.99(d， J ＝ 6.0Hz， 3H)。

    [3335] 实施例 45-55 的合成

    [3336] 实施例 45 ： (R)-4-(6- 苯甲酰基 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )-2- 甲基 -3， 4， 5， 6- 四氢 -2H-[1， 2’ ] 联吡嗪 -5’ - 甲酸甲酯

    [3337] 向在 DMF(5mL) 中的 (R)-2- 甲基 -3， 4， 5， 6- 四氢 -2H-[1， 2] 联吡嗪 -5’ - 甲酸甲 酯 (100mg， 0.403mmol) 中加入 (6- 氯 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )- 苯基 - 甲酮 (100mg， 0.402mmol) 和碳酸钠 (170.7mg， 1.61mmol)， 将反应混合物在 180℃在微波反应器中加热 4 小时。然后用 DCM(25mL) 稀释反应混合物， 用 NaHCO3 和水洗涤。萃取和减压除去有机溶剂。 通过在 220nm 检测波长处使用乙腈的水溶液 ( 含 3％ 1- 丙醇的 20％ -100％ ) 的 HPLC 纯化 粗产物， 收集预期产物， 为灰白色粉末 (58mg， 32％ )。 1

    [3339] H NMR(400MHz， DMSO-d6)δ ＝ 8.65(s， 1H)， 8.35(s， 1H)， 7.48-7.65(m， 5H)， 4.39(d， J ＝ 13.1Hz， 1H)， 3.54(d， J ＝ 12.6Hz， 1H)， 3.29(m， 2H)， 3.17(m， 3H)， 2.31(s， 3H)， 2.18(s， 3H)， 1.30(s， 3H)。

    [3340] HR MS(m/z， MH+) 测定值 446.5098， 计算值 446.5104

    [3341] 实 施 例 46 ： (6-{(R)-4-[4-(1- 羟 基 -1- 甲 基 - 乙 基 )- 苯 基 ]-3- 甲 基 - 哌 嗪 -1- 基 }-4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )- 苯基 - 甲酮

    [3338] 向 在 DMF(3mL) 中 的 (6- 氯 -4， 5- 二 甲 基 - 哒 嗪 -3- 基 )- 苯 基 - 甲 酮 (50mg， 0.20mmol) 中 加 入 2-[4-(R)-2- 甲 基 - 哌 嗪 -1- 基 ]- 苯 基 ]- 丙 烷 -2- 醇 (47.4mg， 0.20mmol) 和碳酸钠 (86.2mg， 0.81mmol)， 将反应混合物在 180℃在微波反应器中加热 4 小 时。然后用 DCM(15mL) 稀释反应混合物， 用 NaHCO3 和水洗涤。萃取和减压除去有机溶剂。通过在 220nm UV 检测波长处使用 ACN 的水溶液 ( 含 3％ 1- 丙醇的 20％ -100％ ) 的 HPLC 纯化粗产物， 得到预期产物， 为灰白色粉末 (25mg， 28％ )。 1

    [3344] H NMR(400MHz， DMSO-d6)δ ＝ 8.42(s， 1H)， 8.23(s， 1H)， 7.61-7.89(m， 5H)， 4.77(m， 1H)， 4.25(d， J ＝ 12.6Hz， 1H)， 3.75(d， J ＝ 12.6Hz， 1H)， 3.65(d， J ＝ 12.6Hz， 1H)， 3.29(m， 2H)， 3.11(m， 1H)， 2.50(s， 3H)， 2.32(s， 3H)， 1.47(s， 6H)， 1.35(d， J ＝ 6.6Hz， 3H)。

    [3345] HR MS(m/z， MH+) 测定值 444.2256， 计算值 444.2651

    [3346] 实施例 47 ： (R)-4[6-( 羟基 - 苯基 - 甲基 )-4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 ]-2- 甲 基 -3， 4， 5， 6- 四氢 -2H-[1， 2] 联吡嗪 -5’ - 甲酸甲酯

    [3347] 在 15 分 钟 内 向 在 MeOH(2mL) 中 的 (R)-4-(6- 苯 甲 酰 基 -4， 5- 二 甲 基 - 哒 嗪 -3- 基 )-2- 甲基 -3， 4， 5， 6- 四氢 -2H-[1， 2’ ] 联吡嗪 -5’ - 甲酸甲酯 (8mg， 0.017mmol) 中加入硼氢化钠 (170μg， 0.004mmol)， 将反应混合物于室温搅拌 1h。用 DCM 稀释反应混合 物， 用 NaHCO3 和水洗涤。分离有机溶剂， 减压除去溶剂。通过在 220nm 检测波长处使用乙 腈的水溶液 ( 含 3％ 1- 丙醇的 10％ -100％ ) 的 HPLC 纯化粗产物， 得到预期产物， 为灰白色 粉末 (6mg， 79％ )。 1

    [3349] H NMR(400MHz， DMSO-d6)δ ＝ 8.77(s， 1H)， 8.47(s， 1H)， 7.29-7.38(m， 5H)， 6.15(s， 1H)， 4.92(m， 1H)， 4.50(m， 1H)， 3.89(s， 3H)， 3.49-3.61(m， 3H)， 3.17-3.02(m， 2H)， 2.30(s， 3H)， 2.14(s， 3H)， 1.43(d， J ＝ 6.6Hz， 3H)。

    [3350] MS(m/z， MH+) 测定值 449

    [3351] 实施例 48 ： 2-{(R)-4-[6-( 羟基 - 苯基 - 甲基 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )-2- 甲 基 -3， 4， 5， 6- 四氢 -2H-[1， 2] 联吡嗪 -5’ - 基 ]- 丙烷 -2- 醇

    [3348] 于 -78 ℃向在 THF(2mL) 中的 (R)-4[6-( 羟基 - 苯基 - 甲基 )-4， 5- 二甲基 - 哒 嗪 -3- 基 ]-2- 甲基 -3， 4， 5， 6- 四氢 -2H-[1， 2] 联吡嗪 -5’ - 甲酸甲酯 (15mg， 0.032mmol) 中加入甲基溴化镁 (32μl， 0.095mmol)， 将反应混合物于 0℃搅拌 2 小时。用 DCM 稀释反应 混合物， 用 NH4Cl 和水洗涤。将有机溶剂分离、 萃取和减压浓缩。通过在 220nm 检测波长处 使用乙腈的水溶液 ( 含 3％ 1- 丙醇的 10％ -100％ ) 的 HPLC 纯化粗产物， 得到预期产物， 为 灰白色粉末 (11mg， 77％ )。 1

    [3354] H NMR(400MHz， DMSO-d6)δ ＝ 8.27(s， 1H)， 8.07(s， 1H)， 7.29-7.34(m， 5H)， 5.88(s ， 1H) ， 4.67(m ， 1H) ， 4.19(m ， 1H) ， 3.61(m ， 1H) ， 3.52-3.31(m ， 3H) ， 3.19(tt ， J ＝ 3.5Hz， 12.7Hz， 1H)， 2.29(s， 3H)， 2.05(s， 3H)， 1.57(s， 6H)， 1.40(d， J ＝ 6.6Hz， 3H)。

    [3355] HR MS(m/z， MH+) 测定值 449.2649， 计算值 444.2665

    [3356] 实施例 49 ： (R)-4-(4， 5- 二甲基 -6- 吡啶 -4- 基甲基 - 哒嗪 -3- 基 )-2- 甲基 -3， 4， 5， 6- 四氢 -2H-[1， 2′ ] 联吡嗪 -5′ - 甲酸甲酯

    [3353] 根 据 下 述 对 实 施 例 46 所 述 的 方 案， 由 4， 5- 二 甲 基 -3-((R)-3- 甲 基 - 哌 嗪 -1- 基 )-6- 吡 啶 -4- 基 甲 基 - 哒 嗪 (155mg， 0.51mmol) 和 5- 氯 - 吡 嗪 -2- 甲 酸 甲 酯 (99mg， 0.56mmol) 得到标题化合物， 为橙色油状物 (123mg， 56％ )。

    [3359] 实 施 例 50 ： 2-[(R)-4-(4， 5- 二 甲 基 -6- 吡 啶 -4- 基 甲 基 - 哒 嗪 -3- 基 )-2- 甲 基 -3， 4， 5， 6- 四氢 -2H-[1， 2′ ] 联吡嗪 -5′ - 基 ]- 丙烷 -2- 醇

    [3358] 根据下述方案， 由 (R)-4-(4， 5- 二甲基 -6- 吡啶 -4- 基甲基 - 哒嗪 -3- 基 )-2- 甲 基 -3， 4， 5， 6- 四 氢 -2H-[1， 2 ′ ] 联 吡 嗪 -5 ′ - 甲 酸 甲 酯 (110mg， 0.25mmol) 和 MeMgI(0.660mL， 1.98mmol) 得到标题化合物， 为黄色粉末 (40mg， 37％ )。 1

    [3362] H NMR(400MHz， DMSO-d6)δ ＝ 8.47(d， J ＝ 5.5Hz， 2H)， 8.36(s， 1H)， 8.21(s， 1H)， 7.21(d， J ＝ 5.5Hz， 2H)， 5.15(s， 1H)， 4.68(br s， 1H)， 4.29(s， 2H)， 4.17(d， J ＝ 12.5Hz， 1H)， 3.21-3.59(m， 3H)， 3.07(dd， J ＝ 12.5Hz， 3.5Hz， 1H)， 2.89-3.00(m， 1H)， 2.28(s， 3H)， 2.13(s， 3H)， 1.42(s， 6H)， 1.28(d， J ＝ 6.5Hz， 3H)。HR MS(m/z， MH+) 测定值 434.2650， 计算 值 434.2668

    [3363] 实施例 51 ： (R)-4-(4， 5- 二甲基 -6- 吡啶 -3- 基甲基 - 哒嗪 -3- 基 )-2- 甲基 -3， 4， 5， 6- 四氢 -2H-[1， 2′ ] 联吡嗪 -5′ - 甲酸甲酯

    [3361] 将 4， 5- 二甲基 -3-((R)-3- 甲基 - 哌嗪 -1- 基 )-6- 吡啶 -3- 基甲基 - 哒嗪 (350mg， 1.18mmol) 和 5- 氯 - 吡嗪 -2- 甲酸甲酯 (243.7mg， 1.41mmol) 加入到微波小瓶中， 然后加入 NMP(7mL) 和三乙胺 (0.49mL， 3.54mmol)。密封小瓶， 在 145℃用微波照射 30 分钟。直接通 过硅胶快速色谱法纯化粗物质 (0-20％甲醇的 CH2Cl2 溶液 )， 得到标题化合物 (30mg， 6％ )。 1

    [3366] H NMR(400MHz， DMSO-d6)δ ＝ 8.71(s， 1H)， 8.52(d， J ＝ 6Hz， 1H)， 8.48(s， 1H)， 8.42(s， 1H)， 7.57(d， J ＝ 8Hz， 1H)， 7.30-7.33(m， 1H)， 4.85(m， 1H)， 4.45(d， J ＝ 12Hz， 1H)， 4.29(s， 2H)， 3.79(s， 3H)， 3.41-3.55(m， 3H)， 3.08(m， 1H)， 2.93-2.99(m， 1H)， 2.28(s， 3H)， 2.17(s， 3H)， 1.36(d， J ＝ 7Hz， 3H)。

    [3367] 实 施 例 52 ： 2-[(R)-4-(4， 5- 二 甲 基 -6- 吡 啶 -3- 基 甲 基 - 哒 嗪 -3- 基 )-2- 甲 基 -3， 4， 5， 6- 四氢 -2H-[1， 2′ ] 联吡嗪 -5′ - 基 ]- 丙烷 -2- 醇

    [3365] 在 N2 氛围中将 (R)-4-(4， 5- 二甲基 -6- 吡啶 -3- 基甲基 - 哒嗪 -3- 基 )-2- 甲基 -3， 4， 5， 6- 四氢 -2H-[1， 2′ ] 联吡嗪 -5′ - 甲酸甲酯 (25mg， 0.058mmol) 加入到烘干的圆底 烧瓶中， 然后加入 THF(0.6mL)。然后将反应物放入干冰浴达 15 分钟。滴加 MeMgI(0.15mL， 3.0M， 0.461mmol)， 将反应物于 -78 ℃搅拌 30 分钟。将反应物温至 0 ℃， 搅拌 30 分钟或直 到观察到反应完全。用饱和氯化铵溶液使反应混合物淬灭。用乙酸乙酯萃取有机相。经 Na2SO4 干燥合并的有机层， 过滤， 减压浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化粗物质 (2％ CH2Cl2， 98％ (50/30/20 乙酸乙酯 / 庚烷 /MeOH))， 得到标题化合物 (3.5mg， 14％ )。

    [3369] 50102143958 A CN 102143965

    [3370] 1说明书46/100 页H NMR(400MHz， DMSO-d6)δ ＝ 8.49(s， 1H)， 8.42(d， J ＝ 6.7Hz， 1H)， 8.36(s， 1H)， 8.21(s， 1H)， 7.57(d， J ＝ 7.9Hz， 1H)， 7.32(m， 1H)， 5.13(s， 1H)， 4.67(s， br， 1H)， 4.29(s， 2H)， 4.17(d， J ＝ 12.5Hz， 1H)， 3.51(d， J ＝ 12.5Hz， 1H)， 3.34-3.42(m， 2H)， 3.07(dd， J＝ 12.1Hz， 1H)， 2.93-2.97(dt， J ＝ 3.4Hz， 12.5Hz， 1H)， 2.28(s， 3H)， 2.17(s， 3H)， 1.43(s， 6H)， 1.28(d， J ＝ 6.5Hz， 3H)。

    [3371] HR MS(m/z， MH+) 测定值 434.2663， 计算值 434.2668

    [3372] 实施例 53 ： (R)-4-(4， 5- 二甲基 -6- 吡啶 -2- 基甲基 - 哒嗪 -3- 基 )-2- 甲基 -3， 4， 5， 6- 四氢 -2H-[1， 2′ ] 联吡嗪 -5′ - 甲酸甲酯

    [3373] 步骤 1 ： 2， 4- 二甲基 -3- 吡啶 -2- 基甲基 - 戊烷 -3- 醇 ( 化合物 20) 的制备将 2- 甲基 - 吡啶 (1.86g， 20mmol) 溶于 THF(20mL)， 冷却至 -30 ℃。向溶液中滴 加叔丁基锂 (11.8mL， 1.7M 的戊烷溶液， 20mmol)， 将反应物于 -30℃搅拌 30 分钟。加入 2， 4- 二甲基 - 戊烷 -3- 酮 (3.4mL， 24mmol)， 将反应物温至室温， 搅拌 2 小时。 加入 H2O(30mL)， 用 EtOAc 萃取。用盐水洗涤合并的有机相， 真空浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化残余物 (EtOAc/ 庚烷 )， 得到 2， 4- 二甲基 -3- 吡啶 -2- 基甲基 - 戊烷 -3- 醇 (4.14g， 定量 )。

    [3377] 步骤 2 ： (R)-4-(4， 5- 二甲基 -6- 吡啶 -2- 基甲基 - 哒嗪 -3- 基 )-2- 甲基 -3， 4， 5， 6- 四氢 -2H-[1， 2′ ] 联吡嗪 -5′ - 甲酸甲酯 ( 实施例 53)

    [3378] 将 (R)-4-(6- 氯 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )-2- 甲基 -3， 4， 5， 6- 四氢 -2H-[1， 2′ ] 联吡嗪 -5′ - 甲酸甲酯 (250mg， 0.663mmol) 与 2， 4- 二甲基 -3- 吡啶 -2- 基甲基 - 戊 烷 -3- 醇 (114.6mg， 0.553mmol)、 碳 酸 铯 (216.2mg， 0.664mmol)、 三 氟 乙 酸 钯 (6.2mg， 0.028mmol)、 三环己基膦 (15.5mg， 0.055) 和甲苯 (2mL) 合并。将反应混合物加热至 110℃ 达 65 小时， 以达到 10％转化率。加入 H2O， 用 EtOAc 萃取。真空浓缩合并的有机相。通过 硅胶快速色谱法纯化残余物 (MeOH/CH2Cl2)， 得到标题化合物 (13mg， 5.4％ )。 1

    [3379] H NMR(400MHz， DMSO-d6)δ ＝ 8.71(d， J ＝ 1.3Hz， 1H)， 8.46-8.43(m， 1H)， 8.41(d， J ＝ 1.3Hz， 1H)， 7.71(td， J ＝ 7.7Hz， 1.8Hz， 1H)， 7.27-7.18(m， 2H)， 4.86(br s， 1H)， 4.41(s， 2H)， 4.48-4.38(m， 1H)， 3.83(s， 3H)， 3.59-3.38(m， 3H)， 3.08(dd， J ＝ 12.6Hz， 3.7Hz， 1H)， 2.95(td， J ＝ 12.2Hz， 3.2Hz， 1H)， 2.28(s， 3H)， 2.16(s， 3H)， 1.36(d， J ＝ 6.6Hz， 3H)。

