FKBP抑制剂 本发明涉及1-杂芳基-吡咯烷、-哌啶和-高哌啶衍生物及其制备方法、其制备中所用的中间体、含有该衍生物的组合物以及所述衍生物的用途。
据报道，免疫抑制剂FK-506可以在体外促进神经细胞系和培养模型中的轴突分枝(参见Lyons等，《美国国家科学院院报》(Pro.Natl.Acad.Sci.),1994,91,3191-95和Snyder等，《天然药物》(Nature Medicine),1995,1,32-37)。国际专利申请号WO96/40140、WO 96/40633和WO 97/16190公开了具有神经营养活性但对蛋白磷酸酶钙调磷酸酶缺乏抑制作用从而没有免疫抑制活性的化合物。
国际专利申请公开号WO 96/40140和WO 96/40633中提出，这些化合物的神经营养作用至少部分是由与FK-506结合蛋白例如FKBP-12或FKBP-52的高亲和性相互作用所介导的。但是，由这种与FKBP-型亲免素的相互作用引起神经营养作用的机制目前还不清楚。对可以通过该神经营养/非免疫抑制剂类型的化合物实现的神经营养活性的范围进行了研究，结果发现，可以在大鼠中促进面部神经压碎和坐骨神经压碎后的轴突再生。还观察到了可以通过文中所公开的化合物在小鼠中促进用毒素MPTP损伤的多巴胺神经元功能的恢复。此外，还报道了在用6-羟基多巴胺损伤多巴胺能神经元后，可以用文中所公开的化合物促进大鼠纹状体神经分布的恢复(参见Hamilton & Steiner,《当代药物设计》(Current Pharmaceutical Design),1997,3,405-428)。
国际专利申请公开号WO 98/00278、WO 98/13343、WO 98/13355、WO 98/20891、WO 98/20892和WO 98/20893描述了各种在杂环的1位带有酰基、酰胺、草酰基或类似的连接基团的神经营养性吡咯烷、哌啶和高哌啶衍生物。
美国专利5,721,256描述了各种在杂环的1位带有SO2连接基团、对旋转异构酶具有亲和性的吡咯烷、哌啶和高哌啶衍生物。
欧洲专利申请号0657451 A2以通式地形式公开了大量用作白三烯生物合成抑制剂的2-(1-吡咯烷基)-苯并噁唑类化合物，并具体公开了1-(5-氯-2-苯并噁唑基)脯氨酸甲酯。
现已发现，本发明公开的化合物是对FKBP-型亲免素具有亲和性的神经营养剂。具体地讲，它们是酶活性、尤其是FKBP-型亲免素、特别是亲免素FKBP-12和FKBP-52的顺-反脯氨酰异构酶(旋转异构酶)活性的强效抑制剂。本发明的化合物对蛋白磷酸酶钙调磷酸酶没有明显的抑制作用，因此没有任何明显的免疫抑制活性。
本发明的物质可以减轻神经元变性并促进神经元的再生和分枝，因此可用于治疗由于神经变性疾病引起的神经病学疾病或其它涉及神经损伤的疾病。可以治疗的神经病学疾病包括老年性痴呆(早老性痴呆)和其它痴呆症、肌萎缩性侧索硬化和其它形式的运动神经元疾病、帕金森氏症、杭廷顿氏舞蹈病、与中风有关的神经病学缺陷、影响中枢或外周神经系统的各种形式的变性疾病(例如小脑-脑干萎缩、进行性共济失调综合征)、各种形式的肌营养不良、进行性肌萎缩、进行性延髓肌萎缩、对中枢或外周神经系统(例如脊髓)的物理或创伤性损伤、突出、破裂或脱出的椎间盘综合征、颈椎关节强硬、神经丛疾病、胸腔出口综合征、各种形式的外周神经病(糖尿病性的和非糖尿病性的)、三叉神经痛、舌咽神经痛、面神经麻痹、导致中枢或外周神经系统损伤的各种形式的自身免疫相关性疾病(例如多发性硬化、重症肌无力、格-巴二氏综合征)、神经系统的AIDS相关性疾病、氨苯砜抽搐(dapsone ticks)、视神经的眼球和眼球后病变(例如视网膜病和眼球后神经炎)、听力障碍例如耳鸣和朊病毒疾病。
优选本发明的化合物可用于治疗老年性痴呆(早老性痴呆)或其它的痴呆症、肌萎缩性侧索硬化和其它形式的运动神经元疾病、帕金森氏症、杭廷顿氏舞蹈病、与中风有关的神经病学缺陷、对中枢或外周神经系统(例如脊髓)的物理或创伤性损伤、外周神经病(糖尿病性的或非糖尿病性的)、多发性硬化或听力障碍例如耳鸣。
本发明的物质是式(Ⅰ)化合物、或其可药用盐或式(Ⅰ)化合物或其可药用盐的溶剂化物：其中：
X是O、S、NH或N(C1-C6烷基)；
R1、R2、R3和R4彼此独立地是H、OH、OCO(C1-6烷基)、CO2(C1-6烷基)、CONH2、CONH(C1-6烷基)、CON(C1-6烷基)2、卤素、C3-7环烷基、C3-7环烷氧基、C2-6链烯基、芳基1、被一个或多个选自卤素和C3-7环烷基的取代基选择性取代的C1-6烷基和被一个或多个选自氟和C3-7环烷基的取代基选择性取代的C1-6烷氧基；
A是选择性地被最多3个C1-6烷基取代的直链C3-C5亚烷基；
D是O或S；
E是O、S、NH、N(C1-6烷基)或CR11R12；
G是C1-14烷基或C2-14链烯基，所述烷基和链烯基均选择性地被一个或多个彼此独立地选自卤素、芳基、C1-4烷氧基、环烷基、het和NR5R6的取代基所取代；
R5和R6彼此独立地是H或C1-6烷基，或者与它们所连接的氮原子合在一起形成选择性地含有选自NR7、O和S(O)p的其它杂原子部分的4至7元杂环，并且所述4至7元杂环选择性地被最多3个彼此独立地选自C1-6烷基和C1-6烷氧基的取代基所取代；
R7是H、C1-6烷基、C2-6链烯基、COR8、SO2R8、CONR9R10、CO2R8或SO2NR9R10；
R8是C3-7环烷基、C2-6链烯基、芳基1或选择性地被C3-7环烷基或芳基1取代的C1-6烷基；
R9和R10彼此独立地是H、C2-6链烯基、C3-7环烷基或选择性地被C3-7环烷基或芳基取代的C1-6烷基；
R11和R12彼此独立地是H、芳基、C2-8链烯基或C1-8烷基，其中所述的C2-8链烯基和C1-8烷基选择性地被一个或多个彼此独立地选自卤素、NO2、C1-6烷基、C2-6链烯基、环烷基、OH、C1-6烷氧基、C2-6链烯氧基、苯氧基、苄氧基、NH2、芳基和het的取代基所取代；
p是0、1或2；
其中的“芳基”是指苯基或萘基，所述苯基和萘基选择性地被最多3个彼此独立地选自选择性地被一个或多个卤素或C3-7环烷基取代的C1-6烷基、C2-6链烯基、C1-6烷氧基、C2-6链烯氧基、OH、卤素、NO2、苯氧基、苄氧基、苯基和NH2的取代基所取代；
“芳基1”是指苯基、萘基或苄基，这些基团均选择性地被1个或2个彼此独立地选自选择性地被一个或多个卤素或C3-7环烷基取代的C1-6烷基、C1-6烷氧基和卤素的取代基所取代；
“环烷基”是选择性地被最多3个彼此独立地选自C2-6链烯基、C1-6烷氧基、C2-6链烯氧基、OH、卤素和选择性地被一个或多个卤素取代的C1-6烷基的取代基所取代的C3-8环烷基；
“het”是指含有1至3个彼此独立地选自O、N和S的杂原子的5或6元单环或8、9或10元二环的杂环基团，该基团选择性地被最多3个彼此独立地选自选择性地被一个或多个卤素或C3-7环烷基取代的C1-6烷基、C2-6链烯基、C1-6烷氧基、C2-6链烯氧基、OH、卤素、NO2、苯氧基、苄氧基和NH2的取代基所取代；
条件是，该化合物不是1-(5-氯-2-苯并噁唑基)脯氨酸甲酯。
在上述定义中，“卤素”是指氟、氯、溴或碘。除非另外说明，当碳原子数允许时，烷基、烷氧基、链烯基、亚烷基和亚烯基可以是直链或支链的。
在此可以理解，当X是NH时，在某些条件下NH的质子可以移动并可以停留在苯并咪唑环的另一个氮原子上，即如下的结构式(ⅠA)：
可以理解，所有这些式(ⅠA)化合物均作为其互变异构体包括在式(Ⅰ)化合物的范围内。
式(Ⅰ)化合物的可药用盐包括其酸加成盐和碱盐。
适宜的酸加成盐从可以形成无毒盐的酸形成，所述无毒盐的例子是盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、硝酸盐、磷酸盐、磷酸氢盐、乙酸盐、马来酸盐、富马酸盐、乳酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、葡糖酸盐、琥珀酸盐、蔗糖酸盐、苯甲酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐和扑酸盐。
适宜的碱盐从可以形成无毒盐的碱形成，所述无毒盐的例子是钠盐、钾盐、铝盐、钙盐、镁盐、锌盐和二乙醇胺盐。
适宜的盐的综述可以参见Berge等，《药学杂志》(J.Pharm.Sci.),1977,66,1-19。
式(Ⅰ)化合物的可药用溶剂化物包括其水合物。
本发明物质的多晶型及其放射标记的衍生物也包括在本发明物质的范围内。
式(Ⅰ)化合物含有一个或多个不对称碳原子，因此以两种或多种立体异构体形式存在。本发明包括式(Ⅰ)化合物的单个的立体异构体及其(如果有的话)单个的互变异构体形式以及它们的混合物。
某些式(Ⅰ)化合物还可以以几何异构体形式存在。本发明包括式(Ⅰ)化合物的单个的几何异构体及其混合物。
