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1、(10)申请公布号 CN 103966101 A (43)申请公布日 2014.08.06 CN 103966101 A (21)申请号 201410222837.0 (22)申请日 2014.05.26 C12N 1/12(2006.01) C12R 1/89(2006.01) (71)申请人 临沂大学 地址 276000 山东省临沂市双岭路中段临沂 大学 (72)发明人 王培磊 (54) 发明名称 利用葡萄酒厂废水养殖亚心形四爿藻的培养 基及培养方法 (57) 摘要 本发明公开了一种利用葡萄酒厂废水养殖亚 心形四爿藻方法。该技术不仅可以低成本处理葡 萄酒废水， 变废为宝， 还可获得有重要饵。
2、料价值的 亚心形四爿藻， 一举多得。亚心形四爿藻传统培 养液营养单调并使用开放水泥跑道池培养， 生长 慢、 产量低、 投资大、 易污染、 效益低， 现在采用容 积为 3 立方米的高密度聚乙烯制成的水塔培养， 成本低， 不易污染， 可重复利用， 易于操作， 而且在 培养基中增加了葡萄酒废水、 尿素、 海泥抽取液、 土壤抽出液、 牛粪浸出液、 L- 半胱氨酸、 酪蛋白 胨、 麦饭石粉、 磷酸二氢钠、 S3 维生素、 人尿等营 养成分， 有机肥和无机肥混合使用， 营养更全面、 均衡， 亚心形四爿藻生长速度大幅提高， 产量提高 350。 (51)Int.Cl. 权利要求书 2 页 说明书 7 页 附图。
3、 2 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书2页 说明书7页 附图2页 (10)申请公布号 CN 103966101 A CN 103966101 A 1/2 页 2 1. 一种利用葡萄酒厂废水养殖亚心形四爿藻的培养基， 配方如下 ： 葡萄酒厂废水 120 毫升， 尿素 25 毫克， 海泥抽取液 1.5 毫升， 土壤抽出液 1.2 毫升， 牛 粪浸出液 1.5 毫升， 兔粪浸出液 1.8 毫升， L- 半胱氨酸 1.0 毫克， 酪蛋白胨 18 毫克， 甘油 20 毫克， 番茄汁 1.5 毫升， 葡萄糖 25 毫克， 乳糖 18 毫克， 淀粉 50 毫克， 酵。
4、母膏 35 毫克， 硝酸铵 15 毫克， 硅藻土 25 毫克， 麦饭石粉 15 毫克， 氯化锰 5 毫克， 磷酸二氢钠 12 毫克， S3 维生素 溶液 1.0 毫升， 人尿 1.0 毫升， 次氯酸钠消毒后的纯净海水 1000 毫升， 其中 S3 维生素溶液配方 ： 硫胺素盐酸盐 50 毫克， 尼古丁酸 10 毫克， 泛酸钙 10 毫克， 对氨安息香酸 1.0 克， 维生素 H0.1 克， 肌醇 0.5 克， 叶酸 0.2 微克， 胸间氮苯 0.3 克， 蒸馏水 1000 毫升。 2. 一种利用葡萄酒厂废水养殖亚心形四爿藻方法， 具体步骤如下 ： 培养容器为圆柱体聚乙烯水塔， 容积 3.0 立。
5、方米， 高密度聚乙烯材料制成， 无色或白 色， 有较好的透光性， 以利藻类进行光合作用， 水塔为一体式构造， 壁厚 6 毫米， 具有很大的 强度和坚固性， 水塔顶部有一圆形盖子， 水塔底部是一角铁焊接成的底座， 高 35 厘米， 水塔 顶部盖子直径 40 厘米， 盖子打上 3 个孔， 一个孔插入充气管， 另一个孔插入排气管， 充气管 和排气管都是玻璃管， 内径 10 毫米， 将反应器洗刷干净， 后用蒸馏水润洗 3 遍， 装入权利 要求 1 所述的培养基 2000 升， 充气混合 5 分钟， 选择生命力旺盛、 无污染的亚心形四爿藻 接种， 接种密度 4104cell/mL， 盖子上插入两根干净玻。