    [3380] HR MS(m/z， MH+) 测定值 434.2236， 计算值 434.2304

    [3381] 实施例 54 ： 2-[(R)-4-(4， 5- 二甲基 -6- 吡啶 -2 基甲基 - 哒嗪 -3- 基 )-2- 甲基 -3， 4， 5， 6- 四氢 -2H-[1， 2′ ] 联吡嗪 -5′ - 基 ]- 丙烷 -2- 醇

    [3376] 如实施例 52 所述， 通过添加 MeMgI 由实施例 53 制得实施例 54。

    [3384] HR MS(m/z， MH+) 测定值 434.2666， 计算值 434.2668

    [3385] 实施例 55 ： 2-{(R)-4-[6-( 二氟 - 苯基 - 甲基 )-4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 ]-2- 甲 基 -3， 4， 5， 6- 四氢 -2H-[1， 2′ ] 联吡嗪 -5′ - 基 }- 丙烷 -2- 醇

    [3383] 步骤 1 ： 3- 氯 -4， 5- 二甲基 -6-(2- 苯基 -[1， 3] 二硫戊环 -2- 基 )- 哒嗪 ( 化合物21)

    [3388] 于 0℃、 在氮气氛围中向 (6- 氯 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )- 苯基 - 甲酮 (300mg， 1.22mmol) 的 DCM 溶液中加入 1， 2- 乙二硫醇 (0.408ml， 4.86mmol) 和 BF3·OEt2(0.154ml， 1.216mmol)。将反应混合物于室温搅拌 16 小时。向反应物中加入 BF3·OEt2(0.154ml， 1.216mmol) 和 1， 2- 乙二硫醇 (0.408ml， 4.86mmol)， 于 40 ℃加热 6 小时。于 0 ℃用饱和 NaHCO3 使反应物淬灭， 用盐水洗涤有机相。 将有机层经 Na2SO4 干燥， 过滤， 浓缩， 得到黄色固 体。将残余物上硅胶， 通过快速色谱法用 20-80％ EtOAc ∶庚烷洗脱纯化。合并含有预期产 物的级分， 浓缩， 得到白色固体 (280mg， 73％ )。 1

    [3390] H NMR(400MHz， CDCl3)δ ＝ 7.54-7.53(m， 2H)， 7.28-7.22(m， 3H)， 3.46-3.34(m， 4H)， 2.30(s， 3H)， 1.94(s， 3H)。

    [3391] MS(m/z， MH+) 测定值 323.0， 计算值 322.88

    [3392] 步骤 2 ： 3- 氯 -6-( 二氟 - 苯基 - 甲基 )-4， 5- 二甲基 - 哒嗪 ( 化合物 22)

    [3389] 向 NBS(49.6mg， 0.279mmol) 的 DCM(1mL) 溶液中加入 DAST(0.147ml， 1.115mmol)。 将 反 应 混 合 物 冷 却 至 0 ℃， 然 后 加 入 3- 氯 -4， 5- 二 甲 基 -6-(2- 苯 基 -[1， 3] 二 硫 戊 环 -2- 基 )- 哒 嗪 (90mg， 0.279mmol)。 将 混 合 物 于 室 温 搅 拌 3 小 时。 再 加 入 2 当 量 DAST(73.7μL， 0.558mmol)， 将混合物再搅拌 2 小时。于 0℃用饱和 NaHCO3 使反应混合物淬 灭。用 DCM 洗涤水层， 经 Na2SO4 干燥合并的有机层， 浓缩， 得到粗混合物。将残余物上硅胶， 通过快速色谱法用 15-45％ EtOAc ∶庚烷洗脱纯化。合并含有预期产物的级分， 浓缩， 得到 黄色油状物 (15mg， 20％ )。 1

    [3395] H NMR(400MHz， CDCl3)δ ＝ 7.54-7.52(m， 2H)， 7.47-7.43(m， 3H)， 2.42-2.41(m，

    [3394] 6H)。 F NMR(400MHz， CDCl3)δ ＝ -89.9

    [3397] MS(m/z， MH+) 测定值 269.2， 计算值 269.06

    [3398] 步骤 3 ： 2-{(R)-4-[6-( 二氟 - 苯基 - 甲基 )-4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 ]-2- 甲 基 -3， 4， 5， 6- 四氢 -2H-[1， 2′ ] 联吡嗪 -5′ - 基 }- 丙烷 -2- 醇 ( 实施例 55)

    [3399] 如实施例 46 所述由化合物 10 和 22 制得实施例 55。

    [3400] 哌啶 -1- 基 - 哒嗪类

    [3401] 如流程 5 所示， 哌啶 -1- 基 - 哒嗪类可以通过多种路径制得。根据路径 A， 可以使 官能化哌啶与中间体 V 反应， 得到实施例 Ig。实施例 Ih 和 Ii 可以通过路径 B 制得。V 与 4- 哌啶基甲酸酯反应， 在酯水解后提供了中间体 XIa， 中间体 XIa 可以反应生成咪唑 - 取代 的实施例 Ih 或者可以与邻位 - 二苯胺缩合生成实施例 Ii。路径 C 通过使中间体 V 与 4- 氰 基哌啶反应和随后使 XIb 与 R” -Br 进行 Pd- 催化反应提供了实施例 Ij。进一步的咪唑 - 取 代的实施例 Ik 可以由中间体 XIc 制备 ( 通过在氨和酮 - 醛前体的存在下进行缩合反应 )， 中间体 XIc 可通过 4- 羟基甲基 - 哌啶与 V 反应和然后使醇官能团氧化而得到 ( 路径 D)。 路径 E 提供了酮 XId， 酮 XId 可以作为金属 - 有机试剂如 R” -Li 的亲电体以提供叔醇实例 II。用氟化试剂如 Deoxofluor 对羟基进行转化， 又得到实施例 In。酮 XId 可以用于与胺和 例如作为还原剂的 NaBH(OAc)3 进行还原性胺化， 得到实施例 Io。

    [3396] 19流程 5

    [3404] 通过路径 A 合成实施例 56 ：

    [3405] 实施例 56 ： 2-[1-(6- 苄基 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )- 哌啶 -4- 基 ]-2， 3- 二 氢 -1H- 异吲哚

    [3403] 步骤 1 ： 8-(6- 苄基 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )-1， 4- 二氧杂 -8- 氮杂 - 螺 [4.5] 癸烷 ( 化合物 23)按照与对化合物 3 所述类似的方法由 3- 苄基 -6- 氯 -4， 5- 二甲基哒嗪和 1， 4- 二 氧杂 -8- 氮杂 - 螺 [4.5] 癸烷制得化合物 23。 1

    [3410] H-NMR(400MHz， CDCl3)δ ＝ 1.89(4H， m)， 2.08(3H， s)， 2.17(3H， s)， 3.33(4H， m)， 4.00(4H， s)， 4.29(2H， s)， 7.22(5H， m)。

    [3411] MS(m/z， MH+) 测定值 340.4

    [3412] 步骤 2 ： 1-(6- 苄基 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )- 哌啶 -4- 酮 ( 化合物 24)

    [3413] 向在丙酮 (50mL) 中的化合物 23(917mg， 2.46mmol) 中加入盐酸 (1.2N， 20mL)。将 混合物搅拌 46 小时， 然后用饱和碳酸氢钠处理至略碱性， 用乙酸乙酯萃取 (3x)。用盐水洗 涤有机萃取物， 干燥， 得到油状物， 在通过硅胶色谱法纯化 (40％乙酸乙酯的庚烷溶液 ) 后 得到纯 24， 为粘稠油状物 (565mg， 78％ )。 1

    [3415] H-NMR(400MHz， CDCl3)δ ＝ 2.1(3H， s)， 2.2(3H， s)， 2.7(4H， m)， 3.6(4H， m)， 4.3(2H， s)， 7.3(5H， m)。

    [3416] HR MS(m/z， MH+) 测定值 296.1763

    [3417] 步骤 3 ： 2-[1-(6- 苄基 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )- 哌啶 -4- 基 ]-2， 3 二氢 -1H- 异 吲哚 ( 实施例 56)

    [3418] 向在无水 THF/CH2Cl2(1.5ml/1.5mL) 中的酮 24(43mg， 0.15mmol) 中加入异二氢吲 哚 (25μL， 0.22mmol) 和冰醋酸 (3μL) 和三乙酰氧基硼氢化钠 (98mg， 0.44mmol)。将混合 物搅拌 2 小时， 用饱和碳酸氢钠淬灭， 用 CH2Cl2 萃取。干燥有机相， 旋转蒸发， 进行 HPLC 纯 化 ( 乙腈 - 水 -0.1％ TFA)， 得到标题化合物， 为 TFA 盐 (67mg， 89％ )。 1

    [3419] H-NMR(400MHz， CDCl3)δ ＝ 2.2(4H， m)， 2.3(3H， s)， 2.4(3H， s)， 3.2(2H， m)， 3.6(1H， m)， 3.8(2H， m)， 4.5(4H， bs)， 5.1(2H， bs)， 7.3(9H， m)。

    [3420] HR MS(m/z， MH+) 测定值 399.2547

    [3421] 通过路径 B 合成实施例 57-59 ：

    [3422] 实 施 例 57 ： 3- 苄 基 -6-[4-(5- 氯 -1H- 咪 唑 -2- 基 )- 哌 啶 -1- 基 ]-4， 5- 二 甲 基 - 哒嗪

    [3414] 步骤 1 ： 1-(6- 苄基 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )- 哌啶 -4- 甲酸乙酯 ( 化合物 25)

    [3425] 向 3- 苄基 -6- 氯 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 (1.0g， 4.31mmol) 在 NMP(10mL) 中的溶液中 加入哌啶 -4- 甲酸乙酯 (2.0g， 12.9mmol) 和 DIPEA(3.7mL， 21.6mmol)。将混合物在 210℃ 在微波中加热 1.5 小时。在 80℃通过旋转蒸发浓缩混合物。通过 HPLC 纯化粗产物 ( 含有

    [3424] 0.1％ TFA 的 CH3CN/H2O ： 22％～ 45％ )， 得到 1-(6- 苄基 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )- 哌 啶 -4- 甲酸乙酯 (0.94g， 61％ )。 1

    [3426] H-NMR(400MHz， CDCl3)δ ＝ 1.28(3H， t)， 1.90(2H， q)， 2.07(2H， d)， 2.23(3H， s)， 2.33(3H， s)， 2.54(1H， m)， 3.03(2H， t)， 3.57(2H， d)， 4.17(2H， q)， 4.50(2H， s)， 7.19(2H， d)， 7.24(1H， d)， 7.29(2H， t)。

    [3427] HR MS(m/z， MH+) 测定值 354.2179

    [3428] 步骤 2 ： 1-(6- 苄基 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )- 哌啶 -4- 甲酸 ( 化合物 26)

    [3429] 向 1-(6- 苄基 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )- 哌啶 -4- 甲酸乙酯 (0.88g， 2.5mmol) 在 EtOH(8mL) 中的溶液中加入氢氧化钠 (0.8g， 20.1mmol) 在 H2O(8mL) 中的溶液。在 25℃ 搅拌 2 小时后， 浓缩混合物， 用 CH2Cl2(2x10mL) 萃取以除去杂质。用 1N HCl 将水层酸化至 pH ～ 5， 用 CH2Cl2(6x20mL) 萃取。经 Na2SO4 干燥合并的有机溶液， 过滤， 浓缩， 得到 1-(6- 苄 基 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )- 哌啶 -4- 甲酸 (0.68g， 83％ )。 1

    [3430] H-NMR(400MHz， CDCl3)δ ＝ 1.92(2H， q)， 2.08(2H， d)， 2.25(3H， s)， 2.35(3H， s)， 2.64(1H， m)， 3.11(2H， t)， 3.60(2H， d)， 4.49(2H， s)， 7.20(2H， d)， 7.26(1H， t)， 7.31(2H， t)。

    [3431] HR MS(m/z， MH+) 测定值 326.1870

    [3432] 步骤 3 ： 1-(6- 苄基 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )- 哌啶 -4- 甲酸氰基甲基酰胺 ( 化 合物 27)

    [3433] 向 1-(6- 苄基 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )- 哌啶 -4- 甲酸 (350mg， 1.08mmol) 在 DMF(10mL) 中的溶液中加入 DIPEA(0.94mL， 5.4mmol) 和 HATU(490mg， 1.29mmol)。 于 25℃搅 拌后， 加入氨基乙腈盐酸盐 (119mg， 1.29mmol)。 将混合物搅拌 2 小时， 用 EtOAc(20mL) 稀释， 用 H2O(3x10mL) 洗涤。经 Na2SO4 干燥有机层， 过滤， 浓缩。通过色谱法纯化粗产物 (CH2Cl2/ MeOH ： 97％ /3％ )， 得到 1-(6- 苄基 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )- 哌啶 -4- 甲酸氰基甲基 酰胺 (280mg， 72％ )。 1

    [3434] H-NMR(400MHz， CDCl3)δ ＝ 1.97(4H， m)， 2.25(3H， s)， 2.36(3H， s)， 2.58(1H， m)， 3.07(2H， t)， 3.67(2H， d)， 4.12(2H， d)， 4.44(2H， s)， 7.14(2H， d)， 7.31(3H， m)。

    [3435] MS(m/z， MH+) 测定值 364.3

    [3436] 步骤 4 ： 3- 苄基 -6-[4-(5- 氯 -1H- 咪唑 -2- 基 )- 哌啶 -1- 基 ]-4， 5- 二甲基 - 哒 嗪 ( 实施例 57)

    [3437] 向 1-(6- 苄基 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )- 哌啶 -4- 甲酸氰基甲基酰胺 (20mg， 0.055mmol) 和三苯膦在乙腈 (1mL) 中的 25℃溶液中加入四氯化碳 (42mg， 0.28mmol)。在 50℃搅拌 3 小时后， 浓缩混合物， 用 CH2Cl2(10mL) 稀释， 用氢氧化钠 (2mL， 1N) 和 H2O(2mL) 洗 涤， 经 Na2SO4 干燥， 过滤， 浓缩。 通过 HPLC 纯化粗产物 ( 含有 0.1％ TFA 的 CH3CN/H2O ： 22％～ 45 ％ )， 得到 3- 苄基 -6-[4-(5- 氯 -1H- 咪唑 -2- 基 )- 哌啶 -1- 基 ]-4， 5- 二甲基 - 哒嗪 (11.8mg， 56％ )。 1

    [3438] H-NMR(400MHz， MeOH-d4)δ ＝ 2.09(2H， m)， 2.20(2H， d)， 2.35(3H， s)， 2.50(3H， s)， 3.20(3H， m)， 3.87(2H， d)， 4.46(2H， s)， 7.25(2H， d)， 7.34(1H， t)， 7.35(1H， s)， 7.39(2H， t)。

    [3439] HR MS(m/z， MH+) 计算值 382.1794

    [3440] 实施例 58 ： 2-[1-(6- 苄基 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )- 哌啶 -4- 基 ]-1H- 咪唑并 [4， 5-b] 吡啶

    [3441] 向 1-(6- 苄基 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )- 哌啶 -4- 甲酸 ( 化合物 26， 50mg， 0.15mmol) 和 2， 3- 二氨基吡啶 (33mg， 0.30mmol) 在 CH2Cl2(0.5mL) 中的溶液中加入聚磷酸 (1mL)。浓缩混合物以除去 CH2Cl2。在 150℃搅拌 1.5 小时后， 将混合物冷却至 25℃， 用水 (10mL) 稀释， 用 10％氢氧化钠水溶液碱化至 pH ～ 8。 用 CH2Cl2(5x15mL) 萃取水溶液。 浓缩合 并的有机层， 通过 HPLC 纯化 ( 含有 0.1％ TFA 的 CH3CN/H2O ： 22％～ 45％ )， 得到 2-[1-(6- 苄 基 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )- 哌啶 -4- 基 ]-1H- 咪唑并 [4， 5-b] 吡啶 (33.8mg， 55％ )。 1

    [3443] H-NMR(400MHz， MeOH-d4)δ ＝ 2.28(2H， qd)， 2.36(3H， s)， 2.38(2H， dd)， 2.53(3H， s)， 3.29(2H， t)， 3.56(1H， m)， 3.93(2H， d)， 4.48(2H， s)， 7.25(2H， d)， 7.32(1H， t)， 7.39(2H， t)， 7.70(1H， dd)， 8.46(1H， d)， 8.62(1H， d)。

    [3444] HR MS(m/z， MH+) 测定值 399.2294

    [3442] 实 施 例 59 ： 2-[1-(6- 苄 基 -4， 5- 二 甲 基 - 哒 嗪 -3- 基 )-4- 甲 基 - 哌 啶 -4- 基 ]-1H- 咪唑并 [4， 5-c] 吡啶