非对映体和几何异构体的分离可以通过常规技术来完成，例如，将式(Ⅰ)化合物或其适宜的盐或衍生物的异构体混合物进行分级结晶、色谱分离或HPLC。式(Ⅰ)化合物的单个对映体还可以从相应的光学纯的中间体制备或通过拆分、例如将相应的外消旋体用适宜的手性载体进行HPLC或将由相应的外消旋体与适宜的光学活性的酸或碱(必要时)反应形成的非对映体盐进行分级结晶制得。
某些式(Ⅰ)化合物可以以互变异构体存在。应当理解，本发明包括式(Ⅰ)化合物的所有单个互变异构体及其混合物。
优选X是O或NH。
优选R1、R2、R3和R4中至少有两个是H。
优选R1是H、卤素或CO2(C1-6烷基)。
更优选R1是H或CO2CH3。
优选R2是H、卤素、C3-7环烷基、C3-7环烷氧基、C2-6链烯基、选择性地被一个或多个选自卤素和C3-7环烷基的取代基取代的C1-6烷基或选择性地被一个或多个选自氟和C3-7环烷基的取代基取代的C1-6烷氧基。
更优选R2是H、卤素、选择性地被一个或多个选自卤素和C3-7环烷基的取代基取代的C1-6烷基或选择性地被一个或多个C3-7环烷基取代的C1-6烷氧基。
仍更优选R2是H、卤素、选择性地被一个或多个卤素取代的C1-4烷基，或C1-4烷氧基。
更优选R2是H、F、I、Br、Cl、CH3、C2H5、CH2CH(CH3)2、CF3、OCH3或OCH(CH3)2。
首选R2是H、F、Cl、Br、I或CF3。
优选R3是H、卤素、C3-7环烷基、C3-7环烷氧基、C2-6链烯基、选择性地被一个或多个选自卤素和C3-7环烷基的取代基取代的C1-6烷基或选择性地被一个或多个选自氟和C3-7环烷基的取代基取代的C1-6烷氧基。
更优选R3是H、卤素、选择性地被一个或多个选自卤素和C3-7环烷基的取代基取代的C1-6烷基或选择性地被一个或多个C3-7环烷基取代的C1-6烷氧基。
仍更优选R3是H、卤素、选择性地被一个或多个卤素取代的C1-4烷基，或C1-4烷氧基。
更优选R3是H、F、I、Br、Cl、CH3、C2H5、CH2CH(CH3)2、CF3、OCH3或OCH(CH3)2。
首选R3是H、F、Cl、Br、I或CF3。
当X是O或NH时，R2和R3优选彼此独立地是H、卤素或CF3。
优选R4是H、卤素或C1-6烷基。
更优选R4是H或CH3。
优选A是选择性地被C1-6烷基取代的直链C3-5亚烷基。
更优选A是直链的C3-5亚烷基。
首选A是亚丁基，即(CH2)4。
优选D是O。
优选E是NH或N(C1-6烷基)。
首选E是NH。
优选G是C1-14烷基或C2-14链烯基，它们被彼此独立地选自het、芳基、环烷基或NR5R6的取代基单取代或二取代。
更优选G是C2-4烷基或C2-4链烯基，它们在末端被NR5R6单取代。
仍更优选G是C2-4烷基或C2-4链烯基，它们在末端被NR5R6取代，其中R5和R6彼此独立地是H或C1-6烷基，或者R5和R6与它们所连接的氮原子合在一起形成选择性地含有选自NR7或O的其它杂原子部分的5至7元环，并且所述的环选择性地被最多3个彼此独立地选自C1-6烷基和C1-6烷氧基的取代基所取代，其中R7是H、C1-6烷基、COR8或CONR9R10。
更加优选G是(CH2)mNR5R6，其中m是2、3或4,R5和R6或者都是H，或者与它们所连接的氮原子合在一起形成6元环，所述6元环在与(CH2)m部分直接相连的环氮原子的4位选择性地含有选自NH、NCOCH3、NCH3、NCONHCH(CH3)2或O的其它杂原子部分，并且所述的环选择性地在与直接和(CH2)m部分相连的环氮原子相邻的环原子上被最多2个CH3取代基取代。
进一步优选G是(CH2)2NR5R6，其中R5和R6或者都是H，或者与它们所连接的氮原子合在一起形成6元环，所述6元环在与(CH2)m部分直接相连的环氮原子的4位选择性地含有选自NH、NCOCH3、NCH3、NCONHCH(CH3)2或O的其它杂原子部分，并且所述的环选择性地在与直接和(CH2)2部分相连的环氮原子相邻的环原子上被最多2个CH3取代基取代。
首选G是(CH2)2NR5R6，其中NR5R6是哌啶子基(piperidino)、吗啉代、哌嗪子基(piperazino)，其中R13是H、COCH3、CH3或CONHCH(CH3)2。
优选化合物具有下式(ⅠB)所示的立体化学。
一组优选的物质是其中的取代基X、A、D、E、G、R1、R2、R3和R4具有以下实施例中所给出的含义并且立体化学如以上式(ⅠB)所示的化合物。
首选的一组物质是以下实施例中的化合物及其盐和溶剂化物。
特别优选的物质是实施例3、10、11、12、16、17、18、19、20、22、27和31的化合物及其盐和溶剂化物。
式(Ⅰ)化合物可以通过多种方法采用常规的操作进行制备，例如通过以下描述的方法及其适宜的改变形式进行制备。所述方法是本发明的另一个方面。
以下除非另外说明，取代基均如以上式(Ⅰ)化合物所定义。方法1
所有式(Ⅰ)化合物均可以通过将如下式(Ⅱ)的化合物(如果必要包括其区域异构体(ⅡA))与如下式(Ⅲ)的化合物反应制得，其中X1是O、S、N(C1-6烷基)或N(APG)，其中“APG”是易于脱除而给出相应的NH化合物的氨基保护基，L1是适宜的离去基例如Cl、Br、I、SH、SCH3、SO2CH3、SO2CF3、OSO2CH3或OSO2CF3。
适宜的氨基保护基是化学领域技术人员公知的，其例子可以参见“有机合成中的保护基(Protecting Groups in OrganicSynthesis)”,TW Greene和PGM Wuts,John Wiley & Sons Inc.,1991，该文献引入本文作为参考。优选的氨基保护基是叔丁氧基羰基(“Boc”)基团，该基团可以在上述式(Ⅱ)和式(Ⅲ)化合物的反应过程中容易地就地脱除，或者在随后通过用三氟乙酸(TFA)在适宜的溶剂如二氯甲烷中处理进行脱除。
反应一般通过将反应物(Ⅱ)(必要时包括其区域异构体(ⅡA))和(Ⅲ)一起在适宜的有机溶剂如二甲基乙酰胺中加热至25-200℃、优选80℃左右来完成，反应中可选择性地存在碱如三乙胺或二异丙基乙基胺，并可选择性地存在金属例如铜。
式(Ⅱ)化合物(必要时包括其区域异构体(ⅡA))和式(Ⅲ)化合物可以通过常规方法例如以下制备例中描述的方法制得。方法2
其中X是O或S，D是O，E是O、S、NH或N(C1-6烷基)的式(Ⅰ)化合物可以通过将式(Ⅳ)化合物与式G-E-H的化合物或其盐反应制得：其中X是O或S,L2是适宜的离去基如叠氮化物、甲磺酸酯、甲苯磺酸酯、OH、Cl、Br、I等，包括其中COL2部分是适宜的活泼酯的情况。所述活泼酯的例子可以从母体的酸(Ⅳ；L2是OH)通过例如与羟基苯并三唑类型的试剂如1-羟基苯并三唑和碳化二亚胺试剂如1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺反应得到。这些类型的酸活化试剂可以单独使用或组合使用。可以单独使用的羟基苯并三唑类试剂的例子是苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)-鏻六氟磷酸盐和O-(1H-苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基四氟硼酸盐。L2的其它例子包括由(Ⅳ；L2是OH)与五氟苯酚和N-羟基琥珀酰亚胺反应衍生得到的部分。同样，还可以使用使式(Ⅳ)化合物成为混合酸酐的L2部分，其例子包括由式(Ⅳ；L2是OH)化合物与诸如氯甲酸异丁酯和二(2-氧代-3-噁唑烷基)-膦酰氯的试剂反应所生成的化合物。此外，L2还可以是咪唑基，该化合物通过将式(Ⅳ；L2是OH)化合物与N,N’-羰基二咪唑反应得到。
式(Ⅳ)化合物与式G-E-H化合物的反应适宜在适宜的溶剂中、在选择性地存在碱例如N-甲基吗啉的条件下进行。
此外，其中X是O或S,D是O,E是O、NH或N(C1-6烷基)的式(Ⅰ)化合物可以通过将例如其中的L2是OH的式(Ⅳ)化合物(必要时包括其互变异构体)与其中E是O、NH或N(C1-6烷基)的式G-E-H化合物一起直接加热进行制备，反应中可以选择性地存在催化剂例如适宜的酸或碱，并可选择性地在适宜的溶剂中进行。
此外，在类似的合成中，其中X是NH的式(Ⅰ)化合物可以通过将式(ⅣA)或(ⅣB)的化合物反应制得：其中X2是N-APG，其中APG如以上的方法1中所定义。
其中X2是N-Boc并且L2是OH的式(ⅣA)或(ⅣB)化合物可以在某些情况下，例如在某些脱水系统如羟基苯并三唑/1-(3-二甲基氨基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐/N-甲基吗啉的存在下在适宜的有机溶剂例如二氯甲烷中，形成式(ⅣC)和(ⅣD)的化合物：该化合物可以是稳定的并且可以分离。
式(Ⅳ)化合物(必要时包括其互变异构体)可以通过标准的方法，例如以下制备例中所描述的方法及其适当的改变形式进行制备。
式G-E-H的化合物可以购买到，或者可以通过常规方法，例如以下制备例中所描述的方法制得。方法3
