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1、(10)申请公布号 CN 103665066 A (43)申请公布日 2014.03.26 CN 103665066 A (21)申请号 201310598669.0 (22)申请日 2013.11.21 C07H 15/203(2006.01) C07H 1/08(2006.01) C07C 43/23(2006.01) C07C 41/36(2006.01) (71)申请人 中国科学院西北高原生物研究所 地址 810001 青海省西宁市新宁路 23 号 (72)发明人 王洪伦 何彦峰 王小艳 丁晨旭 索有瑞 (74)专利代理机构 北京纪凯知识产权代理有限 公司 11245 代理人 关畅 (。
2、54) 发明名称 亚临界流体萃取胡芦巴中土大黄苷和丹叶大 黄素的方法 (57) 摘要 本发明公开了一种亚临界流体萃取胡芦巴 中土大黄苷和丹叶大黄素的方法。该方法， 包括 如下步骤 ： 将胡芦巴种子粉碎后加水进行亚临界 萃取， 收集上层萃取液， 离心， 收集上清液， 浓缩， 完成所述土大黄苷和丹叶大黄素的萃取。所述 粉碎步骤中， 筛孔的目数为 40-60 目。粉碎后的 所述胡芦巴种子与水的用量比为 1g ： 15-25mL， 具体为 1g ： 20mL。所述亚临界萃取步骤中， 温度 100-200 ； 压力 2-6MPa ； 时间为 20-60min ； 萃取 的次数为1-3次。 该方法有效缩短。
3、了提取时间， 简 化了提取工艺， 消除了提取过程中有机溶剂的污 染， 成本低， 适合工业化生产。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 3 页 附图 1 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书3页 附图1页 (10)申请公布号 CN 103665066 A CN 103665066 A 1/1 页 2 1. 一种萃取胡芦巴中土大黄苷和丹叶大黄素的方法， 包括如下步骤 ： 将胡芦巴种子粉碎后加水进行亚临界萃取， 收集上层萃取液， 离心， 收集上清液， 浓缩， 完成所述土大黄苷和丹叶大黄素的萃取。 2. 根据权利要求 1 所述的方法， 。
4、其特征在于 ： 所述粉碎步骤中， 筛孔的目数为 40-60 目。 3. 根据权利要求 1 或 2 所述的方法， 其特征在于 ： 粉碎后的所述胡芦巴种子与水的用 量比为 1g ： 15-25mL， 具体为 1g ： 20mL。 4. 根据权利要求 1-3 任一所述的方法， 其特征在于 ： 所述亚临界萃取步骤中， 温度 100-200 ； 压力 2-6MPa ； 时间为 20-60min ； 萃取的次数为 1-3 次。 5. 根据权利要求 1-4 任一所述的方法， 其特征在于 ： 所述离心步骤中， 转速为 2500-5000rpm。 6. 根据权利要求 1-5 任一所述的方法， 其特征在于 ： 所。
5、述浓缩步骤中， 浓缩温度为 40-80。 权 利 要 求 书 CN 103665066 A 2 1/3 页 3 亚临界流体萃取胡芦巴中土大黄苷和丹叶大黄素的方法 技术领域 0001 本发明涉及一种亚临界流体萃取胡芦巴中土大黄苷和丹叶大黄素的方法。 背景技术 0002 胡芦巴(Trigonella foenum-graecum L.)为豆科胡芦巴属一年生草本植物， 是一 种集药用、 食用、 香料和饲料等价值于一身的经济作物。 本草纲目 记载， 其成熟干燥的种 子 （又称胡芦巴） 具有治疗 “小肠气痛， 肾脏虚冷” 等疾病 ； 2000 年版 中华人民共和国药典 规定， 干燥的胡芦巴种子有 “温肾。
6、， 驱寒， 止痛” 的功效， 主治 “肾脏虚冷， 小腹冷痛， 小肠疝 气， 寒湿脚气” 等症。 近年来， 研究发现胡芦巴种子具有明显的的降血糖、 降血脂和保肝护肝 等药理作用。 0003 芪类化合物及其衍生物 （如土大黄苷和丹叶大黄素等） 主要是由植物在真菌感染， 强紫外线照射等不利条件下产生的一种植物抗毒素。 作为胡芦巴中新发现的重要的活性成 分之一， 胡芦巴中芪类成分 （包括土大黄苷和丹叶大黄素） 因具有显著的抗菌消炎， 活血化 瘀和调节血糖等功效而逐渐成为研究的热点。为有效开发利用胡芦巴资源， 以及进一步研 究芪类化合物的药理活性及机制， 提高芪类化合物的提取率， 研究胡芦巴芪类成分的高。