6、璃管， 一根较长， 65 厘米， 顶端露出 盖子 12 厘米， 下端通过料管与散气石连接， 用以充气， 所述散气石的作用是形成很小的气 泡， 避免大气泡或翻滚的波浪打碎藻细胞 ； 另一根较短， 30 厘米， 两端露出盖子即可， 用以 排气， 两根玻璃管同样粗细， 内径 10 毫米 ； 还有一个孔穿入电源导线， 端部连接一 40 瓦的 节能灯， 用以夜间光照， 用干净的透明胶带将两根玻璃管固定， 长的玻璃管上端用料管与充 气泵相连， 充入混合气体， 混合气体成分和体积比例是 ( 空气纯二氧化碳臭氧氨气 ) 92 6 1 1 ； 连续充气， 充气量不宜太大， 以藻细胞浮起不下沉即可， 室外培 养，。
7、 太阳光照射， 最佳温度 252， 最佳光照强度 3000-10000Lux， 白天利用太阳光自然光 照， 夜间采用节能灯光照， 培养的前 5 天， 水塔上方搭建一简易棚， 上放置帘子遮挡光线， 使 光照强度维持在 1500-4000Lux， 避免强烈阳光对细胞造成的光伤害， 第 6 天撤掉帘子， 较 强的光照有利于细胞的生长繁殖和高不饱和脂肪酸的合成， 培养至第 7 天， 停止充气， 拿开 盖子， 补充新鲜培养基 100 升， 盖上盖子， 充气， 继续培养， 至第 9 天， 亚心形四爿藻密度增 加至 500104cell/mL， 停止培养， 从底部的水龙头放出藻液， 将培养容器洗刷干净后， 。
8、加入 0.2过氧乙酸消毒溶液浸泡消毒 2 小时， 再用蒸馏水润洗 2 遍， 后进入下一轮培养。 3. 根据权利要求 2 所述的一种利用葡萄酒厂废水养殖亚心形四爿藻方法， 其特征在于 对选用的所述的反应器， 洗刷干净后进行消毒， 使用紫外灯消毒， 消毒 10-20 分钟。 4. 根据权利要求 2 所述的一种利用葡萄酒厂废水养殖亚心形四爿藻方法， 其特征在于 对选用的所述的反应器， 洗刷干净后进行消毒， 使用高压氮气喷射消毒， 消毒 5-10 分钟。 5. 根据权利要求 2 所述的一种利用葡萄酒厂废水养殖亚心形四爿藻方法， 其特征在 于对选用的所述的反应器， 洗刷干净后进行消毒， 使用高压二氧化碳。
9、喷射消毒， 消毒 5-6 分 钟。 6. 根据权利要求 2 所述的一种利用葡萄酒厂废水养殖亚心形四爿藻方法， 其特征在于 对选用的所述的反应器， 洗刷干净后分两个阶段消毒， 先使用高压氮气喷射消毒， 消毒 2-3 权 利 要 求 书 CN 103966101 A 2 2/2 页 3 分钟， 使用高压二氧化碳喷射消毒， 消毒 2-3 分钟， 消毒完毕后再进行藻类培养。 权 利 要 求 书 CN 103966101 A 3 1/7 页 4 利用葡萄酒厂废水养殖亚心形四爿藻的培养基及培养方法 技术领域 0001 本发明属于水产养殖领域， 尤其涉及一种利用葡萄酒厂废水养殖亚心形四爿藻的 培养基及培养方。
10、法。 背景技术 0002 葡萄酒厂每年都要排放大量废水， 尤其是在发酵季节。废水主要来自设备 ( 罐、 池、 瓶等 ) 洗涤水、 车间冲洗水及生产过程中排出的葡萄渣、 葡萄泥、 葡萄酒糟。同时， 白兰 地是葡萄酒的蒸馏酒， 不少葡萄酒厂有白兰地生产车间， 废水主要来自蒸馏残液和洗涤水。 发酵时， 排放的废水含有糖、 有机酸、 酒精、 多酚物质， 这些有机质腐烂会消耗水中氧气， 如 果将废水直接排入周围环境， 皮渣和酒泥会破坏周边环境生态平衡。葡萄酒废水为酸性， 含有较多有机悬浮物和酵母菌、 乳酸菌等微生物， 属高浓度有机废水， COD 值达 3 万 mg/L 以 上。 过去多采用生化处理法， 。
11、流程采用生物接触氧化工艺， 运行稳定可靠， 抗冲击能力强， 没 有污泥膨胀现象， 无需污泥回流， 能耗低且操作简单， COD 去除率可达 82， p(SS) 去除率达 64， 但该工艺投资大， 运转费用高， 管理难， 占地面积大。例如张裕葡萄酒公司， 在全厂总 排污口取样测定 ( 为生活污水和洗涤水混合液 )COD 值达 7800mg/L。因为生化处理法 COD 值必须控制在 1000mg/L 左右， 故必须稀释 8 倍， 因此， 废水处理量增加 8000 吨 / 日， 设备基 本投资400万， 每日多耗电500KW， 效果不理想。 现在也有厂家使用厌氧法， 是目前处理高浓 度有机废水较先进的。
