桔小实蝇抗敌百虫和高效氯氰菊酯抗药性水平检测cDNA芯片的制备方法及其应用.pdf

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摘要
申请专利号:

CN201310609364.5

申请日:

20131127

公开号:

CN103614473B

公开日:

20150121

当前法律状态:

有效性:

有效

法律详情:

IPC分类号:

C12Q1/68,C40B40/08,C40B50/06

主分类号:

C12Q1/68,C40B40/08,C40B50/06

申请人:

华南农业大学

发明人:

曾玲,姜建军,陆永跃,何晓芳,梁广文,温硕洋

地址:

510642 广东省广州市天河区五山路483号

优先权:

CN201310609364A

专利代理机构:

广州粤高专利商标代理有限公司

代理人:

任重

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内容摘要

本发明公开了一种桔小实蝇抗敌百虫和高效氯氰菊酯抗药性水平检测cDNA芯片及其制作方法和应用。本发明利用正向抑制性消减杂交(suppression?subtractive?hybridization,SSH)方法分别获得了不同抗性品系桔小实蝇抗药性特异上调表达基因片段,再PCR扩增各抗药性相关特异表达基因,纯化回收得到118个桔小实蝇抗敌百虫抗性相关特异性基因片段,103个桔小实蝇抗高效氯氰菊酯抗性相关特异性基因片段。以上述特异的抗性靶基因片段为DNA探针,构建了桔小实蝇抗敌百虫和高效氯氰菊酯检测cDNA芯片。本发明cDNA芯片能够简单有效地实现对桔小实蝇抗药性水平的实时监测。

权利要求书

1.一种检测桔小实蝇抗敌百虫和高效氯氰菊酯抗药性水平的cDNA芯片,其特征在于,包含221个靶基因DNA探针;其中118个靶基因DNA探针为桔小实蝇抗敌百虫抗性相关特异性基因片段,103个靶基因DNA探针为桔小实蝇抗高效氯氰菊酯抗性相关特异性基因片段;其中,所述的118个桔小实蝇抗敌百虫抗性相关特异性基因片段是:S004(4)-A9、S004(4)-B7、S004(4)-D6、S004(4)-H9、S004(5)-B10、S004(5)-B5、S004(5)-C10、S004(5)-C7、S004(5)-D1、S004(5)-D10、S004(5)-D11、S004(5)-G1、S004(5)-H3、S004(5)-H7、S004(6)-10、S004(6)-12、S004(6)-18、S004(6)-21、S004(7)-100、S004(7)-109、S004(7)-138、S004(7)-156、S004(7)-165、S004(7)-183、S004(8)-197、S004(8)-199、S004(8)-217、S004(8)-225、S004(8)-240、S004(8)-248、S004(9)-293、S004(9)-308、S004(9)-328、S004(10)-394、S004(10)-401、S004(10)-443、S004(10)-471、S005(1)-A1、S005(1)-B2、S005(1)-C1、S005(1)-D12、S005(1)-G8、S005(2)-A8、S005(2)-C7、S005(2)-E8、S005(2)-G1、S005(3)-A5、S005(3)-A9、S005(3)-A11、S005(3)-C11、S005(3)-D12、S005(3)-D8、S005(3)-H12、S005(4)-A2、S005(4)-A3、S005(4)-A8、S005(4)-B8、S005(4)-G1、S005(4)-G2、S005(5)-A5、S005(5)-B7、S005(5)-E11、S005(5)-G6、S005(5)-G9、S005(5)-H2、S005(6)-13、S005(6)-17、S005(6)-49、S005(7)-98、S005(7)-100、S005(7)-103、S005(7)-116、S005(7)-107、S005(7)-131、S005(7)-176、S005(7)-178、S005(7)-181、S005(7)-188、S005(7)-189、S005(8)-200、S005(8)-194、S005(8)-211、S005(8)-212、S005(8)-213、S005(8)-216、S005(8)-224、S005(8)-235、S005(8)-236、S005(8)-254、S005(8)-259、S005(8)-261、S005(8)-286、S005(8)-264、S005(9)-293、S005(9)-299、S005(9)-304、S005(9)-308、S005(9)-310、S005(9)-312、S005(9)-317、S005(9)-329、S005(9)-333、S005(9)-350、S005(9)-355、S005(9)-357、S005(9)-358、S005(9)-359、S005(9)-371、S005(10)-388、S005(10)-390、S005(10)-401、S007(3)-G11、S007(6)-34、S007(7)-107、S007(7)-178、S007(8)-192、S007(8)-259、S007(10)-420,序列如SEQ ID NO.5~ SEQ ID NO.122所示;所述的103个桔小实蝇抗高效氯氰菊酯抗性相关特异性基因片段是:S002(1)-A3、S002(1)-B4、S002(3)-D9、S002(3)-E7、S002(4)-C10、S002(4)-E4、S002(4)-F8、S002(5)-E5、S002(6)-16、S002(6)-19、S002(6)-82、S002(8)-270、S002(10)-416、S002(10)-452、S002(10)-444、S008(1)-B2、S008(1)-D11、S008(1)-D5、S008(1)-D6、S008(1)-E3、S008(1)-F10、S008(1)-F12、S008(2)-B1、S008(2)-F10、S008(2)-F12、S008(2)-G1、S008(3)-B10、S008(3)-C11、S008(3)-D10、S008(5)-B12、S008(5)-B8、S008(5)-C7、S008(5)-E5、S008(5)-G11、S008(5)-H2、S008(6)-14、S008(6)-29、S008(6)-42、S008(6)-58、S008(6)-64、S008(6)-77、S008(6)-85、S008(6)-93、S008(7)-130、S008(7)-135、S008(8)-276、S003(1)-A10、S003(1)-B6、S003(1)-D7、S003(1)-E1、S003(1)-E9、S003(1)-F2、S003(1)-F5、S003(1)-F9、S003(1)-G4、S003(2)-C6、S003(2)-D4、S003(2)-D5、S003(2)-E7、S003(2)-F3、S003(2)-G5、S003(3)-F1、S003(3)-H10、S003(4)-A8、S003(4)-C1、S003(4)-C12、S003(4)-F1、S003(4)-G6、S003(5)-B11、S003(5)-B2、S003(5)-B8、S003(5)-E6、S003(5)-H5、S003(6)-8、S003(6)-32、S003(6)-51、S003(6)-74、S003(6)-81、S003(6)-92、S003(7)-151、S003(7)-160、S003(7)-165、S003(7)-167、S003(7)-175、S003(8)-196、S003(8)-204、S003(8)-220、S003(8)-224、S003(8)-231、S003(8)-249、S003(8)-271、S003(8)-284、S003(8)-288、S003(9)-311、S003(9)-312、S003(9)-321、S003(9)-352、S003(10)-395、S003(10)-404、S003(10)-405、S003(10)-406、S003(10)-432、S003(10)-469;序列如SEQ ID NO.123~ SEQ ID NO.225所示。权利要求1所述cDNA芯片的构建方法,其特征在于,步骤如下:S1.抑制性消减杂交分别构建桔小实蝇抗敌百虫和抗高效氯氰菊酯抗性品系SSH文库;S2.从S1构建的两个文库中分别随机挑选差减重组克隆子,提取重组质粒DNA;S3.分别以S2获得的重组质粒DNA为模板,以SEQ ID NO.1所示引物Nested PCR Primer 1F和SEQ ID NO.2所示引物Nested PCR Primer 2R为接头引物进行PCR扩增,检测各PCR产物浓度和片段的单一性,纯化回收得到产物;S4.将纯化回收得到的产物点样于化学修饰的载体上,同时设置阳性和阴性对照,得到初始基因芯片;S5. 分别采用步骤S1构建文库时使用的抗性品系总RNA和敏感品系总RNA为检测样,进行DNA芯片杂交,去除假阳性差异基因,选择在基因芯片上杂交后上调信号值大于2的样品为抗性相关差异表达基因片段;S6.以S5得到的抗性相关差异表达基因片段的重组质粒为模板进行PCR扩增,引物同S3所述,对产物进行纯化回收、测序、拼接组装,去除重复和冗繁序列,挑取出单一非重叠序列作为特异性抗性靶标基因;S7.将S6得到的特异性抗性靶标基因点样于化学修饰的载体上,同时设置阳性和阴性对照,构建得到检测桔小实蝇抗敌百虫和高效氯氰菊酯的抗性水平的cDNA芯片。根据权利要求2所述cDNA芯片的构建方法,其特征在于,S4和S7所述的载体为载玻片材料。根据权利要求2所述cDNA芯片的构建方法,其特征在于,S7所述的化学修饰是指通过化学反应在载体表面上引入氨基官能团,使DNA能够与表面官能团能共价结合,稳定地固化于支持物表面。

说明书

技术领域

 本发明涉及昆虫抗药性检测技术领域。更具体地,涉及一种检测桔小实蝇抗敌百虫和高效氯氰菊酯的抗性水平的cDNA芯片及其制备方法和应用。

背景技术

世界卫生组织在1957年对昆虫抗药性的定义是:“昆虫具有耐受杀死正常种群中大多数个体的药量的能力并在其种群中发展起来的现象”。昆虫对杀虫剂的抗药性是一种进化现象,是昆虫种群内部遗传结构在杀虫剂选择作用下持续变化的外在表现,是昆虫种群的一种特性,主要包括自然耐药性、交互抗药性、负交互抗药性及多抗药性等。昆虫产生抗药性的后果是:现行的化学药剂防治剂量效果降低-人们开始加大药剂剂量-昆虫抗性增强最终导致防治失败,给环境和人类食品安全生产带来严重的破坏性后果。桔小实蝇是我国华南及西南地区果实蔬菜上的重要害虫之一,每年给我过农业生产特别是经济水果造成重大的经济损失。目前,田间防治桔小实蝇主要采用的化学药剂防治,多年的田间种群监测数据显示桔小实蝇已经对多种农药产生了抗药性。

为了延缓昆虫抗药性发展,减少农药剂量的使用,保护环境和人类安全,对昆虫抗药性进行监测,实时掌握其抗药性动态,及时轮换使用不同类型的农药是治理昆虫抗药性产生的一种很好的策略。昆虫抗药性的机制主要分为:行为抗性、靶标抗药性和生理代谢抗药性。很多研究证明昆虫的这些抗药性机制都是由基因调控的,基因与抗药性是一种内因-表观的关系。因此,了解不同类型杀虫剂作用下,昆虫产生抗性时,其体内特异性抗性相关基因的表达情况,可以为了解昆虫抗性发展水平提供依据。

基因芯片杂交技术 (gene chip hybrid analysis) 是基于核酸分子原位杂交技术原理发展而来的,根据碱基互补的原理,利用基因探针在基因混合物中识别特定基因。该技术将大量DNA探针分子固定于支持物上,然后与荧光标记的样品 (DNA或RNA)进行杂交,通过检测杂交信号强弱来判断样品中靶分子的数量。可以对来源于不同的个体、组织、细胞周期、发育阶段、分化阶段、病变、刺激下的细胞内mRNA或反转录后产生的cDNA进行检测,从而对这些基因表达的个体特异性、组织特异性、发育阶段特异性、分化阶段特异性、病变特异性、刺激特异性进行综合的分析和判断,迅速将某个或几个基因与相关因素联系起来,加快这些基因功能的确定,具有广阔的应用前景。利用表达性基因芯片杂交技术,可以同时对抗药性及敏感昆虫体内的成千上万个不同基因进行差异表达定量检测。

桔小实蝇是我国华南及西南地区果实蔬菜上的重要害虫之一。在农业生产中,为了减少损失,目前,田间防治桔小实蝇主要采用的化学药剂防治,多年的田间种群监测数据显示桔小实蝇已经敌百虫、高效氯氰菊酯等多种农药已经产生了抗药性。2002-2004年,研究学者采用药膜法测定了广东、海南、福建、广西等4省(区)桔小实蝇B. dorsalis种群对敌百虫和高效氯氰菊酯的抗药性,结果表明澄海、闽南桔小实蝇种群对敌百虫抗药性达到4.56和4.07倍,大部分地区桔小实蝇种群对上述2种杀虫剂抗药性尚处于敏感阶段,同时监测2003-2004年广州郊区桔小实蝇成虫对敌百虫和高效氯氰菊酯的抗药性变化,发现除敌百虫外,桔小实蝇对高效氯氰菊酯的抗药性变化不明显。在接下来的2005-2007年间继续对我国7个省份不同地区的田间桔小实蝇抗药性发展进行了监测,结果表明不同地区桔小实蝇均对上述2种药剂抗药性呈上升趋势。随后2008-2012年对全国不同地区的连续监测表明田间桔小实蝇种群均对上述2种药剂抗性达到了中抗甚至高抗水平。

为了延缓昆虫抗药性发展,减少农药剂量的使用,保护环境和人类安全,对昆虫抗药性进行监测,实时掌握其抗药性动态,及时轮换使用不同类型的农药是治理昆虫抗药性产生的一种很好的策略。

目前桔小实蝇的抗药性监测主要采用的是生物测定法,但传统的生物测定方法比较繁琐,操作起来比较复杂,每次测定都需要大量的虫源,往往需要先从野外采集部分虫源带回人工饲养繁殖以达到供试虫数,结果使测得的抗药性水平具有滞后性。另外,生物测定受外界环境(如:虫态、营养、温度、湿度等)的影响较大,重复性和精确性较低。而分子生物学抗药性监测技术,其灵敏度较高,仅用少量试虫就可对抗药性程度进行检测,可实现对样品的高通量并行检测,操作简单,操作简单、省时且试验误差小,可以确定害虫个体的抗药性程度,这一点是生物测定方法所无法达到的。而实现分子抗药性监测就要对抗药性基因进行全面了解,检测更多的抗药性相关基因才能更准确的反映抗药性发展水平。

昆虫抗药性机制是其体内基因调控的结果,虽然研究者们已经对桔小实蝇的抗药性机制从多个方面进行了探讨,但是也存在着一些问题,在抗药性靶标基因的研究上较少,仅仅涉及到ace和alpha 6基因,在代谢抗药性相关研究中也仅对个别酶或蛋白变化现象进行了初步研究,并没有涉及到其编码的基因研究。同时昆虫抗药性是多基因共同协调作用的结果,是一种多基因效应现象。但到底有多少基因参与到抗药性作用、不同的抗药性水平涉及抗药性基因是否相同及抗药性基因是怎样参与抗药性过程等方面的研究尚缺少报道。

发明内容

 本发明所要解决的技术问题是克服现有检测桔小实蝇抗药性的技术不足,提供了一种检测桔小实蝇抗敌百虫和高效氯氰菊酯的抗性相关基因表达水平的cDNA芯片。

本发明的另一目的在于提供上述cDNA芯片的构建方法。

本发明还有一个发明目的是提供上述芯片的应用。

本发明的发明目的是通过以下技术方案予以实现:

提供一种检测桔小实蝇抗敌百虫和高效氯氰菊酯抗性水平的cDNA芯片,所述芯片包含221个靶基因cDNA探针;其中118个靶基因DNA探针为桔小实蝇抗敌百虫抗性相关特异性基因片段,103个靶基因DNA探针为桔小实蝇抗高效氯氰菊酯抗性相关特异性基因片段。

其中,118个桔小实蝇抗敌百虫特异性基因片段是:S004(4)-A9、S004(4)-B7、S004(4)-D6、S004(4)-H9、S004(5)-B10、S004(5)-B5、S004(5)-C10、S004(5)-C7、S004(5)-D1、S004(5)-D10、S004(5)-D11、S004(5)-G1、S004(5)-H3、S004(5)-H7、S004(6)-10、S004(6)-12、S004(6)-18、S004(6)-21、S004(7)-100、S004(7)-109、S004(7)-138、S004(7)-156、S004(7)-165、S004(7)-183、S004(8)-197、S004(8)-199、S004(8)-217、S004(8)-225、S004(8)-240、S004(8)-248、S004(9)-293、S004(9)-308、S004(9)-328、S004(10)-394、S004(10)-401、S004(10)-443、S004(10)-471、S005(1)-A1、、S005(1)-B2、、S005(1)-C1、S005(1)-D12、S005(1)-G8、S005(2)-A8、S005(2)-C7、S005(2)-E8、S005(2)-G1、S005(3)-A5、S005(3)-A9、S005(3)-A11、S005(3)-C11、S005(3)-D12、S005(3)-D8、S005(3)-H12、S005(4)-A2、S005(4)-A3、S005(4)-A8、S005(4)-B8、S005(4)-G1、S005(4)-G2、S005(5)-A5、S005(5)-B7、S005(5)-E11、S005(5)-G6、S005(5)-G9、S005(5)-H2、S005(6)-13、S005(6)-17、S005(6)-49、S005(7)-98、S005(7)-100、S005(7)-103、S005(7)-116、S005(7)-107、S005(7)-131、S005(7)-176、S005(7)-178、S005(7)-181、S005(7)-188、S005(7)-189、S005(8)-200、S005(8)-194、S005(8)-211、S005(8)-212、S005(8)-213、S005(8)-216、S005(8)-224、S005(8)-235、S005(8)-236、S005(8)-254、S005(8)-259、S005(8)-261、S005(8)-286、S005(8)-264、S005(9)-293、S005(9)-299、S005(9)-304、S005(9)-308、S005(9)-310、S005(9)-312、S005(9)-317、S005(9)-329、S005(9)-333、S005(9)-350、、S005(9)-355、S005(9)-357、S005(9)-358、S005(9)-359、S005(9)-371、S005(10)-388、S005(10)-390、S005(10)-401、S007(3)-G11、S007(6)-34、S007(7)-107、S007(7)-178、S007(8)-192、S007(8)-259、S007(10)-420,序列如SEQ ID NO.5~ SEQ ID NO.122所示。

103个桔小实蝇抗高效氯氰菊酯特异性基因片段是:S002(1)-A3、S002(1)-B4、S002(3)-D9、S002(3)-E7、S002(4)-C10、S002(4)-E4、S002(4)-F8、S002(5)-E5、S002(6)-16、S002(6)-19、S002(6)-82、S002(8)-270、S002(10)-416、S002(10)-452、S002(10)-444、S008(1)-B2、S008(1)-D11、S008(1)-D5、S008(1)-D6、S008(1)-E3、S008(1)-F10、S008(1)-F12、S008(2)-B1、S008(2)-F10、S008(2)-F12、S008(2)-G1、S008(3)-B10、S008(3)-C11、S008(3)-D10、S008(5)-B12、S008(5)-B8、S008(5)-C7、S008(5)-E5、S008(5)-G11、S008(5)-H2、S008(6)-14、S008(6)-29、S008(6)-42、S008(6)-58、S008(6)-64、S008(6)-77、S008(6)-85、S008(6)-93、S008(7)-130、S008(7)-135、S008(8)-276、S003(1)-A10、S003(1)-B6、S003(1)-D7、S003(1)-E1、S003(1)-E9、S003(1)-F2、S003(1)-F5、S003(1)-F9、S003(1)-G4、S003(2)-C6、S003(2)-D4、S003(2)-D5、S003(2)-E7、S003(2)-F3、S003(2)-G5、S003(3)-F1、S003(3)-H10、S003(4)-A8、S003(4)-C1、S003(4)-C12、S003(4)-F1、S003(4)-G6、S003(5)-B11、S003(5)-B2、S003(5)-B8、S003(5)-E6、S003(5)-H5、S003(6)-8、S003(6)-32、S003(6)-51、S003(6)-74、S003(6)-81、S003(6)-92、S003(7)-151、S003(7)-160、S003(7)-165、S003(7)-167、S003(7)-175、S003(8)-196、S003(8)-204、S003(8)-220、S003(8)-224、S003(8)-231、S003(8)-249、S003(8)-271、S003(8)-284、S003(8)-288、S003(9)-311、S003(9)-312、S003(9)-321、S003(9)-352、S003(10)-395、S003(10)-404、S003(10)-405、S003(10)-406、S003(10)-432、S003(10)-469,序列如SEQ ID NO.123~ SEQ ID NO.225所示。

本发明提供的cDNA芯片的构建方法如下:

S1.SSH文库构建:分别提取桔小实蝇敏感品系、敌百虫抗性品系和高效氯氰菊酯抗性品系的RNA,按本实验室构建SSH文库的策略和方法(Li,2011),分别构建与抗敌百虫和抗高效氯氰菊酯相关的SSH文库;

S2.从S1构建的两个文库中分别随机挑选2820个差减重组克隆子,然后摇菌、提取重组质粒DNA;

S3.分别以S2获得的重组质粒DNA为模板,以接头引物Nested PCR Primer 1F(SEQ ID NO.1)和Nested PCR Primer 2R(SEQ ID NO.2)进行PCR扩增,将各基因PCR产物凝胶电泳检测其浓度和片段的单一性,并进行纯化回收;

S4.将S3纯化产物采用芯片点样仪点样于化学修饰的载玻片载体上,同时设置阳性和阴性对照,得到初始基因芯片;

S5.分别采用构建SSH文库时使用的抗性品系总RNA和敏感品系总RNA为检测样,对S4得到的初始基因芯片进行DNA芯片杂交,去除假阳性差异基因,选择在基因芯片上杂交后上调信号值大于等于2的样品为抗性相关差异表达基因;

S6.以S5得到的抗性相关差异表达基因的重组质粒为模板进行PCR扩增,引物同S3所述,对产物进行纯化回收并测序,序列采用DNAstar软件进行拼接组装,去除重复和冗繁序列,挑取出单一非重叠序列作为特异性抗性相关靶标基因。

S7.将S6得到的特异性抗性相关靶标基因利用基因芯片点样仪点样于化学修饰的玻璃片载体上,同时设置阳性和阴性对照,委托北京博奥生物有限公司构建检测桔小实蝇抗敌百虫和抗高效氯氰菊酯的抗性水平的cDNA芯片。

其中,步骤S1所述SSH文库构建的具体操作包括接头连接、第一次扣除杂交、第二次扣除杂交、第一次抑制性PCR、第二次抑制性PCR;利用桔小实蝇看家基因G6PDH进行半定量PCR,分别检测所述接头连接和消减杂交效率,引物序列为G6PDH-F:5’-GCTGCCGAAACCTACAAA-3’(SEQ ID NO.3),G6PDH-R:5’-CGCTTATCATAGCCACCC-3’(SEQ ID NO.4),扩增片段中不含Rsa I 酶切位点。

步骤S7所述化学修饰的玻璃片载体是指:通过化学反应在载体表面上引入氨基官能团,使DNA能够与表面官能团能共价结合,稳定地固化于支持物表面。

本发明具有以下有益效果:

本发明首次采用基因芯片技术,发掘并寻找桔小实蝇抗药性相关基因片段,然后利用抗性相关基因片段点制成特异性靶标抗性相关cDNA芯片,对桔小实蝇抗性水平进行监测。可以同时对抗药性及敏感虫体内的成千上万个不同基因进行差异表达定量检测,过程简单有效,弥补了传统生测方法的不足,实现高通量、快速、准确实时监测桔小实蝇抗性发展,从而延缓其抗药性,实现食品生产安全。

另外,分别通过对抗敌百虫3.21倍、16.8倍和69.5倍及抗高效氯氰菊酯5.3倍、21.6倍和160.9倍桔小实蝇成虫品系抗性相关基因表达水平的检测表明,该基因芯片具有高通量、集成化和微型化的优点。

附图说明

图1为 初始基因芯片筛选SSH克隆文库杂交扫描图。

图2为 本发明制备cDNA芯片检测桔小实蝇抗性品系杂交扫描图。

具体实施方式

以下结合具体实施例来进一步说明本发明,除非特别说明,本发明采用的试剂、设备和实验方法为本技术领域常规试剂、设备和方法。

本发明实施例消减杂交(SSH)采用Clontech公司生产的试剂盒(购自广州瑞真生物公司,具体操作参照本实验室李怡峰博士论文进行);PCR扩增试剂、感受态细胞DH5α购自瑞真生物公司,总RNA提取试剂Trizol购自Invitrogen公司,克隆载体pGEM-T购自Promega公司。

分子生物学基本操作:琼脂糖凝胶电泳、PCR产物纯化回收、克隆连接、转化、质粒提取、酶切鉴定等分子生物学操作按照《分子克隆实验操作指南》(科学出版社,第三版,黄培堂编译,2002年)操作。序列测序有上海英潍捷基公司广州分公司完成。

实施例1 检测桔小实蝇抗敌百虫和高效氯氰菊酯抗性水平的cDNA芯片的构建

1、桔小实蝇抗敌百虫和高效氯氰菊酯抗性品系SSH文库的构建

(1)桔小实蝇抗性品系选育:

用试验室饲养保留的敏感品系作为抗药性品系筛选的亲代F0,在室内同一条件下饲养,采用药膜法,分别用敌百虫和高效氯氰菊酯进行逐代筛选。

敏感品系F0的选择标准:敌百虫对桔小实蝇成虫敏感品系的致死中浓度LC50=2.65mg/L;高效氯氰菊酯对桔小实蝇敏感品系的致死中浓度LC50=3.36mg/L。

抗性品系的获得:经过一些代数的筛选后,敌百虫筛选至22代后,敌百虫对桔小实蝇成虫的致死中浓度LC50=184.17mg/L;高效氯氰菊酯筛选至24代后,高效氯氰菊酯对桔小实蝇成虫的致死中浓度为LC50=538.49mg/L。

具体筛选步骤为:首先测定亲代(F0)对敌百虫和高效氯氰菊酯的毒力敏感基线,然后采用药膜法,以致死中浓度 (LC50) 对种群进行抗药性筛选;以丙酮稀释药剂至亲代LC50浓度,均匀涂布于250mL锥形瓶中,待丙酮完全挥发后,放入50-60头羽化后3-5天的桔小实蝇成虫,用医用纱布封口,倒置24hr,条件为:光周期:14hr光照:10hr黑暗,温度26-30℃,湿度:60%-95%。24hr后,存活下来的成虫移入养虫笼中用人工饲料饲养。连续处理三代。从第四代开始根据第三代成虫的LC50浓度处理接下来的三代,以此类推,使其种群获得抗药性,得到桔小实蝇抗敌百虫和抗高效氯氰菊酯成虫品系。

(2)分别以步骤(1)中各抗性品系为检测子,以敏感品系成虫为驱动子,分别构建各抗性品系特异性差异基因表达文库。

构建的特异性差异基因表达文库经过两轮消减杂交和2次选择性PCR后,获得了库容量为9.48×103的桔小实蝇成虫抗敌百虫品系差异基因表达文库,库容量为1.05×104的桔小实蝇成虫抗高效氯氰菊酯品系差异基因表达文库。

2、初始基因芯片的制备

(1)从抗敌百虫和抗高效氯氰菊酯品系SSH文库中分别随机挑选2820个差减重组克隆子,然后摇菌、提取重组质粒DNA。

(2)采用Nested PCR Primer 1F(序列见SEQ ID NO.1)和Nested PCR Primer 2R(序列见SEQ ID NO.2)引物分别PCR扩增每一个重组质粒。PCR体系包括10×PCR Buffer 10μL、2.5mmol/L dNTP 8μL、F/2R引物(10μmol/L)各4μL,重组质粒DNA模板10-50ng、Taq DNA聚合酶(5U/μL)0.5μL,加无菌水至100μL。PCR反应参数:94℃变性30S,68℃退火30S,72℃延伸1.5min,35个循环,72℃延伸5min。

(3)用酒精-异丙醇法沉淀纯化PCR扩增产物,凝胶电泳检测其浓度和片段的单一性,以桔小实蝇G6PDH、28S和β-actin基因为内参基因对照,产物送北京博奥生物有限公司点制成芯片,纯化产物采用芯片点样仪点样于化学修饰的载玻片、硅片、膜或高分子材料等载体上。芯片样品还包括Hex作为阳性对照,Blank(点样溶液)作为阴性对照。整个点阵分为32个亚阵列,亚阵列有12列,11行,点间距为150μm,点的直径约为100μm,每个样品在芯片上重复3次。

3、cDNA芯片杂交确定桔小实蝇成虫抗敌百虫和抗高效氯氰菊酯抗性相关基因片段

分别采用构建SSH文库时使用的抗性品系总RNA和敏感品系总RNA为检测样,进行cDNA芯片杂交,去除假阳性差异基因;选择在基因芯片上杂交后上调信号值大于等于2的样品为抗性差异表达片段;以重组质粒为模板,上述Nested PCR Primer 1F和Nested PCR Primer 2R引物进行PCR扩增,扩增体系与反应参数同步骤(2)所述,对产物进行纯化回收并测序,序列采用DNAstar软件进行拼接组装,去除重复和冗繁序列,挑取出单一非重叠序列序列作为抗性相关特异性靶片段。

芯片杂交:探针RNA样品的荧光标记采用晶芯? cRNA 扩增标记试剂盒(博奥生物有限公司,产品目录号:360060-10),具体操作按照说明书进行。标记的DNA溶于80μl杂交液中 (3×SSC, 0.2%SDS, 5×Denhart’s, 25%甲酰胺),于42℃杂交过夜。杂交结束后,先在42℃左右含0.2% SDS,2×SSC 的液体中洗5 min,而后在0.2×SSC 中室温洗5 min。玻片甩干后即可用于扫描。

芯片扫描:芯片用LuxScan 10KA 双通道激光扫描仪进行扫描。

芯片图像的采集与数据分析:采用LuxScan 3.0 图像分析软件 (CapitalBio 公司) 对芯片图像(图1)进行分析,把图像信号转化为数字信号;根据cy5 和cy3 总体信号的整体平均值(global mean)对各芯片进行片间线性校正;使用 Lowess 方法进行片内归一化;每个基因有三个以上重复比值,即用SAM软件进行分析,FDR控制在5%以内,再以2倍标准筛选差异表达基因。

4、检测cDNA芯片的制备

对3中选取的差异表达片段的重组质粒为模板进行PCR扩增,扩增引物、体系与反应参数同步骤2(2)所述,产物纯化后片段点制成cDNA芯片,方法同上述初始基因芯片的制备。

实施例2 本发明制备的cDNA芯片对桔小实蝇抗性品系抗药性的检测

1、桔小实蝇抗性品系的选育

用试验室饲养保留的敏感品系作为抗药性品系筛选的亲代F0,在室内同一条件下饲养,采用药膜法,分别用敌百虫和高效氯氰菊酯进行逐代筛选。具体步骤同前述。结果分别获得了抗敌百虫3.21倍、18.23倍和69.5倍抗性品系;抗高效氯氰菊酯6.8倍、16.2倍和160.74倍品系。同时,测定了抗高效氯氰菊酯160.74倍品系对敌百虫的交互抗性为21.20倍。

2、桔小实蝇抗性品系和敏感品系样品总RNA的提取

分别取选育的每一个抗性品系和敏感品系羽化后3~5天的成虫提取总RNA(雌雄各8头),总RNA提取采用Trizol ( Invitrogen)试剂法,具体操作参照试剂说明。样品破碎采用玻璃珠研磨法,研磨器为MiniBeadbeater-16研磨珠均质器 (Biospec,美国)。

总RNA质量检测:RNA提取完成后,取2μL用微量紫外分光光度计测定RNA样品的浓度与纯度,高质量的RNA样品OD260/280应在1.9~2.1之间。取5μL用1%琼脂糖凝胶电泳检测其质量,桔小实蝇RNA质量判定标准:28S条带亮度较弱,18S、5S条带较明亮,符合昆虫物种中大部分总RNA存在隐裂现象。

3、荧光标记及杂交

各抗性品系和敏感品系总RNA的反转录、荧光标记和杂交方法同前述。芯片扫描和图像采集与数据分析均同前述,检测结果见图2。

4、cDNA芯片检测结果

(1)抗敌百虫品系cDNA芯片检测结果

抗敌百虫3.21倍品系相对于敏感品系,其上调差异表达基因共有12个,抗敌百虫18.23倍品系相对于敏感品系,其上调差异表达基因共有50个,抗敌百虫69.5倍品系相对于敏感品系,其上调差异表达基因共有51个(如表1和表2所示)。

抗高效氯氰菊酯160.74倍品系(对敌百虫的交互抗性为21.20倍)相对于敏感品系在抗敌百虫特异性表达基因芯片中的上调表达基因有43个(如表1和表2所示)。

表1桔小实蝇成虫抗敌百虫差异上调表达基因

注:Tri-R1、Tri-R2和Tri-R3分别表示桔小实蝇抗敌百虫3.21倍、18.23倍和69.5倍品系;Alp-R3=桔小实蝇抗敌百虫21.20倍品系;--表示信号比小于2,cy3/cy5表示抗性品系杂交信号值/敏感品系杂交信号值。

表2桔小实蝇成虫抗敌百虫差异上调表达基因

注:Tri-R1、Tri-R2和Tri-R3分别表示桔小实蝇抗敌百虫3.21倍、18.23倍和69.5倍品系;Alp-R3=桔小实蝇抗敌百虫21.20倍品系;--表示信号比小于2,cy3/cy5表示抗性品系杂交信号值/敏感品系杂交信号值。

(2)抗高效氯氰菊酯品系cDNA芯片检测结果

抗高效氯氰菊酯6.8倍品系相对于敏感品系,其上调差异表达基因共有4个,抗高效氯氰菊酯16.2倍品系相对于敏感品系,其上调差异表达基因共有24个,抗高效氯氰菊酯160.74倍品系相对于敏感品系,其上调差异表达基因共有34个(如表3和表4所示)。

表3桔小实蝇成虫抗高效氯氰菊酯差异上调表达基因

注:Alp-R1、Alp-R2和Alp-R3分别表示桔小实蝇抗高效氯氰菊酯6.8倍、16.2倍和160.74倍品系,--表示信号比小于2,cy3/cy5表示抗性品系杂交信号值/敏感品系杂交信号值。

表4桔小实蝇成虫抗高效氯氰菊酯差异上调表达基因

注:Alp-R1、Alp-R2和Alp-R3分别表示桔小实蝇抗高效氯氰菊酯6.8倍、16.2倍和160.74倍品系,--表示信号比小于2,cy3/cy5表示抗性品系杂交信号值/敏感品系杂交信号值。

以上检测结果表明,本发明所制作的cDNA芯片能有效地区分和鉴别不同农药不同抗性水平的品系,该基因芯片具有高通量、微型化、集成化和平行化的优点。

本发明cDNA芯片由118个抗敌百虫相关特异性靶基因探针和103个抗高效氯氰菊酯相关特异性靶标基因探针组成,可同时对桔小实蝇抗敌百虫品系和抗高效氯氰菊酯品系的抗性水平进行检测。

                         SEQUENCE LISTING

 

<110>  华南农业大学

<120>  桔小实蝇抗敌百虫和高效氯氰菊酯抗药性水平检测cDNA芯片的制备方法及其

       应用

<130> 

<160>  225  

<170>  PatentIn version 3.3

 

<210>  1

<211>  22

<212>  DNA

<213>  Nested PCR Primer 1F

<400>  1

tcgagcggcc gcccgggcag gt                                              22

 

<210>  2

<211>  20

<212>  DNA

<213>  Nested PCR Primer 2R

<400>  2

agcgtggtcg cggccgaggt                                                 20

 

<210>  3

<211>  18

<212>  DNA

<213>  G6PDH-F

<400>  3

gctgccgaaa cctacaaa                                                   18

 

<210>  4

<211>  18

<212>  DNA

<213>  G6PDH-R

<400>  4

cgcttatcat agccaccc                                                   18

 

<210>  5

<211>  558

<212>  DNA

<213>  S004(4)-A9

 <400>  5

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 <210>  6

<211>  696

<212>  DNA

<213>  S004(4)-B7

<400>  6

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<210>  7

<211>  640

<212>  DNA

<213>  S004(4)-D6

 <400>  7

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 <210>  8

<211>  840

<212>  DNA

<213>  S004(4)-H9

<400>  8

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<210>  9

<211>  755

<212>  DNA

<213>  S004(5)-B10

<400>  9

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tattccttgc aagcctttgg tttggacttt acagt                               755

 

<210>  10

<211>  726

<212>  DNA

<213>  S004(5)-B5

<400>  10

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tctggt                                                               726

 

 

