新的雌激素受体配体 技术领域 本发明涉及为雌激素受体配体且选对雌激素受体 β 亚型 (isoform) 有优先选择 性的化合物， 涉及制备所述化合物的方法， 以及涉及使用所述化合物治疗与雌激素受体有 关疾病的方法， 所述疾病如抑郁症、 焦虑症、 阿尔茨海默病、 认知障碍、 骨质疏松症、 血液甘 油三酯水平升高、 动脉粥样硬化、 子宫内膜异位、 尿失禁、 自身免疫病、 肺癌、 结肠癌、 乳癌、 子宫癌和前列腺癌。
背景技术
雌激素受体 (ER) 是一种参与到基因表达上调和下调的配体活化哺乳动物转录 因子。雌激素受体的天然激素为 β-17- 雌二醇 (E2) 和密切相关的代谢产物。雌二醇结 合至雌激素受体会引起所述受体二聚化， 接着该二聚体结合至 DNA 上的雌激素响应元件 (ERE’ s)。所述 ER/DNA 复合物募集其他转录因子， 所述其他转录因子使 ERE 下游的 DNA 转 录成为 mRNA， 所述 mRNA 最终被翻译为蛋白质。或者， ER 与 DNA 的相互作用可间接通过其他 转录因子， 最明显的是通过 fos 和 jun。由于大量基因的表达受雌激素受体调节， 且由于雌 激素受体在多种细胞类型中表达， 因此通过结合天然激素或合成 ER 配体调节雌激素受体 可对生物体的生理学和病理生理学有重大影响。
过去相信仅有一种雌激素受体。 但发现了第二种亚型 (ER-β)。 尽管 “经典” ER-α 和最近发现的 ER-β 均广泛分布于不同组织中， 但它们却具有明显不同的细胞类型和组织 分布。因此， 具有 ER-α 或 ER-β 选择性的合成配体可保留雌激素的有益效果， 同时降低不 想要的副作用风险。
雌激素对女性的性发育很重要。 另外， 雌激素在保持骨密度、 调节血脂水平方面起 到重要作用， 并且似乎具有神经保护作用。 因此， 绝经后女性雌激素量的降低与多种疾病有 关， 所述疾病如骨质疏松症、 动脉粥样硬化、 抑郁症和认知障碍。 相反， 某些类型的增殖疾病 如乳癌和子宫癌以及子宫内膜异位受雌激素刺激， 因此抗雌激素剂 ( 即雌激素拮抗剂 ) 具 有预防和治疗这些类型的疾病的作用。
已证实了天然雌激素 17β- 雌二醇对治疗多种形式的抑郁症有效， 并提出雌激素 的抗抑郁活性可通过调节色氨酸羟化酶活性及随后的 5- 羟色胺合成而介导 ( 参见， 例如 Lu N Z， Shlaes T A， Cundlah C， Dziennis S E， Lyle R E， Bethea C L， “Ovarian steroid action on tryptophan hydroxylase protein and serotonin compared to localization of ovarian steroid receptors in midbrain of guinea pigs.” Endocrine 11 ： 257-267， 1999)。天然雌激素的多效性使其不能广泛和较长期使用， 因为这会增加对乳腺、 子宫和卵 巢的增殖作用的风险。对雌激素受体 ERβ 的鉴定提供了一种方法， 藉此来鉴定更有选择性 的雌激素试剂， 在不存在通过 ERα 介导的增殖作用的情况下， 所述雌激素试剂具有需要的 抗抑郁活性。因此， 表明具有 ERβ 选择性的治疗剂在治疗抑郁症中是可能特别有效的。
某些苯并呋喃化合物本身是从以下文献中已知的 ： European Journal of Organic Chemistry， 2005， (12)， 2481-2490 ； Australian Journal of Chemistry 1999， 52(8)，767-774 ； Bulletin de la Societe Chimique de France， 1974， (9， -10 pt.2)， 2225-2232 ； 和 Comptes Rendus des Seances de l’ Academie des Sciences， Serie C ： Sciences Chimiques， 1967， 265(5)， 320-323。 这些文献中均没有公开所述化合物具有任何生物活性。
已知某些苯并呋喃对雌激素受体具有生物活性， 参见 Anti-cancer Drug Design 1991， 6(5)， 417-426 ； DE 4117512 ； WO 03/051860 ； 和 WO2007/047204。
本领域中需要的是能够产生与雌激素替代疗法相同的正面响应、 而没有负面副作 用的化合物。还需要对身体的不同组织具有选择性作用的类雌激素化合物。
本发明使用的化合物为雌激素受体配体， 因而可以用于治疗或预防多种与雌激素 功能相关的疾病， 包括骨丢失、 骨折、 骨质疏松症、 软骨退变、 子宫内膜异位、 子宫纤维瘤病、 潮热、 LDL 胆固醇水平升高、 心血管病、 认知功能损害、 脑变性疾病、 再狭窄、 男子女性型乳 房、 血管平滑肌细胞增生、 肥胖症、 失禁、 焦虑、 抑郁、 自身免疫病、 肺癌、 结肠癌、 乳癌、 子宫 癌和前列腺癌。 发明内容 本发明人发现某些苯并呋喃化合物具有有价值的生物活性。这些化合物包括式 (I) 的化合物或其可药用的酯、 酰胺、 溶剂化物或盐 ； 包括这种酯或酰胺的盐， 以及这种酯、 酰胺或盐的溶剂化物 ：
其中 R1、 R2、 R4 和 R5 每个独立地选自氢、 ORA、 卤素、 氰基、 硝基、 C1-6 烷基、 C2-6 烯基、 C2-6 炔基、 卤代 C1-6 烷基、 二卤代 C1-6 烷基和三卤代 C1-6 烷基 ；
R3 选自 ORA ； -CHO ； -C(O)C1-4 烷基 ； -C(O) 苯基 ； -O-C(O)RA ； 和 N(RB)2， 其中每个 RB 独立地选自氢、 -C(O)C1-4 烷基、 -C(O) 苯基、 -SO2C1-4 烷基、 -SO2 苯基、 C1-6 烷基、 C2-6 烯基、 C2-6 炔基、 C3-8 环烷基、 C3-8 环烷基 -C1-6 烷基、 C6-10 芳基、 C6-10 芳基 -C1-6 烷基、 C5-10 杂环基和 C5-10 杂环基 -C1-6 烷基 ；
或 R3 和 R4 与它们连接的原子一起形成任选地包含 1 至 3 个选自 O、 N 和 S 的杂原 A 子的 5、 6 或 7 元环基团， 所述 5、 6 或 7 元环基团任选地被 1 或 2 个选自 OR 、 卤素、 氰基、 硝 基、 C1-6 烷基、 C2-6 烯基、 C2-6 炔基、 卤代 C1-6 烷基、 二卤代 C1-6 烷基和三卤代 C1-6 烷基的基团 取代 ；
R6 选自 C3-8 环烷基、 C3-8 环烷基 -C1-6 烷基、 C3-8 环烷基 -C1-6 烯基、 苯基、 联苯基、 苯基 -C( ＝ CH2)-、 和 C5-10 杂环基， 其中所述苯基、 联苯基、 苯基 -C( ＝ CH2)- 或 C5-10 杂环 基是未被取代的或在环上被 1 至 3 个取代基取代， 每个取代基选自 ORA ； 卤素 ； 氰基 ； 硝 基； -CHO ； -C(O)C1-6 烷基 ； 任选地被 1 至 3 个卤原子取代的 C1-6 烷基、 C1-6 烷氧基或 C1-6 烷氧
基烷基 ； 任选地被卤素或氰基取代的 C2-6 烯基 ； C2-6 炔基 ； SO2H ； SO2C1-6 烷基 ； SH ； 和 SC1-6 烷 基；
R8 为 ORA ；
R7、 R9 和 R10 每个独立地选自氢、 ORA、 卤素、 氰基、 硝基、 C1-6 烷基、 C2-6 烯基、 C2-6 炔 基、 C(O)H、 C(O)C1-6 烷基、 卤代 C1-6 烷基、 二卤代 C1-6 烷基、 三卤代 C1-6 烷基、 氰基 C1-6 烷基和 C1-4 烷氧基 C1-6 烷基 ； 并且 A
R 选自氢、 C1-6 烷基、 C2-6 烯基、 C2-6 炔基、 C3-8 环烷基、 C3-8 环烷基 -C1-6 烷基、 C6-10 芳 基和 C6-10 芳基 -C1-6 烷基。
发现以上定义的化合物为雌激素受体的配体。因此， 所述化合物可用于治疗或预 防与雌激素受体活性相关的疾病。
因此， 本发明提供了一种包含以上定义的化合物和可药用载体的医药组合物 ； 用 作药物的以上定义的化合物 ； 以上定义的化合物用于制备用于治疗或预防与雌激素受体活 性相关疾病或者障碍相关的病症的药物的用途 ； 以及一种治疗或预防与哺乳动物雌激素受 体活性相关的疾病或障碍的方法， 该方法包含对所述哺乳动物施用治疗有效量的以上定义 的化合物。绝大多数以上定义的化合物是新的， 因此， 本发明还提供了这些化合物本身， 所 2 3 8 9 述化合物为以上定义的那些化合物， 前提是 ： (i) 如果 R 、 R、 R 和 R 全部代表甲氧基， 且 R1、 R4、 R5、 R7 和 R10 全部代表氢原子， 那么 R6 代表不是苯基或 3， 4- 二甲氧基苯基的基团 ； (ii) 3 8 2 9 1 4 4 7 如果 R 和 R 均代表甲氧基， R 代表异丙氧基， R 代表羟基或异丙氧基， 且R、 R、 R、 R 和 R10 全部代表氢原子， 那么 R6 代表不是 3， 4， 5- 三甲氧基苯基的基团 ； 和 (iii) 如果 R3 和 R8 均 代表甲氧基， 且 R1、 R2、 R4、 R5、 R7、 R9 和 R10 全部代表氢原子， 那么 R6 代表不是苯基的基团。 具体实施方式
本发明使用的化合物可包含手性 ( 不对称 ) 中心， 或分子整体上可以是手性的。 各 立体异构体 ( 对映异构体和非对映异构体 ) 及其混合物在本发明的范围内。
本发明使用的化合物为雌激素受体配体。 本文使用的术语 “雌激素受体配体” 意欲 包括结合雌激素受体的任意部分。 所述配体可作为激动剂、 部分激动剂、 拮抗剂或部分拮抗 剂。所述配体可为 ERβ 选择性的， 或具有混合 ERα 和 ERβ 活性。例如， 所述配体既可作 为 ERβ 的激动剂或部分激动剂， 又可作为 ERα 的拮抗剂或部分拮抗剂。然而， 一般而言， 所述化合物同时具有改善的针对 β 受体的活性 ( 通常是激动剂活性， 绝大多数化合物都如 此 ) 和选择性。
优选地， RA 选自氢、 C1-4 烷基、 C3-6 环烷基、 C3-6 环烷基 -C1-4 烷基、 苯基和苄基。更优 A A 选地， R 选自氢、 C1-4 烷基和 C3-6 环烷基。最优选地， R 选自氢和 C1-4 烷基， 例如 RA 可为氢。
优选地， R1、 R2 和 R5 每个独立地选自氢、 ORA、 卤素、 氰基、 硝基、 C1-4 烷基、 卤代 C1-4 1 2 5 烷基、 二卤代 C1-4 烷基和三卤代 C1-4 烷基。更优选地， R、 R 和 R 每个独立地选自氢、 ORA、 卤 1 2 5 素、 氰基、 卤代甲基、 二卤代甲基和三卤代甲基。最优选地， R、 R 和 R 每个独立地选自氢、 1 2 羟基、 卤素 ( 例如氯或氟 )、 氰基、 甲基和三氟甲基。优选 R 、 R 和 R5 中至少 1 个、 例如至少 2 个、 例如全部 3 个代表氢。
在一个优选实施方案中， R3 选自 ORA 和 N(RB)2， 其中 RA 具有以上给出的一种优选含 义， 且每个 RB 独立地选自氢、 C1-4 烷基和 C3-6 环烷基， 尤其是氢和 C1-4 烷基。特别地， R3 代表羟基。在一个实施方案中， 当 R3 代表 -OC1-4 烷基时， 适宜地 R8 代表不是 -OC1-4 烷基的基团 ； 例如当 R3 代表 -OCH3 时， 适宜地 R8 代表不是 -OCH3 的基团。
在一个优选的实施方案中， R4 代表以上对 R1、 R2 和 R5 提及的一种优选基团。
在另一个优选实施方案中， R3 和 R4 与它们连接的原子一起形成任选地包含 1 至 3 个选自 O、 N 和 S( 优选 N) 的杂原子的 5、 6 或 7 元环基团， 所述 5、 6 或 7 元环基团任选地 A 被 1 或 2 个选自 OR 、 卤素、 氰基、 硝基、 C1-6 烷基、 C2-6 烯基、 C2-6 炔基、 卤代 C1-6 烷基、 二卤 3 4 代 C1-6 烷基和三卤代 C1-6 烷基的基团取代。优选 R 和 R 一起代表 -NH-CH ＝ N-、 -NH-N ＝ CH- 或 -CH-CH-NH- 基团， 在此情况下， 所述杂环与其稠合的苯环一起为苯并咪唑基团、 吲哚 3 4 3 基团或特别是吲唑基团。在包含 R 和 R 的杂环中， 与 R 位的苯环相邻的原子优选为杂原 3 4 子， 特别是氮。包含 R 和 R 的杂环优选为未被取代的。
R6 优选选自 C3-6 环烷基、 C3-6 环烷基 -C1-2 烷基、 C3-6 环烷基 -C1-2 烯基、 苯基、 联苯 基、 苯基 -C( ＝ CH2)- 和 C5-7 杂环基， 其中所述苯基、 联苯基、 苯基 -C( ＝ CH2)- 或 C5-10 杂环 基是未被取代的， 或在环上被 1 个或 2 个取代基取代， 每个取代基选自 ORA ； 卤素 ( 例如氯或 氟)； 氰基 ； 和任选地被 1 至 3 个卤原子取代的 C1-4 烷基或 C1-4 烷氧基。最优选地， R6 为芳 基， 例如任选地被上述基团取代的苯基或芳香族 C5 杂环基团。优选的 C5 杂环基团包括噻吩 基、 噻唑基、 呋喃基、 吡唑基、 吡咯基、 噁唑基和咪唑基， 特别是呋喃基、 噻吩基和吡唑基。例 6 如， R 可代表任选地被一个上述取代基取代的苯基或 C5 杂环基团。 R7、 R9 和 R10 优选每个独立地选自氢、 ORA、 卤素、 氰基、 C1-4 烷基、 卤代 C1-4 烷基、 二卤 7 9 10 A 代 C1-4 烷基和三卤代 C1-4 烷基。更优选地， R、 R 和 R 每个独立地选自氢、 OR 、 卤素、 氰基、 7 9 10 卤代甲基、 二卤代甲基和三卤代甲基。最优选地， R、 R 和 R 每个独立地选自氢、 羟基、 卤素 7 9 10 ( 例如氯或氟 )、 氰基、 甲基和三氟甲基。优选 R 、 R 和 R 中至少 1 个、 例如至少 2 个、 例如 全部 3 个代表氢。
因此， 在一组优选的化合物中 ： A
R 代表 C1-4 烷基或特别是氢 ；
R1、 R2 和 R5 每个独立地选自氢、 ORA、 卤素 ( 例如氯或氟 )、 氰基、 卤代甲基、 二卤代 1 2 5 甲基和三卤代甲基 ； 优选 R 、 R 和 R 中至少 1 个、 例如至少 2 个、 例如全部 3 个代表氢 ； 3 B B
R 代表 N(R )2， 其中每个 R 独立地代表氢和 C1-4 烷基， 或优选为 ORA ；
R4 代表以上对 R1、 R2 和 R5 提及的一种优选基团 ； 或 3 4
R 和 R 一起代表 -NH-CH ＝ N-、 -CH ＝ CH-NH- 或特别是 -NH-N ＝ CH- 基团 ； 6
R 代表芳香族基团， 例如苯基或 C5 杂环基团， 其可以是未被取代的， 或者可以在环 A 上被 1 个或 2 个取代基取代， 每个取代基选自 OR ； 卤素 ( 例如氯或氟 ) ； 氰基 ； 和任选地被 1 至 3 个卤原子取代的 C1-4 烷基或 C1-4 烷氧基 ；
R7、 R9 和 R10 每个独立地代表氢、 ORA、 卤素 ( 例如氯或氟 )、 氰基、 卤代甲基、 二卤代 7 9 10 甲基和三卤代甲基， 特别是氢、 羟基、 卤素、 氰基、 甲基和三氟甲基， 优选 R 、 R 和 R 中至少 1 个、 例如至少 2 个、 例如全部 3 个为氢。
式 I 的化合物包括但不限于以下化合物 ：
2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 -3- 苯基 - 苯并呋喃 -5- 醇 ；
5- 羟基 -2-(4- 羟基 - 苯基 )-3- 苯基 - 苯并呋喃 -7- 腈 ；
2-(2- 氟 -4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 -3- 苯基 - 苯并呋喃 -5- 醇 ；
7- 二溴甲基 -2-(4- 羟基 - 苯基 )-3- 苯基 - 苯并呋喃 -5- 醇 ； [5- 羟基 -2-(4- 羟基 - 苯基 )-3- 苯基 - 苯并呋喃 -7- 基 ]- 乙腈 ； 2-(4- 羟基 - 苯基 )-7-(1- 甲氧基 - 乙基 )-3- 苯基 - 苯并呋喃 -5- 醇 ； 7- 二氟甲基 -2-(4- 羟基 - 苯基 )-3- 苯基 - 苯并呋喃 -5- 醇 ； 2-(4- 羟基 - 苯基 )-3- 苯基 -7- 乙烯基 - 苯并呋喃 -5- 醇 ； 2-(4- 羟基 - 苯基 )-3- 噻吩 -3- 基 -7- 三氟甲基 - 苯并呋喃 -5- 醇 ； 7- 氟 -2-(1H- 吲唑 -5- 基 )-3- 噻吩 -3- 基 - 苯并呋喃 -5- 醇 ； 2-[7- 氯 -5- 羟基 -2-(4- 羟基 - 苯基 )- 苯并呋喃 -3- 基 ]- 呋喃 -3- 腈 ； 2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 -3- 噻吩 -3- 基 - 苯并呋喃 -5- 醇 ； 3-(2， 5- 二氟 - 苯基 )-2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 - 苯并呋喃 -5- 醇 ； 3-[5- 羟基 -2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 - 苯并呋喃 -3- 基 ]- 苄腈 ； 2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 -3- 间甲苯基 - 苯并呋喃 -5- 醇 ； 2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 -3- 噻吩 -2- 基 - 苯并呋喃 -5- 醇 ； 2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 -3- 吡啶 -3- 基 - 苯并呋喃 -5- 醇 ； 2-[5- 羟基 -2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 - 苯并呋喃 -3- 基 ]- 苄腈 ；2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 -3-(3- 硝基 - 苯基 )- 苯并呋喃 -5- 醇 ；