12、方法。厌氧工艺采用 UASB 和厌氧 - 水解两种技术。既能有效去除废 水中悬浮物， 又能去除部分有机物， COD去除率可达40， p(SS)去除率达50， 但该技术基 础投资大， 占地多， 虽然所产甲烷气能当燃料， 可弥补运转所需部分开支， 但有二次污染， 如 河北某葡萄酒厂， 采用厌氧法， 设备和基建投资 60 万， 每天处理量 200 吨， 进口处废水 COD 值达 50000mg/L， 但处理后 COD 值仍高达 2000mg/L， 超过排放标准 20 倍， 每年罚款 5 万元， 要解决二次污染， 还得再进行生化处理， 设备至少要 50 万元， 投资太大。也有些葡萄酒厂家 在废水中加入。
13、各种絮凝剂如聚合氯化铝、 聚合氯化铝铁、 碱式氯化铝、 硫酸铝、 硫酸亚铁、 聚 合氯化铝铁、 三氯化铁、 硫酸铁、 无机铁盐、 助凝剂聚丙烯酰胺等， 净水效果也不错， 但絮凝 剂和净水剂价格昂贵， 开支太大， 生产实践中难以应用。为了解决目前技术的不足， 我发明 了一种利用葡萄酒厂废水养殖亚心形四爿藻方法， 既能低成本处理葡萄酒厂废水， 又能获 得有重要饵料价值的饵料生物 - 亚心形四爿藻， 变废为宝， 化害为利， 综合利用效益好， 可 大幅度减少废水处理设备投资及运转费用， 一举多得， 是葡萄酒厂废水处理的最佳选择。 0003 亚心形四爿藻 Tetraselmis subcordiform。
14、is 属绿藻门 Chlorophta， 绿藻纲 Prasinophyceae， 四爿藻属 Tetraselmis， 藻体扁压， 前面观呈广卵形， 前端较宽阔， 中间有 一浅的凹陷， 鞭毛 4 条， 由凹处伸出。细胞内有一大型杯状绿色色素体。藻体后端有一蛋白 核， 蛋白核附近有一红色眼点。细胞长 11-16 微米， 一般 11-14 微米， 宽 7-9 微米， 厚 3.5-5 微米。行无性繁殖， 主要是产生动孢子， 细胞纵分裂成两个 ( 少数 4 个 ) 子细胞。环境不良 时， 如培养液老化， 能形成休眠孢子， 椭圆形， 一个或两个， 没发现有性生殖。生长适宜温度 5-30， 最适 20； 适宜。
15、光照强度 500-10000l ux， 最适 4000-7000l ux ； 在最适光强下表现 说 明 书 CN 103966101 A 4 2/7 页 5 为趋光性。适宜盐度 5-85， 最适 35 ； 适宜 pH 值 4-9， 最适为 7。营养实验表明， 四爿藻生长 以 60mg/L 尿素为最佳 ； 在铁盐实验中， 以 0.4mg/L 柠檬酸铁最佳。NaNO3在 10-80mg/L 浓度 范围内， 浓度差异对该藻生长影响不显著。 在NaNO3、 (NH4)2SO4作为氮盐实验中， 细胞分裂频 率最快的一组也不如使用尿素作为氮源的实验组， 可见四爿藻适合使用尿素作氮源 ； 从氮 盐实验结果中。
16、还可以看出， 在氨盐中以 10mg/L(NH4)2SO4最好。氮盐实验表明， 四爿藻能适 应高浓度氨盐， 在 80mg/L 的 (NH4)2SO4中四爿藻还可以生长。该藻适应能力强， 生长繁殖迅 速， 易培养， 是中国对虾、 毛虾、 栉孔扇贝、 海湾扇贝、 贻贝、 鲍鱼、 舌鳎、 梭子蟹、 毛蚶、 泥蚶、 牡蛎、 海参等海珍动物幼体优质饵料， 富含海洋经济动物幼体所必需的多种维生素和脂肪 酸， 对扇贝、 海参幼体生长发育有极重要作用。亚心形四爿藻传统培养液配方是 ： 天然海水 加入 (NH2)2CO60mg/L， KH2PO4mg/L， FeC6H5O70.4mg/L， 维生素 B11mg/L。