    [3447] 步骤 1 ： 1-(6- 苄基 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )-4- 甲基 - 哌啶 -4- 甲酸乙酯 ( 化金物 28) 向 3- 苄基 -6- 氯 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 (1.0g， 4.3mmol) 在 NMP(10mL) 中的溶液 中加入 4- 甲基 - 哌啶 -4- 甲酸乙酯 (2.0g， 8.6mmol) 和 DIPEA(3.7mL， 21.6mmol)。将混 合物在 210℃在微波中加热 1.5 小时。在 80℃通过旋转蒸发浓缩混合物。通过 HPLC 纯化 粗产物 ( 含有 0.1 ％ TFA 的 CH3CN/H2O ： 22 ％～ 45 ％ )， 得到 1-(6- 苄基 -4， 5- 二甲基 - 哒 嗪 -3- 基 )-4- 甲基 - 哌啶 -4- 甲酸乙酯 (0.64g， 41％ )。 1

    [3449] H-NMR(400MHz， CDCl3)δ ＝ 1.27(3H， s)， 1.29(3H， t)， 1.62(2H， t)， 2.24(3H， s)， 2.27(2H， d)， 2.34(3H， s)， 3.13(2H， t)， 3.47(2H， d)， 4.20(2H， q)， 4.42(2H， s)， 7.11(2H， d)，

    [3448] 7.28(3H， m)。

    [3450] HR MS(m/z， MH+) 测定值 368.2335

    [3451] 步骤 2 ： 1-(6- 苄基 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )-4- 甲基 - 哌啶 -4- 甲酸 ( 化合 物 29)

    [3452] 向 1-(6- 苄基 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )-4- 甲基 - 哌啶 -4- 甲酸乙酯 (0.60g， 1.6mmol) 在 EtOH(5mL) 中的溶液中加入氢氧化钠 (0.5g， 13.2mmol) 的 H2O(5mL) 溶液。在 25 ℃搅拌 2 小时后， 浓缩混合物， 用 CH2Cl2(2x10mL) 萃取以除去杂质。用 1N HCl 将水层 酸化至 pH ～ 5， 用 CH2Cl2(6x20mL) 萃取。经 Na2SO4 干燥合并的有机溶液， 过滤， 浓缩， 得到 1-(6- 苄基 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )-4- 甲基 - 哌啶 -4- 甲酸 (0.49g， 89％ )。57102143958 A CN 102143965

    [3453] 1说明书53/100 页H-NMR(400MHz， CDCl3)δ ＝ 1.33(3H， s)， 1.60(2H， t)， 2.13(3H， s)， 2.23(3H， s)， 2.31(2H， d)， 3.17(2H， t)， 3.38(2H， d)， 4.42(2H， s)， 7.21(2H， d)， 7.27(3H， t)。

    [3454] HR MS(m/z， MH+) 测定值 340.2028

    [3455] 步骤 3 ： 2-[1-(6- 苄基 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )-4- 甲基 - 哌啶 -4- 基 ]-1H- 咪 唑并 [4， 5-c] 吡啶 ( 实施例 59)

    [3456] 向 1-(6- 苄 基 -4， 5- 二 甲 基 - 哒 嗪 -3- 基 )-4- 甲 基 - 哌 啶 -4- 甲 酸 (50mg， 0.15mmol) 和 2， 3- 二氨基吡啶 (32mg， 0.29mmol) 在 CH2Cl2(0.5mL) 中的溶液中加入聚磷酸 (1mL)。浓缩混合物以除去 CH2Cl2。在 150℃搅拌 3.5 小时后， 将混合物冷却至 25℃， 用水 (3mL) 稀释， 用 10％氢氧化钠水溶液碱化至 pH ～ 8。 用 CH2Cl2(3x10mL) 萃取水溶液。 浓缩合 并的有机层， 通过 HPLC 纯化 ( 含有 0.1％ TFA 的 CH3CN/H2O ： 15％～ 40％ )， 得到 2-[1-(6- 苄 基 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )-4- 甲基 - 哌啶 -4- 基 ]-1H- 咪唑并 [4， 5-c] 吡啶 (21mg， 27％ )。 1

    [3457] H-NMR(400MHz， MeOH-d4)δ ＝ 1.60(3H， s)， 2.15(2H， t)， 2.34(3H， s)， 2.49(3H， s)， 2.65(2H， d)， 3.35(2H， d)， 3.65(2H， d)， 4.43(2H， s)， 7.22(2H， d)， 7.31(1H， t)， 7.37(2H， t)， 8.12(1H， d)， 8.56(1H， d)， 9.23(1H， s)。

    [3458] HR MS(m/z， MH+) 测定值 413.2446

    [3459] 通过路径 C 合成实施例 60 ：

    [3460] 实施例 60 ： 1′ -(6- 苄基 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )-5-(1- 羟基 -1- 甲基 - 乙 基 )-2′， 3′， 5′， 6′ - 四氢 -1′ H-[2， 4′ ] 联吡啶 -4′ - 甲腈

    [3461] 步骤 1 ： 1-(6- 苄基 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )- 哌啶 -4- 甲腈 ( 化合物 30)按照与对化合物 3 所述类似的方法由化合物 10 和哌啶 -4- 甲腈制得化合物 30。 1

    [3465] H-NMR(400MHz， CDCl3)δ ＝ 2.0-2.2(4H， m)， 2.1(3H， s)， 2.2(3H， s)， 2.8(1H， m)， 3.1(2H， m)， 3.4(2H， m)， 4.3(2H， s)， 7.2(5H， m)。

    [3466] HR MS(m/z， MH+) 测定值 307.1930

    [3467] 步骤 2 ： 2-(6- 溴 - 吡啶 -3- 基 )- 丙烷 -2- 醇 ( 化合物 31)

    [3464] 于 -78℃向在 THF(15mL) 和乙醚 (20mL) 混合物中的 2- 溴 -5- 碘 - 吡啶 (2.974g， 10.2mmol) 中滴加正丁基锂 (2.5M 的己烷溶液， 4L， 10.2mmol)。将混合物于 -78℃搅拌 30 分钟， 然后滴加丙酮 ( 无水， 0.749uL， 10.2mmol)。将混合物历经 1.5 小时缓慢温至 -50℃， 用饱和氯化铵淬灭， 用乙酸乙酯萃取。分离有机相， 干燥， 旋转蒸发。通过硅胶色谱法纯化 残余物 (10-20％乙酸乙酯的庚烷溶液 )， 得到标题化合物， 为白色固体 (1.40g， 64％ )。 1

    [3470] H-NMR(400MHz， CDCl3)δ ＝ 1.60(6H， s)， 1.96(1H， s)， 7.45(1H， d， J ＝ 8Hz)， 7.70(1H， dd， J ＝ 4， 8Hz)， 8.47(1H， s)。

    [3471] HR MS(m/z， MH+) 测定值 216.0034

    [3472] 步骤 3 ： 1 ′ -(6- 苄 基 -4， 5- 二 甲 基 - 哒 嗪 -3- 基 )-5-(1- 羟 基 -1- 甲 基 - 乙 基 )-2′， 3′， 5′， 6′ - 四氢 -1′ H-[2， 4′ ] 联吡啶 -4′ - 甲腈 ( 实施例 60)

    [3473] 向 化 合 物 30(122mg， 0.398mmol) 和 化 合 物 31(103mg， 0.478mmol) 在 无 水 甲 苯 (3mL) 中的混合物中加入 Pd2(dba)3(18mg， 0.020mmol)。给混合物充氮气 7 分钟， 向其中加

    [3469] 入三叔丁基膦 (1.0M 的甲苯溶液， 40μL， 0.040mmol) 和六甲基二硅基胺基锂 (1.0M 的甲苯 溶液， 0.995uL， 0.995mmol)。将混合物于室温搅拌 15 分钟， 然后于 60℃搅拌 3 小时， 冷却 至室温。向反应混合物中再加入 Pd2(dba)3(18mg)、 三叔丁基膦 (40μL) 和六甲基二硅基胺 基锂 (0.995μL)。搅拌 17 小时后， 用饱和氯化铵使混合物淬灭， 用乙酸乙酯萃取。用盐水 洗涤有机相， 干燥， 旋转蒸发， 通过制备型 HPLC 纯化 ( 乙腈 - 水 -0.1％ THF)， 得到标题化合 物， 为 TFA 盐 (24mg， 11％ )。 1

    [3474] H-NMR(400MHz， CDCl3)δ ＝ 1.63(6H， s)， 2.23(2H， m)， 2.27(3H， s)， 2.41(3H， s)， 2.58(2H， m)， 3.57(2H， m)， 3.81(2H， m)， 4.52(2H， s)， 7.30(5H， m)， 7.68(1H， d， J ＝ 12Hz)， 7.96(1H， m)， 8.79(1H， s)。

    [3475] HR MS(m/z， MH+) 测定值 442.2600

    [3476] 通过路径 D 合成实施例 61 ：

    [3477] 中间体的合成 ：

    [3478] (5’ - 苄基 -3’ ， 4’ - 二甲基 -3， 4， 5， 6- 四氢 -2H-[1， 2] 联吡啶 4- 基 )- 甲醇 ( 化 合物 32)

    [3479] 向 哌 啶 -4- 基 - 甲 醇 (125mg， 1.03mmol) 在 NMP(3mL) 中 的 溶 液 中 加 入 3- 苄 基 -6- 氯 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 (60mg， 0.258mmol) 和 TEA。将反应混合物于 210℃在微波反 应器中搅拌 2 小时。然后用 DCM(15mL) 稀释反应混合物， 用 NaHCO3 和水洗涤。分离有机溶 剂， 减压除去。通过用乙腈的水溶液 ( 含 3％ 1- 丙醇的 20％ -100％ )、 在 220nm 检测波长 的 HPLC 纯化粗产物， 得到预期产物， 为灰白色粉末 (200mg， 62％ )。 1

    [3481] H NMR(400MHz， DMSO-d6)δ ＝ 7.23-7.36(m， 5H)， 4.55(t， J ＝ 5.3Hz， 1H)， 4.29(s，

    [3480] 2H)， 3.45(m， 2H)， 2.85(m， 2H)， 2.57(s， 1H)， 2.21(s， 3H)， 2.14(s， 3H)， 1.84(m， 2H)， 1.62(m， 1H)， 1.40(m， 2H)。

    [3482] HR MS(m/z， MH+) 测定值 312.2069， 计算值 312.2076

    [3483] 1-(6- 苄基 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )- 哌啶 -4- 甲醛 ( 化合物 33)

    [3484] 向在 DCM(5mL) 中的 5’ - 苄基 -3’ ， 4’ - 二甲基 -3， 4， 5， 6- 四氢 -2H-[1， 2] 联吡啶 4- 基 )- 甲醇 (155mg， 0.473mmol) 中加入 Dess-Martin 试剂 (257mg， 0.59mmol)， 将反应混 合物于室温搅拌 2 小时。然后用 DCM 稀释反应混合物， 用 NaHCO3 和水洗涤。分离有机相， 减压除去溶剂。通过用乙腈的水溶液 ( 含 3％ 1- 丙醇的 20％ -95％ )、 在 220nm 检测波长 的 HPLC 纯化粗产物， 得到预期产物， 为灰白色粉末 (120mg， 78％ )。

    [3486] MS(m/z， MH+) 测定值 310

    [3487] 实 施 例 61 ： 3- 苄 基 -4， 5- 二 甲 基 -6-[4-(4- 三 氟 甲 基 -1H- 咪 唑 -2- 基 )- 哌 啶 -1- 基 ]- 哒嗪

    [3485] 向三水合乙酸钠 (50mg， 0.615mmol) 在水 (5mL) 中的溶液中加入 1， 1- 二溴 -3， 3， 3- 三氟丙酮 (83.5mg， 0.307mmol)。将溶液在 100℃浴温加热 45 分钟， 然后冷却。将溶 液加入到 1-(6- 苄基 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )- 哌啶 -4- 甲醛 (100mg， 0.31mmol) 在 MeOH(5mL) 中的溶液和浓氨水在 MeOH 中的溶液 (1.7mL， 7M， 12mmol) 中。 将反应混合物于室 温静置 3.5 小时， 然后减压浓缩反应混合物， 得到半固体， 使其从庚烷中重结晶， 得到粗产 物。用乙腈的水溶液 ( 含 3％ 1- 丙醇的 10％ -100％ )、 在 220nm 检测波长的 HPLC 纯化粗 产物， 得到预期产物， 为灰白色粉末 (28mg， 22％ )。 1

    [3490] H NMR(400MHz， DMSO-d6)δ ＝ 7.72(s， 1H)， 7.23-7.36(m， 5H)， 4.29(s， 2H)， 3.52(m， 1H)， 3.37(m， 2H)， 2.97(m， 2H)， 2.24(s， 3H)， 2.20-1.97(m， 4H)， 2.14(s， 3H)。

    [3491] HR MS(m/z， MH+) 测定值 416.2050， 计算值 416.2062

    [3492] 通过路径 E 合成实施例 62-64 ：

    [3493] 实施例 62 ： 2-[1-(6- 苄基 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )- 哌啶 -4- 基 ]-1， 2， 3， 4- 四氢 - 异喹啉

    [3489] 按照实施例 56 使用的方法由化合物 24 和 1， 2， 3， 4- 四氢 - 异喹啉制得化合物， 为1TFA 盐

    [3496] H-NMR(400MHz， MeOH-d4)δ ＝ 2.1(2H， m)， 2.3(3H， s)， 2.3(2H， m)， 2.4(3H， s)，3.1-3.9(9H， m)， 4.4(2H， s)， 4.6(2H， s)， 7.3(9H， m)。

    [3497] HR MS(m/z， MH+) 测定值 413.2689

    [3498] 实施例 63 ： 1′ -(6- 苄基 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )-5-(1- 羟基 -1- 甲基 - 乙 基 )-2′， 3′， 5′， 6′ - 四氢 -1′ H-[2， 4′ ] 联吡啶 4′ - 醇

    [3499] 步骤 1 ： 2- 溴 -5-[1- 甲基 -1-(2- 三甲基甲硅烷基 - 乙氧基甲氧基 )- 乙基 ]- 吡 啶 ( 化合物 34)于 0℃向在无水 DMF(5mL) 中的化合物 31(532mg， 2.46mmol) 中加入氢化钠 (60％ 的矿物油混悬液， 138mg， 3.45mmol)。将混合物于室温搅拌 1 小时， 然后冷却至 0℃， 向其中 加入 SEMCl(0.564uL， 3.2mmol)。将混合物于室温搅拌 16 小时， 于 50℃搅拌 1 小时， 冷却至 室温， 用水淬灭， 用乙酸乙酯萃取。用盐水洗涤有机相， 干燥， 旋转蒸发。通过硅胶色谱法 纯化油状残余物 (10-15％乙酸乙酯的庚烷溶液 )， 得到标题化合物， 为澄清油状物 (474mg， 56％ )。 1

    [3503] H-NMR(400MHz， CDCl3)δ ＝ 0.0(9H， s)， 0.84(2H， m)， 1.59(6H， s)， 3.60(2H， m)， 4.60(2H， s)， 7.43(1H， d， J ＝ 8Hz)， 7.61(1H， m)， 8.42(1H， s)。

    [3504] HR MS(m/z， MH+) 测定值 346.0822

    [3505] 步骤 2 ： 1′ -(6- 苄基 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )-5-[1- 甲基 -1-(2- 三甲基甲 硅烷基 - 乙氧基甲氧基 )- 乙基 ]-2′， 3′， 5′， 6′ - 四氢 -1′ H-[2， 4′ ] 联吡啶 4′ - 醇 ( 化合物 35)

    [3502] 于 -78℃向在 THF(6mL) 中的化合物 34(272mg， 0.786mmol) 中加入叔丁基锂 (1.7M 的戊烷溶液， 1.0mL， 1.7mmol)。将混合物于 -78 ℃搅拌 30 分钟， 于 -78 ℃向其中加入在 THF(2mL) 中的化合物 24(209mg， 0.707mmol)。搅拌混合物， 在 1 小时内缓慢温至 -40℃， 然后于 -40℃用饱和氯化铵淬灭。除去 THF， 用乙酸乙酯萃取残余物 (3x)。用盐水洗涤有机 相， 用无水 Na2SO4 干燥， 浓缩。 通过硅胶色谱法纯化残余物 (40-60％乙酸乙酯的庚烷溶液 )， 得到回收的化合物 24(103mg， 49％ ) 和标题化合物 35(106mg， 27％ )， 为白色固体。 1

    [3508] H-NMR(400MHz， CDCl3)δ ＝ 0.0(9H， s)， 0.87(2H， t， J ＝ 8Hz)， 1.64(6H， s)， 1.74(2H， m)， 2.10(3H， s)， 2.22(3H， s)， 2.28(2H， m)， 3.57(6H， m)， 4.31(2H， s)， 4.66(2H， s)， 4.95(1H， s)， 7.27(5H， m)， 7.43(1H， m)， 7.80(1H， m)， 8.62(1H， m)。