5-[5- 羟基 -2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 - 苯并呋喃 -3- 基 ]- 噻吩 -2- 醛 ；
3-(3， 5- 二氟 - 苯基 )-2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 - 苯并呋喃 -5- 醇 ；
3-(3， 5- 二氯 - 苯基 )-2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 - 苯并呋喃 -5- 醇 ；
2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 -3-(2- 苯氧基 - 苯基 )- 苯并呋喃 -5- 醇 ；
3- 联苯 -2- 基 -2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 - 苯并呋喃 -5- 醇 ；
3-(2- 羟基 - 苯基 )-2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 - 苯并呋喃 -5- 醇 ；
1-{3-[5- 羟基 -2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 - 苯并呋喃 -3- 基 ]- 苯基 }- 乙酮 ；
2-(4- 羟基 - 苯基 )-3-(3- 甲磺酰基 - 苯基 )-7- 甲基 - 苯并呋喃 -5- 醇 ；
3-(3- 乙 基 硫 烷 基 (sulfanyl)- 苯 基 )-2-(4- 羟 基 - 苯 基 )-7- 甲 基 - 苯 并 呋 喃 -5- 醇 ；
2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 -3- 喹啉 -5- 基 - 苯并呋喃 -5- 醇 ；
1-{5-[5- 羟基 -2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 - 苯并呋喃 -3- 基 ]- 噻吩 -2- 基 }- 乙 酮；
2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 -2’ ， 3’ - 二氢 -[3， 5’ ] 二苯并呋喃基 -5- 醇 ；
2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 -3-(3- 三氟甲氧基 - 苯基 )- 苯并呋喃 -5- 醇 ；
3-(2- 氟 - 吡啶 -3- 基 )-2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 - 苯并呋喃 -5- 醇 ；
3- 苯并 [b] 噻吩 -2- 基 -2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 - 苯并呋喃 -5- 醇 ；
2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 -3-(1- 甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 )- 苯并呋喃 -5- 醇 ；
2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 -3-(1- 苯基 - 乙烯基 )- 苯并呋喃 -5- 醇 ；
2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 -3- 吡啶 -4- 基 - 苯并呋喃 -5- 醇 ；
2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 -3-(1- 甲基 -1H- 吡咯 -2- 基 )- 苯并呋喃 -5- 醇 ；
3-(3， 5- 二甲基 - 异噁唑 -4- 基 )-2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 - 苯并呋喃 -5- 醇 ；
3-(5- 氟 -2- 甲基 - 苯基 )-2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 - 苯并呋喃 -5- 醇 ；3-[1-(4- 氟 - 苯基 )- 乙烯基 ]-2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 - 苯并呋喃 -5- 醇 ； 3- 环丙基 -2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 - 苯并呋喃 -5- 醇 ； 3-(5- 氟 -2- 甲氧基 - 苯基 )-2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 - 苯并呋喃 -5- 醇 ； 2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 -3-(1H- 吡咯 -2- 基 )- 苯并呋喃 -5- 醇 ； 3- 呋喃 -2- 基 -2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 - 苯并呋喃 -5- 醇 ； 2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 -3- 噻唑 -5- 基 - 苯并呋喃 -5- 醇 ； 2-(4- 羟基 - 苯基 )-3-(2- 甲氧基 - 噻唑 -4- 基 )-7- 甲基 - 苯并呋喃 -5- 醇 ； 2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 -3- 噻唑 -2- 基 - 苯并呋喃 -5- 醇 ； 2-(4- 羟基 - 苯基 )-3-(2- 异丙基 - 苯基 )-7- 甲基 - 苯并呋喃 -5- 醇 ； 3-(2- 乙基 - 苯基 )-2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 - 苯并呋喃 -5- 醇 ； (E)-3-{2-[5- 羟基 -2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 - 苯并呋喃 -3- 基 ]- 苯基 }- 丙 3-(2- 丁氧基 - 苯基 )-2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 - 苯并呋喃 -5- 醇 ； 2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 -3-(2- 三氟甲氧基 - 苯基 )- 苯并呋喃 -5- 醇 ； 4-[5- 羟基 -2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 - 苯并呋喃 -3- 基 ]- 噻吩 -2- 醛 ； 3-((E)-2- 环丙基 - 乙烯基 )-2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 - 苯并呋喃 -5- 醇 ； 2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 -3-(3- 甲基 - 噻吩 -2- 基 )- 苯并呋喃 -5- 醇 ； 2-[5- 羟基 -2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 - 苯并呋喃 -3- 基 ]- 噻吩 -3- 醛 ； 2-[5- 羟基 -2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 - 苯并呋喃 -3- 基 ]- 噻吩 -3- 腈 ； 7- 溴甲基 -2-(4- 羟基 - 苯基 )-3- 苯基 - 苯并呋喃 -5- 醇 ； 5- 羟基 -2-(4- 羟基 - 苯基 )-3- 噻吩 -3- 基 - 苯并呋喃 -7- 腈 ； 5- 羟基 -2-(4- 羟基 - 苯基 )-3- 苯基 - 苯并呋喃 -7- 醛 ； 7- 氯 -2-(4- 羟基 - 苯基 )-3- 苯基 - 苯并呋喃 -5- 醇 ； 7- 氯 -2-(4- 羟基 - 苯基 )-3- 噻吩 -3- 基 - 苯并呋喃 -5- 醇 ； 5- 羟基 -2-(4- 羟基 - 苯基 )-3- 噻吩 -3- 基 - 苯并呋喃 -7- 醛 ； 2-(4- 羟基 - 苯基 )-3- 噻吩 -3- 基 -7- 乙烯基 - 苯并呋喃 -5- 醇 ； 2-[7- 氯 -5- 羟基 -2-(4- 羟基 - 苯基 )- 苯并呋喃 -3- 基 ]- 噻吩 -3- 腈 ； 3-(3- 氰基 - 呋喃 -2- 基 )-5- 羟基 -2-(4- 羟基 - 苯基 )- 苯并呋喃 -7- 腈 ； 2-[5- 羟基 -2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 三氟甲基 - 苯并呋喃 -3- 基 ]- 呋喃 -3- 腈 ； 2-[2-(3- 氟 -4- 羟基 - 苯基 )-5- 羟基 -7- 甲基 - 苯并呋喃 -3- 基 ]- 呋喃 -3- 腈 ； 2-(4- 羟基 - 苯基 )-6- 甲基 -3- 苯基 - 苯并呋喃 -5- 醇 ； 2-(2， 5- 二氟 -4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 -3- 苯基 - 苯并呋喃 -5- 醇 ； 2-(2， 6- 二氟 -4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 -3- 苯基 - 苯并呋喃 -5- 醇 ； 2-(3- 氟 -4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 -3- 苯基 - 苯并呋喃 -5- 醇 ； 2-(1H- 吲唑 -5- 基 )-7- 甲基 -3- 苯基 - 苯并呋喃 -5- 醇 ； 2-(3， 5- 二氟 -4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 -3- 苯基 - 苯并呋喃 -5- 醇 ； 2-(3- 氯 -5- 氟 -4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 -3- 苯基 - 苯并呋喃 -5- 醇 ； 5-(5- 甲氧基 -7- 甲基 -3- 苯基 - 苯并呋喃 -2- 基 )-1H- 吲唑 ； 2-(3- 氟 -4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 -3- 噻吩 -3- 基 - 苯并呋喃 -5- 醇 ；13烯腈 ；
101998852 A CN 101998858
说明书7/36 页2-(2- 氟 -4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 -3- 噻吩 -3- 基 - 苯并呋喃 -5- 醇 ；
2-(2， 6- 二氟 -4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 -3- 噻吩 -3- 基 - 苯并呋喃 -5- 醇 ；
2-(3- 氯 -5- 氟 -4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 -3- 噻吩 -3- 基 - 苯并呋喃 -5- 醇 ；
2-[2-(3- 氯 -5- 氟 -4- 羟基 - 苯基 )-5- 羟基 -7- 甲基 - 苯并呋喃 -3- 基 ]- 呋 喃 -3- 腈 ； 和
2-[7- 氟 -5- 羟基 -2-(1H- 吲唑 -5- 基 )- 苯并呋喃 -3- 基 ]- 呋喃 -3- 腈。
以上给出的化合物名称根据 IUPAC 通过 ACD Labs 8.0/ 命名程序、 8.05 版， 和/或 ISIS DRAW Autonom 2000 产生。
根据式 I 的化合物中存在的取代基， 所述化合物可形成酯、 酰胺和 / 或盐。适用于 药物的式 (I) 的化合物的盐和溶剂化物为其中反离子或相关溶剂是可药用的那些。但含有 不可药用反离子或相关溶剂的盐和溶剂化物也在本发明范围内， 例如用作制备式 (I) 的化 合物及其可药用盐、 溶剂化物和生理学功能衍生物的中间体。术语 “生理学功能衍生物” 是 指与游离的式 (I) 化合物具有相同生理学功能的式 (I) 的化合物的化学衍生物， 例如可通 过在体内转化成为式 (I) 化合物。生理学功能衍生物的实例有酯和酰胺。
合适的盐包括通过式 I 的化合物中的碱性基团与有机酸或无机酸反应形成的盐。 具体地， 合适的盐包括与以下酸形成的盐 ： 无机酸 ； 强有机羧酸， 如未被取代的或例如被卤 素取代的具有 1 至 4 个碳原子的链烷羧酸， 如饱和或不饱和二元羧酸， 如羟基羧酸， 如氨基 酸； 或有机磺酸， 如未被取代的或例如被卤素取代的 (C1-C4)- 烷基 - 磺酸或芳基 - 磺酸。可 药用酸加成盐包括由以下酸形成的盐 ： 盐酸、 氢溴酸、 硫酸、 硝酸、 柠檬酸、 酒石酸、 乙酸、 磷 酸、 乳酸、 丙酮酸、 乙酸、 三氟乙酸、 琥珀酸、 高氯酸、 富马酸、 马来酸、 乙醇酸、 乳酸、 水杨酸、 草酰乙酸、 甲磺酸、 乙磺酸、 对甲苯磺酸、 甲酸、 苯甲酸、 丙二酸、 萘 -2- 磺酸、 苯磺酸、 羟乙磺 酸、 抗坏血酸、 苹果酸、 邻苯二甲酸、 天冬氨酸、 谷氨酸、 赖氨酸和精氨酸。其他酸如草酸 ( 它 们本身不是可药用 ) 可用作获得所述化合物及其可药用酸加成盐的中间体。
式 (I) 的化合物的可药用酯和酰胺可具有合适的基团， 例如 OH 基团或 NR3 基团， 所述基团通过与合适的酸反应转化而来。
有机化学领域的技术人员将认识到很多有机化合物可同与它们进行反应、 它们从 中沉淀或结晶的溶剂形成络合物。这些络合物被称为 “溶剂化物” 。例如与水的络合物被称 为 “水合物” 。
当施用于接受者时， 能被转化为上述式 (I) 的化合物、 或其活性代谢物或残基的 化合物被称为 “药物前体” 。例如， 药物前体可在体内 ( 例如通过在血液中水解 ) 被转化为 其具有医药效果的活性形式。可药用药物前体描述于 T.Higuchi 和 V.Stella， Prodrugs as Novel Delivery Systems， A.C.S.Symposium Series(1976) 第 14 卷 ； “Design of Prodrugs” ed.H.Bundgaard， Elsevier， 1985 ； 和 Edward B.Roche， ed.， Bioreversible Carriers in Drug Design， American Pharmaceutical Association and Pergamon Press， 1987 中， 所述文献通过引用纳入本文。
除非在具体情况下限制， 否则以下定义适用于本说明书全文中使用的术语。
本文使用的术语 “烷基” 的含义为直链和支链饱和烃基。烷基的实例包括甲基、 乙 基、 正丙基、 异丙基、 正丁基、 叔丁基、 异丁基、 仲丁基、 戊基和己基。在非支链烷基中， 优选 甲基、 乙基、 正丙基、 异丙基、 正丁基。在支链烷基中， 可提及叔丁基、 异丁基、 1- 乙基丙基和1- 乙基丁基。
本文使用的术语 “烷氧基” 的含义是 O- 烷基， 其中 “烷基” 如上所述。烷氧基的实 例包括甲氧基和乙氧基。其他实例包括丙氧基和丁氧基。
本文使用的术语 “烯基” 的含义是具有至少一个碳碳双键的直链和支链不饱和烃 基。烯基的实例包括乙烯基、 丙烯基、 丁烯基、 戊烯基和己烯基。优选的烯基包括乙烯基、 1- 丙烯基和 2- 丙烯基。
本文使用的术语 “炔基” 的含义是具有至少一个碳碳三键的直链和支链不饱和烃 基。炔基的实例包括乙炔基、 丙炔基、 丁炔基、 戊炔基和己炔基。优选的炔基包括乙炔基、 1- 丙炔基和 2- 丙炔基。
本文使用的术语 “环烷基” 的含义是环体系形式的饱和基团。环烷基可以是单环 的或双环的。例如， 双环基团可以是稠合的或桥连的。单环环烷基的实例包括环丙基、 环丁 基和环戊基。单环环烷基的其他实例有环己基、 环庚基和环辛基。双环环烷基的实例包括 双环 [2.2.1] 庚 -2- 基。优选环烷基是单环的。
本文使用的术语 “芳基” 的含义是单环或双环芳香族碳环基团。芳基的实例包括 苯基和萘基。萘基可以通过 1 位或 2 位连接。在双环芳香基团中， 一个环可为例如部分饱 和的。这种基团的实例包括茚满基和四氢化萘基。具体地， 术语 C5-10 芳基在本文中用以指 单环或双环芳香基团中包含 5 至 10 个碳原子的基团。一个尤其优选的 C5-10 芳基为苯基。
本文使用的术语 “卤素” 的含义是氟、 氯、 溴或碘。特别优选氟、 氯和溴。
本文使用的术语 “卤代烷基” 的含义是具有卤素取代基的烷基， 术语 “烷基” 和 “卤 素” 应理解为具有以上指出的含义。类似地， 术语 “二卤代烷基” 的含义是具有两个卤素取 代基的烷基， 术语 “三卤代烷基” 的含义是具有三个卤素取代基的烷基。卤代烷基的实例包 括氟甲基、 氯甲基、 溴甲基、 氟甲基、 氟丙基和氟丁基 ； 二卤代烷基的实例包括二氟甲基和二 氟乙基 ； 三卤代烷基的实例包括三氟甲基和三氟乙基。