其中E是CR11R12的式(Ⅰ)化合物可以通过将以上定义的式(Ⅳ)化合物(必要时包括其互变异构体)与有机金属化合物MnCR11R12G反应制得，其中n小于或等于1，其取决于金属M的价键。M可以是单一的金属或是金属的组合，并可选择性地含有其它配体如卤化物(例如格氏试剂)。该类型反应的一个例子是其中L2是卤化物，M是CuLi并且n是0.5。该类型的反应记载于“高等有机化学(Advanced OrganicChemistry)”J.March，第3版，Wiley Interscience，第0-106和0-107部分以及其中的参考文献，在此将其引入本文作为参考。方法4
其中D是S的式(Ⅰ)化合物(必要时包括其互变异构体)可以从其中D是O的相应式(Ⅰ)化合物(必要时包括其互变异构体)通过与硫亲核试剂反应制得，所述亲核试剂的例子可以参见“高等有机化学(Advanced Organic Chemistry)”J.March,Wiley-Interscience,1985，第6-11部分以及其中的参考文献，在此将其引入本文作为参考。
一种适于完成所述转变的试剂是2,4-二(4-甲氧基苯基)-1,3,2,4-二硫杂diphosphetane-2,4-二硫化物(Lawesson’s试剂)。关于该试剂和反应的综述可以参见，例如Pederson等，Bull.Chim.Soc.Belges 87,223(1978)。方法5
式(Ⅰ)化合物可以通过将式(Ⅴ)化合物与式(Ⅵ)化合物反应制得：其中L3是适宜的离去基，例如Cl、Br或I。该反应适宜在附加的碱如三乙胺的存在下在适宜的非质子传递有机溶剂例如二氯甲烷中进行。
在某些情况下，即特定的取代基、溶剂、碱、反应条件等，反应直接进行而生成式(Ⅰ)的化合物。在另外一些情况下，则可能会以分步的方式经过式(Ⅶ)或(Ⅷ)的中间体或其盐而形成式(Ⅰ)化合物：所述的中间体可以是稳定的并且可以进行分离。
式(Ⅴ)和(Ⅵ)的化合物可以购买到或者可以通过本领域已知的标准方法或其适当的改变形式制得。
某些本发明的物质可以通过常规的功能基互换方法转变成其它本发明的物质。
可以理解，所有本发明的物质均可以通过本领域已知的方法和本文所描述和例举的方法及其适当的改变形式用本领域已知的方法制得。化学领域的技术人员可以应用其技能来判断任何需要的改变，例如选择反应试剂、条件、反应物和试剂与所需反应的相容性、反应步骤的顺序、保护/脱保护、进一步的反应等。
本领域技术人员可以理解，在合成本发明物质的过程中，可能需要对敏感的功能基进行保护和脱保护。这些步骤可以通过常规的技术来完成，参见例如《有机合成中的保护基》(Protective Groups inOrganic Synthesis),TW Greene和PGM Wuts,John Wiley & SonsInc.,1991。
本文所描述的某些反应步骤可能会导致在某些敏感的立体化学中心(如果存在的话)发生外消旋化。具有所需立体化学的化合物可以通过例如随后用常规的方法如手性HPLC进行拆分或通过采用不会导致外消旋化的方式、例如在反应物中使用手性辅助物进行相互转变来制备。
所有上述反应以及前述方法中所用的新原料的制备均是常规的，通过参考所引用的文献以及本文中的实施例和制备例，进行这些反应或制备中所用的适宜试剂和反应条件或所需产物的制备及分离方法对于本领域技术人员是公知的。
式(Ⅰ)化合物的可药用盐可以很方便地通过将式(Ⅰ)化合物与如果必要所需的酸或碱的溶液混合在一起制得。可使盐从溶液中析出沉淀并通过过滤进行收集，或通过蒸除溶剂进行回收。
式(Ⅰ)化合物对FKBP-12的亲和性可以采用与公开的文献方法(例如，参见Kofron,J.L．等，《生物化学》(Biochemistry),1991,30,6127-6134,Zarnt,T．等，《生物化学杂志》(Biochem.J.)1995,305,159-164,Holt,D.A．等，《美国化学会志》(J.Am.Chem.Soc.),1993,115,9925-9938)类似的操作在偶联比色PPI酶试验中进行体外测定。在这些方法中，四肽底物中的疏水性氨基酸-脯氨酸键(例如N-琥珀酰-ala-phe-pro-phe-对硝基酰苯胺[琥珀酰-AFPF-pNA]中的苯丙氨酸-脯氨酸键)的顺-反异构化可以通过监测由过量的胰凝乳蛋白酶从含有反式Pro的肽中裂解出pNA来测定。
IC50(产生50％抑制的式(Ⅰ)化合物的浓度)值用如下分析方法测定。将分析缓冲液(2.175ml)(50mM 4-(2-羟基乙基)-1-哌嗪乙磺酸(HEPES)、100mM NaCl、1mM二硫苏糖醇(DTT),pH 8.0)在比色杯中平衡至10℃。依次向分析缓冲液中加入12.5μl本发明化合物的DMSO溶液、250μl 60mg/ml α-胰凝乳蛋白酶在1mM含水盐酸中的溶液和50μl人重组FKBP-12(4.5μM)的溶液并混合。通过加入12.5μl 20mM琥珀酰-AFPF-pNA的DMSO溶液引发反应。于390nM监测吸收值1分钟，每0.25秒收集一次数据。将数据用带有偏移量的一级速率方程拟合，用得到的速率常数校正未催化的底物异构化速率。将在不同抑制剂浓度(10nM至100μM)下测定的速率常数用对照速率常数的％抑制表示。用符合S形曲线剂量响应数据的非线性最小二乘方曲线拟合规则评估IC50。
用以下描述的试验方法测定本发明化合物的Ki,app(表观抑制常数)。将分析缓冲液(2.175ml)(50mM(HEPES)、100mM NaCl、1mM DTT,pH 8.0)在比色杯中平衡至10℃。依次向分析缓冲液中加入12.5μl本发明化合物的DMSO溶液、250μl 60mg/ml α-胰凝乳蛋白酶在1mM含水盐酸中的溶液和50μl人重组FKBP-12(1.5μM)的溶液并混合。通过加入12.5μl无水琥珀酰-AFPF-pNA(100nM最终浓度)在400mMLiCl的三氟乙醇溶液中的溶液引发反应。于390nM监测吸收值3分钟，每0.5秒收集一次数据。将数据用带有偏移量的一级速率方程拟合，从t0时的顺(re leu-pro键)-琥珀酰-AFPF-pNA的浓度和不同抑制剂浓度(Ⅰ)下的一级速率常数计算初始速率(v)。将v抑制剂/v对照v.[Ⅰ]形式的数据用可逆紧密结合抑制的方程拟合以生成Ki,app值(参见Morrison,J.F．等，《分子细胞生物物理学评论》(Comments Mol.CellBiophys.),1985,2,347-368)。当Ki,app接近试验中FKBP-12的浓度时(30nM)采用该分析。用Dixon分析(参见Dixon,M.，《生物化学杂志》(Biochem.J.),1953,55,170-171)生成效力较弱的化合物的Ki,app值。
用同样的方法测量FKBP-52的Ki,app值，其中进行了如下改变：用40μl人重组FKBP-52(5.2μM)代替FKBP-12并在试验中使用2.185ml分析缓冲液。
无附加条件的式(Ⅰ)化合物促进轴突分枝的活性可以在鸡胚胎背根神经节的外植块培养物中进行测定。背根神经节(DRG)按照Bray的方法(参见“神经细胞培养(Culturing Nerve Cells)”G.Banker和K.Goslin编，MIT Press,Cambridge,MA,1991,119页)无菌分离。将单个的神经节保存在置于冰上的不合Ca2+/Mg2+的Tyrodes缓冲液中直至收集了许多的神经节。然后将单个的神经节转移至含有Neurobasal培养基+B27添充物的胶原涂层的24孔培养板中并在37℃于5％CO2气氛下保温。保温4小时使神经节附着，然后加入试验物质。培养24或48小时后将外植块固定并用考马斯蓝染色。对于每次的处理，分析4至6个神经节并通过用成像分析评估相对于外植块直径的轴突分枝程度进行计分。将本发明的化合物在含和不含10ng/ml神经生长因子(NGF)的条件下进行测试并与仅含10ng/ml神经生长因子时的分枝相比较。
用于测定FKBP-12 PPI酶抑制剂促进轴突分枝活性的另一种系统是Gold,B.G．等，《实验神经病学》(Exp.Neurol.),1997,147(2),269-278中描述的SH-SY-5Y成神经细胞瘤模型。将细胞在37℃和7％CO2气氛下保持在补充有10％胎牛血清(FCS)、50U/ml青霉素、50μg/ml链霉素的Dulbecco’s改良的Eagle’s培养基(DMEM)中。将细胞以1×106细胞/孔置于平板中并用400nM阿非迪霉素处理5天。然后将细胞洗涤并用10mg/ml NGF±各种化合物浓度处理7天以测定化合物是否可以在存在最适度以下的NGF浓度(和/或不含NGF)下促进轴突的分枝。通过用成像分析在20个随机的区域内测量轴突的长度来确定轴突的分枝。