<210>  11

<211>  348

<212>  DNA

<213>  S004(5)-C10

<400>  11

cagtaaattt aatatcataa cgttcaaaaa acgatgatat tgtagatgca ttaaattttt     60

 

gtaaaatatt ctccttaaca gtcataatta aatcatcacc atagaagaat acacatacat    120

 

tttctctaaa cgaagctaaa ctagtaatat ttgatattga atcttcacaa cattctctca    180

 

tcaaagttaa atatgctgta cgaatatata acatattaac tatgttattt aaaatagtcg    240

 

taataggaca tccagatggt gcaccacaaa ctacctcgta taccatattc aacattaaat    300

 

gttttgagaa tgcagtctct cgacccataa ttttccgtac ctcggccg                 348

 

 

<210>  12

<211>  420

<212>  DNA

<213>  S004(5)-C7

<400>  12

gacgtcccgt ctccacggct gtagtcaagc ctttgcgcac agctaccgaa cttatggtgc     60

 

gcagatccgt tgccatgtcg agcgcggcaa acacacgtat cattgccgtt acgaaatcac    120

 

tgccataatc gccgaactct ccgctctgat aatcgttggg caacagataa tgatattgag    180

 

gccaatagct ctttgtaatg aagaacacac tattcgaatc ggaaggcttg aagttcttgt    240

 

ccaatcccca aatgaaatgt gccgaattaa taagccaaca aacattcaaa acgatgagat    300

 

aacgcagtga gaaggccaca aaggtggctg cggcaattga atcgccccaa tactcaagcg    360

 

gtgcattgat cggcaacaaa acgtgcagga agaagtagag tacctcggcc gcgaccacgc    420

 

 

<210>  13

<211>  834

<212>  DNA

<213>  S004(5)-D1

<400>  13

aattgtggtc ctgttgtcaa gaatgggtga gtgaaaaact tggaattgtt gaaccagggg     60

 

cgataactac atttgaacaa gatgttatga agtggcacaa agagattgag ttttggagcg    120

 

tgcttaaaaa taaggaagat gcaaaaaaag atccaaataa agcattgata atttcaaagt    180

 

tatatctcac aggaatgaat cataagcgtc aagccacttt attaaacatg gataggagaa    240

 

ttcatgatat tttgaacagt ggtattattg cggccagtaa gctatacaag tttgtggaag    300

 

aatccaacgc aataggtggt ggcacgcgct tcaaacctct gggtattgcc ttgtttggtg    360

 

aaagccaaat aggaaaaacc acaatggttg agaccttatc gcaagatttg ttgtatgaaa    420

 

tgggacatcg tgatgtagag acgtatcgta atgaaattta ctcacggcaa gcggaaacag    480

 

aatttttcga tggttacgtt aaccagtcaa taattatagt tgatgacgca tttgcaatta    540

 

gagatagtca aacaaaacca aatgctgaaa ttgcagaaac tattagaatg attaacgaat    600

 

tccctcatca cttacatatg gctattttgc aagataagaa tacatacaac acatcacgag    660

 

tcgtgctgtg gaccattaac aacattaata tccaaacacc ttcattatct taccctaaag    720

 

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agatagtaaa agatggaaat gggcaagaac aaaagttatt ggatcaatca aaaa          834

 

 

<210>  14

<211>  278

<212>  DNA

<213>  S004(5)-D10

 <400>  14

agcgaaatat aaaacgtcat ccatttagac catgttatgt agctgctatg gataaacgag     60

 

ctatagaaga aacatgcaat tggatttttg aaggtcatga agaacctgaa gcgtctatca    120

 

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ttagaaataa agtagttgta ttctggcgtc aattaaatat ttatcctaga attcctttat    240

 

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<210>  15

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<212>  DNA

<213>  S004(5)-D11

 <400>  15

ttgagaacga aaataacgcc ggttttcaca acaggaaaga tcaaacaaat gtattcacta     60

 

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ggccgaaaac agctaaccat tacattccgt cgcgctattc aattccttat cgcattcttc    300

 

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<210>  16

<211>  697

<212>  DNA

<213>  S004(5)-G1

<400>  16

gttaccagac aaagataccg gcgaattgat cctgaagtgc accggcccca gcgaagccgt     60

 

gatgacgatg tagagcttag ctctattaat ggttcagaga gagattaagt tgaatatctc    120

 

taaacagcaa tatgaaggaa aacatcaatg aataaaaccc tcagtagatg agtaaaatat    180

 

gaaggaaaac atcaatgaat aaaaccctca gtagatgagt aatcaaattg aatgaaggaa    240

 

aacatcaaag aataaaaccc catgattggt aatcatcaat atgaaccatc cctttcacgg    300

 

taagggaact atgttgggct tagtttcagt tcaacctatc caataaccga aggaaaacga    360

 

atttaacccg ttgattacgt aaaatcacta tcgaaggaaa acgttataac ccggaatgtc    420

 

cgttaatatc gaaggaaaac gaaatataac ctggttgctc cattaccgct tacactcgaa    480

 

ggaaaacgtt gatataaccc ggttgccacg ttattagcac tatagaagga aaactttaac    540

 

ccgatcgtta caatcgtaat tatgtaacat tcgaggattc tcctctgttg acatatgtcc    600

 

gtctgatgaa cgaaaccatc acatgaagga aaacattata accactgtcc ggttaaagac    660

 

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<210>  17

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<212>  DNA

<213>  S004(5)-H3

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gcagagcgtt tgagtttcat aaatttaatt tctgacatat gaatgcgttt tgtcatatta     60

 

ttcgttctca tttctatagt tgtatctaat ggtaaacttt taattttatc aatataatga    120

 

tctatacata taaagctcca cccttttatt cctaaacaac ggcataatgt ttcagtattt    180

 

cgagaggtag ttgctactat aaagaaataa tttcttctta aggcaatatc tagagatttt    240

 

tgcatatcta gtgccatctc tggttgctta ggattaacat ttggcttctt cttgttagct    300

 

tctacatgtt gttgattata tgccatttgt ggtgatactt tacagaattg acaattacca    360

 

tttacacatt catcagtaat tacatgtttt ttaagcgcat ctgcatctat aatttttcta    420

 

ctatttaagt attctttcgt caatttcttt ttatcactgt aatccttata catattataa    480

 

cctttataca tacccgtaac ccctaatact atagctaata tccataataa tggtttagca    540

 

acacttttaa ttaaagatcc aattttcccc catgtacctc gg                       582

 

<210>  18

<211>  533

<212>  DNA

<213>  S004(5)-H7

<400>  18

atatcgcaaa aaccagagta aacctgaatt taatccaata cattagtgat tatcttcaga     60

 

aacaaactac cttcagaaat gaaaaagtag ttatgtcgaa tctcacatct gacggagact    120

 

cagttcagtt cattagaact caaccgaccg cagaaactgt caataaaatg acaaagtgga    180

 

ccgacaaagt agtgcgaccc gtgtcaacga acgccgagtc aatcactaca ttcggagcga    240

 

gctatatgac tggatttcag ttatataaag aagcaacagg cggagatcat accaattggt    300

 

atcctctcaa agtcacagct tcaaatccaa ttcctgatga atggatagca aatcgcaacg    360

 

aaaatagaat cctaccacca ggattcaaca ttaatagatt taatgctatt agtgactcac    420

 

aagtcaatag gacaaacgca attgtgagac gtatgataac tagcttacgc taatcataca    480

 

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<210>  19

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<212>  DNA

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cgtaataact gtggcggagg ttgtatccaa accggccatc agcatgtcga tagccatcac     60

 

cacagccaca ttcttattta tgcgatagag tttctccagc acgctttgcg cttcgtcatt    120

 

ttgctcattt ttgaacttct ccatcgcctt ttcaataaag aatgtggtgg cgttggttac    180

 

atcatcataa gctttcatca gctctttaaa gccgggtgtt tcaacatact tccaaaatga    240

 

cggtgacaca tcgtatgtat tggccttatc gaaaaatata ttcataccgt cgacaatttt    300

 

taagacatta gcatctggtt tgtcgcgcgc taaaagaccc aagcgcgtgt tgagcgcgac    360

 

gactgcgacc gactcgaaag cccacatttt aatttcttcg gtaagatcgg tggtcaattt    420

 

gccggtgttg tggtccaact ttgagtccaa tctatccaaa aagtcttgcg caatattatc    480

 

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<210>  20

<211>  341

<212>  DNA

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<400>  20

cgtacacatg tttgaacatt ttgcaaaatt gtggtcctgt tgtcaagaat gggtgagtga     60

 

aaaacttgga attgttgaac caggggcgat aactacgttt gaacaagatg ttatgaagtg    120

 

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cactttatta aacatggata ggagaattca tgatattttg aacagtggca ttattgcggc    300

 

cagtaagcta tacaagtttg tggaagaatc caacgcaata g                        341

 

<210>  21

<211>  667

<212>  DNA

<213>  S004(6)-18

<400>  21

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ttttccttca tttactatct ttaaccggat agtggtttat cttgttttcc ttcaaataaa    120

 

tacatcattc tgacgggttt aaacttgttt tccttcatta actatcttca tagatagtgg    180

 

tttggcatgt tttccttcat agagttaata cagctagcat ggccgggtta taataacgtt    240

 

ttcctttgat tttagagata acggatctac cgggttataa caacgttttc cttcgagtgc    300

 

catgtggaga gagattcaat ccactacgat ataatactca tcatcaacaa tctcacactg    360

 

ttttatgcta tgaaacatgt caatggctga ctgtattaag gatccatcat accagagcaa    420

 

ggacgaacag agacatggct tcttccttgc aggcaatata gtccactgat gaacgtcatc    480

 

tacaccagta atctctattt caagggaggt ttcactgggc agcatagcgc cacaatggct    540

 

aggacgctct tcatgttcca atagagtcgc caaacagtca cattcgaaac gcaaaagttc    600

 

atatttgctt tcgcagttga tatcggcgag ttgcacaatt ttcattctta tgtgcaaagg    660

 

taacttg                                                              667

 

<210>  22

<211>  507

<212>  DNA

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<400>  22

aatggatata atgttacata aaaaatgttt taacattggt tgatgacaca ttatgtattc     60

 

ctgatattaa tggtgcaata gataaatata ccacgtgtga atggtattgg cagtatcaaa    120

 

cttcaggtaa gggtcggtgt ggtagcattt tgatatccga tatgaaccat aattcgccta    180

 

tcgttggtat gcatgttact ggaaaacctg gctcttctgg tcaagcggga tctgttggtt    240

 

atggcgaggt tatatgccaa gaaacgttgg aaaatgttct tgaacagtta gaaccaagta    300

 

tgattcttgt cgatatagaa acggaagggc aaatgtttga cggaaaatat atacatatag    360

 

atgttgataa accagaacgt gtaaaatcag cattagatgg taattttatc tttacgggtg    420

 

ttgttccaga aaaattttca cacaagcccc caactaaatc gaaattagtt catacgatgt    480

 

gctataatca gataacgaat tcaacgt                                        507

 

<210>  23

<211>  754

<212>  DNA

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<400>  23

catggcgata taacgcctaa gttaattacc aatgaagaat taggttatat aatgccaagt     60

 

actatggccg tcatgtttgg gtataattcc gatatgaaac attttagtaa atgtgaaaaa    120

 

tttgtacaag aactgacgcc atttgataca cctattcaat taaatatgga tggacaagat    180

 

tatatgatgt tgcgttgtgg atattcgtat agcgtggcct ctgaaaaagg agattgtgga    240

 

gctgcgttaa tggttcttag taggtgtaat aatcgtaaat ggattggcat gcatgttgct    300

 

ggtagtagta ataatgaagg atattctata aaattgacac aagagttgat agctacacat    360

 

ctgaagcaat tagaaataaa cattaaacaa aaactaataa cagctgaggt gcataactta    420

 

tcaattgaag gtgcaatgtg ccccgatggc gactttatac ttaatggtgt aacggaaata    480

 

ccgctaagtg cgtctagcgt caccaaaata gaaccgtcac ttatatacgg agagttttcc    540

 

acaccgataa caaagcccgc ttatttaagg ccatttacga attatgaagg aattctagtg    600

 

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atcttaaatg aagttacggc ttatatgaaa caacgattaa tgcaacaaca taatcaatca    720

 

attagtttgt caacgtacgc tagggtgatg acgt                                754

 

<210>  24

<211>  547

<212>  DNA

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ccgaaggtta agtgcgctga agtacaaggt tggatgagta tacctaatta tttaggtaaa     60

 

attacatcct ttctatctga acaactacca gcattaatgg atcgtttctt ctttacagtt    120

 

gaagagacac gcgaacaatt tcatgaagac gtagttacta ttaacaatac tacgttatct    180

 

cttcgtgata aattggctaa tcttaaatat gatttagtca agtgcttcgt tttagtgctc    240

 

accgttttcc ttctatgttt atatgaacag tataccttgt cgttgataac tgcgattcta    300

 

ggtgtaactg gtctcttttc cgatatacca agagacctta tggaatggtt gcgcgattac    360

 

ttttatcctt tacaagatga aagtaaagtg gaagttcaat tagatgccgg aagtgccatc    420

 

gctttatgtg ggccagccat attgagtata gttgcttttt atggtatcaa taagttaccc    480

 

aaggacagtg agatagaaat gttttcaaaa aaaatttttt ctattgacaa aggagtaact    540

 

ggtacct                                                              547

 

<210>  25

<211>  429

<212>  DNA

<213>  S004(7)-138

<400>  25

tttgtcagta tgtcgactta tatgtgcctg gcggaagggt cgtacacgta aacctgaacg     60

 

aggattcatt agaaagttac gttgtatatc atcgaacatg atggtatttt tggcactata    120

 

ttgcggatat tggccccaaa ttagaccgag cggtttcaca tctacgacac cacgttcaat    180

 

cgtatatact gaaatcatgg cagtagagtc caagtagaac attattttgt aattgggatt    240

 

gttgctgaca cccagcaatt tcattttttc ctcaatccaa cgcataccag ttgccgacca    300

 

tataacaata tcataatttt cgtaactaga ttccagaaat tcatgtaaat atggtcgcat    360

 

tagctccgag gcattttcgg cgggagatcg atgatcgaat aaggtgtaat caatatcaag    420

 

tacctcggc                                                            429

 

<210>  26

<211>  455

<212>  DNA

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ctcccgctgt cgtggccgct gaaggcacct atgtggccaa gacccgtggc gctgtacgaa     60

 

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ttcgcaaagt gctggttgtt gtggccaatt attgtcgctt ctactaaaaa ccaattaccg    180

 

tggtttctac tgaaaattgt attacaatga gagttgaagt tctggcatgc ctgtgcctta    240

 

cgagtataat gctactcgcg gttgcacagg cctatataga gccacggaca gatttgggtg    300

 

aaattcaaaa tcgcattgta tcgggtagcc cggcatcact tggtcaattt ccttggcaag    360

 

taattttgaa aaaagatccc atcgaagatt tgttatgtgg cggttcaatt atcgctgcaa    420

 

attgggtgct caccgcagga cattgtacct cggcc                               455

 

<210>  27

<211>  509

<212>  DNA

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tctaactgtg tgaatcgcgc gttgaggaac tctgttttat tagcatgttt ctctactcga     60

 

cacttataaa gttccttgca gtgttcggca aattgttcgt aattcattga ttcgcctaca    120

 

ggataataca ccactccccc atcacgttca tgtctctcat atttcgtaat tttgtaaatg    180

 

gacaagtcaa taggaccatc agcagtattt atttttgatt gatccaataa cttttgttct    240

 

tgcccatttc catcttttac tatcttaaca acgtgatcag ccggttctac tttataggca    300

 

ttttccatca acctattatg gaaagcttta gggtaagata atgaaggtgt ttggatatta    360

 

atgttgttaa tggtccacag cacgactcgt gatgtgttgt atgtattctt atcttgcaaa    420

 

atagccatat gtaagtgatg agggaattcg ttaatcattc taagagtttc tgcaatttca    480

 

gcatttggtt ttgtttgact atctctaat                                      509

 

<210>  28

<211>  182

<212>  DNA

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<400>  28

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ca                                                                   182

 

<210>  29

<211>  762

<212>  DNA

<213>  S004(8)-197

<400>  29

atgctttact aatttgatcg actctattgt taatggaata gtgatgagat atctaatata     60

 

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gactgaaaaa cccatcaacc tagatagcct atcggaattg gcctttaccg aattttcgat    180

 

gaagttcaat cctgataaaa gttatcaaac aggaaacgtg gagaacatgc actttctggg    240

 

atactataat ttattcggtc aaccgtataa acctatagat accgtaattg catcctcgtt    300

 

gtatcctgaa agaccagttc aagacaagtt tgaaacgatt actcgattta tcgggcaagc    360

 

gtattcatgc tttgaaccgg aagacgcaaa gagatttttc tcatgcgcaa gaatcttagc    420

 

tgaagaatgc aatcagctgg aggattctga aattgaaaat tttattcaaa ctcacccata    480

 

ccaatttaag tatttacata ctttaggtat aaaggtagag caaggggtaa aatttccaaa    540

 

atttaagcag tgggattttg tatcaattac attacctaga gcttgtaaaa agaaattttc    600

 

acgtcgccac ttcaatatag aagagttatc acaatatatt gaaaaatgga aaaccgacga    660

 

atagactaag acaaaactaa attaagcata aacttaaaac tagattaagc ataaacttaa    720

 

aatagaaatg aaatagaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aa                       762

 

<210>  30

<211>  520

<212>  DNA

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<400>  30

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aaatgttgaa agaacctgct gatcaacatc cgatcttcat ccaacgcaat gctggtgaaa    120

 

atgagacttg cttttcttat agagttaagc gaatatgttc agttttctgt cttttcgaaa    180

 

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taacgattaa atgtctagcg tttgaaataa ctgccaaggt                          520

 

<210>  31

<211>  819

<212>  DNA

<213>  S004(8)-217

<400>  31

tttagataat atagcatttc tcaaacgcaa gttcattttt gataatcata taaacaagtg     60

 

gttagctcct ctagatgaag cagttatatg ggaaatgtta aattggaagc gaactaatga    120

 

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aaaatataga ttaaatatag ttatccctac atatgcctca atgttagcta caattgagga    300

 

tatggatttt ttttagatta gattatgaga gttgtgtgat cttgtgttat ttcaaaaata    360

 

ttgaagagtc taaagaaatt acacattgct acaactcaaa aaaggtgcac tatttagtgt    420

 

tacttccagg atgccttggt agcagcccta ctaaaatcca ggaaactctt ctaggtatgt    480

 

ttatgttaag tagcttaact taccgaacaa atttacttgc tgatataaaa acacaaaata    540

 

atactgataa tgataaggag tttatgcaga cacatcgtga acaagttata acttttcatg    600

 

atcaaggcaa tactacttat gatcaagcaa ttccagagtt tagtgacctg gatgaatcct    660

 

acttatcaat gactgtcgct caagacactc atcatgatat agtctccttc cttgaacgac    720

 

ctgttcgagt gtggagtggt aatatgacca ctagtaacac tgttggacag gtattatgga    780

 

ctgcttctta tcctagtgtg ttaatacaaa ataccacgt                           819

 

<210>  32

<211>  515

<212>  DNA

<213>  S004(8)-225

<400>  32

cggcattatc agatagaaaa gaatacagca atttacactc tgatacttcc actcaaactg     60

 

aaacaaatca ttggtataga ttaccattgc acataaggat aggaattgtg cagctagccg    120

 

atatcaactg tgaaagcaaa tatgagcttt tacgtttcaa ttttgactgt ttggcatccc    180

 

tatggaacca tgatcaaatg gctaatcgtt gttgtggaat gttctatctc caagcaccaa    240

 

atgagataga agtcgctaat atgcacgacg ttcgtttaca ctctacacaa ccaggaagaa    300

 

aagaaccatg tttgtgttca tcattattct ggtatgatag cgcgctgatg caatcagcta    360

 

ttgatctgtt tcatagtatt aaacagtgtg aagttgtcga tgaggagtat tatattgtgt    420

 

tggattgata ttctctccac attgcactcg aaggaaaacg ttgttataac ccggttgctc    480

 

cgttatctca aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaa                               515

 

<210>  33

<211>  803

<212>  DNA

<213>  S004(8)-240

<400>  33

tatgatccgg ctgtcttaga aggagtaagc caccaaaaac tgtcaaattt gtattccctt     60

 

actttggctt ttgagagaaa acatggacgt atgatgaatt atataccagg cgtattaagg    120

 

cctgatagta taccagcaca agctcttcag cctcatccta aatacaagcg taatgtaact    180

 

gctgatccca ctagtcctga attcttacgc ctcctaaatg cacaagcagt catatctcca    240

 

gtgggaggcg gagctgaggc tatcctagct caattgctac aggccatgag gactaatgag    300

 

taattcaggg cattttgcat gggccctttc cctctatgat ttcattgact atatatataa    360

 

aaaaaccgtg agtaaagtca catactgcgt taaatcactg ttataatacc tgagggagtc    420

 

attttattgt caactggagt ctttaatata attaaatatc ataatggaaa atcttgaatt    480

 

tgatgagaaa ttacctgcaa gcacccaact gctttcgtat gatgcatact gtgactctat    540

 

gtatgaagtt gatataaagt cagttcagaa gcgtctaatg tgtctgttgt atgcaacaca    600

 

actaactcta gacaattcca cagcagagaa gaaaattgct agacatactg ccttaagtta    660

 

tatgagcatc ttaaagttat taaaagataa ctacctttcc tctgatgagc ctggcaatct    720

 

ggagcttgag atccaggagc gtttggttga tttaaaggtg aacatagcag agtatgaata    780

 

ttttccactc ccaggttttc tgt                                            803

 

<210>  34

<211>  830

<212>  DNA

<213>  S004(8)-248

 <400>  34

tccctatctt taatagtaaa tcccaagtcc tataccgtga gagtaactta ttattttctt     60

 

caataatctt tttccgctct aaattcaatg cttcaccaag tgacatttca cgagcatcga    120

 

aaaactcttc tctataagct gcggcatcaa attgctttac tggaggcttt aaataacatg    180

 

ttctaaatgg tttttctcct aaactctcta agttcttaat taactcagga gaacctacat    240

 

gcacctcaat tttccgtggt tgttttacta actgtgtgaa ccgcgcgttg aggaactctg    300

 

ttttattagc atgtttctct actcgacact tataaagttc cttgcagtgt tcggcaaatt    360

 

gttcgtagtt cattgattcg cctacaggat aatacaccac tcccccatca cgttcatgtc    420

 

tctcatattt cgtaattttg taaatggaca agtcaatagg accatcagca gtatttattt    480

 

ttgattgatc caataacttt tgttcttgcc catttccatc ttttacccca tgtactctat    540

 

tgtgccacaa aacgtgtgcg taacgatacc ttcttgaatg tgctctttac acaaaccgaa    600

 

atcagttaat tttacatgtc cttgtgcgtc caagaggatg ttttctggct tcaaatcgcg    660

 

ataaataatg cccaatttgt gtaaatgtcc caaagctagt ataatttcac ttagataaaa    720

 

gcatgttgta tcctccaaaa atatgccttc acgctctaaa tgcataaata attcaccgcc    780

 

acttaaatat tccaaaatta aatataactt tccatcagtt tggaacgcgt               830

 

<210>  35

<211>  683

<212>  DNA

<213>  S004(9)-293

<400>  35

ttgcactcaa cccagccgac taccctacaa tatttcggaa tgagggtgta tggcccgatc     60

 

gacgaccact cgactctttt gcatatcatc gagaagtgca tcggccagat atttttcaag    120

 

gcatacacgg acttatgaca acatctggcg aagattgggc gaaaatacgg actgcgacta    180

 

acccggtttt aatgcaacct aggaatgcgc gactatatcc gaacacaata cttgagatca    240

 

atgacgaatt tctggaaaga atccgtcaca tacgcgatcc ggtaacaaac gagatgcccg    300

 

atgactttca cgacgatctc aatcgtctaa cgcttgaagg cattgtcggt gttgcgctaa    360

 

acacccgttt gggtatgata cataagaatc gagactctcc agaatgtaaa caactgttgc    420

 

aatcaatacg agactttttc gacctctccg aagatttaga agtgaaaccc tcaatttgga    480

 

aaattgtgaa aacaccgaaa ttctacaaat taatgaaaac tttggatttg ctcgcagatt    540

 

tgtgcaacaa atatattgat gaggcgctaa aacaaattga aatggatagg gatggaaaat    600

 

tcacctctga ggtgggtaag gaaaatagtg ttttggagaa gcttttgcgc atcgatcgtc    660

 

gcatcgccgt ggttatggct cta                                            683

 

 <210>  36

<211>  372

<212>  DNA

<213>  S004(9)-308

 <400>  36

gacaacacag cgtaacgctt ccacttaact ggacattaca cccaaagtct tcagaggtgt     60

 

agtcagatcc gtcctgtgga tcttcaaagg caacatatag ccgaatgaag tgatctgaaa    120

 

gaccaatcat tccataacag acgggtgtgc gtggtgttgg agtaaaacgt aaactcaacg    180

 

gactagttac aggtccaaat tttgcaaacg gcgaatcaca aatttcccga taagacatgt    240

 

acttatgtat tggtggatac acatctaggg gctgaaaaca cattccccac atgccacttt    300

 

tctttcctgt agggcacgta gataccaatg ttgctgatac cgaacggaca cagcatttag    360

 

tataattaga gt                                                        372

 

 <210>  37

<211>  694

<212>  DNA

<213>  S004(9)-328

<400>  37

gcaactaaca agttacgatt catgttacca tcgagtaaag cataatattc taattgatta     60

 

cacaaatcta aagttgtttc ttttcctaac atctttgtca acatattgtg agtaaacaca    120

 

ttaatgtctt ctgtatttat atccatgtta ggtgttttta cataatcaaa ttggaaaatc    180

 

gctatatttt caggtaaaag aattgtccat ctttgttctg ggaaatcttg aatggcttgt    240

 

ttaatagccg gcaagtaaaa atgtttcagt ggtgtggtgt cgattctttc caatcttatc    300

 

gtttcaatac atctttcttt tagcgataaa acaggaggaa caacacttgc gtcaacactt    360

 

tttcttacgt caaaattgtc cgtatacaaa atttcatttt cttccatatc ggggaaatat    420

 

ttgaaaaacg catccatgtc atcaacctgt attgctaact tttctccaag gtgctcagca    480

 

acaggcatac gagtagcaac aggcatagac ataacttcaa aagtttcctc aacacgggtc    540

 

tcaaagtcac gaccaatagt aacatcaatt attttcattt tgttattttt gttttaattt    600

 

ttattaaaaa gtaaatgtag attattttac tttaattatt gtttttccaa acagtttccg    660

 

tctcaatagg aaatttatag cgagaagaac atgt                                694

 

<210>  38

<211>  221

<212>  DNA

<213>  S004(10)-394

 <400>  38

ggctgcggtg gcatgcattt tgcctagttt tttaagtgtc aacaaggtct gcgcttcatc     60

 

catcccagct aaacgatcgg gagtaacaaa ttttaacact gcaaggtctt caaaaattat    120

 

agctgaatgc ttgtagtcca cataaatggt gtcggcaaat agtttatctg tgtcaccgat    180

 

ttcctttagc aactcagtca gttttggtaa aactttttcg t                        221

 

 <210>  39

<211>  609

<212>  DNA

<213>  S004(10)-401

 <400>  39

acatggggcg tttttatgac acattggatt tccgataccg tcaatgaaaa ttctttcata     60

 

ataaaacctg ccgagttaaa tattattcaa cttttaaata tttatcactc aactgaaaca    120

 

aaaaaaagtt aaagccatgg aatgcacaaa agagatcaca tgtctacaga acttaactca    180

 

acaagttgct gagttatcaa aagcgttatc ccaaaatatg cagcatacgt tgtccctgga    240

 

gggaaaattt tcagctgcca tggatgaaat cgctaaactc caacggcaaa acgcgatgat    300

 

gctagatgtc atcaataaaa ccttatatag taatagaaaa gaagaagaag aagaggagga    360

 

agaagaagag gaagaagaag aagaagagga agaggaagag gaggaagaag aataaattaa    420

 

tttaactaca tttaataaaa tttaaaaaca aagaaaatag ttattattag cttattcgat    480

 

caaccaacaa aataaaacac aaaaaaaaaa atccaaaaac atatatataa cgagcgaata    540

 

acagaagaag aagaagacgc agtaaaaaga acatatttaa atgtagaaaa ctgctgaaat    600

 

tgtcaaagt                                                            609

 

<210>  40

<211>  684

<212>  DNA

<213>  S004(10)-443

<400>  40

taaacaacgg cataatgttt cagtatttcg agaggtagtt gctactataa agaaataatt     60

 

tcttcttaag gcaatatcta gagattttgc atatctagtg ccatctctgg ttgcttagga    120

 

ttaacatttg gcttcttctt gttagcttct acatgttgtt gattatatgc catttgtggt    180

 

gatactttac agaattgaca attaccattt acacattcat cagtaattac atgtttttta    240

 

agcgcatctg catctataat ttttctacta tttaagtatt ctttcgtcaa tttcttttta    300

 

tcactgtaat ccttatacat attataacct ttatacatac ccgtaacccc taatactata    360

 

gctaatatcc ataataatgg tttagcaaca cttttaatta aagatccaat tttcccaagc    420

 

caagtagatg gttctatttt ggtttccatt attttcataa actcctctct attgcgttga    480

 

catttatcca gatatctttg actaaattca taagtatgct gaggtaattc atatttagta    540

 

ataaattctt caggtaatgg caattcagtt cctaattcag tatataaggt cactattttt    600

 

gcaacatatg ttctataatt ttcctggaat actttagtgt gaccacaaca ttctttatat    660

 

gaatcaatat gacaatgccc atgt                                           684

 

<210>  41

<211>  455

<212>  DNA

<213>  S004(10)-471

<400>  41

ataagatgaa gacagcccgc tcgttgttcc acgactgcct agcacaccca tacaattact     60

 

ctttcaacgc ctccacccgc aagtgtatgc catgtttcgc tgatagcagt atcgtctctt    120

 

ttttgtaagt cagttcagct ggtgtctgtg gtgcgaagga gaatctgaaa tgcttgatca    180

 

gcaaagcgag accgatcagc gcctgcattt tgccgaaacg caagccgatg caattgcgtg    240

 

gtccatcgcc gaatggtaac catgtacagg cgggtcgttt ctgaatttcc tcctcagtga    300

 

aacgttccgg atcgaatttc tctggttcgg gatagtattc gggatcgtaa tgtatgccat    360

 

agctgaatat taatacacgc atgttcttct cgatgcgata gcgtggatcg ccggtgtcat    420

 

actctgcctt tgcataacgc tccaaaaacg gcagt                               455

 

<210>  42

<211>  241

<212>  DNA

<213>  S005(1)-A1

<400>  42

ttcatgtgtc tttctgtgcc catagcgcgt atggcgttgt taaagagccc gacacccaag     60

 

gcgattttca ccgacaaact cggacagtat gtgtgcaaag cctcgtttat gctcatcaaa    120

 

tatttggtct tttcaccgaa acttttctgt tcgatctctt tcggtatgag attcaaatgt    180

 

ggcatgcgat taacttgcat ggcgcaaaga tgcttctgtt cgtcggcaga gagtgtagat    240

 

t                                                                    241

 

<210>  43

<211>  619

<212>  DNA

<213>  S005(1)-B2

<400>  43

ctgctgttgt atagagagtg gaatgatttc gagttcggga acttctggtt tctccaagcc     60

 

agtgtatttg tttagcacaa attgctctaa aagtttatca acggtcatat cattaaattg    120

 

acgcttaaaa tccgaatgca cctgtccaac catgtcatga ttattttgca gcatctccaa    180

 

aaatgtggat aagaactctt tcatttgacg caaatggact tcttcaattt cttgaaaacg    240

 

cttgcacgtc tgtgtcatgc gccgctcgaa gtcattcttg atcggattat gcttatcgag    300

 

tagcgattta tattcatctt gtaatttacg taattttgct tcgacttttt caatgtcctt    360

 

ctgtgaggca ttgtccttgc gcaatttttc caattccagc actttgctcg cgtaaaggtc    420

 

acgtaacttt tgaacagcag ctgttgatgt ctgcatcgct tgcacagatt ccaaggtatg    480

 

tgattcttcc tccttaacgg ttttgtgttt tttatgcaat tcatcggcat acttatcgac    540

 

atccttcaca agctccgtga gcttttgcac catttgcaga tgtagtgtgg ataacttctc    600

 

ggctgaagtg cgtaatata                                                 619

 

<210>  44

<211>  739

<212>  DNA

<213>  S005(1)-C1

<400>  44

tgttgcaagg taagacacca aatacgtctc caaattccgt gatatgcctt ccgtttccac     60

 

ggatcgtggt aagttactca ctaattgaag ggcggcttcg aaacacgcat ccgcctgtcc    120

 

taaacattga ttcaatagtg ccacttgacc ggtcagtaag tataggtcca tttgattttg    180

 

aattgctgta atactgggga ttgaaataaa acagaatgct atgcatgctt ttacaaacgc    240

 

tccagttttt tgagtataat ttcctttaac cacatgtcgt atcccgacgg ctaacttatt    300

 

taccgaattt accaatgtta tatagactgc gtccaaatca gtgaaagcct cacgtgcgtc    360

 

cacataaaaa ctaagctgcc gttcaaaatc ttttgggtaa gtaactttac gtatgaaact    420

 

acttatcaaa tgcgaaattt gtcggcgttc atcttctacg gattgagcgg ttacagagtt    480

 

actgagaatc tttccaataa acattatcgc atttatcaca atttcatccg agatattatc    540

 

ttcggatttt tggtggaacc ttatcagaat atttttacat acgactatcc tatttgaatc    600

 

tttcttaaaa agatctaaat atggtaaaaa attttcctga atgagcaaca actccgtatt    660

 

ttcaaaatgc tgcaaaattt gatctaagat attttgcaac tgagtataaa atctttcata    720

 

tgttcggctt gcgttcact                                                 739

 

<210>  45

<211>  709

<212>  DNA

<213>  S005(1)-D12

<400>  45

tgactattcg gcatgttgac atgttgaacg cgttaacgct gtaacggtat atagacagat     60

 

ttttatttga agcagcagca gcaagttgtt gtagcagagt ttgttgtgaa aaatattgat    120

 

atataacaaa gaaaatttta attgataata tttcataaat aaccgaggtg ttcaaccgaa    180

 

gtgaaacttg ttttattaaa aatatgaaaa taaataaaac gaacagtgtg tgttgaaagt    240

 

attgttgtgc gatcataaac acgtgttgga taattacagt gctctatttt gagcacatat    300

 

aaaataattg atgcatgctt ttgggagcat agatgtgtgt gtgttaaact gaaaggaatt    360

 

agaaactaaa cttcctgaaa ttattgttgc aagtattcgt tgaaatcaag cgggtttgta    420

 

gcaaacaatt cactcagcaa tcaaacttgt atttgatttc cgaaattacg cgcctattta    480

 

taactagcat acattcaggc gcaggtgtgt ttagcttcat taacaagcat atctaacggt    540

 

taacggcttt tatttgacaa ttaatataac tacttttcgc ttagtgaagc ttttggctta    600

 

tttccatcat ttgttcttac tcactcattt cgtttgcctg agtgtaaacg cgaaaacgcc    660

 

cacgagctta agcgtggcag ctaataccgg attaaacata gtgtagaag                709

 

<210>  46

<211>  772

<212>  DNA

<213>  S005(1)-G8

<400>  46

aatagttcgt gggcggggcg agctgatcac ggttcaatgc accattcaaa tataaagtta     60

 

ctggacttgt cacacaacaa catatctctg atacatccag gctacttccg gccagcggag    120

 

atttcattga cccacctata catgggctat aactcattga tgaatgcaac gcgagatgtg    180

 

ttcggtaata tgccgcatct gcaatggctg gacctgtctt ataatagtat acgcgagctg    240

 

gatttcgatg cgtttaaaaa taccaagcag ctgcagttaa tatatctgga tcacaattac    300

 

ttaacggaca taccccagga catcttcaag cccatctacg ccttgcgcgt tatcgatttg    360

 

tcacataacc atttacgagg tttgcctgac aatcttttct ataacggcgg catggaaaaa    420

 

atggacgttt cgcacaatat gctgctcaaa ataccctcat catccctgtc cagcttggcc    480

 

gctttaacgc tttgtgagct gcacttatcc aataacttta tttcaactat acacagcatg    540

 

gacttatcca ataagttcag gtctctgcgc ttcctggaca tttcttacaa ttacttgctg    600

 

cggattgacg acgcggtctt cgccacaatg ccacgactcg ctgcgcttga cctctcacac    660

 

aaccgtgatc tcaaagtgat ggacaagtcg tttatgggtc tggaaaattc actcataaaa    720

 

ctaggaatgg agaatgtttc tttgagcact attcccgaga tacgcttaaa gt            772

 