本文使用的术语 “杂环基” 的含义是芳香族或非芳香族碳原子环状基团， 其中 1 至 3 个碳原子被一个或多个独立地选自氮、 氧或硫的杂原子替代。 例如。 杂环基可以是单环的 或双环的。在双环杂环基中， 可在每个环中或仅在一个环中存在一个或多个杂原子。杂原 子优选为 O 或 N。含有合适的氮原子的杂环基包括相应的 N- 氧化物。单环杂环烷基环的实 例包括吖丙啶基、 氮杂环丁烷基、 吡咯烷基、 咪唑烷基、 吡唑烷基、 哌啶基、 哌嗪基、 四氢呋喃 基、 四氢吡喃基、 吗啉基、 硫代吗啉基和氮杂环庚烷基 (azephanyl)。
其中一个环为非芳香环的双环杂环的实例包括二氢苯并呋喃基、 茚满基、 二氢吲 哚基、 异二氢吲哚基、 四氢异喹啉基、 四氢喹啉基和苯并氮杂环庚烷基。
单环杂芳基的实例包括呋喃基、 噻吩基、 吡咯基、 噁唑基、 噻唑基、 咪唑基、 噁二唑 基、 噻二唑基、 吡啶基、 三唑基、 三嗪基、 哒嗪基、 嘧啶基、 异噻唑基、 异噁唑基、 吡嗪基、 吡唑 基和嘧啶基 ； 双环杂芳基的实例包括喹喔啉基、 喹唑啉基、 吡啶并吡嗪基、 苯并噁唑基、 苯 并噻吩基、 苯并咪唑基、 二氮杂萘基、 喹啉基、 苯并呋喃基、 吲哚基、 苯并噻唑基、 噁唑基 [4， 5-b] 吡啶基、 吡啶并嘧啶基、 异喹啉基和 benzodroxazole。
优选的杂环基的实例包括哌啶基、 四氢呋喃基、 四氢吡喃基、 吡啶基、 嘧啶基和吲 哚基。优选的杂环基还包括噻吩基、 噻唑基、 呋喃基、 吡唑基、 吡咯基和咪唑基。
本文使用的术语 “环烷基烷基” 的含义是通过烷基连接的环烷基 - 烷基， “环烷基”和 “烷基” 应理解为具有以上给出的含义。
如上所述， 本文定义的化合物具有作为雌激素受体配体的活性。所述化合物具有 作为雌激素受体调节剂的活性， 且可以为雌激素受体的激动剂、 部分激动剂、 拮抗剂或部分 拮抗剂。
因此， 所述化合物可用于治疗与雌激素受体活性相关的疾病或障碍。 具体地， 为雌 激素受体的激动剂或部分激动剂的所述化合物 ( 其包括绝大多数本发明的化合物 ) 可用于 治疗显示出雌激素受体的选择性激动剂或部分激动剂的疾病或障碍。 为雌激素受体的拮抗 剂或部分拮抗剂的化合物可用于治疗显示出雌激素受体的选择性拮抗剂或部分拮抗剂的 疾病或障碍。
显示出激动剂或部分激动剂的临床病症包括， 但不限于， 骨丢失、 骨折、 骨质疏松 症、 软骨退变、 子宫内膜异位、 子宫纤维瘤病、 潮热、 LDL 胆固醇水平升高、 心血管病、 认知功 能损害、 脑变性疾病、 再狭窄、 男子女性型乳房、 血管平滑肌细胞增生、 肥胖症、 失禁、 焦虑、 抑郁、 自身免疫病、 炎症、 IBD、 IBS、 性功能障碍、 高血压、 视网膜变性、 肺癌、 结肠癌、 乳癌、 子 宫癌和前列腺癌， 和 / 或与雌激素功能有关的障碍。
所述化合物特别适用于治疗或预防以下疾病 ： 骨丢失、 骨折、 骨质疏松症、 软骨退 变、 子宫内膜异位、 子宫纤维瘤病、 潮热、 LDL 胆固醇水平升高、 心血管病、 认知功能损害、 脑 变性疾病、 再狭窄、 男子女性型乳房、 血管平滑肌细胞增生、 肥胖症、 失禁、 焦虑、 抑郁、 自身 免疫病、 炎症、 IBD、 IBS、 性功能障碍、 高血压、 视网膜变性、 肺癌、 结肠癌、 乳癌、 子宫癌和前 列腺癌， 和 / 或与雌激素功能有关的障碍。 当然， 取得疗效需要的活性成分的量将随以下条件变化 ： 具体化合物、 给药途径、 治疗对象 ( 包括类型、 种类、 年龄、 重量、 性别、 对象的医疗病症和对象的肾功能和肝功能 )、 和待治疗的具体障碍或疾病及其严重性。有普通经验的内科医生、 兽医或临床医生可容易 地确定预防、 抵抗或抑制病症进展需要的药物的有效量， 并开出处方。
当用于所述的作用时， 对于成年人， 本发明的口服剂量在约 0.01mg/ 千克体重 / 天 (mg/kg/day) 至约 100mg/kg/day、 优选 0.01mg/ 千克体重 / 天 (mg/kg/day) 至约 10mg/kg/ day、 最优选 0.1 至 5.0mg/kg/day 的范围内。对于口服给药， 组合物优选以片剂形式或其 他表现形式， 以包含 0.01、 0.05、 0.1、 0.5、 1.0、 2.5、 5.0、 10.0、 15.0、 25.0、 50.0、 100 和 500 毫克用于调节症状的活性成分的剂量的离散单元提供给待治疗的患者。药物通常包含约 0.01mg 至约 500mg 的活性成分， 优选约 1mg 至约 100mg 的活性成分。以静脉内方式， 在恒速 输注过程中， 最优选的剂量在约 0.1 至约 10mg/kg/ 分钟范围内。有利地， 本发明的化合物 可以以每天单次剂量给药， 或总日剂量可以以每天两次、 三次或四次分剂量给药。另外， 优 选的本发明化合物可以以鼻内方式， 通过局部使用合适的鼻内工具给药 ； 或通过经皮途径， 使用本领域普通技术人员熟知形式的经皮皮肤贴片给药。当然， 为以经皮给药系统形式给 药， 在给药方案中给药应连续而不间断。
尽管所述活性成分可以单独给药， 但其优选存在于药物制剂或组合物中。 因此， 本 发明提供了一种包含以下成分的药物制剂 ： 通式 I 的化合物或其可药用酯、 酰胺、 溶剂化物 或盐， 包括这种酯或酰胺的盐、 和这种酯、 酰胺或盐的溶剂化物 ； 以及可药用稀释剂、 赋形剂 或载体 ( 本文总称为 “载体” 材料 )。本发明的药物组合物可以为下述药物制剂形式。
本发明的药物组合物包括适于以以下方式给药的那些 ： 口服、 肠胃外 ( 包括皮下、
皮内、 肌内、 静脉内 [ 推注或输注 ] 和关节内 )、 吸入 ( 包括可使用多种计量剂量压力喷雾器 产生的细颗粒粉剂或雾剂 )、 喷雾或吹入、 直肠、 腹膜内和局部 ( 包括皮肤、 含服、 舌下和眼 内 ) 给药， 但最合适的途径可以取决于例如接受者的病症和障碍。
制剂可方便地以单位剂量形式存在， 并可通过医药领域中熟知的任意方法制备。 所有方法包括使活性成分与构成一种或多种辅助成分的载体结合的步骤。一般而言， 通过 使活性成分与液体载体或细分固体载体或二者均匀且紧密结合， 然后如果需要， 将产物塑 形为需要的制剂来制备制剂。
适于口服给药的本发明制剂可以以以下形式存在 ： 离散单元， 如胶囊剂、 扁囊剂、 丸剂或片剂， 每种包含预定量的活性成分 ； 粉末剂或颗粒剂 ； 水性液体或非水性液体中的 溶液剂或悬液剂， 例如酏剂、 酊剂、 悬浮剂或糖浆 ； 或水包油液体乳液剂或油包水液体乳液 剂。活性成分还可以以大丸剂、 舐剂或膏剂存在。
片剂可任选地与一种或多种辅助成分通过挤压或模制制备。挤压片剂可如下制 备： 在合适的机器中， 将自由流动形式 ( 如粉末或颗粒 ) 的活性成分——任选地与粘合剂、 润滑剂、 惰性稀释剂、 润滑剂、 表面活性剂或分散剂混合——挤压。模制片剂可通过在合适 的机器中将用惰性液体稀释剂润湿的粉末化合物的混合物模制而制备。 片剂可任选地被覆 以包衣或施加刻痕并可制成制剂， 以缓慢释放或控制释放其中的活性成分。 例如， 本发明的 化合物可以以适于立即释放或延长释放的形式给药。 立即释放或延长释放可通过使用合适 的包含本发明化合物的药物组合物实现， 或者， 尤其是在延长释放情况下， 通过使用诸如皮 下植入物或渗透泵的设备实现。本发明的化合物还可以以脂质体形式给药。
示例性口服给药用组合物包括 ： 悬浮剂， 其可包含例如用于产生大块的微晶纤维 素、 藻酸或藻酸钠作为助悬剂、 甲基纤维素作为增粘剂、 和例如本领域已知的增甜剂或增香 剂； 和立即释放片剂， 其可包含例如微晶纤维素、 磷酸二钙、 淀粉、 硬脂酸镁、 硫酸钙、 山梨糖 醇、 葡萄糖和 / 或乳糖和 / 或例如本领域已知的其他赋形剂、 粘合剂、 增容剂、 崩解剂、 稀释 剂和润滑剂。合适的粘合剂包括淀粉、 凝胶、 天然糖类如葡萄糖或 β- 乳糖、 玉米增甜剂、 天 然和合成树胶如阿拉伯树胶、 黄蓍胶或藻酸钠、 羧甲基纤维素、 聚乙二醇、 蜡等。崩解剂非 限制性地包括淀粉、 甲基纤维素、 琼脂、 膨润土、 黄原胶等。式 (I) 的化合物还可以以舌下 和 / 或含服给药方式通过口腔给药。模制片剂、 挤压片剂或冻干片剂是可使用的示例性形 式。示例性组合物包括本发明的化合物与速溶稀释剂 ( 如甘露醇、 乳糖、 蔗糖和 / 或环糊 精 ) 制成的制剂。所述制剂还可包含高分子量赋形剂如纤维素 ( 微晶纤维素 ) 或聚乙二醇 (PEG)。所述制剂还可包含辅助粘膜粘附的赋形剂如羟丙基纤维素 (HPC)、 羟丙基甲基纤维 素 (HPMC)、 羧甲基纤维素钠 (SCMC)、 马来酸酐共聚物 ( 例如 Gantrez)， 和控制释放的试剂 如聚丙烯酸共聚物 ( 例如 Carbopol 934)。为易于制备和使用， 还可添加润滑剂、 助流剂、 香料、 着色剂和稳定剂。 所述剂型中使用的润滑剂包括油酸钠、 硬脂酸钠、 硬脂酸镁、 苯甲酸 钠、 乙酸钠、 氯化钠等。 为以液体形式口服给药， 口服药物组分可与任意口服、 无毒且可药用 的惰性载体 ( 如乙醇、 甘油、 水等 ) 结合。
所述化合物还可以以脂质体送递系统形式给药， 所述脂质体送递系统如小型单层 囊泡、 大型单层囊泡和多层囊泡。脂质体可由多种磷脂、 1， 2- 二棕榈酰磷脂酰胆碱、 磷脂酰 乙醇胺 ( 脑磷脂 ) 或磷脂酰胆碱 ( 卵磷脂 ) 形成。
肠胃外给药用制剂包括 ： 水性和非水性无菌注射溶液， 其可包含抗氧化剂、 缓冲剂、 抑菌剂和使制剂与目标接受者血液等压的溶质 ； 和水性和非水性无菌悬液， 其可包含助 悬剂和增稠剂。 所述制剂可存在于单位剂量容器或多倍剂量容器中， 例如密封安瓿和小瓶， 并可储存于冻干条件下， 仅需要在即将使用时加入无菌液体载体例如盐水或注射用水。即 用 (Extemporaneous) 注射溶液和悬液可由前述各种无菌粉末剂、 颗粒剂和片剂制备。示例 性肠胃外给药组合物包括可注射溶液或悬液， 其可包含例如合适的无毒且肠胃外可接受的 稀释剂或溶剂如甘露醇、 1， 3- 丁二醇、 水， 林格溶液， 等压氯化钠溶液， 或其他合适的分散剂 或润湿剂和助悬剂 ( 包括合成甘油单酯或甘油二酯 )， 和脂肪酸 ( 包括油酸或 Cremaphor)。
示例性鼻部、 喷雾或吸入给药用组合物包括盐水溶液， 其可包含例如苯甲醇或其 他合适的防腐剂、 增强生物利用度的吸收促进剂、 和 / 或例如本领域已知的其他增溶剂或 分散剂。
直肠给药用制剂可以与常规载体一起以栓剂形式存在， 所述常规载体如可可脂、 合成甘油酯或聚乙二醇。此类载体在常温下通常为固态， 但在肠腔内会液化和 / 或溶解以 释放药物。
口内局部 ( 例如含服或舌下 ) 给药用制剂包括 ： 锭剂， 其包含在诸如蔗糖和阿拉 伯树胶或黄蓍胶等有味基质中的活性成分 ； 和软锭剂 (pastille)， 其包含在诸如明胶和甘 油或蔗糖和阿拉伯树胶等基质中的活性成分。 示例性局部给药用组合物包含局部用载体如 Plastibase( 用聚乙烯凝胶化的矿物油 )。
如前文所述， 优选的单位剂量制剂为包含有效剂量或适当份数的活性成分的单位 剂量制剂。
应理解除了以上具体提及的成分， 本发明的制剂还可包括就所讨论的剂型而言在 本领域中常规使用的其他试剂， 例如适于口服给药的制剂可包含增香剂。
尽管本文定义的化合物可作为药物中的唯一活性成分使用， 但所述化合物还可 与一种或多种另外的活性试剂结合使用。此类另外的活性试剂可以是本文定义的另外的 化合物， 或它们可以是不同的治疗剂， 例如抗抑郁剂、 抗焦虑药、 抗精神病药、 或对预防或治 疗骨质疏松症有用的试剂或其他可药用活性材料。例如， 本文定义的化合物可有效地与 有效量的其他试剂结合给药， 所述其他试剂如抗抑郁剂、 抗焦虑药、 抗精神病药、 有机二膦 酸盐或组织蛋白酶 K 抑制剂。抗抑郁剂的非限制性实例包括去甲肾上腺素再摄取抑制剂 (NRI)、 选择性 5- 羟色胺再摄取抑制剂、 单胺氧化酶抑制剂、 三环抗抑郁剂 (TCA)、 多巴胺再 摄取抑制剂 (DRI)、 类吗啡物质、 选择性 5- 羟色胺 (seretonic) 再摄取增强剂、 四环抗抑 郁剂、 单胺氧化酶的可逆抑制剂、 退黑激素激动剂、 5- 羟色胺和去甲肾上腺素再摄取抑制 剂 (SNRI)、 促肾上腺皮质激素释放因子拮抗剂、 α- 肾上腺素受体拮抗剂、 5HT1α 受体激动 剂和拮抗剂、 锂和非典型抗精神病药。SSRI 类抗抑郁剂的实例包括氟西汀 (Fluoxetine) 和 舍 曲 林 (Sertraline) ； SNRI 类 抗 抑 郁 剂 的 实 例 包 括 文 拉 法 辛 (Venlafaxine)、 西 酞 普 兰 (Citalopram)、 帕 罗 西 丁 (Paroxetine)、 依 他 普 仑 (Escitalopram)、 氟甲沙明 (Fluvoxamine) ； SNRI 类 抗 抑 郁 剂 的 实 例 包 括 度 洛 西 汀 (Duloxetine) ； DRI 和 NRI 类 抗抑郁剂的实例包括安非他酮 (Bupropion) ； TCA 类抗抑郁剂的实例包括阿密曲替林 (Amitriptyline) 和度硫平 (Dothiepin(Dosulepin))。非典型安定药的实例包括 ： 氯氮 平 (Clozapine)、 奥 氮 平 (Olanzapine)、 利 哌 酮 (Risperidone)、 喹 硫 平 (Quetiapine)、 齐 拉 西 酮 (Ziprasidone) 和 多 巴 胺 部 分 激 动 剂。 抗 焦 虑 药 的 非 限 制 性 实 例 包 括 苯 并二氮卓 (benzodiazepine) 类和非苯并二氮卓类。苯并二氮卓类的实例包括劳拉西泮 (lorazepam)、 阿普唑仑 (alprazolam) 和苯甲二氮 (diazepam)。非苯并二氮卓类包括丁螺 环酮 (Buspirone
)、 巴比土酸盐 (barbiturate) 和眠尔通 (meprobamate)。可结合使用一种或多种所述另外的抗抑郁剂。 所 述 有 机 二 膦 酸 盐 的 非 限 制 性 实 例 包 括 adendronate、 氯屈磷酸二钠 (clodronate)、 依 替 膦 酸 钠 (etidronate)、 伊 本 膦 酸 钠 (ibandronate)、 伊卡膦酸盐 (incadronate)、 minodronate、 neridronate、 利塞膦酸钠 (risedronate)、 piridronate、 氨 羟二磷酸二钠 (pamidronate)、 替鲁膦酸钠 (tiludronate)、 zoledronate， 其可药用盐或 酯， 及其混合物。优选的有机二膦酸盐包括阿伦膦酸钠 (alendronate) 及其可药用盐和混 合物。最优选阿伦膦酸一钠三水合物。
所述二膦酸盐的精确剂量将随以下因素变化 ： 剂量时间表， 选择的具体二膦酸 盐的口服效力， 哺乳动物或人的年龄、 个头、 性别和健康状况， 待治疗的障碍的性质和严 重性， 和其他相关药物和身体因素。因此， 精确的药物有效量不能事先确定， 可由护理师 (caregiver) 或临床医生容易地确定。合适的量可通过常规实验由动物模型和人临床研究 确定。 一般， 选择合适的二膦酸盐的量以得到抑制骨吸收的效果， 即给予骨吸收抑制量的二 膦酸盐。对人而言， 有效口服剂量的二膦酸盐通常为约 1.5 至约 6000 微克 / 千克体重， 优 选约 10 至 2000 微克 / 千克体重。
对于包含阿伦膦酸钠、 其可药用盐、 或其可药用衍生物的人口服组合物， 以阿仑膦 酸活性化合物重量为基准计 ( 即以相应酸为基准计 )， 单位剂量通常包含约 8.75mg 至约 140mg 的阿伦膦酸钠化合物。
本文定义的化合物可以与对治疗雌激素介导的病症有用的其他试剂结合使用。 此 类结合物中各种组分可在治疗过程中的不同时间独立地给药， 或以分开的或单一结合物形 式同时给药。 因此， 本发明应理解为包括全部此类形式的同时或交替治疗方案， 并据此解释 术语 “给药” 。 应理解本发明的化合物与对治疗雌激素介导的病症有用的其他试剂的结合物 的范围原则上包括与对治疗雌激素功能相关疾病有用的任意药物组合物的任意结合物。
当 与 本 文 定 义 的 化 合 物 结 合 使 用 时， 上述其他治疗剂可以例如以 Physicians’ Desk Reference(PDR) 指出的量使用， 或以本领域的普通技术人员确定的量使 用。
当所述化合物与一种或多种其他治疗剂结合使用时， 无论同时使用， 还是序贯使 用， 优选以下结合比和剂量范围 ：
当与抗抑郁剂、 抗焦虑药、 抗精神病药、 有机二膦酸盐或组织蛋白酶 K 抑制剂结合 时， 本文定义的化合物可以以在约 10 ∶ 1 至约 1 ∶ 10 范围内的与另外试剂的重量比使用。
如上所述， 本发明的化合物还任选地以标记形式用作诊断与雌激素受体障碍相关 病症的诊断剂。例如， 此类化合物可被放射性地标记。
如上所述， 本发明的化合物还任选地以标记形式用作发现雌激素受体的其他激动 剂、 部分激动剂、 拮抗剂或部分拮抗剂方法中的参考化合物。因此， 本发明提供了一种发现 雌激素受体配体的方法， 其包括使用本文定义的化合物 ( 如标记形式的本发明化合物 ) 作 为参考化合物。 例如， 这种方法可包括竞争结合实验， 其中化合物与雌激素受体的结合由于 存在具有雌激素受体结合特性——例如比所讨论的本发明化合物更强的雌激素受体结合特性——的另一种化合物而降低。
本领域技术人员可设计多种本发明化合物的合成路线， 下述可能的合成路线并不 限制本发明。 文献中存在多种合成苯并呋喃的方法， 几种可能的合成路线以下以图示示出。 如果合适， 任意初始制备的本文定义的化合物均可通过已知方法转化为另一种本文定义的 化合物。
方案 1
(a)NaOAc， Ac2O ； (b)Br2， CHCl3 ； (c)KOH， EtOH ； (d)R6B(OH)2， Pd(OAc)2， 2- 二环己基 膦基 -2’ ， 6’ - 二甲氧基 -1， 1’ - 联苯， K2CO3， 甲苯
方案 2