    [3509] HR MS(m/z， MH+) 测定值 563.3392

    [3510] 步骤 3 ： 1 ′ -(6- 苄 基 -4， 5- 二 甲 基 - 哒 嗪 -3- 基 )-5-(1- 羟 基 -1- 甲 基 - 乙 基 )-2′， 3′， 5′， 6′ - 四氢 -1′ H-[2， 4′ ] 联吡啶 4′ - 醇 ( 实施例 63)

    [3511] 于 0℃向在 CH2Cl2(1.5mL) 中的化合物 35(44mg， 0.078mol) 中加入 TFA(0.15μL)。 将混合物于 0℃搅拌 2 小时， 用 25％乙酸铵淬灭， 用乙酸乙酯萃取。用盐水洗涤有机相， 干 燥， 浓缩， 得到黄色残余物， 通过硅胶色谱法纯化 (0-5％甲醇的 CH2Cl2 溶液 )， 得到预期产物 (17mg， 50％ )。 1

    [3512] H-NMR(400MHz， CDCl3)δ ＝ 1.62(6H， s)， 1.72(2H， m)， 2.09(3H， s)， 2.21(3H， s)， 2.25(2H， m)， 3.50(4H， m)， 4.30(2H， s)， 7.20(5H， m)， 7.42(1H， m)， 7.86(1H， m)， 8.66(1H， b.s)。

    [3513] HR MS(m/z， MH+) 测定值 433.2590

    [3514] 实施例 64 ： 2-[1 ′ -(6- 苄基 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )-4 ′ - 氟 -1 ′， 2 ′， 3′， 4′， 5′， 6′ - 六氢 -[2， 4′ ] 联吡啶 5- 基 ]- 丙烷 -2- 醇

    [3515] 步骤 1 ： 1′ -(6- 苄基 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )-4′ - 氟 -5-[1- 甲基 -1-(2- 三 甲基甲硅烷基 - 乙氧基甲氧基 )- 乙基 ]-1′， 2′， 3′， 4′， 5′， 6′ - 六氢 -[2， 4′ ] 联吡 啶 ( 化合物 36)

    [3516] 于 0 ℃向化合物 35(39mg， 0.069mmol) 中加入冷 Deoxofluor(50 ％的 THF 溶液， 665μL， 1.38mmol)。将混合物于室温搅拌 4 小时， 用饱和 NaHCO3 洗涤， 用 CH2Cl2(3x) 萃取。 用盐水洗涤有机相， 干燥， 浓缩， 得到棕色油状物。通过硅胶色谱法纯化， 得到标题化合物 (21mg， 48％ )。 1

    [3519] H-NMR(400MHz， CDCl3)δ ＝ 0.0(9H， s)， 0.9(2H， t， J ＝ 8Hz)， 1.6(6H， s)， 2.0(2H，

    [3518] m)， 2.1(3H， s)， 2.2(3H， s)， 2.6(2H， m)， 3.4(4H， m)， 3.6(2H， t， J ＝ 8Hz)， 4.3(2H， s)， 4.7(2H， s)， 7.2(5H， m)， 7.6(1H， m)， 7.8(1H， m)， 8.6(1H， b.s)。

    [3520] HR MS(m/z， MH+) 测定值 565.3369

    [3521] 步骤 2 ： 2-[1 ′ -(6- 苄基 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3 基 )-4 ′ - 氟 -1 ′， 2 ′， 3 ′， 4′， 5′， 6′ - 六氢 -[2， 4′ ] 联吡啶 5- 基 ]- 丙烷 -2- 醇 ( 实施例 64)

    [3522] 按照实施例 63 所述的方法由化合物 36 和 TFA 制得本实施例。 1

    [3524] H-NMR(600MHz， CDCl3)δ ＝ 1.63(6H， s)， 2.05(2H， m)， 2.19(3H， s)， 2.32(3H， s)， 2.55(2H， m)， 3.94(4H， m)， 4.53(2H， b.s)， 7.25(5H， m)， 7.59(1H， d， J ＝ 6Hz)， 7.90(1H， m)， 8.71(1H， b.s)。

    [3525] HR MS(m/z， MH+) 测定值 435.2554

    [3526] 哌嗪基 - 哒嗪类

    [3527] 流程 6 显示了制备式 Ip 化合物的通用合成流程。取代的 1， 4- 二氯哒嗪 II 可以 与有机锌试剂在钯催化下反应， 形成中间体 XII。在碱存在下用哌嗪置换剩余的氯， 得到化 合物 XIII。根据取代基 Z 的位置， 可能需要施用 N- 保护基来阻断哌嗪氮之一的反应活性。 根据预期的连接基 Y， 中间体 XIII 可以与 R3-Cl 在亲核置换反应中在碱性条件下反应， 与 R-CHO 在还原性胺化中用例如 NaBH(OAc)3 反应， 在酰化反应中与 R3-OC(O)Cl 或 R3-NCO、 R3-COCl 在碱性条件下反应， 或者与 R3-CO2H 在酰胺偶联中用例如 HATU 作为偶联试剂反应， 得到实施例 Ip。另外， 在碱存在下用官能化的哌嗪置换中间体 XII 中剩余的氯可以直接产 生实施例 Ip( 路径 A)。或者， 可以采用路径 B 和 C 制备实施例 Ip， 其中哌嗪部分首先通过 亲核置换反应装配， 随后进行 Negishi 偶联。

    [3523] 流程 6 中间体 II 和 XII 的合成 ： 4， 5- 二甲基 -1， 2- 二氢 - 哒嗪 -3， 6- 二酮 ( 化合物 36)将盐酸肼 (58g， 552mmol) 溶于热水 (300mL)， 分批加入二甲基马来酸酐 (58g， 460mmol)， 将混悬液于回流搅拌 16 小时。将混悬液冷却至室温， 过滤沉淀， 用水洗涤， 在 40℃真空干燥， 得到 4， 5- 二甲基 -1， 2- 二氢 - 哒嗪 -3， 6- 二酮 (36)(64g， 99％ )。 1

    [3534] H-NMR(400MHz， DMSO-d6)δ ＝ 11(br s， 2H)， 2.01(s， 6H)。

    [3535] MS(m/z， MH+) 测定值 141.1

    [3536] 4， 5- 二甲基 -1， 4- 二氯 - 哒嗪 ( 化合物 37)

    [3533] 将 4， 5- 二甲基 -1， 2- 二氢 - 哒嗪 -3， 6- 二酮 (50g， 357mmol) 加入到 1 升烧瓶中， 缓慢加入 POCl3(250mL)。搅拌混悬液， 加热至回流， 全部原料溶解， 约 2 小时后， 真空除去 150mL POCl3。将粘性棕色溶液在搅拌下分小批缓慢倾入 1.5 升烧杯中的冰中。用 28％氨 水在外部冷却下中和橙色混悬液。用布氏漏斗过滤产物， 用水洗涤， 在 40℃真空干燥， 得到

    [3538] 灰白色粉末 (59g， 93％ )。 1

    [3539] H-NMR(400MHz， CDCl3)δ ＝ 2.44(s， 6H)。

    [3540] MS(m/z， MH+) 测定值 177.1

    [3541] 2， 3， 6， 7- 四氢 -5H- 环戊二烯并 [d] 哒嗪 -1， 4- 二酮 ( 化合物 38)

    [3542] 将盐酸肼 (2.4g， 22.8mmol) 和 1- 环戊烯 -1， 2- 二甲酸酐 (3.0g， 21.7mmol) 在水 (10mL) 中的溶液加热至回流 3 小时。将反应混合物冷却至室温， 通过过滤收集沉淀。将黄 色固体与 15mL 1N NaOH 混合， 搅拌 2 小时， 过滤， 真空干燥， 得到 2， 3， 6， 7- 四氢 -5H- 环戊 二烯并 [d] 哒嗪 -1， 4- 二酮 (38)(2.2g， 67％ )。MS(m/z， MH+) 测定值 153.1

    [3544] 1， 4- 二氯 -6， 7- 二氢 -5H- 环戊二烯并 [d] 哒嗪 ( 化合物 39)

    [3543] 按照与化合物 37 类似的方式由化合物 36 制得化合物。 1 H-NMR(400MHz， DMSO-d6)δ ＝ 2.74-2.61(m， 4H)， 2.00(m， 1H)， 1.85(m， 1H)。 HR MS(m/z， MH+) 测定值 188.9986 2， 3， 5， 6， 7， 8- 六氢 - 酞嗪 -1， 4- 二酮 ( 化合物 40)向肼 (392μL， 13.1mmol) 在水 (6mL) 和 HOAc(2mL) 中的溶液中加入 4， 5， 6， 7- 四 氢 - 异苯并呋喃 -1， 3- 二酮 (2g， 13.1mmol)。将反应混合物回流 3 小时， 然后冷却至室温， 通过过滤收集沉淀， 用水洗涤， 真空干燥， 得到 2， 3， 5， 6， 7， 8- 六氢 - 酞嗪 -1， 4- 二酮 (40) (2.09g， 96％ )。

    [3552] MS(m/z， MH+) 测定值 167.05

    [3553] 1， 4- 二氯 -5， 6， 7， 8- 四氢 - 酞嗪 ( 化合物 41)

    [3551] 将化合物 40(2.09g， 12.6mmol) 在 POCl3(10mL) 中的混悬液回流 1 小时， 冷却， 倾 入冰中。通过过滤收集沉淀， 真空烘箱干燥， 得到 1， 4- 二氯 -5， 6， 7， 8- 四氢 - 酞嗪 (41)(2.23g， 87％ )。

    [3556] HR MS(m/z， MH+) 测定值 203.0139

    [3557] 3- 苄基 -6- 氯 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 ( 化合物 42)

    [3558] 使 4， 5- 二甲基 -1， 4- 二氯 - 哒嗪 (10g， 56.5mmol)、 四 ( 三苯膦 ) 钯 (0)(3.3g， 2.80mmol) 和 THF(200mL) 的混合物脱气， 然后加入苄基溴化锌 (147mL， 0.5M 的 THF 溶液， 73.40mmol)。将反应溶液加热至 65 ℃过夜。除去溶剂。加入水， 用 EtOAc 萃取水层。浓 缩有机层， 得到粗产物， 通过硅胶色谱法纯化 (EtOAc/ 庚烷 ： 0％～ 50％ )， 得到标题化合物 (9.5g， 67％ )。 1

    [3560] H NMR(400MHz， CD2Cl2)δ ＝ 7.27(m， 5H)， 4.38(s， 2H)， 2.36(s， 3H)， 2.21(s， 3H)。

    [3561] HR MS(m/z， MH+) 测定值 233.0839

    [3562] 3- 氯 -6-(4- 氟 - 苄基 )-4， 5- 二甲基 - 哒嗪 ( 化合物 43)

    [3559] 按照与上述化合物 42 类似的方式由 4， 5- 二甲基 -1， 4- 二氯 - 哒嗪和对氟苄基溴 化锌制得 3- 氯 -6-(4- 氟 - 苄基 )-4， 5- 二甲基 - 哒嗪。

    [3565] MS(m/z， MH+) 测定值 251.1

    [3566] 1- 苄基 -4- 氯 -6， 7- 二氢 -5H- 环戊二烯并 [d] 哒嗪 ( 化合物 44)

    [3564] 向 1， 4- 二氯 -6， 7- 二氢 -5H- 环戊二烯并 [d] 哒嗪 ( 化合物 39， 500mg， 2.64mmol) 在 THF(5mL) 中的溶液中加入 Pd(PPh3)4(383mg， 0.33mmol)。使混合物脱气， 加入苄基溴化 锌 (11mL， 0.5M 的 THF 溶液， 5.6mmol)。将混合物在 60℃加热 5 小时。将反应混合物冷却 至室温， 加入饱和 NaHCO3 水溶液， 用 EtOAc 萃取混合物。用水、 盐水洗涤合并的有机层， 用 NaSO4 干燥， 过滤， 浓缩。通过快速色谱法纯化粗产物 (EtOAc/ 庚烷 10％ -30％ )， 得到化合 物 44(490mg， 76％ )。 1

    [3569] H-NMR(400MHz， CD2Cl2)δ ＝ 7.30-7.21(m， 5H)， 4.28(s， 2H)， 2.97(m， 2H)， 2.84(m，

    [3568] 2H)， 2.09(m， 2H)。

    [3570] HR MS(m/z， MH+) 测定值 245.0848

    [3571] 1- 氯 -4-(4- 氟 - 苄基 )-6， 7- 二氢 -5H- 环戊二烯并 [d] 哒嗪 ( 化合物 45)

    [3572] 按照与上述化合物 44 类似的方式由 1， 4- 二氯 -6， 7- 二氢 -5H- 环戊二烯并 [d] 哒嗪 ( 化合物 39) 和对氟苄基溴化锌为原料制得化合物 45。 1

    [3574] H-NMR(400MHz， CD2Cl2)δ ＝ 7.23(m， 2H)， 6.99(m， 2H)， 4.27(s， 2H)， 2.98(m， 2H)， 2.84(m， 2H)， 2.11(m， 2H)。

    [3575] HR MS(m/z， MH+) 测定值 263.0752

    [3576] 1- 氯 -4-(4- 氟 - 苄基 )-5， 6， 7， 8- 四氢 - 酞嗪 ( 化合物 46)

    [3573] 向 1， 4- 二氯 -5， 6， 7， 8- 四氢 - 酞嗪 ( 化合物 41， 0.50g， 2.46mmol) 在 THF(5mL) 中 的溶液中加入 4- 氟 - 苄基氯化锌 (0.5M 的 THF 溶液 )(6.40mL， 3.20mmol) 和四 ( 三苯膦 ) 钯 (0.36g， 0.31mmol)。使混合物脱气， 在 50℃搅拌过夜。然后将反应混合物冷却至室温， 加入饱和 NaHCO3 和水， 用 EtOAc 萃取混合物。用盐水洗涤合并的有机层， 经 Na2SO4 干燥， 过 滤， 浓缩。通过色谱法纯化粗产物 (EtOAc/ 庚烷 ： 10％～ 40％ )， 得到 1- 氯 -4-(4- 氟 - 苄 基 )-5， 6， 7， 8- 四氢 - 酞嗪 (46)(0.51g， 30％ )。

    [3579] MS(m/z， MH+) 测定值 277.11

    [3580] 中间体 XIII 的合成

    [3578] 用哌嗪使氯化物 XII 胺化得到化合物 48-53 的通用方案 ( 路径 A) 向 XII(0.4mmol) 在 NMP 或 DMF/ 二 烷 (2mL) 中的溶液中加入哌嗪 (0.6mmol)。将反应混合物于 190 ℃在微波反应器中加热 4 小时。将其冷却至室温， 用 DCM 稀释， 用 NaHCO3 水 溶 液 洗 涤， 取 出 有 机 层， 得 到 粗 产 物。 用 EtOAc/ 庚 烷 (20 ％ -50 ％ )、 然后用 MeOH/DCM(5 ％ -20 ％ ) 将粗产物进行快速色谱法， 除去溶剂， 得到产物， 为黄色固体 ( ～ 50％ -70％ )。

    [3583] 3- 苄基 -4， 5- 二甲基 -6-((R)-3- 甲基 - 哌嗪 -1- 基 )- 哒嗪 ( 化合物 47)

    [3584] 制备 A ：

    [3586] 在微波小瓶中将 3- 氯 -4， 5- 二甲基 -6-((R)-3- 甲基 - 哌嗪 -1- 基 )- 哒嗪 (400mg， 1.66mmol， 1 当量 ) 加入到苄基溴化锌 (12.3mL 0.5M 的 THF 溶液， 6.64mmol， 4 当量 ) 和四 ( 三苯膦 ) 钯 (100mg， 0.08mmol， 0.05 当量 ) 的溶液中。密封小瓶， 在 100℃用微波照射 40 分钟 ( 高吸收设置 )。浓缩反应混合物， 通过硅胶色谱法纯化 (5-20％ EtOAc/ 庚烷 )， 得到 预期化合物 (324mg， 66％ )。

    [3587] 制备 B ：

    [3588] 向 3- 苄基 -6- 氯 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 (100mg， 0.41mmol) 在 NMP(2mL) 中的溶液 中加入 2-(R)- 甲基 - 哌嗪 (62mg， 0.61mmol)。将反应混合物于 190℃在微波反应器中加热 4 小时。将其冷却至室温， 用 DCM 稀释， 用 NaHCO3 水溶液洗涤， 取出有机层， 得到粗产物。用 EtOAc/ 庚烷 (20％ -50％ )、 然后用 MeOH/DCM(5％ -20％ ) 将粗产物进行快速色谱法， 除去 溶剂， 得到产物， 为黄色固体 (74mg， 61％ )。 1