<210>  47

<211>  717

<212>  DNA

<213>  S005(2)-A8

<400>  47

gcacctgtca aaggtccgga aaatccaaat ttaacacgac aaatgcgagc gccgcgtaac     60

 

actctttctg gatatgtaga aaaggcgcac attaatgctt ttgaatttga aaatcagcga    120

 

cgcacattcc acacttacgg atatgcgttg gatccctccg tcgacgaagt tgcagacggt    180

 

caagcatttg tcggtgattt acaatcggca tatgatgatg atggaaaaac tgtgtttgaa    240

 

tcaccgaaac cgaaaaggaa acgtaaacaa gataaaaacg acaatccaga agacattgaa    300

 

ggtttcgttg gtccttgggg taaatataaa aatgaacaat ccatagcacg gccaaacgac    360

 

caagaaaagg cagaactgga agagatcctt gctaaaaaac ataggcgtaa ccgcattgtt    420

 

gaggataagc cattggagga aaaatctgtt cttcacatca aagacgccta cgattatcaa    480

 

ggacgttctt atctacatgc tccacatgac ttgggtatca acttgcgttc aacgtccgct    540

 

cctaacaaat gcttcttacc aaaatcacat atacacactt ggactggcca tacgaaaggt    600

 

atttcgtcaa ttcgatggtt ccctcaaaca gcgcacttac tgctttcggg ctcaatggat    660

 

tgtcgtgtga agctgtggga agtgttcggc gagcgacgtt gcattcgtac attctct       717

 

<210>  48

<211>  173

<212>  DNA

<213>  S005(2)-C7

<400>  48

attatgtatt cctgatatta atggtgcaat agataaatat accacgtgtg aatggtattg     60

 

gcagtatcaa acttcaggta agggtcggtg tggtagcatt ttgatatccg atatgaacca    120

 

taattcgcct atcgttggta tgcatgttgc tggaaaacct ggctcttctg gtc           173

 

<210>  49

<211>  561

<212>  DNA

<213>  S005(2)-E8

<400>  49

gaggaatgtc gcaagcgaaa tcttcgaacg aaggcaacga ataagtaaaa taacacattc     60

 

cacttcccca gctccaagaa ttaaccagac attcacgcat acaacaaatc caatgacgac    120

 

aacctgcgca caataccaac aaccacaatg aaacaaattg gacaatgatg tcatcagccg    180

 

ttgaaatctc agtccgagca gcttgcgtcg caaccaaatc actgaagcaa aactttcgct    240

 

ctcatcaatg ctgaagctat gtagcagcgt cgaactttgg tcaatttggt atacagcggc    300

 

aacagcagca acaatactac taagtcttag tataagtata agcatacata catacatata    360

 

gttattgcga actgagttgc tcacagttct cttcgatttt aatggacgtt ctgcactgga    420

 

gggcaaagtc ttcgcccaaa gattgttata atttccaaaa gaggaaaaga gtgcagtggc    480

 

ttctcagatt cgtcaaaatc attccaccgc acgctgtgtc taacacggct ccacatggct    540

 

acgaacgcca ttaaatcaca a                                              561

 

<210>  50

<211>  659

<212>  DNA

<213>  S005(2)-G1

<400>  50

attccgttga taccattaca tcaaaatatg gttgatacca aaagtcatag ccacataatg     60

 

ccacttggtt gcccttggtc cacgtgccga cacaattgaa attattcgtt tcgaagagaa    120

 

taaaatcgcc cttggcatta ccctcagcat cgcccagcgt tgaaatcatt acattaccat    180

 

cagccagaca atgcgttgta tgcggcgcag ttacgttatg ttgcttgaat acatcaccat    240

 

ctatggtctt gtataaagag ggcttgcgtg gatcagtcgc cacatccatt acgtaaatga    300

 

aatcggaaat aatcgaaggc aaaataagtt tgtcacgttt cggtatttgt ttagaattct    360

 

catccacata gtagcagctg gagcaagcat tccagcccga gtgatggagt tcattgcctt    420

 

tgcgattggt aaaggttcta tgaattacct gacagtaagt cggactttcg ggatccacat    480

 

ccacagttga taagtaatca ccatggggtt cgtctagatt aggctgcaca gtaacggtgt    540

 

agagcaattt ttcgcgagga ccatttttca tggcgtcaag tgggctctta tagccgggac    600

 

catggcaaca agctttgctc gacattttta gggtttttcg gttgttaaca atttcttat     659

 

<210>  51

<211>  560

<212>  DNA

<213>  S005(3)-A5

<400>  51

atttataaat aagagcggta gcagaacatt ttgcagaaaa gctagtttgc cagccgtttt     60

 

cgaccaacca taaattcata gaggtgcata cggaaagttg gacgcagtcg acttccaact    120

 

atctacaaga tgaatcggcg attttctcga gtagagtccg gtggtgactt aaaagatttc    180

 

cttgatcgcg gtgacattgc ttctcgagaa aatcgatgga atttcgaaat agcatgggaa    240

 

gtggctaaca aggttggagg catctacaca gtcattcgtt ctaaagcata tgtttcaaca    300

 

gaagagatgg gtgagcagcc gtgtctcatg ggcccttata aagagcattg tgcacgcaca    360

 

gaaatggagg agatagaatt tccacgcggt aatccacttc tagatgcagt gaatacaatg    420

 

agaacgcgcg gttataaaat acatacagga cgttggttag tcgatggtaa ccctcaactc    480

 

atactgtttg atatcggctc aggtgcatgg aaattggatc aattcagatc agagttatgg    540

 

gaaaaatgcc atgttggtgt                                                560

 

<210>  52

<211>  491

<212>  DNA

<213>  S005(3)-A9

<400>  52

gcaatattat ttttttggct tttccttaac taattttgtt tattgtcttc ttctttgggc     60

 

attgtaaaat tgcattaatt ggaattgtaa cgcatacgcc atggtgttct ggacgttagt    120

 

gatcggtgcg atcataatcg cttggctcta caaactaaat aaggattatg tggtgctgac    180

 

attatttact aagcgagtga caactgttga tggcacaccc ttggagaatt cagtggcgct    240

 

gcccaaagga ctcacaatat ttggcaatgc cttcgatttg gctgtatccg gcgatgacat    300

 

cttcgacttc tcgcgcaaac tagctgccga aatgaaacgc agttatctac aatatggact    360

 

attcacacct ttttaccaca taatcaccgc tgaggatgct gaactagtga tgaacgatca    420

 

aaacaatcta accactaagg gtattattta taattttttg gagccattcc taaatagagg    480

 

actgctgacg t                                                         491

 

<210>  53

<211>  700

<212>  DNA

<213>  S005(3)-A11

<400>  53

gtggtgagca gtggtggcag catttacata gtgtcaacgc tcgtaaattg cgtgtcacgc     60

 

ttaaaataat aaagtgaaaa tcgcgcacaa aaactcataa atacttccaa tatagtgtcg    120

 

aggacaagtc gctaatactc aagtcacgcg ctttttgtaa ataaccgaat aattgccgaa    180

 

gtttttgaca caaatcaaag ttgcgttggc gcgaagtgtt gaccaacaaa gtgcggtttg    240

 

cgagcaccag agcaaactaa gtttcgtgaa gttgaataaa ctattaacgg tttatgtgag    300

 

tgatagtgac gtgagtgcat tagatccgtg attcataaca atgttttcgc ttgacaagaa    360

 

cattcatcaa tgtcgccacg gtcgggaacg aaacgcgctt ttgacttaca gcatcctgtt    420

 

atgcgcgttg gtggcgctaa tgctttgtct gcctgtgggt ggggacgatt tgagagcata    480

 

taagtatgtg tccagagcac gcgaaaggca gctggaaaaa ctcgcgatac gcataaatga    540

 

gtccgttaac ccaaatcggt atccctgtga gagcttctac gattatgttt gcagttatag    600

 

taaaccgcta ttcacgatac ttggtcattt gcccgaactc gatgatctca tgaagttatt    660

 

tactgagctg cagcaagatc ccgagaagtt tagtgccaaa                          700

 

<210>  54

<211>  428

<212>  DNA

<213>  S005(3)-C11

<400>  54

ttgtcttagc ctgtgctatt cgtattgttt cctttgtgcc ctcttcgttc caaaatgttt     60

 

gcaacgccga agtggatcca aaaagttgtg catcttcatc gctaagggga ttttgttcgt    120

 

tgactgtgtc aaaattattt aaatttatct tgccactttg ggaaacggta tcatcgaaaa    180

 

taattttgga tttgtcgtaa ctaattttat caacagaggt tcgccgcgaa cgacgtcgca    240

 

gtagttgctc aagcatttcg tttattaaac tagaatcagc tttgactgaa cttaatctat    300

 

ccaaacattc ccgcggtatt gccgtagtat ctcgtggaag gaaagaggtt cgcgcatctt    360

 

tcataatatc tctatcttcc acttctatag tttcactaag accaaattta aatgatatac    420

 

atcgttta                                                             428

 

<210>  55

<211>  836

<212>  DNA

<213>  S005(3)-D12

<400>  55

gcgttggccg attcattaat gcagctggca cgacaggttt cccgactgga aagcgggcag     60

 

tgagcgcaac gcaattaatg tgagttagct cactcattag gcaccccagg ctttacactt    120

 

tatgcttccg gctcgtatgt tgtgtggaat tgtgagcgga taacaatttc acacaggaaa    180

 

cagctatgac catgattacg ccaagctatt taggtgacac tatagaatac tcaagctatg    240

 

catccaacgc gttgggagct ctcccatatg gtcgacctgc aggcggccgc gaattcacta    300

 

gtgatttcga gcggccgccc aggcaggtac aatggatata atgttacata aaaatgtttt    360

 

aacattggtt gatgacacat tatgtattcc tgatattaat ggtgcaatag ataaatatac    420

 

cacgtgtgaa tggtattggc agtatcaaac ttcaggtaag ggtcggtgtg gtagcatttt    480

 

gatatccgat atgaaccata attcgcctat cgttggtatg catgttgctg gaaaacctgg    540

 

ctcttctggt caagcgggat ctgttggtta tggcgaggtt atatgccaag aaacgttgga    600

 

aaatgttctt gaacagttag aaccaagtat gattcttgtc gatatagaaa cggaagggca    660

 

aatgtttgac ggaaaatata tacatataga tgttgataaa ccagaacgtg taaaatcagc    720

 

attagatggt aattttatct ttacgggtgt tgttccagaa aaattttcac acaagccccc    780

 

aactaaatcg aaattagttc atacgatgtg ctataatcag ataacgaatt caacgt        836

 

<210>  56

<211>  519

<212>  DNA

<213>  S005(3)-D8

<400>  56

taccatactc agatatggta gattattgat agtctcatat gacattttac cccgttcagc     60

 

tacaagagct tcacaaatct cattgcgcag acgttcttgt aaatcgggcc gtttcgataa    120

 

ttcgtataga gcaaatgtca tcgtcgatga tgacgtctca aaaccagctg acagaaatac    180

 

ggcagcttgt gctgtcaaca tatcctgtaa ctgaggacta tactcgcctt tcgcaactgc    240

 

ctcttgttta aggctcacca atacatcgat cagatcgtta cgcgttgctt tgctctcctc    300

 

tcttgacgtc ataacatgtt cgatggtgcc gcgtaaaaag gaactgaact ctgttgtaaa    360

 

aagtttaata cggaatgtag agacccactt ggggacgaaa aaggcgatga agaagtcaat    420

 

ggcacgacgg agtgtaaagg tgaacaattt tcgtccttga gtgcgaaatt cgccgtttgg    480

 

atttacaaga ctgttggctt ttacaccaaa agcgatggt                           519

 

<210>  57

<211>  639

<212>  DNA

<213>  S005(3)-H12

<400>  57

ggcacaaact aagacttctt ttataaataa tatttttctt gagtgcgcat aatgctgtcg     60

 

gtaaatactg cttgcctctt ggcggctctc ttggggttgg tctatgtttg gtgtcgctac    120

 

acatatggct actggaaacg caataagatt ccctatatga cgccgctgcc actaattggc    180

 

aatatggaag ttttgtttaa aatgagcaat agtttttatc tgtatctatc tgacgtctat    240

 

aaggatgcta aaatgtcaaa ggctgcagca gtcggcatct atatactcaa caagccagcg    300

 

ttagtgttac gtgaaccgga acttataaaa tctgtgctca tcaaggaatt ctcaaaattc    360

 

gccaatcggt cagccacctg tgatccacat aatgatgctt tgggttggaa taatctattt    420

 

ttcatacgaa atccacaatg gaaggatttg agatcgaaaa taacgccggt tttcacaacg    480

 

ggaaagatca aacaaatgta tccactaatg actgagatcg gcacggagtt ggaagcccat    540

 

ttgaattcgt atgcgaagac taacgacgct ttcgtaactg aagttaaaga ggtttgtgcc    600

 

agcttcacca ccgacatgat tgccaccatc gcttttggt                           639

 

<210>  58

<211>  366

<212>  DNA

<213>  S005(4)-A2

<400>  58

aaccatgttc atagagtgag caatcagcca ctaaactcaa aaattcaaac aacaaaagaa     60

 

atatttcatt cttcgatcga aaaacaaagg ccaaagccac tcgtttgaaa aagccgaaat    120

 

ccgttaatgt atgttgaaca gctgggactc cgaggagatc acagtcgtta cagcatgcac    180

 

acgaatttcc actcgaacaa aacaagggag tagaccaatg caaattttga ttgaagaggg    240

 

aaactcgaat attgtctgaa tttccaagcg aggaaaactg ctcccaatat tgttgaagca    300

 

tagctgatca gatgcgtgac tcggttctat ggttccgaag aaccgacttt gattcaaaat    360

 

tcttgg                                                               366

 

<210>  59

<211>  564

<212>  DNA

<213>  S005(4)-A3

<400>  59

acggatttgt taactacaaa ctcattaatt aaaactttct gaattctata gtaattcctc     60

 

gacaccttct taatgacctt ttgtgaccga gagataaatt gtctaaatca aatagtcgcc    120

 

agtctcgacc gaattgaacg cggaaataac ttaccatctt taactttcat ttatttcata    180

 

ttaattgtta tctgcgtatt attgacacca tgggcaaaac tcgtcaatcg tttagaaaac    240

 

gaaattcgtc gaagaagagg aggacaattc gtagacgtcg aacttcagga cgcgcgtcaa    300

 

ccgttgttaa atcaaccccg gctgagtatc tcatcaatgg agcaaggact ttaattggtt    360

 

tgttacctgg tcaggcaata ttaaaaccaa tatctgactt catcttcggt aaaacatctg    420

 

tgtcatctct tagctatgca gagctaatta gtggcccaac tccggcaaaa actcactgca    480

 

ttggacttca agtttgtcta tctttgactc cagcaaactt ggttatcgat tcacctgaaa    540

 

atgctattca taatggtacc tcgg                                           564

 

<210>  60

<211>  757

<212>  DNA

<213>  S005(4)-A8

<400>  60

ccggaatcga cccaccctag tgtgtatgcc ataggtttgc gcttaaagcg ctttatacac     60

 

tgctgcggag tggcctcaca gaggatccgg agtcaacaag ttcacctact caatatttcc    120

 

tgattttaat agatatacct gctgcctcag cattttttcg caccttaagt gggcgttata    180

 

ttccgtggta gccgttttct aggcacactg ggtgtagctc ataaaaactg acattccgcg    240

 

ttgacacttg ttaaatactt tttttacggt tgttgaagaa aactttttga aatcactgca    300

 

caaattctct taagaaaccg aatccgatgg catgcgcctt ttctcttgcc gacaaaacaa    360

 

aactactact ggaaacacta tcgtaattcc atcagatcgc tttctcggaa caccatcgta    420

 

tagaccatac ataccaaatg tgctggaaga tttcgagagt gaatgaaaaa atattttctg    480

 

atttctggta gtataaaaga gtataaaaga tcttaatttt gatttcgtca ataaaaagga    540

 

ttataccagg gcatgaattt atctttcagt ttctatggaa gctggatgct atagtggtcc    600

 

gatatcgatg gttccgaaaa atgagtagca tttagacgga caaactgaca tgactacatt    660

 

gagacagctc gacgaaccga tcattgaaga atgttacaac aaaacaataa agtaaaaaat    720

 

tagttgaact tgtggcgaaa actccgtgaa cgaggaa                             757

 

<210>  61

<211>  390

<212>  DNA

<213>  S005(4)-B8

<400>  61

aagaatttga ttctttctac caactggttg tcaaagaaaa gggacatgtt tacgtttgtg     60

 

gtgatgttac aatggctgaa gatgtctatc agacaattag gaactgcatc gcaataaaag    120

 

aacaaaaaac tgaagcggaa gtagaagcgt tcttgctgac attgagacat gaaaaccgtt    180

 

atcacgagga catattcggt ataacatcgc acgctggcga ggcgcgcaat aaatcaacac    240

 

ttcgacgggg ttcaagaaca ctaaatgcgt tatagagcaa ttctcgatct gcagaacaaa    300

 

ccattgggaa agagagatag tgccggccac gactgctctt tatgattacc acaaatttgt    360

 

taaatatttc ctttttcaac ttatacaaca                                     390

 

<210>  62

<211>  839

<212>  DNA

<213>  S005(4)-G1

<400>  62

atgggaaata tagcccgatt attgttgcac tcactatgaa tgaaggtcat cctaaatttg     60

 

atagtgtatt tgctagtaat gatgcttggc agaatagacg agatgttttg attaaagttc    120

 

atttaaaacc acattgtttt ggaaaagatg cagttaaagt tcaggaactt ccaaaagatt    180

 

ttgttaaagg tcataaccat cttacattta ctgttaatag atatgttaat tcaggcactg    240

 

ataatgatac ttctcttatg aaagaaattg aagttccacg agaaaatgat aaaggtgaat    300

 

ttgtaaaaca taatggtcat tttatcatgg aaaagaaggt gcatgtttct ttaaaacaaa    360

 

ttaaatggta tttggctgaa atttttaaag agaaatatgc taatatgcgt caagaatatc    420

 

ttaaagattt agctttagca aagagttttt atccaaaaga aagtgagact tttgaagtta    480

 

atattaaaga ttatgtaaaa tttgttaaag ctaataggcg acatatgaat gaacaagaga    540

 

agcataccat ttatatagca gagaagttat caggatcagt aaagtgtgat aaatgtaacg    600

 

aatctgctaa ttgtatgtgt gatttaaatg tatttgatgt taattatgtc agtggcaacg    660

 

ttcaaccgga agtaaacgat agagatgaaa taggtccagt tgaaatgatg cgagccattt    720

 

atcaacgagg cgaattaaat actgctactt attttgatga attggatgca ttagaaaaat    780

 

tatttgatga aaatttccat agtgatctaa gagaatttct acctcctcaa tctttagac     839

 

<210>  63

<211>  266

<212>  DNA

<213>  S005(4)-G2

<400>  63

gaaaccctca agacattccg ggctgaagtt gtggaacata ctcaagggcg tcttccaaat     60

 

gtccctgttg tcataacacc accacaagta actcagagtt tcggtgttac ccagcaatca    120

 

cagcctcaag tccagaagaa gacgatgacc ctaaatgaac ttttagctag gaaacgaaat    180

 

tagatgtgat caagatagac atgacttggt cctttaatat gtttggtcag tcttttgaag    240

 

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaa                                         266

 

<210>  64

<211>  771

<212>  DNA

<213>  S005(5)-A5

<400>  64

aaatcttcga acgaaggcaa tgaataagta aaaaacacat tccacttcat cagctccaag     60

 

aattaaccag acattcacgc atacaacaaa tccaatgacg acaacctgcg cacaatacca    120

 

acaaccacaa tgaaacaaat tggacaatga tgtcatcagc cggtgaagtc tcagtccgag    180

 

cagcttgcgt cgcaaccaaa tcactgaagc aaaactttcg ctctcatcaa cgctgaagct    240

 

atgcagcagc gtcgaacttt ggtcaatttg gtatacagcg gcaacagcag caacaatact    300

 

actaagtctt agtataagta taagcataca tacatacata tagttattgc gaactgagtt    360

 

gctcacagtt ctcttcgatt ctagtggacg ttctacattg gagggcaaag tctttgccca    420

 

aagattgtta taatttccaa aagaggaaaa gagggcagtg gcttctcaga ttcgtcaaaa    480

 

tcattccacc gcacgctgtg tctaacacgg ctccacatgg ctacgaacgc cattaaatca    540

 

caagtagtga aaccaagaat tttgaatcaa agtcggttct tcggaaccat agaaccgagt    600

 

cacgcatctg atcaactatg cttcaacaat attgggagca gttttcctcg cttggaaatt    660

 

cagacaatat tcgagtttcc ttcttcaatc gaaatttgca ttggtctatt cccttgtttt    720

 

gttcgagtgg aaatttgtgt gcatgctgta acgactgtga tctcctcgga g             771

 

<210>  65

<211>  771

<212>  DNA

<213>  S005(5)-B7

<400>  65

atggagttcg atacgtctga aggctttcct tttgtaagca ttcgtcccaa aactgcaaaa     60

 

gataagcggt ggttatttga tttatatgaa acttctatgg gttatggttt gagatcaata    120

 

gataagcgtt tagttgaagt tatggatatt aaacagcgac aaagagaaaa aggtattgtt    180

 

ccgcttacta tttttacaga ttgtttgaaa gatgctaaat tacccgctga gaagtgtcat    240

 

aaaactagaa ttttctctat atcaccagtt gattttacta ttcaatttcg ccaatatttt    300

 

tatgatttca ccattgcttt tcaagaagct agattctcta ttgaatctgc tgttggaatt    360

 

aatgtggatt cttatgaatg gaatgaaatg gttcgtatat tgttgagtaa ttcaactaaa    420

 

tttgtttgcg gtgattattc taaatttggt ccacgtttaa tgagttctgt agtagttaga    480

 

ttctttgaga taatatgcga ttggtatgaa gcttatggag attctgatct aacaaatagg    540

 

cgcgttagaa tggctatggc acatgaaata gcttttgccc aacatcttat gcttaatatg    600

 

gtttatcagg ttctttgtgg tgcaccatca ggttgtccca ctacaaccat tcttaataat    660

 

ggggtaaata tgatgtatct ccgttcagca tatttacaat tatcaaggga aaacaatatt    720

 

gggttgacat tagaatcata taaaaataat gtttgttcaa tattttacgg a             771

 

<210>  66

<211>  709

<212>  DNA

<213>  S005(5)-E11

<400>  66

tcaagtgaac ggtttatgta gaaatttgag tgagcattcg tttaaccgat ttaataaaga     60

 

aattgcataa gttctcatat ttttcaatac tttaaccgtt atggatggaa aaccaaagaa    120

 

aacgcgccat cggaatcggc caagaaataa agcaaatcgt ttaaaggagg acaacggcca    180

 

gacctcgaat agtgaattaa ataacactga gggcgtagcg ttaaatattg tgggtcaaca    240

 

aaaagcactt gttaacgaat gtgtaaatga gaattacgga gctctaacaa aaaccacgcc    300

 

gagtggtagt gaattgccaa cgcaatcacc gcaagattcg gacaatggtt tgagattact    360

 

gcaacaaatg atgcgcacaa agcttttaca gcaaggcaaa aagagtgaaa aaggcaatgt    420

 

tgatacaaaa gccactgaaa aggtcgataa aaagggtcaa aaaagtagtg ctagtttgag    480

 

caaaggcaaa gaaagtggta aaacgacaaa tggaaaagcg gcagcggaca atttacaaaa    540

 

gcaaagtgca tttgttgcaa gtttgcagag aaaattagag agctcagtgg caaacggcag    600

 

caccgattta cctaatactt tattggaaaa cctacaaaaa ttactccatg agggaccaat    660

 

aagtgatgta gagtcctcag acgacgagga ggattacatc gagtatatt                709

 

<210>  67

<211>  706

<212>  DNA

<213>  S005(5)-G6

<400>  67

atgggacaat tcacgggaaa gtagagagtg atggaatatc tagagacaca attagagatg     60

 

acaatatacc tggcgaagca gctgcacaat ttgaagaaca ctctacaaaa gttggcgaac    120

 

gcaaggtata tgaagacaag gtgaaagcag taggtcctaa gaaatcaaat acactgagca    180

 

gtgcttatag aaaacgacgt gatcccagac gtatgacgtt aacacgctct gcaactatcg    240

 

aaattgagga gcgctttcag gcactggaac gcagaatgag tgaagatagt tttcgaacag    300

 

acaaaatgaa tactaacggt gagaatatgt ttgttgaaga tagcgcaaga aaaattccaa    360

 

catcagctga gttggacaaa aggttgaaca cactggagaa tgaaatagat atggacgcga    420

 

aagttaagaa aaggtttgca gaaagtagcg aatttagaga tttggctaaa tacaaatcca    480

 

cagaactaac gaacagccct tttacagaat caaaacacgt agaagattca agcaaaaact    540

 

tgaatgaaaa ttccaaaata gaagatttag aagttaaggc cctcgatacc gatattagta    600

 

atcgtttacc tgttattgta aactctcaga aaacacctga agatacattg cccaaacgag    660

 

ccagcaatca cataccttca accacagaac tggaagatcg ctataa                   706

 

<210>  68

<211>  442

<212>  DNA

<213>  S005(5)-G9

<400>  68

atacataacc tccatctgtg attattgtga cagacctctg tgaacttgaa agctttcaaa     60

 

ataggtgtgc tttcgcaaca gatcactaaa atcaaggcaa aatctagaca aaaaaacaaa    120

 

ctgacagttt aaaatcaaga taaagatctt tatactttta acttcttcta tttctttact    180

 

atgaagttac atgcataatg tatattgttt cactttattc atgataaatt taaactggtt    240

 

accaaactag tcctcaacta gttcgaagac actgttaaat ctgtcaagat ttttgatatt    300

 

tgtttgagtt tctgtttatg attcataata agttaatatt acaatttgtt accgaactag    360

 

tcctcaacta gtccgaaacc gctaaaaagc gtgttaagtg ttttttgcaa atttgttttc    420

 

attattcgtt aacgaaatat gt                                             442

 

<210>  69

<211>  711

<212>  DNA

<213>  S005(5)-H2

<400>  69

tgatctgttt gtctggaatg ttctgtatac cagtttataa atattgtgat ttcagattgt     60

 

gtgtttggat caaagaaacc agcaagtagt tcaggttgga ataacatgct gtggcatgca    120

 

cgtatgaggg acattccggt gtattgggag atattagaga gatacattct taatgcaatt    180

 

ctccttgaag cattcaatcc atcaattaaa taaggccgca attctactgg caggaatcct    240

 

tgatactgac ttaagtattg ttcatcaaag atagacttaa taaatggaag ttctatgatg    300

 

ggaggagctt tcagccctaa tgaggcatag aatgcgctag ctcgctttgt tacaacttgg    360

 

ttgaaattgt cacttgtata gtttttccca agaccatggt aggccaatag cattccaaat    420

 

tcaaaaccct ctctagtggt gtataaaggc acctgattag atacagttgg tgcctgggga    480

 

aaatcattgg tcccatgttg taaaaaccgt gtcactttaa caccggtgta gactcggtat    540

 

ttttcaggga aagcaggtga gagataaaat aagtgtgcta gaatgatatt actcctagct    600

 

tcactctctg tcaaccctaa gcctgaataa taagatatta tctgctgaag catattattt    660

 

gtgatagtag gtaatgcttg tgcaatttta gccatgtgag tgtatggtag t             711

 

<210>  70

<211>  272

<212>  DNA

<213>  S005(6)-13

<400>  70

attgggcccg acgtcgcatg ctcccggccg ccatggcggc cgcgggaatt cgatttcgag     60

 

cggccgcccg ggcaggtaca tggggacatg taaaacaaca ggttatgggc ccagggcata    120

 

catttttaaa ttaaagtcat attttatcat ctgtattaaa taaaaagatt cgtacatcat    180

 

caattgcatc atatatggtg atagtggtat aaatggcgag ctcaacagtg aggattgatc    240

 

cgctaaacgc ggataactac gatacgtgga ag                                  272

 

<210>  71

<211>  313

<212>  DNA

<213>  S005(6)-17

<400>  71

gttggacatc caggaaaata caacacaata tttgattatc gacaagagga gtgttcttct     60

 

ggtggctgtt tgactgaact ctgtattcag ctggcaatca ttatgattgg aaaacaagct    120

 

tttaacacca tactggaagt aataatgcca aagatttggc gaaaaatcat ggccatacaa    180

 

gtaggtctat cgcgtttgtt caacagtaaa actcatgatg tgaataagga gaaagtggaa    240

 

cgttatttgc gcgacttaaa attacttgac tggggtccac gcagcttatt tccggagtat    300

 

ttggaaatgg ttt                                                       313

 

<210>  72

<211>  560

<212>  DNA

<213>  S005(6)-49

<400>  72

cacactatta taatttggtc acaacacaat tgggtgatga accctttacg gccggcgtag     60

 

aacatagtgg taaagacaat acattcttcg atacaaaaga tgaggatgaa gaaatggttg    120

 

attataaaat tgaagaggca gctttaattg aagaaaatct ggacgactcg tcactttggc    180

 

cgatattgaa gatgaataca cccgaatggc cgcaactatt gggcggtatg gtgtcgtcgg    240

 

ttataatggg ctgtgctatg cccattttcg ctttactttt tggtgaaatt ctacaaatat    300

 

tggctgttag ggatgaccct gactatgtgc gggataacac caatgtatac agtttatatt    360

 

ttctgatcac cggcattgtt gtaggcctgg caacattttt acagatttat ctattcggta    420

 

ttgctggcga gagattgacc gaacgcctta ggggtatgat gtttggcaca atgttgaagc    480

 

aagaagttgc ttggttcgac gacaaagcca atagcaccgg cagtctttgc tcgagacttt    540

 

ctggcgttgc ctccgccgta                                                560

 

<210>  73

<211>  630

<212>  DNA

<213>  S005(7)-98

<400>  73

ggggttttga gtcactcatc ttcacaacca tgttcataga gtgagcaatc agccactaaa     60

 

ctcaaaaatt caaacaacaa aagaaatatt tcattcttcg atcgaaaaac aaaggccaaa    120

 

gccactcgtt tgaaaaagcc gaaatccgtt agtgtatgtt gaacagctgg gactccgagg    180

 

agatcacagt cgttacagca tgcacacgaa tttccactcg aacaaaacaa gggagtagac    240

 

caatacaaat ttcgattgaa gaaggaaact cgaatattgt ctgaatttcc aagcgaggaa    300

 

aactgctccc aatattgttg aagcatagct gatcagatgc gtgactcggt tctatggttc    360

 

cgaagaaccg aatttgattc aaaattcttg gtttcactac ttgtgattta atggcgttcg    420

 

tagccatgtg gagccgtgtt agacacagcg tgcggtggaa tgattttgac gaatctgaga    480

 

agccactgca ctcttttcct cttttggaaa ttataacaat ctttgggcga agactttgcc    540

 

ctccagtgca gaacgtccat taaaatcgaa gagaactgtg agcaactcag ttcgcaataa    600

 

ctatatgtat gtatgtatgc ttatacttat                                     630

 

<210>  74

<211>  686

<212>  DNA

<213>  S005(7)-100

 <400>  74

atgcttgccg tcaactgctc ctatgcagtt aggaaagttc cataataaat cgaatttcga     60

 

agcaacttca gtccattctt cttttgttga aggtatcttc aagtaagtat ttcgaagttg    120

 

actgtaaatc gcatcacaaa cttcaggaac aaattttggg gtagtgtttg gggcaatacg    180

 

gaaaaaagct gaaagacttt tgtagctatc gcccgtggcc aaaaagcgga gagtgcaggc    240

 

caaacgatga cttgctggaa tagcttcacg aaaacgtgta tctttttttt taatcagtgg    300

 

ggaaattagc tgcagtaact cattaaaatt gttttcgttc attcgcacgt aatttttaaa    360

 

aagaaacttt tgattatcaa cttctcgaaa ttcacgtaaa gtcgtttcat atgcaccatt    420

 

agtatttctt ctttccagcc aatttctcac ccagatacta cgttgtttag gatttgtttt    480

 

acgtttctga tttttctttt tcagctttaa tgttgcaatg gtaagcagag caactgcaac    540

 

ttttttcttc ttcaaataat ccatgttctt ccacatcaat tccgtttatc gacagcggat    600

 

gtttcacagc aacacatcct tcaactttta cgctgccaaa actgtttccg ttatgccact    660

 

ttgtgtttgc ttgtttttat agtttt                                         686

 

<210>  75

<211>  537

<212>  DNA

<213>  S005(7)-103

<400>  75

tcttcgtttt gtggcagact attaatactg tcgcctttca atggtatatg tataacatca     60

 

gcggtcaaac gtgatgggcg ttttcccgaa acgctactta cactgcgacc aactgggcgg    120

 

cttgacttag ttcccttatt aaattcactt ttagaggggc ttgttggtaa agatataggc    180

 

tgaagagatt ttacagatcc gcgatttgga tcgttcattc gaaattggga aatacttggt    240

 

tcacgactta aatttggagt agtgcccttg gaattttggg ctacgtctcc actttgattg    300

 

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ttaggtaatg tatttgaatt actgccgttg atcggcttgg agggcaaacg ctttgaaagt    420

 

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gatacaacgt tgatattatc ttgaatcgaa ttgctttcag taattccatc ttgcttt       537

 

<210>  76

<211>  517

<212>  DNA

<213>  S005(7)-116

<400>  76

agcatttctt tatgccttat actttgccaa tatcggttta attacatcct cggttacttt     60

 

cagacctttg gcgtttgctt tctcataata tggcaactgc ttcatgttct ccaaccacgc    120

 

tgtcaacttt ggccacttgt ccgccaccac tggcacaatt aaattcagaa cagtaaccgt    180

 

tgttagaaga ctgaagtcag ctatggttaa atgatcagca gccatatatt tattttgatt    240

 

gagataagcc tccagcacag tgtatacatc gctaatgcct tttaatgctt catcaaccgc    300

 

cgcctttggc agttcgcttg taagtaatgg acgcaaacgt tgtttcattg tttcgttaaa    360

 

gataacacca ttctcatagt gcaaacgttg atcgacagtg gcgcgttgat acaggtcctt    420

 

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<210>  77

<211>  719

<212>  DNA

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<400>  77

ttgtaaaatc aagaccagta tagaacatct tgtgtttcct gaatcggttg cgaatcttct     60

 

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cctggtatcc ttcaatgagt ggaatagcga atacggcctc tccaaatgtg atagtagctg    180

 

gatatcccca aacagcacga actttatgct catcaagtcc acaaacatga gcacggacga    240

 

aagcgcaaca atcggggaag cttatgtcat caccagcttt cacaaaatgc caaaattttc    300

 

tcacttcctg tattttgtct gggtcatcac gaatttgtct cttagtttta acgccatatc    360

 

gagtccacgg aagaccagga cttttactcc agatgtcact ttctctttta aagacatcat    420

 

taaggtgtaa cattttaact gcattgggca acagaaattt tcgcgtagca tgagcgattg    480

 

ataaatcaag taatggatca ttaggccttt tagtggtatt attaaattgt tttaagtcgt    540

 

cgataataag gctttgcgta acgggtgaac gtcttttagc aggaatatga tccagaaatg    600

 

gtaacacgaa tttacttgga aatatctcgt catgagtcat tgacgcgaat ccttgtgttc    660

 

ttcctatata gcgtaacggc atggtttaac tgtttaacag tagcgttgtc ggcccatgt     719

 