(a)Br2， CHCl3 ； (b)1， 8- 二 氮 杂 双 环 [5.4.0] 十 一 碳 -7- 烯， CH3I， 丙酮； (c) X-Phos， Pd(AcCN)2Cl2， Cs2CO3， EtCN ； (d)I2， CH2Cl2 ； (e)PhB(OH)2， 2- 二 环 己 基 膦 基 -2’ ， 6’ - 二甲氧基 -1， 1’ - 联苯， Pd(OAc)2， K2CO3， 甲苯， 乙醇 ； (f)BBr3， CH2Cl2 ；方案 3当使用方案 3 时， 使用以下一般方法。称取硼酸 (0.1mmol， 2eq) 置于微波瓶中。 将碳酸钠 (11mg， 0.1mmol， 2eq) 溶于水 (0.5ml) 中并加入。将苯并呋喃 (20mg， 0.05mmol， 1eq) 溶于 DME(1ml) 中并加入。将 Tetrakis(2mg， 0.0015mmol， 0.03eq) 溶于乙醇 (0.5ml) 中并加入。用氮气充满所述瓶， 盖帽， 并在 140 度的微波炉中照射 3 分钟。将反应混合物过 滤装入制备 HPLC 瓶中， 并在酸性缓冲液中使用 20-100％水 / 乙腈梯度进行色谱分离。 收集 16-24 分钟范围内的 UV 峰。对于主要反应， 在约 18 分钟时洗脱出一个 UV 主峰。蒸发级分 管， 将残余物溶于丙酮中， 并转移至预先称重的瓶中。将所述瓶蒸发干燥， 在真空下保持过 夜并称重。
将干燥化合物溶于带有隔片的瓶中含环己烷 (21μl) 的 DCM(1ml) 中， 充入氮气， 并在氧化铝块中在干冰 / 丙酮浴中冷却。 用注射器加入三溴化硼 (1M 的 DCM 溶液， 200μL)。
使所述瓶达到 10 度， 然后在 4 度保持过夜。
将反应物冷却， 用 MeOH(100μl) 终止反应， 用含 10％ MeOH 的 DCM(1ml) 稀释， 并用 饱和碳酸氢钠洗涤。 再用 DCM(1ml) 洗涤一次碳酸氢钠溶液。 使用相分离膜进行相分离。 将 有机相蒸发干燥， 并进行反相制备 HPLC。将合适的馏分合并并蒸发， 并通过 1H-NMR 和 LC/ MS 确认。通过分析 HPLC 确定纯度。
方案 4
A or B ： A 或者 B
对方案 4 使用如下两种变化方案。
方法 A
称取硼酸或频哪醇酯 (pinacolate)(0.2mmol， 2eq) 置于微波瓶中。将碳酸铯 (0.2mmol， 2eq) 溶于水 (326mg/ml)， 并向每个瓶中加入 0.2ml 这种溶液。将 2-(4- 乙酰氧 基 - 苯基 )-3- 溴 -7- 甲基 - 苯并呋喃 -5- 基酯 (0.1mmol， 1eq) 溶于二氧杂环己烷 (19.7mg/ ml)， 并向每个瓶中加入 2ml 这种溶液。向每个瓶中加入四 ( 三苯基膦 ) 钯 (5mol％ ) 干粉。 加入磁体， 将氮气充入所述瓶， 盖帽， 并在 150 度在微波下放置 60 分钟。将反应混合物过滤 并蒸发。将残余物溶于无水甲醇 (2ml) 和 THF(200μl) 中， 并在室温下用几滴 1M 甲醇钠溶 液处理 3 小时。将反应混合物用 H+ 树脂 (Amberlyst 15) 中和 15 分钟， 过滤， 并在制备反 1 相 HPLC 上进行色谱分离。将合适的级分结合并蒸发， 通过 H-NMR 和 LC/MS 确认。通过分 析 HPLC 确定纯度。
方法 B
将 乙 酸 2-(4- 乙 酰 氧 基 - 苯 基 )-3- 溴 -7- 甲 基 - 苯 并 呋 喃 -5- 基 酯 (30mg， 0.074mmol， 1eq) 溶于无水 DMF， 并分装于各个瓶中。 用刮勺加入 LiCl(23mg， 0.52mmol， 7eq) 和 tetrakis(0.05eq)。将所述瓶充入氮气。用吸液管加入锡试剂 (0.089mmol， 1.2eq)。将 所述瓶盖帽， 并在 100 度在微波下放置 10 分钟。
通过真空离心除去溶剂， 并将残余物溶于无水甲醇 (2ml) 中。加入几滴 1M 甲醇钠 溶液。将该溶液在室温下搅拌 20 分钟， 用 Amberlyst 15(H+ 树脂 ) 中和， 过滤， 通过使用氮 气流蒸发至 1.5ml， 并通过制备 HPLC 使用 20-50％ ACN 20 分钟酸性梯度纯化。
以下实施例说明本发明。
实施例 1
2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 -3- 苯基 - 苯并呋喃 -5- 醇 (E1)
方案 1
(a)NaOAc， Ac2O ； (b)Br2， CHCl3 ； (c)KOH， EtOH ； (d)PhB(OH)2， Pd(OAc)2， 2- 二环己基 膦基 -2’ ， 6’ - 二甲氧基 -1， 1’ - 联苯， K2CO3， 甲苯
(a) 乙酸 2-(4- 乙酰氧基 - 苯基 )-7- 甲基 - 苯并呋喃 -5- 基酯
将 2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 - 苯并呋喃 -5- 醇 ( 根据 WO03/51860 制备 ； 16mg， 0.067mmol) 和乙酸钠 (8mg， 0.13mmol) 与乙酸酐 (1mL) 混合， 并在室温下搅拌过夜。 加入甲 醇 (1mL)， 并将该混合物搅拌 30 分钟， 然后加入饱和碳酸氢钠水溶液 (3mL)， 用 CH2Cl2 萃取 该混合物， 并通过 isolute 分相器过滤。蒸发有机相得到定量产率的标题化合物。
(b) 乙酸 2-(4- 乙酰氧基 - 苯基 )-3- 溴 -7- 甲基 - 苯并呋喃 -5- 基酯
将乙酸 2-(4- 乙酰氧基 - 苯基 )-7- 甲基 - 苯并呋喃 -5- 基酯 (24mg， 0.067mmol) 溶于 CHCl3(1mL) 中， 并将该混合物冷却至 0℃， 加入溴 (3.5μL， 0.067mmol)， 将该混合物在 0℃下搅拌一小时， 然后在室温下搅拌 2h。蒸发溶剂得到定量产率的标题化合物。
(c)3- 溴 -2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 - 苯并呋喃 -5- 醇
在室温下， 向乙酸 2-(4- 乙酰氧基 - 苯基 )-3- 溴 -7- 甲基 - 苯并呋喃 -5- 基酯 (2mg， 4.5μmol) 在 EtOH(0.5mL) 中的溶液中加入 KOH(2mg， 0.032mmol)， 并将该混合物搅拌 30 分钟。加入几滴 HCl 水溶液 (2M) 以将 pH 调节至 1。将该混合物用水稀释， 用 CH2Cl2 萃 取， 然后通过分相器过滤， 蒸发有机相得到定量产率的标题化合物。
(d)2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 -3- 苯基 - 苯并呋喃 -5- 醇
将 乙 酸 2-(4- 乙 酰 氧 基 - 苯 基 )-3- 溴 -7- 甲 基 - 苯 并 呋 喃 -5- 基 酯 (8mg， 0.018mmol)、 2- 二环己基膦基 -2’ ， 6’ - 二甲氧基 -1-1’ - 联苯 (0.4mg， 0.001mmol)、 乙酸 钯 (0.1mg， 0.0004mmol)、 碳酸钾 (5.2mg， 0.038mmol) 和苯基硼酸 (4.4mg， 0.036mmol) 在甲 苯 (0.5mL) 中的混合物在 90℃下搅拌过夜。冷却后， 加入水和 CH2Cl2， 并通过分相器过滤混 合物。蒸发有机相， 并通过制备 HPLC 纯化残余物得到标题化合物 (3mg， 52％ )。ES/MS m/ 1 z： 317(M+H)， 315.1(M-H) ； H NMR( 丙酮 -d6， 500MHz) ： 7.66-7.61(m， 4H)， 7.18(dd， 1H， J＝ 4.4， 1.6Hz)， 6.96(m， 2H)， 6.84(m， 1H)， 6.77(m， 1H) 和 2.52(s， 3H)。
实施例 2 ： 5- 羟基 -2-(4- 羟基 - 苯基 )-3- 苯基 - 苯并呋喃 -7- 腈 (E2)
方案 2
(a)Br2， CHCl3 ； (b)1， 8- 二氮杂双环 [5.4.0] 十一碳 -7- 烯， CH3I， 丙酮 ； (c)1- 乙 炔基 -4- 甲氧基苯， X-Phos， Pd(AcCN)2Cl2， Cs2CO3， EtCN ； (d)I2， CH2Cl2 ； (e)PhB(OH)2， 2- 二 环己基膦基 -2’ ， 6’ - 二甲氧基 -1， 1’ - 联苯， Pd(OAc)2， K2CO3， 甲苯， 乙醇 ； (f)BBr3， CH2Cl2 ；
(a)3- 溴 -2- 羟基 -5- 甲氧基 - 苄腈
在 30 分钟的时段内， 向冰冷却的 2- 羟基 -5- 甲氧基 - 苄腈 (1.00g， 6.71mmol) 在 CHCl3(50mL) 中的溶液中滴加溴 (345μL， 6.71mmol) 在 CHCl3(50mL) 中的溶液， 并将该混合 物在 0℃下再搅拌 30 分钟。用过量亚硫酸氢钠水溶液洗涤该混合物直到橙黄色溴颜色褪 色， 然后通过分相器过滤。蒸发有机相得到 1.53g(100％ ) 标题化合物。
(b)3- 溴 -2， 5- 二甲氧基 - 苄腈
在 1 小时内， 在搅拌下向 3- 溴 -2- 羟基 -5- 甲氧基 - 苄腈 (1.53g， 6.71mmol) 和碘 甲烷 (4.10mL， 65.8mmol) 在丙酮 (100mL) 中的溶液中滴加 1， 8- 二氮杂双环 [5.4.0] 十一 碳 -7- 烯 (3.92mL， 26.3mmol) 在丙酮 (50mL) 中的溶液。添加完成后， 将该反应混合物再搅 拌 1 小时， 然后蒸发约 80％的溶剂， 将残余物用水稀释， 并用 CH2Cl2 萃取。然后通过分相器 过滤， 蒸发有机相， 并通过柱色谱 ( 流动相 ： CH2Cl2- 异己烷 1 ∶ 1) 纯化残余物得到标题化 合物 (1.62g， 100％ )。
(c)2， 5- 二甲氧基 -3-(4- 甲氧基 - 苯基乙炔基 )- 苄腈
在回流和氮气流下搅拌 3- 溴 -2， 5- 二甲氧基 - 苄腈 (505mg， 2.07mmol)、 二环己 基 -(2’ ， 4’ ， 6’ - 三异丙基 - 联苯 -2- 基 )- 膦 (phosphane)(30mg， 0.062mmol)、 二乙腈氯化
钯 (II)(5mg， 0.021mmol)、 碳酸铯 (1.35g， 4.14mmol) 和丙腈 (15mL)。在 30 分钟内， 通过注 射器滴加 1- 乙炔基 -4- 甲氧基 - 苯 (287mg， 2.17mmol) 在丙腈 (5mL) 中的溶液， 添加完成 后， 在回流下将该混合物再搅拌 2h。冷却并用水稀释后， 将该混合物用 CH2Cl2 萃取， 通过分 相器过滤， 蒸发有机相， 并通过柱色谱 ( 流动相 ： CH2Cl2- 异己烷 1 ∶ 2) 纯化残余物得到标 题化合物 (550mg， 91％ )。
(d)3- 碘 -5- 甲氧基 -2-(4- 甲氧基 - 苯基 )- 苯并呋喃 -7- 腈
向 2， 5- 二 甲 氧 基 -3-(4- 甲 氧 基 - 苯 基 乙 炔 基 )- 苄 腈 (550mg， 1.88mmol) 在 CH2Cl2(15mL) 中的溶液 ( 使用铝箔包围反应容器而使其保持在黑暗中 ) 中加入碘 (952mg， 3.76mmol)， 并在室温下将该混合物搅拌 3h。加入过量 NaHSO3 水溶液， 并搅拌该混合物直至 紫色碘颜色褪色。然后通过分相器过滤， 蒸发有机相， 并通过柱色谱 ( 流动相 ： CH2Cl2- 异己 烷 1 ∶ 1) 纯化残余物得到标题化合物 (762mg， 100 ％ )。参考碘环化 ： J.Org.Chem.2005， 70， 10292-20296。
(e)5- 甲氧基 -2-(4- 甲氧基 - 苯基 )-3- 苯基 - 苯并呋喃 -7- 腈
将 3- 碘 -5- 甲氧基 -2-(4- 甲氧基 - 苯基 )- 苯并呋喃 -7- 腈 (20mg， 0.049mmol)、 二环己基 -(2’ ， 6’ - 二甲氧基 - 联苯 -2- 基 )- 膦 (1.6mg， 0.004mmol)、 乙酸钯 (0.23mg， 0.001mmol)、 碳 酸 钾 (14mg， 0.098mmol)、 苯 基 硼 酸 (12mg， 0.098mmol)、 甲 苯 (0.9mL) 和 EtOH(0.1mL) 的混合物在室温下搅拌过夜。然后将该混合物用 CH2Cl2 稀释， 用水洗涤， 并通 过分相器过滤。蒸发有机相， 并通过柱色谱 ( 流动相 ： CH2Cl2- 异己烷 1 ∶ 1) 纯化残余物得 到标题化合物 (17mg， 97％ )。
(f)5- 羟基 -2-(4- 羟基 - 苯基 )-3- 苯基 - 苯并呋喃 -7- 腈
在 搅 拌 下 将 三 溴 化 硼 在 CH2Cl2 中 的 溶 液 (1M， 240μL， 0.24mmol) 加 入 5- 甲 氧 基 -2-(4- 甲氧基 - 苯基 )-3- 苯基 - 苯并呋喃 -7- 腈 (17mg， 0.048mmol) 的溶液中， 并在室 温下将该混合物搅拌 1h。将该反应用甲醇停止， 用 NaHCO3( 饱和水溶液 ) 洗涤， 并通过分 相器过滤。蒸发有机相， 并通过柱色谱 ( 流动相 ： CH2Cl2- 甲醇 19 ∶ 1) 纯化残余物得到标 1 题化合物 (13mg， 83％ )。ES/MS m/z ： 328.1(M+H)， 326.2(M-H) ； H NMR(MeOH-d4， 500MHz) ： 7.45-7.50(m， 2H)， 7.39-7.45(m， 5H)， 7.0-7.03(m， 2H)， 6.71-6.75(m， 2H)。
实施例 3 ： 2-(2- 氟 -4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 -3- 苯基 - 苯并呋喃 -5- 醇 (E3)
方案 3
(a)1.EtOCOCl， Et3N， THF 2.NaBH4( 水溶液 ) ； (b) 三甲基甲硅烷基乙炔， X-Phos， Pd(AcCN)2Cl2， Cs2CO3， EtCN ； (c) 四 丁 基 氟 化 铵， THF ； (d)4- 溴 -3- 氟 苯 甲 醚， X-Phos， Pd(AcCN)2Cl2， Cs2CO3， EtCN
Ex. ： 实施例
(a)4- 甲氧基 -2- 甲基 - 苯酚
标题化合物由 2- 羟基 -5- 甲氧基 - 苯甲醛使用 Chem Pharm Bull 27(6)， 1979， 1490-1494 页中描述的方法获得 ： 在 30 分钟的时段内将氯甲酸乙酯 (571μL， 6.0mmol) 滴 加至冰冷却的 2- 羟基 -5- 甲氧基 - 苯甲醛 (624μL， 5.0mmol) 和三乙胺 (832μL， 6.0mmol) 在 THF(5mL) 中的溶液中， 并在℃下将该混合物再搅拌 30 分钟。滤出沉淀物， 并在 45 分钟 的时段内将滤液滴加至冰冷却的 NaBH4(756mg， 20mmol) 在水 (7.5mL) 中的溶液中。在室温 下将形成的混合物搅拌 90 分钟， 然后用水稀释， 用 2M HCl 酸化至 pH ＜ 2， 并用乙醚萃取。 将有机相干燥 (MgSO4) 和蒸发。当 90％的乙醚蒸发时， 滤出形成的沉淀物。标题化合物在 滤液中。定量产率。
(b)(2， 5- 二甲氧基 -3- 甲基 - 苯基乙炔基 )- 三甲基 - 硅烷
在回流和氮气流下搅拌 1- 溴 -2， 5- 二甲氧基 -3- 甲基 - 苯 ( 由 4- 甲氧基 -2- 甲 基 - 苯酚根据方法 2 的第一步制备， 1.62g， 6.61mmol)、 二环己基 -(2’ ， 4’ ， 6’ - 三异丙基 - 联 苯 -2- 基 )- 膦 (94mg， 0.20mmol)、 二乙腈氯化钯 (II)(17mg， 0.066mmol)、 碳酸铯 (4.31g， 13.2mmol) 和丙腈 (40mL)。用注射器加入乙炔基 - 三甲基 - 硅烷 (2.04mL， 13.2mmol)， 并在 回流下将该混合物再搅拌 2h。冷却并用水稀释后， 将该混合物用 CH2Cl2 萃取， 并通过分相 器过滤。蒸发有机相， 并通过柱色谱 ( 流动相 ： CH2Cl2- 异己烷 1 ∶ 3) 纯化残余物得到标题 化合物 (312mg， 19％ ) 与大量 1- 乙炔基 -2， 5- 二甲氧基 -3- 甲基 - 苯 (242mg， 21％ )。
(c)1- 乙炔基 -2， 5- 二甲氧基 -3- 甲基 - 苯
向 (2， 5- 二甲氧基 -3- 甲基 - 苯基乙炔基 )- 三甲基 - 硅烷 (312mg， 1.26mmol) 在 THF(10mL) 中的溶液中添加四丁基氟化铵水合物 (362mg， 1.38mmol)， 并在室温下将该混合 物搅拌 1h。将该混合物用乙醚稀释， 用水洗涤， 进行相分离， 并干燥 (MgSO4)、 过滤和蒸发有 机相。使用 CH2Cl2 作洗脱液通过硅胶栓 (2g) 过滤残余物得到定量产量的标题化合物。
(d)1-(2- 氟 -4- 甲氧基 - 苯基乙炔基 )-2， 5- 二甲氧基 -3- 甲基 - 苯在回流和氮 气流下搅拌 1- 溴 -2- 氟 -4- 甲氧基 - 苯 (47mg， 0.23mmol)、 二环己基 -(2’ ， 4’ ， 6’ - 三异丙 基 - 联苯 -2- 基 )- 膦 (3mg， 0.0068mmol)、 二乙腈氯化钯 (II)(0.6mg， 0.0023mmol)、 碳酸铯 (150mg， 0.46mmol) 和丙腈 (0.5mL)。 用注射器加入 1- 乙炔基 -2， 5- 二甲氧基 -3- 甲基 - 苯 (40mg， 0.23mmol) 在丙腈 (0.5mL) 中的溶液， 并在回流下将该混合物再搅拌 2h。冷却和用 水稀释后， 将该混合物用 CH2Cl2 萃取， 并通过分相器过滤。蒸发有机相， 并通过柱色谱 ( 流 动相 ： CH2Cl2- 异己烷 1 ∶ 1) 纯化残余物得到标题化合物 (58mg， 84％ )。
2-(2- 氟 -4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 -3- 苯基 - 苯并呋喃 -5- 醇
