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19F标记的蒽环酮和蒽环衍生物
    本发明涉及氟代蒽环酮(anthracyclinone)和氟代蒽环(anthracycline)衍生物作为NMR成像探针用于监测淀粉样变性疾病的用途。术语淀粉样变性是指，其共同特征在于特定的蛋白质趋向于以不溶性原纤维的形式聚集和沉积在细胞外空间并对器官和组织造成结构和功能性损伤的各种疾病。最近，在世界卫生组织报告(Bulletin ofWorld Health Organisation)71(1):105(1993)中对淀粉样蛋白和淀粉样变性的分类进行了修订。各种不同类型的淀粉样蛋白虽然含有多种不同的蛋白质亚单位，但它们在反平行的β-折叠中具有相同的超微结构[参见Glenner G.G.，新英格兰医学组织(New England Journal ofMedicine)1980,302卷，1283页；Ghiso J．等，分子神经生物学(Molecular Neurobiology)1994,8卷，49页]。

    该疾病的临床病程取决于所涉及的器官；预后对于心脏浸润的情况是极为不利的(平均存活期＜12个月)，对于肾的情况，预后相对较好(平均存活期约5年)。式A化合物可与淀粉样沉积物和斑块以及淀粉样蛋白的原纤维相互作用。因此，本发明提供通式A的蒽环或蒽环酮衍生物或其可药用盐用于诊断淀粉样变性或在制备用于所述诊断的组合物中的用途：其中：-R1是