本发明化合物的神经营养活性可以用大鼠坐骨神经压碎模型作为外周神经再生模型(参见Bridge,P.M．等，《实验神经病学》(Experimental Neurology),1994,127,284-290,Medinaceli,L.等，《实验神经病学》(Expl.Neurology),1982,77,634-643,Gold,B.G．等，《恢复神经病学和神经学》(Restorative Neurology andNeuroscience),1994,6,287-296)、用在各种动物中的1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)和6-羟基多巴胺模型作为帕金森氏症中的再生模型(参见Mokry,J.,《生理学研究》(Physiol.Res.),1995,44(3),143-150)以及用伞穹窿损伤作为早老性痴呆中的再生模型(参见Cassel,J.C.,Duconseille,E.,Jeltsch,H．和Will,B.，《神经病学进展》(Prog.Neurol.),1997,51,663-716)进行体内评估。
本发明的物质可以单独给药，但通常是以其与根据预定的给药途径和标准药物实践选择的适宜药物赋形剂、稀释剂或载体的混合物的形式给药。
例如，可将本发明的物质以可以含有矫味剂或着色剂的片剂、胶囊、卵形片、酏剂、溶液剂或混悬剂的形式口服或舌下给药，用于立即或控制释放应用。
所述片剂可以含有赋形剂如微晶纤维素、乳糖、柠檬酸钠、碳酸钙、磷酸二钙和甘氨酸，崩解剂如淀粉(优选玉米淀粉、土豆淀粉或木薯淀粉)、藻酸和某些复合硅酸盐，以及制粒粘合剂如聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖、明胶和阿拉伯胶。此外，还可以含有润滑剂如硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠和滑石。
同种类型的固体组合物还可用作明胶胶囊的填料。就此而言，优选的赋形剂包括乳糖以及高分子量的聚乙二醇。对于含水混悬液和/或酏剂，可将本发明的物质与各种甜味剂或矫味剂、着色剂或染料、乳化剂和/或助悬剂以及稀释剂如水、乙醇、丙二醇、甘油及其混合物相混合。
本发明的物质还可以进行胃肠外注射，例如静脉内、腹膜内、鞘内、心室内、胸骨内、颅内、肌肉内或皮下注射，或者可以将其通过输注的方法给药。最好是将它们以无菌含水溶液的形式给药，该溶液还可含有其它物质，例如可以使溶液与血液等渗的足够量的盐或葡萄糖。如需要，应将含水溶液进行适当的缓冲(优选缓冲至pH3到9)。在无菌条件下制备适宜的胃肠外制剂很容易通过本领域技术人员熟知的常规制药技术来完成。
对于人类患者的口服和胃肠外给药，本发明物质的每日剂量水平通常为1μg/kg至25mg/kg(单次给药或分多次给药)。
因此，胶囊或片剂可以含有0.05mg至1.0g活性化合物，用于每次给药1粒、两粒或多粒。不论怎样，医生均可以确定最适于任何具体患者的实际剂量，该剂量将随着具体患者的年龄、体重和反应而改变。以上剂量是一般情况的例子。当然，有些个体可能需要更高或更低的剂量范围，这些也包括在本发明的范围内。
本发明的物质还可以鼻内或通过吸入给药，它通常以干粉吸入剂或气雾剂喷雾的形式从加压的容器或喷雾器中释放，该制剂使用适宜的抛射剂例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、氢氟烷烃如1,1,1,2-四氟乙烷(HFA 134A[商标]或1,1,1,2,3,3,3-七氟丙烷(HFA 227EA[商标])、二氧化碳或其它适宜的气体。对于加压气雾剂，剂量单位可以通过装配能够释放计量量的阀门来确定。加压容器或喷雾器可以含有活性化合物的溶液或混悬液，例如，用乙醇和抛射剂的混合物作为溶剂，其中还可含有润滑剂如脱水山梨醇三油酸酯。用于吸入或吹入剂的胶囊和药筒(例如由明胶制成的)可以配制成含有本发明物质和适宜的粉末基质如乳糖或淀粉的粉末混合物。
优选对气雾剂或干粉制剂进行设置，从而使每一计量剂量或每一“喷”可以向患者传递20μg至20mg本发明的物质。气雾剂的每日总剂量在20μg至20mg的范围内，可以单次剂量给药，或者，更常用的是在一天内分成多次剂量给药。
或者，可以将本发明的物质以栓剂或阴道栓的形式给药，或将其以洗剂、溶液剂、霜剂、软膏或扑粉的形式局部应用。还可将本发明的物质用皮肤贴剂进行经皮给药。还可将其通过眼的途径进行给药，特别是用于治疗眼的神经病学疾病。
对于眼科应用，可将化合物配制成在等渗的、调节过pH值的无菌盐水中的微粉化混悬液的形式，或者，优选配制成在等渗的、调节过pH值的无菌盐水中的溶液的形式，其中可选择性地含有防腐剂如氯苄烷铵。或者，可将其在软膏如凡士林中配制。
对于皮肤的局部应用，可将本发明的物质配制成适宜的软膏形式，其含有悬浮或溶解在例如一种或多种如下物质的混合物中的活性化合物：矿物油、液体矿脂、白凡士林、丙二醇、聚氧乙烯聚氧丙烯化合物、乳化蜡和水。或者，可将其配制成悬浮或溶解在例如一种或多种如下物质的混合物中的适宜的洗剂或霜剂：矿物油、脱水山梨醇一硬脂酸酯、聚乙二醇、液体石蜡、吐温60、鲸蜡酯蜡、鲸蜡基硬脂醇、2-辛基十二烷醇、苄醇和水。
还可将本发明无附加条件的物质与其它神经营养剂例如神经营养生长因子(NGF)、神经胶质衍生的生长因子、脑衍生的生长因子、睫状神经营养因子和/或神经营养蛋白-3一起给药。神经营养剂的剂量水平取决于联合用药的神经营养效果和采用的给药途径。
应当理解，本文所提到的所有治疗包括治愈、减轻和预防性治疗。
因此，本发明还提供：
(ⅰ)含有式(Ⅰ)化合物或其可药用盐或溶剂化物及可药用赋形剂、稀释剂或栽体并且选择性地含有其它神经营养剂的药物组合物；
(ⅱ)式(Ⅰ)化合物，或其可药用盐、溶剂化物或组合物用作药物；
(ⅲ)式(Ⅰ)化合物，没有附带条件，或其可药用盐、溶剂化物或组合物在生产用于治疗神经元变性的药物中的用途；
(ⅳ)式(Ⅰ)化合物，没有附带条件，或其可药用盐、溶剂化物或组合物在生产用于促进神经元再生和分枝的药物中的用途；
(ⅴ)式(Ⅰ)化合物，没有附带条件，或其可药用盐、溶剂化物或组合物在生产用于治疗神经病学疾病或障碍如神经变性疾病的药物中的用途；
(ⅵ)如(ⅴ)中所述的用途，其中的神经病学疾病或障碍选自老年性痴呆(早老性痴呆)和其它痴呆症、肌萎缩性侧索硬化和其它形式的运动神经元疾病、帕金森氏症、杭廷顿氏舞蹈病、与中风有关的神经病学缺陷、影响中枢或外周神经系统的各种形式的变性疾病(例如小脑-脑干萎缩、进行性共济失调综合征)、各种形式的肌营养不良、进行性肌萎缩、进行性延髓肌萎缩、对中枢或外周神经系统(例如脊髓)的物理或创伤性损伤、突出、破裂或脱出的椎间盘综合征、颈椎关节强硬、神经丛疾病、胸腔出口综合征、各种形式的外周神经病(糖尿病性的和非糖尿病性的)、三叉神经痛、舌咽神经痛、面神经麻痹、导致中枢或外周神经系统损伤的各种形式的自身免疫相关性疾病(例如多发性硬化、重症肌无力、格-巴二氏综合征)、神经系统的AIDS相关性疾病、氨苯砜抽搐、视神经的眼球和眼球后病变(例如视网膜病和眼球后神经炎)、听力障碍例如耳鸣和朊病毒疾病；
(ⅶ)如(ⅵ)中所述的用途，其中的神经病学疾病或障碍是老年性痴呆(早老性痴呆)或其它的痴呆症、肌萎缩性侧索硬化和其它形式的运动神经元疾病、帕金森氏症、杭廷顿氏舞蹈病、与中风有关的神经病学缺陷、对中枢或外周神经系统(例如脊髓)的物理或创伤性损伤、外周神经病(糖尿病性的或非糖尿病性的)、多发性硬化或听力障碍例如耳鸣；
(ⅷ)治疗人类患者神经元变性的治疗方法，该方法包括，将所述人类患者用有效量的式(Ⅰ)化合物，没有附带条件，或其可药用盐、溶剂化物或组合物进行治疗；
(ⅸ)促进人类患者神经元再生和分枝的治疗方法，该方法包括，将所述人类患者用有效量的式(Ⅰ)化合物，没有附带条件，或其可药用盐、溶剂化物或组合物进行治疗；
(ⅹ)治疗人类患者神经病学疾病或障碍如神经变性疾病的治疗方法，该方法包括，将所述人类患者用有效量的式(Ⅰ)化合物，没有附带条件，或其可药用盐、溶剂化物或组合物进行治疗；
(ⅹⅰ)如(ⅹ)中所述的方法，其中的神经病学疾病或障碍选自老年性痴呆(早老性痴呆)和其它痴呆症、肌萎缩性侧索硬化和其它形式的运动神经元疾病、帕金森氏症、杭廷顿氏舞蹈病、与中风有关的神经病学缺陷、影响中枢或外周神经系统的各种形式的变性疾病(例如小脑-脑干萎缩、进行性共济失调综合征)、各种形式的肌营养不良、进行性肌萎缩、进行性延髓肌萎缩、对中枢或外周神经系统(例如脊髓)的物理或创伤性损伤、突出、破裂或脱出的椎间盘综合征、颈椎关节强硬、神经丛疾病、胸腔出口综合征、各种形式的外周神经病(糖尿病性的和非糖尿病性的)、三叉神经痛、舌咽神经痛、面神经麻痹、导致中枢或外周神经系统损伤的各种形式的自身免疫相关性疾病(例如多发性硬化、重症肌无力、格-巴二氏综合征)、神经系统的AIDS相关性疾病、氨苯砜抽搐、视神经的眼球和眼球后病变(例如视网膜病和眼球后神经炎)、听力障碍例如耳鸣和朊病毒疾病；
(ⅹⅱ)如(ⅹⅰ)中所述的方法，其中的神经病学疾病或障碍是老年性痴呆(早老性痴呆)或其它的痴呆症、肌萎缩性侧索硬化和其它形式的运动神经元疾病、帕金森氏症、杭廷顿氏舞蹈病、与中风有关的神经病学缺陷、对中枢或外周神经系统(例如脊髓)的物理或创伤性损伤、外周神经病(糖尿病性的或非糖尿病性的)、多发性硬化或听力障碍例如耳鸣。