标题化合物由 1-(2- 氟 -4- 甲氧基 - 苯基乙炔基 )-2， 5- 二甲氧基 -3- 甲基 - 苯通 1 过方法 2 中描述的最后三步制备。ES/MS m/z ： 353.3(M+H)， 351.4(M-H) ； H NMR(MeOH-d4， 500MHz) ： 7.33-7.39(m， 4H)， 7.26-7.31(m， 3H)， 6.80(d， 2.23Hz， 1H)， 6.64-6.66(m， 1H)， 6.62(dd， 2.24Hz， 8.56Hz， 1H)， 6.52(dd， 2.50Hz， 12.00Hz， 1H)， 2.48(s， 3H)。
实施例 47- 二溴甲基 -2-(4- 羟基 - 苯基 )-3- 苯基 - 苯并呋喃 -5- 醇 (E4) 方案 4(a) 二乙基氨基三氟化硫， CH2Cl2 ； (b)BBr3， CH2Cl2
Ex. ： 实施例
(a)1- 溴 -3- 二氟甲基 -2， 5- 二甲氧基 - 苯
向含有 3- 溴 -2， 5- 二甲氧基 - 苯甲醛 ( 由 2- 羟基 -5- 甲氧基 - 苯甲醛根据方法 2 的第一步制备， 108mg， 0.44mmol) 在 CH2Cl2(3mL) 中的溶液的塑料管中加入二乙基氨基三 氟化硫 (291μL， 2.2mmol)， 并在 40℃下将该混合物搅拌过夜。冷却后， 将该混合物倒入水 中， 并通过分相器过滤。蒸发有机相， 并通过柱色谱 ( 流动相 ： CH2Cl2- 异己烷 1 ∶ 3) 纯化 残余物得到标题化合物 (96mg， 82％ )。
(b)7- 二溴甲基 -2-(4- 羟基 - 苯基 )-3- 苯基 - 苯并呋喃 -5- 醇
在搅拌下将三溴化硼在 CH2Cl2 中的溶液 (1M， 220μL， 0.22mmol) 加入 7- 二氟甲 基 -5- 甲氧基 -2-(4- 甲氧基 - 苯基 )-3- 苯基 - 苯并呋喃 ( 由 1- 溴 -3- 二氟甲基 -2， 5- 二 甲氧基 - 苯根据方法 2 制备， 17mg， 0.045mmol) 的溶液中， 并在室温下将该混合物搅拌 1h。 将该反应用甲醇停止， 用 NaHCO3( 饱和水溶液 ) 洗涤， 并通过分相器过滤。蒸发有机相， 并 通过柱色谱 ( 流动相 ： CH2Cl2- 甲醇 19 ∶ 1) 纯化残余物得到标题化合物 (5mg， 23％ )。1H NMR(CDCl3， 500MHz) ： 7.58-7.61(m， 2H)， 7.43-7.49(m， 4H)， 7.38-7.42(m， 1H)， 7.22(s， 1H)， 7.19(d， 2.46Hz， 1H)， 6.85-6.89(m， 3H)。
实施例 5
[5- 羟基 -2-(4- 羟基 - 苯基 )-3- 苯基 - 苯并呋喃 -7- 基 ]- 乙腈 (E5)
方案 5
(a)NaBH4， 甲醇 ； (b)BBr3， CH2Cl2 ； (c)KCN， THF， NMP
(a)[5- 甲氧基 -2-(4- 甲氧基 - 苯基 )-3- 苯基 - 苯并呋喃 -7- 基 ]- 甲醇
向 5- 甲氧基 -2-(4- 甲氧基 - 苯基 )-3- 苯基苯并呋喃 -7- 醛 ( 由 2- 羟基 -5- 甲 氧基 - 苯甲醛根据方法 2 制备， 53mg， 0.15mmol) 在甲醇 (3mL) 中的溶液中加入 NaBH4(11mg， 0.30mmol)， 并在室温下将该混合物搅拌 1h。用 1M HCl( 水溶液 ) 淬灭反应， 并用水稀释该 混合物。使标题化合物沉淀， 并通过过滤分离。产量 ： 50mg(94％ )。
(b)7- 溴甲基 -2-(4- 羟基 - 苯基 )-3- 苯基 - 苯并呋喃 -5- 醇
向冰冷却的 [5- 甲氧基 -2-(4- 甲氧基 - 苯基 )-3- 苯基 - 苯并呋喃 -7- 基 ]- 甲醇 (50mg， 0.14mmol) 在 CH2Cl2(3mL) 中的溶液中加入 1M 的 BBr3 在 CH2Cl2(0.56mL， 0.56mmol) 中 的溶液， 并在 0℃下将该混合物搅拌 4h。将反应通过加入甲醇停止， 用碳酸氢钠 ( 饱和水溶 液 ) 洗涤， 并通过分相器过滤。蒸发有机相， 并通过柱色谱 ( 流动相 ： CH2Cl2- 甲醇 39 ∶ 1) 纯化残余物得到标题化合物 (26mg， 44％ )。
(c)[5- 羟基 -2-(4- 羟基 - 苯基 )-3- 苯基 - 苯并呋喃 -7- 基 ]- 乙腈
将氰化钾 (3mg， 0.039mmol) 和 7- 溴甲基 -2-(4- 羟基 - 苯基 )-3- 苯基 - 苯并呋 喃 -5- 醇 (14mg， 0.035mmol) 悬浮于 THF 和 NMP 的 3 ∶ 1 混合物中 (0.5mL)， 并在 60℃下将该 混合物搅拌过夜。加入碳酸氢钠 ( 饱和水溶液 )， 将该混合物用 CH2Cl2 和甲醇的 4 ∶ 1 混合 物萃取， 并通过分相器过滤。 蒸发有机相， 并通过柱色谱 ( 流动相 ： CH2Cl2- 甲醇 39 ∶ 1) 纯化 1 残余物得到标题化合物 (2mg， 17％ )。 ES/MSm/z ： 342.2(M+H)， 340(M-H) ； H NMR ： (MeOH-d4， 500MHz) ： 7.38-7.50(m， 7H)， 6.83(d， 2.37Hz， 1H)， 6.75(d， 2.37Hz， 1H)， 6.71-6.74(m， 2H)， 4.16(s， 2H)。
实施例 6 ： 2-(4- 羟基 - 苯基 )-7-(1- 甲氧基 - 乙基 )-3- 苯基 - 苯并呋喃 -5- 醇 (E6)
方案 6
(a)BuLi， Ph3PCH3Br， THF ； (b)1.BF3SMe2， 环己烯， CH2Cl2， 2. 甲醇
(a)5- 甲氧基 -2-(4- 甲氧基 - 苯基 )-3- 苯基 -7- 乙烯基 - 苯并呋喃
将丁基锂 (2.5M 的己烷溶液， 0.08mL， 0.2mmol) 加入冰冷却的甲基三苯基溴化磷 鎓在 THF(1mL) 中的浆液中。在 0℃下将该混合物搅拌 15 分钟。加入 5- 甲氧基 -2-(4- 甲 氧基 - 苯基 )-3- 苯基苯并呋喃 -7- 醛 (36mg， 0.10mmol)， 并在 50℃下将该混合物搅拌三小 时。将反应通过小心加入 2M HCl 淬灭， 用 CH2Cl2 萃取， 通过分相器过滤， 蒸发有机相， 并通 过柱色谱 ( 流动相 ： CH2Cl2- 异己烷 1 ∶ 2) 纯化残余物得到标题化合物 (20mg， 89％ )。
(b)2-(4- 羟基 - 苯基 )-7-(1- 甲氧基 - 乙基 )-3- 苯基 - 苯并呋喃 -5- 醇
将 5- 甲 氧 基 -2-(4- 甲 氧 基 - 苯 基 )-3- 苯 基 -7- 乙 烯 基 - 苯 并 呋 喃 (12mg， 0.034mmol) 和 环 己 烯 (34μL， 0.34mmol) 溶 于 CH2Cl2(1mL) 中， 并 在 室 温 下 搅 拌。 加 入 BF3·S(CH3)2(14μL， 0.135mmol)， 并在室温下将该混合物搅拌过夜。加入甲醇， 接着加入 NaHCO3( 饱和水溶液 )。 通过分相器过滤后， 蒸发有机相， 并通过柱色谱 ( 流动相 ： CH2Cl2- 甲 醇 39 ∶ 1) 纯化残余物得到标题化合物 (2mg， 15％ )。ES/MSm/z ： 361.4(M+H)， 359.2(M-H) ； 1 H NMR ： (MeOH-d4， 500MHz) ： 7.37-7.50(m， 7H)， 6.78(d， 2.43Hz， 1H)， 6.70-6.74(m， 2H)， 6.69(d， 2.43Hz， 1H)， 4.91(q， 6.55Hz， 1H)， 3.34(s， 1H)， 1.60(d， 6.55Hz， 3H)。
实施例 7
7- 二氟甲基 -2-(4- 羟基 - 苯基 )-3- 苯基 - 苯并呋喃 -5- 醇 (E7)
方案 7
(a)1.BF3SMe2， CH2Cl2， 环己烯， 2. 甲醇 ； (b) 二乙基氨基三氟化硫， CH2Cl2
(a)5- 羟基 -2-(4- 羟基 - 苯基 )-3- 苯基 - 苯并呋喃 -7- 醛
将 5- 甲氧基 -2-(4- 甲氧基 - 苯基 )-3- 苯基苯并呋喃 -7- 醛 (80mg， 0.22mmol) 和 环己烯 (220μL， 2.2mmol) 溶于 CH2Cl2(3mL)， 并在室温下搅拌。加入 BF3·S(CH3)2(56μL， 0.54mmol)， 并在室温下将该混合物搅拌过夜。加入甲醇， 接着加入 NaHCO3( 饱和水溶液 )。 通过分相器过滤后， 蒸发有机相， 并通过柱色谱 ( 流动相 ： CH2Cl2- 甲醇 39 ∶ 1) 纯化残余物 得到标题化合物 (20mg， 27％ )。
(b)7- 二氟甲基 -2-(4- 羟基 - 苯基 )-3- 苯基 - 苯并呋喃 -5- 醇
在塑料管中， 将 5- 羟基 -2-(4- 羟基 - 苯基 )-3- 苯基 - 苯并呋喃 -7- 醛 (15mg， 0.045mmol) 和二乙基氨基三氟化硫 (22μL， 0.18mmol) 在 CH2Cl2(0.5mL) 中的溶液在 40℃ 下搅拌过夜。冷却后， 通过加入甲醇停止反应， 并用 NaHCO3( 饱和水溶液 ) 洗涤该混合物。 通过分相器过滤后， 蒸发有机相， 并通过柱色谱 ( 流动相 ： CH2Cl2- 甲醇 19 ∶ 1) 纯化残余 1 物得到标题化合物 (5mg， 31％ )。ES/MS m/z ： 353.3(M+H)， 351.3(M-H) ； H NMR ： (MeOH-d4， 500MHz) ： 7.39-7.51(m， 7H)， 7.18(t， 55.13Hz， 1H)， 6.93-6.95(m， 1H)， 6.87-6.89(m， 1H)， 6.71-6.75(m， 2H)。
实施例 8 ： 2-(4- 羟基 - 苯基 )-3- 苯基 -7- 乙烯基 - 苯并呋喃 -5- 醇 (8)
方案 8
2-(4- 羟基 - 苯基 )-3- 苯基 -7- 乙烯基 - 苯并呋喃 -5- 醇
在 -78 ℃下， 向 5- 甲氧基 -2-(4- 甲氧基 - 苯基 )-3- 苯基 -7- 乙烯基 - 苯并呋 喃 ( 根据方法 6 制备， 4mg， 0.011mmol) 和环己烯 (23μL， 0.22mmol) 的溶液中加入 BBr3(1M 的 CH2Cl2 溶液， 56μL， 0.056mmol)。然后将该混合物在冷冻器 (-18 ℃ ) 中储存过夜。将 反应用水停止， 用 NaHCO3( 饱和水溶液 ) 洗涤， 并通过分相器过滤。蒸发有机相， 并通过 柱色谱 ( 流动相 ： CH2Cl2- 甲醇 39 ∶ 1) 纯化残余物得到标题化合物 (2mg， 54 ％ )。ES/MS 1 m/z ： 329.1(M+H)， 327.2(M-H) ； H NMR ： (MeOH-d4， 500MHz) ： 7.38-7.50(m， 7H)， 6.97(dd， 13.37Hz ， 17.76Hz ， 1H) ， 6.81(d ， 2.52Hz ， 1H) ， 6.71-6.75(m ， 2H) ， 6.69(d ， 2.52Hz ， 1H) ， 6.25(dd， 1.35Hz， 17.76Hz， 1H)， 5.52(dd， 1.35Hz， 11.37Hz， 1H)。
实施例 9
2-(4- 羟基 - 苯基 )-3- 噻吩 -3- 基 -7- 三氟甲基 - 苯并呋喃 -5- 醇 (E9)
(a)Br2， MeOH ； (b)1， 8- 二氮杂双环 [5.4.0] 十一碳 -7- 烯， CH3I， 丙酮 ； (c) 氟代磺酰基二氟乙酸甲酯， CuI， DMF
Ex. ： 实施例
(a)2， 6- 二溴 -4- 甲氧基 - 苯酚
在搅拌下将 4- 甲氧基苯酚 (5.72g， 46.1mmol) 在 MeOH(80mL) 中的溶液冷却至 0℃。滴加 Br2(4.97mL， 96.8mmol) 在 MeOH(20mL) 中的溶液， 并在室温下将形成的混合物搅 拌 3h。通过加入 NaHCO3 和 NaHSO3 水溶液停止反应。当气体放出停止且溴颜色褪色后， 加入 水， 形成一种浓稠浅黄色沉淀。过滤出沉淀， 并用 MeOH-H2O 重结晶得到标题化合物 (5.20g， 40％ )。
(b)1， 3- 二溴 -2， 5- 二甲氧基 - 苯
在 搅 拌 下， 在 30 分 钟 内， 向 2， 6- 二 溴 -4- 甲 氧 基 - 苯 酚 (5.2g， 18.4mmol) 和 CH3I(11.5mL， 184mmol) 在无水丙酮 (50mL) 中的溶液中滴加 1， 8- 二氮杂双环 [5.4.0] 十一 碳 -7- 烯 (13.8mL， 92.2mmol) 在无水丙酮 (50mL) 中的溶液。添加完成时， 在室温下将该反 应混合物搅拌 30 分钟。将该混合物倒入 2M HCl( 水溶液 ) 中， 并用乙醚萃取。将有机相干 燥、 过滤和蒸发， 并通过柱色谱 ( 流动相 ： CH2Cl2- 异己烷 9 ∶ 1 → 1 ∶ 1) 纯化残余物得到 需要的二醚， 其为无色液体。
(c)1- 溴 -2， 5- 二甲氧基 -3- 三氟甲基 - 苯
在 N2 和 搅 拌 下， 向 1， 3- 二 溴 -2， 5- 二 甲 氧 基 - 苯 (353mg， 1.19mmol) 和 二 氟 - 氟代磺酰基 - 乙酸甲酯 (455μL， 3.58mmol) 在 DMF(1mL) 中的溶液中加入 CuI(227mg， 1.19mmol)。 然后在 N2 和 80℃下， 将该混合物搅拌三天。 通过冷却、 用 CH2Cl2 稀释、 用水洗涤、 并通过分相器过滤对反应物进行后处理。蒸发有机相， 并通过柱色谱 ( 流动相 ： CH2Cl2- 异 己烷 1 ∶ 9 → 1 ∶ 1) 纯化残余物得到标题化合物 (60mg， 18％ )。
2-(4- 羟基 - 苯基 )-3- 噻吩 -3- 基 -7- 三氟甲基 - 苯并呋喃 -5- 醇
标题化合物由 1- 溴 -2， 5- 二甲氧基 -3- 三氟甲基 - 苯通过实施例 2 中描述的最 后四步制备。ES/MS m/z ： 377.2(M+H)， 375.2(M-H)。
实施例 10 ： 7- 氟 -2-(1H- 吲唑 -5- 基 )-3- 噻吩 -3- 基 - 苯并呋喃 -5- 醇 (E10)
(a) 四丁基溴化铵， 2-( 三甲基甲硅烷基 ) 乙氧基甲基氯 ； (b) 三甲基甲硅烷基乙炔， X-Phos， Pd(AcCN)2Cl2， Cs2CO3， EtCN ； (c) 四丁基氟化铵 ； (d)BBr3， CH2Cl2， 环己烯
Ex. ： 实施例
(a)5- 溴 -1-(2- 三甲基硅烷基 - 乙氧基甲基 )-1H- 吲唑
在 冰 浴 中 冷 却 5- 溴 -1H- 吲 唑 (2.00g， 10.15mmol)、 四 丁 基 溴 化 铵 (33mg， 0.10mmol) 和 2M NaOH( 水溶液， 10.15mL， 20.3mmol) 在 CH2Cl2(30mL) 中的混合物， 在 30 分钟 内滴加 (2- 氯甲氧基 - 乙基 )- 三甲基 - 硅烷在 CH2Cl2(20mL) 中的溶液， 并在 0℃下将该混合 物搅拌 1h， 后升温至室温， 并再搅拌一小时。通过分相器过滤该混合物， 蒸发有机相得到比 例为 3 ∶ 1 的标题化合物和区域异构的 5- 溴 -2-(2- 三甲基硅烷基 - 乙氧基甲基 )-2H- 吲 唑， 合并定量产率。
(b)1-(2- 三甲基硅烷基 - 乙氧基甲基 )-5- 三甲基硅烷基乙炔基 -1H- 吲唑
在 80 ℃ 和 氩 气 下 搅 拌 5- 溴 -1-(2- 三 甲 基 硅 烷 基 - 乙 氧 基 甲 基 )-1H- 吲 唑 (3.32g， 10.15mmol)、 二 环 己 基 -(2’ ， 4’ ， 6’ - 三 异 丙 基 - 联 苯 -2- 基 )- 膦 (387mg， 0.81mmol)、 二 乙 腈 氯 化 钯 (II)(53mg， 0.20mmol)、 碳 酸 铯 (6.61g， 20.30mmol) 和 丙 腈 (60mL) 的混合物。用注射器加入乙炔基 - 三甲基 - 硅烷 (4.3mL， 30.5mmol)， 并在 80℃下将 该混合物搅拌 2h。将该混合物冷却， 用水和乙醚稀释 ； 进行相分离， 将有机相干燥、 过滤和 蒸发， 并通过柱色谱 ( 流动相 ： CH2Cl2- 异己烷 1 ∶ 9 → 1 ∶ 0) 纯化残余物得到标题化合物 (3.10g， 89％ )。
(c)5- 乙炔基 -1-(2- 三甲基硅烷基 - 乙氧基甲基 )-1H- 吲唑
将 1-(2- 三甲基硅烷基 - 乙氧基甲基 )-5- 三甲基硅烷基乙炔基 -1H- 吲唑 (357mg， 1.04mmol)、 四丁基氟化铵水合物 (271mg， 1.04mmol) 和乙腈 (10mL) 混合， 并在 0℃下搅拌 10 分钟。蒸发溶剂， 并通过 5g 硅胶栓过滤残余物。用 CH2Cl2 和异己烷 (1 ∶ 1) 的混合物 洗脱得到标题化合物 (235mmol， 83％ )。
(d)7- 氟 -2-(1H- 吲唑 -5- 基 )-3- 噻吩 -3- 基 - 苯并呋喃 -5- 醇
在 6 ℃下， 向 5-(7- 氟 -5- 甲氧基 -3- 噻吩 -3- 基 - 苯并呋喃 -2- 基 )-1-(2- 三 甲 基 硅 烷 基 - 乙 氧 基 甲 基 )-1H- 吲 唑 ( 由 2- 氟 -4- 甲 氧 基 - 苯 酚 并 最 终 由 5- 乙 炔 基 -1-(2- 三甲基硅烷基 - 乙氧基甲基 )-1H- 吲唑根据方法 2 制备， 20mg， 0.04mmol) 和 环己烯 (82μL， 0.81mmol) 在 CH2Cl2(1mL) 的溶液中加入 BBr3(1M 的 CH2Cl2 溶液， 0.40mL， 0.40mmol)， 并将该混合物在此温度下放置过夜。将反应用水停止， 用碳酸钠 ( 饱和水溶 液 ) 将 pH 调节至约 10， 用 EtOAc 萃取， 进行相分离， 干燥 (Na2CO3)、 过滤并蒸发有机相。通 过柱色谱 ( 流动相 ： CH2Cl2- 甲醇 99 ∶ 1 → 19 ∶ 1) 纯化残余物得到标题化合物 (4.3mg， 1 30％ )。ES/MSm/z ： 351.1(M+1)， 349.1(M-1) ； H NMR(MeOH-d4， 500MHz) ： 8.09-8.10(m， 1H)， 8.06(d， 093Hz， 1H)， 7.63(dd， 1.52Hz， 8.81Hz， 1H)， 7.58(dd， 2.83Hz， 5.04Hz， 1H)， 7.53(dd， 1.27Hz， 3.14Hz， 1H)， 7.49-7.52(m， 1H)， 7.12(dd， 1.28Hz， 5.03Hz， 1H)， 6.69(d， 2.14Hz， 1H)， 6.61(dd， 2.14Hz， 12.05Hz， 1H)。