17、 和维生素 B120.0005mg/ L 并使用开放水泥跑道池培养， 生长慢、 产量低、 投资大、 易污染、 效益低， 现在我采用容积为 3 立方米的高密度聚乙烯制成的具有极好透光性的水塔培养， 成本低， 不易污染， 洗刷方便， 可重复利用， 易于操作， 而且我在培养基中增加了葡萄酒厂废水、 尿素、 海泥抽取液、 土壤抽 出液、 牛粪浸出液、 兔粪浸出液、 L- 半胱氨酸、 酪蛋白胨、 甘油、 番茄汁、 葡萄糖、 乳糖、 淀粉、 酵母膏、 硝酸铵、 硅藻土、 麦饭石粉、 氯化锰、 磷酸二氢钠、 S3 维生素溶液、 人尿等营养成分， 有机肥和无机肥混合使用， 营养更加全面、 均衡， 亚心形四爿藻。
18、生长速度和产量大幅提高， 培养周期缩短， 产量提高 350。 发明内容 0004 为了克服目前技术的不足， 本发明提供了一种利用葡萄酒厂废水养殖亚心形四爿 藻的培养基， 配方如下 ： 0005 葡萄酒厂废水120毫升， 尿素25毫克， 海泥抽取液1.5毫升， 土壤抽出液1.2毫升， 牛粪浸出液 1.5 毫升， 兔粪浸出液 1.8 毫升， L- 半胱氨酸 1.0 毫克， 酪蛋白胨 18 毫克， 甘油 20 毫克， 番茄汁 1.5 毫升， 葡萄糖 25 毫克， 乳糖 18 毫克， 淀粉 50 毫克， 酵母膏 35 毫克， 硝酸 铵 15 毫克， 硅藻土 25 毫克， 麦饭石粉 15 毫克， 氯化锰。
19、 5 毫克， 磷酸二氢钠 12 毫克， S3 维生 素溶液 1.0 毫升， 人尿 1.0 毫升， 次氯酸钠消毒后的纯净海水 1000 毫升 ； 0006 其中 S3 维生素溶液配方 ： 硫胺素盐酸盐 50 毫克， 尼古丁酸 10 毫克， 泛酸钙 10 毫 克， 对氨安息香酸 1.0 克， 维生素 H0.1 克， 肌醇 0.5 克， 叶酸 0.2 微克， 胸间氮苯 0.3 克， 蒸 馏水 1000 毫升 ； 0007 一种利用葡萄酒厂废水养殖亚心形四爿藻方法， 具体步骤如下 ： 0008 培养容器为圆柱体聚乙烯水塔， 容积3.0立方米， 高密度聚乙烯材料制成(市场有 售 )， 无色或白色， 有较。
20、好的透光性， 以利藻类进行光合作用， 水塔为一体式构造， 壁厚 6 毫 米， 具有很大的强度和坚固性。水塔顶部有一圆形盖子。水塔底部是一角铁焊接成的底座， 高 35 厘米。水塔顶部盖子直径 40 厘米， 盖子打上 3 个孔， 一个孔插入充气管， 另一个孔插 入排气管， 充气管和排气管都是玻璃管， 内径 10 毫米。将反应器洗刷干净， 后用蒸馏水润 洗 3 遍， 装入权利要求 1 所述的培养基 2000 升， 充气混合 5 分钟， 选择生命力旺盛、 无污染 的亚心形四爿藻接种， 接种密度 4104cell/mL ； 盖子上插入两根干净玻璃管， 一根较长， 65 厘米， 顶端露出盖子12厘米， 下。
21、端通过料管与散气石连接， 用以充气(散气石的作用是形成 很小的气泡， 避免大气泡或翻滚的波浪打碎藻细胞 ) ； 另一根较短， 30 厘米， 两端露出盖子 说 明 书 CN 103966101 A 5 3/7 页 6 即可， 用以排气 ； 两根玻璃管同样粗细， 内径 10 毫米 ； 还有一个孔穿入电源导线， 端部连接 一 40 瓦的节能灯， 用以夜间光照。用干净的透明胶带将两根玻璃管固定 ； 长的玻璃管上端 用料管与充气泵相连， 充入混合气体， 混合气体成分和体积比例是空气纯二氧化碳臭 氧氨气 92 6 1 1 ； 连续充气， 充气量不宜太大， 以藻细胞浮起不下沉即 可 ； 室外培养， 太阳光照。
22、射， 最佳温度 252， 最佳光照强度 3000-10000Lux ； 白天利用太 阳光自然光照， 夜间采用节能灯光照 ； 培养的前 5 天， 水塔上方搭建一简易棚， 上放置帘子 遮挡光线， 使光照强度维持在 1500-4000Lux， 避免强烈阳光对细胞造成的光伤害 ； 第 6 天撤 掉帘子， 较强的光照有利于细胞的生长繁殖和高不饱和脂肪酸的合成 ； 培养至第 7 天， 停止 充气， 拿开盖子， 补充新鲜培养基 100 升， 盖上盖子， 充气， 继续培养， 至第 9 天， 亚心形四爿 藻密度增加至 500104cell/mL， 停止培养， 从底部的水龙头放出藻液， 将培养容器洗刷干 净后， 。