以下实施例说明了式(Ⅰ)化合物的制备。应当理解，当实施例和/或制备例的化合物是苯并咪唑时，还包括价互变异构体。在以下实施例和制备例中，室温是指20至25℃。快速色谱是指硅胶(Kieselgel60.230-400目)柱色谱。熔点未校正。1H核磁共振(NMR)图谱用BrukerAC300、Varian Unity Inova-300或Varian Unity Inova-400波谱仪记录，并且所有情况均与预期的结构一致。特征性化学位移以向四甲基硅烷低场移动的百万分之一(ppm)来表示，用常规的缩写来表示主要的峰：例如s，单峰；d，双峰；t，三重峰；q，四重峰；m，多重峰；br，宽峰。质谱用Finnigan Mat.TSQ 7000或FisonsIntruments Trio 1000质谱仪记录。MS是指低分辨质谱，所报告的计算值和观察到的离子是指最低质量的同位素组成。己烷是指b.p.65-70℃的己烷混合物(HPLC级)。醚指乙醚。乙酸指冰醋酸。旋光度于25℃下测定。以下提到的化合物的命名是通过IUPAC命名程序生成的。实施例1(2S)-1-(1.3-苯并噁唑-2-基)-N2-(2-哌啶子基乙基)-2-哌啶甲酰胺
将N-甲基吗啉(0.085ml)加入到(2S)-1-(1,3-苯并噁唑-2-基)-2-哌啶甲酸(95.5mg)[参见制备例3]、羟基苯并三唑水合物(89.0mg)、2-哌啶子基乙基胺(50mg)[参见《化学会志》(J.Chem.Soc),(1935),1421-1426]和1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐(140mg)的二氯甲烷(20ml)溶液中。将反应混合物室温搅拌18小时，然后将混合物用水稀释并将有机层分离，用硫酸镁干燥然后减压蒸除溶剂。将粗产物通过硅胶柱色谱纯化，用4∶1∶0→0∶95∶5(体积比)己烷∶乙酸乙酯∶0.88氨水的溶剂梯度进行洗脱得到白色固体状(2S)-1-(1,3-苯并噁唑-2-基)-N2-(2-哌啶子基乙基)-2-哌啶甲酰胺(109mg)。1H-NMR(CDCl3)δ:7.40(1H,d),7.25(1H,d),7.20(1H,t),7.00(1H,t),6.95(1H,bs),4.95(1H,bs),4.25(1H,d),3.45(1H,m),3.30(2H,m),2.40(3H,m),2.25(4H,bs),1.80-1.60(5H,m),1.30(6H,m).MS:357(MH+).分析：实测值C,61.65；H,7.47；N,13.64；C20H28N4O2·1.75H2O·0.05CH2Cl2的理论值C,61.36；H,8.13；N,14.30％。实施例2(2S)-N2-(2-氨基乙基)-1-(1,3-苯并噁唑-2-基)-2-哌啶甲酰胺
将N-[2-([(2S)-1-(1,3-苯并噁唑-2-基)-2-哌啶基]羰基氨基)乙基]氨基甲酸苄酯(480.6mg)[参见制备例4]溶于甲醇(20ml)并加入10％钯碳(48mg)。然后将反应混合物在4大气压(60 p.s.i.)下室温氢化3小时，然后将混合物过滤并减压蒸除溶剂。然后将产物与二氯甲烷共沸得到无色液体状(2S)-N2-(2-氨基乙基)-1-(1,3-苯并噁唑-2-基)-2-哌啶甲酰胺(296mg)。1H-NMR(CDCl3)δ:7.40(1H,d),7.25(1H,d),7.20(1H,t),7.05(1H,t),6.75(1H,bs),4.90(1H,s),4.25(1H,d),3.40-3.20(3H,m),2.80(2H,t),2.40(1H,d),1.80-1.60(3H,m),1.60-1.40(4H,m).MS:289(MH+).分析：实测值C,57.13；H,6.69；N,16.27；C15H20N4O2·0.5 CH2Cl2的理论值C,57.05；H,6.28；N,16.63％。实施例3(2S)-1-(1.3-苯并噁唑-2-基)-N2-2-[(顺)-2,6-二甲基-1-哌啶基]乙基-2-哌啶甲酰胺
标题化合物按照与实施例1类似的方法从(2S)-1-(1,3-苯并噁唑-2-基)-2-哌啶甲酸[参见制备例3]和2-[(顺)-2,6-二甲基-1-哌啶基]乙基胺[《药物化学杂志》(J.Med.Chem.),27；5,(1984),684-691]制备。将粗产物通过硅胶柱色谱纯化，用溶剂系统93∶7∶1(体积比)二氯甲烷∶甲醇∶0.88氨水溶液洗脱得到无色胶状(2S)-1-(1,3-苯并噁唑-2-基)-N2-2-[(顺)-2,6-二甲基-1-哌啶基]乙基-2-哌啶甲酰胺。分析：实测值C,67.63；H,8.40；N,14.38；C22H32N4O2·0.1CH2Cl2的理论值C,67.54；H,8.26；N,14.26％。实施例4至7
以下列表的实施例(表1)中的如下通式的化合物通过与以上实施例1所述类似的方法从2-[(顺)-2,6-二甲基-1(2H)-哌啶基]乙基胺[《药物化学杂志》(J.Med.Chem.),27；5,(1984),684-691]和相应的羧酸制得：1H-NMR(CDCl3)δ:7.40(1H,d),7.25(1H,d),7.20(1H,t),7.05(1H,t),6.65(1H,bs),5.00(1H,5),4.30(1H,d),3.40-3.20(3H,m),2.80(2H,m),2.40(3H,m),1.80-1.60(6H,m),1.50(2H,m),1.40-1.10(9H,m).MS:385(MH+).
表1实施例8(2S)-1-(1.3-苯并噁唑-2-基)-N2-2-[(顺)-2.6-二甲基-1-哌嗪基]乙基-2-哌啶甲酰胺
将三氟乙酸(10ml)于0℃下加入到(顺)-4-[2-([(2S)-1-(1,3-苯并噁唑-2-基)-2-哌啶基]羰基氨基)乙基]-3,5-二甲基-1-哌嗪甲酸叔丁酯(0.95g)[参见制备例8]的二氯甲烷(10ml)溶液中。然后将反应混合物室温搅拌1.5小时，然后减压蒸除溶剂并将残余物在饱和碳酸钾溶液和乙酸乙酯之间进行分配。分出有机层，用硫酸镁干燥然后减压蒸除溶剂。将产物与二氯甲烷共沸数次得到白色泡沫状(2S)-1-(1,3-苯并噁唑-2-基)-N2-2-[(顺)-2,6-二甲基-1-哌嗪基]乙基-2-哌啶甲酰胺(0.65g)。1H-NMR(CDCl3)δ:7.40(1H,m),7.25(1H,m),7.20(1H,m),7.00(1H,m),6.60(1H,bs),4.95(1H,s),4.30(1H,d),3.40-3.20(3H,m),2.80(4H,m),2.50-2.30(5H,m),1.80-1.60(6H,m),1.00(6H,m).分析：实测值C,62.08；H,8.04；N,16.98；C21H31N5O2·0.5H2O·0.2CH2Cl2的理论值C,61.88；H,7.94；N,17.02％。旋光度：[α]D=-78.0°(c=0.1甲醇)MS:387(MH+)。实施例9(2S)-N2-2-[(顺)-4-乙酰基-2,6-二甲基-1-哌嗪基]乙基-1-(1,3-苯并噁唑-2-基)-2-哌啶甲酰胺
将乙酰氯(0.018ml)加入到(2S)-1-(1,3-苯并噁唑-2-基)-N2-2-[(顺)-2,6-二甲基-1-哌嗪基]乙基-2-哌啶甲酰胺(0.1g)[参见实施例8]和碳酸钾(36mg)的乙腈(2ml)溶液中。将反应混合物室温搅拌2小时，然后减压蒸除溶剂并将残余物在乙酸乙酯和水之间进行分配。分出有机层，用硫酸镁干燥然后减压蒸除溶剂。将粗产物通过硅胶柱色谱纯化，用97∶3.5∶0.5→97∶3∶1(体积比)二氯甲烷∶甲醇∶0.88氨水溶液(93∶7∶1)的溶剂梯度进行洗脱得到白色泡沫状(2S)-N2-2-[(顺)-4-乙酰基-2,6-二甲基-1-哌嗪基]乙基-1-(1,3-苯并噁唑-2-基)-2-哌啶甲酰胺(91.6mg)。1H-NMR(CDCl3)δ:7.40(1H,d),7.25(1H,d),7.20(1H,t),7.00(1H,t),6.60(1H,m),4.95(1H,s),4.30-4.15(2H,m),3.40-3.15(4H,m),2.75(3H,m),2.50(3H,m),2.30(1H,q),2.00(3H,s),1.80-1.60(5H,m),1.10(6H,m).分析：实测值C,62.64；H,7.79；N,15.73；C23H33N5O3·0.1H2O·0.4CH2Cl2的理论值C,62.43；H,7.59；N,15.69％。旋光度：[α]D=-67.0°(c=0.1甲醇)MS:428(MH+)。实施例10(2S)-1-(1,3-苯并噁唑-2-基)-N2-2-[(顺)-2,4,6-三甲基-1-哌嗪基]乙基-2-哌啶甲酰胺