实施例 11 ： 2-[7- 氯 -5- 羟基 -2-(4- 羟基 - 苯基 )- 苯并呋喃 -3- 基 ]- 呋喃 -3- 腈 (E11)
(a)1.BuLi， THF 2.3- 呋喃腈 (furonitrile)3.Bu3SnCl ； (b)Pd(PPh3)2Cl2， 二氧杂 环己烷 ； (c)BBr3， CH2Cl2，
(a)2- 三丁基锡烷基 - 呋喃 -3- 腈
将丁基锂 (1.6M 的己烷溶液， 3.3mL， 5.24mmol) 加入冰冷却的 2， 2， 6， 6- 四甲基哌 啶 (1.00mL， 5.90mmol) 在 THF(10mL) 中的溶液中。在 0℃下将该溶液搅拌 30 分钟， 然后冷 却至 -78 ℃。在 30 分钟内滴加呋喃 -3- 腈 (610mg， 6.56mmol) 在 THF(10mL) 中的溶液， 并 在 -78℃下将该混合物搅拌 2h。在 30 分钟内滴加三丁基氯化锡在 THF(2mL) 中的溶液， 并 将该混合物搅拌过夜。在此过程中将温度升至室温。将反应通过加入 NH4Cl( 饱和水溶液 ) 停止， 用 CHCl3 萃取， 通过分相器过滤。 蒸发有机相， 并通过柱色谱 ( 流动相 ： CH2Cl2- 异己烷 0 ∶ 1 → 1 ∶ 1) 纯化残余物得到标题化合物 (992mg， 50％ )。
(b)3-[7- 氯 -5- 甲氧基 -2-(4- 甲氧基 - 苯基 )- 苯并呋喃 -3- 基 ]- 呋喃 -2- 腈
在氮气下， 在微波瓶中， 将 7- 氯 -3- 碘 -5- 甲氧基 -2-(4- 甲氧基 - 苯基 )- 苯并 呋喃 ( 由 2- 氯 -4- 甲氧基 - 苯酚根据方法 2 制备， 24mg， 0.06mmol)、 2- 三丁基锡烷基 - 呋 喃 -3- 腈 (29mg， 0.08mmol) 和 Pd(PPh3)2Cl2(4mg， 0.01mmol) 与 二 氧 杂 环 己 烷 (0.5mL) 混 合。使反应在 130 ℃在微波反应器中进行 40 分钟。加入 NH4Cl( 饱和水溶液 )， 将该混合 物用 CHCl3 萃取， 并通过分相器过滤。蒸发有机相， 并通过柱色谱 ( 流动相 ： CH2Cl2- 异己烷 1 ∶ 3 → 1 ∶ 0) 纯化残余物得到标题化合物 (17mg， 77％ )。
(c)3-[7- 氯 -5- 羟基 -2-(4- 羟基 - 苯基 )- 苯并呋喃 -3- 基 ]- 呋喃 -2- 腈
向冰冷却的 3-[7- 氯 -5- 甲氧基 -2-(4- 甲氧基 - 苯基 )- 苯并呋喃 -3- 基 ]- 呋 喃 -2- 腈 (17mg， 0.04mmol) 在 CH2Cl2(1mL) 中的溶液中加入 BBr3(1M 的 CH2Cl2 溶液， 0.45mL， 0.45mmol)。将该混合物在 6℃的冰箱中储存过夜， 不搅拌。将反应通过加入 NaHCO3( 饱和 水溶液 ) 停止， 用 CH2Cl2-MeOH 19 ∶ 1 萃取， 并通过分相器过滤。蒸发有机相， 并通过柱色 谱 ( 流动相 ： CH2Cl2-MeOH 1 ∶ 0 → 9 ∶ 1) 纯化残余物得到标题化合物 (1mg， 6％ )。ES/MS 1 m/z ： 352(M+1)， 350(M-1) ； H NMR(MeOH-d4， 500MHz) ： 7.85(d， 2.02Hz， 1H)， 7.71(d， 8.61Hz， 1H)， 7.44-7.49(m， 2H)， 6.93(d， 2.00Hz， 1H)， 6.83-6.90(m， 3H)。
使用上述方法合成以下实施例化合物。E12 2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 -3- 噻吩 -3- 基 - 苯并呋喃 -5- 醇
R6 ＝噻吩 -3- 基 1
ES/MS m/z ： 323.6( 正 M+H)， 321.6( 负 M-H) ； H NMR( 丙 酮 -d6， 500MHz) ： 7.66-7.61(m， 4H)， 7.18(dd， 1H， J ＝ 4.4， 1.6Hz)， 6.96(m， 2H)， 6.84(m， 1H)， 6.77(m， 1H) 和 2.52(s， 3H)。
E13 3-(2， 5- 二氟 - 苯基 )-2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 - 苯并呋喃 -5- 醇 6
R ＝ 2， 5- 二氟 - 苯基 1
ES/MS m/z ： 353.7( 正 M+H)， 351.7( 负 M-H) ； H NMR( 丙酮 -d6， 500MHz) ： 7.57(m， 2H)， 7.36(m， 1H)， 7.31(m， 1H)， 6.97(m， 2H)， 6.80(m， 1H)， 6.70(m， 1H) 和 2.55(s， 3H)。
E14 3-[5- 羟基 -2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 - 苯并呋喃 -3- 基 ]- 苄腈
R6 ＝ 3- 氰基 - 苯基 1
ES/MS m/z ： 342.7( 正 M+H)， 340.7( 负 M-H) ； H NMR( 丙酮 -d6， 500MHz) ： 7.89(m， 1H)， 7.85-7.81(m， 2H)， 7.73(m， 1H)， 7.54(m， 2H)， 6.96(m， 2H)， 6.80(m， 2H) 和 2.54(s， 3H)。
E15 2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 -3- 间苯甲基 - 苯并呋喃 -5- 醇
R6 ＝ 3- 甲基 - 苯基 1
ES/MS m/z ： 331.7( 正 M+H)， 329.7( 负 M-H) ； H NMR( 丙酮 -d6， 500MHz) ： 7.58(m， 2H)， 7.39(t， 1H， J ＝ 7.7Hz)， 7.32(m， 1H)， 7.26(m， 1H)， 6.92(m， 2H)， 6.77(m， 1H)， 6.73(m， 1H)， 2.54(s， 3H) 和 2.38(s， 3H)。
E16 2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 -3- 噻吩 -2- 基 - 苯并呋喃 -5- 醇
R6 ＝噻吩 -2- 基 1
ES/MS m/z ： 321.6( 负 M-H) ； H NMR( 丙酮 -d6， 500MHz) ： 7.66(m， 2H)， 7.61(dd， 1H， J ＝ 4.8， 1.5Hz)， 7.24-7.21(m， 2H)， 6.97(m， 2H)， 6.84(m， 1H)， 6.79(m， 1H) 和 2.53(s， 3H)。
E17 2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 -3- 吡啶 -3- 基 - 苯并呋喃 -5- 醇
R6 ＝吡啶 -3- 基 1
ES/MS m/z ： 318.7( 负 M+H) ； H NMR( 丙 酮 -d6， 500MHz) ： 8.68(dd， 1H， J ＝ 2.3， 0.9Hz)， 8.63(dd， 1H， J ＝ 5.0， 1.7Hz)， 7.90(m， 1H)， 7.55(m， 2H)， 7.51(m， 1H)， 6.96(m， 2H)， 6.80(m， 1H)， 6.78(m， 1H) 和 2.55(s， 3H)。
E18 2-[5- 羟基 -2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 - 苯并呋喃 -3- 基 ]- 苄腈
R6 ＝ 2- 氰基 - 苯基 1
ES/MS m/z ： 342.3( 正 M+H)， 340.2( 负 M-H) ； H NMR( 丙酮 -d6， 500MHz) ： 7.96(m， 1H)， 7.89(m 1H)， 7.71(m， 1H)， 7.47(m， 2H)， 7.05(m， 1H)， 6.94(m， 2H)， 6.81(m， 1H)， 6.63(m， 1H) 和 2.57(s， 3H)。
E19 2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 -3-(3- 硝基 - 苯基 )- 苯并呋喃 -5- 醇
R6 ＝ 3- 硝基 - 苯基
1 ES/MS m/z ： 362.0( 正 M+H)， 360.0( 负 M-H) ； H NMR( 丙酮 -d6， 500MHz) ： 8.33(m， 1H)， 8.27(m， 1H)， 7.91(m， 1H)， 7.80(dd， 1H， J ＝ 7.6， 8.1Hz)， 7.50(m， 2H)， 6.87(m， 2H)， 6.75-6.73(m， 2H) 和 2.52(s， 3H)。
E20 5-[5- 羟基 -2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 - 苯并呋喃 -3- 基 ]- 噻吩 -2- 醛
R6 ＝ 5- 噻吩 -2- 醛 1
ES/MS m/z ： 349.0( 负 M-H) ； H NMR( 丙酮 -d6， 500MHz) ： 9.98(s， 1H)， 8.02(d， 1H， J ＝ 3.9Hz)， 7.60(m， 2H)， 7.38(d， 1H， J ＝ 3.9Hz)， 6.94(m， 2H)， 6.92(m， 1H)， 6.75(m， 1H) 和 2.50(s， 3H)。
E21 3-(3， 5- 二氟 - 苯基 )-2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 - 苯并呋喃 -5- 醇 6
R ＝ 3， 5- 二氟 - 苯基 1
ES/MS m/z ： 351.0( 负 M-H) ； H NMR( 丙 酮 -d6 ， 500MHz) ： 7.50(m ， 2H) ， 7.11-7.04(m， 3H)， 6.89(m， 2H)， 6.73-6.71(m， 2H) 和 2.50(s， 3H)。
E22 3-(3， 5- 二氯 - 苯基 )-2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 - 苯并呋喃 -5- 醇 6
R ＝ 3， 5- 二氯 - 苯基 1
ES/MS m/z ： 383+385( 负 M-H) ； H NMR( 丙酮 -d6， 500MHz) ： 7.52(t， 1H， J ＝ 1.9Hz)， 7.50(m， 2H)， 7.45(m， 2H)， 6.90(m， 2H)， 6.72-6.70(m， 2H) 和 2.50(s， 3H)。
E23 2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 -3-(2- 苯氧基 - 苯基 )- 苯并呋喃 -5- 醇
R6 ＝ 2- 苯氧基 - 苯基 1
ES/MS m/z ： 407.0( 负 M-H) ； H NMR( 丙 酮 -d6 ， 500MHz) ： 7.51(m ， 2H) ， 7.49-7.44(m， 2H)， 7.28(m， 1H)， 7.21-7.17(m， 2H)， 7.04(m， 1H)， 6.96(m， 1H)， 6.84(m， 2H)， 6.76(m， 2H)， 6.65(m， 1H)， 6.63(m， 1H) 和 2.45(s， 3H)。
E24 3- 联苯 -2- 基 -2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 - 苯并呋喃 -5- 醇
R6 ＝联苯 -2- 基 1
ES/MS m/z ： 391.0( 负 M-H) ； H NMR( 丙 酮 -d6 ， 500MHz) ： 7.56(m ， 1H) ， 7.52-7.49(m， 2H)， 7.45(m， 1H)， 7.32(m， 2H)， 7.13-7.10(m， 2H)， 7.06-7.04(m， 3H)， 6.75(m， 2H)， 6.58(m， 1H)， 6.39(m， 1H) 和 2.43(s， 3H)。
E25 3-(2- 羟基 - 苯基 )-2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 - 苯并呋喃 -5- 醇
R6 ＝ 2- 羟基 - 苯基 1
ES/MS m/z ： 331.0( 负 M-H) ； H NMR( 丙酮 -d6， 500MHz) ： 7.50(m， 2H)， 7.29(m， 1H)， 7.23(dd， 1H， J ＝ 7.6， 1.6Hz)， 7.04(dd， 1H， J ＝ 8.3， 1.0Hz)， 6.95(m， 1H)， 6.78(m， 2H)， 6.63(m， 1H)， 6.48(m， 1H) 和 2.48(s， 3H)。
E26 1-{3-[5- 羟基 -2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 - 苯并呋喃 -3- 基 ]- 苯基 }- 乙 酮
R6 ＝ 4- 乙酰基 - 苯基 1
ES/MS m/z ： 357.0( 负 M-H) ； H NMR( 丙 酮 -d6， 500MHz) ： 8.10(m， 1H)， 8.02(m， 1H)， 7.70(m， 1H)， 7.64(m， 1H)， 7.49(m， 2H)， 6.84(m， 2H)， 6.71-6.70(m， 2H)， 2.60(s， 3H) 和 2.51(s， 3H)。
E27 2-(4- 羟基 - 苯基 )-3-(3- 甲磺酰基 - 苯基 )-7- 甲基 - 苯并呋喃 -5- 醇
R6 ＝ 3- 甲磺酰基 - 苯基1 ES/MS m/z ： 393.0( 负 M-H) ； H NMR( 丙 酮 -d6， 500MHz) ： 8.05(m， 1H)， 7.97(m， 1H)， 7.81(m， 1H)， 7.77(m， 1H)， 7.49(m， 2H)， 6.87(m， 2H)， 6.74-6.72(m， 2H)， 3.17(s， 3H) 和 2.51(s， 3H)。
E28 3-(3- 乙基硫烷基 - 苯基 )-2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 - 苯并呋喃 -5- 醇
R6 ＝ 3- 乙基硫烷基 - 苯基 1
ES/MS m/z ： 375.0( 负 M-H) ； H NMR( 丙酮 -d6， 500MHz) ： 7.50(m， 2H)， 7.44(m， 1H)， 7.41(m， 1H)， 7.36(m， 1H)， 7.28(m， 1H)， 6.85(m， 2H)， 6.69(m， 2H)， 2.97(q， 2H， J ＝ 7.3Hz)， 2.50(s， 3H) 和 1.27(t， 3H， J ＝ 7.3Hz)。
E29 2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 -3- 喹啉 -5- 基 - 苯并呋喃 -5- 醇
R6 ＝喹啉 -5- 基 1
ES/MS m/z ： ( 负 M-H) ； H NMR( 丙酮 -d6， 500MHz) ： 8.94(dd， 1H， J ＝ 4.1， 1.6Hz)， 8.18(m， 1H)， 8.04(m， 1H)， 7.90(dd， 1H， J ＝ 8.5， 7.1Hz)， 7.66(dd， 1H， J ＝ 7.1， 1.2Hz)， 7.39(dd， 1H， J ＝ 8.5， 4.1Hz)， 7.33(m， 2H)， 6.72-6.69(m， 3H)， 6.28(d， 1H， J ＝ 2.0Hz) 和 2.57(s， 3H)。
E30 1-{5-[5- 羟 基 -2-(4- 羟 基 - 苯 基 )-7- 甲 基 - 苯 并 呋 喃 -3- 基 ]- 噻 吩 -2- 基 }- 乙酮
R6 ＝ 4- 乙酰基 - 噻吩 -2- 基 1
ES/MS m/z ： 363.0( 负 M-H) ； H NMR( 丙酮 -d6， 500MHz) ： 7.90(d， 1H， J ＝ 3.8Hz)， 7.60(m， 2H)， 7.26(d， 1H， J ＝ 3.8Hz)， 6.92(m， 2H)， 6.90(m， 1H)， 6.73(m， 1H)， 2.57(s， 3H) 和 2.49(s， 3H)。
E31 2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 -2’ ， 3’ - 二氢 -[3， 5’ ] 二苯并呋喃基 -5- 醇 6
R ＝ 1- 苯基 - 乙烯基 1
ES/MS m/z ： 357( 负 M-H) ； H NMR( 丙酮 -d6， 500MHz) ： 7.55(m， 2H)， 7.29(d， 1H， J ＝ 2.1Hz)， 7.18(dd， 1H， J ＝ 8.2， 2.1Hz)， 7.00(d， 1H， J ＝ 8.2Hz)， 6.83(m， 2H)， 6.71(m， 1H)， 6.66(m， 1H)， 3.72(t， 2H， J ＝ 7.4Hz)， 3.22(t， 2H， J ＝ 7.4Hz) 和 2.49(s， 3H)。