<210>  78

<211>  718

<212>  DNA

<213>  S005(7)-131

<400>  78

agaacacaat gaaccagatg ttgctgacga atctaaaaag aaaatttttc gagctttgtc     60

 

gaaatcattg tctgcagagg acagcaattc agaggattgc aagaattcgc cgcaccataa    120

 

taaaatcgga attttacaaa atgcaaattc aatgtcaaat acagcatcct taaatacgtt    180

 

aaataacgaa aataaccacg taattaatca gtttgctgac tctttggatt tgaaaattga    240

 

atgtctattg agagattggc atcaaagtcc cgatcttgta tttgcaattc atcctattga    300

 

tggaagttat cttatatggg tagttgattg gttggacgat tactatcccg gatcttttcg    360

 

ccaagcacaa atttcgtttt ccacaagaat accttttgca tttcctctcg gagatgcaat    420

 

gtcgatgtca acaacagtta gtttatataa tacgggatct ccaccactta tttttagaga    480

 

aatcgcaaat agtgtgaaaa gtagaagtga ggaaataaca tcacttaaag agtcaccaag    540

 

ctcttcgcct ttaaataagg tcagcaaccc cgacataagc gatcaagctt ttaagacttt    600

 

aacaagtagt atttcaccgt ctgtttcaat ggtgacaaaa cattccaatg gaacattaaa    660

 

tctctggcaa ctaacttttg cacttaaaac taagttcacg caagttctaa gcataggg      718

 

 <210>  79

<211>  710

<212>  DNA

<213>  S005(7)-176

<400>  79

acgaagtcta tcaaaagttt cgtggtaaag caaagatagt cggcacatat atatacacta     60

 

agccaattgc gattgtagtc gatctagatc tgataaagtc gatattaata aaggatttca    120

 

ataaatttac cgatcgtatc gaacgcggcc atcacccgac gaactcatta aatagcaatg    180

 

ttttttcact gcccggtgaa aaatggcgtc cactacgcat aaagctttca ccaaccttca    240

 

catcggcgaa aatgaagttt atgttttcca cgctgttgac ggtagcacaa caattggagg    300

 

aggcattcag caaagagttg tccaaaacaa cgagtggtgt tattgaatta cacgatataa    360

 

tgggtcgcta tacaaccgat gtgattggtt cttgtgtctt cggcattgaa tgcaatagct    420

 

tgaaggatcc gaatgctgac tttcgtcgca taggacatac aattttttat cggcagtatt    480

 

actccatacg ttggcgcaca ttcatgctca cttatccgat tatgtttaaa atactacagc    540

 

tcttcaaggt gaaacgtatt cccaatcatg tcgaagactt cataattcgt ttggtgcatg    600

 

acacagtgcg ttatcgtgaa gagcacaagg tggagcgtaa agatttcatg aatctattaa    660

 

ttgaattgaa aaatacaaag gactcggaag gtgtgcctct aatgagtatt               710

 

<210>  80

<211>  700

<212>  DNA

<213>  S005(7)-178

<400>  80

ttcagcgagc acatattatt tttttggctt ttccttaaat aattttgttt attgtcttct     60

 

tctttggaca ttgtaaaatt gcattaattg gaattgtaac gcatacgcca tggtgttctg    120

 

gacgttagtg atcggtgcga tcataatcgc ttggctctac aagctaaata aggattatgt    180

 

ggtgctgaca ttatttacta agcgagtgac aacagttgat ggcacgccct tggagaattc    240

 

agtggcgctg cccaaaggac tcacaatatt tggcaatgcc ttcgatttgg ctgtatccgg    300

 

cgatgacatc ttcgacttct cgcgcaaact agctgtcgaa atgaaacgca gttatctaca    360

 

atatggacta ttcacatctt tttaccacat aatcaccgct gaggatgctg aactagtgat    420

 

gaacgatcaa aacaatctaa ccactaaggg tattatttat aattttttgg agccattcct    480

 

aaatagagga ctgctgacgt catcgggcaa aaaatggcac tctcgtagaa aaatgctgac    540

 

tcctgccttc cattttaata tacttggaca atttgaagag atttttaaag aagagagtaa    600

 

aaaatttgtg gagagcttgg aagccagcga tttaagttct gtaactttga acgaaatcat    660

 

accaaaattt acactgaacg ccatttgtga gaccgcattg                          700

 

<210>  81

<211>  846

<212>  DNA

<213>  S005(7)-181

<400>  81

aacgatcgga acgtagttgt gaattgcttc ggcccatact ggtggtttgc tgattctcga     60

 

cgaggcaaga accatcattt gacaagcacg gctgacccgc attcgaacag atgccgaacg    120

 

tataattttt taaaggcatc gacaacttgt atgtcttacc ctgcagcgat cgcataccca    180

 

aaacttcatt gccatgggtt atcgtggtgc atggtggatt gttattacag gccaaaggcg    240

 

tggtaaacga aaggtcatac acgttttctt tggcgccaat aaatgacaat tgagaactct    300

 

ttatctcatt atcacatatg aagtgtattg ttgaggagta attatgtgtc gcattataag    360

 

gtgttgggga tggcaggcgc atgagcaaat tgccattttc taatatagga ttgggctgca    420

 

cggtgccata gtcaacaaac cgttttttgt agtcggtgga gtttaatttt actaaacaca    480

 

cactactcgc tttggggcac attgccatct cgccatacag cactggcttg caaatgttca    540

 

ccgtaaatat attgccatgt cgatcgcttg ttctatagtt aaagtcactc aacgcaagca    600

 

gatcataatt gtgtccagta acggggtcct gcacactgca accactcgat ttaaccgtct    660

 

cgggttcagg caaacaggca tatggtgtct ctaacgatat atagaattta cacgcattgg    720

 

cggaatataa tgtcactttc gattgtttag catccagtgt gtagtcacag ccaaggaaca    780

 

caaacagttt aaactcgcca tcgccgctgg cacacttggc gccattgcta aattcaaagt    840

 

acctcg                                                               846

 

<210>  82

<211>  649

<212>  DNA

<213>  S005(7)-188

<400>  82

gttacagaag ttcggcacaa actaagactt cttttataaa taatattttt cttgagtgcg     60

 

cataatgctg tcggtaaata ctgcttgcct cttggcggct ctcttggggt tggtctatgt    120

 

ttggtgtcgc tacacatatg gctactggaa acgcaataag attccctata tgacgccgct    180

 

gccactaatt ggcaatatgg aagttttgtt taaaatgagc aatagttttt atctgtatct    240

 

atctgacgtc tataaggatg ctaaaatgtc aaaggctgca gcagtcggca tctatatact    300

 

caacaagcca gcgttagtgt tacgtgaacc ggaacttata aaatctgtgc tcatcaagga    360

 

attctcaaaa ttcgccaatc ggtcagccac ctgtgatcca cataatgatg ctttgggttg    420

 

gaataatcta tttttcatac gaaatccaca atggaaggat ttgagatcga aaataacgcc    480

 

ggttttcaca acgggaaaga tcaaacaaat gtatccacta atgactgaga tcggcacgga    540

 

gttggaagcc catttgaatt cgtatgcgaa gactaacgac gctttcgtaa ctgaagttaa    600

 

agaggtttgt gccagcttca ccaccgacat gattgccacc atcgctttt                649

 

<210>  83

<211>  710

<212>  DNA

<213>  S005(7)-189

<400>  83

tttatattgc gctaattttg ccaaatcagt cattattcct tgcttcagca aaattctata     60

 

catattatta cgttgtaaat gcactttact tgacagcatt ggactttcaa tcattatggg    120

 

aatcaaacca ataagaactt gcaaacgaac atgtttttct gtgtagctag gttcagttag    180

 

tgttcgcaca atcgcttcat gaagttcttc aaccaatttc gattgaactg ttggctgact    240

 

aacgcaatct gacaaagaag aaagtagaac tcttgacatc atactcactt ctggatcttg    300

 

ttggcgctta gttattggta gaaaatgatc tagaataaat gagatgcatg tctgtggttt    360

 

tttaattagt gggctgtcgg acggcatata tacgtattcg ataataattt tcggcactag    420

 

acactggtag gatctaactg catctgctaa tatttttaat aaagtcgaac gcggcaatat    480

 

tggcttttgg tgcgtatgac ttgtagatgg tatatgccaa ctgcagcagc aaggatttac    540

 

atcaatattt tctgtgtgtt ttttagccga agatatttta ggttgagaat tatctaattg    600

 

aatatgtgaa gtctccccca tccctgtgat actatcatca caatcatctg ttgtggacaa    660

 

tccgccataa tgttcacaag gttgaattat agctctcaat atatctttta               710

 

<210>  84

<211>  641

<212>  DNA

<213>  S005(8)-200

<400>  84

ttcggagata atataccatg gcgcaaaagt ttaaacggca gtgatacttc ctgtataaaa     60

 

aacattctta taacccaaga tgtccaatta agtagtattc atacggtatt tggaacagtc    120

 

gaattttgtc agatagttgg tgttacggat gaagaacttg aacaagcatc tcgttggaat    180

 

ggccgtggtg ttctgaatta tttgcaacaa gacatacaga caggtggcaa atggtggatt    240

 

acaaacatga atcgttcgct aagtgtattt gagctttgtc ccgaattgct attaaatttg    300

 

caagatgact tggaaaaaca aggatctgat ttagctggag ttaatgctga atttactttt    360

 

cgggaaattc gggaaagacc ttgtataaaa aaagaaataa actcagaaag tttaaatgaa    420

 

caatgcgtat ctgatgaaaa taattgcgtg gtaagaaatg aagtaaagtg tgagggtttc    480

 

ccacaatcaa tgtcaatgag tagtagttca ttgcataaat cgtgtcctct tagatatcag    540

 

ccatattcgg ctgactcaat atcattagat ggaattgaaa tcacttttgg ctccttatgc    600

 

agcaaaatat cttatattag ccataaaaga tcgggttcga c                        641

 

<210>  85

<211>  671

<212>  DNA

<213>  S005(8)-194

<400>  85

gatttcggag aacgcattat cccaggtaat tgtggcccaa ccctgtggtg cttgattatc     60

 

gtgcaccaca acaactatgg gtagactgag tgccgagcaa ttaatcgcat atcccttata    120

 

taccgcggtt gtataaaaga gcaaagcgta tttgccatct gcaacaattt cggaaccctt    180

 

tttctcggag cgtttgttgt cgtggattat aagagttgaa aaatttgctg aaaaactcct    240

 

attactggca tcgaattcca tttggcactc atttcctgtc attttgccat tgcattctgg    300

 

tggcatgtga atattctcaa tagtaagtcg ttttgctaga gcctctgaga gtatttcaca    360

 

ttttacaact ggtttgctca aatgaatgcc caatttatca ccgatcaacc agcgcacagt    420

 

tgcctgaagt ttggaaccct ttttctccac ccgtggcggt tgcttttcga cgatgaatgt    480

 

tgaaaagata agtatgttat gtaaggtctg tgcatgtgtc aagaactcat taagtgttgg    540

 

gtcatctcca aaatgcagca gattacttat aaataatgta atgtctgcca tgcgatccat    600

 

caaggactcc acaacaaatt gtataccatc taaattggta gggaacggcg caccattgcc    660

 

agccaaggcc t                                                         671

 

<210>  86

<211>  376

<212>  DNA

<213>  S005(8)-211

<400>  86

aaaattttca cacgcaatgt tgtggtccat ttcggataga agaatgcgat aaggaattga     60

 

atagcgcgac ctaatgtaaa gtctagctgt tttcggccta gcgcacgaaa ctcggcattc    120

 

ggatctataa gactattggc tttaatgcca aaggcggtgg tggcaatcac atcggtggtg    180

 

aagtttgcac aaatctcttt aacttcagtt acgaaagcgt cgtctgtttt cgcaaacgaa    240

 

ttcaaatggg cttccaactc cgtgccgatc tcagtcatta atgaatacat ttgtttgatc    300

 

tttcctgatg tgaaaatcgg cgttattttc gttctcaaat ccttccattg tggattgcgt    360

 

ataaaaaata gattgt                                                    376

 

<210>  87

<211>  657

<212>  DNA

<213>  S005(8)-212

<400>  87

atggggagtg ttattttgga agtgcgttac agaagttcgg cacaaactaa gacttctttt     60

 

ataaataata tttttcttga gtgcgcataa tgctgtcggt aaatactgct tgcctcttgg    120

 

cggctctctt ggggttggtc tatgtttggt gtcgctacac atatggctac tggaaacgca    180

 

ataagattcc ctatatgacg ccgctgccac taattggcaa tatggaagtt ttgtttaaaa    240

 

tgagcaatag tttttatctg tatctatctg acgtctataa ggatgctaaa atgtcaaagg    300

 

ctgcagcagt cggcatctat atactcaaca agccagcgtt agtgttacgt gaaccggaac    360

 

ttataaaatc tgtgctcatc aaggaattct caaaattcgc caatcggtca gccacctgtg    420

 

atccacataa tgatgctttg ggttggaata atctattttt tatacgcaat ccacaatgga    480

 

aggatttgag aacgaaaata acgccgattt tcacatcagg aaagatcaaa caaatgtatt    540

 

cattaatgac tgagatcggc acggagttgg aagcccattt gaattcgttt gcgaaaacag    600

 

acgacgcttt cgtaactgaa gttaaagaga tttgtgcaaa cttcaccgcc gatgtga       657

 

<210>  88

<211>  603

<212>  DNA

<213>  S005(8)-213

<400>  88

gcagaattta atcttttcta atggccaatt cagccagccc gtagtaatgc aaaaatatgt     60

 

ctcatgcggt gctacgtgat gtatgcgatg atgctttcgt ggtaatacta tgtgatagtt    120

 

ttgcaagaag agaacccatc gcggtagacc ccaataagta tgcgaccatt tgtgaatctg    180

 

atttgtcata gccacaaata ttgaacacaa aaacaaatat gatatccagc caaaatcttg    240

 

ctggatatct tgaggtgatt tcgtgttaaa gctgtatgct aagaagccca atatgggtat    300

 

gctaaccata aagttgtcac cattggtttc gatgaagtca tgccgcgtta tagacgttgg    360

 

atccaaatga tgttcacgga aaggtcgtaa aaaattcttc ccaatgaccg gtaattcaac    420

 

gctaccccaa gtatcagctg cccagtggac taatccggaa ccgaagtcgg ccgttataat    480

 

accacacaat gctgatacac aagccacact cagtctttca aaatgtatat gttttaggat    540

 

cagtatcagg tcaactaaca tgagtgcgat gcaggtgtaa acgcagacta tctcttgtag    600

 

acg                                                                  603

 

<210>  89

<211>  739

<212>  DNA

<213>  S005(8)-216

<400>  89

tgggtattac tggctcatac aaataagctg tagggcacac attgtgaaca aaatcagatc     60

 

taacaaaacg cttaacaata ttcttaaaca atggcatatc atttggtaac ttacacataa    120

 

ctattgcact attcttcaat ttatatttaa caatagactt ataatctatc ggtttataca    180

 

tttgttgatc acaataataa aacttcgcat tttcactcat tgtgtcaaat ttgtcaaaat    240

 

aatgatctat agctaaaaac cacctaccct taactccaag acaccttgca acagactcat    300

 

aattaccatc atgcgcaaat aagtagaaat aatttcgttt taaatgtctg ctcaaactat    360

 

taaagaactc agtattcatt tctggttgaa tagatttcga ttctatcgtc tttgatgtta    420

 

tattaagacg tggttttgta ttcttcttat tctgatcata agccatttga ggattgatac    480

 

aaatttggca ttgtccattc aaacaagtct cagtgacaac atgttcttcc aacatcttgg    540

 

catatgcaac attttgattt ttaatactat tatatggatt taatttttga acttgtttaa    600

 

ttacgctctt gtaattacaa actccatata atactccaac tgctccaata acaacaagag    660

 

aatatttaca aatcttccac aaaagactac ccttcttcgt catccaagta tctggatcaa    720

 

cctcttctgc taaaaaact                                                 739

 

<210>  90

<211>  545

<212>  DNA

<213>  S005(8)-224

<400>  90

tcaatttctg acgcatcaac aagccttttt cttcatcaaa tttgaagaag aaatgttcta     60

 

ccagccagtc cataacagga catcttctgt ggtagattgc attatcaagc tcgagttgtg    120

 

ttccacaatt tggacattga ctttgttcat tacgaatatc cgtaaataga acggccaaca    180

 

cctcatcttg cgacaagtcg atttccgata atgtttgagc gagcactttc gcacttttgc    240

 

tctttatgtc ttggattata gaatccttga cttttgagaa taagtttagc tttgcagctg    300

 

ctttttctct tggctttgga gaaaatacta gtttcaccaa ccattgagtc tgttgatcat    360

 

ccaacttata cttcggaact aacacctttc gctttgaagc aggtattgat tcgtcgttat    420

 

tgttagaaat ccacaaacct tgagtcgatt cgtctaagta aatttcttta ctgccatata    480

 

gagcgtccac tctatttaac aacttatctc taagcttctc ccacaatagt gcttgtaaca    540

 

aaatc                                                                545

 

<210>  91

<211>  683

<212>  DNA

<213>  S005(8)-235

<400>  91

gacaagatac cggcgaattg atcctgaagt gcaccggccc cagcgaagcc gtgatgacga     60

 

tgtagagctt agctctatta atggttcaga gagagattaa gttgaatatc tctaaacagc    120

 

aatatgaagg aaaacatcaa tgaataaaac cctcagtaga tgagtaaaat atgaaggaaa    180

 

acatcaatga ataaaaccct cagtagatga gtaatcaaat tgaatgaagg aaaacatcaa    240

 

agaataaaac cccatgattg gtaatcatca atatgaacca tccctttcac ggtaagggaa    300

 

ctatgttggg cttagtttca gttcaaccta tccaataacc gaaggaaaac gaatttaacc    360

 

cgttgattac gtaaaatcac tatcgaagga aaacgttata acccggaatg tccgttaata    420

 

tcgaaggaaa acgaaatata acctggttgc tccattaccg cttacactcg aaggaaaacg    480

 

ttgatataac ccggttgcca cgttattagc actatagaag gaaaacttta acccgatcgt    540

 

tacaatcgta attatgtaac attcgaggat tctcctctgt tgacatatgt ccgtctgatg    600

 

aacgaaacca tcacatgaag gaaaacatta taaccactgt ccggataaag acagtaaatg    660

 

aaggagaaaa aaaaaaaaaa aaa                                            683

 

<210>  92

<211>  609

<212>  DNA

<213>  S005(8)-236

<400>  92

tatatgcgga gcaactctgc gtagggtttc gctactaagt attacacccg gaccacccat     60

 

acaaaaattt tcatcaaact ccaatgataa taagccaaat tcctcactat tgcccttgcc    120

 

ggcttgacct ataaactgtg gcttagaact gtcgatcgag cgtagaaagc gttcgagttt    180

 

ctccggttca atgtatacat cgtcatcggc tcgtatgaac cattcaaact tgtcaatata    240

 

gtgttcatac atgtaataga gcatcatgaa tgatttcttc tgcggtggat aacgatcgtc    300

 

tacgttcttc aaacctatta ctggcaattc gttggagtga gaaccttctg aactaaagaa    360

 

ggctattcta ccaggcacct ccttccccca tgtatcataa actgcacgtg cacgtccctc    420

 

gataaaattc tgcgctgtca ttacgccgac gaatacaaga ttcctctgtg aggtttttat    480

 

tgtttcttct tcaggattca taccgatgat ttcgaatggg ctttgttgcc cgcttggctt    540

 

catgctgcac cgtttaacga tctccagcgc gcgatagttt ttgagaaccg tgccaatgca    600

 

tagtcccaa                                                            609

 

<210>  93

<211>  525

<212>  DNA

<213>  S005(8)-254

<400>  93

gtcaactttc tttaccgtga cgtgagaact tttaccattt tttggaatga acgtaactct     60

 

gacatttctc aaagccctgg taaattccag tcttatgaag ttcgcgtaga catatgtcag    120

 

ctagtttcat gacaccttaa tagcctgttg caattgcgct ggggtaatgc cagctggttc    180

 

ctaggatttt aatgatttga acaagtcaag tcacgtgccg tttatgaaga aagtaggcaa    240

 

aagcgactca atcctcttgt atcactccta gaggagtgta tttcctagaa agtttttctt    300

 

tctattgaca tccctaagat aacgaaggaa tggggttcct tgcgagaatg cgcccgagca    360

 

tagaggactt ttgactgtcc tctactttct cacagaagct tttctataag gtcttcttga    420

 

gctttcttat cttgcacttg tatattcata aacatgtttc atataaaatg tcatttaatt    480

 

tcccccggat ggccttgttg aataagcgtc tgcaagattc cctga                    525

 

<210>  94

<211>  583

<212>  DNA

<213>  S005(8)-259

<400>  94

taccttcctt aatgcaggcg cgcagataag gaagattttg catattctct atagttaaac     60

 

gggagtcctt atttggcaaa atattcttga gttcttcgaa caatttttgc tgtttgtctg    120

 

gatttttggc gatgcagaat aatatgcccg ttaaggtgga acttgttgta tcaacaccag    180

 

ccatcatcat atctagagcc ataacaacgg cgatgcgacg atcgatgcgc aaaagcttct    240

 

ccaaaacact attttcctta cccacctcag aggtgaattt tccatcccta tccatttcaa    300

 

tttgttctag cgcctcatca atatacttgt tgcacaaatc tgctagcaaa tccaaagttt    360

 

tcattaattt gtagaatttc ggtgttttca caattttcca aattgaaggt ttcacttcta    420

 

aatcttcgga gaggtcgaaa aagtcccgta tcgattgcaa cagttgttta cattctggag    480

 

agtctcgatt cttgtgtatc atacctaaac gggtgtttag tgcaacaccg acaatgcctt    540

 

caagcgttag acgattaaga tcatcgtgaa agtcatcggg cat                      583

 

<210>  95

<211>  601

<212>  DNA

<213>  S005(8)-261

<400>  95

ataccgtcca gttggagagc attgccgtgt ctgaaggctt ccataacaca ctacagccca     60

 

tcaaagcagg tgtaaacgct aaattaccac cgattgcggt gaaattaaat ggtgttattg    120

 

ctgcaacaaa tccctctaag ccccgaatgc gtaaatggtt tttggttatg cctggctgag    180

 

gacttagagg ttgttccatg gctaaatttt tcaagtaacc ggcattcatt ctggtaaaat    240

 

cgatcaattc agcacctgaa tcaatttcag tctgtattac tgtttttgat tgccccaaca    300

 

ttgtagtggc taacaaatca gcacgatact ttttggccat aagatcagca gctcgctccc    360

 

aaatttcaat acgtttttta agaggggttt tatcccattc cttttgtttc tgcaccgaga    420

 

cacgtatagc ttcttctata gtagcattgt cagcatagta atattttgca agtttgtgat    480

 

tcttgttatg tggcataact tggaacgtct cttgtccctc tcttatctct ttaccgttta    540

 

taacaatcgg tatatcttca caattatttt cataatgttt aagggctttc tgcaaatctt    600

 

t                                                                    601

 

<210>  96

<211>  609

<212>  DNA

<213>  S005(8)-286

 <400>  96

gccagtggca gtgtgaagag tagctgtaaa aatttttata cataagcagc taaaggccga     60

 

cttcattaaa agaaaaaaca aaaaatctct atataatcga agtaaaataa ttcttgtaaa    120

 

atttgctata atatacatgg acattgcata aaaggtcaat agaacgtaaa aaagtgtgtg    180

 

tagcgacaaa agaggcgaga aacgtcgata ttttggagtc gctctagcgc tggcagtggc    240

 

ctgtgaaact tattgtcggc gcaaccagac gaaaagcatc tatctagctg ctgtcctctt    300

 

ctctgatagt tttcactgaa cttggcagac tcactaaagc tatctctagc tcttgacgcg    360

 

tttaaaagag acaactgtgt ttcaaccaca ataacaacaa caaaagcatt aactatacta    420

 

acttcaacta aagcaagaac ttttacaaca cagctgagtt actcgaactt tgctgtgtct    480

 

ttgctcgtaa actttgcagt taaaacaaag aactcatcga aaacagcact tctcatcgtg    540

 

tgaacgcaac gagcatcttc cgtgagaata ttgtttcgaa atatccacca attaaacagc    600

 

agcaacaaa                                                            609

 

<210>  97

<211>  338

<212>  DNA

<213>  S005(8)-264

<400>  97

attggatttc cgataccgtc aatgaaaatt ctttcataat aaaacctgcc gagttaaata     60

 

ttattcaact tttaaatatt tatcactcaa ctgaaacaaa aaagttaaag ccatggaatg    120

 

cacaaaagag atcacatgtc tacagaactt aactcaacaa gttgctgagt tatcaaaagc    180

 

gttatcccaa aatatgcagc atacgttgtc cctggaggga aaattttcag ctgccatgga    240

 

agaaatcgct aaactccaac ggcaaaacgc gatgatgcta gatgtcatca ataaaacctt    300

 

atatagtaat agaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaa                            338

 

<210>  98

<211>  640

<212>  DNA

<213>  S005(9)-293

<400>  98

gattagcgtg gtcgcggccg aggtacatgg gagaacaaaa tttttaattg tcaaagtgac     60

 

attgccttat ctaaatgcaa acatgtttga cgtttgcaat gattaatctg tgcaaaaaag    120

 

taataattta tagtttttat taaacaattt tattaaattt cacggcagcc gtttctaatt    180

 

tcatcagcat tcggggtaac attatgccat tgggagctaa ataacactta cataggcaat    240

 

acgggcgcgc cgtaatgtca gtgagagcaa tacatgagtg taaagaaagc cattctatgt    300

 

aaggcgagtc tacgtagctg gaacccaccc agattttcat acggccaagg actgccaact    360

 

aggccggaat caaaattatt tcaggaatgc ttttcgaagc tacaaaacaa caagagttta    420

 

aagaagcgag cgcgaaacta caactgacgt aacagagctg aaatgacctc accatcctaa    480

 

cgaggattga ataaccgtta aaacaaccac aacaaaagct taaatgaact tatgtcatcg    540

 

gtcgacaaac tgttatcata gtgaaattac cgttggaata agtgttggac gagctaaact    600

 

ttttttacca ttaaagtaac gatattttta tttatttatt                          640

 

<210>  99

<211>  345

<212>  DNA

<213>  S005(9)-299

<400>  99

tcggagtaga ccttcctccg aggtaatacc aattataagt ggtaaggaga agccatgtgg     60

 

catgcctcca tcacgtggta agactgtaag gaaggcaccc tcatgtggag gctcaacaac    120

 

aggttggaat ggtatcacgg gatcaaagtc ccattcgaag aagtcgtaga gcgtagcaac    180

 

gacatcgctg gcttctttag tgcgtaagca gcgcaatatt tgttgccaat tttcctcagg    240

 

attacaccca accaattgtg cgaccttccg tgcacgcttt gcgggtgtgc ctttatgctc    300

 

tggttgtccc cagggattgt agtatgaacc ggactgtacc tcggc                    345

 

<210>  100

<211>  914

<212>  DNA

<213>  S005(9)-304

<400>  100

ggagtgcgtt aagaagttcg gcacaaacta agacttcttt tataaataat atttttcttg     60

 

agtgcgcata atgctgtcgg taaatactgc ttgcctcttg gcggctctct tggggttggt    120

 

ctatgtttgg tgtcgctaca catatggcta ctggaaacgc aataagattc cctatatgac    180

 

gccgctgcca ctaattggca atatggaagt tttgtttaaa atgagcaata gtttttatct    240

 

gtatctatct gacgtctata aggatgctaa aatgtcaaag gctgcagcag tcggcatcta    300

 

tatactcaac aagccagcgt tagtgttacg tgaaccggaa cttataaaat ctgtgctcat    360

 

caaggaattc tcaaaattcg ccaatcggtc agccacctgt gatccacata atgatgcttt    420

 

gggttggaat aatctatttt tcatacgaaa tccacaatgg aaggatttga gatcgaaaat    480

 

aacgccggtt ttcacaacgg gaaagatcaa acaaatgtat ccactaatga ctgagatcgg    540

 

cacggagttg gaagcccatt tgaattcgta tgcgaagact aacgacgctt tcgtaactga    600

 

agttaaagag gtttgtgcca gcttcaccac cgacatgatt gccaccatcg cttttggtgt    660

 

aaaagccaac agtcttgtaa atccaaacgg cgaatttcgc actcaaggac gaaaattgtt    720

 

cacctttaca ctccgtcgtg ccattgactt cttcatcgcc tttttcgtcc ccaagtgggt    780

 

ctctacattc cgtattaaac tttttacaac agagttcagt tcctttttac gcggcaccat    840

 

cgaacatgtt atgacgtcag agaggagagc aaagcaacgc gtaacgatct gatcgatgta    900

 

ttgtgagcct taaa                                                      914

 

<210>  101

<211>  588

<212>  DNA

<213>  S005(9)-308

<400>  101

tgtagcatta ttattgttgc cgttagccgt ggaagtgtca ttaataatat tattgtggtt     60

 

attgttgtga tagcgcgtgc cgtagaaact gttgcgaaag ggttgttggc gccccaaatt    120

 

attactcgga taattattgt tgctcgtcaa caagtgatta tcattagtgt tgttgttgtt    180

 

gtggttatta ttattagtat taacgaaact attatcttga cttgaataca tcggcgtaga    240

 

actattgtga ccatataacg ggccatggtt agcattacca ttgctattgg tattatgagc    300

 

gtgaccgctg ctactgttat tggtgttgcc tggaaaagtg tgtaaattac agcttgcgcg    360

 

agtcgctcga aacgaactat acggcctaga cgtaaattga tgtcctaccg gcattttcct    420

 

agttattttt gcgccgagag tttaatatcc gctaactaga tgttcttaat ttcttagttt    480

 

acacttatga aatgggtgca ccaggttgac aaagggtcct tgctggtagt ctggtttatc    540

 

acatttcaat ttgtcactaa tcaataatgc ttaaagtatt taaaaagt                 588

 

<210>  102

<211>  707

<212>  DNA

<213>  S005(9)-310

<400>  102

tacccctgcc actgataaaa acacagatga tataataagt gtggaaagac catttaccga     60

 

ccaatagagc gatatgccga gagtgccaga tattaagagt ccataaatta gtaaattttt    120

 

agctcctata gctcgcacag taataccagc aaaacaatat gctactacac cagccgacga    180

 

tacgacaata ttattaacgt atagatctat tgacacgttt ggtaggttac tacaggagtc    240

 

gtggaaatct gtaatcactg atgttttatt aacactatac tctagaattg cacatagatt    300

 

cgctgagctt gattcaccgt tatctagagc ttcgtattca gcgatcgatg caaaaagttg    360

 

aggcaaccac agtcgaacag tatttaaacc aagtaaaata cagaattgca tcgcatacgc    420

 

gtgaatggag tgacctaata acggctttgt gaacataggc ttaatctgct tcattccttc    480

 

cttgaaagct tgggagaatg ttctgggctc acgtttgtat ttctgcttaa ctggtttgtt    540

 

ttctacagta aatataagct cattaacatt cgagatacga ttcggaactt cctcaaccag    600

 

ctctttgact ggataagcag ttctgcttgt tcttttatta atagaataaa tcttttgaaa    660

 

tgctaggagg gcctcagcat ttcttccttg agacattaaa aatttag                  707

 

 <210>  103

<211>  671

<212>  DNA

<213>  S005(9)-312

<400>  103

tatggccgaa cgaagatatt tagcaaaata ggagacaatg aattgtaatt ctgatgcgct     60

 

tgatgattca cacgttcgct atgtgtggcg ttaaaatgtt ttattacaac tacttaaatt    120

 

ataaatgtgt tagataaatt gtaaacactt tgtaaaagtc attaaaacta aaatatttgc    180

 

taaattgaat gttatgtaaa gcataaatac cgataacaca ccttacaccg taataagaat    240

 

gtaaataact aattgtttag aaaaggcgaa tcactgtaaa aaacgcagca aagatgtgtt    300

 

acttcgtgtt ttattcgttc attgtaagat cttgtaaatt atatcaggtt tctgtgtctg    360

 

ctaattatac ttttgtttta ttttatcaaa aaacttaaag atttctctga gcctagataa    420

 

cgcagcccat caccagtcgc agttgcgatt aaacttgttt attctcacat gttttagttc    480

 

ttaagttttc aagtttgaag tcacagctta aaagcacaca tatacacact tacatataga    540

 

gcattccaac ttaaagttat ttttaattaa cgcaataatg ttttgttcat gcatgcatgt    600

 

tactcaatgt tcaagtatta aaaaacctat cccaactcgt ctcacacgca caaaaaaaaa    660

 

aaaaaaaaaa a                                                         671

 

<210>  104

<211>  506

<212>  DNA

<213>  S005(9)-317

<400>  104

accaataccc acatcaacaa caacaacaac acccaacaca atcgaaaaca tcacgccaac     60

 

agcaacagca gcagcaacag tcacagcaac atcatcacat tctccctact tcggcaaacg    120

 

gtatgtggtc gtggcgctca accgacgcgc ctttagtttg gacgaggctg gcaattgaag    180

 

ccgcagcagc tgtagcacga agtattatgg agctttcgac gagttttcat ttacttttgt    240

 

gctgattttc aatctaaatg cgtagcacag ttatgtgctg agtgttctga aattattgac    300

 

ttccgaagtg gcggttggcg cagcgtaaac ataaggcgta actgtgcggc caacgagctt    360

 

tcattttatt tcatactgat ttcgaaagtg ctcctgctca accgttatgt gatctagttc    420

 

cagatctaac gacttccagc acgttttatg gctaaagttg gcgctcgggc gaccaatctt    480

 

cactcatcca tggcatgtac ctcggc                                         506

 

<210>  105

<211>  611

<212>  DNA

<213>  S005(9)-329

<400>  105

cgcctgctaa agatttgaaa ggagccttag agcctaatca gcacctagat ggtgccgaac     60

 

gcctcctcga agggcgtgtc tatggcccag aatgtctcat tgcacgtaaa aatgagatat    120

 

acaccggcat acatggtggt gagataatta aactaactgc cgatcatgtt acacacgtag    180

 

caaaaattgg acaaccttgt gaagaaatat ttgaagaagc tcgttgcgga agacctttgg    240

 

gccttgcctt tgatacgcag ggtaataatt tgattgtggc ggacgcatac tacggcattt    300

 

ggctgataga tcttaatacg aatcaaaaga aattgctggt atcgccacaa caagaacaac    360

 

ctggtaaaga tattccacgt gaagctaaaa ttttcaacac ggtagccgtt gatcagaaag    420

 

gtgacattta ttggacagat tcggaatcag attttgtgtt gctcgattta gtatttggct    480

 

ctttggcaaa cccctctggc cgactcttca aatatgatcg tgctaacaat gttagcgaag    540

 

ttttgctgga cgaattattc tttgctaatg gtttggccct aagtcccgat gaagacttca    600

 

ttgttgtcgc c                                                         611

 

<210>  106

<211>  668

<212>  DNA

<213>  S005(9)-333

<400>  106

gtcttgaggg tttcattgag agtcaccatg ctagactcaa tacttgattg tattgatcca     60

 

aatacgtttt cattcactaa ggacttcaat attgaggtaa ttctagttat gtcatttcga    120

 

ctcgctgaaa cattcattac tgggtcaaca aatctatgaa ccatactata ggcacactcc    180

 

ttatcaatat aagcccaaca ctcttcccaa gatcgttttt gatataactc ttgatactgc    240

 

ttgatctgat taggtgccca atggcttttc attgcatcca ggacatgaga tttatctaat    300

 

atcgatacca gcctaacaat aggtgcctca catagaggga gatgtagttg tccggaacta    360

 

gtgcaaggga gagctgcgtc ttcactcttt ggagaagtgg taagattttc tccttgaact    420

 

ctttccttac attttccctc acatttatct agccctcccg ttattctgga acttttaatt    480

 

attgcctcat tcttttctac tctcggaatg atcttgggtt ttggttgtag accagtttta    540

 

ggttttgcac ctttcatttc tgttagttgt ttctgtgtgt ttagagaccc tgccacttgt    600

 

ttgacacttg ctacaatttc ttgatagtca gatagagtaa gatgttcagt caagtctgac    660

 

tcaatggt                                                             668

 