将(2S)-1-(1,3-苯并噁唑-2-基)-N2-2-[(顺)-2,6-二甲基-1-哌嗪基]乙基-2-哌啶甲酰胺(108mg)[参见实施例8]和37％甲醛水溶液(0.21ml)的乙腈(3ml)溶液加入到氰基硼氢化钠(86.5mg)中，然后加入冰乙酸(0.1ml)。将反应混合物室温搅拌1.5小时，然后加入冰乙酸(0.1ml)并将混合物继续搅拌30分钟。向混合物中加入乙醚，然后将有机层用2N氢氧化钠水溶液洗涤数次。分出有机层，用硫酸镁干燥然后减压蒸除溶剂。将粗产物通过硅胶柱色谱纯化，用97∶3.5∶0.5→97∶3∶1(体积比)二氯甲烷∶甲醇∶0.88氨水溶液的溶剂梯度进行洗脱得到白色固体状(2S)-1-(1,3-苯并噁唑-2-基)-N2-2-[(顺)-2,4,6-三甲基-1-哌嗪基]乙基-2-哌啶甲酰胺(53.1mg)。1H-NMR(CDCl3)δ:7.40(1H,d),7.25(1H,d),7.20(1H,t),7.00(1H,t),6.65(1H,bs),4.95(1H,s),4.35(1H,d),3.40-3.20(3H,m),2.80(2H,t),2.60(4H,m),2.40(1H,d),2.10(3H,5),1.80-1.60(7H,m),1.05(6H,m).分析：实测值C,65.17；H,8.33；N,17.28；C22H33N5O2·0.3H2O的理论值C,65.25；H,8.36；N,17.29％。旋光度：[α]D=-73.0°(c=0.1甲醇)MS:400(MH+)。实施例11(顺)-4-[2-([(2S)-1-(1,3-苯并噁唑-2-基)-2-哌啶基]羰基氢基)乙基]-N1-异丙基-3,5-二甲基-1-哌嗪甲酰胺
将异氰酸异丙酯(0.029m1)加入到(2S)-1-(1,3-苯并噁唑-2-基)-N2-2-[(顺)-2,6-二甲基-1-哌嗪基]乙基-2-哌啶甲酰胺(105mg)[参见实施例8]和碳酸钾(37.5mg)的乙腈(3ml)溶液中。将反应混合物室温搅拌5小时，然后减压蒸除溶剂并将残余物在乙酸乙酯和水之间进行分配。分出有机层，用硫酸镁干燥然后减压蒸除溶剂。将粗产物通过硅胶柱色谱纯化，用94.6∶5.6∶0.8→93∶7∶1(体积比)二氯甲烷∶甲醇∶0.88氨水溶液的溶剂梯度进行洗脱得到白色固体状(顺)-4-[2-([(2S)-1-(1,3-苯并噁唑-2-基)-2-哌啶基]羰基氨基)乙基]-N1-异丙基-3,5-二甲基-1-哌嗪甲酰胺(72.8mg)。1H-NMR(CDCl3)δ:7.35(1H,d),7.25(1H,d),7.15(1H,t),7.00(1H,t),4.90(1H,s),4.25(1H,d),3.90(1H,m),3.70-3.10(6H,m),2.90-2.30(6H,m),1.80-1.50(5H,m),1.10(12H,m).分析：实测值C,59.28；H,8.26；N,15.99；C25H38N6O3·0.75H2O·0.35CH2Cl2的理论值C,59.25；H,7.89；N,16.35％。旋光度：[α]D=-38.0°(c=0.1甲醇)MS:471(MH+)。实施例12(2S)-1-(1,3-苯并噁唑-2-基)-N2-[2-(3,5-二甲基吗啉代)乙基]-2-哌啶甲酰胺
标题化合物通过与实施例1类似的方法从(2S)-1-(1,3-苯并噁唑-2-基)-2-哌啶甲酸[参见制备例3]和2-(3,5-二甲基吗啉代)乙基胺[参见制备例12]制备。将粗产物通过硅胶柱色谱纯化，用100∶0→95∶5(体积比)二氯甲烷∶甲醇的溶剂梯度进行洗脱得到固体状(2S)-1-(1,3-苯并噁唑-2-基)-N2-[2-(3,5-二甲基吗啉代)乙基]-2-哌啶甲酰胺。1H-NMR(CDCl3)δ:7.40(1H,d),7.30(1H,d),7.20(1H,t),7.05(1H,t)。6.80(1H,bs),5.00(1H,s),4.30(1H,d),3.40-3.00(6H,m),2.80(3H,m),2.50(2H,m),1.80-1.60(6H,m),0.95-0.90(6H,m).分析：实测值C,57.43；H,6.90；N,12.17；C21H30N4O3·2.25H2O·0.2CH2Cl2的理论值C,57.35；H,7.92；N,12.62％。旋光度：[α]D=-58.0°(c=0.1甲醇)MS:387(MH+)。实施例13(2S)-N2-3-[(顺)-2,6-二甲基-1-哌啶基]丙基-1-(5-甲基-1,3-苯并噁唑-2-基)-2-哌啶甲酰胺
将(2S)-1-(1,3-苯并噁唑-2-基)-2-哌啶甲酸(270mg)[参见制备例3]和3-[(顺)-2,6-二甲基-1-哌啶基]丙基胺(180mg)[《美国化学会志》(J.Am.Chem.Soc.)(1971),71,3839和其中引用的参考文献]溶于二氯甲烷(20ml)。然后向反应混合物中加入1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐(290mg)和催化量的4-二甲氨基吡啶。将反应混合物室温搅拌18小时，然后减压蒸除溶剂并将残余物在乙酸乙酯和水之间进行分配。分出有机层，用硫酸钠干燥然后减压蒸除溶剂。将粗产物通过硅胶柱色谱纯化，用溶剂系统20∶1(体积比)二氯甲烷∶甲醇洗脱得到固体状(2S)-N2-3-[(顺)-2,6-二甲基-1-哌啶基]丙基-1-(5-甲基-1,3-苯并噁唑-2-基)-2-哌啶甲酰胺(37mg)。1H-NMR(CDCl3)δ:7.28(1H,m),7.22(1H,m),7.10(1H,m),7.00(1H,m),4.90(1H,bs),4.22(1H,d),3.40-3.15(3H,m),2.70(2H,t),2.40(1H,d),2.30(2H,bs),1.80-1.30(10H,m),1.30-1.05(4H,m),0.97(6H,d).MS:399(MH+).Rf:0.35(5∶1(体积比)二氯甲烷∶甲醇)。实施例14(2S)-1-(1,3-苯并噁唑-2-基)-N2-4-[(顺)-2,6-二甲基-1-哌啶基]丁基-2-哌啶甲酰胺
标题化合物通过与实施例13类似的方法从(2S)-1-(1,3-苯并噁唑-2-基)-2-哌啶甲酸[参见制备例3]和4-[(顺)-2,6-二甲基-1-哌啶基]丁基胺[《药物化学杂志》(J.Med.Chem.)(1984),27,684-689]制备和纯化得到固体状(2S)-1-(1,3-苯并噁唑-2-基)-N2-4-[(顺)-2,6-二甲基-1(2H)-哌啶基]丁基-2-哌啶甲酰胺。1H-NMR(CDCl3)δ:7.32(1H,m),7.25(1H,m),7.15(1H,m),7.05(1H,m),6.60(1H,bs),4.20(1H,d),3.30(1H,m),3.20(2H,m),2.75(2H,m),2.50-2.30(3H,m),1.90-1.50(8H,m),1.50-1.20(8H,m),1.00(6H,t).MS:413(MH+).Rf:0.1(10∶1∶0.05(体积比)二氯甲烷∶甲醇∶0.88氨水溶液)。实施例15(2S)-N2-2-[(顺)-2,6-三甲基-1-哌啶基]乙基-1-(5-氟-1,3-苯并噁唑-2-基)-2-哌啶甲酰胺
标题化合物通过与实施例13类似的方法从(2S)-1-(5-氟-1,3-苯并噁唑-2-基)-2-哌啶甲酸[参见制备例20]和2-[(顺)-2,6-二甲基-1-哌啶基]乙基胺[《药物化学杂志》(J.Med.Chem.),27；5,(1984),684-691]制备和纯化得到固体状(2S)-N2-2-[(顺)-2,6-二甲基-1-哌啶基]乙基-1-(5-氟-1,3-苯并噁唑-2-基)-2-哌啶甲酰胺。1H-NMR(CDCl3)δ:7.11(1H,m),7.00(1H,m),6.80(1H,bs),6.70(1H,m),4.88(1H,bs),4.20(1H,d),3.40-3.10(3H,m),2.70(2H,t),2.50-2.30(3H,m),1.80-1.35(8H,m),1.35-1.10(3H,m),1.05(6H,t).MS:403(MH+).Rf:0.4(10∶0.5∶0.5(体积比)二氯甲烷∶甲醇∶0.88氨水溶液)。实施例16(2S)-N2-2-[(顺)-2,6-二甲基-1-哌啶基]乙基-1-[6-(三氟甲基)-1H-1,3-苯并咪唑-2-基]-2-哌啶甲酰胺