E32 2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 -3-(3- 三氟甲氧基 - 苯基 )- 苯并呋喃 -5- 醇
R6 ＝ 3- 三氟甲氧基 - 苯基 1
ES/MS m/z ： 399.0( 负 M-H) ； H NMR( 丙 酮 -d6 ， 500MHz) ： 7.64(m ， 1H) ， 7.52-7.48(m， 3H)， 7.40-7.36(m， 2H)， 6.86(m， 2H)， 6， 71(m， 2H) 和 2.50(s， 3H)。
E33 3-(2- 氟 - 吡啶 -3- 基 )-2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 - 苯并呋喃 -5- 醇
R6 ＝ 2- 氟 - 吡啶 -3- 基 1
ES/MS m/z ： 334.0( 负 M-H) ； H NMR( 丙酮 -d6， 500MHz) ： 8.32(m， 1H)， 8.03(m， 1H)， 7.48(m， 1H)， 7.46(m， 2H)， 6.87(m， 2H)， 6.71(m， 1H)， 6.57(m， 1H) 和 2.52(s， 3H)。
E34 3- 苯并 [b] 噻吩 -2- 基 -2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 - 苯并呋喃 -5- 醇
R6 ＝苯并 [b] 噻吩 -2- 基
ES/MS m/z ： 373.3( 正 M+H)， 371.3( 负 M-H)。
E35 2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 -3-(1- 甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 )- 苯并呋喃 -5- 醇
R6 ＝ 1- 甲基 -1H- 吡唑 -4- 基
ES/MS m/z ： 321.3( 正 M+H)。E36 2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 -3-(1- 苯基 - 乙烯基 )- 苯并呋喃 -5- 醇 R6 ＝ 1- 苯基 - 乙烯基 ES/MS m/z ： 343.3( 正 M+H)。 E37 2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 -3- 吡啶 -4- 基 - 苯并呋喃 -5- 醇 R6 ＝吡啶 -4- 基 ES/MS m/z ： 318.3( 正 M+H)。 E38 2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 -3-(1- 甲基 -1H- 吡咯 -2- 基 )- 苯并呋喃 -5- 醇 R6 ＝ 1- 甲基 -1H- 吡咯 -2- 基 ES/MS m/z ： 320.4( 正 M+H)。 E39 3-(3， 5- 二 甲 基 - 异 噁 唑 -4- 基 )-2-(4- 羟 基 - 苯 基 )-7- 甲 基 - 苯 并 呋喃 -5- 醇 R6 ＝ 3， 5- 二甲基 - 异噁唑 -4- 基 1
ES/MS m/z ： 336.3( 正 M+H)， 334.3( 负 M-H) ； H NMR( 丙酮 -d6， 500MHz) ： 7.53(m， 2H)， 6.91(m， 2H)， 6.70(m， 1H)， 6.52(m， 1H)， 2.51(s， 3H)， 2.24(s， 3H) 和 1.99(s， 3H)。
E40 3-(5- 氟 -2- 甲基 - 苯基 )-2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 - 苯并呋喃 -5- 醇
R6 ＝ 5- 氟 -2- 甲基 - 苯基 1
ES/MS m/z ： 349.3( 正 M+H)， 347.3( 负 M-H) ； H NMR( 丙 酮 -d6， 500MHz) ： 7.44-7.39(m， 3H)， 7.15(m， 1H)， 7.08(dd， 1H， J ＝ 9.5， 2.8Hz)， 6.82(m， 2H)， 6.69(m， 1H)， 6.40(m， 1H)， 2.52(s， 3H) 和 2.06(s， 3H)。
E41 3-[1-(4- 氟 - 苯基 )- 乙烯基 ]-2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 - 苯并呋喃 -5- 醇
R6 ＝ 1-(4- 氟 - 苯基 )- 乙烯基 1
ES/MS m/z ： 361.4( 正 M+H)， 359.4( 负 M-H) ； H NMR( 丙酮 -d6， 500MHz) ： 7.66(m， 2H)， 7.51(m， 2H)， 7.06(m， 2H)， 6.82(m， 2H)， 6.66(m， 1H)， 6.48(m， 1H)， 6.01(d， 1H， J ＝ 1.0Hz)， 5.45(d， 1H ； J ＝ 1.0Hz)， 2.50(s， 3H)。
E42 3- 环丙基 -2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 - 苯并呋喃 -5- 醇
R6 ＝环丙基
ES/MS m/z ： 279.4( 负 M-H)。
E43 3-(5- 氟 -2- 甲氧基 - 苯基 )-2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 - 苯并呋喃 -5- 醇
R6 ＝ 5- 氟 -2- 甲氧基 - 苯基 1
ES/MS m/z ： 365.3( 正 M+H)， 363.3( 负 M-H) ； H NMR( 丙酮 -d6， 500MHz) ： 7.46(m， 2H)， 7.22-7.15(m， 2H)， 7.09(dd， 1H， J ＝ 9.1， 2.9Hz)， 6.82(m， 2H)， 6.66(m， 1H)， 6.50(m， 1H)， 3.65(s， 3H) 和 2.50(s， 3H)。
E44 2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 -3-(1H- 吡咯 -2- 基 )- 苯并呋喃 -5- 醇
R6 ＝ 1H- 吡咯 -2- 基 1
ES/MS m/z ： 306.3( 正 M+H)， 304.3( 负 M-H) ； H NMR( 丙酮 -d6， 500MHz) ： 7.55(m， 2H)， 6.93(m， 1H)， 6.85(m， 2H)， 6.76(m， 1H)， 6.66(m， 1H)， 6.29-6.26(m， 2H) 和 2.48(s， 3H)。
E45 3- 呋喃 -2- 基 -2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 - 苯并呋喃 -5- 醇
R6 ＝呋喃 -2- 基 1
ES/MS m/z ： 307.3( 正 M+H)， 305.3( 负 M-H) ； H NMR( 丙 酮 -d6， 500MHz) ：
7.67(t， 1H， J ＝ 1.3Hz)， 7.64(m， 2H)， 6.98(d， 1H， J ＝ 1.3Hz)， 6.94(m， 2H)， 6.71(m， 1H)， 6.62-6.60(m， 2H) 和 2.48(s， 3H)。
E46 2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 -3- 噻唑 -5- 基 - 苯并呋喃 -5- 醇
R6 ＝噻唑 -5- 基 1
ES/MS m/z ： 324.3( 正 M+H)， 322.3( 负 M-H) ； H NMR( 丙酮 -d6， 500MHz) ： 9.10(s， 1H)， 7.97(s， 1H)， 7.56(m， 2H)， 6.91(m， 2H)， 6.75-6.72(m， 2H) 和 2.50(s， 3H)。
E47 2-(4- 羟基 - 苯基 )-3-(2- 甲氧基 - 噻唑 -4- 基 )-7- 甲基 - 苯并呋喃 -5- 醇
R6 ＝ 2- 甲氧基 - 噻唑 -4- 基 1
ES/MS m/z ： 354.3( 正 M+H)， 352.2( 负 M-H) ； H NMR( 丙酮 -d6， 500MHz) ： 7.60(m， 2H)， 6.96(m， 2H)， 6.72(m， 1H)， 6.66(m， 1H)， 6.47(s， 1H)， 3.01(s， 3H) 和 2.51(s， 3H)。
E48 2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 -3- 噻唑 -2- 基 - 苯并呋喃 -5- 醇
R6 ＝噻唑 -2- 基 1
ES/MS m/z ： 324.2( 正 M+H)， 322.2( 负 M-H) ； H NMR( 丙 酮 -d6， 500MHz) ： 极弱 9.10(s， 1H)， 7.97(s， 1H)， 7.57(m， 2H)， 6.91(m， 2H)， 6.75(m， 1H)， 6.73(m， 1H) 和 2.50(s， 3H)。
E49 2-(4- 羟基 - 苯基 )-3-(2- 异丙基 - 苯基 )-7- 甲基 - 苯并呋喃 -5- 醇
R6 ＝ 2- 异丙基 - 苯基 1
ES/MS m/z ： 359.3( 正 M+H)， 357.3( 负 M-H) ； H NMR( 丙酮 -d6， 500MHz) ： 7.54(dd， 1H， J ＝ 7.8， 1.2Hz)， 7.47(m， 1H)， 7.41(m， 2H)， 7.32(m， 1H)， 7.23(dd， 1H， J ＝ 7.5， 1.4Hz)， 6.78(m， 2H)， 6.67(m， 1H)， 6.36(m， 1H)， 2.93(m， 1H)， 2.52(s， 3H)， 1.10(d， 3H， J ＝ 6.9Hz) 和 1.00(d， 3H， J ＝ 6.9Hz)。
E50 3-(2- 乙基 - 苯基 )-2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 - 苯并呋喃 -5- 醇
R6 ＝ 2- 乙基 - 苯基 1
ES/MS m/z ： 345.3( 正 M+H)， 343.3( 负 M-H) ； H NMR( 丙 酮 -d6， 500MHz) ： 7.46-7.40(m ， 4H) ， 7.33(m ， 1H) ， 7.26(m ， 1H) ， 6.78(m ， 2H) ， 6.66(m ， 1H) ， 6.35(m ， 1H) ， 2.52(s， 3H)， 2.48(m， 2H) 和 0.96(t， 3H， J07.5Hz)。
E51 (E)-3-{2-[5- 羟基 -2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 - 苯并呋喃 -3- 基 ]- 苯 基 }- 丙烯腈
R6 ＝ 2-((E)-2- 氰基 - 乙烯基 )- 苯基 1
ES/MS m/z ： 368.3( 正 M+H)， 366.3( 负 M-H) ； H NMR( 丙 酮 -d6， 500MHz) ： 不纯 7.64-7.55(m， 3H)， 7.47(dd， 1H， J ＝ 7.6， 1.4Hz)， 7.38-7.31(m， 3H)， 6.80(m， 2H)， 6.71(m， 1H)， 6.39(m， 1H)， 6.20(d， 1H， J ＝ 16.6Hz) 和 2.53(s， 3H)。
E52 3-(2- 丁氧基 - 苯基 )-2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 - 苯并呋喃 -5- 醇
R6 ＝ 2- 丁氧基 - 苯基 1
ES/MS m/z ： 389.3( 正 M+H)， 387.3( 负 M-H) ； H NMR( 丙酮 -d6， 500MHz) ： 7.47(m， 2H)， 7.40(m， 1H)， 7.34(dd， 1H， J ＝ 7.4， 1.7Hz)， 7.13(d， 1H， J ＝ 8.0Hz)， 7.06(m， 1H)， 6.80(m， 2H)， 6.64(m， 2H)， 6.53(m， 1H)， 3.88(m， 2H)， 2.50(s， 3H)， 1.34(m， 2H)， 1.10(m， 2H) 和 0.71(t， 3H， J ＝ 7.3Hz)。
E53 2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 -3-(2- 三氟甲氧基 - 苯基 )- 苯并呋喃 -5- 醇R6 ＝ 2- 三氟甲氧基 - 苯基 1
ES/MS m/z ： 401.3( 正 M+H)， 399.3( 负 M-H) ； H NMR( 丙酮 -d6， 500MHz) ： 7.62(m， 1H)， 7.55-7.52(m， 3H)， 7.42(m， 2H)， 6.83(m， 2H)， 6.68(m， 1H)， 6.50(m， 1H) 和 2.51(s， 3H)。
E54 4-[5- 羟基 -2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 - 苯并呋喃 -3- 基 ]- 噻吩 -2- 醛
R6 ＝噻吩 -2- 醛 1
ES/MS m/z ： 351.3( 正 M+H)， 349.2( 负 M-H) ； H NMR( 丙酮 -d6， 500MHz) ： 10.03(s， 1H) ， 8.09(s ， 1H) ， 8.03(s ， 1H) ， 7.55(m ， 2H) ， 6.89(m ， 2H) ， 6.76(m ， 1H) ， 6.71(m ， 1H) 和 2.50(s， 3H)。
E55 3-((E)-2- 环丙基 - 乙烯基 )-2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 - 苯并呋喃 -5- 醇
R6 ＝ (E)-2- 环丙基 - 乙烯基 1
ES/MS m/z ： 307.3( 正 M+H)， 305.3( 负 M-H) ； H NMR( 丙酮 -d6， 500MHz) ： 7.67(m， 2H)， 7.02-6.99(m， 3H)， 6.73-6.65(m， 2H)， 5.85(dd， 1H， J ＝ 16.0， 9.1Hz)， 2.53(s， 3H)， 1.66(m， 1H)， 0.85(m， 2H) 和 0.57(m， 2H)。
E56 2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 -3-(3- 甲基 - 噻吩 -2- 基 )- 苯并呋喃 -5- 醇
R6 ＝ 3- 甲基 - 噻吩 -2- 基
1 ES/MS m/z ： 410.3( 正 M+H)， 408.3( 负 M-H) ； H NMR( 丙酮 -d6， 500MHz) ： 7.54(d， 1H， J ＝ 5.1Hz)， 7.52(m， 2H)， 7.08(d， 1H， J ＝ 5.1Hz)， 6.85(m， 2H)， 6.68(m， 1H)， 6.59(m， 1H)， 2.51(s， 3H) 和 1.99(s， 3H)。
E57 2-[5- 羟基 -2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 - 苯并呋喃 -3- 基 ]- 噻吩 -3- 醛
R6 ＝噻吩 -2- 基 -3- 醛
ES/MS m/z ： 349.2( 正 M+H)， 347.2( 负 M-H)。
E58 2-[5- 羟基 -2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 - 苯并呋喃 -3- 基 ]- 噻吩 -3- 腈
R6 ＝ 3- 氰基 - 噻吩 -2- 基 1
ES/MS m/z ： 410.3( 正 M+H)， 408.3( 负 M-H) ； H NMR( 丙酮 -d6， 500MHz) ： 7.54(d， 1H， J ＝ 5.1Hz)， 7.52(m， 2H)， 7.08(d， 1H， J ＝ 5.1Hz)， 6.85(m， 2H)， 6.68(m， 1H)， 6.59(m， 1H)， 2.51(s， 3H) 和 1.99(s， 3H)。
E59 7- 溴甲基 -2-(4- 羟基 - 苯基 )-3- 苯基 - 苯并呋喃 -5- 醇
R6 ＝苯基 R10 ＝溴甲基 1
ES/MS m/z ： 395.0+397.1( 正 M+H)， 393.1+394.9( 负 M-H) ； H NMR MeOH-d4 ： 7.35-7.47(m， 7H)， 6.80(d， 2.40Hz， 1H)， 6.70-6.74(m， 3H)， 4.79(s， 2H)。
E60 5- 羟基 -2-(4- 羟基 - 苯基 )-3- 噻吩 -3- 基 - 苯并呋喃 -7- 腈
R6 ＝噻吩 -3- 基 R10 ＝氰基 1
ES/MS m/z ： 344.4( 正 M+H)， 393.1+332.2( 负 M-H) ； H NMR MeOH-d4 ： 7.59(dd， 2.87Hz， 5.02Hz， 1H)， 7.52(dd， 1.30Hz， 2.87Hz， 1H)， 7.48-7.52(m， 2H)， 7.10-7.14(m， 2H)，
7.03(d， 2.51Hz， 1H)， 6.77-6.81(m， 2H)。
E61 5- 羟基 -2-(4- 羟基 - 苯基 )-3- 苯基 - 苯并呋喃 -7- 醛
R6 ＝苯基， R10 ＝醛 1
ES/MS m/z ： 331.3( 正 M+H)， 329.3( 负 M-H) ； H NMR MeOH-d4 ： 10.44(s， 1H)， 3.40-3.51(m， 7H)， 7.21(d， 2.52Hz， 1H)， 7.06(d， 2.53Hz， 1H)， 6.71-6.76(m， 2H)。
E62 7- 氯 -2-(4- 羟基 - 苯基 )-3- 苯基 - 苯并呋喃 -5- 醇