<210>  107

<211>  196

<212>  DNA

<213>  S005(9)-350

<400>  107

tacgaagatc taaaactaag cattttgatg gattgagtgg tattgaacct ggtctttatt     60

 

atgatgattt cctgcatctt actacaccag aaatggcatc agaacaaatt gccgaattac    120

 

taacacttaa gtctaaatgt gtatttatcc ctcctagggc tgagttgagt gataagggta    180

 

aaccatttaa tccttt                                                    196

 

<210>  108

<211>  692

<212>  DNA

<213>  S005(9)-355

<400>  108

aaaattatct tgtcacttga actcagcttt ccactttcat tgaaattgtg aaatgctctt     60

 

tgtggtggat atcgaaatgg ttccagtcca aaattaaatc tacattgttg aaaggacata    120

 

aaacttgctg ccgcaaaaaa tccttcctta acgttattga atatgtgcct ataaggatca    180

 

gtcgattctc catcgagagt aaaaataact tcttgtttgt ctaaatcgag taaacaacca    240

 

agaatcgagc cacttttcca tgttggcaaa ctgtgtggaa ttgacttggc attatgccat    300

 

ataatacgcc tacaaccatc aaatccaata gagtatttgt catcacctat accataacca    360

 

tcgtcactta gaaaactcga ttcttttgtt gcccaaccga tttgcatcac acccggtgtt    420

 

attaggagga cttcataata ccaacaacct ttggttatct ggaatgtgca gcggacactt    480

 

tcaaatgtgt aagcgtcaca gcgcgcttct aaaccatctg gtgatatttt caaatattca    540

 

cttacatcct tcgtattaag catggcgtta atattggaga cattggttgt ctcatatgaa    600

 

tattgtcgcc cgcttactgg aaagtagttg tctaaacacc aacaagcgca aaatcctatt    660

 

tgacgcatta agaaatttgg tgatgataca tg                                  692

 

<210>  109

<211>  569

<212>  DNA

<213>  S005(9)-357

<400>  109

catggctata tctggttgca ccgagggcat gatggaaaac tttggcgaag gtggatattt     60

 

tacacatggc aataagggct tattacctga tggcacttgg tggcgttttc ttttttctac    120

 

aataattaat acagctatgt tggtggtgtg tttgattggc gcggcactct ttgctaagac    180

 

atcggtatta attttgggca ttgtgtcaat atgtttgttg gccacatata taagttttct    240

 

ggctgaaggc ccaaaggaaa ttgatcgccc taaagaaaat accatctata atcagacgac    300

 

gaaacttcca tatactggtc tagacagtaa tacgttaatg ggcaatctgt atccacatta    360

 

tgtagaagat tacacctcga atggtaaaat ggttgatttc gccacaacat ttggcgtgtt    420

 

gttcgctggt gtgactggca tcatggctgg tgcaaatatg tcgggcgaat tgaagagtcc    480

 

atcgagaagt ataccaaccg gcaccttatc ggccgtttcc tttactttcg tttcttacat    540

 

tttattgtca ttcctgatgg catttacaa                                      569

 

<210>  110

<211>  530

<212>  DNA

<213>  S005(9)-358

<400>  110

tgtggtcggt ttttcccgca aagtaaactc aaaggagcag tttggtaacc gtttttctgc     60

 

tgttaaaacg gattttataa gagcatataa atcgtatttt cacatccata tatatgtgct    120

 

ttaaaataga ttcaatgaaa tgaaataaat acgctcactt tgttttccaa caagggtttt    180

 

tggggataat gcggttgtat atatgtatgt atatatgtgt cctcaggtat tcgggccgtt    240

 

gatgctaatt ccttctcctc cgcttccagt tggttgttca gtatgtatgt atgttgttcc    300

 

tgcttttttg tttattctag tttaatttaa attcgcgccc gttttcttgt ttttatttat    360

 

gtcttgcttt aacgtttcgc gcgcgatttt ctgtgtgttg ttctctgttt cttttacatt    420

 

actttttgct atttagatat gtgtggtttt gttttttttc ttttaggttt cgcgcccgaa    480

 

tagtgcttgt ttttaattta tgtcttttat ttttagtttg ggagcttccc               530

 

<210>  111

<211>  697

<212>  DNA

<213>  S005(9)-359

<400>  111

agccaatgat aggccctggc gcatccggaa ttgcaggctc gaagtggttt caccacaaat     60

 

tggagcaaat gtgcaagttg atatcctaaa cacagaaggg ttatcaatag caacatcagg    120

 

aatagcagtt gtaggatctt ctgcaagaaa gctatatgtc agaaatcccg acaaaacttt    180

 

cataggaagt ggtcgaactg acgctttcaa cctggtggca ataaagaacg tgtgcgcgaa    240

 

ctcagcgtta cagaccgttc aaatcaccgg aaatttgatg ttacaattag agttgcataa    300

 

cgaaatcatg caaactagtt gtggatacgt caaaacacaa gaggagattg actttaaatt    360

 

aagtcaaatg tctttatcat cacacactac cagtgatgaa cccgttattt tgcggaagga    420

 

ggatgcagaa agctagacac ctcaaaatgg acttagatat aagaattaat taagttcaaa    480

 

tggatgacca agttgatata cgcacccgaa taaaacgaaa tcgttgaccg aacatacaag    540

 

gaaacgaccg ttgaacaagg gaaaagctaa atgatacaac gtctacccat tagatatata    600

 

atgatagtat aagctagaac gagaccctta aaactcgagt aagctaaggt gaaggtcatc    660

 

aactttcact agggaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaa                             697

 

<210>  112

<211>  398

<212>  DNA

<213>  S005(9)-371

<400>  112

tattgccgtc tttgcgtcca atgctgccat tgcttgacct acatggtgtt cgccgtttgg     60

 

acttccacac atccctaatg gaggagctgc gagaaaaact aattgctcat attaatgaat    120

 

tgggacaaaa ggatccacgt gaacgtgata agaaattgag agaattgttg attaaaagtt    180

 

ttcctgttgt gcgagttaag gcgctccggc ctgtagtaat ggcaatttta cgtaataccc    240

 

aacatattga tgacaagtat ttgcgaatac tggtgcggga tcgcgaacct tattcggata    300

 

cggatacaga agtaaaacgg caaatttggc gtgataacca atcactgttt ggtgatgaag    360

 

tttcgccact tctgtcacaa tatattcgtg aaaaggag                            398

 

<210>  113

<211>  727

<212>  DNA

<213>  S005(10)-388

<400>  113

ggatataaac gcaacacttc gtccactacc atactcagat atggtagatt attgatagtc     60

 

tcatatgaca ttttaccccg ttcagctaca agagcttcac aaatctcatt gcgcagacgt    120

 

tcttgtaaat cgggccgttt cgataattcg tatagagcaa atgtcatcgt cgatgatgac    180

 

gtctcaaaac cagctgacag aaatacggca gcttgtgctg tcaacatatc ctgtaactga    240

 

ggattatact cgcctttcgc aactgcctct tgtttaaggc tcaccaatac atcgatcaga    300

 

tcgttacgcg ttgctttgct ctcctctctt gacgtcataa catgttcgat ggtgccgcgt    360

 

aaaaaggaac tgaactctgt tgtaaaaagt ttaatacgga atgtagagac ccacttgggg    420

 

acgaaaaagg cgatgaagaa gtcaatggca cgacggagtg taaaggtgaa caattttcgt    480

 

ccttgagtgc gaaattcgcc gtttggattt acaagactgt tggcttttac accaaaagcg    540

 

atggtggcaa tcatgtcggt ggtgaagctg gcacaaacct ctttaacttc agttacgaaa    600

 

gcgccgttag tcttcgcata cgaattcaaa tgggcttcca actccgtgcc gatctcagtc    660

 

attagtggat acatttgttt gatctttccc gttgtgaaaa ccggcgttat tttcgatctc    720

 

aaatcct                                                              727

 

<210>  114

<211>  837

<212>  DNA

<213>  S005(10)-390

<400>  114

ctcacaatct tgaattatac tttaataaga cattataaaa gagctaattt tataatgcag     60

 

aaagtcctac taatatataa aactaaaata atagataaag acataaccta agagcttatt    120

 

atgtcaaaat cttcgtcacg cttaattggt ttcaatcctt catatatacg ccaatctaca    180

 

tccacccaac tagggatgct tggacatata ccaaattgtc tccagtattg catacactta    240

 

ttacgaagca tttcataata ttctttacct tgaccatgtg catttaataa cattgattca    300

 

cacgaaatca atgatgaatt aagtagatca ttggatgcaa atgtccaatt acacgtttct    360

 

tctatggctc ttttatccat agcagcaaca tacacaggtc ttttttcgtg tcgcttaata    420

 

catcttttca aaaatgatgt ttctggagca aagactgtcg tatatagatt gatatcgcca    480

 

gttttcagcg catccgtaaa tttaatatta taacgatcaa agaagctaga tacattcggt    540

 

gcattaaacc aatgtaaaat atcctcttta acagtcataa ttaaatcatc tccgtaaaat    600

 

attgaacaaa cattattttt atatgattct aatgtcaacc caatattgtt ttcccttgat    660

 

aattgtaaat atgctgaacg gagatacatc atatttaccc cattattaag aatagttgta    720

 

atgggacaac ctgatggtgc accacaaaga acctgataaa ccatattaag cataagatgt    780

 

tgggcaaaag ctatttcatg tgccatagcc attctaacgc gcctatttgt tagatca       837

 

<210>  115

<211>  638

<212>  DNA

<213>  S005(10)-401

<400>  115

gagactacga gtaaatcgca aaggaattaa ttcttagtgg cattcttaac gagtgatcgc     60

 

gtgtcgccta cgtgttgtct atctggcgga aaggtggcgc tcattgcaga tcggttgaaa    120

 

gatataaaat tgccattaga gaaaacgttt atgtgttcac agtgaagatt tattgttaaa    180

 

gaaaataaag atttatttga agcatatcaa taattgtgga gtcttcttgc taaaatctgg    240

 

aaagggttaa aactgatttt taagaaataa gtgcttgctc caccaacatc aaaccatgaa    300

 

ctggctgtat ctactaacga tagcagcctt tttggctgtg agcagcgtga actcactatc    360

 

acttgatcca gtggcctcca ctgagctgga gcagcacata aagaagggtg attgtgtcat    420

 

atcaatgcga cacatacggc cgcgtcgcaa actacacata tccatagaag cactttttat    480

 

gatcgatttc cctacactaa aacataaatt atcctttttc ctcgatcgca tgaatcaacg    540

 

tgtcaccttg gatgtaacgg ccaacggtac cactgtatcg aaacacttcg aattgcccaa    600

 

tacgaatgag accagcacaa tacgttcgct ggcattgc                            638

 

<210>  116

<211>  306

<212>  DNA

<213>  S007(3)-G11

<400>  116

tagccccaat tataactttc aaccaaactt tatagctcct caccgccgac agatttctct     60

 

tgatcggctt ttcttatgag ctcttccata tctttgcgca acgactcggt gccagcgcat    120

 

attaaatctg gtttcataat ttcaaatggt ccgccatagg gatgtgttac cacgccaccg    180

 

gcttcacgta tgagcaaata accggcagca caatcccatg ggtacctgct agcttatcct    240

 

tctcttcttg ttgcaacttg aagagcaatt tgactagagc ttcggcaact tcctcaggta    300

 

cctcgg                                                               306

 

<210>  117

<211>  659

<212>  DNA

<213>  S007(6)-34

<400>  117

atggggaaaa cattgtaaac atgtaaagcg taactcttat ctacagcaat acgtttaaac     60

 

atttgattca tggattcctt cataggctta ggcagcatta gcccgtatat gcctgtgcta    120

 

agcgattccc ataaagcttt gatagcaggg aaagcctgct gagacccacg catgcgagca    180

 

ttcgtattag gatcagtagt taataacaca ttgcgcatag caacaacccc tgggttttga    240

 

tcccagatgg gaaaactaac ctgtcttcca gatgttgccg cttgaaacaa ttgctgtttt    300

 

tgatttgggc taacgccttt catattacaa tcccggtgtt aatttctgcc tttacgttgt    360

 

ttttcggcac gcccgccttg gacattgata gtagggccat tgctgaccaa gctgctacca    420

 

acaccagctt tttctgtagg tgcggccggt tcttctacca ctgctttttc tgggacttct    480

 

actacgagcg ctggctcaag gacttccggc ttggcttctt caagagcagg aacttgaacc    540

 

gcgacttctg atgtttcgtt cgccacggta gtaggcaatg caactactgg gctgatgctg    600

 

acttcatgcg ctgctttaaa gaattcacga aacaactctt tagcactacc ggctgaggt     659

  

<210>  118

<211>  490

<212>  DNA

<213>  S007(7)-107

<400>  118

ttgagctttc tctttattcc ttacgttaga ttttcccatt gataaagtat tgggtttaat     60

 

taatccataa aaacaaatta cttaactttg gaaagaaacc actgtatccg gtcaagcgcg    120

 

aaagcgcttg gctggatgcc aataaaattt tggattcgat tatgcttgaa caagctaagg    180

 

aatttaccaa tatgtccgaa ccaacccaaa ccaccagcat tactattcct gcaggttctc    240

 

cggctgctca ggctttcttt ggtcaaggta gctcccagac caactctacc tggatcatca    300

 

cggcgtttgt cgcgtttctg gtgatcgttt ggggtatctg gcgtggtcac tctcagtcca    360

 

gcgaagagca gaacactctg actcgtgcga tcgatgcaca ggcattccag tcaggtctgg    420

 

ctgcacaacg tttggctgat atgcaacaag ctatcactct ggaacgcgtt gcttctactc    480

 

agtacctcgg                                                           490

 

<210>  119

<211>  483

<212>  DNA

<213>  S007(7)-178

<400>  119

atcacgcaaa cacggatgga tttgggatac aagaaaaatc tacggttatt ggttgcatgc     60

 

cccaatcgtc gagtgtgttt ttgcatggat tttctccgtc gcatttttca cgcaaaattg    120

 

ctgtaatatc cttttctgtg caatcatcaa taacacaatg cataaaaaca ccggaatact    180

 

gtcttattgc tttggtaatt cgaatggtat aatccaaggg gcagttaagt tcaaattcgc    240

 

tcgaactaaa gcgaataggt ctctgtaatc ttttctttct cttagaggtg ttaatacatc    300

 

tgcacagtaa tattccacat ctacgtccat agcctcggtg tctttaaaag aaaataggca    360

 

tgacttcttg ttgtcacaca acttttttat tccttcggtt ctgtcatatt ctacgcagtg    420

 

acccgtgatg catgctagcc caaccgtgca aagagcgagt gcccaaggga tggtacctcg    480

 

gcc                                                                  483

 

<210>  120

<211>  336

<212>  DNA

<213>  S007(8)-192

<400>  120

cagaagagag gtttcctcgg ccaagctggt ttggcaggaa ttaactacaa gtcaaattct     60

 

gccttatcgc gacaacaatt cgaacagtcg caaaagctgg ccgcgcaaca acaagagttc    120

 

actaaggaga accaacatcg tgaaatgctg ctaagtggcg ctagaacgga agtatctggt    180

 

gctactacgg cagtttcaca cgcctaatct aatgccgtga aagtaatgtg tgcggcatta    240

 

gggggcccta acaccaggac cccgtagcat ggacttgaga gagcactcca gtaagagccc    300

 

tgtcctgggc cagttcgcaa tataaagtac ctgccc                              336

 

<210>  121

<211>  391

<212>  DNA

<213>  S007(8)-259

<400>  121

aaaaaggccg tgataaagga aaaccacgtt tgaacttcgt tcatatgcat aaagatcccc     60

 

tttgcaaaag tctcttgaaa taggatggtg acgaatgaac cctagcggcc ttgaagcatt    120

 

aatggctttc atgaacagtg atatagggca gctccttaag aatatcgttg ttaatgaagt    180

 

cgttcctttt gcaaaacaaa agttcattaa tggagcgatg aacccggtta ctatgactca    240

 

ggaagaagct gcacagcgtg cgactcaaga gtttgccact gtcgatattc ctgaagaagg    300

 

aataaatcca ggtaatgagc aggaagttcc tggtgagaat ctggataact ccacgtatta    360

 

gcggggaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa a                                   391

 

<210>  122

<211>  427

<212>  DNA

<213>  S007(10)-420

<400>  122

ttttcgtcct acaggtcgat ctactatgtc ccatgttttg tttgaaattt gagccatata     60

 

ttcattttca acggcacgca gccacatatt acattcttca ctgtttatag cttcttgaaa    120

 

actagttgga tcattttcta ctgatatatt tgcatattcg cattcttcaa aatctacact    180

 

agattcagat tcagtatcgt ttttcttagt tttgacttct tgaaatgact tcttgggccg    240

 

tccgcgcgtt ccagttcgaa ttagctttgg tctacctttg ccccttttcg gaacgattaa    300

 

ttcagtattt atgtcttcat tttcactttc gcttgaagac ccctcaatta ttttctcaga    360

 

ttcaactatg ctttcatctt ttcgtgtatc gaaatctatc tccacagatc catcttcaca    420

 

gtacctc                                                              427

 

<210>  123

<211>  748

<212>  DNA

<213>  S002(1)-A3

<400>  123

atgggggcat ttggtagtga aaattcaaag tgaacggttt atgtagaaat ttgagtgagc     60

 

attcgtttaa ccgatttaat aaagaaattg cataagttct catatttttc aatactttaa    120

 

ccgttatgga tggaaaaccg aagaaaacgc gccagcggaa tcggccaaga aataaagcaa    180

 

atcgtttaaa ggaggacaac ggccagacct cgaatagtga attaaataac actgagggcg    240

 

tagtgttaaa tattgtggga caacaaaaag cacttattaa cgaatgtgta aatgagaatt    300

 

acggagctct aacaaaaacc acgccgagtg gtagtgaatt gccaacgcaa tcaccgcaag    360

 

attcagacaa tggtttgaga ttactgcaac aaatgatgcg cacaaagctt ttacagcaag    420

 

gcaaaaagag tgaaaaaggc aatgttgata caaaagccac tgaaaaggtc gataaaaagg    480

 

gtcaaaaaag tagtgccagt ttgagcaaag gcaaagaaag tggtaaaacg acaaatggaa    540

 

aagcggcagc ggacaattta caaaagcaaa gtgcatttgt tgcaagtttg cagagaaaat    600

 

tagagagctc agtggcaaac ggcagcaccg atttacctaa tactttattg gaaaacctac    660

 

aaaaattact ccatgaggga ccaataagtg atgtagagtc ctcagacgac gaggaggatt    720

 

acatcgagta tatttataga ccgcggca                                       748

 

<210>  124

<211>  668

<212>  DNA

<213>  S002(1)-B4

<400>  124

atcacccaca tgcacatcgt aagcaacatg taacggaaag tcatgaggac gtcgagtcgc     60

 

accaccagcg acgccaccac gcacgaaact tccactcaag actcgcaact tcctcgcttg    120

 

acagcagcag caaccacaaa tgtgcagagc gcttggcaca gatttgcaat aatgtcggtg    180

 

ttagtgaaat tcagttggac gatgacaaag tgtcaccatt caaagtgctt tgcggtgccg    240

 

aacgttggat tgttgttctg cagcgtttag atggctcagt cgcctttcac aatcgcactt    300

 

gggatgcata taagcagggt ttcggtagtg taggtgaaaa aactgaattt ttcttgggtt    360

 

tacaacattt gcacgagcta acctatagtg gtttcttcga agtacctgcc cgggcggccg    420

 

ctcgaaatca ctagtgaatt cgcggccgcc tgcaggtcga ccatatggga gagctcccaa    480

 

cgcgttggat gcatagcttg agtattctat agtgtcacct aaatagcttg gcgtaatcat    540

 

ggtcatagct gtttcctgtg tgaaattgtt atccgctcac aattccacac aacatacgag    600

 

ccggaagcat aaagtgtaaa gcctggggtg cctaatgagt gagctaactc acattaattg    660

 

cgttgcgc                                                             668

 

<210>  125

<211>  406

<212>  DNA

<213>  S002(3)-D9

<400>  125

aatttataca ccttatcaca tgcattggtg ccgccagcgt tgagacaacc atcaacaata     60

 

ttcagtaagc gttgttcacc cacaatttca tacagcgact ccttcatggc ctgtttgttg    120

 

atggcatcat ccttatagaa tactaattta ttgtagagac agttcacgta gcacttctcg    180

 

cgatcacttg ggttcgccac ctttatttta accagattgg tggcgagctc atccgaaaaa    240

 

ccatattctc ccacacaagc ttccttggcg tgtttcaaat tgagacgata ggcaatccaa    300

 

gcggtcaaaa cttcgaactt cgcttccaat tccggtgtga gcttcttggg cttgcgcaga    360

 

cccgcttcgg cgttgaaaac gcacagactg agcagtacct cggccg                   406

 

<210>  126

<211>  624

<212>  DNA

<213>  S002(3)-E7

<400>  126

tcaccaagtt tggccaaact ttgacggaat tctttaactt tagctggatc tgcctttgct     60

 

tttgctccac tagcatcaag accttttcct tcctcttcaa tgtaaaatct caaattctcc    120

 

aacaaaataa tagtgccagg tgctggatct ttacattcat tttccacttc gggtccaacg    180

 

caatcaggta aaaatttcac atcttttcca agaagttttt tcagttcatc agccactgga    240

 

gcaagggtat acttttgatt tttttgtcca tctggccgac ctaaatgcga catgagcacg    300

 

acagatttcg cttttgcgtc caacgcaaat ttgacactat ccaaagcggc aacaatacgt    360

 

tgattgctag taattttgcc atctttgatt ggaacattga agtccactct catcaacact    420

 

cgtttgccat ttaaatccaa actttcgatg ctcaacttgt taaaagccat tttaccggtt    480

 

ttactctttt cttttttatt acaagaggat agacttttct gattagtatt tccgaaataa    540

 

gattggaatt gaaaagtttt ccgcacgcac aaaatgttcc ttctgcttat cggtatggta    600

 

aaactttttc cccatgtacc tcgg                                           624

 

<210>  127

<211>  410

<212>  DNA

<213>  S002(4)-C10

<400>  127

gccagcagtg aataacaagt gaccagtttg ctgaaactgg aaaatacgcg cttgtagaga     60

 

gcaacagact atcttttaga agactgacca gcggtatcgc gagagtgtta agacaacaag    120

 

aacaatgtgc gcaatgcagg ggattttact tgccttattg atcgctactg cggccgcaca    180

 

atcgcaatcc tattaccaac agcaacaaca agcacaatat gagaaacaat atgaggcaca    240

 

agaagctgag tatgcagcac gcagagagca gcaaagcaca cccgcttact tgacaaggat    300

 

atcattgacg acaacctcct ataccaacgg gattttattg ccgcatttta acataagacc    360

 

aacaacatca cctactgtcc agcacccagc agggatcaat gtacctcggc               410

 

<210>  128

<211>  631

<212>  DNA

<213>  S002(4)-E4

 <400>  128

tatatgaaac aaaatttcag tttggaatcg gatgattcag tagatattcc atatcatgcc     60

 

agagaaactg cactgccatt cacatatggc gacatatctg aaggattaac gcaaagtcaa    120

 

ctgaagcacg ttgagagtat ttttgacgaa tcacaatttg aaaatgataa acaaccgttt    180

 

ttaaaggaga cgaactcttt atataattta ggggagacag caatgattca agatgtatat    240

 

ttaaaaaaga aaattgccaa caatgaaaag cttcaacaaa gctatgacaa ttcaattaat    300

 

aaaaacaatc agacagggaa acgtgagctt ctctcaaaga acaaactaat caataatata    360

 

gtgcgaagtg aaaacaatac tcgtaagtta tccgaaaatg tccataatag gataattttg    420

 

gaacaagatg aaattagtaa tgagttatta gatacatcac ataacggttt aaatcttaat    480

 

agagagaatt caaaagatca acctatccta gaaactaagg atctaaaaag gtgtcaagca    540

 

catagtttcc catatgagga aatcacaagc tttttaaatc gttcgactag cccctatcca    600

 

acgctcagcg cacaaatttg tagtacctcg g                                   631

 

 <210>  129

<211>  408

<212>  DNA

<213>  S002(4)-F8

<400>  129

catggaattt atacacctta tcacatgcat tggtgccgcc agcgttgaga caaccatcaa     60

 

caatattcag caagcgttgt tcacccacaa tttcatacag cgactccttc atggcctgtt    120

 

tgttgatggc atcatcctta tagaatacta atttattgta gagacagttc acgtagcact    180

 

tctcgcgatc acttgggttc gccaccttta ttttaaccag attggtggcg agctcatccg    240

 

aaaaaccata ttctcccaca caagcttcct tggcgtgttt caaattgaga cgataggcaa    300

 

tccaagcggt caaaacttcg aacttcgctt ccaattccgg tgtgagcttc ttgggcttgc    360

 

gcagacctgc ttcggcgttg aaaacgcaca gactgagcag tacctcgg                 408

 

<210>  130

<211>  339

<212>  DNA

<213>  S002(5)-E5

 <400>  130

aattctcttt cagtagaaga agttggtgcg cctgacgcaa gctcggacga gacactagaa     60

 

gacacaaagt tacttgaaaa gcgttccgct gacgccatac ccgacgtaga cttgtgcaaa    120

 

caccacaagc acaataaaga cagtaatgaa tttggtagtg aagatgctta cgagcgttat    180

 

tatcaactcg aaaaatcata taatagtgaa cttcgaagga agcgtcagaa agttgacaag    240

 

aaagactcat cacaagagga ttcctccgag ctggcaggca gtgatttgct agcactagga    300

 

ttacgtagaa aacgcaaagc agccgatagt acctcggcc                           339

 

<210>  131

<211>  515

<212>  DNA

<213>  S002(6)-16

<400>  131

catgaaattt atacacctta tcacatgcat tggtgccgcc agcgtttaga caaccatcaa     60

 

caatattcaa taagcgttgt tcacccacaa tttcatacaa cgactccttc atggcctgtt    120

 

tgttgatggc atcatcctta tagaatacca atttattata gagacagttc acgtagcact    180

 

tctcacgatc acttgggttc gccaccttta tttttaccag atttgtggcg agctcatcag    240

 

aaaaaccata ttcgcccacg caggcttcct tggcgtgttt caagttgaga cgataggcaa    300

 

tccaagcggt caaaacttcg aacttcgctt ccagttctgg tgtaagtttc ttgggcttgc    360

 

gcagacccgc ttcggcgttg aaaacgcaca ggctgagcac tactgtcgcc agtatgcagc    420

 

agacgataga ggatttcatg tttagttgat tttgtgggtt gattttagta gattactgta    480

 

atgtataatc gaactgaatc cccatgtacc tcggc                               515

 

<210>  132

<211>  475

<212>  DNA

<213>  S002(6)-19

 <400>  132

ttatatacat tatcacatgc attggtgccg ccagcgttga ggcaaccatc aacaatattc     60

 

agtaagcgtt gttcacccac aatttcataa agcgactcct tcatggcctg tttgttgatg    120

 

gcatcatcct tatagaatac caatttatta tagagacagt tcacgtagca cttctcacga    180

 

tcacttgggt tcgccacctt tatttttacc agatttgtgg cgagctcatc cgaaaaacca    240

 

tattctccca cacaagcttc cttggcgttt tcaaattgag acgataggca atccaagcgg    300

 

tcaaaacctc gaacttcgct tccagttctg gtgtgagctt cttgggcttg cgtaagcccg    360

 

cgtccgcgct gaaaacgcac aggttgagca ctactgtagc caataagtag cagacgatag    420

 

aggatttcac gtttagttga ttttgtgggt tgattttagt agattactgt acctc         475

 

<210>  133

<211>  596

<212>  DNA

<213>  S002(6)-82

 <400>  133

atccaataac ttagttagca tatcttgtat atacaattta tatccttctg aagtttctaa     60

 

tgttttttga atatcacgga tttcattttc cttatgatga agctcatata aggcagaatc    120

 

acaacggtta cgactttccc gtaaatcctt ctgagttgca attaattctg ctcgtgtcct    180

 

actaagttct tccgaaataa gcgtttttgc ctggatctca gcctgaagtg aactttgtaa    240

 

atttaataac tccatcttat cgagtttttg agaacgtcta tttcgccaat ttttcgtttc    300

 

ataggtttgc tgaaatgaac ctgagtgttt tagatattca acctcctcag tcatttttgt    360

 

tgctaaggct tgtaagtaac ttcgtgcatc cttttcatca gatacccatt gtataatttc    420

 

ggacatttgt cgttcccatt gtattatagc ttgtcgcttt gttcttaatt cttcacaatt    480

 

attttggtct tctatttgct ttgtttgtaa ttgtcttata gattctttga gattttccat    540

 

ttctgatatt aatcttcttt tttcttccac ccatatactc ttctcttgct cataca        596

 

<210>  134

<211>  186

<212>  DNA

<213>  S002(8)-270

<400>  134

tcccaagttc tttaaaaaca gcaaacgaat gaagaacgaa ttacaaataa taccacactt     60

 

ccagcaaaag ttacacgcag cgtttaatga ccaaagtgcc gacgacgcct aagtatatga    120

 

ccgctaaaga agatagacac aacgcgaaag ttctctcact gtgttcgtcc ccatgtacct    180

 

cggccg                                                               186

 

<210>  135

<211>  425

<212>  DNA

<213>  S002(10)-416

<400>  135

tgctcagtct gtgcgttttc aacgccgaag cgggtctgcg caagcccaag aagctcacac     60

 

cggaattgga agcgaagttc gaagttttga ccgcttggat tgcctatcgt ctcaatttga    120

 

aacacgccaa ggaagcttgt gtgggagaat atggtttttc ggatgagctc gccaccaatc    180

 

tggttaaaat aaaggtggcg aacccaagtg atcgcgagaa gtgctacgtg aactgtctct    240

 

acaataaatt agtattctat aaggatgatg ccatcaacaa acaggccatg aaggagtcgc    300

 

tgtatgaaat tgtgggtgaa caacgcttac tgaatattgt tgatggttgt ctcaacgctg    360

 

gcggcaccaa tgcatgtgat aaggtgtata aattccatgc ttgtgcctca ccggaattcg    420

 

acaaa                                                                425

  

<210>  136

<211>  401

<212>  DNA

<213>  S002(10)-452

<400>  136

gcttacgcaa gcccaagaag ctcacaccag aactggaagc gaagttcgag gttttgaccg     60

 

cttggattgc ctatcgtctc aatttgaaac acgccaagga agcttgtgtg ggagaatatg    120

 

gtttttcgga tgagctcgcc acaaatctgg taaaaataaa ggtggcgaac ccaagtgatc    180

 

gtgagaagtg ctacgtgaac tgtctctata ataaattggt attctataag gatgatgcca    240

 

tcaacaaaca ggccatgaag gagtcgcttt atgaaattgt gggtgaacaa cgcttactga    300

 

atattgttga tggttgcctc aacgctggcg gcaccaatgc atgtgataat gtatataagt    360

 

tccatgcttg tgcctcaccg gaattcgaca aagtacctcg g                        401

 

<210>  137

<211>  590

<212>  DNA

<213>  S002(10)-444

<400>  137

gtgaagttga agagaagaaa cagcgcgaaa tcgaagagaa gcgtcagcgt ctcgaggagg     60

 

ccgagaagaa gcgtcaagct atgctgcagg ccatgaagga caaggacaag aagggaccta    120

 

atttcactat tgccaaaaag gaggcaggcg tgttgggact ctcatccgct gccatggagc    180

 

gtaacaagac taaggaacaa ttggaggagg agaagaaaat ctctttgtcg ttccgcatca    240

 

aacctctggc cattgaaggt ttcaacgaaa gcaaattgcg tgagaaggcc caagaactgt    300

 

gggaactcat cgtcaaattg gaaactgaga agtatggctt ggaagaaagg cagaaacgtc    360

 

aggattacga tttgaaagaa ttgaaggaaa gacagaagca acagctcagg cacaaagcct    420

 

tgaagaaggg tctcgaccct gaggcttcga ctggcaaata cccgcccaag attcaagtcg    480

 

cctccaaata tgagagacgt gtagacacac gctcatatga cgacaagaag aagctcttcg    540

 

aaggcggctg ggaagaaatc ggcaaggagg tgaatgagaa gatctggaac               590

 

<210>  138

<211>  293

<212>  DNA

<213>  S008(1)-B2

<400>  138

tacgcccaat accgataccg aaatctttct ccgccgccaa gttgaacacg accagcataa     60

 

gtatacgtgc accaaatata acttcaacaa ttcaaccggt cggtagtagt ggtgtggttg    120

 

gcagcactat taattctgtg gtggggtcag gtaatacaac tgctaacaat tcgccacgca    180

 

atacgactat gagtggcgta actacaggtg ttggcaacaa cgtcataccg acgtcgaatt    240

 

tacccaccac acgtatcata cagctgcaac aacagcccgg cagtacctcg gcc           293

 

<210>  139

<211>  186

<212>  DNA

<213>  S008(1)-D11

<400>  139

agcgaggaat cttctaacag caaacagacc aaacctagtg gtaatttggt ggttattgat     60

 

ttgggcgccg tcatacgcaa tttcgaggaa cttgttctgc tcgatatcaa ccgcgtcggt    120

 

gctgcgatcg gtaacacttt ggttcaactt acgtcgcaaa ctgatgtacc tcggccgcga    180

 

ccacgc                                                               186

 

<210>  140

<211>  343

<212>  DNA

<213>  S008(1)-D5

<400>  140

ggttaaggct gctcttcgga gcacaagcaa tcgagcaaac tcaaatcgtg aaaaatctat     60

 

tgaatacaaa ttggttccac aaaaataaaa acgcaaaaca aactaagcag gaaaataaaa    120

 

gaaaacttgg aaaaacaatt cgcttcatat cataacctct ctggtcgccg tctgttaacg    180

 

agcgctgctt gctattgatc gttacaacag catcaccttg acttcggttc gcctttactc    240

 

tgcttaatcc cgccactttg taaacattca cattggcgcc gccgacaaat ctcaattata    300

 

cgatggctgt catcagtgat catggcagca gtacctcggc cgc                      343

 

<210>  141

<211>  718

<212>  DNA

<213>  S008(1)-D6

<400>  141

ttatggcttt cgtattagcc attgctaatg cttcacccaa gcatggcaag aacaaggata     60

 

acatgaatag cttaaaacct gtggattggt tatcggcctc tgaattagaa tcgatgccat    120

 

cagtcgagga tatcactttg caacagttgg agaacatgtc agtagaagat gcccagcgaa    180

 

agattgagaa gctgtatcac ttgtcacaaa ttaatcacgc tctagaaccg tcctttgttc    240

 

cgagcccaag taatgtgcca gttatcttga tgaaacccaa tggacagccc gagcgcacca    300

 

atctcaatga actcgtccaa actgccaaac aacaacccaa ctttggcgat gaggaagtca    360

 

ccattttcat tactggtttg ccacagtcgt ccccttctgt tgcaaaggca aacaaaaaat    420

 

tgatccaggc ttatatgcag cgctacaatg gacagcgtca accaatcagc aataaccagg    480

 

actatgatta tggcaacaat aaggataatc aaggtgccac ttcaagtgaa gaagactaca    540

 

gtgaatcgtg gaagaacccc aaacccacaa agggcaacct tgtggtcatc agcttgggtt    600

 

ccaccctcac caatatgaaa cgtttggctc ttatcgatgt agaacaaacc ggtaacatga    660

 

tcggtaaagc tctcgtcgaa ctgaccaacg aatgtgatgt acctcggccg gaaccacg      718

 