    氢，

    羟基，

    卤素，

    C1-C8烷氧基，

    可被苄基、酰基或三氟乙酰基取代的氨基，或

    OSO2(R4)，其中R4是烷基或芳基，所述烷基或芳基可以是未取代

    的或被一个或多个氟原子取代；-R2是

    氢或

    羟基；-R3是

    氢，

    羟基，

    氨基，所述氨基可被C1-C16烷基、芳基、芳烷基、C2-C8链烯基、

    C3-C8环烷基、未取代的或被一个或多个氟原子或三氟甲基取代的

    C5-C8环烯基单取代或二取代，

    吗啉基，所述吗啉基可被C1-C16烷基、芳基、芳烷基、C2-C8链烯

    基、C3-C8环烷基、未取代的或被一个或多个氟原子或三氟甲基取

    代的C5-C8环烯基取代，

    哌嗪基，所述哌嗪基可被三氟酰基、三氟甲磺酰基或芳基(三氟甲

    基)取代，

    四氢吡啶，

    式B或C地基团

    其中R5是氢或C1-C6烷基，R6表示COCF3或SO2CF3,n和m相同或不同，分别表示1-4的整数，或是如下定义的式D的多糖

    其中-R7是

    氢，

    羟基，

    未取代的或被酰基、三氟乙酰基、三氟甲磺酰基取代的氨基，天然

    氨基酸或合成氨基酸的残基或二肽或三肽残基；-R8和R9均是氢，或R8或R9之一是羟基、C1-C4烷氧基、四氢吡

    喃基、卤素或以上定义的OSO2(R4),R8和R9中的另一个表示氢

    或未取代的或被酰基、三氟乙酰基、三氟甲磺酰基取代的氨基；-Y是

    氢，

    羟基，

    C1-C16烷氧基，

    氨基，所述氨基可以是未取代的或被酰基、三氟乙酰基、C1-C16

    烷基、芳基或未取代的或被一个或多个氟原子取代的芳烷基所取

    代，

    吗啉基，

    哌嗪基，所述哌嗪基可被三氟酰基或三氟甲磺酰基取代，

    四氢吡啶，

    以上定义的式B或C的基团，

    或以上定义的式D的多糖；-Z是

    C=O,

    CHOH或

    CH2；其中至少有一个氟原子连接在蒽环酮或蒽环骨架上或由连接在分子不同位置上的基团所携带。

    当R7是天然氨基酸的残基或二肽或三肽的残基时，优选是N-三氟乙酰基或三氟甲磺酰基的形式。

    优选的式A化合物是如下化合物，其中：-R1是

    氢，

    羟基，

    氟，

    甲氧基，

    氨基，

    氨基三氟甲磺酰基(NHSO2CF3)，

    氨基三氟乙酰基，或

    O-甲磺酰基[OSO2CH3]；-R2是羟基；-R3是

    未取代的或被一个或多个氟原子取代的C1-C6单-或二-烷基氨基，

    苄基三氟乙基氨基，

    吗啉基，

    三氟甲磺酰基哌嗪基，

    三氟乙酰基哌嗪基，

    四氢吡啶基，

    式B或C的基团，其中-R5是氢或甲基或乙基，-R6是COCF3或SO2CF3,-n是2或3,-m是2或3,

    或是式D的多糖，其中-R7是

    氨基

    氨基三氟乙酰基，

    氨基三氟甲磺酰基，或

    α-或ε-N-三氟乙酰基-赖氨酸；-R8是

    羟基，

    碘，或

    O-甲磺酰基；-R9是氢；-Y是

    氢，

    羟基，

    甲氧基，

    氨基，

    未取代的或被一个或多个氟原子取代的C1-C6单-或二-烷基氨基，

    苄基三氟乙基氨基，

    吗啉基，

    三氟乙酰基哌嗪基，

    三氟甲磺酰基哌嗪基，

    四氢吡啶基，

    式B或C的基团，其中-R5是氢或甲基或乙基，-R6是COCF3或SO2CF3,-n是2或3,-m是2或3,

    或是式D的多糖，其中-R7是

    氨基

    氨基三氟乙酰基，

    氨基三氟甲磺酰基，或

    α-或ε-(N-三氟乙酰基)-赖氨酸，或

    α-或ε-(N-三氟甲磺酰基)-赖氨酸；-R8是

    羟基，

    碘，或

    O-甲磺酰基[OSO2CH3]；-R9是氢；-Z是

    C=O,

    CHOH。

    更优选的式A化合物是如下化合物，其中：-R1是

    氢，或

    甲氧基；-R2是羟基；-R3是

    氢，

    羟基，

    六氟二乙基胺，

    苄基三氟乙基氨基，

    吗啉基，

    三氟甲磺酰基哌嗪基，

    三氟酰基哌嗪基，

    四氢吡啶，

    式B或C的基团，其中-R5是氢或甲基，-R6是COCF3,-n是2或3,-m是2或3，或

    式D的多糖，其中-R7是

    氨基

    氨基三氟甲磺酰基，

    氨基三氟乙酰基，或

    α-或ε-N-三氟乙酰基-赖氨酸；-R8是碘-R9是氢；-Y是

    氢，

    羟基，

    六氟二乙基胺，

    苄基三氟乙基氨基，

    吗啉基，

    三氟甲磺酰基哌嗪基，

    三氟乙酰基哌嗪基，或

    式B的多糖，其中-R5是

    氨基

    氨基三氟乙酰基，或

    α-或ε-N-三氟乙酰基-赖氨酸；-R6是碘；-R7是氢；-Z是C=O。

    进一步优选的式A化合物是如下化合物，其中： -R1是甲氧基；-R2是羟基；-R3是

    氢，

    羟基，

    六氟二乙基胺，

    苄基三氟乙基氨基，

    吗啉基，

    三氟酰基哌嗪基，或

    四氢吡啶，-Y是

    氢，

    羟基，

    三氟甲磺酰基哌嗪基，

    三氟乙酰基哌嗪基，

    式B或C的基团，其中-R5是氢，-R6是COCF3,-n是3,-m是2，或

    式D的多糖，其中-R7是

    氨基

    氨基三氟乙酰基，或

    α-或ε-N-三氟乙酰基-赖氨酸；-R8是碘-R9是氢；-Z是C=O。

    本文所用的术语“烷基”包括最多含16个碳的直链或支链基团，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、叔丁基、异丁基、戊基、己基、异己基、庚基、辛基、壬基、癸基、十一烷基、十二烷基，这些基团的各种支链异构体，以及含有一个或多个卤素取代基如氟、氯、溴、碘、CF3、烷氧基取代基、芳基取代基、烷芳基取代基、卤代芳基取代基、环烷基取代基或烷基环烷基取代基的所述基团。

    本文所用的术语“链烯基”包括最多含8个碳的直链或支链基团，例如烯丙基、丁烯基、己烯基、辛烯基。

    本文所用的术语“环烷基”指含3-8个碳的环烷基，例如环丙基、环戊基、环戊基甲基、环庚基和环辛基。

    本文所用的术语“芳基”包括在环部分含有6-10个碳的单环或二环芳基，例如苯基、萘基、取代的苯基或取代的萘基，其中苯环或萘环上的取代基可以是例如C1-6烷基、卤素或C1-6烷氧基。