R6 ＝苯基 R10 ＝氯 1
ES/MS m/z ： 337.2( 正 M+H)， 335.3( 负 M-H) ； H NMR MeOH-d4 ： 7.45-7.50(m， 2H)， 7.38-7.45(m， 5H)， 6.80(d， 2.22Hz， 1H)， 6.71-6.75(m， 2H)， 6.69(d， 2.22Hz， 1H)。
E63 7- 氯 -2-(4- 羟基 - 苯基 )-3- 噻吩 -3- 基 - 苯并呋喃 -5- 醇
R6 ＝噻吩 -3- 基 R10 ＝氯 1
ES/MS m/z ： 343.2( 正 M+H)， 341.2( 负 M-H) ； H NMR MeOH-d4 ： 7.56(dd， 2.85Hz， 5.02Hz ， 1H) ， 7.46-7.50(m ， 3H) ， 7.11(dd ， 1.25Hz ， 5.00Hz ， 1H) ， 6.80(d ， 2.25Hz ， 1H) ， 6.75-6.79(m， 3H)。
E64 5- 羟基 -2-(4- 羟基 - 苯基 )-3- 噻吩 -3- 基 - 苯并呋喃 -7- 醛
R6 ＝噻吩 -3- 基， R10 ＝醛 1
ES/MS m/z ： 337.2( 正 M+H)， 335.2( 负 M-H) ； H NMR MeOH-d4 ： 10.45(s， 1H)， 7.59(dd， 2.97Hz， 4.88Hz， 1H)， 7.52-7.57(m， 3H)， 7.22-7.24(m， 1H)， 7.14-7.16(m， 2H)， 6.86-6.81(m， 2H)。
E65 2-(4- 羟基 - 苯基 )-3- 噻吩 -3- 基 -7- 乙烯基 - 苯并呋喃 -5- 醇
R6 ＝噻吩 -3- 基 R10 ＝乙烯基 1
ES/MS m/z ： 335.3( 正 M+H)， 333.2( 负 M-H) ； H NMR MeOH-d4 ： 7.56(dd， 3.10Hz， 5.06Hz， 1H)， 7.46-7.52(m， 3H)， 7.13(dd， 1.24Hz， 5.03Hz， 1H)， 6.96(dd， 11.25Hz， 17.77Hz， 1H)， 6.81(d， 2.36Hz， 1H)， 6.74-6.80(m， 3H)， 6.23(dd， 1.36Hz， 11.32Hz)， 5.52(dd， 1.36Hz， 11.32Hz， 1H)。
E66 2-[7- 氯 -5- 羟基 -2-(4- 羟基 - 苯基 )- 苯并呋喃 -3- 基 ]- 噻吩 -3- 腈
R6 ＝ 3- 氰基 - 噻吩 -2- 基 R10 ＝氯
ES/MS m/z ： 368.2( 正 M+H)， 366.2( 负 M-H)。
E67 3-(3- 氰基 - 呋喃 -2- 基 )-5- 羟基 -2-(4- 羟基 - 苯基 )- 苯并呋喃 -7- 腈
R6 ＝ 3- 氰基 - 呋喃 -2 基 R10 ＝氰基
ES/MS m/z ： 343.1( 正 M+H)， 341.1( 负 M-H)。1H NMR MeOH-d4 ： 7.87(d， 1.93Hz， 1H)， 7.48-7.52(m， 2H)， 7.24(d， 2.23Hz， 1H)， 7.14(d， 2.22Hz， 1H)， 6.95(d， 1.91Hz， 1H)， 6.86-6.90(m， 2H)。
E68 2-[5- 羟基 -2-(4- 羟基 - 苯基 )-7- 三氟甲基 - 苯并呋喃 -3- 基 ]- 呋喃 -3- 腈
R6 ＝ 3- 氰基 - 呋喃 -2- 基 R10 ＝三氟甲基
ES/MS m/z ： 386.1( 正 M+H)， 384.0( 负 M-H)。1H NMR MeOH-d4 ： 7.86(d， 2.21Hz， 1H)， 7.44-7.49(m， 2H)， 7.15(d， 2.24Hz， 1H)， 7.08(d， 2.30Hz， 1H)， 6.83-6.90(m， 3H)。
E69 2-[2-(3- 氟 -4- 羟 基 - 苯 基 )-5- 羟 基 -7- 甲 基 - 苯 并 呋 喃 -3- 基 ]- 呋 喃 -3- 腈R6 ＝ 3- 氰基 - 呋喃 -2- 基 R ＝ 3- 氟 -4- 羟基 - 苯基 1
ES/MS m/z ： 350.1( 正 M+H)， 348.1( 负 M-H)。 H NMR MeOH-d4 ： 7.84(d， 2.19Hz， 1H)， 7.30(dd， 2.05Hz， 12.06Hz， 1H)， 7.22-7.26(m， 1H)， 6.97(t， 8.78Hz， 1H)， 6.92(d， 2.21Hz， 1H)， 6.77(d， 2.21Hz， 1H)， 6.68-6.71(m， 1H)， 2.51(s， 3H)。
E70 2-(4- 羟基 - 苯基 )-6- 甲基 -3- 苯基 - 苯并呋喃 -5- 醇
R ＝ 4- 羟基苯基 R9 ＝甲基
R10 ＝氢
ES/MS m/z ： 317.0( 正 M+H)， 315.1( 负 M-H)。1H NMR MeOH-d4 ： 7.34-7.48(m， 7H)， 7.22(s， 1H)， 6.76(s， 1H)， 6.68-6.72(m， 2H)， 2.30(s， 1H)。
E71 2-(2， 5- 二氟 -4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 -3- 苯基 - 苯并呋喃 -5- 醇
R ＝ 2， 5- 二氟 -4- 羟基 - 苯基 1
ES/MS m/z ： 335.6( 正 M+H)， 333.4( 负 M-H) ； H NMR MeOH-d4 ： 7.34-7.42(m， 4H)， 7.29-7.34(m， 1H)， 7.15(dd， 6.61Hz， 11.34Hz， 1H)， 6.79(d， 2.21Hz， 1H)， 6.63-6.69(m， 2H)， 2.48(s， 3H)。
E72 2-(2， 6- 二氟 -4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 -3- 苯基 - 苯并呋喃 -5- 醇
R ＝ 2， 6- 二氟 -4- 羟基 - 苯基 1
ES/MS m/z ： 335.6( 正 M+H)， 333.1( 负 M-H) ； H NMR MeOH-d4 ： 7.33-7.38(m， 4H)， 7.26-7.30(m， 1H)， 6.87(d， 2.45Hz， 1H)， 6.69(d， 2.45Hz， 1H)， 6.42(d， 9.37Hz， 2H)， 2.47(s， 3H)。
E73 2-(3- 氟 -4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 -3- 苯基 - 苯并呋喃 -5- 醇
R ＝ 3- 氟 -4- 羟基 - 苯基 1
ES/MS m/z ： 353.3( 正 M+H)， 351.4( 负 M-H) ； H NMR MeOH-d4 ： 7.46-7.51(m， 2H)，
7.39-7.44(m， 3H)， 7.20-7.26(m， 2H)， 6.81-6.86(m， 1H)， 6.63(d， 2.27Hz， 1H)， 6.58(d， 2.27Hz， 1H)， 2.50(s， 3H)。
E74 2-(1H- 吲唑 -5- 基 )-7- 甲基 -3- 苯基 - 苯并呋喃 -5- 醇
R ＝ 1H- 吲唑 -5- 基
1 ES/MS m/z ： 341.3( 正 M+H)， 339.1( 负 M-H) ； H NMR MeOH-d4 ： 8.04-8.06(m， 1H) ， 7.97-8.01(m ， 1H) ， 7.56-7.59(m ， 1H) ， 7.35-7.47(m ， 6H) ， 6.68(d ， 2.18Hz ， 1H) ， 6.63-6.66(m， 1H)， 2.54(s， 3H)。
E75 2-(3， 5- 二氟 -4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 -3- 苯基 - 苯并呋喃 -5- 醇
R ＝ 3， 5- 二氟 -4- 羟基 - 苯基 1
ES/MS m/z ： 353.2( 正 M+H)， 351.3( 负 M-H) ； H NMR MeOH-d4 ： 7.49-7.54(m， 2H)， 7.42-7.47(m， 3H)， 7.07-7.11(m， 2H)， 6.65(d， 2.28Hz， 1H)， 6.56(d， 2.28Hz， 1H)。
E76 2-(3- 氯 -5- 氟 -4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 -3- 苯基 - 苯并呋喃 -5- 醇
R ＝ 3- 氯 -5- 氟 -4- 羟基 - 苯基 1
ES/MS m/z ： 368.9( 正 M+H)， 367.0( 负 M-H) ； H NMR MeOH-d4 ： 7.48-7.54(m， 2H)， 4.41-7.47(m， 3H)， 7.33-7.35(m， 1H)， 7.17(dd， 2.21Hz， 11.79Hz， 1H)， 6.64-6.66(m， 1H)， 7.57(d， 2.30Hz， 1H)， 2.51(s， 3H)。
E77 5-(5- 甲氧基 -7- 甲基 -3- 苯基 - 苯并呋喃 -2- 基 )-1H- 吲唑
R ＝ 1H- 吲唑 R8 ＝甲氧基
ES/MS m/z ： 355.4( 正 M+H)， 353.2( 负 M-H)。1H NMR CDCl3 ： 8.10-8.13(m， 2H)， 7.66(d， 8.73Hz， 1H)， 7.40-7.53(m， 6H)， 6.76-6.79(m， 2H)， 3.80(s， 3H)， 2.60(s， 3H)。
E78 2-(3- 氟 -4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 -3- 噻吩 -3- 基 - 苯并呋喃 -5- 醇 R6 ＝噻吩 -3- 基 R ＝ 3- 氟 -4- 羟基 - 苯基R10 ＝甲基 1
ES/MS m/z ： 341.3( 正 M+H)， 339.1( 负 M-H) ； H NMR MeOH-d4 ： 7.58(dd， 3.16Hz， 4.73Hz， 1H)， 7.48(dd， 1.28Hz， 3.16Hz， 1H)， 7.27-7.31(m， 2H)， 7.13(dd， 1.25Hz， 4.73Hz， 1H)， 6.85-6.90(m， 1H)， 6.64-6.66(m， 1H)， 6.62-6.63(m， 1H)， 2.50(s， 3H)。
E79 2-(2- 氟 -4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 -3- 噻吩 -3- 基 - 苯并呋喃 -5- 醇
R6 ＝噻吩 -3- 基 R ＝ 2- 氟 -4- 羟基 - 苯基 10
R ＝甲基 1
ES/MS m/z ： 341.3( 正 M+H)， 339.1( 负 M-H) ； H NMR MeOH-d4 ： 7.42(dd， 2.83Hz， 5.04Hz， 1H)， 7.38(dd， 1.25Hz， 2.83Hz， 1H)， 7.30(t， 8.49Hz， 1H)， 7.03(dd， 1.26Hz， 5.04Hz， 1H)， 6.88-6.89(m， 1H)， 6.63-6.66(m， 2H)， 6.57(dd， 2.22Hz， 11.67Hz， 1H)， 2.47(s， 3H)。E80 2-(2， 6- 二氟 -4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 -3- 噻吩 -3- 基 - 苯并呋喃 -5- 醇 6
R ＝噻吩 -3- 基 R ＝ 2， 6- 二氟 -4- 羟基 - 苯基 10
R ＝甲基 1
ES/MS m/z ： 359.3( 正 M+H)， 357.1( 负 M-H) ； H NMR MeOH-d4 ： 7.42(dd， 2.83Hz， 5.00Hz， 1H)， 7.38(dd， 1.28Hz， 2.83Hz， 1H)， 7.05(dd， 1.28Hz， 5.00Hz， 1H)， 6.96(d， 2.50Hz， 1H)， 6.69(d， 2.50Hz， 1H)， 6.47(d， 9.27Hz， 1H)， 2.46(s， 3H)。
E81 2-(3- 氯 -5- 氟 -4- 羟基 - 苯基 )-7- 甲基 -3- 噻吩 -3- 基 - 苯并呋喃 -5- 醇
R6 ＝噻吩 -3- 基 R ＝ 3- 氯 -5- 氟 -4- 羟基 - 苯基 10
R ＝甲基 1
ES/MS m/z ： 373.1( 负 M-H) ； H NMR MeOH-d4 ： 7.62(dd， 2.84Hz， 5.04Hz， 1H)， 7.50(dd ， 1.27Hz ， 2.84Hz ， 1H) ， 7.40(t ， 1.87Hz ， 1H) ， 7.24(1.93Hz ， 5.04Hz) ， 7.14(dd ， 1.27Hz， 5.04Hz， 1H)， 6.63-6.66(m， 2H)， 2.50(s， 3H)。
E82 2-[2-(3- 氯 -5- 氟 -4- 羟基 - 苯基 )-5- 羟基 -7- 甲基 - 苯并呋喃 -3- 基 ]- 呋 喃 -3- 腈
R6 ＝ 3- 氰基 - 呋喃 -2- 基 R ＝ 3- 氯 -5- 氟 -4- 羟基 - 苯基 10
R ＝甲基 1
ES/MS m/z ： 384.0( 正 M+H)， 382.0( 负 M-H)。 H NMR MeOH-d4 ： 7.87(d， 1.97Hz， 1H)， 7.35-7.38(m， 1H)， 7.26(dd， 2.14Hz， 11.36Hz， 1H)， 6.94(d， 1.95Hz， 1H)， 6.79(d， 2.22Hz， 1H)， 6.72(d， 2.16Hz， 1H)， 2.52(s， 3H)。
E83 2-[7- 氟 -5- 羟基 -2-(1H- 吲唑 -5- 基 )- 苯并呋喃 -3- 基 ]- 呋喃 -3- 腈
R6 ＝ 3- 氰基 - 呋喃 -2- 基 R ＝ 1H- 吲唑 -5- 基 10
R ＝氟
ES/MS m/z ： 360.0( 正 M+H)， 358.1( 负 M-H)。1H NMR MeOH-d4 ： 8.12-8.15(m， 2H)， 7.87(d， 2.19Hz， 1H)， 7.61-7.64(m， 1H)， 7.58(dd， 1.55Hz， 8.11Hz， 1H)， 6.94(d， 2.19Hz， 1H)， 6.81(d， 2.19Hz， 1H)， 6.70(dd， 2.22Hz， 12.30Hz， 1H)。
实施例 84 ： 雌激素结合分析描述
将雌激素受体配体结合分析设计为闪烁迫近分析 (SPA)， 使用氚标记的雌二 3 醇 ( H-E2) 和 重 组 体 表 达 的 生 物 素 化 的 雌 激 素 受 体 结 合 区 域。 人 类 ERα(ERα-LBD， pET-N-AT#1， aa 301-595) 和 ERβ(ERβ-LBD， pET-N-AT#1， aa 255-530) 蛋白质的结合区 域由大肠杆菌 ((BL21， (DE3)， pBirA)) 在补充有 50μM 生物素的 2xLB 培养基中于 22C 产 生。IPTG 诱导三小时 (0.55mM) 后， 通过以 7300xg 离心 15 分钟得到细胞， 并将细胞沉淀 在 -20℃下冷冻储存。使用 5g 悬浮于 50mL 提取缓冲液 (50mM Tris， pH 8.0， 100mM KCl， 4mM EDTA， 4mM DDT 和 0.1mMPMSF) 中的细胞萃取 ERα 和 ERβ。使所述细胞悬浮液通过 MicrofluidizerM-110L( 微流体 ) 两次， 并以 15,000xg 离心 60 分钟。将上层清液等分， 并 储存在 -70℃。
将 ERα-LBD 或 ERβ-LBD 提取物稀释到测试缓冲液 (18mMK2HPO4， 2mM KH2PO4， 20mM NasMoO4， 1mM EDTA， 1mM TCEP) 中， 对于 α 和 β， 稀释度分别为 1 ∶ 676 和 1 ∶ 517。稀释 后的受体浓度应为 900fmol/L。 在室温下， 用浓度为 0.43mg/mL 的抗生蛋白链菌素包被的聚 乙烯甲苯 SPA 小球 (RPNQ0007， GE Healthcare) 将提取物预孵育 1h。在 157μM 至 37.5pM 浓度范围内评价试验化合物。 试验化合物储备溶液应在 100％ DMSO 中制成分析中试验需要的最终浓度的 5 倍。384 孔板的试验孔中 DMSO 的量为 20％。 向测试板中加入 18μl 试验化合物的等分试样， 接着加入 35μl 预孵育的受体 /SPA 小球混 3 合物， 最后加入 35μl 3nM H-E2。用塑料封膜盖住该板， 以 1000rpm 离心 1 分钟， 并在室温 下在摇荡器上平衡过夜。第二天早晨， 以 2000rpm 使该板离心 5 分钟， 并在平板闪烁计数器 ( 例如 PerkinElmer Microbeta 1450 Trilux) 上测量。
对于能够替换受体上的 3[H]-E2 的化合物， 通过非线性四参数 Logistic 模型确 定其 IC50 值 ( 抑制 50％的 3[H]-E2 结合需要的浓度 ) ； b ＝ ((b 最大值 -b 最小值 )/(1+(I/IC50) S))+b 最小值， I 为结合抑制剂的添加浓度， IC50 为结合最大值一半时抑制剂的浓度， S 为坡度 因子。Microbeta 仪器得到平均 cpm( 计数 / 每分钟 ) 值 / 分钟， 并校正检测器间的个体差 异， 从而得到正确的 cpm 值。
实例 1-84 的化合物展示出的对雌激素受体 α- 亚型的结合亲和力在 IC501 至 10,000nM 范围内， 或展示出的对雌激素受体 β- 亚型的结合亲和力在 IC501 至 10,000nM 范 围内。43