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1、(10)申请公布号 CN 102174120 A (43)申请公布日 2011.09.07 CN 102174120 A *CN102174120A* (21)申请号 201110060127.9 (22)申请日 2011.03.14 C08B 37/00(2006.01) C12S 3/02(2006.01) C12P 19/04(2006.01) (71)申请人 盐城工学院 地址 224051 江苏省盐城市迎宾大道 9 号 (72)发明人 余晓红 邵荣 许琦 陈洪兴 张春银 许伟 (54) 发明名称 一种海蓬子多糖提取和生物活性修饰方法 (57) 摘要 本发明涉及海蓬子多糖的提取分离和活性。
2、修 饰。本发明所述的海蓬子包括鲜菜和植株嫩茎 ； 海蓬子经打浆或干燥粉碎后， 采用超声辅助酶法 提取海蓬子多糖 ； 采用膜分离技术进行海蓬子多 糖的分离纯化 ； 采用凝胶过滤色谱 (GPC) 分析多 糖分子量及分散度 ； 采用气相色谱 (GC) 方法确定 单糖组成及比例 ； 采用酶可控降解和酶促酰化修 饰多糖。为制备高活性的海蓬子多糖及其相关产 品奠定基础。 (51)Int.Cl. (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 3 页 CN 102174124 A1/1 页 2 1. 海蓬子海蓬子多糖的提取分离和活性修饰。 2. 根据权利要求 1 所述。
3、的海蓬子， 其特征是 ： 本发明所述的海蓬子包括海蓬子鲜菜、 海 蓬子植株的嫩茎。 3. 根据权利要求 1 所述的海蓬子多糖的提取分离， 其特征是 ： 海蓬子经打浆或干燥粉 碎后， 采用超声辅助酶法提取海蓬子多糖 ； 采用膜分离技术进行海蓬子多糖的分离纯化。 4. 根据权利要求 1 所述的海蓬子多糖活性修饰， 其特征是 ： 采用酶可控降解和酶促酰 化修饰海蓬子多糖。 权 利 要 求 书 CN 102174120 A CN 102174124 A1/3 页 3 一种海蓬子多糖提取和生物活性修饰方法 技术领域 0001 本发明涉及海蓬子在制备生物活性物质中的应用。 背景技术 0002 多糖是近年热。
4、点研究的生物活性物质， 具有显著的调节机体免疫功能和对肿瘤细 胞的抑制作用， 同时对正常细胞无任何毒副作用， 在开发新药药品、 功能食品方面具有特殊 的优势。近些年来， 沿海滩涂和盐荒地以及海水资源的开发利用已成为人类生存面临的重 大课题， 并引起全世界范围的广泛关注。 由此， 盐土农业和海水灌溉农业在世界范围逐渐兴 起。 海蓬子即为盐土农业典型的产物， 我国海蓬子资源十分丰富， 海蓬子多糖是海蓬子体内 最具有应用前景的一类生理活性物质， 海蓬子多糖具有独特的增强机体免疫功能、 抗肿瘤、 抗辐射和抗衰老作用， 已越来越多地引起世界各国的重视， 海蓬子多糖将逐步成为生物多 糖的主要来源之一。目前。
5、对于多糖提取主要采用酸提、 碱提、 水提及萃取剂辅助提取等方 法， 酸或碱提取工艺会破坏多糖的硫酸酯基结构， 产品多糖生物活性下降， 热水提取时间较 长， 得率低。常规的浸提法提取的多糖产品纯度低， 分离、 纯化工艺复杂， 且引入有机溶剂， 带来潜在的产品安全和环境问题。 0003 针对国内还没有一套完整的海蓬子多糖的高效分离纯化技术和方法， 且缺乏海蓬 子多糖的分子生物修饰技术研究， 创建高纯度和高生物活性海蓬子多糖制备技术、 海蓬子 多糖的生物修饰技术， 通过活性追踪获得高活性 ( 抗肿瘤活性、 免疫调节作用 ) 的修饰产 物， 创建有特殊结构和活性海蓬子多糖的修饰方法， 可以体现多糖的高。
6、效制备及修饰技术 领域的前沿性核心技术， 解决海蓬子多糖的高效制备技术问题， 全面提升我国盐土农业生 物制造和食品精细加工技术水平和自主创新能力。 可以使我国生物活性多糖的高效制备技 术在整体上达到国际先进水平， 为建立以 “绿色、 高效、 健康、 安全” 为特征的中国食品工业 技术创新体系做出重大贡献， 同时也为开发具有免疫调节、 抗肿瘤、 抗衰老的多糖新药品资 源， 研制具有明确的功能因子和功能特性的功能食品提供理论依据和技术支撑。研究成果 对我国盐土农业资源的开发和高附加值利用， 发展盐土农业经济， 促进农民增收， 都具有特 别重要的意义。 0004 海蓬子蔬菜富含蛋白质、 氨基酸、 碳。