    本文所用的术语“卤素”指氟、氯、溴和碘。

    本文所用的术语“芳烷基”指带有芳基取代基的上述烷基基团，例如苄基、苯乙基、二苯甲基和三苯甲基。

    本文所用的术语“烷氧基”包括与氧原子连接的所有上述烷基。

    本发明还包括所有可能的异构体及其混合物，包括非对映异构体混合物和外消旋混合物，所述混合物由于C-7和C-9的R和S立体化学中心以及多糖的α或β糖苷键的可能组合而形成。

    本发明提供带有成盐基团的式A化合物的盐，特别是带有羧基、碱性基团(例如氨基)的化合物的盐。

    所述盐优选生理可耐受的盐，例如碱金属和碱土金属盐(例如钠、钾、锂、钙和镁盐)、铵盐和与适宜的有机胺或氨基酸形成的盐(例如精氨酸、普鲁卡因盐)、以及与适宜的有机或无机酸形成的加成盐，所述酸是例如盐酸、硫酸、羧酸和有机磺酸(例如乙酸、三氟乙酸、甲磺酸、对甲苯磺酸)。

    本发明包括所有可能的立体异构体以及它们的外消旋或光学活性的混合物。式A化合物的特征在于含有氟原子或连接在蒽环结构不同位置上的带有氟原子的基团。例如，氟原子可以连接在糖苷配基部分的C-4或糖残基的C-4′上。带有氟原子的基团，例如氨基三氟乙酰基(NHCOCF3)或氨基三氟甲磺酰基(NHSO2CF3)，可以连接在分子的不同位置上，例如：蒽环糖苷配基部分的C-4、C-6和C-11或糖残基的C-3′或C-4′。三氟乙酰基或三氟甲磺酰基还可以由连接在糖苷配基C-14上的取代基如14-[1-(4-三氟乙酰基)哌嗪]，或连接在糖残基C-3′的取代基如-或3′-N-[(ε-N-三氟乙酰基)-赖氨酸]所携带。优选将其中的氨基糖为N-酰基衍生物如N-三氟乙酰基或N-三氟甲磺酰基形式的式A蒽环化合物通过连接在C-14位的氨基取代基转变成水溶的衍生物。

    许多蒽环化合物的3′-N-三氟乙酰基衍生物是已知的，例如4-烷氧基-衍生物(参见：美国专利4166848,1979年4月9日)、6-烷氧基-衍生物(参见：美国专利4191756,1980年4月3日)、11-烷氧基-衍生物(参见：美国专利4191755,1980年4月3日)或4′-碘-衍生物(参见：美国专利4345070,1982年8月17日)，其它化合物记载于F.Arcamone，阿霉素，药物化学，17卷，Academic Press,1981。在本申请人的PCT专利申请WO96/04895和WO96/07665中已经要求了某些式A化合物用于治疗淀粉样变性的用途。

    本发明还提供以上定义的新的式A化合物及其在治疗淀粉样变性中的用途，其中：-R3是

    被C1-C16烷基、芳基、芳烷基、C2-C8链烯基、C3-C8环烷基、被

    一个或多个氟原子或三氟甲基取代的C5-C8环烯基单取代或二取代

    的氨基，

    被C1-C16烷基、芳基、芳烷基、C2-C8链烯基、C3-C8环烷基、被

    一个或多个氟原子或三氟甲基取代的C5-C8环烯基取代的吗啉基，

    被三氟酰基或三氟甲磺酰基取代的哌嗪基，四氢吡啶，或式B或C的基团

    其中R5是氢或C1-C6烷基，R6是COCF3或SO2CF3,n和m相

    同或不同，分别表示1-4的整数。

    以下化合物是新化合物：N-三氟乙酰基-4′-碘阿霉素(A1),14-(4-三氟乙酰基哌嗪-1-基)-柔红霉素酮(daunmycinone)(A2),14-(4-三氟甲磺酰基哌嗪-1-基)-柔红霉素酮(A3),14-[4-(3-三氟甲基苯基)哌嗪-1-基)-柔红霉素酮(A4),14-[N-乙基-N-(3,5-二-三氟甲基苯基)甲基]-柔红霉素酮(A5),14-[N-苄基-N-(2,2,2-三氟乙基)]-氨基柔红霉素酮(A6)，和14-(1,2,3,6-四氢吡啶-1-基)-4′-脱氧-4′-碘-3′-三氟乙酰基柔红霉素(A7)。

    通式A的氟代衍生物可以根据关于蒽环酮类化合物或蒽环类化合物的文献中所描述的常规方法进行制备，所用原料为式E化合物：其中：-Ra是氢、羟基、甲氧基、氨基、OSO2(R4)，其中的R4如上所定义；-Rb是氢或羟基；-Rc是氢、溴或羟基；-W是氢、羟基或式W′的多糖的残基，