 <210>  142

<211>  186

<212>  DNA

<213>  S008(1)-E3

 <400>  142

atactgtggg gagcgtttca ctaaagcgac atttccagct tctgcggtag gcagtaacat     60

 

ccccaatacc gctattagaa gaggcatcgt aatgcagatc aaaagtattt tctttgttgc    120

 

tgccattggt gctaaaattc gatatgaaac aaatattttc tcccatgtac ctcggccgcg    180

 

accacg                                                               186

 

<210>  143

<211>  272

<212>  DNA

<213>  S008(1)-F10

<400>  143

tagacgtctg aaccgccctg agaattgcgg cgtcgacatt cccggcacct cggtattgca     60

 

tggtcagcta caacattgtc attggagatt gctcttgtag cactttccga attgtgttga    120

 

agtttaaagc aaggtaaatg ctgaagaaat gttgcacccg atgcgcgtaa ctcttgatcg    180

 

cgaacagctt cttcggctgt gagttcttct ggtggggtat gattttcatg ttcgcccatg    240

 

ttaaagtgat tactattatc attgagtacc tc                                  272

 

<210>  144

<211>  569

<212>  DNA

<213>  S008(1)-F12

<400>  144

taccggtttg ttctacattg ataagagcca aacgtttcat gttggtgagg gtggagccca     60

 

agctgatgac cacaaggttg ccctttgtgg gtttggggtt cttccacgat tcactgtagt    120

 

cttcttcact tgaagtggca ccttgattgt ccttattgtt gccataatca tagtcttggt    180

 

tattgctgat tggttgacgc tgtccattgt agcgctgcat ataagcctgg atcaattttt    240

 

ttgtttgcct ttgcaacaga aggggacgac tgtggcaaac cggtaatgaa aatggtgact    300

 

tcctcatcgc caaagttggg ttgttgtttg gcagtttgga cgaatccatt gagattggtg    360

 

cgctcgggct gtccattggg tttcatcaag ataactggca cattacttgg gctcggaaca    420

 

aaggacggtt ctagagcgtg attaatttgt gacaagtgat acagcttctc aatctttcgc    480

 

tgggcatctt ctactgacat gttctccaac tgttgcaaag tgatatcctc gactgatggc    540

 

atcgattcta attcagaggc cgatgacca                                      569

 

<210>  145

<211>  289

<212>  DNA

<213>  S008(2)-B1

 <400>  145

gcttttcgca tgcgaaagag cgaagatgaa aatttgctta agaaattgac gtcacgtgag     60

 

cgccgcttca tcaagttcgc atcggtggaa taccgcggcc aattgtatat gacaccgcaa    120

 

gatttcctag attctgtggt tgagcaagag ccaagacctc gcctgaaacg acgcatgctg    180

 

agtgaccaag acttgcagac cataaaagac aacacaccgc ccttgaagaa aggctcaaaa    240

 

atgctatttc gcacactaag ggacagaggc attgtttcgt acctcggcc                289

 

 <210>  146

<211>  194

<212>  DNA

<213>  S008(2)-F10

<400>  146

gcttccgcgc aaatcgcaac gataagtgcg aatagaatgc aaaagcgcat tttgtcgaag     60

 

atatgtattt agtttttttt ttgatgacac gacacttgtg ttctgttcgg taagaagtcc    120

 

gaatttctac tgcatttctt ttacaggact gaccagcgct tttatactgc cccatgtacc    180

 

tcggccgcga ccac                                                      194

 

 <210>  147

<211>  219

<212>  DNA

<213>  S008(2)-F12

<400>  147

ggcaactaac aacacactac atacgctcag atagcggact gcgcacaaca ttcagataaa     60

 

taccgccttc ggcctgtatc actaccgcct tgcgatccag ctgcatggga atcttggtgc    120

 

gagcacaagt cgtcactttg tggttaagta gaaaatagtg cgtataatgt tgccgatagc    180

 

tgctacttac ctcttggcgg ctctcttggt acctcggcc                           219

 

<210>  148

<211>  519

<212>  DNA

<213>  S008(2)-G1

<400>  148

acatgagtcc ttcccacctt gaggcacacc agcacatagc atgcgttccg ttatgacacc     60

 

ataaggcgca tactcagttg cacatacaat gggatccacc acattcacag tgactgcttg    120

 

caatgtgggg gataatgatc caccctcact ggtgctgccc caaccggtga caacagcagc    180

 

tgtgccatcc gccggactta tgctggacat acgtatcggt tgcgtcgagc tactgaacgg    240

 

tatttgattt cgtagcttaa tcaaggcaat gtcatagtcg gaggtgagtg ggttgtagtt    300

 

ctcatgtcgt accagtcgaa ctacaagctc cacggttggt tgggaaagct gtgaacgctt    360

 

cactagagcc acttctcgag cttcagcccc cggcaacaac atgctaaatg ccgcaattaa    420

 

aagaggcaac gcgacacaaa ttatgaaaat tttcttcagt gtggccattc ttagtggaga    480

 

tagaagtgtg aaaataaaac tgtgccccca tgtacctcg                           519

 

<210>  149

<211>  558

<212>  DNA

<213>  S008(3)-B10

<400>  149

aatgggtgag gaaccaacaa cagtccgact aatgaggaac aaatataccg gtgagccggc     60

 

tggttactgc tttgttaatt ttgcgactga cgaaagtgca atggatgcta tgcataaact    120

 

aaacggcaaa cccattcctg gaactaatcc gattgttcgt tttcgattaa atagcgcaag    180

 

taattcatat aaacttcctg gaaacgagcg agaattcagt gtatgggttg gagatttaag    240

 

ctcagatgtc gatgattatc aactttataa ggtgttttca acaaaatata cttctataaa    300

 

aactgccaaa gtaattctgg atagttctgg gttttcgaaa ggctacgggt tcgtacatgg    360

 

gggaaaacgt gcaaggaata gcagacattt tgatttaatt ttttttgttt ttcgtatcgg    420

 

tatttagttg ctaaattcat atgtaatttt tcgcgttttg aaattacgta tattttgttt    480

 

ttacattaag tactctgcgt tgataccact gcttacatgg gacccgagga ggttagggaa    540

 

atgcccgaag aggtgcgt                                                  558

 

<210>  150

<211>  243

<212>  DNA

<213>  S008(3)-C11

<400>  150

agtgaaaatt aacaaattta tctttaattg ggcgtattgt gttaattgat tttactaaat     60

 

aaataagttc tttattagaa atgattggtg gattatttgt atataaccac aagggagagg    120

 

tattaattag ccgtgtgtat cgagatgata ttggtcgtaa tgcagttgat gcttttcgtg    180

 

tcaacgtcat ccatgcaagg cagcaagttc gttccccggt aacaaatatc gcacgtacct    240

 

cgg                                                                  243

 

<210>  151

<211>  470

<212>  DNA

<213>  S008(3)-D10

<400>  151

aacgagccaa acgttggcat tctccaagat ggattggtaa gatggggtgt tcttgccgat     60

 

cttcaagacg caacgccact tggcgaagtc gcaaccgtcc ttcttgtatt gggcgcaacg    120

 

ggcagccaaa tcatccaaac cctgagtggt gcactcgtct tcggagccga acaatggcac    180

 

gacaccctta tcgaccttaa tgccggggat gatgccgcgc ttcttcaaca gctcaacgaa    240

 

tggggtgtca tcatcagcct tctggtacgc atgcccacat gcgccctgcc atacatccac    300

 

tctattttgc aggagcatat aggaagtatt gttcaatttg gaccaaaata caatgaactg    360

 

agttgtgctg gtttgaaagg tttcgaaaca tttattaatt aaactgcaag tgttggaaaa    420

 

ggcaaaaggc cacagagaga gcagagcatt aaagcgaaaa gtacctcggc               470

 

<210>  152

<211>  405

<212>  DNA

<213>  S008(5)-B12

<400>  152

ggtttagtcg tttcttttga actatcccca tgtacgctcg ggctgtccat tgggtttcat     60

 

caagataact ggcacattac ttgggctcgg aacaaaggac ggttctagag cgtgattaat    120

 

ttgtgacaag tgatacagct tctcaatctt tcgctaggca tcttctactg acatgttctc    180

 

caactgttgc aaagtgatat cctcgactga tggcatcgat tctaattcag aggccgataa    240

 

ccaatccaca ggttttaagc tattcatgtt gtccttgttc ttgccatgct tgggtgaagc    300

 

attagcaatg gctaatacga aagccataaa gcagaaaatc tttagaggat tcatactgat    360

 

cacgtttgca aatcggtttg aactgtcccc atgtacctcg gccgc                    405

 

 <210>  153

<211>  355

<212>  DNA

<213>  S008(5)-B8

<400>  153

tacatgtttt ttgccttcaa aatcgatacg atgcagattc tgtattaaaa gcaacaataa     60

 

attactatta tacagttcct gcgacagctg ggcgactaca taatccgctg gtggctccga    120

 

atcactgcta ccgtaaagca tatttttaat ggagacaaga tttttgctga catcttcttg    180

 

tgctttttct gctttacgat caccacccgt ttctagtgca ttgattgctt ccttaagcga    240

 

ccgcaccaat tcagcggggg tcttttgtga ttttccaaac aagggcatta cgttggcact    300

 

ttactttatt cacacccggt ttaccgcaca cctatttttt cgtacctcgg ccgcg         355

 

<210>  154

<211>  170

<212>  DNA

<213>  S008(5)-C7

 <400>  154

gttatcacgt attgagttgc ctctagcgca cactgttgtt gctgtagcca acacggccac     60

 

caaacaaaaa atacttaaag gactcatggc tcttcgttac cgtttatgtc gtatgccggg    120

 

agcagtcgaa ttgaactgtg gtccccatgt acctcggccg cgaccacaaa               170

 

 <210>  155

<211>  321

<212>  DNA

<213>  S008(5)-E5

 <400>  155

tttgtcagaa gctgatgatc tctatactta ctacaataac tctgtaaaaa atctgaagtc     60

 

acgtgataca gaagtggtaa gtaagaaagt ggatgacttt gttgagatcc tcaaaatact    120

 

gaaacgcaaa gttgattctt ccgatattag attgtcacct gaagacttca ccacagttga    180

 

actggtagca ggtcgtatta atgagctggt ctctatagcc ggtcgtttaa tagcaatgct    240

 

gaatgatctt gccagacatc tcgagttgca gattcaggca ttccgcgatt acgcaaaaaa    300

 

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa a                                              321

 

<210>  156

<211>  399

<212>  DNA

<213>  S008(5)-G11

<400>  156

attgtgcaat cagctgcatt cagagatggc ggtcgatttc cggtgctcag ctatcagcat     60

 

gaaaatgggg ctacgctaat gcgcagctca cagcccgtct ccatacaagg tattaaacgt    120

 

tgtcgtgctg acgaagcgat actgaacgtt gtgctgggac gcagtaaaaa ggggtttatc    180

 

gttgacactt ggggaaaggg taaatcaaac accgaaaccg atcaacatta ctcacagtgg    240

 

aagaaagtga atcgggctat tggcaatgtg tcggcgcctt cagcaatttt agatagttac    300

 

accaaactta ttgaagcatg caatgatatt acatgttccg cggacaaatg gttgtcacgc    360

 

ctagaagcaa gcggctggtt aagtctcgta cctcggccg                           399

 

<210>  157

<211>  427

<212>  DNA

<213>  S008(5)-H2

 <400>  157

aatcttcaga gccaatcctt atcccgaagt tacggatcta atttgccgac ttcccttacc     60

 

tacattattc tatcgactag agactcttca ccttggagac cagctgcgga tattggtacg    120

 

gcctgttgag aagtttgcgt aaccccacca taaattttca aggtccgagg agaaaatatc    180

 

gacacaacag taaatgtcat gctcttctag tccatctacc atatctctct tcgaaagact    240

 

tccatggtag tacgactata aaacagaaaa gaaaactctt ccgatacctc tcgacggctt    300

 

ctttatggtc gttcctgttg ccaggatgag cacaaggccc atttttaata acaaacggat    360

 

actcaacagg ttacggaatt ggaaccgtat tccctttcgt tcaaaattat tccccatgta    420

 

cctcggc                                                              427

 

<210>  158

<211>  480

<212>  DNA

<213>  S008(6)-14

 <400>  158

tttgcgattg ggcgaaaccg atgaggcggc cctgaaagat cgtgtagatg aagacgcgga     60

 

tgattggcgt ctgtcgcgac agttgcgcgc tatgaaatcg aaggcggttt tggataaact    120

 

cacctttttg cgcggttgtg atgagaagga tgtggaggag ctcgtgccgg gcaagctttg    180

 

cactttctgc aatatcggct ttcaaaacac cgaaacactg tggactcaca tggtgagcgc    240

 

gcatttacca ccggcacgta aactgcaacg gaacagttat ataacgaccg atactttgca    300

 

ctcggaatcc acaatggata cagtctgttc gagtggtaga cgtagctact tatcacacga    360

 

tacggaaacg gaatcacaaa ccgtttccga gccgtctaac ttgagacgca gtcgtcgtcg    420

 

cggcattttt cggaatagac aacgcgtgcg tccaaaaaac caggtggtac ctcggccgcg    480

 

<210>  159

<211>  482

<212>  DNA

<213>  S008(6)-29

<400>  159

tagcactatg cgtatgctgg ccaacgacag taaccacatg tcgcaggagt gccacaaaac     60

 

acctcccaat gacgtgctgc atactttgaa cagcaacgca gttggcaatg ccgcaggtgg    120

 

cgtagctgtt aactgcaatc atacggaagc tgtcaatgct gatatggacg gggaaatggc    180

 

caacaatgtg tcggacggct ttgctgcagc tggtggtctt ttctgctttc ggaatgtaat    240

 

catacaagat aatcactttc agcggacacg tcaggtatat gtgaatgagg gcaatgtaaa    300

 

attgcaattt caagacttta accaagaagg tgaccccatc acgcagatct ggcagaaata    360

 

tttggaaatg caaaaatatg cgctacaaaa gccgaccgcg cctcatagtg caacgcaagt    420

 

ggcaaatgct gtgcctattg ttgtatccac cgaagagcta caaacgatgc aaggtacctc    480

 

gg                                                                   482

 

<210>  160

<211>  322

<212>  DNA

<213>  S008(6)-42

<400>  160

gacaggtgtt ggtgcacaag ttgccggtgc tgctggacgt caatacaaac gttcgacagg     60

 

ccatcaattg cgtcgtatca cagctttgga ccctgcaaaa ttgttcgcta aggacaagga    120

 

tatgttaact ggtttggctc gtggtgatgc tgatttcgtt gatgccattc atacttcgac    180

 

ttgtggaatg ggaacacgcc aacgagttgg tgatgtcgac ttctatgtca acggtccagc    240

 

ttccgctgct ccaggcgcta ccaatgtaat tgaagcaact atgcgtgcaa ctcgttactt    300

 

cgccgaatct gtacctcggc cc                                             322

 

<210>  161

<211>  167

<212>  DNA

<213>  S008(6)-58

<400>  161

atcgtcctac cagcagttac agcggaagat tcagccgaac attcagtttt agtgaagagg     60

 

ggtatcaatc ttgctaaagt ggtgaaagta gtcaaaccag tagtaaaggc actggcacct    120

 

ttattagcaa acatctaaat ccgaaacaac cgaagcgtac ctcggcc                  167

 

<210>  162

<211>  216

<212>  DNA

<213>  S008(6)-64

<400>  162

aagagaaggt cggcggctgg tggaaggagg gttgcgccaa gagtaagtta aacggtatgt     60

 

atgcgcctac aaaatgggag gaaaaacagc aagatggtat tatatgggat aataagaccg    120

 

ttgtgggcat gaattactcg ctgtcgtatg tgcatatggc gatacgacca aaatattgct    180

 

acaaaattaa aacggaattg tgaaatagta cctcgg                              216

 

 <210>  163

<211>  339

<212>  DNA

<213>  S008(6)-77

<400>  163

atcaagataa ctggcacatt acttgggctc ggaacaaagg acggttctag agcgtgatta     60

 

atttgtgaca agtgatacag cttctcaatc tttcgctggg catcttctac tgacatgttc    120

 

tccaactgtt gcaaagtgat atcctcgact gatggcatcg attctaattc agaggccgat    180

 

aaccaatcca caggttttaa gctattcatg ttgtccttgt tcttgccatg cttgggtgaa    240

 

gcattggcaa tggctaatac gaaagccata aagcagaaaa tctttagagg attcatactg    300

 

atcacgtttg caaatcggtt tgaactgtcc ccatgtacc                           339

 

<210>  164

<211>  387

<212>  DNA

<213>  S008(6)-85

<400>  164

agagctttac cgatcatgtt accggtttgt tctacatcaa taagagccaa acgtttcatg     60

 

ttggtgaggg tggagcccaa gctgatgacc acaaggttgc cctttgtggg tttggggttc    120

 

ttccacgatt cactgtagtc ttcttcactt gaagtggcgc cttgattgtc cttattgttg    180

 

ccataatcat agtcctggtt attgctgatt ggttgacgct gtccattgta gcgctgcata    240

 

taagcctgga tcaatttttt gtttgccttt gcaacagaag gggacgactg tggcaaacca    300

 

gtaatgaaaa tggtgacttc ctcatcgcca aagttgggtt gttgtttggc agtttggacg    360

 

agttcattga gattggtacc tcggccg                                        387

 

<210>  165

<211>  584

<212>  DNA

<213>  S008(6)-93

<400>  165

ttaacaaatc aaaaatatca aaatgaaatt cgtcatcgcc gctgtctgca ctttggctct     60

 

cgccatgagt gctcaatcct caatcattcc cggtctgctg cccggtctta cacaaatcgc    120

 

cggacacagt ctctcctata ccgccgtctc tggaccattg gccgttcccg ttcccatttc    180

 

cgtcgctcac gctccagctg ctgtaatcgc tgccgcctca ccaccaattg ccattgtttc    240

 

tcatgctgct gctattgccg caccctctgt cgctgtgcat gcacccgctg tggcggccgt    300

 

tgctcatggc ggtgtcgtag ccggtggtgc ttatgttgcc aagacccgtg gtgctgtgca    360

 

ttcggctcca ttgcccggac acatcgcctc agtggccaat gtgaatgttg ctcccgcacc    420

 

aggcacctgg taaattcagc caatctagct gcacatccgt ctaaatcaat tcttccccca    480

 

atggtgacat ggctaactct ttaaggacct gcaagaaaat tataaatgtg tggctgaggc    540

 

gcacattagt cgataaagtt aagtaggcgc aaatttgtac ctcg                     584

 

<210>  166

<211>  646

<212>  DNA

<213>  S008(7)-130

<400>  166

gtcgcacaag gtattggcgc tcatgtggcc ggtgctgctg ctcgccaata cacacgtcaa     60

 

acaggaaaca agttgcgtcg tatcactgcc atggatccct caaaaatctt tgcacgcaaa    120

 

cccaacactt tggtcggctt ggctcgcggc aatgctgatt tcgttgatgc catccacact    180

 

tctgcttatg gcttgggtag cgctgctcgt gccggtgatg ttgacttcta tcccaacggt    240

 

ccttctgttg ccatgcccgg cactgataac attatcgaag cttccttacg tgcaacacgt    300

 

tacttcgccg agacggtgcg tccaggtaat gatcgcaact tcccagctgt cgcagccgaa    360

 

tccttacaac agtataaaaa caacaatggc aatggcagac gcgcttatat gggtattgcc    420

 

gctgactacg atttggaagg tgactacatt ctgcaagtga acgctaaaag tccattcgga    480

 

aagagcgcac ccgccaagaa acaaaattcc taccatggca tacatcagac ctccggccgc    540

 

tcctcttcga acaactaaag tgcagttgaa ggcggaaaag taaatagcag agctttaaat    600

 

atatttcgta tttaatttcc cttgcaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaa                   646

 

<210>  167

<211>  550

<212>  DNA

<213>  S008(7)-135

<400>  167

cacactcagt tctggcgtta tttcgcaggt aacttggcct ccggtggtgc tgctggtgcc     60

 

acttctttgt gcttcgtcta ccccttggac cttgcccgta ccaatctcaa tgaactcgtc    120

 

caaactgcca aacaacaacc caactttggc gatgaggaag tcaccatttt cattactggt    180

 

ttgccacagt cgtccccttc tgttgcaaag gcaaacaaaa aattgatcca ggcttatatg    240

 

cagcgctaca atggacagcg tcaaccaatc agcaataacc aggactatga ttatggcaac    300

 

aataaggaca atcaaggcgc cacttcaagt gaagaagact acagtgaatc gtggaagaac    360

 

cccaaaccca caaagggcaa ccttgtggtc atcagcttgg gctccaccct caccaacatg    420

 

aaacgtttgg ctcttattga tgtagaacaa accggtaaca tgatcggtaa agctctcgtc    480

 

gaactgacca acgaatgtga tgtacttgac cgtttggact aattttccgt tctccccatg    540

 

tacctcggcc                                                           550

  

<210>  168

<211>  721

<212>  DNA

<213>  S008(8)-276

<400>  168

gttggtgaac tacaaacatt tacctctcgc actaccaata aggaattcaa aaaacgcgaa     60

 

ctgacactgg ttgactccag caatgctgct gtgaatttaa cattatgggg cgaagatgct    120

 

gttaacttcg atggctatgt gcaaccagtg attttagtaa aaggtgcacg cgtgactgaa    180

 

tttaatggcg gtaaaagtat aagcatgggc aatggctcgg ttatgaaaat aaacccagac    240

 

ataccggtgg ttatagcacg gagtggttaa cgtttcacga ggcacgcagc cgaaatttgg    300

 

gctctggcga caaaccagac tatttccaat gcaaagctgt tgtgcatata gtaaaatgtc    360

 

agaatgcctt ctacaaggct tgtccgcaag cggaatgcaa caaaaaggtt atcgacgaga    420

 

ataacggaca ttatcgttgc gagcgttgta atgccgtctt cccaaacttc aaatacaggc    480

 

tactaattaa tatgagcatt ggcgattgga catcaaatcg ttgggttact tgcttcagcg    540

 

aagtggctga acaactgttg aagcgttcgt cgcaggaaat cggtgattta ctcgaaaaca    600

 

atcccccaga aggtgaagaa gtgctctcct ctatcaactt caattcgtat atatttaaat    660

 

tgcgcagcaa agtggaacag tttggtgata tgcaacgtaa taagctgaca gtacctcggc    720

 

c                                                                    721

 

<210>  169

<211>  229

<212>  DNA

<213>  S003(1)-A10

<400>  169

gtgccaagct tgccacacaa tacctttggc aaactgatct tttggaaatt ctcctcctat     60

 

atataaaccg ttaagattgc tgctttgaca tttccaatac cacccagctc ctgtatattg    120

 

tacctcggcc gcgaccacgc ttgacgatgg aggcaatcat gtcggtggtg aagctagcac    180

 

aaatctcttt gacttcagtt acgacccatg tacctcggcc gcgaccacg                229

 

<210>  170

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<212>  DNA

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taacagcagt tctcgttcta caaataattt aacgatctac aaaatggcca gccaagagga     60

 

atttgataaa gccgctgaga atgtaaagaa tctaaactct acaccatccg ataatgattt    120

 

attggaactt tacagtttat ttaaacaggc tactgtagga gattgcaata cagataagcc    180

 

tggtttcttg ggcttcaagg gcaaagctaa gtgggaagca tggaacactc gcaaaggtac    240

 

tgatgttttt gcacgtgaaa cttcttttct taagcgaaat ataaaacgtc atccatttag    300

 

accatgttat gtagctgcta tggataaacg agctatagaa gaaacatgca attggatttt    360

 

tgaaggtcat gaagaacctg aagcgtctat catagcttgt gaatcaatgt tacttaatgc    420

 

atttggtcat ggtccagaat attataatca tcttagaaat aaagtagttg tattctggcg    480

 

tcaattaaat atttatccta gaattccttt atggatagaa gtagattgga gaatctacga    540

 

aggtacctcg gcc                                                       553

 

<210>  171

<211>  362

<212>  DNA

<213>  S003(1)-D7

<400>  171

atccgatacc gcttacaacc attaatcttt gattaaaatg ttgaataaac ttaccgatca     60

 

atattcgatc ttcattctac gcgatgttgg tgatggtaaa acttgctttg cctatcaggc    120

 

taagatagat aatttaacca tctgtctctt cacaagtcaa ttgggttgtt gccacccttt    180

 

ttgtaagacc atatacaagg aaagaggagc atttaatgat agaacttatg ttacggataa    240

 

attactcaaa gctttcttta tggcacttga cttatatctg atgcatgatt gtctcttcaa    300

 

acgtgatgtc cttacaattt accagccgcg ttctggtgag atcaattata tgtacctcgg    360

 

cc                                                                   362

 

<210>  172

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<212>  DNA

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aatttacact ctgatacttc cactcaaact gaaacaaatc attggtatag attaccattg     60

 

cacataagga taagaattgt gcagctagcc gatatcaact gtgaaagcaa atatgagctt    120

 

ttacgtttca attttgactg tttggcatcc ctatggaacc atgatcaaat ggctaatcgt    180

 

tgttgtggaa tgttctatct ccaagcacca aatgagatag aagtcgctaa tatgcacgac    240

 

gttcgtttac actctacaca accaggaaga aaagaaccat gtttgtgttc atcattattc    300

 

tggtatgata gcgcgctgat gcaatcagct attgatctgt ttcatagtat taaacagtgt    360

 

gaagttgtcg atgaggagta ttatattgtg ttggattgat attctctccc atgtacctcg    420

 

gccgcgacca cgcta                                                     435

 

<210>  173

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<212>  DNA

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cagagaagtg ctttcataca aattagggtg tttctggatt ttgaactaaa ttttcattaa     60

 

atatgagttt ggcgggtaaa aatgttgtgt tcgttggtgg cttgggcttc attggttatg    120

 

aagcttgcaa agcgttgatg accagagatt tggcggtaag acggaagaga atttccaaat    180

 

taaaaatacg caaaaaaaaa aaaaaaaaaa a                                   211

 

<210>  174

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<212>  DNA

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<400>  174

ttttcttaag cgaaatataa aacgtcatcc atttagacca tgttatgtag ctgctatgga     60

 

taaacgagct atagaagaaa catgcaattg gatttttgaa ggtcacgaag aacctgaagc    120

 

gtctatcata gcttgtgaat caatgttact taatgcattt ggtcatggtc cagaatatta    180

 

taatcatctt agaaataaag tagttgtatt ctggcgtcaa ttaaatattt atcctagaat    240

 

tcctttatgg atagaagtag attggagaat ctacgaaggt accagttcta tttgctggac    300

 

gtgatcgctt tggtcgtagc cgccgtcgct gttgcccttg gagtgcttgt tctgttggta    360

 

cctcggccgc gaccacgcta                                                380

 

<210>  175

<211>  482

<212>  DNA

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<400>  175

atacctactg gcagtgtgta atcgtaatat ggtttaaggt cgaatggctt ttccccctct     60

 

ttcggccgat gttcgcgatc aaggaaaggt attaatgggt ataaacgcat tacttcgtcc    120

 

actaccatac ccagatatgg tagattattg atagtctcat atgacatttt accctgttca    180

 

gctacaaaag cttcacatat ctcattgcgc agacgttctt gtaaatcggg tcgtttggat    240

 

aattcgtata gcgtaaatgt catcaacgaa tatgacgact caaaaccagc tgagaaaaac    300

 

acagcagctt gtgctgtcaa aacatcctgt agatgggcat tatactcgcc tttcgcaaca    360

 

gcctctcctt tgaggctcac caacacatcg atcagatcgt tacgcgttgc tttgctctcc    420

 

tctcttgacg ccatcacatg attgatggtg ccacgtaaaa aggtacctcg gccgcgacca    480

 

cg                                                                   482

 

<210>  176

<211>  465

<212>  DNA

<213>  S003(1)-F9

<400>  176

tccgataccg ctaacaacca ttaatctttg attaaaatgt tgaataaact taccgatcag     60

 

tattcgatct tcattctacg cgatgttggt gatggtaaaa cttgctttgc ctatcaggct    120

 

aagatagata atttaaccat ctgtctcttc acaagtcaat tgggttgttg ccaccctttt    180

 

tgtaagacca tatacaagga aagaggagta tttaatgata gaacttatgt tacggataaa    240

 

ttacttaaag ctttctttat ggcacttgac ttatatctga tgcatgattg tctcttcaaa    300

 

cgtgatgtcc ttacaattta ccagccgcgt tttggtgaga tcaattatat gcacggaaaa    360

 

tacctacgac ggttatactt cacaaagatg actaatactg gccctggaaa agctagattt    420

 

actgcatttg aagtagctcc tatggtacct cggccgcgac cacgc                    465

 

<210>  177

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<400>  177

acccatacct gcaacggcta ccaaacgact ttctcacaaa attccaccac cccgatagac     60

 

gctataaaaa acaacttttc cttggcctat atttcgatgt aatctacgag cgtatacgta    120

 

aaacattgca cacgaagtct gctcctttct tacataaagc caacttcgtg gacgatttct    180

 

tcataagcca tgcgcaattg caagcagtga agaaattaag ttggaatttt tttgtagcac    240

 

atgatgacct tgatgcatgg accgaactca agcggaacat attagcacat cgaaatacca    300

 

gcaaagctga tctggacatt tatgttggca gtcatggcac gcaggtgtta aatggcccta    360

 

atggtgaaca aatgaagctc tacctacatc cagaattggg agagtatggg aaattccccg    420

 

tgccagaact cttgtggatc gttgtgaagg aggaagataa atcaacggct tttggtgtgt    480

 

acctcggccg cgaccac                                                   497

 

<210>  178

<211>  403

<212>  DNA

<213>  S003(2)-C6

<400>  178

tcgtaggttc agctgtgcag tagcaaaagg cttcagagga ttcggttaat gtgcgttcat     60

 

agcttcaaag aagttttctg cttttccagt ttgattgagt ttataatttg taataatttt    120

 

ctaaatattt ttttatagtt taaagaaaaa tttagcgcaa attaagagaa atcgtaattc    180

 

gataatttgg atttaaggta agaatatgct gaaataaaag ccataattta tgaaaaataa    240

 

aacaagagta aaaaaatgct tgttgttgga gtgcaacgct atcttgcaga ccttaaaaat    300

 

cataattaat aaagagttag ttcttaaaaa aaaaaatatt ttagcattca agcagacagt    360

 

gtttaatgat gtaatattac caaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaa                      403

 

<210>  179

<211>  451

<212>  DNA

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<400>  179

atacgcgcaa tacccacagc gcggaagaga ttgatggcca gaccaggggt tgggtcgatc     60

 

agcacgtaga ggaagccaat gatgaagaat ggcaaaatgt tttccagatc attgcgatga    120

 

gctctgcgca cgcgttcaac atcgggatta tcgaatttca ctttaaggcg tttgtccatc    180

 

aaatcctcgg ggttggcgaa ggtctttgtc cggaagcgtt gaattgccgt cagcaatgac    240

 

atgaacaaaa gttttagaac caaaactgcc gaccagaaga cataggcact gaatacttca    300

 

ttatcaaacg atatcaaatc ttttgccgcc attttacttt gactaaatga acttctttaa    360

 

ttttctagaa aaatataaaa atgtctacga ccggtaaaat ttactgatct atcgcctcag    420

 

aaatcaactg tccaactccc catgtacctc g                                   451

 

<210>  180

<211>  662

<212>  DNA

<213>  S003(2)-D5

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gaaactgtca gtcacacccc tgagcgtgaa aaatgtgtgc gacaacgaaa caccaccagc    120

 

gcacaaatgc acacttctgc gttgctgacg gtgggtgaac agacagacac ccaaagaatt    180

 

cttcaaatat ttgtaaaccg ttttaggaaa ttcgacgact tttacacagc caattttttt    240

 

gggcgcagct taaggcgact atatacgtaa agactcgatg acaaatgccc taaaaagtct    300

 

cgagttccga attcgtcacc ttcagcacta tgcaagtatc cccaaaattc actcttatgc    360

 

aaaacgtgca aaagttttgc atttatcttc gtcgccacaa aaaactagtt tacacaacac    420

 

acgccttcat taatttcaga attatcgtct tagttcactt taatctcgac attttcttac    480

 

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tcggttcgtt tgattgaaac gcttacaaat gtcgacgacg acagtctccc atgtacctcg    660

 

gg                                                                   662

 

<210>  181

<211>  719

<212>  DNA

<213>  S003(2)-E7

<400>  181

gcttcacaat ctcattgcgc agacgttctt gtaaatcggg tcgtttggat aattcgtata     60

 

gtgtaaatgt catcaacgaa gatgacgact caaaaccagc tgagaaaaac acagcagctt    120

 

gtgctgtcaa aacatcctgt agatgggcat tatactcgcc tttcgcaaca gcctctcctt    180

 

tgaggctcac caacacatcg atcagatcgt tacgcgttgc tttactctcc tctcttgacg    240

 

ccatcacatg attgatggtg ccacgtaaaa aggtacagac tttatgaaac cagtgataca    300

 

tatcgtcgag gaacttctca acaacacaac actgcaggta ggtgtctact ccgggcaatt    360

 

ggacttgatt tgtgccactc caggcacggt taactggatt gagaaaatgc aatggaataa    420

 

taagtcttca tacgaggcgg caccacgcgt tggcatcagt gttaatcgca ttttggaggg    480

 

ctatgagaag accgctggca atttcactat gttctggatc gatcgcgctg gacatatggt    540

 

gcctgcagat aatccagctg gcatgggcca tattttaagg aaatatacca actttggttg    600

 

agagtaaact tcaaatacat atttgaaatg caatcaatat caaatcattg cataagaaat    660

 

cattaataaa ccttttgtta ttacaaaatc tataaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaa     719

 

<210>  182

<211>  489

<212>  DNA

<213>  S003(2)-F3

<400>  182

aacgaagatg acgactcaaa accagctgag aaaaacacag cagcttgtgc tgtcaaaaca     60

 

tcctgtagat gggcattata ctcgcctttc gcaacagcct ctcctttgag gctcaccaac    120

 

acatcgatca gatcgttacg cgttgctttg ctctcctctc ttgacgccat cacatgattg    180

 

atggtgccac gtaaaaaggt actgaactct ggtgtaaaaa gtgtaatacg caatgtagag    240

 

gcccacttgg aaaagaaaaa accgacgaag aagtcaatgg cacgacggaa tgtagcggtg    300

 

aacaattttc gtccttgagt gcgaaattcg ccgtttggat tactaagact gttggctttc    360

 

acaccaaaag cgatggaggc aatcatgtcg gtggtgaagc tagcacaaat ctctttggct    420

 

tcagttacga aagcgtcgtc cgttttcgca tacgagttca aatgggcttc caaatccgta    480

 

cctcggccg                                                            489

 

<210>  183

<211>  306

<212>  DNA

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<400>  183

acacaaattg ctgacctatg cgctggtggt cttggtgctg ctgcaagttc tgatcgaccc     60

 

caccgaagcg gcgacgaagt gtcacaaatg caccggaatt aattgtcaac gcacgactta    120

 

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tatggtccta gcacaaggct gccttggtca attagccgta gagttacgta acaaatgtga    240

 

aatgccaagc gctgaggaga ccgacagaac tgaaatgacc gatgctgatg acgccgtacc    300

 

tcggcc                                                               306

 

<210>  184

<211>  223

<212>  DNA

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<400>  184

aaatttggac ctgtaactag tccgttgagt ttacgtttta ctccaacacc acgcacaccc     60

 

gtctgttatg gaatgattgg tctttcagat cacttcattc ggctatatgt tgcctttgaa    120

 

gatccacagg acggatctga ctacacctct gaagactttg ggtgtaatgt ccagttaagt    180

 

ggaagcgtta cgctgtgttg tcgtacctcg gccgcgacca cgc                      223

 