23、加入0.2过氧乙酸消毒溶液浸泡消毒2小时， 再用蒸馏水润洗2遍， 后进入下一轮培 养。 0009 优选的， 将培养容器洗刷干净后， 不采用 “加入 0.2过氧乙酸消毒溶液浸泡消毒 2 小时， 再用蒸馏水润洗 2 遍， 后进入下一轮培养” 的消毒方式， 而采用 “加入中药消毒液消 毒 30 分钟， 后进入下一轮培养。所述中药消毒液由以下重量比的物质组成 ： 每 100 份 85 乙醇中加入以下重量份的中药材 ： 板蓝根 30 50 份、 柴胡 15 25 份、 薄荷 15 25 份、 栀子 5 15 份、 艾叶 5 15 份， 中药消毒液制作方法 ： 将新鲜板蓝根、 柴胡、 薄荷叶、 艾叶、 山。
24、栀果切碎， 于 60-70下烘干， 再用中药材粉碎机分别粉碎至 70 目备用， 用托盘天平分别 称取烘干并粉碎的板蓝根 120 克， 柴胡 60 克， 薄荷叶 60 克， 艾叶 30 克， 山栀果 30 克， 置于 三角烧瓶中充分混合后， 加入 1000 毫升 85乙醇， 浸泡 48 小时， 200 筛绢过滤， 将清液静置 沉淀 36 小时， 撇去液面漂浮物， 取中上层的清液， 即为复方中药消毒液， 密封于黑色试剂瓶 中， 贴上标签， 置于 4冰箱备用。 ” 0010 优选地， 对选用的所述的反应器， 洗刷干净后进行消毒， 使用紫外灯消毒， 消毒 10-20 分钟。 0011 优选地， 对选用。
25、的所述的反应器， 洗刷干净后进行消毒， 使用高压氮气喷射消毒， 消毒 5-10 分钟 ； 0012 优选地， 对选用的所述的反应器， 洗刷干净后进行消毒， 使用高压二氧化碳喷射消 毒， 消毒 5-6 分钟 ； 0013 优选地， 对选用的所述的反应器， 洗刷干净后分两个阶段消毒， 先使用高压氮气喷 射消毒， 消毒 2-3 分钟 ； 使用高压二氧化碳喷射消毒， 消毒 2-3 分钟 ； 消毒完毕后再进行藻 类培养。 0014 有益结果 0015 为了克服葡萄酒厂废水传统处理方法缺点， 发明了一种利用葡萄酒厂废水养殖亚 心形四爿藻方法， 不仅废物利用， 变废为宝， 而且可获得有重要饵料价值的亚心形四。
26、爿藻， 一举两得， 实在是巧妙之极， 妙不可言。亚心形四爿藻传统培养液配方是， 天然海水加入 (NH2)2CO60mg/L， KH2PO4mg/L， FeC6H5O70.4mg/L， 维生素 B11mg/L 和维生素 B120.0005mg/L 并使 用开放水泥跑道池培养， 生产速率低、 产量不高、 投资大、 易污染、 效益低， 现在我采用容积 为 3 立方米的高密度聚乙烯制成的具有极好透光性的水塔培养， 成本低， 不易污染， 洗刷方 便， 可重复利用， 易于操作， 而且我在培养基中增加了葡萄酒厂废水、 尿素、 海泥抽取液、 土 说 明 书 CN 103966101 A 6 4/7 页 7 壤。
27、抽出液、 牛粪浸出液、 兔粪浸出液、 L- 半胱氨酸、 酪蛋白胨、 甘油、 番茄汁、 葡萄糖、 乳糖、 淀 粉、 酵母膏、 硝酸铵、 硅藻土、 麦饭石粉、 氯化锰、 磷酸二氢钠、 S3 维生素溶液、 人尿等营养成 分， 有机肥和无机肥混合使用， 营养更加全面、 均衡， 亚心形四爿藻生长速度和产量大幅提 高， 培养周期缩短， 产量提高 350。 附图说明 0016 图 1 为亚心形四爿藻形态结构图 0017 其中附图标记为 ： 1 红色眼点 2 色素体 3 蛋白核 4 鞭毛 ； 0018 图 2 为一种利用葡萄酒厂废水养殖亚心形四爿藻方法图 0019 其中附图标记为 ： 5 充气管 6 藻液 7。