7、效 制备方法具有重要的意义。 0004 现有芪类化合物的提取方法主要有乙醇回流提取法， 有机溶剂萃取法等， 这些方 法存在提取过程繁琐， 提取效率低， 试剂耗费量大 ； 制得的产品纯度不高等缺陷。 发明内容 0005 本发明的目的是提供一种亚临界流体萃取胡芦巴中土大黄苷和丹叶大黄素的方 法。 0006 本发明提供的萃取胡芦巴中土大黄苷和丹叶大黄素的方法， 包括如下步骤 ： 0007 将胡芦巴种子粉碎后加水进行亚临界萃取， 收集上层萃取液， 离心， 收集上清液， 浓缩， 完成所述土大黄苷和丹叶大黄素的萃取。 0008 上述方法的所述粉碎步骤中， 筛孔的目数为 40-60 目， 具体为 50 目、。
8、 40-50 目或 50-60 目。 0009 粉碎后的所述胡芦巴种子与水的用量比为 1g ： 15-25mL， 具体为 1g ： 20mL、 1g ： 20-25mL 或 1g ： 15-20mL。 0010 所 述 亚 临 界 萃 取 步 骤 中， 温 度 100-200 ， 具 体 为 120 、 150 、 180 、 120-180、 120-150或 150-180 ； 0011 压力 2-6MPa， 具体为 2、 4、 5、 6、 2-5、 2-4、 4-6 或 4-5MPa ； 0012 时间为 20-60min， 具体为 20、 40、 60、 20-40 或 40-60mi。
9、n ； 0013 萃取的次数为 1-3 次， 具体为 2 次、 1-2 次或 2-3 次。 0014 所述离心步骤中， 转速为 2500-5000rpm， 具体为 2500、 3000、 3500、 4000、 4500、 2500-4500 或 3000-4000rpm。 说 明 书 CN 103665066 A 3 2/3 页 4 0015 所述浓缩步骤中， 浓缩温度为 40-80， 具体为 40、 50、 60、 70、 80、 40-70或 50-80。 0016 本发明采用亚临界流体技术萃取胡芦巴种子中两种芪类成分， 与传统提取技术相 比较， 不但有效缩短了提取时间， 而且简化了提取。
10、工艺， 消除了提取过程中有机溶剂的污 染。同时， 在适宜的压力下， 随着温度的升高， 水的极性、 表面张力和黏度都急剧下降， 对胡 芦巴种子中两种芪类化合物的溶解能力增加， 从而提高了两种芪类成分的提取率， 萃取物 中土大黄苷的含量为 30.42%-39.06%， 丹叶大黄素含量为 34.78%-53.15%。本发明简单快 速， 无污染， 成本低， 适合工业化生产。 附图说明 0017 图 1 为标准品 (A) 的高效液相色谱 （HPLC） 图 ； 1. 土大黄苷 （13.1min） ， 2. 丹叶大 黄素 （23.8min） ； 0018 图2为实施例1所得胡芦巴种子亚临界萃取液的HPLC图。
11、 ； 1.土大黄苷 （13.1min） ， 2. 丹叶大黄素 （23.8min） 。 具体实施方式 0019 下面结合具体实施例对本发明作进一步阐述， 但本发明并不限于以下实施例。所 述方法如无特别说明均为常规方法。所述原材料如无特别说明均能从公开商业途径而得。 0020 下述实施例中均采用 HPLC 法， 以标准品为对照， 对亚临界流体萃取液中两种芪 类成分进行确认以及对两种成分的总得率进行定量， 其色谱条件为 ： Eclipse XDB C18 柱 (250mm4.6mm， i.d.5m) ； 0021 流动相 ： 甲醇 - 水溶液 ； 0022 梯度洗脱程序具体如下 ： 0023 0 分。
12、钟起至 10 分钟止， 流动相为甲醇的质量百分含量为 30-40% 的甲醇水溶液 ； 0024 11 分钟起至 25 分钟止， 流动相为甲醇的质量百分含量为 40-50% 的甲醇水溶液 ； 0025 26 分钟起至 30 分钟止， 流动相为甲醇的质量百分含量为 50-80% 的甲醇水溶液 ； 0026 30 分钟起至 35 分钟止， 流动相为甲醇的质量百分含量为 80% 的甲醇水溶液 ； 0027 流速 ： 1.0mL/min ； 0028 检测波长为 320nm。 0029 实施例 1 0030 称取 50g 过 60 目筛的胡芦巴种子粉末， 投入亚临界萃取罐中， 然后加入 750ml 水，。