    其中Rd是氢、羟基或氨基，Re和Rf均是氢，或Re或Rf

    之一是羟基、烷氧基、卤素或如上所定义的OSO2(R4),Re

    或Rf的另一个是氢或氨基。

    具体地讲，其中R3是带有氟原子的含氨基基团的式A．化合物可以通过将式E的14-溴衍生物(Rc=Br)(按照有机化学杂志42,3653(1977)的描述从Rc是氢的相应式E化合物制备)与单或二取代的氨基化合物在非质子有机溶剂如二氯甲烷或丙酮或二甲基甲酰胺或四氢呋喃中于4℃-40℃下反应4-48小时制得。优选的反应条件包括，使用比4-溴衍生物过量2-5倍的胺，使用二氯甲烷作为溶剂，于室温下反应24小时。如需要，可将生成的14-氨基衍生物与适宜的试剂如三氟甲磺酰基或三氟乙酸酐反应，以引入所需的含氟基团。在另一例子中，带有三氟乙酰基的式A化合物，例如其中的R7是NHCOCF3的化合物，可以通过将其中Rd是氨基的相应式E蒽环化合物与三氟乙酸酐在非质子有机溶剂如无水二氯甲烷中于0℃下反应15分钟至3小时制得。

    用于制备式A氟衍生物的原料蒽环酮化合物或蒽环化合物的实例包括：柔红霉素酮(E1:Ra=OCH3,W=OH,Rb=OH,Rc=H)、4-去甲氧基柔红霉素酮(E2:Ra=H,W=OH,Rb=OH,Rc=H),以及它们相应的14-溴衍生物(E3和E4,其中Rc=Br)、7-脱氧衍生物(E5和E6，其中W=H)、7-脱氧和14-溴衍生物(E7和E8，其中W=H,Rc=Br)或7-溴衍生物(E9和E10，其中W=Br)；糖苷4′-碘柔红霉素(E11:Ra=OCH3,Rb=OH,Rc=H,W=W′,其中Rd=NH2,Re=I,Rf=H)、4′-碘阿霉素(E12:Ra=OCH3,Rb=Rc=OH,W=W′,其中Re=NH2,Rf=I,Rg=H)。

    所有这些化合物均是文献中已知的。蒽环酮化合物和蒽环化合物与Aβ原纤维的结合

    将Aβ25-35肽的原纤维悬浮在含有各种浓度试验化合物的10％二甲亚砜蒸馏水溶液中并将其室温保温60分钟。保温后，将样品于室温下以15000g离心10分钟，然后弃去上清液。将原纤维沉积物用0.3ml10％DMSO的蒸馏水溶液洗涤3次，然后溶于乙醇并通过荧光检测定量结合的化合物。然后通过等轴双曲线(结合等温线)方程计算出EC50，该值表示试验化合物对Aβ原纤维亲和性。

    本发明化合物的EC50与用作参考化合物的碘阿霉素(IDOX)(参见WO95/04538)相当。报道如下数据作为例子。IDOX         EC50=52.04±10.66μM化合物A3     EC50=8.16±1.32μM

    将Aβ1-40肽单体溶于Tris·HCl缓冲液(100mM,pH7.4)中，然后于37℃保温5天。将沉淀出的原纤维离心，用蒸馏水洗涤，再次离心并以230单体当量的浓度重新悬浮在蒸馏水中。将原纤维悬浮液超声处理1分钟，然后以等份的形式于-20℃冷冻直至使用。向各种浓度的试验化合物水溶液(含3％(v/v)二甲亚砜)中加入33μl 230μM Aβ1-40原纤维的悬浮液以达到100μl的终体积，由此开始结合研究。将得到的悬浮液室温保温15分钟。保温后，将悬浮液上样到Millipore ultrafreeMC滤纸(0.22μm孔保留)并于4℃离心5分钟。将滤纸用100μl蒸馏水洗涤2次，然后用100μl 0.6M盐酸/乙醇50∶50(v/v)的混合物洗涤滤纸回收结合的化合物。通过HPLC对结合化合物的量进行定量。通过将化合物样品按照以上描述在不含原纤维的条件下进行处理来评估化合物对滤纸的非特异性结合。用存在原纤维时得到的总结合值减去结合在滤纸上的化合物的量。根据Hill方程用计算机进行非线性回归分析来评价结合参数。数据用每mg肽单体结合的化合物的纳摩尔数表示(Bmax)。

    报道如下数据作为例子。IDOX            Bmax=122.2nmol/mg Aβ1-40化合物A5        Bmax=223.1nmol/mg Aβ1-40