28、 底座 8 培养容器 9 节能灯 10 排 气管。 具体实施方式 0020 1) 葡萄酒厂废水预处理方法 ： 葡萄酒废水用于养藻前需要进行预处理， 方法是 ： 先用 60 目的筛绢过滤废水， 除去葡萄皮、 葡萄核、 漂浮物、 玻璃渣子、 毛发、 泥沙、 树叶、 塑料 袋等体积较大固形物， 后将污水引入长 30 米、 宽 20 米、 深 0.7 米的水泥曝气池中， 池子呈东 西走向， 以接受更多的阳光照射 ； 水深保持在 55 厘米 ； 按每立方米污水加入 50 克生石灰的 量均匀泼洒生石灰 ( 生石灰最好预先按 1 公斤加入 5 升纯水的量在塑料桶中溶解、 稀释、 搅 拌均匀， 再全池泼洒)，。
29、 隔60分钟， 再按每立方米污水加入80克的量全池泼洒明矾(明矾最 好预先按100克加4升纯水的量在塑料桶中溶解、 稀释并搅拌均匀， 再全池泼洒)， 然后用耙 子搅动或充气搅拌 60 分钟， 使石灰和明矾充分溶解、 混合并与污水中有机物充分发生化学 反应， 然后自然沉淀、 发酵、 曝光 72 小时， 撇去水面泡沫等漂浮物， 勿搅动池底， 取中上层的 污水， 煮沸 6 分钟， 冷却， 装入不透光的黑色塑料桶中， 密封， 4冰箱或冷库， 保存， 备用 ； 0021 2) 牛粪浸出液制备方法 ： 取新鲜牛粪 50 公斤， 加入麸皮 1 公斤， 玉米面 2 公斤， 自 来水 3 升， 充分搅拌， 堆成。
30、圆锥状， 自然发酵 20 天， 后摊成薄层， 阳光下暴晒 4 天， 后取 3 公 斤放入水桶中， 加入 15 升蒸馏水， 充分搅匀， 静置， 48 小时后 100 目筛绢过滤， 取滤液加热， 煮沸 15 分钟， 杀死其中的细菌、 霉菌、 病毒等， 冷却， 沉淀 24 小时， 取上清液， 即得牛粪浸出 液， 装入磨口塞试剂瓶， 密封， 贴上标签， 置于 4冰箱备用 ； 0022 3) 次氯酸钠消毒海水方法 ： 取海水， 脱脂棉过滤， 按 1 立方米海水中加入漂白粉 50-100 克的量加入漂白粉， 使海水中有效氯含量达到 10-20mg/L， 充气 10-12 小时后， 用硫 代硫酸钠中和余氯。。
31、硫代硫酸钠量由余氯的多少来确定， 直到滴入淀粉碘化钾液不变色为 止 ； 0023 4)过氧乙酸消毒液制备方法和使用注意事项 ： 市售过氧乙酸原液含量35(以重 量计 )， 无色液体， 有强烈刺激性气味。使用时应用洁净自来水稀释成 0.2溶液， 浸泡水塔 内壁 2 小时。该品对眼睛、 皮肤、 粘膜和上呼吸道有强烈刺激作用， 头痛、 恶心且易燃， 具爆 炸性、 强腐蚀性、 强刺激性， 可致人体灼伤， 加热至 100即猛烈分解， 遇火或受热、 受震都可 起爆。与还原剂、 促进剂、 有机物、 可燃物等接触会发生剧烈反应 ； 腐蚀性强， 不可直接用手 接触， 操作时应带胶皮手套、 口罩和眼镜， 对金属有。
32、腐蚀性， 不可用于金属器械的消毒 ； 原液 长期放置可分解， 注意保质期， 应贮于塑料桶内凉暗处保存， 远离可燃性物质。 说 明 书 CN 103966101 A 7 5/7 页 8 0024 5) 接种用的亚心形四爿藻预先进行提纯 ( 本领域常规方法， 只要可实现提纯即 可， 例如凯氏提取法 )， 以确保接种时藻种处于生长旺盛的指数生长期 ； 0025 6) 各种营养盐要按配方中提供的顺序加入， 以免发生化学反应 ； 0026 7) 各种无机物营养盐和维生素需预先配成母液且置于 4冰箱冷藏保存备用， 放 置时间不要超过 45 天 ； 0027 8) 全部营养盐加完后要充气混合 10 分钟， 。
33、使营养盐混合均匀后再接种 ； 0028 9) 兔粪浸出液制备方法 ： 把干兔粪、 青草、 豆饼、 米糠、 颖壳 ( 五谷杂粮的外壳 ) 和 腐殖土按 60 10 12 15 2 1 的重量比例混合， 搅拌均匀， 装入缸内密闭进行发 酵， 30 天后， 倒出， 在干净水泥地上， 摊成薄层， 晾干 48 小时， 后取 2 公斤， 置于塑料水桶， 加 自来水 10 公斤， 搅拌均匀， 用 200 目筛绢过滤， 将清液煮沸 5 分钟， 冷却， 静置 24 小时， 取上 清液， 装入试剂瓶， 贴上标签， 置于 4冰箱， 备用 ； 0029 10) 土壤抽出液制备方法 ： 到树林中取松散、 富含有机质的上。