    [3589] H NMR(400MHz， DMSO-d6)δ ＝ 7.22-7.34(m， 2H)， 7.11-7.22(m， 3H)， 4.22(s， 2H)， 3.13-3.26(m， 2H)， 2.81-2.99(m， 3H)， 2.70-2.80(m， 1H)， 2.38-2.48(m， 1H)， 2.15(s， 3H)， 2.08(s， 3H)， 1.00(d， J ＝ 6.5Hz， 3H)。

    [3590] HR MS(m/z， MH+) 测定值 297.2089

    [3591] 化合物 46-53 ： 下表 ( 表 4) 列出了通过如上所述的胺化制得的化合物 ：

    [3592] 表4

    [3585] 来自路径 B 的中间体 ： 3- 氯 -4， 5- 二甲基 -6-((R)-3- 甲基 - 哌嗪 -1- 基 )- 哒嗪 ( 化合物 54)

    [3598] 将固体 K2CO3(10g， 72.4mmol， 1.8 当量 ) 加入到 (R)-2- 甲基 - 哌嗪 (4.00g， 40mmol， 1 当量 ) 和 3， 6- 二氯 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 (8g， 45.2mml， 1.1 当量 ) 在 DMF(50mL) 中的溶液 中， 将所得溶液在 60℃搅拌 48 小时。将反应混合物减压浓缩至 1/2 体积， 加入溶解固体盐 所需的最少量的水 ( 约 15mL)， 然后加入二氯甲烷 (100mL)。分离有机层， 经硫酸钠干燥， 减 压浓缩， 然后通过硅胶柱色谱法纯化 (2％ -20％ MeOH/CH2Cl2)， 得到预期化合物， 为白色固体 (4.7g， 49％ )。 1

    [3599] H NMR(400MHz， CDCl3)δ ＝ 3.08-3.21(m， 2H)， 2.73-2.92(m， 4H， )2.47(dd， J＝ 12.4Hz， 10.2Hz， 1H)， 2.13(s， 3H)， 2.07(s， 3H)， 0.93(d， J ＝ 6.3Hz， 3H)。

    [3600] HR MS(m/z， MH+) ： 测定值 241.1218

    [3601] 3- 氯 -4， 5- 二甲基 -6-( 哌嗪 -1- 基 )- 哒嗪 ( 化合物 55)

    [3602] 由哌嗪和 3， 6- 二氯 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪如上所述制得化合物 55。

    [3604] MS(m/z， MH+) 测定值 227

    [3605] (R)-4-(6- 氯 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )-2- 甲基 -3， 4， 5， 6- 四氢 -2H-[1， 2′ ] 联吡嗪 -5′ - 甲酸甲酯 ( 化合物 56)

    [3603] 在安装了回流冷凝器的 100mL 圆底烧瓶中合并 3- 氯 -4， 5- 二甲基 -6-((R)-3- 甲 基 - 哌嗪 -1- 基 )- 哒嗪 (1.20g， 4.88mmol)、 5- 氯 - 吡嗪 -2- 甲酸甲酯 (946mg， 5.37mmol)、 三乙胺 (3.40mL， 24.4mmol) 和 1， 4- 二 烷 (10mL)， 加热至 80℃达 24 小时。然后将反应物冷却至室温， 搅拌 48 小时。在此过程中通过过滤分离浅褐色固体沉淀， 用 H2O 冲洗。真空 干燥沉淀， 得到标题化合物 (1.30g， 71％ )。MS(m/z， MH+) 测定值 377.3

    [3608] 2-[(R)-4-(6- 氯 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )-2- 甲基 -3， 4， 5， 6- 四氢 -2H-[1， 2′ ] 联吡嗪 -5′ - 基 ]- 丙烷 -2- 醇 ( 化合物 57)将 (R)-4-(6- 氯 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )-2- 甲基 -3， 4， 5， 6- 四氢 -2H-[1， 2′ ] 联吡嗪 -5′ - 甲酸甲酯 (400mg， 1.04mmol) 混悬于 THF(12mL) 中， 冷却至 78℃。滴加 甲基碘化镁 (2.8mL， 3M 的乙醚溶液， 8.4mmol)。将反应物搅拌 30 分钟， 温至 0℃， 再搅拌 30 分钟。 加入饱和 NH4Cl 水溶液 (10mL) 使反应物淬灭， 然后加入 H2O(40mL)。 用 EtOAc(3x50mL) 萃取有机相， 干燥， 浓缩， 得到预期产物， 为浅褐色粉末 (415mg， 定量 )。MS(m/z， MH+) 测定 值 359.3

    [3611] 2-[(R)-4-(6- 氯 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )-2- 甲基 - 哌嗪 -1- 基 ]-4- 三氟甲 基 - 嘧啶 -5- 甲酸甲酯 ( 化合物 58)

    [3610] 将三乙胺 (2.0mL， 14.4mmol， 2.9 当量 ) 加入到 2- 氯 -4- 三氟甲基 - 嘧啶 -5- 甲 酸甲酯 (1.25g， 5.0mmol， 1 当量 )、 3- 氯 -4， 5- 二甲基 -6-((R)-3- 甲基 - 哌嗪 -1- 基 )- 哒 嗪 (1.20g， 5.0mmol， 1 当量 ) 在二氯甲烷 (40mL) 中的溶液中， 将所得溶液于室温搅拌 2 小 时。用二氯甲烷 (50mL) 稀释反应混合物， 用水 (25mL)、 然后用盐水 (25mL) 洗涤。分离有机 层， 经硫酸钠干燥， 减压浓缩， 得到白色残余物。通过硅胶色谱法分离预期化合物 (10-75％ EtOAc/ 庚烷 )， 为白色固体 (1.83g， 82％ )。 1

    [3614] H NMR(400MHz， DMSO-d6)δ ＝ 9.00(s， 1H)， 4.92-5.15(m， 1H)， 4.54-4.76(m， 1H)， 3.84(s， 3H)， 3.59(d， J ＝ 14.0Hz， 1H)， 3.50(t， J ＝ 12.8Hz， 2H)， 3.08(dd， J ＝ 12.8Hz， 3.3Hz， 1H)， 2.89-2.99(m， 1H)， 2.36(s， 3H)， 2.33(s， 3H)， 1.39(d， J ＝ 7.0Hz， 3H)。

    [3615] HR MS(m/z， MH+) ： 测定值 445.1373

    [3616] 2-[(R)-4-(6- 氯 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )-2- 甲基 - 哌嗪 -1- 基 ]-4- 三氟甲 基 - 嘧啶 -5- 甲酸乙酯 ( 化合物 59)

    [3613] 用 2- 氯 -4- 三氟甲基 - 嘧啶 -5- 甲酸乙酯 (400mg， 1.57mmol， 1 当量 ) 和 3- 氯 -4， 5- 二甲基 -6-((R)-3- 甲基 - 哌嗪 -1- 基 )- 哒嗪 (400mg， 1.66mmol， 1 当量 ) 进行上述方案， 得到 700mg 预期产物， 为白色固体 (97％ )。 1

    [3619] H NMR(400MHz， DMSO-d6)δ ＝ 8.94(s， 1H)， 5.12-5.18(m， 1H)， 4.70-4.85(m， 1H)， 4.35(q， J ＝ 7.0Hz， 2H)， 3.48-3.56(m， 2H)， 3.40(d， J ＝ 12.5Hz， 1H)， 3.21(d， J ＝ 10.5Hz， 1H)， 3.02-3.14(m， 1H)， 2.36(s， 3H)， 2.35(s， 3H)， 1.44(d， J ＝ 7.0Hz， 3H)， 1.37(t， J ＝ 7.0Hz， 3H)。

    [3620] 3- 氯 -4， 5- 二 甲 基 -6-[(R)-3- 甲 基 -4-(5- 三 氟 甲 基 - 吡 啶 -2- 基 )- 哌 嗪 -1- 基 ]- 哒嗪 ( 化合物 60)

    [3621] 在小瓶中合并 3， 6- 二氯 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 (100mg， 0.554mmol)、 (R)-2- 甲基哌 嗪 (85mg， 0.831mmol)、 碳酸钾 (383mg， 2.77mmol) 和 DMF(1mL)。 在 120℃在微波中加热 3.25 小时。加入 2- 氯 -5- 三氟甲基吡啶 (181mg， 0.997mmol)， 在 180℃加热 30 分钟。通过硅胶 快速色谱法直接纯化粗反应物 (0-40％ EtOAc 的庚烷溶液 )， 得到标题化合物， 为浅黄色固 体 (78mg， 37％ )。MS(m/z， MH+) 测定值 386.4

    [3623] 来自路径 C 的中间体 ：

    [3624] 3- 氯 -4， 5- 二甲基 -6-[4-(5- 三氟甲基 - 吡啶 -2- 基 )- 哌嗪 -1- 基 ]- 哒嗪 ( 化 合物 61)

    [3622] 将 1-(5- 三氟甲基 - 吡啶 -2- 基 )- 哌嗪 (10g， 43.3mmol) 与 3， 6- 二氯 -4， 5- 二 甲基 - 哒嗪 (14.4g， 84.3mmol)、 三乙胺 (8.25mL) 和 NMP(40mL) 合并。将反应混合物照射至 180℃达 25 分钟， 然后真空浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化残余物 (0-8％ MeOH/CH2Cl2)， 得 到标题化合物 (13.2g， 82％ )。 1

    [3627] H NMR(400MHz， DMSO-d6)δ ＝ 8.48-8.41(m， 1H)， 7.84(dd， J ＝ 9.1Hz， 2.4Hz， 1H)， 7.03(d， J ＝ 9.1Hz， 1H)， 3.88-3.76(m， 4H)， 3.28-3.20(m， 4H)， 2.31(s， 6H)。

    [3628] 1- 氯 -4-[4-(5- 三氟甲基 - 吡啶 -2- 基 )- 哌嗪 -1- 基 ]-67- 二氢 -5H- 环戊二烯 并 [d] 哒嗪 ( 化合物 62)

    [3626] 向 4- 二氯 -6， 7- 二氢 -5H- 环戊二烯并 [d] 哒嗪 ( 化合物 39， 500mg， 2.64mmol) 在 NMP(5mL) 中的溶液中加入 1-[5- 三氟甲基 )- 吡啶 -2- 基 )- 哌嗪 (581mg， 2.51mmol)， 然 后加入三乙胺 (1.1mL， 7.9mmol)。将混合物在 170℃在微波反应器中加热 60 分钟。向反应 混合物中加入水， 用 EtOAc 萃取。用水、 盐水洗涤合并的有机萃取物， 经 Na2SO4 干燥， 过滤， 浓缩。将粗产物与甲醇一起研磨， 得到标题化合物 (483mg， 48％ )。 1

    [3631] H NMR(CD2Cl2)δ ＝ 8.41(s， 1H)， 7.68(dd， J ＝ 8.9Hz， 2.5Hz， 1H)， 6.73(d， J＝ 8.9Hz， 1H)， 3.80(m， 4H)， 3.60(m， 4H)， 3.04(m， 2H)， 2.95(m， 2H)， 2.16(m， 2H)。

    [3630] HR MS(m/z， MH+) ： 测定值 384.1190

    [3633] 1- 氯 -4-[4-(5- 三氟甲基 - 吡啶 -2- 基 )- 哌嗪 -1- 基 ]-5， 6， 7， 8- 四氢 - 酞嗪 ( 化合物 63)

    [3634] 向 1， 4- 二氯 -5， 6， 7， 8- 四氢 - 酞嗪 ( 化合物 25， 100mg， 0.492mmol) 在 NMP(3mL) 中的溶液中加入 1-[5- 三氟甲基 )- 吡啶 -2- 基 )- 哌嗪 (114mg， 0.492mmol)， 然后加入三乙 胺 (218μL， 1.57mmol)。将混合物在 140℃在微波反应器中加热 60 分钟。将水加入反应混 合物中， 用 EtOAc 萃取。用水、 盐水洗涤合并的有机萃取物， 经 Na2SO4 干燥， 过滤， 浓缩。通 过硅胶快速色谱法纯化粗产物 (EtOAc/ 庚烷 10％ -70％ )， 得到 96mg(49％ ) 标题化合物。 1

    [3636] H NMR(400MHz， CD2Cl2)δ ＝ 8.41(s， 1H)， 7.73(dd， J ＝ 9.0Hz， 2.5Hz， 1H)， 6.79(d， J ＝ 9.0Hz， 1H)， 3.85(m， 4H)， 3.40(m， 4H)， 2.76-2.68(m， 4H)， 1.93(m， 2H)， 1.80(m， 2H)。

    [3635] HR MS(m/z， MH+) 测定值 398.1359 6-[4-(4- 氯 -5， 6， 7， 8- 四氢 - 酞嗪 -1- 基 )- 哌嗪 -1- 基 ]- 烟酸乙酯 ( 化合物64)

    [3639] 按照与如上所述类似的方式制得化合物。

    [3641] MS(m/z， MH+) 测定值 402.2

    [3642] 6-[(S)-4-(4- 氯 -6， 7- 二 氢 -5H- 环 戊 二 烯 并 [d] 哒 嗪 -1- 基 )-3- 甲 基 - 哌 嗪 -1- 基 ]- 烟酸甲酯 ( 化合物 65)

    [3640] 向 1， 4- 二氯 -6， 7- 二氢 -5H- 环戊二烯并 [d] 哒嗪 (150mg， 0.79mmol) 在 NMP(5mL) 中的溶液中加入 (S)-3- 甲基 -3， 4， 5， 6- 四氢 -2H-[1， 2′ ] 联吡嗪 -5′ - 甲酸乙酯 (297mg， 1.19mmol) 和三乙胺 (332μL， 2.39mmol)。 将反应混合物在 195℃在微波反应器中加热 4 小 时。加入水和 EtOAc。分离各层， 用 EtOAc 萃取水层。用水洗涤合并的有机层， 经 Na2SO4 干 燥， 过滤， 浓缩。通过快速色谱法纯化粗产物 (EtOAx/ 庚烷 10％ -70％ )， 得到 50mg(16％ ) 标题化合物。

    [3645] 4-(6- 氯 -4， 5- 二 甲 基 - 哒 嗪 -3- 基 )-3， 4， 5， 6- 四 氢 -2H-[1， 2′]联吡 嗪 -5′ - 甲酸甲酯 ( 化合物 66)

    [3644] 向 3， 4， 5， 6- 四氢 -2H-[1， 2] 联吡嗪 -5’ - 甲酸甲酯 (250mg， 1.07mmol) 在 NMP(5mL) 中 的 溶 液 中 加 入 3， 6- 二 氯 -4， 5- 二 甲 基 - 哒 嗪 (237mg， 1.33mmol) 和 TEA(446μl， 3.21mmol)， 将反应混合物在 190℃搅拌 60 分钟。将水加入到混合物中， 用 EtOAc 萃取。用 水、 盐水洗涤合并的有机层， 经 Na2SO4 干燥， 过滤， 浓缩。通过 HPLC 纯化粗产物 ( 含有 3％ 1- 丙醇的乙腈 / 水 ： 10％～ 95％ )， 得到白色粉末 (165mg， 43％ )。 1

    [3648] H-NMR(400MHz， DMSO-d6)δ ＝ 8.69(s， 1H)， 8.44(s， 1H)， 3.92(t， J ＝ 5.0Hz， 4H)， 3.83(s， 3H)， 3.27(m， 4H)， 2.41(s， 3H)， 2.32(s， 3H)。

    [3649] MS(m/z， MH+) 测定值 363

    [3650] 实施例 65-72 的合成

    [3651] 哒嗪氯化物 IIIA 与芳基溴化锌进行 Negishi 偶联生成实施例 65-69 的通用方案 ( 路径 B/C)

    [3652] 向 氯 哒 嗪 IIIa(0.15mmol， 1 当 量 ) 在 THF(5ml) 中 的 溶 液 中 加 入 Pd(PPh3)4(12.5mol％ )。使混合物脱气， 加入芳基溴化锌 (0.225， 1.5 当量， 例如为 0.5M 的 THF 溶液 )， 将混合物于 80℃在微波反应器中加热 30 分钟。将反应混合物冷却至室温， 加 入水， 用 EtOAc 萃取混合物。用水、 盐水洗涤合并的有机萃取物， 经硫酸钠干燥， 过滤， 浓缩。 通过硅胶快速色谱法使用 EtOAc/ 庚烷作为洗脱剂纯化粗产物， 得到实施例 Ip。