    本发明的化合物还具有抗原纤维形成活性。当将Aβ肽与化合物一起保温时，观察到淀粉样原纤维形成的减少。由于肽聚集而形成的淀粉样蛋白的量可用文献中报道的硫黄素T(ThT)试验(Naiki等，分析生物化学(Analytical Biochemistry)1989,177卷，244页；H.LeVine Ⅲ，蛋白质科学(Protein Science)1993,2卷，404页)来评估。将化合物以30μM的浓度在50μM的磷酸缓冲液(pH5)中和100μM肽一起于25℃保温24小时。将保温后的样品用含有47μM ThT的柠檬酸钠缓冲液(pH5)稀释。在Kontron荧光分光光度计中测定荧光，激发光为420nm，发射光为490nm，减去ThT的背景荧光后，将数值平均。荧光越弱表明在保温期间形成的淀粉样蛋白的量越少。

    报道如下用Aβ25-35肽得到的数据作为例子。

      化合物        ThT荧光

                    (％对照)

      碘代阿霉素    40.95

      A1            20.58

      A2            22.24

      A3            23.00

      A4            22.27

      A5            23.05

      A6            34.99

      A7            33.24

    如上所述，本发明的化合物能够与原纤维和淀粉样生成肽的淀粉样沉积物和斑块结合。在早老性痴呆症中，淀粉样沉积物为Aβ1-40或Aβ1-42(3)，参见Gravina S.A．等，生物化学杂志(Journal ofBiologicalChemisrty),1995,270卷，7013页。化合物中所含的19F原子可以通过核磁共振(NMR)波谱检测到，因此，所述化合物可用于在体内检测淀粉样沉积物和斑块，从而可以诊断和监测与在不同的器官和组织中形成并沉积淀粉样蛋白有关之疾病的进展，所述疾病是例如原发性和继发性的外周、全身和中枢淀粉样变性，例如早老性痴呆、Down氏综合征、海绵状脑病。本发明的化合物还可用于监测治疗对于各种淀粉样蛋白形成疾病的影响。

    本发明还涉及将所述化合物用于19F磁共振成像(MRI)的方法。所述方法包括，向活的对象施用有效量的19F-标记的化合物并检测由此产生的19F NMR信号。

    本发明还包括用于诊断方法或治疗淀粉样变性的、含有一种或多种新的或已知的式A化合物作为活性成分以及可药用载体、赋形剂或随需要加入的其它添加剂的药物组合物。在诊断或治疗淀粉样变性中，式A化合物或其可药用盐通常以0.1-50mg/kg体重的量施用给患者。

    以下实施例用来说明本发明，但并不对其起限定作用。实施例1：N-三氟乙酰基-4′-碘阿霉素(A1)

    将4′-碘阿霉素盐酸盐(E12:0.7g,1mmol)悬浮在无水二氯甲烷(50ml)中，冷却至0℃，搅拌下于5分钟内滴加三氟乙酸酐(0.26ml,0.2mmol)的无水二氯甲烷(5ml)溶液。将该混合物继续搅拌30分钟，然后加入碳酸氢钠(20ml 5％的溶液)。15分钟后，分出有机相，用水(50ml)洗涤，用无水硫酸钠干燥并减压浓缩至少量体积。加入乙醚/己烷(1∶1 v/v)后回收得到标题化合物A1(0.7g)。

    在Kieselgel F254(Merck)上进行TLC，用二氯甲烷∶丙酮(体积比95∶5)展开，Rf=0.53。FD-MS: m/e 748  [M]+1HNMR(200MHz,CDCl3)δ:1.30(d,J=6.1Hz,3H,CH3-5′)；1.84(dd,J=4.6,13.4Hz,1H,H-2′eq)；2.05(m,1H,H-2′ax)；2.24(dd,J=4.2,14.9Hz,H-8ax)；2.36(ddd,J=1.5,2.2,14.9Hz,1H,H-8eq)；2.99(s,J=5.0Hz,1H,CH2OH)；3.05(d,J=1.5,18.9Hz,1H,H-10eq)；3.42(dq,J=1.5,6.1Hz,1H,H-5′)；3.60(m,1H,H-3′)；4.09(s,1H,4-OCH3)；4.28(s,1H,OH-9)；4.61(m,1H,H-4′)；4.77(d,J=5.0Hz,2H,CH2-14)；5.30(dd,J=2.2,4.2Hz,1H,H-7)；5.52(d,J=8.3Hz,1H,NH-CO)；7.40(dd,J=1.1,8.6Hz,H-3)；7.79(dd,J=7.7,8.6Hz,H-2)；6.04(dd,J=1.1,7.7Hz,1H,H-1)；13.24(s,1H,OH-11)；14.00(s,1H,OH-6).实施例2：14-(4-三氟乙酰基哌嗪-1-基)-柔红霉素酮(A2)