34、层土壤 1 公斤， 加自 来水 5 升， 煮沸 20 分钟， 将泥浆倒入烧杯中， 静置 24 小时， 后吸取上清液， 倒入三角烧瓶中， 加棉花塞， 煮沸 15 分钟， 冷却， 静置沉淀 12 小时， 取上清液即得土壤抽出液， 装入磨口塞试 剂瓶， 密封， 贴上标签， 置于 4冰箱备用 ； 0030 11) 海泥浸出液制备方法 ： 取海滩上沙质较少、 有机质较多而又不过分於黑的上 层软泥， 清除其中的小树枝和小石块等杂物， 以容量计算一份泥加两份水， 充分搅拌均匀， 静置 10-15 分钟， 待粗砂、 小石下沉后， 把上层泥浆倒入铝锅中， 弃去底部粗砂、 小石等杂 物， 按每 1000 毫升泥浆。
35、加入 1 克的量加入 NaOH， 煮沸 20-30 分钟， 煮时需不断搅拌， 煮后静 置 24 小时， 吸取上清液， 装入棕色试剂瓶， 密封， 置于 4冰箱保存， 备用 ； 0031 12) 人尿制备方法 ： 取人尿 1000 毫升， 烧瓶煮沸 5 分钟后， 冷却备用 ； 0032 13) 水塔安放在一角铁、 钢管焊接成的底座上， 底座高 35 厘米， 要求底座坚固、 强 壮、 安稳、 牢靠、 耐用、 防锈 ； 0033 14) 麦饭石粉是麦饭石的粉制品， 由麦饭石原矿经过筛选， 粉碎， 加工成面粉状， 颗 粒大小可以通过 200 目筛绢即可 ； 0034 15) 所用化学药品纯度均需化学纯级。
36、别 ； 0035 16) 为了克服目前技术的不足， 本发明提供了一种一种利用葡萄酒厂废水养殖亚 心形四爿藻的培养基， 配方如下 ： 0036 17) 葡萄酒厂废水 120 毫升， 尿素 25 毫克， 海泥抽取液 1.5 毫升， 土壤抽出液 1.2 毫升， 牛粪浸出液1.5毫升， 兔粪浸出液1.8毫升， L-半胱氨酸1毫克， 酪蛋白胨18毫克， 甘 油 20 毫克， 番茄汁 1.5 毫升， 葡萄糖 25 毫克， 乳糖 18 毫克， 淀粉 50 毫克， 酵母膏 35 毫克， 硝酸铵 15 毫克， 硅藻土 25 毫克， 麦饭石粉 15 毫克， 氯化锰 5 毫克， 磷酸二氢钠 12 毫克， S3 维生。
37、素溶液 1.0 毫升， 人尿 1 毫升， 次氯酸钠消毒后的纯净海水 1000 毫升 ； 0037 18) 其中 S3 维生素溶液配方 ： 硫胺素盐酸盐 50 毫克， 尼古丁酸 10 毫克， 泛酸钙 10 毫克， 对氨安息香酸 1.0 克， 维生素 H0.1 克， 肌醇 0.5 克， 叶酸 0.2 微克， 胸间氮苯 0.3 克， 蒸馏水 1000 毫升 ； 0038 一种利用葡萄酒厂废水养殖亚心形四爿藻方法， 具体步骤如下 ： 0039 培养容器为圆柱体聚乙烯水塔， 容积3.0立方米， 高密度聚乙烯材料制成(市场有 售 )， 无色或白色， 有较好的透光性， 以利藻类进行光合作用， 水塔为一体式构。
38、造， 壁厚 6 毫 说 明 书 CN 103966101 A 8 6/7 页 9 米， 具有很大的强度和坚固性。水塔顶部有一圆形盖子。水塔底部是一角铁焊接成的底座， 高 35 厘米。水塔顶部盖子直径 40 厘米， 盖子打上 3 个孔， 一个孔插入充气管， 另一个孔插 入排气管， 充气管和排气管都是玻璃管， 内径 10 毫米。将反应器洗刷干净， 后用蒸馏水润洗 3 遍， 装入权利要求 1 所述的培养基 2000 升， 充气混合 5 分钟， 选择生命力旺盛、 无污染的 亚心形四爿藻接种， 接种密度4104cell/mL ； 盖子上插入两根干净玻璃管， 一根较长， 65厘 米， 顶端露出盖子12厘米。