将二甲基乙酰胺(0.5ml)加入到(2S)-N2-2-[(顺)-2,6-二甲基-1-哌啶基]乙基-2-哌啶甲酰胺(134mg)[参见制备例15]和2-氯-5-(三氟甲基)-1H-1,3-苯并咪唑-1-甲酸叔丁酯(463mg)[参见制备例16]的混合物中。将反应混合物于80℃加热12小时，然后将混合物浓缩到低体积，加入二甲苯(50ml)并减压蒸除所有溶剂。将残余物在饱和碳酸氢钠溶液和乙酸乙酯之间进行分配，分出有机层，用硫酸镁干燥然后减压蒸除溶剂。将粗产物通过硅胶柱色谱纯化，用100∶0→98∶2(体积比)乙酸乙酯∶二乙胺的溶剂梯度以0.5％的增量洗脱得到白色固体状(2S)-N2-2-[(顺)-2,6-二甲基-1-哌啶基]乙基-1-[6-(三氟甲基)-1H-1,3-苯并咪唑-2-基]-2-哌啶甲酰胺(55mg)。1H-NMR(d4-MeOH)δ:7.50(1H,s),7.30(2H,q),4.90(1H,d),3.90(1H,d),3.50-3.40(2H,m),2.85(3H,t),2.60(2H,m),2.30(1H,d),1.90-1.20(11H,m),1.20(6H,d).分析：实测值C,60.77；H,7.16；N,15.25；C23H32F3N5O的理论值C,61.18；H,7.14；N,15.51％。旋光度：[α]D=-79.0°(c=0.1甲醇)MS:452(MH+)。实施例17-22
以下列表的实施例(表2)中的如下通式的化合物通过与实施例16类似的方法从(2S)-N2-2-[(顺)-2,6-二甲基-1-哌啶基]乙基-2-哌啶甲酰胺[参见制备例15]和相应的苯并咪唑基氯化物制得：
表2实施例编号原料制备例号Y分析数据实施例23(2S)-N2-2-[(顺)-2.6-二甲基环己基]乙基-1-(5-甲氧基-1.3-苯并噁唑-2-基)-2-哌啶甲酰胺
标题化合物通过与实施例16类似的方法从(2S)-N2-2-[(顺)-2,6-二甲基-1-哌啶基]乙基-2-哌啶甲酰胺[参见制备例15]和2-氯-5-甲氧基-1,3-苯并噁唑[参见《药物化学杂志》(J.Med.Chem)(1988),31,1719-1728]制备。将粗产物通过硅胶柱色谱纯化，用98∶2→90∶10(体积比)二氯甲烷∶甲醇的溶剂梯度以1％的增量洗脱得到油状(2S)-N2-2-[(顺)-2,6-二甲基环己基]乙基-1-(5-甲氧基-1,3-苯并噁唑-2-基)-2-哌啶甲酰胺。1H-NMR(CDCl3)δ:7.15(1H,d),6.90(1H,s),6.60(2H,m),4.95(1H,s),4.25(1H,d),3.80(3H,s),3.40-3.20(3H,m),2.75(2H,m),2.40(3H,bs),1.80-1.10(17H,m).MS:415(MH+).旋光度：[α]D=-97.42°(c=0.1甲醇)实施例24(2S)-N2-2-[(顺)-2,6-二甲基环己基]乙基-1-(5-乙基-1,3-苯并噁唑-2-基)-2-哌啶甲酰胺
标题化合物通过与实施例16类似的方法从(2S)-N2-2-[(顺)-2,6-二甲基-1-哌啶基]乙基-2-哌啶甲酰胺[参见制备例15]和2-氯-5-乙基-1,3-苯并噁唑[参见《药物化学杂志》(J.Med.Chem)(1988),31,1719-1728]制备。将粗产物通过硅胶柱色谱纯化，用98∶2→90∶10(体积比)二氯甲烷∶甲醇的溶剂梯度以1％的增量洗脱得到油状(2S)-N2-2-[(顺)-2,6-二甲基环己基]乙基-1-(5-乙基-1,3-苯并噁唑-2-基)-2-哌啶甲酰胺。1H-NMR(CDCl3)δ:7.25(1H,s),7.20(1H,d),6.90(1H,d),6.80(1H,bs),4.95(1H,s),4.30(1H,d),3.40-3.20(3H,m),2.80-2.70(4H,m),2.45(3H,m),1.90-1.10(20H,m).MS:413(MH+)旋光度：[α]D=-127.83°(c=0.1甲醇)。实施例25(2S)-N2-2-[(顺)-2,6-二甲基-1-哌啶基]乙基-1-(6-异丙基-1,3-苯并噁唑-2-基)-2-哌啶甲酰胺
将氢化钠(60％油分散液，6mg)于0℃下加入到(2S)-N-2-[(顺)-2,6-二甲基-1-哌啶基]乙基-1-(6-羟基-1,3-苯并噁唑-2-基)-2-哌啶甲酰胺(54.5mg)[参见制备例39]的二甲基甲酰胺(2ml)的溶液中。5分钟后加入2-碘丙烷(0.014ml)。将反应混合物室温搅拌4小时，然后依次加入氢化钠(3mg)和2-碘丙烷(0.007ml)。将混合物继续搅拌18小时，然后蒸除溶剂并将残余物在水和乙醚之间进行分配。分出有机层，用硫酸镁干燥然后减压蒸除溶剂。将粗产物通过硅胶柱色谱纯化，用溶剂系统97∶3.5∶0.5(体积比)二氯甲烷/甲醇/0.88氨水溶液洗脱得到棕色固体状(2S)-N-2-[(顺)-2,6-二甲基-1-哌啶基]乙基-1-(6-异丙氧基-1,3-苯并噁唑-2-基)-2-哌啶甲酰胺(24mg)。1H-NMR(CDCl3)δ:7,25(1H,d),6.90(1H,s),6.80(1H,d),6.65(1H,bs),4.90(1H,s),4.45(1H,m),4.25(1H,d),3.40-3.15(3H,m),2.75(2H,m),2.40(3H,m),1.80-1.00(23H,m).MS:444(MH+).分析：实测值C,65.43；H,8.50；N,12.07；C25H38N4O3·0.75H2O的理论值C,65.83；H,8.73；N,12.28％。旋光度：[α]D=-76.00°(c=0.1甲醇)。实施例26(2S)-N2-2-[(顺)-2.6-二甲基-1-哌啶基]乙基-1-[5.6-二氟-1H-1、3-苯并咪唑-2-基]-2-哌啶甲酰胺
将二甲基乙酰胺(1ml)加入到(2S)-N2--2--[(顺)-2,6-二甲基-1-哌啶基]乙基-2-哌啶甲酰胺(267mg)[参见制备例15]和2-氯-5,6-二氟-1H-1,3-苯并咪唑-1-甲酸叔丁酯(350mg)[参见制备例43]的混合物中。将反应混合物于60℃加热4小时，然后将混合物浓缩到低体积，加入二甲苯(50ml)，减压蒸除所有溶剂。将残余物溶于二氯甲烷(10ml)并用三氟乙酸(5ml)处理。室温搅拌2小时后，将混合物浓缩到低体积。将残余物溶于二氯甲烷，用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，用硫酸镁干燥然后蒸发至干。将粗产物通过硅胶柱色谱纯化，用100∶0→95∶4.5∶0.5二氯甲烷∶甲醇∶0.880氨水溶液的溶剂梯度进行洗脱得到白色固体状(2S)-N2-2-[(顺)-2,6-二甲基-1-哌啶基]乙基-1-[5,6-二氟-1H-1,3-苯并咪唑-2-基]-2-哌啶甲酰胺(50mg)。1H-NMR(d4-MeOH)δ:7.05(2H,m),4.90(1H,d),3.90(1H,d),3.50-3.40(3H,m),2.85(2H,t),2.60(2H,m),2.30(1H,d),1.90-1.20(11H,m),1.20(6H,d).分析：实测值C,60.47；H,7.33；N,15.83；C22H31F2N5O·0.6H2O·0.4甲醇的理论值C,60.71；H,7.69；N,15.80％。旋光度：[α]D=-71.7°(c=0.096甲醇)MS:420(MH+)。实施例27-29
以下列表的实施例(表3)中的如下通式的化合物通过与以上实施例26类似的方法在指定的温度下反应指定的时间从(2S)-N2-2-[(顺)-2,6-二甲基-1-哌啶基]乙基-2-哌啶甲酰胺[参见制备例15]和相应的苯并咪唑基氯化物制得：
表3实施例30(2S)-N2-2-[(顺)-2,6-二甲基-1-哌啶基]乙基-1-[7-(甲氧基)羰基-1,3-苯并噁唑-2-基]-2-哌啶甲酰胺
标题化合物按照与实施例1类似的方法从(2S)-1-[7-(甲氧基)羰基-1,3-苯并噁唑-2-基]-2-哌啶甲酸[参见制备例51]和2-[(顺)-2,6-二甲基-1-哌啶基]乙基胺[《(药物化学杂志》(J.Med.Chem.),27(5),(1984),684-691]制备。将粗产物通过硅胶柱色谱纯化,用100∶0∶0→99∶1∶0→80∶20∶10(体积比)二氯甲烷∶甲醇∶0.88氨水溶液的溶剂梯度进行洗脱得到白色固体状(2S)-N-2-[(顺)-2,6-二甲基-1-哌啶基]乙基-1-[7-(甲氧基)羰基-1,3-苯并噁唑-2-基]-2-哌啶甲酰胺。1H NMR CDCl3)δ:7.62(1H,d),7.50(1H,d),7.20(1H,t),6.60(1H,s),4.95(1H,s),4.35(1H,d),3.95(3H,t),3.30(3H,m),2.72(2H,m),2.40(3H,m),1.79(4H,m),1.42(3H,m),1.30-1.05(10H,m)MS:443.3(MH+)分析：实测值C,63.40；H,7.59；N,12.22；C24H34N4O4·0.6H2O的理论值C,63.58；H,7.83；N,12.36％。旋光度：[α]D=-90.8°(c=0.124甲醇)。实施例31(2S)-N2-2-[(顺)-2,6-二甲基-1-哌啶基]乙基-1-[5,6-二甲基-1,3-苯并噁唑-2-基]-2-哌啶甲酰胺