    14-溴柔红霉素酮(E3,3.2g,6.9mmol)，按照有机化学杂志，42,3653(1977)所述的方法制备，将其溶于无水二氯甲烷(200ml)中，用无水哌嗪(1.19g,13.8mmol)处理并室温下放置18小时。

    减压蒸除溶剂，粗产物进行快速硅胶色谱，用二氯甲烷-甲醇-乙酸(体积比90:10∶0.3)的混合物进行洗脱，得到14-(N-哌嗪基)柔红霉素酮(0.9g，收率27％)。FAB-MS:m/z 483[M+H]+；m/z 447[M+H-2H2O]+1H-NMR(200MHz,CDCl3)δ:2.14(dd,J=5.0,14.8Hz,1H,H-8ax)；2.36(ddd,J=2.0,2.2,14.8Hz,1H,H-8eq)；2.59,2.98(两个多重峰)8H,N(CH2CH2)2NH)；2.97(d,J=18.7Hz,1H,H-10ax)；3.16(dd,J=2.0,18.7Hz,1H,H-10eq)；3.58,3.69(两个两重峰，J=16.5Hz,2H,CH2-14)；4.08(s,3H,OCH3)；5.26(dd,J=2.2,5.0Hz,1H,H-7)7.38(dd,J=0.9,8.6Hz,1H,H-3)；7.77(dd,J=7.7,8.6Hz,1H,H-2)；8.01(dd,J=1.1,7.7Hz,1H,H-1).

    将14-(N-哌嗪基)柔红霉素酮(0.35g,0.7mmol)和三乙胺(0.2g,1.4mmol)的二氯甲烷(30ml)溶液用三氟乙酸酐(0.1g,0.7mmol)处理，室温搅拌1小时。将反应混合物用二氯甲烷稀释，用水洗涤，用无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，将残余物进行快速硅胶色谱，用二氯甲烷-甲醇(体积比8∶2)的混合物洗脱，得到标题化合物A2，通过加入化学计量量的氯化氢甲醇溶液，随后用乙醚进行沉淀，将其转化成相应的盐酸盐(0.23g，收率50％)。

    在Kieselgel F254(Merck)上进行TLC，用二氯甲烷/甲醇/乙酸/水(体积比60∶8∶2∶1)体系展开，Rf=0.57.FAB-MS:m/z 579[M+H]+；m/z 562[M+H-H2O]+1H-NMR(200MHz,DMSO-d6)δ:2.03(dd,J=4.0,14.3Hz,1H,H-8ax)；2.30(m,1H,H-8eq)；2.90,3.14(两个多重峰，J=18.0Hz,2H,CH2-10)；3.0-4.0(m,8H,N(CH2CH2)2N)；398(s,3H,OCH3)；4.77(m,2H,CH2-14)；5.12(m,1H,H-7)；6.30(宽信号峰，1H,OH-9)；7.64(m,1H,H-3)；7.90(m,2H,H-1+H-2)；10.60(宽信号峰，1H,NH+)；13.26(s,1H,OH-11)；13.97(s,1H,OH-6).实施例3：14-(4-三氟甲磺酰基哌嗪-1-基)柔红霉素酮(A3)

    将按照实施例2所述制得的14-(N-哌嗪基)柔红霉素酮(0.35g,0.7mmol)和三乙胺(0.2g,1.4mmol)的二氯甲烷(30ml)溶液用三氟甲磺酸酐(0.1g,0.7mmol)进行处理并室温搅拌1小时。将反应混合物用二氯甲烷稀释，用水洗涤，用无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，将残余物进行快速硅胶色谱，用二氯甲烷-甲醇(体积比8∶2)的混合物进行洗脱，得到标题化合物A3，通过加入化学计量量的氯化氢甲醇溶液，随后用乙醚进行沉淀，将其转化成相应的盐酸盐(0.11g，收率23％)。

    在Kieselgel F254(Merck)上进行TLC，用二氯甲烷/甲醇/乙酸/水(体积比60∶8∶2∶1)体系展开，

    Rf=0.62.