39、， 下端通过料管与散气石连接， 用以充气(散气石的作用是形成很 小的气泡， 避免大气泡或翻滚的波浪打碎藻细胞 ) ； 另一根较短， 30 厘米， 两端露出盖子即 可， 用以排气 ； 两根玻璃管同样粗细， 内径 10 毫米 ； 还有一个孔穿入电源导线， 下端部连接 一 40 瓦的节能灯， 用以夜间光照。用干净的透明胶带将两根玻璃管固定 ； 长的玻璃管上端 用料管与充气泵相连， 充入混合气体， 混合气体成分和体积比例是空气纯二氧化碳臭 氧氨气 92 6 1 1 ； 连续充气， 充气量不宜太大， 以藻细胞浮起不下沉即 可 ； 室外培养， 太阳光照射， 最佳温度 252， 最佳光照强度 3000-10。
40、000Lux ； 白天利用太 阳光自然光照， 夜间采用节能灯光照 ； 培养的前 5 天， 水塔上方搭建一简易棚， 上放置帘子 遮挡光线， 使光照强度维持在 1500-4000Lux， 避免强烈阳光对细胞造成的光伤害 ； 第 6 天撤 掉帘子， 较强的光照有利于细胞的生长繁殖和高不饱和脂肪酸的合成 ； 培养至第 7 天， 停止 充气， 拿开盖子， 补充新鲜培养基 100 升， 盖上盖子， 充气， 继续培养， 至第 9 天， 亚心形四爿 藻密度增加至 500104cell/mL， 停止培养， 从底部的水龙头放出藻液， 将培养容器洗刷干 净后， 加入0.2过氧乙酸消毒溶液浸泡消毒2小时， 再用蒸馏水。
41、润洗2遍， 后进入下一轮培 养 ； 0040 优选的， 将培养容器洗刷干净后， 不采用 “加入 0.2过氧乙酸消毒溶液浸泡消毒 2 小时， 再用蒸馏水润洗 2 遍， 后进入下一轮培养” 的消毒方式， 而采用 “加入中药消毒液消 毒 30 分钟， 后进入下一轮培养。所述中药消毒液由以下重量比的物质组成 ： 每 100 份 85 乙醇中加入以下重量份的中药材 ： 板蓝根 30 50 份、 柴胡 15 25 份、 薄荷 15 25 份、 栀子 5 15 份、 艾叶 5 15 份， 中药消毒液制作方法 ： 将新鲜板蓝根、 柴胡、 薄荷叶、 艾叶、 山栀果切碎， 于 60-70下烘干， 再用中药材粉碎机。
42、分别粉碎至 70 目备用， 用托盘天平分别 称取烘干并粉碎的板蓝根 120 克， 柴胡 60 克， 薄荷叶 60 克， 艾叶 30 克， 山栀果 30 克， 置于 三角烧瓶中充分混合后， 加入 1000 毫升 85乙醇， 浸泡 48 小时， 200 筛绢过滤， 将清液静置 沉淀 36 小时， 撇去液面漂浮物， 取中上层的清液， 即为复方中药消毒液， 密封于黑色试剂瓶 中， 贴上标签， 置于 4冰箱备用。 ” 0041 优选地， 对选用的所述的反应器， 洗刷干净后进行消毒， 使用紫外灯消毒， 消毒 10-20 分钟 ； 0042 优选地， 对选用的所述的反应器， 洗刷干净后进行消毒， 使用高压氮。
43、气喷射消毒， 消毒 5-10 分钟 ； 0043 优选地， 对选用的所述的反应器， 洗刷干净后进行消毒， 使用高压二氧化碳喷射消 毒， 消毒 5-6 分钟 ； 0044 优选地， 对选用的所述的反应器， 洗刷干净后分两个阶段消毒， 先使用高压氮气喷 射消毒， 消毒 2-3 分钟 ； 使用高压二氧化碳喷射消毒， 消毒 2-3 分钟 ； 消毒完毕后再进行藻 类培养。 0045 最后应说明的是 ： 以上实施例仅用以说明本发明的技术方案， 而非对其限制 ； 尽 说 明 书 CN 103966101 A 9 7/7 页 10 管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明， 本领域的普通技术人员应当理解 ： 其依然 可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改， 或者对其中部分技术特征进行等同替换 ； 而这些修改或者替换， 并不使相应技术方案的本质脱离本发明实施例技术方案的精神和范 围。 说 明 书 CN 103966101 A 10 1/2 页 11 图 1 说 明 书 附 图 CN 103966101 A 11 2/2 页 12 图 2 说 明 书 附 图 CN 103966101 A 12 。