<210>  185

<211>  671

<212>  DNA

<213>  S003(3)-H10

<400>  185

gacacgctac tgttaaacag ttaaaccatg ccgttacgct atataggaag aacacaagga     60

 

ttcgcgtcaa tgactcatga cgagatattt ccaagtaaat tcgttttacc atttctggat    120

 

catattcctg ctaaaagacg ttcacccgtt acgcaaagcc ttattatcga cgatttaaaa    180

 

caatttaata ataccactaa aaggcccaat gatccattac ttgatttatc aatcgctcat    240

 

gctacgcgaa agtttctgtt gcccaatgca gttaaaatgt tacaccttaa tgatgtcttt    300

 

aaaagagaaa gtgacatctg gagtaaaagt cctggtcttc cgtggactcg atatggcgtt    360

 

aaaactaaga gacaaattcg tgatgaccca gacaaaatac aggaagtgag aaaattttgg    420

 

cattttgtga aagctggtga tgacataagc ttccccgatt gttgcgcttt cgtccgtgct    480

 

catgtttgtg gacttgatga gcataaagtt cgtgctgttt ggggatatcc agctactatc    540

 

acatttggag aggccgtatt cgctattcct ctcattgaag gataccaggc cctttcaccc    600

 

gatttgactc ctattgctta tggattggag actgcaactg gtggagccca gaagattcgc    660

 

aaccgattca g                                                         671

 

<210>  186

<211>  231

<212>  DNA

<213>  S003(4)-A8

<400>  186

tgcttaccat gtactctgcg ttgataccac tgcttcccat gtactctgcg ttgataccac     60

 

tgctttccat gtactctgcg ttgataccgc tgcttaccat gtactctgcg ttgataccac    120

 

tgcttcccat gtactctgcg ttgataccac tgcttaccat gtactctgcg ttgataccac    180

 

tgcttaccat gtactctgcg ttgataccac tgcttcccat gtacctcggc c             231

 

 <210>  187

<211>  444

<212>  DNA

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 <400>  187

taccggcgaa ttgatcctga agtgcaccgg ccccagcgaa gccgtgatga tgatgtagag     60

 

cttagctcta ttaatggttc agagagagat taagttgaat atctctaaac agcaatatga    120

 

aggaaaacat caatgaataa aaccctcagt agatgagtaa aatatgaagg aaaacatcaa    180

 

tgaataaaac cctcagtata tgagtaatta aattgaatga aggaaaacat caaaataaaa    240

 

ccccatgatt ggtaatcatc aatatgaacc atccctttca cggtaaggga actatgttgg    300

 

gcttagtttc agttcaacct atccaataac cgaaggaaaa cgaacttaac ctgttgatta    360

 

cgtaaaatca ctgtcgaagg aaaacgttat aacccggaat gtccgttaat atcgaaggaa    420

 

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaa                                           444

 

 <210>  188

<211>  253

<212>  DNA

<213>  S003(4)-C12

<400>  188

gatgacgaaa ggtacttcgt gtatgccaca aattgattgc tctctagtca aaacaccaat     60

 

tttacttctt atgggtttaa ctctagctaa aacttgttgt tttacatcgt cttgcaccac    120

 

ttctagtaaa tctgttttaa acgataatgg cggatcggta tggtgtaaac agccattcac    180

 

cattggtgag ccctcaaatc gactatcacg atgtgatata tgaggaaagt cgtacctcgg    240

 

ccgcgaccac gct                                                       253

 

 <210>  189

<211>  347

<212>  DNA

<213>  S003(4)-F1

<400>  189

tgagaacgaa aataacgccg attttcacat caggaaagat caaacaaatg tattcattaa     60

 

tgactgagat cggcacggag ttggaagccc atttgaattc gtttgcgaaa acagacgacg    120

 

ctttcgtaac tgaagttaaa gagatttgtg caaacttcac caccgatgtg attgccacca    180

 

ccgcctttgg cattaaagcc aatagtctta tagatccgaa tgccgagttt cgtgcgctag    240

 

gccgaaaaca gctagacttt acattaggac gcgctattca attccttatc gcattcttct    300

 

atccgaaatg gaccacagca ttgcgtgtga aaattttggt acctcgg                  347

 

<210>  190

<211>  210

<212>  DNA

<213>  S003(4)-G6

<400>  190

ccaaatctat ccgcgttcat ttcgtgacag tgatggtgac ggtattggtg atttaaatgg     60

 

tgtcactgag aaattgcaat atctgaagga tatcggtttc acagcggctt ggctgtcgcc    120

 

gatcttcaaa tcaccgatgg ccgatttcgg ttatgacatc tccgatttct atcaaattca    180

 

cccagaatat ggtacctcgg ccgcgaccac                                     210

 

<210>  191

<211>  545

<212>  DNA

<213>  S003(5)-B11

<400>  191

caattatggc cattgagcta agcacttttg gttctcgggc agacggcact ttacaacgct     60

 

ggtaatctaa caaaaccgca tcgagtagtg gcggaataaa gttatccata accaattgat    120

 

tgtcattaga acgcgatacc cactccgaaa ttaaattcaa agtctctttt tttacaacat    180

 

tcattgattt tataagcggt tgattattta caacgacacc gtttacctca atcgcctgaa    240

 

ttatgttctc agatgttatt ttatagacat taagcatatc caaatatatg cgtcccaact    300

 

gaattacata ggcatgccct aaagccttac atgcggctac attcgtcttc aaaatgctac    360

 

ccagctgctt tacagctgtc atatttttga gaaagtcaac attcttggag gcacgtgaga    420

 

ttatatcatc ccaaacctgg tttggcgaga acatatactt ctcaattaag gcgtcctgct    480

 

gtacttgatc aatctgtgcg gatatcatgt agcccactgc ttcgtagaac gtatgtacct    540

 

cggcc                                                                545

 

<210>  192

<211>  116

<212>  DNA

<213>  S003(5)-B2

<400>  192

atattgtggt ggggatttaa attgcttgaa atttcaatta attgtctaaa tactgagcta     60

 

gccgtagcta aattaactca ccttagggtc acgatgtacc tcggccgcga ccacgc        116

 

<210>  193

<211>  702

<212>  DNA

<213>  S003(5)-B8

<400>  193

gcgcgtgcgc atgatgaacg agattgtctc gggcatacag gtgatcaaga tgtatgcgtg     60

 

ggagaaacct ttcggcaaga tgatacagtt tgtacgtcga aaggaaatgt cagccatacg    120

 

ctacaataac tatatacgcg gcatcttgca atcgttcgcg atgtatatga cccgcgtatc    180

 

tgttttcgtc agcttagtcg gctatgtgct gttgggtaac tttctcaccg cggaaaaagc    240

 

cttcgttatc actgcctttt acagcatttt gcgcaacacc atggttgtgg cctttcccaa    300

 

tggtattcaa caaatctcgg aaacgcttgt gtccatgaag cgtataacag attacttatt    360

 

atacgaagaa atcggtgata actcgaaaat ttcagcgaat agctgtaata aaactaagaa    420

 

gacagacgac ctgaatggta atctaaagtt aacgaaacaa ataacacagg agccagcacg    480

 

taaagaagct ggcattgaaa tatgtaattt gaaagcgaag tgggatccca ccgcaataga    540

 

atatacgctg aacaatgtga acttgaatgt aaaaccgcgc acactagtgg ctgtcattgg    600

 

accggtgggt tccggaaagt caagtttgat acaagccata cttggtgaac tgcctacgga    660

 

atcgggttcc attactgtac acggctccta ctcgtacctc gg                       702

 

 <210>  194

<211>  516

<212>  DNA

<213>  S003(5)-E6

 <400>  194

gatgaaggac tttcgatcac aaaactggac ataaaaccag ccacaaaaaa gggtgacaac     60

 

tatgccagtg tgatgacacg aatcagcgtc gatttcacgt taagcactaa ggataccgaa    120

 

catggtttat atatcgtgaa gacctcacat gaaagtgatc ccttcacagc aggtatcatg    180

 

agtcaatatg atatctataa tacggaaatg ttaatgtaca aaaaagtctt accaaaactg    240

 

accgagttgc taaaggaaat cggtgacaca gataaactat ttgccgacac cattcatgtg    300

 

gactacaagc attcagctat aattttcgaa gaccttgcag tgttaaaatt tgttactccc    360

 

gatcgtttag ctgggatgga tgaagcgcag accttgttga cacttaaaaa actggccaaa    420

 

atgcatgcaa ccgcggccgt accataggag ctacttcaaa tgcaataaat ctagcttttc    480

 

cagggccagt attagtcatc tttgtgaagt acctcg                              516

 

<210>  195

<211>  193

<212>  DNA

<213>  S003(5)-H5

<400>  195

taatctacca tatctgggta tggtagtgga cgaagcattg cgtttatacc cattaatacc     60

 

tttccttgat cgcgaacatc ggccgaaaga gggggaaaag ccattcgacc ttaaaccata    120

 

ttacgattac acactgccag taggtatgac tcttttagta tcagtcctag gcgtacctcg    180

 

gccgcgacca cgc                                                       193

 

<210>  196

<211>  456

<212>  DNA

<213>  S003(6)-8

<400>  196

gtattggcgt cataggatcg ccagtcatta cattgtgatc cctacatttg aatccctcca     60

 

gactaagcgc actacttgtg gccacactta ataatgcaat taaggctatc tttaatgcca    120

 

tttcgtttcg ttgatttggt gcgtcaacta gcacaattat ttatttataa aatgtgtgta    180

 

ttaatacgcg tcctatgcaa acaaaattga tatttgaaaa cagaaattgc aacaatttta    240

 

agttagatac tttcacgagc agtgatcgca agagactgtc cccatgtact ttatatgcgt    300

 

caacggagac acgcgtgaga gcgccaagtg ctggatattt gcggagagtt tcatttataa    360

 

cttgatccaa ataggtcatc tcttccatgg catcatatgt caactcgcca ttgtgtttac    420

 

ttagcaccgt tttaatttcc tctctcaact tatcct                              456

 

<210>  197

<211>  709

<212>  DNA

<213>  S003(6)-32

<400>  197

atggggactt agtgttattg tgaaagcgcg ttacaaaagg tcgacagaat ttaataactt     60

 

tcataccaga ttttttctta agcgcttcga aagcagtgcg cataatgctg tcgataaata    120

 

ctactttcct cttggcggct ctcttggggc ttgtctatgt ttggtgtcgc tacagttttg    180

 

gttattggaa acgaactaat attccatata tgtcgccact gattggcaat acggaagttt    240

 

ttattaaaag gaccaatagt ttcttcctat atctagctga tgtttataag gatgctaaaa    300

 

tgttaacagc tgcggcagtt ggtatttaca tactcaacaa gccagcgtta gtgttacgtg    360

 

aaccggaact tattaaaact gtgctagtca aggaattcgc aaagttcgaa aatcgatcag    420

 

ccgcctgtga tccacacaat gatcccttgg gttcgaataa tctatttttc gtaaacaatc    480

 

cactatggaa ggatttgaga acgaaaataa cgccgatttt cacatcagga aagttcaaac    540

 

aaatgtatcc actaatgact gagatcggta cggatttgga agcccatttg aattcgtttt    600

 

gcgaagacta acgacgcttt cgtaactgaa gttaaagaga ttttgtgcta gcttcaccac    660

 

cgacatgatt gcctccatcg cttttggtgt gaaagccaac agtcttagt                709

 

<210>  198

<211>  461

<212>  DNA

<213>  S003(6)-51

<400>  198

atggggcgtt tttatgacac attggatttc cgataccgtc aatgaaaatt ctttcataat     60

 

aaaacctgcc gagttaaata ttattcaact tttaaatatt tatcactcaa ctgaaacaaa    120

 

aagttaaagc catggaatgc acaaaagaga tcacatgtct acagaactta actcaacaag    180

 

ttgctgagtt atcaaaagcg ctatcctaaa atatgcagca tacgttgtcc ctggagggaa    240

 

aattttcagc tgccatggaa gaaatcgcta aactccaacg gcaaaacgcg atgatgctag    300

 

atgtcatcaa taaaacctta tatagtaata ataaagagaa agaaaataac aatgactatg    360

 

gttttggaat atttattcta acgatgatac ttgtcctaat tggacttcta cgcttggttc    420

 

ccacatccgt ttggcttggt ttggaggata aagtatactg t                        461

 

<210>  199

<211>  382

<212>  DNA

<213>  S003(6)-74

<400>  199

agttttgagc tcgataagag aggtgttaaa gaaagaatat ttggataatg ccaaagcgat     60

 

ttcatccgcc tacaaaaatc gtccgcagag cccactcgag actgccattt ggtgggtgga    120

 

atatgtcgcc aaaaccaagg gtgcgccact cattaaggct catgccgtgc atgtatcacg    180

 

cttcgtttac tactctttgg atatttatct attcattgct gccattatat tcataacggt    240

 

tgtgagttgg agctttatat gtagtagatg gtgctcgcgg cgtccaaagg ccgttaagca    300

 

aaagtcaaat taaacaagga ggtgcgaatt tcagacgaag agagttagct caataaaatg    360

 

taaataagaa attttaattt ga                                             382

 

<210>  200

<211>  359

<212>  DNA

<213>  S003(6)-81

<400>  200

tattggatat ttacgaagtg tttctgatac gacctgcttc atataagaca tcgaatttac     60

 

acattcatag gtcaccttac cgccatgatt ttcaaccgcc tctagaattt cttcgcgtag    120

 

gcgcttttga atatctggat ttagggccaa ctcatagagt aaaaatgtaa gagtcgaaga    180

 

tgatgtctca aagccagcta caaaaaacac aaacgcctgc gccgtcatct cctccaacgt    240

 

aagccctttc tcctcgtttt tatcgtcgaa ctttaatttt cctttgttta attcaatcag    300

 

aatgttcaaa aaatcattac gctgcacatt cttcttccct ctataatcaa ctgcttcac     359

 

<210>  201

<211>  341

<212>  DNA

<213>  S003(6)-92

<400>  201

tgcatgcctc ttggcggctc ttttggcgct cgcctacgtt tggtgtcgct acacatatgg     60

 

ctactggaaa cgcaataaga ttccctttat gacgccattg ccactaattg gcaatatgga    120

 

agttttgttt aaaaggacca atagtttctt tctatatcta tctgacattt ataaggatgc    180

 

tagaatgtca aaggctgctg cagtcggcat ttacatactc aacaaaccag cgttagtgct    240

 

acgtgaaccg gaacttataa aatctgtgct catcaaggag tttccgaaat tcgccaatcg    300

 

gtcaggcggc tctgatccac ataatgatcc tttgggcgcg t                        341

 

<210>  202

<211>  377

<212>  DNA

<213>  S003(7)-151

<400>  202

caaaattttc acacgcaatg ctgtggtcca tttcggatag aagaatgcga taaggaattg     60

 

aatagcgcga cctaatgtaa agtctagctg ttttcggcct agcgcacgaa actcggcatt    120

 

cggatctaca agactattgg ctttaatgcc aaaggcggtg gtggcaatca catcggtggt    180

 

gaagtttgca caaatctctt taacttcagt tacgaaaacg tcgtctgttt tcgcaaacga    240

 

attcaaatgg gcttccaact ccgtgccgat ctcagtcatt agtgaataca tttgtttgat    300

 

ctttcctgat gtgaaaatcg gcgttatttt cgttctcaaa tccttccatt gtggattgcg    360

 

tataaaaaat agattgt                                                   377

 

<210>  203

<211>  521

<212>  DNA

<213>  S003(7)-160

<400>  203

cttggcagtt atttcaaacg ctagacattt aatcgttaat ccataatttc ttctaaggcg     60

 

agcatgccac tgctcttggg ataaacgact atcaagcgac ggtttctgaa tatataatcg    120

 

ccgtaagtat tttccatgca agtaattaac ttcactagaa cgcggacggc aaaatgaaag    180

 

aatgtcacgt ctaaagaggc aatcacgcat cagatataag tcaatagcca taaagaaaac    240

 

ttttaacaca tctttcgtta ttatatatct atgtaaattt gttattgagt tttcactgca    300

 

tatggtctta caaaatgggt ggcaacagcc cggttgactt tcgaaaagac agaaaactga    360

 

acatattcgc ttaactctat aagaaaagca agtctcattt tcaccagcat tgcgttggat    420

 

gaagatcgga tgttgatcag caggttcttt caacatttta atcagggatt aaaggttgta    480

 

agcggtatcg gaaatccaat gtgcttaaaa acgccccatg t                        521

 

<210>  204

<211>  454

<212>  DNA

<213>  S003(7)-165

<400>  204

gttttcacca aacctataat cattgtgttg gacttagact tggcaaaaac gatactaatc     60

 

aaggatttta acaaatttac ggatcgcttt caacggcgta agcccgataa gcacaggttc    120

 

gacattctca atgagacact atttcgtgtg tccggtgata ggtggggtcc attgcgcaag    180

 

aaactttcat cgaccttcac atcgttgaag acgaagttca tgtttccgac ggtgttgaac    240

 

gtggcgcaac aaatggacga agctctcaaa gcgcacttcg caaatacgcc gagcggtgac    300

 

atagatacac acgattggat gggccgcttt acaaccgatg tgattgctaa ttgtgccttc    360

 

ggtgttaagt gcaatagctt aatagatcca aataatatat ttcgtcacat aggacatcgc    420

 

attttttatc caaaatacgt atccctaaag ctgc                                454

 

<210>  205

<211>  340

<212>  DNA

<213>  S003(7)-167

<400>  205

atgggaacag caatatgaag gaaaacatca atgaataaaa ccctcagtag atgagtaaaa     60

 

tatgaaggaa aacatcaatg aataaaaccc tcagtatatg agcaattaaa ttgaatgaag    120

 

gaaaacatca aaataaaacc ccatgattgg taatcatcaa tatgaaccat ccctttcacg    180

 

gtaagggagc tatgttgggc ttagtttcag ttcaacctat ccaataaccg aaggaaaacg    240

 

aacttaaccc gttgattacg taaaatcact gtcgaaggaa aacgttataa cccggaatgt    300

 

ccgttaatat cgaaggaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaagt                          340

 

<210>  206

<211>  492

<212>  DNA

<213>  S003(7)-175

<400>  206

cgatctcagt cattagtgga tacatttgtt tgaactttcc tgatgtgaaa atcggcgtta     60

 

ttttcgttct caaatccttc catagtggat tgtttacgaa aaatagatta ttcgaaccca    120

 

agggatcatt gtgtggatca caggcggctg accgattttc gaacttgcga attccttgac    180

 

tagcacagtt ttaataagtt ccggttcacg taacactaac gctggcttgt tgagtatgta    240

 

aataccaact gccgcagctg ttgacatttt agcatcctta taaacatcag ctagatatag    300

 

gaagaaacta ttggtccttt taataaaaac ttccgtattg ccaatcagtg gcgacatata    360

 

tggaatatta tttcgtttcc aataaccaaa actgtagcga caccaaacat agacaagccc    420

 

caagagagcc gccaagaggc aagcagtatt tatcgacagc attatgcgca ctgctttcga    480

 

agcgctgtat gt                                                        492

 

<210>  207

<211>  656

<212>  DNA

<213>  S003(8)-196

<400>  207

catttggcgc caaatttaag taacggcacg catcggtcgc aaagatggtg atttcttgct     60

 

tagagcttaa atgtggtggg aataaatcgc cggtggtgcc attaacggtg ccacatggtg    120

 

cataataaaa gccagtctca ttcttcatat tccaatgcgt caagcgaccc aaattagcca    180

 

tatcatcgac accagtatgc attgtgaata gaccgtcata ttcggccgaa ccattacggt    240

 

caaccaacca gccaaagcga gtgtatggta tctttatatt tgttgtattg aaaaggttta    300

 

aaaaatcgat aagcctatcc ttgtatcctt caaagatcca ctcgcgcact gttttcgttg    360

 

tgtaccctgt tcagctacga aagcttcaca gatctcattg cgcagacgct cttgtaaatc    420

 

gggtcgtttg gataattcat atagcgtaaa tgtcatcaac gaagatggcg actcaaaacc    480

 

agctgagaaa aacacagcag cttgtgctgt caaaacatcc tgtagatggg cattatactc    540

 

gcctttcgca acagcctctc ctttgaggct caccaacaca tcgatcagat cgttacgcgt    600

 

tgctttgctc tcctctcttg acgccatcac atgattgatg gtgccacgta aaaagg        656

 

<210>  208

<211>  387

<212>  DNA

<213>  S003(8)-204

<400>  208

actttcgatc ctgaacgctt caacgccgag aataagaaaa cccataagcc tatgacctac     60

 

tttcctttcg gcagcggacc acgtaactgc attggttctc gcatcggttt gttgcaggcg    120

 

aaggtcggtt tggtgcatat ttttaagaat cattatgtga ccacatgtga gaagacaccg    180

 

tccgaaatca ttttcgatac actgggcgta gcgctaaatt ataagagtgg aatgtacttg    240

 

aactttgtca atgacaaacg ctatgaacgc aatgccaagc agtgaatgtt ggaaattcga    300

 

atgaattttg agatatcaat tttaattttt ttgaaataaa aaccaaactt cttgtcataa    360

 

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaa                                        387

 

<210>  209

<211>  575

<212>  DNA

<213>  S003(8)-220

<400>  209

ttgtcttacc tgctgaagaa gacttagaag atgatcttct ctcagatgaa gagtcggttg     60

 

aagcagagac tgattcaccg gcatcatctg aataatggag ccacttaacc gacaaagtag    120

 

ttatatgaaa agtggatctt gaagtttacg agtataagta catcgtgacc ccaagttttg    180

 

gcccaacccg gaaactttcg atcctgaacg cttcaacgcc gagaataaga aaacccataa    240

 

gcctatgacc tactttcctt tcggcagtgg accacgtagc tgtattggtt ctcgcatcgg    300

 

tttgttgcag gcgaaggtcg gtttggtgca tatttttaag aatcattatg tgaccacatg    360

 

tgagaagaca ccgaaggaaa ttacttttga tccattttta atgtcgctag gttataagaa    420

 

tggaatttac ttgagccttg tcaatgacaa acgctatgaa cgcaatgcca agcagtgaat    480

 

gttcgaaatt cgaatgaatt ttgaaatatc aattttaatt tttttgaaat aaaaaccaaa    540

 

cttcttgtca aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaa                               575

 

<210>  210

<211>  610

<212>  DNA

<213>  S003(8)-224

<400>  210

cagcggcgac aatcaacaca gcacaatcag cctgtgaggt acaggttgaa cagtttaccc     60

 

accactatca tctgttattg cacacggagg agcttcagtt gacctagcta ttttttcact    120

 

tcacttagcg ggtatttcct caattttagg agcagtaaat ttcattacaa cagtaattaa    180

 

tatgcgatcg acaggaatca cctttgatcg aatacctcta ttcgtttgag cagttgtatt    240

 

aacagcttta ttacttttat tatcattacc agttttagcg ggggctatta ctatactact    300

 

aacagaccga aacttaaata cttccttttt tgaccctgcc ggaggaggag atcctattct    360

 

ttaccaacat ttattttgat tctttggaca cccagaagtt tatattttaa ttcttccagg    420

 

attcggaata atttcccata ttattagtca agaatcagga aagaaggaaa catttggatc    480

 

tctaggaata atttatgcta taatagcaat tggtctatta ggatttattg tatgagctca    540

 

tcacatattc acagtaggaa tagatgtaga tactcgtgcc tatttcactt cagctacaat    600

 

aattattgcg                                                           610

 

<210>  211

<211>  318

<212>  DNA

<213>  S003(8)-231

<400>  211

aactgccgca gctgttgaca ttttagcatc cttataaaca tcagctagat ataggaagaa     60

 

actattggtc cttttaataa aaacttccgt attgccaatc agtggcgaca tatagggaat    120

 

attagttcgt ttccaataac caaaactgta gcgacaccaa acatagacaa gccccaagag    180

 

agccgccaag aggaatgtag tatttatcga cagcattatg cgcactgctt tcgaagcgct    240

 

taagaaaaaa tctagtatga aaggtattaa attctgtcga ccttttgtaa cgcgccttca    300

 

caataacact ccccatgt                                                  318

 

<210>  212

<211>  598

<212>  DNA

<213>  S003(8)-249

<400>  212

agcaaattgg cagctttcac tcatttcaaa aactttcgtg agctggcatt tctccagttc     60

 

ttaaattgct gctgactgct ttgttgtttt catcattgtt ttataaaaat tatttaactt    120

 

cacgtactta tatcacatgg gtcacattat caacctttaa attctcctgt ttccactatt    180

 

cataactacc acacaatgcg cttatgtata cataaatata tgtatatata tagcaatatc    240

 

catataatgt ccgagacatt taatccttaa actaagttaa ttgattttaa tttaattact    300

 

aaatagacgt taaaacaaat tcgtatgatt caaatgcatg aggttatggc taatacgtat    360

 

gtatagtatg taaattaatg aaatttcacg tgagcctaag tcaaatggtt tattaccaat    420

 

ctctcgcata cgtctttatc atatcattgc tgatcagtaa tcgggttcac aatatgattt    480

 

gagctccgga tagccgcacg gacggcgaca gcactcgtgt atggcacctt gaaaaggttg    540

 

ccgatattca ccttcctcac cggctaaccg cttcaagctg gacaggtgtc ccatgcca      598

 

<210>  213

<211>  248

<212>  DNA

<213>  S003(8)-271

<400>  213

tcgttctggg taaatagaga atttcggttc ttgttccccg gatagtagtt acgtagccaa     60

 

ttgtggaact ttcttgctaa aatttttaaa ggattatatc gtaagatatg tattcttttt    120

 

aaattataac gattatcaat taacaatcaa ttcagaactg gcacggactt ggggaatccg    180

 

actgtctaat taaaacaaag cattgtgatg gccctaacgg gtgttgacac aatgtgattt    240

 

ctgcccat                                                             248

 

 <210>  214

<211>  460

<212>  DNA

<213>  S003(8)-284

 <400>  214

atctttcgtc gcggtaatat tctggcaatg aagcgagcaa cttattgcgc aaggtcttga     60

 

catttgcgtt gttttccaag taaaatgttt tgcattgatc atttacaatg caaacttcta    120

 

tggaagactt tgcactttga ctgataattc cattacactc tttatcactc actatcatcc    180

 

ttggttcttg tcttcgctca atggcacggt tgctgtccat aaaaatgtcg tcctctgtca    240

 

gtcctagact tacacgtgcg gctgcatacg taacaatttc ggagtcaaaa gtcctgtata    300

 

cgtttaaacc atttcttacg aaacaaatta cgacagacgc acaagaataa ttggcaacaa    360

 

atgtcaacaa catgaaatat agtaacgcag acttgatctt catggtaaac gattcaagtg    420

 

tgacttgatt gatagaattt taaatcgcaa ctccccatgt                          460

 

<210>  215

<211>  672

<212>  DNA

<213>  S003(8)-288

<400>  215

cgaaatatag gtctaggatt taaaactcct gctgaggcta ttgatggtac cggcattatc     60

 

agatagaaaa gaatacagca atttacactc tgatacttcc actcaaactg aaacaaatca    120

 

ttggtataga ttaccattgc acataaggat aagaattgta cagctagccg atatcaactg    180

 

tgaaagcaaa tatgagcttt tacgtttcaa ttttgactgt ttggcatccc tatggaacca    240

 

tgatcaaatg gctaatcgtt gttgtggaat gttctatctc caagcaccaa atgagataga    300

 

agtcgctaat atgcacgacg ttcgtttaca ctctacacaa ccaggaagaa aagaaccatg    360

 

tttgtgttca tcattattct ggtatgatag cgcgctgatg caatcagcta ttgatctgtt    420

 

tcatagtatt aaacagtgtg aagttgtcga tgaggagtat tatattgtgt tggattgata    480

 

ttctctccac attgcactcg aaggaaaacg ttgttataac ccggttgctc cgttatctca    540

 

aaataaaata atcgaaggaa aatgttacta taacccggtt gttccgttat cactactcaa    600

 

ttgaaggaaa acaattcaaa ccactatccg gttaaagata gtaaatgaag gaaaaaaaaa    660

 

aaaaaaaaaa aa                                                        672

 

<210>  216

<211>  688

<212>  DNA

<213>  S003(9)-311

<400>  216

cgaagggaag gtaggacata ggcttatggg ttttcttatt ctctacgctg aagcgttcag     60

 

gatcgaaggt gttcgggttg ggccaaaact cggggtcacg ttgtatgccg aagattggta    120

 

tataaacagg catatctact ggcactgtgt aatcgtaata tggtttaaga tcgaatggct    180

 

tttccccctc tttcggcaga tgctcccgac cgagaaaagg tagtgatggg tataaacgca    240

 

atacttcgtc aacgaccata cctaaatatg gcagattatt gatagtctca taagacaatc    300

 

taccttgctc agctacgaaa gcttcacaga tctcattgcg cagacgttct tgtaaatcga    360

 

gccttttgga taattcgtat agcgcaaatg tcattgtcga agatgaagtc tcaaaaccag    420

 

ctaccataaa taccgctgct tgtgctgcta agatatcctg tagctgagca ttatactcgc    480

 

ccttcgcaac tgcctcttgt ttaaggctca ccaacacatc gatcagatcg ttacgcgtcg    540

 

ctttgctctc ttctcttaac gccataacat gttcgatggt gccacgtata aaagtttcgt    600

 

actccggtac gctgcacttc ctcatcggcc aacacactct gcaccagcgc tttgctttgt    660

 

accaactcat agtcggtcag ctttaggt                                       688

 

<210>  217

<211>  461

<212>  DNA

<213>  S003(9)-312

<400>  217

atggggcgtt tttatgacac attggatttc cgataccgtc aatgaaaatt ctttcataat     60

 

aaaacctgcc gagttaaata ttattcaact tttaaatatt tatcactcaa ctgaaacgaa    120

 

aagttaaagc catggaatgc acaaaagaga tcacatgtct acagaactta actcagcaag    180

 

ttgctgagtt atcaaaagcg ctatcccaaa atatgcagca tacgttgtcc ctggagggaa    240

 

aattttcagc tgccatggaa ggaatcgcta aactccaacg gcaaaacgcg atgatgctag    300

 

atgtcatcaa taaaacctta tatagtaata ataaagagaa agaaaataac aatgactatg    360

 

gttttggaat atttattcta acgatgatac ttgtcctaat tggacttcta cgcttggttc    420

 

ccacatccgt ttggcttggt ttggaggata aagtatactg t                        461

 

<210>  218

<211>  265

<212>  DNA

<213>  S003(9)-321

<400>  218

atggttacca tttggcgatg gaccacgcaa ttgcatcggc ttgcgtttcg gcaaaataca     60

 

ggcgctgatc ggtctcgctt tgctgatcaa gcattttaga ttctccttcg caccacagac    120

 

acaagctgaa ttgacttaca aaaaagagac gatactgcta tcagcggaac atggcataca    180

 

cttgcgggtg gaggcgttga aagagtaatt gtataggtgt gctaggcagt cgtggagcaa    240

 

cgagcgggct gtcttcatct tatgt                                          265

 

 <210>  219

<211>  233

<212>  DNA

<213>  S003(9)-352

<400>  219

ggaggcagca taattgaggg tttgtgcctt gtcgctccag tctacggaga aaacgttgta     60

 

tttaccactt gccaagtaag cgtcacggat caatgggttc aaatcggaat cagaatccga    120

 

ttgccaaccg tggattatga atttggttgg attgctttgt tgaagtgaga tgcagccaag    180

 

gaagcggcat cacccgaaat gatagtgtct ggcgtggcgg ggttctcgtt ggt           233

 

<210>  220

<211>  646

<212>  DNA

<213>  S003(10)-395

<400>  220

gtcttcgggt tgcgttaaat tcatgccggt taagagtgac aactcgctca gcatgccgag     60

 

gtatggttca atttccgctt ttacatttgg caactctaaa acttcgccta aagcctcaaa    120

 

ataacgcgga caaggtgtgc gcaccaacag taaagaatcc tcattgagtg gctgcgaaaa    180

 

taccggcacc ggctgccaat tatatttcgg atgccattcc atgggcgtat cttttggggg    240

 

gaacaaactc gccagcaccg tctgcagtgt catgtgggtg cgtgcaacac ccgttgcttg    300

 

agcgtgtgcc acgtctggcg tatagtatgg cgacatgaag tctgcgtaac gcttgcgcag    360

 

ccacgttcca atgccaaata gctcacgctt gccgttattg gttatgtgcc cccatccgaa    420

 

aggagagaag gtctggttaa tgtgtgggtc atttggatat gtgtctgcgg gtgtgcgtgg    480

 

tccgtgtcgg aaaaccacat gtagtaattc taaagtatca gcatcggctt tgtcttcgga    540

 

cacgaatgaa agaacgtttg aacttagcaa acataacaat aaaagcacca ccgccaccgc    600

 

tgcgccagcc atagctagac gatgtttatt agagaaatgt ccccat                   646

 

<210>  221

<211>  462

<212>  DNA

<213>  S003(10)-404

<400>  221

aaatacacac gcatatacat atatgtgaga atttttataa aaaacaaaaa caaataaatt     60

 

aaagcgaaaa gcagctgtgt gtgttaattt acggcacgcc atatgcactt ctgcttgaat    120

 

tcatatggaa aaggttactc atacgtcgtg tagggtctga tggattgact ggtcataggc    180

 

gtatggaaat tttctttata aaaagtcatt tcgcaacgga ctaacgcgga aactgcaacc    240

 

tcctgtataa ctaaacaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaagt acggatttgt aaattatata    300

 

aaacaagaag atgctgagaa ggcaataagc tcactcaatg gcttgcgttt acaaaataaa    360

 

acaattaaag tttcagtagc ccgtcctagt tcagaatcaa ttaagggtgc aaatttatat    420

 

gtgtctggtc ctcccaaaaa tatgactcaa ccagaactcg aa                       462

 

<210>  222

<211>  467

<212>  DNA

<213>  S003(10)-405

<400>  222

tattcgaaga aggtatgtta ccagacaaag atgccggcga attgatcctg aagtgcaccg     60

 

gccccagcga agccgtgatg acgatgtaga gcttagctct attaatggtt cagagagaga    120

 

ttaagttgaa tatctctaaa cagcaatatg aaggaaaaca tcaatgaata aaaccctcag    180

 

tagatgagta aaatatgaag gaaaacatca atgaataaaa ccctcagtat atgagtaatt    240

 

aaattgaatg aaggaaagca tcaaaataaa accccatgat tggtaatcat caatatgaac    300

 

catccctttc acggtaaggg aactatgttg ggcttagttt cagttcaacc tatccaataa    360

 

ccgaaggaaa acgaacttaa cccgttgatt acgtaaaatc actgtcgagg gaaaacgtta    420

 

taacccggaa tgtccgttaa tatcgaagga aaaaaaaaaa aaaaaaa                  467

 

<210>  223

<211>  670

<212>  DNA

<213>  S003(10)-406

<400>  223

ggtccaaggt ctcaataaaa tggctctgtt gtctctttac aaatacttcg ctgtgttgat     60

 

gctggtgaac ggagtcgtca gctacaaatc cgctatgaac ttggaagcgt ttatggccca    120

 

cgactatttg ctgaacacca tgtatgaaga ttggctgaaa ataagcagtt atgcttataa    180

 

gagtggtaac gaagtatgtc aacagctact cggcgtagag ataaacaaga atgaaacaag    240

 

tgctgaaagg gagacacgcg aacagaacat gtttaattgt gttggtcgtt tcgtgtatcg    300

 

cgtaattccc acagcaagtc ttcctgggga agacccacat gatatagtgt tgcgcaaata    360

 

tggattggac ggtattcgga aagttatgga tcaaaaatat gcagacttct tcgaagagat    420

 

aattcagcga atggatgatt ttgtgtttgg tttaacgccg gcgcagcaaa gcgacacggc    480

 

agtgcaaaat ttgaaaggat ggttaagtaa tattaagagt gcctcgactt tggcggagaa    540

 

agaaatgact tttagaaaat gtatggaatt ttataaattt cagaggattt tttaatgtat    600

 

ctaaataaaa gtaaagatac tcgataataa attttctaaa atgcaagcaa agtcaagaaa    660

 

gaaaaaaaca                                                           670

 