7、水化合物、 - 胡萝卜素、 维生素 C 以及钠、 钾、 钙、 镁、 铁、 锌、 碘等海洋矿物质、 微量元素及其它一些生物活性物质。海蓬子的营养保健价 值越来越受到国际社会的重视和公认， 近些年来， 科学家对海蓬子药用保健机理的研究也 越来越深入， 得到一系列研究成果， 取得了重大进展。截至目前， 已被科学家研究证明的药 用保健价值包括降三高 ( 血压、 血糖和血脂 )、 抗氧化、 抗炎、 免疫调节、 预防癌症、 减肥与皮 肤美白等。但对于海蓬子活性物尤其是多糖的有效提取和结构的修饰及构效关系研究， 尚 未见报道。 0005 此外， 除了作为新鲜蔬菜外， 目前世界上已经陆续出现许多海蓬子蔬菜的加。
8、工产 品， 如冻干蔬菜、 腌渍蔬菜、 蔬菜粉等。也开发了以海蓬子蔬菜为主要原料加工生产的各种 保健产品， 产品有粉剂、 水剂、 丸剂、 胶囊等各种剂型。 国内还没有一套完整的海蓬子多糖的 说 明 书 CN 102174120 A CN 102174124 A2/3 页 4 高效分离纯化技术和方法， 且缺乏海蓬子多糖的分子生物修饰技术研究， 因而， 如何使海蓬 子深加工产品向高附加值综合利用转化， 是海蓬子蔬菜产业发展的重要方向。 发明内容 0006 本发明的目的 ： 以海蓬子多糖高效分离提取及生物修饰技术研究为重点， 体现多 糖的高效制备及修饰技术领域的前沿性核心技术， 解决海蓬子多糖的高效制。
9、备技术问题， 全面提升我国盐土农业生物制造和食品精细加工技术水平和自主创新能力。 0007 本发明的技术方案 ： 海蓬子鲜菜和植株嫩茎经打浆或干燥粉碎后， 采用超声辅助 酶法提取海蓬子多糖 ； 采用膜分离技术进行海蓬子多糖的分离纯化 ； 采用凝胶过滤色谱 (GPC) 分析多糖分子量及分散度 ； 采用气相色谱 (GC) 方法确定单糖组成及比例 ； 采用酶可 控降解和酶促酰化修饰多糖。为制备高活性的海蓬子多糖及其相关产品奠定基础。 0008 本发明的有益效果 ： 使我国生物活性多糖的高效制备技术在整体上达到国际先进 水平， 为建立以 “绿色、 高效、 健康、 安全” 为特征的中国食品工业技术创新体。
10、系做出重大贡 献， 同时也为开发具有免疫调节、 抗肿瘤、 抗衰老的多糖新药品资源， 研制具有明确的功能 因子和功能特性的功能食品提供理论依据和技术支撑。 研究成果对我国盐土农业资源的开 发和高附加值利用， 发展盐土农业经济， 促进农民增收， 都具有特别重要的意义。 具体实施方式 0009 下面结合具体实施例对本发明进行进一步说明， 但实施例不限制本发明的保护范 围。 0010 实施例 1 海蓬子多糖的纯化 0011 研究证明， 用浓度 2 6的 TCA 去蛋白， 用浓度 50 85的乙醇溶液沉淀多糖 ； 此条件下， 多糖的得率可达到34.5， 纯度达到5060。 三氯乙酸结合微滤(0.1m) 。
11、技术可以使蛋白清除率达到 80 85， 超过相同条件下只用三氯乙酸的 50 60， 同时 多糖损失率仅为 4 6。通过超滤膜孔径的筛选， 选用截留分子量分别为 30kDa 和 1kDa 的膜。确定了超滤过程中的工艺参数， 分别为操作压力为 8 12psi， 温度 30 45， 时间 1 2.5h。超滤技术的应用将减少有机溶剂的污染， 同时有利于缩短生产周期， 减少成本。 0012 实施例 2 多糖的生物活性研究 0013 通过用动物试验来评价海蓬子多糖增强免疫功能方面的作用。按 0.4ml/20g BW-1 的量灌胃给予小鼠75mg mL-1、 50mg mL-1和25mg mL-1三个剂量的。
12、海蓬子多糖溶液， 连续进行 30 天。测定各实验组的体重、 相关脏器重， 迟发型变态反应 (DTH)、 血清凝集素抗体积数和 吞噬细胞作用。结果表明， 在 75mg mL-1和 50mg mL-1的剂量下， 小鼠的吞噬指数、 吞噬率和 迟发型变态反应 (DTH)、 抗体积数与对照相比， 差异都十分显著 (P 0.05) ； 而在 25mg mL-1 的剂量下， 小鼠只在非特异性免疫和体液免疫(即在吞噬指数、 吞噬率和抗体积数)中与对 照相比差异显著(P0.05)。 这表明， 海蓬子多糖对小鼠的免疫功能有显著的调节作用， 其 活性依赖于海蓬子多糖的试验剂量。 0014 体外实验研究证明， 海蓬子。
13、多糖能够显著地促进大、 小鼠脾淋巴细胞和大鼠睾丸 支持细胞的增殖， 能够抑制绵羊红血球诱导 (SRBC) 的小鼠迟发型变态反应， 能够增长小白 鼠游泳时间， 同时对癌细胞有一定的杀伤作用， 表明海蓬子多糖具有提高免疫力、 促进生殖 说 明 书 CN 102174120 A CN 102174124 A3/3 页 5 功能、 抗疲劳以及抑制癌细胞的作用。 0015 实施例 3 多糖的生物修饰 0016 结果表明， 脂肪酶在非水介质和许多特殊的反应体系中不仅能高效催化海蓬子多 糖进行酰化反应， 而且还具有较高的稳定性和选择性。不同来源的酶能催化多糖化合物中 不同位点的羟基区域选择性酰化 ； 同种酶在不同的反应介质中表现出不同的选择性。 说 明 书 CN 102174120 A 。