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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201810635635.7 (22)申请日 2018.06.20 (71)申请人 安徽瑞然生物药肥科技有限公司 地址 242300 安徽省宣城市宁国市宁国经 济技术开发区河沥园区宜黄线旁外环 东路109号 (72)发明人 肖忠 (74)专利代理机构 合肥市浩智运专利代理事务 所(普通合伙) 34124 代理人 王志兴 (51)Int.Cl. C12P 13/06(2006.01) C12R 1/38(2006.01) C12R 1/385(2006.01) C12R 1/19(。
2、2006.01) (54)发明名称 一种培养基 (57)摘要 本发明公开了一种培养基， 培养基成分包括 碳源物质、 氮源物质、 2.2g/L柠檬酸、 2.8g/L硫酸 铵、 5 .0g/LK2HPO4、 2.5g/LMgSO4、 0 .04g/L CaCl2、 0.001g/LCoCl2、 0.0002g/LMnC4H6O4 4H2O。 本发明的优点在于： 在本发明优选的培养 基中培养， 可以高效表达色氨酸合成酶， 使酶法 合成S-甲基-L-半胱氨酸有较高的催化速率和转 化率， L-丝氨酸摩尔转化率达到95以上， 酶法 合成反应条件温和， 酶立体选择性强， 催化效率 高。 权利要求书1页 说明。
3、书2页 CN 108913727 A 2018.11.30 CN 108913727 A 1.一种培养基， 其特征在于， 培养基成分包括碳源物质、 氮源物质、 2.2g/L柠檬酸、 2.8g/L硫酸铵、 5.0g/L K2HPO4、 2.5g/L MgSO4、 0.04g/L CaCl2、 0.001g/L CoCl2、 0.0002g/L MnC4H6O44H2O。 2.根据权利要求1所述的培养基， 其特征在于， 培养基中的碳源采用葡萄糖、 麦芽糖、 蔗 糖、 果糖中的一种或多种。 3.根据权利要求2所述的培养基， 其特征在于， 培养基中总碳源质量浓度为1040g/L。 4.根据权利要求1所。
4、述的培养基， 其特征在于， 培养基中的氮源采用牛肉膏、 酵母膏、 玉 米浆、 蛋白胨、 豆饼水解液中的一种或多种。 5.根据权利要求4所述的培养基， 其特征在于， 培养基中总氮源质量浓度为535g/L。 权利要求书 1/1 页 2 CN 108913727 A 2 一种培养基 技术领域 0001 本发明涉及的是化学物质， 尤其涉及的是一种培养基。 背景技术 0002 S-甲基-L-半胱氨酸是一种非蛋白质组成的氨基酸， S-甲基-L-半胱氨酸是一种药 物中间体， 可作为抗氧化剂抑制蛋白质和肽的氧化， 在生物组分分析中也具有一定作用。 0003 化学世界 ， 2003， 7： 370-372中公开。
5、了以L-半胱氨酸为原料， 磷酸三甲酯为甲基 化试剂合成了S-甲基-L-半胱氨酸的方法。 美国专利US6147257,2000.中公开了一种以二甲 基碳酸酯作甲基化试剂的方法， 制备S-甲基-L-半胱氨酸步骤繁琐， 反应时间长。 0004 目前， S-甲基-L-半胱氨酸生产主要来源于化学合成法， 该方法反应步骤多， 操作 难度大， 生产成本高， 不适合大规模工业化生产。 而另一方面我国在氨基酸工业生产中， 会 产生大量不能直接用于食品和医药方面的富含L-丝氨酸的毛发酸水解液， 该混合氨基酸料 液直接分离制备L-丝氨酸成本高、 效率低。 发明内容 0005 本发明的目的在于克服现有技术的不足， 提。
6、供了一种培养基， 提高反应的催化速 率和转化率。 0006 本发明是通过以下技术方案实现的， 一种培养基， 培养基成分包括碳源物质、 氮源 物质、 2.2g/L柠檬酸、 2.8g/L硫酸铵、 5.0g/L K2HPO4、 2.5g/L MgSO4、 0.04g/L CaCl2、 0.001g/L CoCl2、 0.0002g/L MnC4H6O44H2O。 0007 优选的， 培养基中的碳源采用葡萄糖、 麦芽糖、 蔗糖、 果糖中的一种或多种。 0008 优选的， 培养基中总碳源质量浓度为1040g/L。 0009 优选的， 培养基中的氮源采用牛肉膏、 酵母膏、 玉米浆、 蛋白胨、 豆饼水解液中。