    [3653] 下表 ( 表 5) 列出了通过如上所述的 Negishi 偶联制得的化合物 ：

    [3654] 表5

    [3655] 实施例 70 ： 2-(6-｛(S)-4-[4-(2- 氯 - 苄基 )-6， 7- 二氢 -5H- 环戊二烯并 [d] 哒 嗪 -1- 基 ]-3- 甲基 -1- 基 }- 吡啶 -3- 基 )- 丙烷 -2- 醇于 0 ℃ 向 (S)-4-[4-(2- 氯 - 苄 基 )-6， 7- 二 氢 -5H- 环 戊 二 烯 并 [d] 哒 嗪 -1- 基 ]-3- 甲基 -3， 4， 5， 6- 四氢 -2H-[1， 2′ ] 联吡嗪 -5′ - 甲酸乙酯 (35mg， 0.071mmol) 在 THF(5mL) 中的溶液中加入甲基碘化镁 (3M 的乙醚溶液， 0.19mL， 0.57mmol)， 将混合物于 室温搅拌 30 分钟。加入饱和 NaHCO3 溶液和 EtOAc。分离各层， 用 EtOAc 萃取水层。用水、 盐水洗涤合并的有机层， 经 Na2SO4 干燥， 过滤， 浓缩。通过 HPLC 纯化粗产物 ( 含有 0.1 ％ TFA 的乙腈 / 水， 10％ -50％ )。用 Na2CO3 溶液处理盐后， 分离出作为游离碱的产物 (11mg， 32％ )

    [3660] HR MS(m/z， MH+) 测定值 478.2367

    [3661] 实施例 71 ： 2｛(R)-4-[6-(2， 4- 二氟 - 苄基 )-4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 ]-2- 甲 基 - 哌嗪 -1- 基 }-4- 三氟甲基 - 嘧啶 -5- 甲酸乙酯

    [3659] 在 微 波 小 瓶 中 向 2-[(R)-4-(6- 氯 -4， 5- 二 甲 基 - 哒 嗪 -3- 基 )-2- 甲 基 - 哌嗪 -1- 基 ]-4- 三氟甲基 - 嘧啶 -5- 甲酸乙酯 (229mg， 0.50mmol， 1 当量 ) 和 THF(1.4mL) 的 溶液中加入 2， 4- 二氟苄基溴化锌 (2.0mL 0.5M 的 THF 溶液， 2.0mmol， 4 当量 ) 和四 ( 三苯 膦 ) 钯 (25mg， 0.03mmol， 0.05 当量 )。 密封小瓶， 在微波中于 60℃加热 ( 高吸收设置 )25 分 钟。再加入等分试样的 2， 4- 二氟苄基溴化锌 (1.0mL 0.5M 的 THF 溶液， 1.0mmol， 2 当量 )， 将反应混合物在 100℃在微波中加热 ( 高吸收设置 )5 分钟。用水 (10mL) 使反应混合物淬 灭， 然后用 EtOAc(2x25mL) 萃取。用硫酸镁干燥合并的有机级分， 浓缩， 通过硅胶色谱法纯 化 (25-75％ EtOAc/ 庚烷 )， 得到预期化合物 (225mg， 81％ )。 1

    [3664] H NMR(400MHz， CDCl3)δ ＝ 8.86(s， 1H)， 7.12(t， J ＝ 7.3Hz， 1H)， 6.76-6.83(m， 2H)， 4.99-5.07(m， 1H)， 4.64-4.73(m， 1H)， 4.28(q， J ＝ 7.0Hz， 2H)， 3.35-3.46(m， 2H)， 3.31(d， J ＝ 12.5Hz， 1H)， 3.10(d， J ＝ 10.5Hz， 1H)， 2.90-3.02(m， 1H)， 2.25(s， 3H)， 2.24(s， 3H)， 1.36(d， J ＝ 7.0Hz， 3H)， 1.29(t， J ＝ 7.0Hz， 3H)。

    [3665] 实施例 72 ： 2-(2-{(R)-4-[6-(2， 4- 二氟 - 苄基 )-4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 ]-2- 甲 基 - 哌嗪 -1- 基 }-4- 三氟甲基 - 嘧啶 -5- 基 )- 丙烷 -2- 醇

    [3666] 向 在 冰 浴 中 冷 却 的 2-{(R)-4-[6-(2， 4- 二 氟 - 苄 基 )-4， 5- 二 甲 基 - 哒 嗪 -3- 基 ]-2- 甲基 - 哌嗪 -1- 基 }-4- 三氟甲基 - 嘧啶 -5- 甲酸乙酯 (220mg， 0.40mmol， 1 当量 ) 在 THF(1.0mL) 中的溶液中加入 MeMgBr 溶液 (2mL， 3M 的乙醚溶液， 6mmol， 15 当量 )。 将溶液温至室温达 30 分钟。小心加入饱和 NH4Cl 使反应物淬灭， 然后用 EtOAc 萃取。经硫 酸钠干燥有机层， 然后浓缩。通过硅胶柱色谱法分离产物 (25-75％ EtOAc/ 庚烷 )， 得到预 期化合物， 为白色固体 (27mg， 13％ )。 1

    [3668] H NMR(400MHz， CDCl3)δ ＝ 8.74(s， 1H)， 7.21(tt， J ＝ 8.3Hz， 6.5Hz， 1H)， 6.85-6.94(m， 1H)， 4.95-5.05(m， 1H)， 4.64(dd， J ＝ 12.5Hz， 3.3Hz， 1H)， 4.26(s， 2H)，

    [3667] 3.49(d， J ＝ 12.4Hz， 1H)， 3.36-3.44(m， 2H)， 3.19(dd， J ＝ 12.5Hz， 3.8Hz， 1H)， 3.05(td， J ＝ 12.0Hz， 3.3Hz， 1H)， 2.35(s， 3H)， 2.33(s， 3H)， 1.70(s， 6H)， 1.42(d， J ＝ 6.7Hz， 3H)。

    [3669] HR MS(m/z， MH+) 测定值 537.2408

    [3670] 实施例 73-87 的合成

    [3671] 胺 XIII 与芳族氯化物进行胺化生成实施例 74-86 的通用方案 ( 路径 A)

    [3672] 向胺 XIII(0.5mmol， 1 当量 ) 和芳族卤化物 (1mmol， 2 当量 ) 在 NMP(2.5ml) 中的 溶液中加入三乙胺 (1.5mmol， 3 当量 )。 将混合物在微波反应器中加热至 140℃ -190℃温度 ( 取决于芳族卤化物的反应活性 ) 达 30 分钟。LCMS 显示反应完全后， 加入水和 EtOAc， 分离 各层， 用 EtOAc 萃取水层。用水、 盐水洗涤合并的有机层， 经硫酸钠干燥， 过滤， 浓缩。通过硅胶快速色谱法用 EtOAc/ 庚烷作为洗脱剂纯化产物， 得到实施例 Ip。

    [3673] 实施例 73 ： (R)-4-(6- 苄基 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )-2- 甲基 -3， 4， 5， 6- 四 氢 -2H-[1， 2′ ] 联吡嗪 -5′ - 甲酸甲酯

    [3674] 将 化 合 物 47(6.0g， 20.27mmol)、 5- 氯 吡 嗪 -2- 甲 酸 甲 酯 (5.3g， 30.30mmol)、 烷 (100mL) 的混合物加热至回流过夜。除去溶剂。加入饱和Et3N(6.2g， 60.60mmol) 和二用 EtOAc 萃取。浓缩有机层， 得到粗产物， 通过硅胶色谱法纯化 (EtOAc/ 庚烷 ： NH4Cl 溶液， 50％～ 100％ )， 得到标题化合物 (6.6g， 76％ )， 为黄色固体。 1

    [3676] H NMR(400MHz， CD2Cl2)δ ＝ 8.81(s， 1H)， 8.21(s， 1H)， 7.29(m， 5H)， 4.83(m， 1H)， 4.43(m， 1H)， 4.33(s， 2H)， 3.94(s， 3H)， 3.52(m， 3H)， 3.27(m， 1H)， 3.14(m， 1H)， )， 2.31(s， 3H)， 2.17(s， 3H)， 1.49(d， J ＝ 6.5Hz， 3H)。

    [3677] HR MS(m/z.MH+) 测定值 433.2348

    [3678] 实施例 74-86 ： 下表 ( 表 6) 列出了通过如通用方案中所述的胺化制得的实施例化 合物 ：

    [3679] 表6

    [3680] 实施例 87 ： 3- 苄基 -4， 5- 二甲基 -6-[(R)-3- 甲基 -4-(4- 三氟甲磺酰基苯基 )- 哌 嗪 -1- 基 ]- 哒嗪

    [3684] 向 3- 苄基 -4， 5- 二甲基 -6-((R)-3- 甲基 - 哌嗪 -1- 基 )- 哒嗪 (80mg， 0.257mmol) 烷 (5mL) 中的溶液中加入 1- 氯 -4- 三氟甲磺酰基 - 苯 (95.2mg， 0.385mmol)、 氢氧在二化钾颗粒 (101mg， 1.55mmol)、 萘醌咪唑啉 -2- 亚基 -Pd(0)(175mg， 0.129mmol)。将混合物 在微波反应器中在 100℃加热 120 分钟。向混合物中加入水， 用 EtOAc 萃取。用水、 盐水洗 涤合并的有机层， 经 Na2SO4 干燥， 过滤， 浓缩。通过 HPLC 纯化粗产物 ( 含有 3％ 1- 丙醇的 乙腈 / 水 ： 10％～ 95％ )， 得到浅黄色粉末 (55mg， 89％ )。 1

    [3685] H-NMR(400MHz， DMSO-d6)δ7.81(d， J ＝ 9.1Hz， 2H)， 7.17-7.30(m， 7H)， 4.51(m， 1H)， 4.26(s， 2H)， 3.97(d， J ＝ 12.6Hz， 1H)， 3.55(d， J ＝ 12.2Hz， 1H)， 3.42(m， 2H)， 3.14(m， 1H)， 3.00(m， 1H)， 2.26(s， 3H)， 2.13(s， 3H)， 1.31(d， J ＝ 6.5Hz， 3H)。

    [3686] HR MS(m/z， MH+) 测定值 505.1872 计算值 505.1885

    [3687] 实施例 88-115 的合成

    [3688] 用酯进行 Grignard 反应的通用方案

    [3689] 于 -78℃向酯 (0.5mmol， 1 当量 ) 在 THF(3mL) 中的溶液中加入烷基溴化镁或碘化 镁 (4mmol， 8 当量， 在乙醚中的溶液 )。将反应混合物于 0℃搅拌 2 小时， 然后用 DCM 稀释， 用 NH4Cl 和水洗涤。用水、 盐水洗涤合并的有机层， 经 Na2SO4 干燥， 过滤， 浓缩。通过使用乙 腈水溶液的 HPLC 对粗产物进行纯化， 在较少量相应的甲基酮之后得到叔醇 ( 主要产物 )。 用冷冻干燥器除去溶剂， 得到产物， 为白色粉末。

    [3690] 实施例 88 ： 2-[(R)-4-(6- 苄基 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )-2- 甲基 -3， 4， 5， 6- 四氢 -2H-[1， 2′ ] 联吡嗪 -5′ - 基 ]- 丙烷 -2- 醇

    [3691] 于 -78 ℃向 (R)-4-(6- 苄基 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )-2- 甲基 -3， 4， 5， 6- 四 氢 -2H-[1， 2’ ] 联吡嗪 -5’ - 甲酸甲酯 (840mg， 1.85mmol) 在 THF(12mL) 中的溶液中加入甲 基溴化镁 (5mL， 15mmol， 3M 的乙醚溶液 )。将反应混合物于 0℃搅拌 2 小时， 然后用 DCM 稀 释， 用 NH4Cl 和水洗涤。用水、 盐水洗涤合并的有机层， 经 Na2SO4 干燥， 过滤， 浓缩。通过使 用乙腈水溶液 ( 含有 3％ 1- 丙醇的 10％ -95％ ) 的在 220nm 检测波长的 HPLC 纯化粗产物， 在较少量相应的甲基酮 ( 实施例 95) 之后得到预期的醇 (400mg， 50％ )。用冷冻干燥器除 去溶剂， 得到产物， 为白色粉末。 1

    [3693] H NMR(400MHz， CD2Cl2)δ ＝ 8.28(s， 1H)， 8.10(s， 1H)， 7.25(m， 5H)， 4.83(m， 1H)， 4.33(s， 2H)， 4.20(m 1H)， 3.78(s， 1H)， 3.57(m， 1H)， 3.44(m， 2H)， 3.29(m， 1H)， 3.14(m， 1H)， 2.31(s， 3H)， 2.16(s， 3H)， 1.56(s， 6H)， 1.40(d， J ＝ 6.5Hz， 3H)。

    [3692] HR MS(m/z， MH+) 测定值 433.2713， 计算值 433.2716

    [3695] 实施例 89-111 ： 下表 ( 表 7) 列出了通过如上所述的 Grignard 加成制得的实施例 化合物 ：

    [3696] 表7

    [3694] 实施例 112 ： 2-[(R)-4-(6- 苄基 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )-2- 甲基 -3， 4， 5， 6- 四氢 -2H-[1， 2’ ] 联吡嗪 -5’ - 基 ]-2， 2- 二甲氧基 - 乙醇

    [3699] 于 0 ℃向 KOH(33mg， 0.38mmol) 和甲醇 (5mL) 的溶液中分批加入在甲醇 (1mL) 中 的实施例 95(20mg， 0.048mmol)、 然后分批加入二乙酸碘苯 (23mg， 0.072mmol)。将混合物 于室温搅拌过夜。除去溶剂， 得到粗产物， 通过 HPLC 纯化 ( 乙腈 / 水 (1％ NH4OH)， 30％～ 100％ )， 得到标题化合物 (12mg， 52％ )， 为黄色固体。 1

    [3702] H NMR(400MHz， CD2Cl2)δ ＝ 8.42(s， 1H)， 8.18(s， 1H)， 7.29(m， 5H)， 4.72(m， 1H)， 4.32(s， 2H)， 4.30(m， 1H)， 3.94(d， J ＝ 6.0Hz， 2H)， 3.58(m， 1H)， 3.47(m， 2H)， 3.28(m， 1H)， 3.26(s， 6H)， 3.13(m， 1H)， 2.31(s， 3H)， 2.16(s， 3H)， 1.44(d， J ＝ 6.5Hz， 3H)。

    [3703] 实施例 113 ： 1-[(R)-4-(6- 苄基 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )-2- 甲基 -3， 4， 5， 6- 四氢 -2H-[1， 2′ ] 联吡嗪 -5′ - 基 ]- 乙醇

    [3701] 于 0 ℃ 向 实 施 例 95(50mg， 0.12mmol) 和 MeOH(3mL) 的 溶 液 中 加 入 NaBH4(10mg， 0.24mmol)， 然后将反应混合物于室温再搅拌 0.5 小时。 除去溶剂， 加入水， 然后用 DCM 萃取。 浓缩有机层， 得到标题化合物 (38mg， 76％ )， 为白色固体。 1

    [3706] H NMR(400MHz， CD2Cl2)δ ＝ 8.04(s， 1H)， 8.01(s， 1H)， 7.15(m， 5H)， 4.73(m， 1H)， 4.57(m， 1H)， 4.21(s， 2H)， 4.07(m， 1H)， 3.46(m， 1H)， 3.33(m， 2H)， 3.15(m， 1H)， 3.01(m， 2H)， 2.19(s， 3H)， 2.05(s， 3H)， 1.39(d， J ＝ 6.5Hz， 3H)， 1.30(d， J ＝ 6.5Hz， 3H)。

    [3707] HR MS(m/z， MH+) 测定值 419.2543

    [3708] 实施例 114 ： 1-[(R)-4-(6- 苄基 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )-2- 甲基 -3， 4， 5， 6- 四氢 -2H-[1， 2’ ] 联吡嗪 -5’ - 基 )-2- 羟基 - 乙酮

    [3705] 于 0℃向 KOH(224mg， 4.0mmol) 和 CH3OH(10mL) 的溶液中分批加入在 CH3OH(10mL) 中的 1-[(R)-4-(6- 苄基 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )2- 甲基 -3， 4， 5， 6- 四氢 -2H-[1， 2’ ] 联吡嗪 -5’ - 基 )- 乙酮 (400mg， 1.0mmol)， 然后分批加入二乙酸碘苯 (464mg， 1.5mmole)。 将混合物于室温搅拌过夜。除去溶剂， 然后用 DCM 萃取。用 NH4Cl 水溶液洗涤有机层， 然后 浓缩， 得到粗的实施例 112。将物质溶于水， 然后加入 6N HCl(5mL)。将混合物于室温搅拌 3 小时。然后用 NaHCO3 使其呈碱性， 用 DCM 萃取。浓缩有机层， 得到粗产物， 通过硅胶色谱 法纯化 (EtOAc/ 庚烷 ： 50％～ 100％ )， 得到标题化合物 (240mg， 58％ )， 为黄色固体。 1

    [3711] H NMR(400MHz， CD2Cl2)δ ＝ 8.82(s， 1H)， 8.15(s， 1H)， 7.27(m， 5H)， 4.91(s， 2H)， 4.86(m， 1H)， 4.48(m， 1H)， 4.33(s， 2H)， 3.57(m， 2H)， 3.46(m， 1H)， 3.30(m， 2H)， 3.14(m， 1H)，