13、 设定萃取条件， 萃取温度 120， 萃取压力 2MPa， 萃取时间为 20min， 萃取 1 次， 收集上层萃 取液， 在 5000rpm 离心， 收集上清液， 60浓缩至干， 得含两种芪类成分的萃取物 26.8g， 萃 取率为 53.6%。经高效液相色谱分析， 所得结果如图 2 所示， 通过与图 1 所示标准品对照， 两种芪类成分为土大黄苷和丹叶大黄素， 外标法测得萃取物中土大黄苷的质量百分含量为 30.42%， 丹叶大黄素的质量百分含量为 43.78%。 0031 实施例 2 0032 称取 50g 过 40 目筛的胡芦巴种子粉末， 投入亚临界萃取罐中， 然后加入 1000ml 水， 设。
14、定萃取条件， 萃取温度 150， 萃取压力 4MPa， 萃取时间为 40min， 萃取 2 次， 收集上层 说 明 书 CN 103665066 A 4 3/3 页 5 萃取液， 在 3000rpm 离心， 收集上清液， 50浓缩至干， 得含两种芪类成分的萃取物 32.4g， 萃取率为 64.8%。经高效液相色谱分析， 通过与标准品对照， 两种芪类成分为土大黄苷和丹 叶大黄素， 外标法测得萃取物中土大黄苷的质量百分含量为 33.54%， 丹叶大黄素的质量百 分含量为 53.15%。 。 0033 实施例 3 0034 称取 50g 过 50 目筛的胡芦巴种子粉末， 投入亚临界萃取罐中， 然后加。
15、入 1000ml 水， 设定萃取条件， 萃取温度 150， 萃取压力 5MPa， 萃取时间为 60min， 萃取 2 次， 收集上层 萃取液， 4000rpm 离心， 收集上清液， 50浓缩至干， 得含两种芪类成分的萃取物 34.4g， 萃 取率为 68.8%。经高效液相色谱分析， 通过与标准品对照， 两种芪类成分为土大黄苷和丹叶 大黄素， 外标法测得萃取物中土大黄苷的质量百分含量为 39.06%， 丹叶大黄素的质量百分 含量为 51.33%。 0035 实施例 4 0036 称取 50g 过 50 目筛的胡芦巴种子粉末， 投入亚临界萃取罐中， 然后加入 1250ml 水， 设定萃取条件， 萃。
16、取温度 180， 萃取压力 6MPa， 萃取时间为 60min， 萃取 3 次， 将萃取 液 4000rpm 离心， 收集上清液， 70浓缩至干， 得含两种芪类成分的萃取物 39.7g， 萃取率 为 79.4%。经高效液相色谱分析， 通过与标准品对照， 两种芪类成分为土大黄苷和丹叶大黄 素， 外标法测得萃取物土大黄苷的质量百分含量为 38.24%， 丹叶大黄素的质量百分含量为 50.15%。 0037 实施例 5 0038 称取 50g 过 40 目筛的胡芦巴种子粉末， 投入亚临界萃取罐中， 然后加入 750ml 水， 设定萃取条件， 萃取温度180， 萃取压力6MPa， 萃取时间为40min。
17、， 萃取2次， 收集上层萃取 液， 2500rpm 离心， 收集上清液， 40浓缩至干， 得含两种芪类成分的萃取物 36.7g， 萃取率 为 73.4%。经高效液相色谱分析， 通过与标准品对照， 两种芪类成分为土大黄苷和丹叶大黄 素， 外标法测得萃取物中土大黄苷的质量百分含量为 37.65%， 丹叶大黄素的质量百分含量 为 51.75%。 0039 实施例 6 0040 称取 50g 过 60 目筛的胡芦巴种子粉末， 投入亚临界萃取罐中， 然后加入 1250ml 水， 设定萃取条件， 萃取温度 120， 萃取压力 2MPa， 萃取时间为 40min， 萃取 1 次， 收集上层 萃取液， 350。
18、0rpm 离心， 收集上清液， 80浓缩至干， 得含两种芪类成分的萃取物 24.5g， 萃 取率为 49.0%。经高效液相色谱分析， 通过与标准品对照， 两种芪类成分为土大黄苷和丹叶 大黄素， 外标法测得萃取物土大黄苷的质量百分含量为 35.37%， 丹叶大黄素的质量百分含 量为 46.02%。 0041 实施例 7 0042 称取 50g 过 50 目筛的胡芦巴种子粉末， 投入亚临界萃取罐中， 然后加入 1250ml 水， 设定萃取条件， 萃取温度 120， 萃取压力 5MPa， 萃取时间为 60min， 萃取 2 次， 收集上层 萃取液， 4500rpm 离心， 收集上清液， 60浓缩至干， 得含两种芪类成分的萃取物 35.7g， 萃 取率为 71.4%。经高效液相色谱分析， 通过与标准品对照， 两种芪类成分为土大黄苷和丹叶 大黄素， 外标法测得萃取物土大黄苷的质量百分含量为 38.88%， 丹叶大黄素的质量百分含 量为 48.64%。 说 明 书 CN 103665066 A 5 1/1 页 6 图 1 图 2 说 明 书 附 图 CN 103665066 A 6 。