7、的一 种或多种。 0010 优选的， 培养基中总氮源质量浓度为535g/L。 0011 本发明相比现有技术具有以下优点： 本发明采用含色氨酸合成酶的特定菌株， 在 优选的培养基中培养可以高效表达色氨酸合成酶， 使酶法合成S-甲基-L-半胱氨酸有较高 的催化速率和转化率， 其中L-丝氨酸摩尔转化率达到95以上。 具体实施方式 0012 下面对本发明的实施例作详细说明， 本实施例在以本发明技术方案为前提下进行 实施， 给出了详细的实施方式和具体的操作过程， 但本发明的保护范围不限于下述的实施 例。 0013 实施例1 0014 本实施例包括以下步骤： 0015 (1)将1000mL枯草芽孢杆菌CG。
8、MCC NO:1.1628在培养基中培养发酵， 发酵液离心得 说明书 1/2 页 3 CN 108913727 A 3 到20g湿菌体， 加入到500mL转化液中， 转化液中含11g的L-丝氨酸、 4.81g的甲硫醇、 0.2g/L 磷酸吡哆醛和0.5g/L乙醇， pH8.0， 37酶促反应20h， 反应结束后转化液中S-甲基-L-半胱 氨酸为13.3g， 对L-丝氨酸摩尔转化率为99； 0016 (2)将转化液4000r/min离心15min， 去除菌体细胞， 加热， 活性碳脱色， 抽滤， 滤液 调pH 7左右， 静置析出沉淀， 真空抽滤， 烘干得11.5g S-甲基-L-半胱氨酸粗品， 质。
9、量浓度为 95的乙醇洗涤， 真空抽滤， 烘干得10.3g S-甲基-L-半胱氨酸精品， 纯度为99.9。 0017 实施例2 0018 本实施例包括以下步骤： 0019 (1)将1000mL施氏假单胞菌CGMCC NO:1.202在培养基中培养发酵， 发酵液离心得 到湿菌体20g， 加入到500mL转化液中， 转化液中含21g的L-丝氨酸的毛发酸水解液、 9.62g的 甲硫醇、 0.2g/L磷酸吡哆醛和0.01g/L丙酮， pH8.0， 37酶促反应15h， 反应结束后转化液中 S-甲基-L-半胱氨酸为26.1g， 对L-丝氨酸摩尔转化率为97； 0020 (2)将转化液5000r/min离心。
10、10min， 去除菌体细胞， 加热， 活性碳脱色， 抽滤， 滤液 调pH 7左右， 静置析出沉淀， 真空抽滤， 烘干得25.8g S-甲基-L-半胱氨酸粗品， 质量浓度为 95的乙醇洗涤， 真空抽滤， 烘干得22.3g S-甲基-L-半胱氨酸精品， 纯度为99.9。 0021 实施例3 0022 本实施例包括以下步骤： 0023 (1)将1000mL铜绿假单胞菌CGMCC NO： 1.1129在培养基中培养发酵， 发酵液离心得 到15g湿菌体， 加入到500mL转化液中， 转化液中含11g的L-丝氨酸、 4.81g甲硫醇、 0.2g/L磷 酸吡哆醛和0.5g/L乙醇， pH 8.0， 37酶促。
11、反应16h， 反应结束后转化液中S-甲基-L-半胱氨 酸为12.7g， 对L-丝氨酸摩尔转化率为95； 0024 (2)将转化液3000r/min离心20min， 去除菌体细胞， 加热， 活性碳脱色， 抽滤， 滤液 调pH 7左右， 静置析出沉淀， 真空抽滤， 烘干得10.7g S-甲基-L-半胱氨酸粗品， 质量浓度为 95的乙醇洗涤， 真空抽滤， 烘干得9.9g S-甲基-L-半胱氨酸精品， 纯度为99.9； 0025 实施例4 0026 本实施例包括以下步骤： 0027 (1)将1000mL大肠杆菌ATCC15489在培养基中培养发酵， 发酵液离心得到12g湿菌 体， 加入到500mL转化。
12、液中， 转化液中含21g的L-丝氨酸的毛发酸水解液、 9.62g的甲硫醇、 0.2g/L的磷酸吡哆醛和0.005g/L的甲醇， pH 8.0， 35酶促反应16h， 反应结束后转化液中 S-甲基-L-半胱氨酸为25.9g， 对L-丝氨酸摩尔转化率为96； 0028 (2)将转化液4000r/min离心10min， 去除菌体细胞， 加热， 活性碳脱色， 抽滤， 滤液 调pH 7左右， 静置析出沉淀， 真空抽滤， 烘干得23.1g S-甲基-L-半胱氨酸粗品， 质量浓度为 95的乙醇洗涤， 真空抽滤， 烘干得21.1g S-甲基-L-半胱氨酸精品， 纯度为99.9。 说明书 2/2 页 4 CN 108913727 A 4 。