<210>  224

<211>  455

<212>  DNA

<213>  S003(10)-432

<400>  224

caagacgcaa atgaagaaaa tcttgttgaa ggtcgccatt ttaactgtga atgttcaatg     60

 

taattgtccc catgtacaat tcacatattc ttgaaaatat ttgcatttaa aaaatttctg    120

 

gaacatttaa taggcttgct atggtctctt ctgcctctga agaatcagaa cttgggtttg    180

 

ctgtaatttc ttctgcctct gaggaatcag aacttccttg ttcaagtgct gatgtaactt    240

 

ctgagtttcg cactaagcaa acctcaaatt tcacatattc accgtgtaca cttttgaaga    300

 

gttcttctgt gcggaagaat atttttgcat agtcaactgg ggaaaaatta ccggtgtgag    360

 

cctggaatgc ccggaccact ttttgcatcg ctgagaagta gcaatcattg ctttcctttt    420

 

gtgcttcgca gttgcttata tttgctaaga attcc                               455

 

<210>  225

<211>  437

<212>  DNA

<213>  S003(10)-469

<400>  225

atggggagtt atcaaaagcg ttatcccaaa atatgcagca tacgttgtcc ctggagggaa     60

 

aattttcagc tgccatggaa gaaatcgcta aactccaacg gcaaaacgcg atgatgctag    120

 

atgtcatcaa taaaacctta tatagtaata gaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aagtactgag    180

 

aaattgccga tttcgcatat cgcgaatgct gctaaagaac cccagacttg aatagcacaa    240

 

ggactggtaa ataatgggtg attaacgtgg taggaaacgt atgcggtgaa tccccagtag    300

 

tagctgcaat ttttgaacag attacgaatg ggcatagtgg catgcgagaa acgatgtacg    360

 

taatgatttc gttgttgaga atatataaat caccacgcca tttccacacc atgaaatcat    420

 

accgatgcag atcacgt                                                   437

 

桔小实蝇抗敌百虫和高效氯氰菊酯抗药性水平检测cDNA芯片的制备方法及其应用.pdf_第1页
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1、(10)授权公告号 CN 103614473 B (45)授权公告日 2015.01.21 CN 103614473 B (21)申请号 201310609364.5 (22)申请日 2013.11.27 C12Q 1/68(2006.01) C40B 40/08(2006.01) C40B 50/06(2006.01) (73)专利权人 华南农业大学 地址 510642 广东省广州市天河区五山路 483 号 (72)发明人 曾玲 姜建军 陆永跃 何晓芳 梁广文 温硕洋 (74)专利代理机构 广州粤高专利商标代理有限 公司 44102 代理人 任重 US 2005191634 A1,2005.。

2、09.01, CN 102660777 A,2012.09.12, 刘静等 . 抑制性消减杂交 (SSH) 技术及其应 用 .河北化工 .2008,( 第 07 期 ), (54) 发明名称 桔小实蝇抗敌百虫和高效氯氰菊酯抗药性水 平检测 cDNA 芯片的制备方法及其应用 (57) 摘要 本发明公开了一种桔小实蝇抗敌百虫和高 效氯氰菊酯抗药性水平检测 cDNA 芯片及其制 作方法和应用。本发明利用正向抑制性消减杂 交 (suppression subtractive hybridization, SSH) 方法分别获得了不同抗性品系桔小实蝇抗 药性特异上调表达基因片段, 再 PCR 扩增各抗药。

3、 性相关特异表达基因, 纯化回收得到 118 个桔小 实蝇抗敌百虫抗性相关特异性基因片段, 103 个 桔小实蝇抗高效氯氰菊酯抗性相关特异性基因片 段。以上述特异的抗性靶基因片段为 DNA 探针, 构建了桔小实蝇抗敌百虫和高效氯氰菊酯检测 cDNA 芯片。本发明 cDNA 芯片能够简单有效地实 现对桔小实蝇抗药性水平的实时监测。 (51)Int.Cl. (56)对比文件 审查员 王瑶 权利要求书 2 页 说明书 11 页 序列表 132 页 附图 2 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书2页 说明书11页 序列表132页 附图2页 (10)授权公告号 CN 1。

4、03614473 B CN 103614473 B 1/2 页 2 1. 一种检测桔小实蝇抗敌百虫和高效氯氰菊酯抗药性水平的 cDNA 芯片, 其特征在于, 包含 221 个靶基因 DNA 探针 ; 其中 118 个靶基因 DNA 探针为桔小实蝇抗敌百虫抗性相关特 异性基因片段, 103 个靶基因 DNA 探针为桔小实蝇抗高效氯氰菊酯抗性相关特异性基因片 段 ; 其中, 所述的 118 个桔小实蝇抗敌百虫抗性相关特异性基因片段是 : S004(4)-A9、 S004(4)-B7、S004(4)-D6、S004(4)-H9、S004(5)-B10、S004(5)-B5、S004(5)-C10、 。

5、S004(5)-C7、S004(5)-D1、S004(5)-D10、S004(5)-D11、S004(5)-G1、S004(5)-H3、 S004(5)-H7、S004(6)-10、S004(6)-12、S004(6)-18、S004(6)-21、S004(7)-100、 S004(7)-109、 S004(7)-138、 S004(7)-156、 S004(7)-165、 S004(7)-183、 S004(8)-197、 S004(8)-199、 S004(8)-217、 S004(8)-225、 S004(8)-240、 S004(8)-248、 S004(9)-293、 S004(9)。

6、-308、 S004(9)-328、 S004(10)-394、 S004(10)-401、 S004(10)-443、 S004(10)-471、 S005(1)-A1、S005(1)-B2、S005(1)-C1、S005(1)-D12、S005(1)-G8、S005(2)-A8、 S005(2)-C7、S005(2)-E8、S005(2)-G1、S005(3)-A5、S005(3)-A9、S005(3)-A11、 S005(3)-C11、 S005(3)-D12、 S005(3)-D8、 S005(3)-H12、 S005(4)-A2、 S005(4)-A3、 S005(4)-A8、S00。

7、5(4)-B8、S005(4)-G1、S005(4)-G2、S005(5)-A5、S005(5)-B7、 S005(5)-E11、S005(5)-G6、S005(5)-G9、S005(5)-H2、S005(6)-13、S005(6)-17、 S005(6)-49、 S005(7)-98、 S005(7)-100、 S005(7)-103、 S005(7)-116、 S005(7)-107、 S005(7)-131、 S005(7)-176、 S005(7)-178、 S005(7)-181、 S005(7)-188、 S005(7)-189、 S005(8)-200、 S005(8)-194、。

8、 S005(8)-211、 S005(8)-212、 S005(8)-213、 S005(8)-216、 S005(8)-224、 S005(8)-235、 S005(8)-236、 S005(8)-254、 S005(8)-259、 S005(8)-261、 S005(8)-286、 S005(8)-264、 S005(9)-293、 S005(9)-299、 S005(9)-304、 S005(9)-308、 S005(9)-310、 S005(9)-312、 S005(9)-317、 S005(9)-329、 S005(9)-333、 S005(9)-350、 S005(9)-355、 。

9、S005(9)-357、 S005(9)-358、 S005(9)-359、 S005(9)-371、 S005(10)-388、 S005(10)-390、 S005(10)-401、 S007(3)-G11、 S007(6)-34、 S007(7)-107、 S007(7)-178、 S007(8)-192、 S007(8)-259、 S007(10)-420, 序列如 SEQ ID NO.5 SEQ ID NO.122 所示 ; 所述的 103 个桔小实蝇抗高效氯氰菊酯抗性相关特异性基因片段是 : S002(1)-A3、 S002(1)-B4、S002(3)-D9、S002(3)-E7、。

10、S002(4)-C10、S002(4)-E4、S002(4)-F8、 S002(5)-E5、 S002(6)-16、 S002(6)-19、 S002(6)-82、 S002(8)-270、 S002(10)-416、 S002(10)-452、 S002(10)-444、 S008(1)-B2、 S008(1)-D11、 S008(1)-D5、 S008(1)-D6、 S008(1)-E3、 S008(1)-F10、 S008(1)-F12、 S008(2)-B1、 S008(2)-F10、 S008(2)-F12、 S008(2)-G1、 S008(3)-B10、 S008(3)-C11、。

11、 S008(3)-D10、 S008(5)-B12、 S008(5)-B8、 S008(5)-C7、S008(5)-E5、S008(5)-G11、S008(5)-H2、S008(6)-14、S008(6)-29、 S008(6)-42、S008(6)-58、S008(6)-64、S008(6)-77、S008(6)-85、S008(6)-93、 S008(7)-130、 S008(7)-135、 S008(8)-276、 S003(1)-A10、 S003(1)-B6、 S003(1)-D7、 S003(1)-E1、 S003(1)-E9、 S003(1)-F2、 S003(1)-F5、 S0。

12、03(1)-F9、 S003(1)-G4、 S003(2)-C6、 S003(2)-D4、S003(2)-D5、S003(2)-E7、S003(2)-F3、S003(2)-G5、S003(3)-F1、 S003(3)-H10、S003(4)-A8、S003(4)-C1、S003(4)-C12、S003(4)-F1、S003(4)-G6、 S003(5)-B11、 S003(5)-B2、 S003(5)-B8、 S003(5)-E6、 S003(5)-H5、 S003(6)-8、 S003(6)-32、 S003(6)-51、S003(6)-74、S003(6)-81、S003(6)-92、S0。

13、03(7)-151、S003(7)-160、 权 利 要 求 书 CN 103614473 B 2 2/2 页 3 S003(7)-165、 S003(7)-167、 S003(7)-175、 S003(8)-196、 S003(8)-204、 S003(8)-220、 S003(8)-224、 S003(8)-231、 S003(8)-249、 S003(8)-271、 S003(8)-284、 S003(8)-288、 S003(9)-311、 S003(9)-312、 S003(9)-321、 S003(9)-352、 S003(10)-395、 S003(10)-404、 S003(1。

14、0)-405、 S003(10)-406、 S003(10)-432、 S003(10)-469 ; 序列如 SEQ ID NO.123 SEQ ID NO.225 所示。 2. 权利要求 1 所述 cDNA 芯片的构建方法, 其特征在于, 步骤如下 : S1. 抑制性消减杂交分别构建桔小实蝇抗敌百虫和抗高效氯氰菊酯抗性品系 SSH 文 库 ; S2. 从 S1 构建的两个文库中分别随机挑选差减重组克隆子, 提取重组质粒 DNA ; S3. 分别以 S2 获得的重组质粒 DNA 为模板, 以 SEQ ID NO.1 所示引物 Nested PCR Primer 1F 和 SEQ ID NO.2。

15、 所示引物 Nested PCR Primer 2R 为接头引物进行 PCR 扩增, 检 测各 PCR 产物浓度和片段的单一性, 纯化回收得到产物 ; S4. 将纯化回收得到的产物点样于化学修饰的载体上, 同时设置阳性和阴性对照, 得到 初始基因芯片 ; S5. 分别采用步骤 S1 构建文库时使用的抗性品系总 RNA 和敏感品系总 RNA 为检测样, 进行DNA芯片杂交, 去除假阳性差异基因, 选择在基因芯片上杂交后上调信号值大于2的样 品为抗性相关差异表达基因片段 ; S6. 以 S5 得到的抗性相关差异表达基因片段的重组质粒为模板进行 PCR 扩增, 引物同 S3 所述, 对产物进行纯化回。

16、收、 测序、 拼接组装, 去除重复和冗繁序列, 挑取出单一非重叠序 列作为特异性抗性靶标基因 ; S7. 将 S6 得到的特异性抗性靶标基因点样于化学修饰的载体上, 同时设置阳性和阴性 对照, 构建得到检测桔小实蝇抗敌百虫和高效氯氰菊酯的抗性水平的 cDNA 芯片。 3. 根据权利要求 2 所述 cDNA 芯片的构建方法, 其特征在于, S4 和 S7 所述的载体为载 玻片材料。 4. 根据权利要求 2 所述 cDNA 芯片的构建方法, 其特征在于, S7 所述的化学修饰是指 通过化学反应在载体表面上引入氨基官能团, 使 DNA 能够与表面官能团能共价结合, 稳定 地固化于支持物表面。 权 利。

17、 要 求 书 CN 103614473 B 3 1/11 页 4 桔小实蝇抗敌百虫和高效氯氰菊酯抗药性水平检测 cDNA 芯片的制备方法及其应用 技术领域 0001 本发明涉及昆虫抗药性检测技术领域。更具体地, 涉及一种检测桔小实蝇抗敌百 虫和高效氯氰菊酯的抗性水平的 cDNA 芯片及其制备方法和应用。 背景技术 0002 世界卫生组织在 1957 年对昆虫抗药性的定义是 :“昆虫具有耐受杀死正常种群中 大多数个体的药量的能力并在其种群中发展起来的现象” 。昆虫对杀虫剂的抗药性是一种 进化现象, 是昆虫种群内部遗传结构在杀虫剂选择作用下持续变化的外在表现, 是昆虫种 群的一种特性, 主要包括自。

18、然耐药性、 交互抗药性、 负交互抗药性及多抗药性等。昆虫产生 抗药性的后果是 : 现行的化学药剂防治剂量效果降低 - 人们开始加大药剂剂量 - 昆虫抗性 增强最终导致防治失败, 给环境和人类食品安全生产带来严重的破坏性后果。桔小实蝇是 我国华南及西南地区果实蔬菜上的重要害虫之一, 每年给我过农业生产特别是经济水果造 成重大的经济损失。 目前, 田间防治桔小实蝇主要采用的化学药剂防治, 多年的田间种群监 测数据显示桔小实蝇已经对多种农药产生了抗药性。 0003 为了延缓昆虫抗药性发展, 减少农药剂量的使用, 保护环境和人类安全, 对昆虫抗 药性进行监测, 实时掌握其抗药性动态, 及时轮换使用不同。

19、类型的农药是治理昆虫抗药性 产生的一种很好的策略。昆虫抗药性的机制主要分为 : 行为抗性、 靶标抗药性和生理代谢 抗药性。很多研究证明昆虫的这些抗药性机制都是由基因调控的, 基因与抗药性是一种内 因 - 表观的关系。因此, 了解不同类型杀虫剂作用下, 昆虫产生抗性时, 其体内特异性抗性 相关基因的表达情况, 可以为了解昆虫抗性发展水平提供依据。 0004 基因芯片杂交技术 (gene chip hybrid analysis) 是基于核酸分子原位杂交技 术原理发展而来的, 根据碱基互补的原理, 利用基因探针在基因混合物中识别特定基因。 该 技术将大量DNA探针分子固定于支持物上, 然后与荧光标。

20、记的样品 (DNA或RNA)进行杂交, 通过检测杂交信号强弱来判断样品中靶分子的数量。 可以对来源于不同的个体、 组织、 细胞 周期、 发育阶段、 分化阶段、 病变、 刺激下的细胞内 mRNA 或反转录后产生的 cDNA 进行检测, 从而对这些基因表达的个体特异性、 组织特异性、 发育阶段特异性、 分化阶段特异性、 病变 特异性、 刺激特异性进行综合的分析和判断, 迅速将某个或几个基因与相关因素联系起来, 加快这些基因功能的确定, 具有广阔的应用前景。 利用表达性基因芯片杂交技术, 可以同时 对抗药性及敏感昆虫体内的成千上万个不同基因进行差异表达定量检测。 0005 桔小实蝇是我国华南及西南地。

21、区果实蔬菜上的重要害虫之一。在农业生产中, 为 了减少损失, 目前, 田间防治桔小实蝇主要采用的化学药剂防治, 多年的田间种群监测数据 显示桔小实蝇已经敌百虫、 高效氯氰菊酯等多种农药已经产生了抗药性。2002-2004 年, 研 究学者采用药膜法测定了广东、 海南、 福建、 广西等 4 省 ( 区 ) 桔小实蝇B. dorsalis种群 对敌百虫和高效氯氰菊酯的抗药性, 结果表明澄海、 闽南桔小实蝇种群对敌百虫抗药性达 到 4.56 和 4.07 倍, 大部分地区桔小实蝇种群对上述 2 种杀虫剂抗药性尚处于敏感阶段, 同 说 明 书 CN 103614473 B 4 2/11 页 5 时监测。

22、 2003-2004 年广州郊区桔小实蝇成虫对敌百虫和高效氯氰菊酯的抗药性变化, 发现 除敌百虫外, 桔小实蝇对高效氯氰菊酯的抗药性变化不明显。在接下来的 2005-2007 年间 继续对我国 7 个省份不同地区的田间桔小实蝇抗药性发展进行了监测, 结果表明不同地区 桔小实蝇均对上述 2 种药剂抗药性呈上升趋势。随后 2008-2012 年对全国不同地区的连续 监测表明田间桔小实蝇种群均对上述 2 种药剂抗性达到了中抗甚至高抗水平。 0006 为了延缓昆虫抗药性发展, 减少农药剂量的使用, 保护环境和人类安全, 对昆虫抗 药性进行监测, 实时掌握其抗药性动态, 及时轮换使用不同类型的农药是治理。

23、昆虫抗药性 产生的一种很好的策略。 0007 目前桔小实蝇的抗药性监测主要采用的是生物测定法, 但传统的生物测定方法比 较繁琐, 操作起来比较复杂, 每次测定都需要大量的虫源, 往往需要先从野外采集部分虫源 带回人工饲养繁殖以达到供试虫数, 结果使测得的抗药性水平具有滞后性。 另外, 生物测定 受外界环境 ( 如 : 虫态、 营养、 温度、 湿度等 ) 的影响较大, 重复性和精确性较低。而分子生 物学抗药性监测技术, 其灵敏度较高, 仅用少量试虫就可对抗药性程度进行检测, 可实现对 样品的高通量并行检测, 操作简单, 操作简单、 省时且试验误差小, 可以确定害虫个体的抗 药性程度, 这一点是生。

24、物测定方法所无法达到的。而实现分子抗药性监测就要对抗药性基 因进行全面了解, 检测更多的抗药性相关基因才能更准确的反映抗药性发展水平。 0008 昆虫抗药性机制是其体内基因调控的结果, 虽然研究者们已经对桔小实蝇的抗药 性机制从多个方面进行了探讨, 但是也存在着一些问题, 在抗药性靶标基因的研究上较少, 仅仅涉及到ace和alpha 6基因, 在代谢抗药性相关研究中也仅对个别酶或蛋白变化现象 进行了初步研究, 并没有涉及到其编码的基因研究。同时昆虫抗药性是多基因共同协调作 用的结果, 是一种多基因效应现象。 但到底有多少基因参与到抗药性作用、 不同的抗药性水 平涉及抗药性基因是否相同及抗药性基。

25、因是怎样参与抗药性过程等方面的研究尚缺少报 道。 发明内容 0009 本发明所要解决的技术问题是克服现有检测桔小实蝇抗药性的技术不足, 提供了 一种检测桔小实蝇抗敌百虫和高效氯氰菊酯的抗性相关基因表达水平的 cDNA 芯片。 0010 本发明的另一目的在于提供上述 cDNA 芯片的构建方法。 0011 本发明还有一个发明目的是提供上述芯片的应用。 0012 本发明的发明目的是通过以下技术方案予以实现 : 0013 提供一种检测桔小实蝇抗敌百虫和高效氯氰菊酯抗性水平的 cDNA 芯片, 所述芯 片包含 221 个靶基因 cDNA 探针 ; 其中 118 个靶基因 DNA 探针为桔小实蝇抗敌百虫抗。

26、性相关 特异性基因片段, 103 个靶基因 DNA 探针为桔小实蝇抗高效氯氰菊酯抗性相关特异性基因 片段。 0014 其中, 118 个桔小实蝇抗敌百虫特异性基因片段是 : S004(4)-A9、 S004(4)-B7、 S004(4)-D6、S004(4)-H9、S004(5)-B10、S004(5)-B5、S004(5)-C10、S004(5)-C7、 S004(5)-D1、S004(5)-D10、S004(5)-D11、S004(5)-G1、S004(5)-H3、S004(5)-H7、 S004(6)-10、S004(6)-12、S004(6)-18、S004(6)-21、S004(7)。

27、-100、S004(7)-109、 S004(7)-138、 S004(7)-156、 S004(7)-165、 S004(7)-183、 S004(8)-197、 S004(8)-199、 说 明 书 CN 103614473 B 5 3/11 页 6 S004(8)-217、 S004(8)-225、 S004(8)-240、 S004(8)-248、 S004(9)-293、 S004(9)-308、 S004(9)-328、 S004(10)-394、 S004(10)-401、 S004(10)-443、 S004(10)-471、 S005(1)-A1、 、 S005(1)-B2、。

28、 、S005(1)-C1、S005(1)-D12、S005(1)-G8、S005(2)-A8、S005(2)-C7、 S005(2)-E8、S005(2)-G1、S005(3)-A5、S005(3)-A9、S005(3)-A11、S005(3)-C11、 S005(3)-D12、S005(3)-D8、S005(3)-H12、S005(4)-A2、S005(4)-A3、S005(4)-A8、 S005(4)-B8、S005(4)-G1、S005(4)-G2、S005(5)-A5、S005(5)-B7、S005(5)-E11、 S005(5)-G6、 S005(5)-G9、 S005(5)-H2、。

29、 S005(6)-13、 S005(6)-17、 S005(6)-49、 S005(7)-98、 S005(7)-100、 S005(7)-103、 S005(7)-116、 S005(7)-107、 S005(7)-131、 S005(7)-176、 S005(7)-178、 S005(7)-181、 S005(7)-188、 S005(7)-189、 S005(8)-200、 S005(8)-194、 S005(8)-211、 S005(8)-212、 S005(8)-213、 S005(8)-216、 S005(8)-224、 S005(8)-235、 S005(8)-236、 S005。

30、(8)-254、 S005(8)-259、 S005(8)-261、 S005(8)-286、 S005(8)-264、 S005(9)-293、 S005(9)-299、 S005(9)-304、 S005(9)-308、 S005(9)-310、 S005(9)-312、 S005(9)-317、 S005(9)-329、 S005(9)-333、 S005(9)-350、 、 S005(9)-355、 S005(9)-357、 S005(9)-358、 S005(9)-359、 S005(9)-371、 S005(10)-388、 S005(10)-390、 S005(10)-401、 。

31、S007(3)-G11、 S007(6)-34、 S007(7)-107、 S007(7)-178、 S007(8)-192、 S007(8)-259、 S007(10)-420, 序列如 SEQ ID NO.5 SEQ ID NO.122 所示。 0015 103 个桔小实蝇抗高效氯氰菊酯特异性基因片段是 : S002(1)-A3、 S002(1)-B4、 S002(3)-D9、S002(3)-E7、S002(4)-C10、S002(4)-E4、S002(4)-F8、S002(5)-E5、 S002(6)-16、 S002(6)-19、 S002(6)-82、 S002(8)-270、 S0。

32、02(10)-416、 S002(10)-452、 S002(10)-444、 S008(1)-B2、 S008(1)-D11、 S008(1)-D5、 S008(1)-D6、 S008(1)-E3、 S008(1)-F10、 S008(1)-F12、 S008(2)-B1、 S008(2)-F10、 S008(2)-F12、 S008(2)-G1、 S008(3)-B10、 S008(3)-C11、 S008(3)-D10、 S008(5)-B12、 S008(5)-B8、 S008(5)-C7、 S008(5)-E5、S008(5)-G11、S008(5)-H2、S008(6)-14、S0。

33、08(6)-29、S008(6)-42、 S008(6)-58、S008(6)-64、S008(6)-77、S008(6)-85、S008(6)-93、S008(7)-130、 S008(7)-135、 S008(8)-276、 S003(1)-A10、 S003(1)-B6、 S003(1)-D7、 S003(1)-E1、 S003(1)-E9、 S003(1)-F2、 S003(1)-F5、 S003(1)-F9、 S003(1)-G4、 S003(2)-C6、 S003(2)-D4、 S003(2)-D5、S003(2)-E7、S003(2)-F3、S003(2)-G5、S003(3)-。

34、F1、S003(3)-H10、 S003(4)-A8、S003(4)-C1、S003(4)-C12、S003(4)-F1、S003(4)-G6、S003(5)-B11、 S003(5)-B2、 S003(5)-B8、 S003(5)-E6、 S003(5)-H5、 S003(6)-8、 S003(6)-32、 S003(6)-51、 S003(6)-74、 S003(6)-81、 S003(6)-92、 S003(7)-151、 S003(7)-160、 S003(7)-165、 S003(7)-167、 S003(7)-175、 S003(8)-196、 S003(8)-204、 S003(。

35、8)-220、 S003(8)-224、 S003(8)-231、 S003(8)-249、 S003(8)-271、 S003(8)-284、 S003(8)-288、 S003(9)-311、 S003(9)-312、 S003(9)-321、 S003(9)-352、 S003(10)-395、 S003(10)-404、 S003(10)-405、 S003(10)-406、 S003(10)-432、 S003(10)-469, 序列如 SEQ ID NO.123 SEQ ID NO.225 所 示。 0016 本发明提供的 cDNA 芯片的构建方法如下 : 0017 S1.SSH 。

36、文库构建 : 分别提取桔小实蝇敏感品系、 敌百虫抗性品系和高效氯氰菊酯 抗性品系的 RNA, 按本实验室构建 SSH 文库的策略和方法 (Li, 2011) , 分别构建与抗敌百虫 和抗高效氯氰菊酯相关的 SSH 文库 ; 说 明 书 CN 103614473 B 6 4/11 页 7 0018 S2. 从 S1 构建的两个文库中分别随机挑选 2820 个差减重组克隆子, 然后摇菌、 提 取重组质粒 DNA ; 0019 S3. 分别以 S2 获得的重组质粒 DNA 为模板, 以接头引物 Nested PCR Primer 1F (SEQ ID NO.1) 和 Nested PCR Prime。

37、r 2R(SEQ ID NO.2) 进行 PCR 扩增, 将各基因 PCR 产 物凝胶电泳检测其浓度和片段的单一性, 并进行纯化回收 ; 0020 S4. 将 S3 纯化产物采用芯片点样仪点样于化学修饰的载玻片载体上, 同时设置阳 性和阴性对照, 得到初始基因芯片 ; 0021 S5.分别采用构建SSH文库时使用的抗性品系总RNA和敏感品系总RNA为检测样, 对 S4 得到的初始基因芯片进行 DNA 芯片杂交, 去除假阳性差异基因, 选择在基因芯片上杂 交后上调信号值大于等于 2 的样品为抗性相关差异表达基因 ; 0022 S6. 以 S5 得到的抗性相关差异表达基因的重组质粒为模板进行 PC。

38、R 扩增, 引物同 S3 所述, 对产物进行纯化回收并测序, 序列采用 DNAstar 软件进行拼接组装, 去除重复和冗 繁序列, 挑取出单一非重叠序列作为特异性抗性相关靶标基因。 0023 S7. 将 S6 得到的特异性抗性相关靶标基因利用基因芯片点样仪点样于化学修饰 的玻璃片载体上, 同时设置阳性和阴性对照, 委托北京博奥生物有限公司构建检测桔小实 蝇抗敌百虫和抗高效氯氰菊酯的抗性水平的 cDNA 芯片。 0024 其中, 步骤 S1 所述 SSH 文库构建的具体操作包括接头连接、 第一次扣除杂 交、 第二次扣除杂交、 第一次抑制性 PCR、 第二次抑制性 PCR ; 利用桔小实蝇看家基因。

39、 G6PDH 进行半定量 PCR, 分别检测所述接头连接和消减杂交效率, 引物序列为 G6PDH-F : 5 -GCTGCCGAAACCTACAAA-3 (SEQ ID NO.3) , G6PDH-R : 5 -CGCTTATCATAGCCACCC-3 (SEQ ID NO.4) , 扩增片段中不含Rsa I 酶切位点。 0025 步骤 S7 所述化学修饰的玻璃片载体是指 : 通过化学反应在载体表面上引入氨基 官能团, 使 DNA 能够与表面官能团能共价结合, 稳定地固化于支持物表面。 0026 本发明具有以下有益效果 : 0027 本发明首次采用基因芯片技术, 发掘并寻找桔小实蝇抗药性相关基。

40、因片段, 然后 利用抗性相关基因片段点制成特异性靶标抗性相关 cDNA 芯片, 对桔小实蝇抗性水平进行 监测。可以同时对抗药性及敏感虫体内的成千上万个不同基因进行差异表达定量检测, 过 程简单有效, 弥补了传统生测方法的不足, 实现高通量、 快速、 准确实时监测桔小实蝇抗性 发展, 从而延缓其抗药性, 实现食品生产安全。 0028 另外, 分别通过对抗敌百虫 3.21 倍、 16.8 倍和 69.5 倍及抗高效氯氰菊酯 5.3 倍、 21.6 倍和 160.9 倍桔小实蝇成虫品系抗性相关基因表达水平的检测表明, 该基因芯片具有 高通量、 集成化和微型化的优点。 附图说明 0029 图 1 为 。

41、初始基因芯片筛选 SSH 克隆文库杂交扫描图。 0030 图 2 为 本发明制备 cDNA 芯片检测桔小实蝇抗性品系杂交扫描图。 具体实施方式 0031 以下结合具体实施例来进一步说明本发明, 除非特别说明, 本发明采用的试剂、 设 说 明 书 CN 103614473 B 7 5/11 页 8 备和实验方法为本技术领域常规试剂、 设备和方法。 0032 本发明实施例消减杂交 (SSH) 采用 Clontech 公司生产的试剂盒 (购自广州瑞真 生物公司, 具体操作参照本实验室李怡峰博士论文进行) ; PCR 扩增试剂、 感受态细胞 DH5 购自瑞真生物公司, 总 RNA 提取试剂 Trizo。

42、l 购自 Invitrogen 公司, 克隆载体 pGEM-T 购自 Promega 公司。 0033 分子生物学基本操作 : 琼脂糖凝胶电泳、 PCR 产物纯化回收、 克隆连接、 转化、 质粒 提取、 酶切鉴定等分子生物学操作按照 分子克隆实验操作指南 (科学出版社, 第三版, 黄 培堂编译, 2002 年) 操作。序列测序有上海英潍捷基公司广州分公司完成。 0034 实施例 1 检测桔小实蝇抗敌百虫和高效氯氰菊酯抗性水平的 cDNA 芯片的构建 0035 1、 桔小实蝇抗敌百虫和高效氯氰菊酯抗性品系 SSH 文库的构建 0036 (1) 桔小实蝇抗性品系选育 : 0037 用试验室饲养保留。

43、的敏感品系作为抗药性品系筛选的亲代 F0, 在室内同一条件下 饲养, 采用药膜法, 分别用敌百虫和高效氯氰菊酯进行逐代筛选。 0038 敏感品系 F0的选择标准 : 敌百虫对桔小实蝇成虫敏感品系的致死中浓度 LC50=2.65mg/L ; 高效氯氰菊酯对桔小实蝇敏感品系的致死中浓度 LC50=3.36mg/L。 0039 抗性品系的获得 : 经过一些代数的筛选后, 敌百虫筛选至 22 代后, 敌百虫对桔小 实蝇成虫的致死中浓度LC50=184.17mg/L ; 高效氯氰菊酯筛选至24代后, 高效氯氰菊酯对桔 小实蝇成虫的致死中浓度为 LC50=538.49mg/L。 0040 具体筛选步骤为 。

44、: 首先测定亲代 (F0) 对敌百虫和高效氯氰菊酯的毒力敏感基线, 然后采用药膜法, 以致死中浓度 (LC50) 对种群进行抗药性筛选 ; 以丙酮稀释药剂至亲代 LC50浓度, 均匀涂布于 250mL 锥形瓶中, 待丙酮完全挥发后, 放入 50-60 头羽化后 3-5 天的 桔小实蝇成虫, 用医用纱布封口, 倒置 24hr, 条件为 : 光周期 : 14hr 光照 : 10hr 黑暗, 温度 26-30, 湿度 : 60%-95%。24hr 后, 存活下来的成虫移入养虫笼中用人工饲料饲养。连续处 理三代。 从第四代开始根据第三代成虫的LC50浓度处理接下来的三代, 以此类推, 使其种群 获得抗。

45、药性, 得到桔小实蝇抗敌百虫和抗高效氯氰菊酯成虫品系。 0041 (2) 分别以步骤 (1) 中各抗性品系为检测子, 以敏感品系成虫为驱动子, 分别构建 各抗性品系特异性差异基因表达文库。 0042 构建的特异性差异基因表达文库经过两轮消减杂交和 2 次选择性 PCR 后, 获得了 库容量为 9.48103的桔小实蝇成虫抗敌百虫品系差异基因表达文库, 库容量为 1.05104 的桔小实蝇成虫抗高效氯氰菊酯品系差异基因表达文库。 0043 2、 初始基因芯片的制备 0044 (1) 从抗敌百虫和抗高效氯氰菊酯品系SSH文库中分别随机挑选2820个差减重组 克隆子, 然后摇菌、 提取重组质粒 DN。

46、A。 0045 (2) 采用 Nested PCR Primer 1F (序列见 SEQ ID NO.1) 和 Nested PCR Primer 2R (序列见 SEQ ID NO.2) 引物分别 PCR 扩增每一个重组质粒。PCR 体系包括 10PCR Buffer 10L、 2.5mmol/L dNTP 8L、 F/2R 引物 (10mol/L) 各 4L, 重组质粒 DNA 模板 10-50ng、 Taq DNA 聚合酶 (5U/L) 0.5L, 加无菌水至 100L。PCR 反应参数 : 94变性 30S, 68 退火 30S, 72延伸 1.5min, 35 个循环, 72延伸 5。

47、min。 0046 (3) 用酒精-异丙醇法沉淀纯化PCR扩增产物, 凝胶电泳检测其浓度和片段的单一 说 明 书 CN 103614473 B 8 6/11 页 9 性, 以桔小实蝇 G6PDH、 28S 和 -actin 基因为内参基因对照, 产物送北京博奥生物有限公 司点制成芯片, 纯化产物采用芯片点样仪点样于化学修饰的载玻片、 硅片、 膜或高分子材料 等载体上。芯片样品还包括 Hex 作为阳性对照, Blank(点样溶液) 作为阴性对照。整个点 阵分为32个亚阵列, 亚阵列有12列, 11行, 点间距为150m, 点的直径约为100m, 每个样 品在芯片上重复 3 次。 0047 3、 。

48、cDNA 芯片杂交确定桔小实蝇成虫抗敌百虫和抗高效氯氰菊酯抗性相关基因片 段 0048 分别采用构建 SSH 文库时使用的抗性品系总 RNA 和敏感品系总 RNA 为检测样, 进 行 cDNA 芯片杂交, 去除假阳性差异基因 ; 选择在基因芯片上杂交后上调信号值大于等于 2 的样品为抗性差异表达片段 ; 以重组质粒为模板, 上述 Nested PCR Primer 1F 和 Nested PCR Primer 2R 引物进行 PCR 扩增, 扩增体系与反应参数同步骤 (2) 所述, 对产物进行纯化 回收并测序, 序列采用 DNAstar 软件进行拼接组装, 去除重复和冗繁序列, 挑取出单一非重。

49、 叠序列序列作为抗性相关特异性靶片段。 0049 芯片杂交 : 探针 RNA 样品的荧光标记采用晶芯 cRNA 扩增标记试剂盒 (博奥生物 有限公司, 产品目录号 : 360060-10) , 具体操作按照说明书进行。标记的 DNA 溶于 80l 杂 交液中 (3SSC, 0.2%SDS, 5Denhart s, 25%甲酰胺), 于42杂交过夜。 杂交结束后, 先在 42左右含 0.2% SDS, 2SSC 的液体中洗 5 min, 而后在 0.2SSC 中室温洗 5 min。 玻片甩干后即可用于扫描。 0050 芯片扫描 : 芯片用 LuxScan 10KA 双通道激光扫描仪进行扫描。 0051 芯片图像的采集与数据分析 : 采用 LuxScan 3.0 图像分析软件 (CapitalBio 公 司 ) 对芯片图像 (图 1) 进行分析, 把图像信号转化为数字信号 ; 根据 cy5 和 cy3 总体信号 的整体平均值 (global mean) 对各芯片进行片间线性校正 ; 使用 Lowess 方法进行片内归 一化 ; 每个基因有三个以上重复比值, 即用 SAM 软件进行分析, FDR 控制在 5% 以内, 再以 2 倍标准筛选差异表达基因。 0052 4、 检测 cDNA 芯片的制备 0053 。

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