    [3710] 2.31(s， 3H)， 2.17(s， 3H)， 1.50(d， J ＝ 6.5Hz， 3H)。

    [3712] HR MS(m/z， MH+) 测定值 433.2340

    [3713] 实施例 115 ： 1-[(R)-4-(6- 苄基 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )-2- 甲基 -3， 4， 5， 6- 四氢 -2H-[1， 2’ ] 联吡嗪 -5’ - 基 )- 乙烷 -1， 2- 二醇

    [3714] 于 0 ℃ 向 1-[(R)-4-(6- 苄 基 -4， 5- 二 甲 基 - 哒 嗪 -3- 基 )-2- 甲 基 -3， 4， 5， 6- 四氢 -2H-[1， 2’ ] 联吡嗪 -5’ - 基 )-2- 羟基 - 乙酮 ( 实施例 114， 110mg， 0.25mmol) 和 EtOH(20ml) 的溶液中加入 NaBH4(14mg， 0.38mmol)。将混合物温至室温， 搅拌 3 小时。用 3N HCl 将反应溶液酸化至 pH ～ 7， 除去有机溶剂。将残余物溶于饱和 NaHCO3 溶液， 用 DCM 萃 取。浓缩有机层， 得到标题化合物 (96mg， 91％ )， 为白色固体。 1

    [3716] H NMR(400MHz， CD2Cl2)δ ＝ 8.09(s， 1H)， 8.00(s， 1H)， 7.18(m， 5H)， 4.64(m， 1H)， 4.57(m， 1H)， 4.26(s， 2H)， 4.10(m， 1H)， 3.60(m， 2H)， 3.48(m， 1H)， 3.34(m， 2H)， 3.18(m， 1H)， 3.02(m， 1H)， 2.21(s， 3H)， 2.06(s， 3H)， 1.30(d， J ＝ 6.5Hz， 3H)。

    [3717] HR MS(m/z， MH+) 测定值 435.2511

    [3718] 实施例 116 和 117 的合成

    [3719] 实施例 116 ： (R)-4-(6- 苄基 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )-2- 甲基 -3， 4， 5， 6- 四 氢 -2H-[1， 2′ ] 联吡嗪 -5′ - 甲酸

    [3715] 将 (R)-4-(6- 苄基 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )-2- 甲基 -3， 4， 5， 6- 四氢 -2H-[1， 2 ′ ] 联 吡 嗪 -5 ′ - 甲 酸 甲 酯 (1.8g， 4.16mmol) 与 LiOH(998mg， 42mmol)、 H2O(20mL)、 THF(20mL) 和 MeOH(10mL) 合并。将合并的混合物于室温搅拌 16 小时。真空浓缩以除去有 机溶剂。再加入水， 用 HCl 或磷酸盐缓冲液将 pH 调节至 4.0。用 EtOAc 萃取溶液， 用盐水洗 涤合并的有机萃取物。经硫酸钠干燥萃取物， 过滤以除去干燥剂。浓缩滤液， 得到标题化合 物 (1.46g， 84％ )。

    [3721] H NMR(400MHz， CD2Cl2)δ ＝ 8.89(s， 1H)， 8.10(s， 1H)， 7.27(m， 5H)， 4.84(m， 1H)， 4.44(m， 1H)， 4.34(s， 2H)， 3.58(m， 3H)， 3.31(m， 1H)， 3.16(m， 1H)， 2.32(s， 3H)， 2.18(s， 3H)， 1.50(d， J ＝ 6.5Hz， 3H)。

    [3723] HR MS(m/z， MH+) 测定值 419.2200

    [3724] 实 施 例 117 ： 2-[(R)-4-(6- 苄 基 -4， 5- 二 甲 基 - 哒 嗪 -3- 基 )-2- 甲 基 - 哌 嗪 -1- 基 ]-4- 三氟甲基 - 嘧啶 -5- 甲酸

    [3722] 1向 2-[(R)-4-(6- 苄基 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )-2- 甲基 - 哌嗪 -1- 基 ]-4- 三 氟甲基 - 嘧啶 -5- 甲酸甲酯 (500mg， 1.0mmol， 1.0 当量 ) 在 THF(5mL) 中的溶液中加入 LiOH 水溶液 (1M， 2.0mL， 2.0mmol， 2.0 当量 )， 将所得溶液加热至 75℃达 4 小时。用 EtOAc(50mL) 稀释反应混合物， 用水 (3x15mL) 洗涤。用 HCl 水溶液 (1M) 将合并的水洗涤液调节至 pH6， 然后用二氯甲烷 (3x50mL) 萃取。经硫酸钠干燥合并的有机层， 减压浓缩， 得到预期产物， 为 白色固体 (470mg， 96％ )。 1

    [3727] H NMR(400MHz， MeOH-d4)δ ＝ 8.97(s， 1H)， 7.23-7.30(m， 2H)， 7.10-7.22(m， 3H)， 5.11-5.23(m， 1H)， 4.77-4.86(m， 1H)， 4.31(s， 2H)， 3.52-3.64(m， 2H)， 3.50(d， J ＝ 12.5Hz， 1H) ， 3.17(dd ， J ＝ 12.5Hz ， 3.5Hz ， 1H) ， 2.97-3.09(m ， 1H) ， 2.37(s ， 3H) ， 2.17(s ， 3H) ， 1.47(d， J ＝ 6.5Hz， 3H)。

    [3728] HR MS(m/z， MH+) 测定值 487.2088

    [3729] 实施例 118-144 的合成

    [3730] 用酸实施例 116 进行酰胺形成以生成其它实施例 118-140 的通用方案

    [3731] 方法 A ：

    [3732] 将实施例 116(40mg， 0.10mmol) 和 SOCl2(10mL) 的混合物加热至回流达 1 小时， 然 后除去溶剂。将残余物溶于 DCM(2mL)， 转入胺 (0.14mmole) 和 DCM(3mL) 的溶液中。将反 应混合物于室温搅拌 2 小时。加入水 (10mL)， 用 DCM(3x20mL) 萃取混合物。浓缩有机层， 得到粗产物， 通过 HPLC 纯化 [ 乙腈 / 水 (1 ％ NH4OH)， 30 ％～ 100 ％ ]， 得到产物 ( 实施例 118-132， 20％～ 84％ )。

    [3733] 方法 B ：

    [3734] 将 实 施 例 116(40mg， 0.10mmol)、 HATU(73mg， 0.14mmole)、 二 异 丙 基 乙 胺 (37mg， 0.29mmol)、 二甲基乙酰胺 (1.5ml) 和胺 (0.14mmole) 的混合物于室温搅拌 10 小时。通过 HPLC 纯化粗产物 ( 乙腈 / 水 (3％丙醇 )， 30％～ 100％ )， 得到产物 ( 实施例 133-140， 37％～ 55％ )。

    [3735] 实施例 118-140 ： 下表 ( 表 8) 列出了通过如上所述的酰胺形成制得的实施例化合 物：

    [3736] 表8

    [3737] 实 施 例 141 ： 2-[(R)-4-(6- 苄 基 -4， 5- 二 甲 基 - 哒 嗪 -3- 基 )-2- 甲 基 - 哌 嗪 -1- 基 ]-4- 三氟甲基 - 嘧啶 -5- 甲酸 (2- 羟基 - 乙基 )- 甲基 - 酰胺

    [3739] 向 2-[(R)-4-(6- 苄基 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )-2- 甲基 - 哌嗪 -1- 基 ]-4- 三氟甲基 - 嘧啶 -5- 甲酸 (45mg， 0.1mmol， 1 当量 ) 在 THF(2mL) 中的溶液中加入过量草酰 氯 (100μL， 1.2mmol， 12 当量 ) 和催化量的 DMF， 将所得溶液于室温搅拌 45 分钟， 此时加 入 N-2- 羟基乙基， N- 甲基胺 (200μL， 2.5mmol， 25 当量 )， 将反应物再搅拌 1 小时。用 EtOAc(50mL) 稀释反应混合物， 用水 (2x10mL)、 然后用盐水 (2x10mL) 洗涤。经硫酸钠干燥 有机层， 减压浓缩， 得到白色残余物。通过硅胶色谱法分离预期化合物 (CH2Cl2-20％ MeOH/ CH2Cl2)， 为白色固体 (43mg， 79％ )。 1

    [3742] H NMR(400MHz， MeOH-d4)δ ＝ 8.55(d， J ＝ 2.6Hz， 1H)， 7.22-7.29(m， 2H)， 7.11-7.20(m， 3H)， 5.05-5.15(m， 1H)， 4.69-4.79(m， 1H)， 4.30(s， 2H)， 3.80(t， J ＝ 5.7Hz， 2H)， 3.66(t， J ＝ 5.6Hz， 2H)， 3.50-3.60(m， 2H)， 3.43-3.50(m， 2H)， 3.15(dt， J ＝ 12.6Hz， 4.2Hz， 1H)， 2.97-3.07(m， 1H)， 2.35(s， 3H)， 2.16(s， 3H)， 1.45(d， J ＝ 8.3Hz， 3H)。

    [3743] HR MS(m/z， MH+) 测定值 544.2647

    [3744] 实施例 142 ： (R)-4-(6- 苄基 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )-2- 甲基 -3， 4， 5， 6- 四 氢 -2H-[1， 2′ ] 联吡嗪 -5′ - 甲酸甲氧基 - 甲基 - 酰胺

    [3745] 将 (R)-4-(6- 苄基 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )-2- 甲基 -3， 4， 5， 6- 四氢 -2H-[1， 2′ ] 联吡嗪 -5′ - 甲酸 (50mg， 0.120mmol) 溶于 CH2Cl2(300μL) 中。 将混合物冷却至 0℃， 加入草酰氯 (32μL， 0.358mmol)， 然后加入 DMF(3 滴 )。搅拌时， 将反应物历经 3 小时温至 室温。滴加二异丙基乙胺 (209μL， 1.2mmol)， 然后加入 N， O- 二甲基羟胺盐酸盐 (14mg， 0.144mmol)。将反应物搅拌 16 小时。真空浓缩粗混合物。通过硅胶快速色谱法纯化残余 物 (MeOH/CH2Cl2)， 得到标题化合物 (42mg， 76％ )。

    [3747] 制备实施例 95 的供选路径 ：

    [3748] 实施例 95 ： 1-[(R)-4-(6- 苄基 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )-2- 甲基 -3， 4， 5， 6- 四 氢 -2H-[1， 2′ ] 联吡嗪 -5′ - 基 ]- 乙酮

    [3746] 将 (R)-4-(6- 苄基 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )-2- 甲基 -3， 4， 5， 6- 四氢 -2H-[1， 2 ′ ] 联 吡 嗪 -5 ′ - 甲 酸 甲 氧 基 - 甲 基 - 酰 胺 ( 实 施 例 142， 450mg， 0.975mmol) 溶 于 THF(1mL) 中， 冷却至 0℃。滴加甲基碘化镁 (325μL， 0.975mmol)。将反应物温至室温， 继 续搅拌 16 小时。加入 H2O(1 滴 )， 真空浓缩反应混合物。通过硅胶快速色谱法纯化残余物 (60-100％ EtOAc/ 庚烷和 0-8％ MeOH/EtOAc)， 得到标题化合物 (350mg， 86％ )。

    [3751] 实施例 143 ： (R)-4-(6- 苄基 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )-5′ - 异丙烯基 -2- 甲 基 -3， 4， 5， 6- 四氢 -2H-[1， 2′ ] 联吡嗪

    [3750] 将甲基三苯基碘化(410mg， 1.010mmol) 加入到 THF(5.5mL) 中， 冷却至 5℃。滴加叔丁醇钾 (1.1mL， 1M 的 THF 溶液， 1.1mmol)， 将反应物搅拌 30 分钟。向反应物中加入在 THF(1.5mL) 中的 1-[(R)-4-(6- 苄基 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )-2- 甲基 -3， 4， 5， 6- 四 氢 -2H-[1， 2′ ] 联吡嗪 -5′ - 基 ]- 乙酮 (350mg， 0.841mmol)。将反应物于 5℃搅拌 1 小 时， 然后除去冰浴， 将反应物于室温再搅拌 16 小时。真空除去 THF。通过硅胶色谱法纯化残 余物 (60-90％ EtOAc/ 庚烷 )， 得到标题化合物 (130mg， 37％ )。 实施例 144 ： 2-[(R)-4-(6- 苄基 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )-2- 甲基 -3， 4， 5， 6- 四氢 -2H-[1， 2′ ] 联吡嗪 -5′ - 基 ]- 丙烷 -1， 2- 二醇

    [3754] 将 (R)-4-(6- 苄基 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )-5 ′ - 异丙烯基 -2- 甲基 -3， 4， 5， 6- 四氢 -2H-[1， 2 ′ ] 联吡嗪 ( 实施例 143， 120mg， 0.290mmol) 混悬于丙酮 (2mL)、 叔 丁 醇 (1mL) 和 H2O(1mL) 中。 向 混 悬 液 中 加 入 K2OsO4(9.6mg， 0.029mmol) 和 NMO(37.4mg， 0.319mmol)。将反应物于室温搅拌 16 小时。真空浓缩。加入 H2O， 用 EtOAc 萃取。用盐水 洗涤合并的有机层， 真空浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化残余物 (MeOH/CH2Cl2)， 得到标题 化合物 (49.2mg， 38％ )。 1

    [3757] H NMR(400MHz， DMSO-d6)δ ＝ 8.32(d， J ＝ 1.4Hz， 1H)， 8.27-8.16(m， 1H)， 7.33-7.23(m， 2H)， 7.22-7.13(m， 3H)， 4.98(d， J ＝ 1.0Hz， 1H)， 4.74-4.62(m， 1H)， 4.58(td， J ＝ 6.2Hz， 1.0Hz， 1H)， 4.25(s， 2H)， 4.18(dm， J ＝ 12.9Hz， 1H)， 3.55-3.46(m， 1H)， 3.49(d， J ＝ 5.8Hz， 2H)， 3.40(dm， J ＝ 12.4Hz， 1H)， 3.29(td， J ＝ 12.5Hz， 3.2Hz， 1H)， 3.07(dd， J＝ 12.3Hz， 3.5Hz， 1H)， 2.95(td， J ＝ 12.3， 3.2Hz， 1H)， 2.26(s， 3H)， 2.12(s， 3H)， 1.36(s， 3H)， 1.28(d， J ＝ 6.4Hz， 3H)。

    [3758] HR MS(m/z， MH+) 测定值 449.2667， 计算值 449.2665

    [3759] 实施例 145-158 的合成

    [3760] 用胺使哒嗪氯化物 XII 胺化生成实施例 145-154 的通用方案 ( 路径 A)

    [3756] 向哒嗪氯化物 XII(0.34mmol) 在 NMP 或二烷 /DMF(3mL) 中的溶液中加入取代的哌嗪 (0.49mmol) 和 TEA(0.15mL， 1.08mmol)。将混合物于 210℃在微波合成仪中加热 60 分钟。加入水， 用 EtOAc 萃取所得混合物。用水、 盐水洗涤合并的有机层， 经 Na2SO4 干燥， 过 滤， 浓缩。通过硅胶色谱法纯化粗产物 (EtOAc/ 己烷 ： 10％～ 70％ )， 得到实施例 Ip。

    [3762] 实施例 145-154 ： 下表 ( 表 9) 列出了通过如上所述的胺化制得的实施例化合物 ：

    [3763] 表9

    [3764] 实施例 155 ： 4-(6- 苄基 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )- 哌嗪 -1- 甲酸苯基酯于 25℃向 3- 苄基 -4， 5- 二甲基 -6- 哌嗪 -1- 基 - 哒嗪 (60mg， 0.21mmol) 和氯甲酸 苯基酯 (40mg， 0.26mmol) 在 CH2Cl2(3mL) 中的溶液中加入 N- 甲基吗啉 (0.07mL， 0.60mmol)。 于 25℃搅拌 3 小时后， 用 CH2Cl2(10mL) 稀释混合物， 用饱和碳酸氢钠 (1mL) 和水 (2x5mL) 洗 涤。 浓缩有机层， 通过 HPLC 纯化 ( 含有 0.1％ TFA 的 CH3CN/H2O ： 22％～ 45％ )， 得到 4-(6- 苄 基 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )- 哌嗪 -1- 甲酸苯基酯 (69mg， 81％ )。 1

    [3770] H-NMR(400MHz， CDCl3)δ ＝ 2.28(3H， s)， 2.41(3H， s)， 3.40(4H， d)， 3.81(4H， d)， 4.50(2H， s)， 7.13(2H， d)， 7.20(2H， d)， 7.27(2H， m)， 7.33(2H， m)， 7.38(2H， m)。