    FAB-MS:m/z 615[M+H]+；m/z 597[M+H-H2O]+

    1H-NMR(200MHz,DMSO-d6)δ:2.02(dd,J=4.0,14.3Hz,1H,H-8ax)；2.27(m,1H,H-8eq)；2.93,3.11(两个两重峰，J=18.5Hz,2H,CH2-10)；3.2-4.0(m,8H,N(CH2CH2)2N)；3.99(s,3H,OCH3)；4.60(m,2H,CH2-14)；5.13(m,1H,H-7)；7.66(m,1H,H-3)；7.93(m,2H,H-1+H-2)；13.28(s,1H,OH-11)；13.98(s,1H,OH-6).实施例4：14-[4-(3-三氟甲基苯基)哌嗪-1-基]柔红霉素酮(A4)

    将14-溴柔红霉素酮(E3,lg,2.1mmol)，按照有机化学杂志，42,3653(1977)所述的方法制备，将其溶于无水二氯甲烷(125ml)中，用1-(3-三氟甲基-苯基)哌嗪(1g,4.4mmol)处理并室温放置42小时。然后，减压蒸除溶剂，将粗产物进行快速硅胶色谱，用氯仿-甲醇(体积比98∶2)的混合物进行洗脱，得到标题化合物A4(1.02g，收率78％)，通过加入化学计量量的氯化氢甲醇溶液并随后用乙醚进行沉淀，可将其转化成相应的盐酸盐。FAB-MS:m/z 627[M+H]+；m/z 619[M+H-H2O]+1H-NMR(200MHz,DMSO-d6)δ:2.06(dd,J=4.0,14.3Hz,1H,H-8ax)；2.28(m,1H,H-8eq)；2.96,3.14(两个两重峰，J=18.7Hz,2H,CH2-10)；3.2-4.0(m,8H,N(CH2CH2)2N)；3.99(s,3H,OCH3)；4.90(m,2H,CH2-14)；5.17(m,1H,H-7)；5.70(宽信号峰，1H,OH-7)；6.28(s,1H,OH-9)；7.1-7.5(m,4H,m.CF3-C6H4)；7.67(m,1H,H-3)；7.92(m,2H,H-1+H-2)；10.2(宽信号峰，1H,NH+)；13.29(s,1H,OH-11)；14.00(s,1H,OH-6).实施例5：14-[N-乙基-N-(3,5-二-三氟甲基苯基)甲基]-柔红霉素酮(A5)

    75分钟内，将14-溴柔红霉素酮(E3,0.5g,1.05mmol)于60℃下分批加至N-乙基-N-(3,5-二三氟甲基苯基)甲胺(0.34g,1.25mmol)和二异丙基乙基胺(0.215ml,1.26mmol)的无水N,N-二甲基乙酰胺(3ml)溶液中。将反应混合物在60℃下再保温30分钟。

    然后，减压蒸除溶剂，将残余物加入盐水中并用乙酸乙酯萃取。将萃取液用水洗涤，用无水硫酸钠干燥，蒸除溶剂。粗产物通过硅胶柱色谱进行纯化(氯仿/甲醇，98∶2)得到红色粉末状标题化合物A5(0.21g，收率30％)，通过加入化学计量量的氯化氢甲醇溶液，再用乙醚进行沉淀，可将其转化成相应的盐酸盐。FAB-MS:m/z 668[M+H]+；m/z 650[M+H-H2O]+；m/z 632[M-2H2O+H]+1H-NMR(200MHz,DMSO-d6)δ:1.07(t,J=7.3Hz,3H,CH2CH3)；1.6-3.6(m,6H,CH2CH3+CH2-8+CH2-10)；3.99(s,3H,OCH2)；4.60(m,2H,NCH2Ph),4.83(m,2H,CH2-14)；5.07(m,1H,H-7)；5.5,6.3(宽信号峰，2H,OH-7+OH-9)；7.65(m,1H,H-3)；7.92(m,2H,H-1+H-2)；8.24,8.36(两个单峰，3H，芳族氢)；10.14(宽信号峰，1H,NH+)；13.24(s,1H,OH-11)；13.96(s,1H,OH-6).实施例6：14-[N-苄基-N-(2,2,2-三氟乙基)]氨基-柔红霉素酮(A6)