    [3771] HR MS(m/z， MH+) 测定值 403.2115

    [3772] 实施例 156 ： 4-(6- 苄基 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )- 哌嗪 -1- 甲酸苯基酰胺

    [3769] 于 25 ℃ 向 3- 苄 基 -4， 5- 二 甲 基 -6- 哌 嗪 -1- 基 - 哒 嗪 (60mg， 0.21mmol)) 在 CH2Cl2(5mL) 中的溶液中加入异氰酸苯基酯 (33mg， 0.28mmol)。于 25℃搅拌 2 小时后， 浓缩 反应混合物， 通过 HPLC 纯化 ( 含有 0.1 ％ TFA 的 CH3CN/H2O ： 22 ％～ 45 ％ )， 得到 4-(6- 苄 基 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )- 哌嗪 -1- 甲酸苯基酰胺 (49mg， 58％ )。 1

    [3775] H-NMR(400MHz， CDCl3)δ ＝ 2.12(3H， s)， 2.21(3H， s)， 3.27(4H， t)， 3.67(4H， t)， 4.30(2H， s)， 7.01(1H， t)， 7.19(3H， m)， 7.25(4H， m)， 7.39(2H， d)。

    [3776] HR MS(m/z， MH+) 测定值 402.2279

    [3777] 实施例 157 ： 4-(6- 苄基 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )- 哌嗪 -1- 甲酸苄基酰胺

    [3774] 于 25 ℃ 向 3- 苄 基 -4， 5- 二 甲 基 -6- 哌 嗪 -1- 基 - 哒 嗪 (60mg， 0.21mmol)) 在 CH2Cl2(5mL) 中的溶液中加入异氰酸苄基酯 (37mg， 0.28mmol)。于 25℃搅拌 2 小时后， 浓缩 反应混合物， 通过 HPLC 纯化 ( 含有 0.1 ％ TFA 的 CH3CN/H2O ： 22 ％～ 45 ％ )， 得到 4-(6- 苄 基 -4， 5- 二甲基 - 哒嗪 -3- 基 )- 哌嗪 -1- 甲酸苄基酰胺 (46mg， 60％ )。 1

    [3780] H-NMR(400MHz， CDCl3)δ ＝ 2.24(3H， s)， 2.34(3H， s)， 3.33(4H， t)， 3.58(4H， t)， 4.44(2H， s)， 4.49(2H， s)， 7.19(2H， d)， 7.26(2H， m)， 7.30(2H， m)， 7.32(4H， m)。

    [3781] HR MS(m/z， MH+) 测定值 416.2437

    [3782] 实施例 158 ： 3- 苄基 -6-(4- 苄基 - 哌嗪 -1- 基 )-4， 5- 二甲基 - 哒嗪

    [3779] 于 25 ℃ 向 3- 苄 基 -4， 5- 二 甲 基 -6- 哌 嗪 -1- 基 - 哒 嗪 (40mg， 0.14mmol)) 在 CH2Cl2(1.6mL) 和 THF(1.6mL) 中的溶液中加入苯甲醛 (23mg， 0.21mmol)、 乙酸 (2 滴 ) 和三 乙酰氧基硼氢化钠 (90mg， 0.43mmol)。于 25℃搅拌 2 小时后， 用 CH2Cl2(10mL) 稀释混合物， 用饱和碳酸氢钠 (2mL) 和水 (5mL) 洗涤。浓缩有机层， 通过 HPLC 纯化 ( 含有 0.1％ TFA 的 CH3CN/H2O ： 22 ％～ 45 ％ )， 得到 3- 苄基 -6-(4- 苄基 - 哌嗪 -1- 基 )-4， 5- 二甲基 - 哒嗪 (20mg， 37％ )。 1

    [3785] H-NMR(400MHz， MeOH-d4)δ ＝ 2.00(3H， s)， 2.11(3H， s)， 2.56(4H， t)， 3.12(4H， t)， 3.51(2H， s)， 4.16(2H， s)， 7.05(3H， m)， 7.15(3H， m)， 7.25(4H， m)。

    [3786] HR MS(m/z， MH+) 测定值 373.2378

    [3787] 5- 元芳基甲基 - 哒嗪类

    [3788] 流程 7 显示了制备式 Iq 至 Is 化合物的通用合成流程。取代的氯哒嗪 IIIa 可以 与乙腈在用强碱 ( 例如 LiHMDS) 处理下反应， 形成中间体 XIVa。水解腈官能团得到酸中间 体 XIVb， 随后与酰肼进行酰胺偶联， 得到中间体 XIVc。中间体 XIVa 可以与羟胺和 N， N- 二 甲基甲酰胺 - 二甲基缩醛反应生成实施例 Iq ； 或者通过与叠氮化钠反应、 然后进行烷基化 ( 例如溴化物或碘化物 ) 提供四唑实施例 Ir。中间体 XIVc 可以与例如三苯膦缩合， 生成实 施例 Is。

    [3784] 流程 7

    [3791] 中间体 XIV 的合成

    [3792] 4， 5- 二甲基 -6-[4-(5- 三氟甲基 - 吡啶 -2- 基 )- 哌嗪 -1- 基 ]- 哒嗪 -3- 基 - 乙 腈 ( 化合物 67)

    [3790] 合并 3- 氯 -4， 5- 二甲基 -6-[4-(5- 三氟甲基 - 吡啶 -2- 基 )- 哌嗪 -1- 基 ]- 哒 嗪 (1.0g， 2.64mmol)、 乙腈 (0.225mL， 4.22mmol) 和甲苯 (5mL)， 冷却至 0℃。历经 5 分钟滴 加 LiHMDS(8.4mL， 1.0M， 8.4mmol)。将反应物于 0℃搅拌 1 小时， 然后温至室温， 再搅拌 16 小时。通过添加饱和 NH4Cl 水溶液使反应物淬灭， 用 EtOAc 萃取有机相。用 MgSO4 干燥合并 的有机层， 浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化残余物 (0-100％ EtOAc 的庚烷溶液 )， 得到标题 化合物， 为橙色固体 (500mg， 50％ )。 1

    [3795] H NMR(400MHz， CDCl3)δ ＝ 8.36(s， 1H)， 7.60(dd， J ＝ 9.0Hz， 2.5Hz， 1H)， 6.65(d， J ＝ 9.0Hz， 1H)， 3.96(s， 2H)， 3.72-3.78(m， 4H)， 3.26-3.37(m， 4H)， 2.26(d， J ＝ 13.1Hz， 6H)。

    [3796] MS(m/z， MH+) 测定值 377.2

    [3794] {4， 5- 二甲基 -6-[4-(5- 三氟甲基 - 吡啶 -2- 基 )- 哌嗪 -1- 基 ]- 哒嗪 -3- 基 }- 乙 酸 ( 化合物 68)将 {4， 5- 二 甲 基 -6-[4-(5- 三 氟 甲 基 - 吡 啶 -2- 基 )- 哌 嗪 -1- 基 ]- 哒 嗪 -3- 基 }- 乙腈 (210mg， 0.56mmol) 和 6M HCl(1.0mL) 加入到密封试管内， 然后加热至 100℃达 16 小时。 用 CH2Cl2 萃取有机相。 用碳酸氢钠溶液将水部分中和至 pH ～ 7， 用 EtOAc 萃取。目标化合物保留在水层中。减压浓缩水层， 将残余物与 MeOH 一起研磨数次， 然后真 空干燥， 得到标题化合物 (280mg， 定量 )。

    [3800] 乙酸 N′ -(2-{4， 5- 二甲基 -6-[4-(5- 三氟甲基 - 吡啶 -2- 基 )- 哌嗪 -1- 基 ]- 哒 嗪 -3- 基 }- 乙酰基 )- 酰肼 ( 化合物 69)

    [3799] 在 N2 氛 围 中 将 乙 酸 酰 肼 (20.6mg， 0.28mmol) 加 入 到 圆 底 烧 瓶 中， 然后加 入 DMF(5mL)。 加 入 二 异 丙 基 乙 胺 (0.25mL)， 将 反 应 物 搅 拌 30 分 钟。 加 入 {4， 5- 二 甲 基 -6-[4-(5- 三 氟 甲 基 - 吡 啶 -2- 基 )- 哌 嗪 -1- 基 ]- 哒 嗪 -3- 基 }- 乙 酸 (110mg， 0.28mmol)，将 反 应 物 搅 拌 1 小 时。 加 入 HOBT(42mg， 0.311mmol) 和 HBTU(116.8mg， 0.31mmol)， 将反应物搅拌 16 小时。 通过硅胶快速色谱法纯化粗反应混合物 (0-30％甲醇的 二氯甲烷溶液 )， 得到标题化合物 (114mg， 90％ )。

    [3803] 实施例 159-162 的合成

    [3802] 实 施 例 159 ： 4， 5- 二 甲 基 -3-(5- 甲 基 -[1， 2， 4]二 唑 -3- 基 - 甲基 )-6-[4-(5- 三氟甲基 - 吡啶 -2- 基 )- 哌嗪 -1- 基 ]- 哒嗪

    [3805] 将 4， 5- 二甲基 -6-[4-(5- 三氟甲基 - 吡啶 -2- 基 )- 哌嗪 -1- 基 ]- 哒嗪 -3- 基 - 乙 腈 (120mg， 0.32mmol) 与羟胺 (63mg， 0.96mmol) 和 THF(2mL) 合并。将反应混合物加热至回 流达 3 小时。浓缩反应物， 再将残余物溶于二甲基乙酰胺二甲基缩醛 (500μL) 中。将溶液 回流加热 16 小时。 真空浓缩所得混合物。 通过硅胶快速色谱法纯化残余物 (MeOH/CH2Cl2)， 得到标题化合物 (62.3mg， 45％ )。 1

    [3807] H NMR(400MHz， DMSO-d6)δ ＝ 8.44(d， J ＝ 1.6Hz， 1H)， 7.83(dd， J ＝ 9.1Hz， 2.5Hz， 1H)， 7.03(d， J ＝ 9.1Hz， 1H)， 4.34(s， 2H)， 3.86-3.76(m， 4H)， 3.26-3.18(m， 4H)， 2.54(s， 3H)， 2.27(s， 3H)， 2.22(s， 3H)。

    [3806] HR MS(m/z， MH+) ： 测定值 434.1913 计算值 434.1916

    [3809] 实施例 160 和 161 ： 4， 5- 二甲基 -3-(1- 甲基 -1H- 四唑 -5- 基甲基 )-6-[4-(5- 三 氟甲基 - 吡啶 -2- 基 )- 哌嗪 -1- 基 ]- 哒嗪 & 4， 5- 二甲基 -3-(2- 甲基 -2H- 四唑 -5- 基 甲基 )-6-[4-(5- 三氟甲基 - 吡啶 -2- 基 )- 哌嗪 -1- 基 ]- 哒嗪

    [3810] 将 4， 5- 二甲基 -6-[4-(5- 三氟甲基 - 吡啶 -2- 基 )- 哌嗪 -1- 基 ]- 哒嗪 -3- 基 - 乙 腈 (120mg， 0.32mmol) 与氯化锌 (II)(43.5mg， 0.32mmol) 和叠氮化钠 (25mg， 0.38mmol) 在 H2O(5mL) 中合并。将混合物加热至回流达 4 小时， 然后冷却至室温。通过过滤分离游离的 四唑， 溶于 DMF(4.2mL) 中， 不进行进一步纯化。加入碳酸铯 (128.5mg， 0.395mmol)， 将反应 混合物冷却至 0℃。滴加碘甲烷 (16μL,0.263mmol)， 搅拌反应物， 历经 16 小时温至室温。 冷却回 0℃， 再加入碘甲烷 (24μL， 0.395mmol)。 将反应物历经 16 小时温至室温。 真空浓缩 反应物， 过滤出固体。用 MeOH 洗涤。将剩余固体溶于 H2O 和 TFA 中， 通过 HPLC 纯化 (CH3CN/ H2O)， 得到标题化合物， 为区域异构体的 57 ∶ 43 混合物 (22.2mg， 20％ )。 1

    [3812] H NMR( 化合物的混合物， 600MHz， DMSO-d6)δ ＝ 8.44(s， 1H)， 7.83(d， J ＝ 9.1Hz， 1H) ， 7.07-6.99(m ， 1H) ， 4.62(s ， 1.1H) ， 4.50(s ， 0.9H) ， 4.30(s ， 1.3H) ， 4.00(s ， 1.7H) ， 3.85-3.76(m， 4H)， 3.24-3.16(m， 4H)， 2.29(s， 1.7H)， 2.26(s， 3H)， 2.21(s， 1.3H)。

    [3813] HR MS(m/z， MH+) 测定值 434.2035， 计算值 434.2029

    [3811] 实施例 162 ： 4， 5- 二甲基 -3-(5- 甲基 -[1， 3， 4]二唑 -2- 基甲基 )-6-[4-(5- 三氟甲基 - 吡啶 -2- 基 )- 哌嗪 -1- 基 ]- 哒嗪

    [3815] 在 N2 氛围中将乙酸 N′ -(2-{4， 5- 二甲基 -6-[4-(5- 三氟甲基 - 吡啶 -2- 基 )- 哌 嗪 -1- 基 ]- 哒嗪 -3- 基 }- 乙酰基 )- 酰肼 (114mg， 0.248mmol) 加入圆底烧瓶中， 然后加入 乙腈 (3mL)、 二异丙基乙胺 (0.27mL， 1.43mmol) 和三苯膦 (115.5mg， 0.44mmol)， 将反应物搅 拌 30 分钟。然后加入六氯乙烷 (77.5mg， 0.329mmol)， 将反应物搅拌 16 小时。通过 HPLC 纯 化粗混合物 ( 氢氧化铵作为调节剂 )， 得到标题化合物 (8mg， 7％ )。

    [3817] HR MS(m/z， MH+) 测定值 434.1934， 计算值 434.1916

    [3818] 实施例 163 和 164 的合成

    [3819] 通过使 200mg 实施例 88 与重组人 Cyp3A4 一起孵育、 在分离和纯化后获得下文提 及的化合物， 从而制得实施例 163 和 164， 为白色固体。

    [3820] 实施例 163 ： 2-[(R)-4-(6- 苄基 -5- 羟基甲基 -4- 甲基 - 哒嗪 -3- 基 )-2- 甲基 -3， 4， 5， 6- 四氢 -2H-[1， 2′ ] 联吡嗪 -5′ - 基 ]- 丙烷 -2- 醇

    [3816] 收率 ： 6.5mg

    [3823] 实施例 164 ： 2-[(R)-4-(6- 苄基 -4- 羟基甲基 -5- 甲基 - 哒嗪 -3- 基 )-2- 甲基 -3， 4， 5， 6- 四氢 -2H-[1， 2′ ] 联吡嗪 -5′ - 基 ]- 丙烷 -2- 醇

    [3822] 收率 ： 8.2mg

    [3826] 本发明的化合物是美国临时申请 60/89499 中所示的化合物类别的种类。下文的 对比数据显示了将来自申请 60/89499 的最接近实施例、 例如化合物编号 92、 93、 93a、 b、 c与 本发明的实施例相比较在效力和溶解性方面的改善。

    [3827] 申请 60/89499

    [3825] 本发明的实施例生物学活性

    [3832] 在 TMHh12 细胞中采用报道基因试验 (RGA) 评价了化合物的活性。在增加浓度的 小分子激动剂的存在下测试了 Gli- 荧光素酶活性拮抗的 IC50， 所述小分子激动剂以 1nM 亲 和力与 Smo 结合并激活 Hh 通路 (Frank-Kamenetsky 等人， 2002， Journal of Biology 1， 10.1-10.19)。用于筛选当增加激动剂剂量时显示出对 Gli- 荧光素酶而言增加的 IC50 的那 些的激动剂化合物可直接与 Smo 相互作用 ( 通过竞争 Smo 上的相同结合位点， 或者通过由

    [3831] 激动剂所诱导的 Smo 的活性构象状态和由测试拮抗剂所诱导的非活性状态之间的竞争 )。 在验证试验中， Smo 的各种小分子拮抗剂显示出 “IC50 改变” (IC50shift) 行为。

    [3833] 表 10 列出了在不同浓度的 Smoothened 小分子激动剂 (1nM 和 25nM) 的存在下测 定的拮抗剂的 IC50(Frank-Kamenetsky 等人， 2002， Journal of Biology 1， 10.1-10.19)。

    [3834] 采用用于化合物竞争的放射性标记的 Smoothened 激动剂进行了 Smo 结合分析。 表 10 列出了在用于小鼠和人 Smoothened 受体的滤器结合模式中测定的 Smoothened 小分子激 动剂的置换的 IC50。

    [3835] 表 10

    [3836] 因此， 尽管已经描述了目前据信是本发明的优选实施方案， 但是本领域技术人员 将认识到可以在不背离本发明的宗旨的情况下对其进行改变和变通， 并且意欲要求保护所 有这些改变和变通作为在本发明的范围内。

    [3842] 105