    75分钟内，将14-溴-柔红霉素酮(0.70g,1.47mmol)于60℃下分批加至苄基-(2,2,2-三氟乙基)胺(0.554g,2.93mmol)和二异丙基乙基胺(0.25ml,1.46mmol)的无水N,N-二甲基乙酰胺(3ml)溶液中。将反应混合物在60℃下再保温30分钟。然后，减压蒸除溶剂，将残余物加入盐水中并用乙酸乙酯萃取。将萃取液用水洗涤，用无水硫酸钠干燥，然后蒸除溶剂得到0.46g的粗产物。将粗产物通过硅胶柱色谱进行纯化(氯仿/甲醇99∶1)得到红色粉末状标题化合物(60mg)，通过加入化学计量量的氯化氢甲醇溶液，再用乙醚进行沉淀，可将其转化成相应的盐酸盐。FAB-MS:m/z 586[M+H]+；m/z 568[M+H-H2O]+；m/z 550[M-2H2O]+；m/z 516[M-CF3]+.1H-NMR(200MHz,DMSO-d6)δ:1.8-2.2(m,2H,CH2-8)；2.83-2.99(两个两重峰，J=18.7Hz,2H,CH2-10)；3.52(q,Ｊ=10.1Hz,2H,NCH2CF3)；3.98(s,3H,OCH3)；3.8-4.2(m,4H,NCH2Ph+CH2-13)；5.04(m,1H,H-7)；5.39(d,J=6.8Hz,1H,OH-7)；7.1-7.4(m,5H,Ph)；7.6-7.8(m,3H,H-1+H-2+H-3)；13.2-13.9(两个bs,2H,OH-6+OH-11).实施例7：14-(1,2,3,6-四氢吡啶-1-基)-4′-脱氧-4′-碘-3′-N-三氟乙酰基柔红霉素(A7)

    根据标准方法(如US专利3,803,124,1974年4月9日所述)，将4′-脱氧-4′-碘-柔红霉素(E11:500mg,0.742mmol)转化成相应的14-溴衍生物。将该化合物溶于丙酮(10ml)中，加入1,2,3,6-四氢吡啶(0.5ml,5mmol)，将反应混合物在35℃下搅拌1小时。将反应混合物加入二氯甲烷和水中，分离出有机相，用无水硫酸钠干燥并加入己烷沉淀出粗产物。对沉淀出的产物通过快速硅胶色谱进行纯化，用二氯甲烷/甲醇/乙酸(30∶4∶1)的混合物进行洗脱，得到纯净化合物，通过加入化学计量量的氯化氢甲醇溶液，再用乙醚进行沉淀，可将其转化成相应的盐酸盐(160mg,收率28％)。TLC(Kieselgel F254板)：洗脱体系：二氯甲烷/甲醇/乙酸/水(体积比60∶8∶2∶1),Rf=0.25。

    根据标准方法(参见：F.Arcamone等，Chim.Ind.(Milan),1969，第51卷，834页)，将14-(1,2,3,6-四氢吡啶-1-基)-4′-脱氧-4′-碘柔红霉素(70mg,0.1mmol)在0℃下用三氟乙酸酐处理1小时，将其转化成相应的3′-N-三氟乙酰基衍生物。对反应混合物进行快速硅胶色谱，用二氯甲烷/丙酮(体积比9∶1)的混合物进行洗脱。将纯化的产物用氯化氢的甲醇溶液进行处理将其转化成盐酸盐得到46mg(收率58％)所需产物。TLC(Kieselgel F254板)：洗脱系统：二氯甲烷/丙酮(体积比80∶20)进行洗脱，Rf=0.50。FAB-MS:m/z 815[MH]+；462[MH-糖-H2O]+；444[MH-糖-2H2O]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:1.15(d,J=6.0Hz,3H,CH3-5′)；1.56(dd,J=3.8,14.1Hz,1H,H-2′eq)；2.06(m,1H,H-2′ax)；2.23(m,2H,CH2-8)；2.40(m,2H,N-CH2CH2-CH=CH)；2.95,3.14(dd,J=18.0Hz,2H,CH2-10)；3.30(m,2H,N-CH2CH2-CH=CH)；3.50(m,1H,H-3′)；3.60(m,1H,H-5′)；3.70(m,2H,N-CH2-CH=CH)；3.99(s,3H,OCH3)；4.59,4.72(dd,J=18.8Hz,2H,CH2-14)；4.79(s,1H,H-4′)；5.04(m,1H,H-7)；5.29(d,J=3.4Hz,1H,H1′)；5.69,5.90(dd,J=10.7Hz,1H,CH=CH)；5.98(s,1H,OH-9)；7.64,7.91(two m,3H,H-1,H-2,H-3)；9.51(d,J=5.6Hz,1H,NHCOCF3)；9.96(宽信号峰，1H,NH+)；13.28(s,1H,OH-11)；14.05(s,1H,OH-6).