标题化合物按照与实施例1类似的方法从(2S)-1-[5,6-二甲基-1,3-苯并噁唑-2-基]-2-哌啶甲酸[参见制备例53]和2-[(顺)-2,6-二甲基-1-哌啶基]乙基胺[《药物化学杂志》(J.Med.Chem.),27(5),(1984),684-691]制备。将粗产物通过硅胶柱色谱纯化,用93∶7∶1(体积比)二氯甲烷∶甲醇∶0.88氨水溶液的溶剂梯度进行洗脱得到白色固体状(2S)-N-2-[(顺)-2,6-二甲基-1-哌啶基]乙基-1-[1-(5,6-二甲基1,3-苯并噁唑-2-基]-2-哌啶甲酰胺。1H NMR(CDCl3)δ:7.15(1H,s),7.05(1H,s),6.65(1H,bs),4.90(1H,s),4.20(1H,d),3.35(1H,m),3.30(1H,m),3.20(1H,t),2.70(2H,t),2.40(3H,m),2.30(6H,s),1.85-1.55(6H,m),1.45(1H,m),1.30-1.05(10H,m)MS:413.3(MH+)分析：实测值C,68.87；H,8.79；N,13.35；C24H36N4O2·0.25H2O的理论值C,69.12；H,8.82；N,13.43％旋光度：[α]D=-90.42°(c=0.1甲醇)
实施例32-44也被指定为某些制备例，以下将可以看到这一点。制备例1(2S)-2-(甲氧羰基)哌啶鎓氯化物
将(2S)-哌啶甲酸L-酒石酸盐(20.0g)[参见国际专利申请公开号WO-A-96/11185]于0℃下滴加到亚硫酰氯(54ml)的甲醇(270ml)溶液中。然后将反应混合物室温搅拌18小时，然后减压蒸除溶剂并将残余物与甲苯(3×100ml)共沸。将粗产物通过用甲醇(15ml)重结晶进行纯化，加入乙醚使其混浊，得到白色结晶状(2S)-2-(甲氧基羰基)哌啶鎓氯化物(11.06g)。1H-NMR(D2O)δ:3.95(1H,d),3.70(3H,m),3.40(1H,d),3.00(1H,t),2.20(1H,d),1.80(2H,m),1.70-1.40(3H,m).旋光度：[α]D=-8.40°(c=0.1甲醇)。MS:144(MH+)。制备例2/实施例32(2S)-1-(1,3-苯并噁唑-2-基)-2-哌啶甲酸甲酯
将N-乙基二异丙基胺(6.52ml)加入到(2S)-2-(甲氧羰基)哌啶鎓氯化物(3.057g)[参见制备例1]和2-氯苯并噁唑(2.13ml)的乙腈(50ml)溶液中。将反应混合物室温搅拌18小时，然后于50℃继续搅拌2小时。减压蒸除溶剂并将残余物在乙酸乙酯和水之间进行分配，分出有机层，用硫酸镁干燥然后减压蒸除溶剂。将粗产物通过硅胶柱色谱纯化，用80∶10∶0→0∶100∶0→0∶95∶5(体积比)己烷∶乙酸乙酯∶甲醇的溶剂梯度进行洗脱得到固体状(2S)-1-(1,3-苯并噁唑-2-基)-2-哌啶甲酸甲酯(3.18g)。1H-NMR(CDCl3)δ:7.35(1H,d),7.25(1H,d),7.15(1H,m),7.00(1H,m),5.00(1H,d),4.20(1H,m),3.70(3H,s),3.35(1H,t),2.30(1H,d),1.80(3H,m),1.60(1H,m),1.35(1H,m).MS:261(MH+).制备例3(2S)-1-(1,3-苯并噁唑-2-基)-2-哌啶甲酸
将氢氧化锂水溶液(1N,51ml)于0℃下加入到(2S)-1-(1,3-苯并噁唑-2-基)-2-哌啶甲酸甲酯(8.987g)[参见制备例2]的甲醇(306ml)溶液中。将反应混合物室温搅拌18小时，然后减压蒸除溶剂并将残余物在乙酸乙酯和水之间进行分配。分出水层并用2N盐酸水溶液酸化至pH2，将产物用乙酸乙酯萃取，用硫酸镁干燥然后减压蒸除溶剂得到白色固体状(2S)-1-(1,3-苯并噁唑-2-基)-2-哌啶甲酸(8.17g)。1H-NMR(CDCl3)δ:7.40(1H,d),7.25(1H,m),7.15(1H,t),7.00(1H,t),5.80(1H,bs),4.95(1H,bs),4.15(1H,d),3.40(1H,t),2.40(1H,d),1.80(3H,m),1.60-1.40(2H,m).旋光度：[α]D=-116.2°(c=0.1甲醇)。MS:247(MH+)。制备例4N-[2-([(2S)-1-(1.3-苯并噁唑-2-基)-2-哌啶基]羰基氧基)乙基]氧基甲酸苄酯
将N-甲基吗啉(0.47ml)加入到(2S)-1-(1,3-苯并噁唑-2-基)-2-哌啶甲酸(352.6mg)[参见制备例3]、羟基苯并三唑水合物(338.4mg)、N-苄氧基羰基-1,2-二氨基乙烷盐酸盐(499.5mg)和1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐(552.7mg)的二氯甲烷(15ml)溶液中。将反应混合物室温搅拌18小时，然后将混合物用水稀释，分出有机层，用硫酸镁干燥然后减压蒸除溶剂。将粗产物通过硅胶柱色谱纯化，用1∶1→1∶9(体积比)己烷∶乙酸乙酯的溶剂梯度进行洗脱得到油状N-[2-([(2S)-1-(1,3-苯并噁唑-2-基)-2-哌啶基]羰基氨基)乙基]氨基甲酸苄酯(550mg)。1H-NMR(CDCl3)δ:7.40-7.20(6H,m),7.10(1H,t),7.00(2H,m),5.20(1H,bs),5.00-4.80(3H,m),4.20(1H,d),3.45(1H,m),3.40-3.10(5H,m),2.30(1H,d),1.80-1.50(5H,m).MS:423(MH+).制备例5(顺)-3.5-二甲基-1-哌嗪甲酸叔丁酯
将(顺)-3,5-二甲基哌嗪(5.01g)溶于二氧六环(9ml)和水(4ml)，加入连二碳酸二叔丁酯(9.59g)并将反应混合物室温搅拌18小时。然后减压蒸除溶剂并将剩余的水溶液用2N氢氧化钠水溶液碱化至pH9.0。将产物用乙酸乙酯萃取两次，将合并的有机层用硫酸镁干燥然后减压蒸除溶剂。将粗产物通过硅胶柱色谱纯化，用溶剂系统93∶7∶1(体积比)二氯甲烷∶甲醇∶0.88氨水溶液洗脱得到黄色液体状(顺)-3,5-二甲基-1-哌嗪甲酸叔丁酯(6.40g)。1H-NMR(CDCl3)δ:3.90(2H,bs),2.80(2H,m),2.30(2H,m),1.45(9H,s),1.40(1H,bs),1.05(6H,d).MS:215(MH+).制备例6(顺)-4-[2-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异氮杂茚-2-基)乙基]-3,5-二甲基-1-哌嗪甲酸叔丁酯将碳酸钾(1.79g)加入到(顺)-3,5-二甲基-1-哌嗪甲酸叔丁酯(2.57g)[参见制备例5]的乙腈(10ml)溶液中。将反应混合物室温搅拌5分钟，然后加入N-(2-溴乙基)邻苯二甲酰亚胺(3.36g)并将混合物继续搅拌4小时。加入碘化钠(0.1g)并将反应混合物加热回流18小时。然后将混合物冷却并减压蒸除溶剂。将残余物在乙酸乙酯和水之间进行分配，分出有机层，用硫酸镁干燥然后减压蒸除溶剂。将粗产物通过硅胶柱色谱纯化，用4∶1∶0→0∶95∶5(体积比)己烷∶乙酸乙酯∶0.88氨水溶液的溶剂梯度进行洗脱得到油状(顺)-4-[2-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异氮杂茚-2-基)乙基]-3,5-二甲基-1-哌嗪甲酸叔丁酯(0.94g)。1H-NMR(CDCl3)δ:7.85(2H,m),7.75(2H,m),3.90(2H,m),3.75(2H,t),2.95(2H,t),2.70-2.50(4H,m),1.45(9H,s),1.20(6H,d).MS:388(MH+).制备例7(顺)-4-(2-氨基乙基)-3,5-二甲基-1-哌嗪甲酸叔丁酯
将水合肼(0.11ml)加入到(顺)-4-[2-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异氮杂茚-2-基)乙基]-3,5-二甲基-1-哌嗪甲酸叔丁酯(0.736g)[参见制备例6]的甲醇(1.1ml)溶液中。然后将反应混合物于50℃搅拌18小时，然后减压蒸除溶剂并将残余物在乙酸乙酯和10％柠檬酸之间进行分配。分出水层，用碳酸钾碱化，将产物用四氢呋喃∶乙酸乙酯(1∶1)萃取数次。将合并的有机层用硫酸镁干燥然后减压蒸除溶剂得到油状(顺)-4-(2-氨基乙基)-3,5-二甲基-1-哌嗪甲酸叔丁酯(0.33g)。1H-NMR(CDCl3)δ:3.80(2H,bs),2.80(4H,m),2.60(4H,m),1.85(2H,m),1.45(9H,s),1.10(6H,d).MS:258(MH+).制备例8/实施例33(顺)-4-[2-([(2S)-1-(1,3-苯并噁唑-2-基)-2-哌啶基]羰基氨基)乙基]-3,5-二甲基-1-哌嗪甲酸叔丁酯
标题化合物通过与制备例4类似的方法从(2S)-1-(1,3-苯并噁唑-2-基)-2-哌啶甲酸[参见制备例3]和(顺)-4-(2-氨基乙基)-3,5-二甲基-1-哌嗪甲酸叔丁酯[参见制备例7]制备。将粗产物通过硅胶柱色谱纯化，用4∶1∶0→93∶7∶1(体积比)二氯甲烷∶甲醇∶0.88氨水溶液的溶剂梯度以1％的增量洗脱得到油状(顺)-4-[2-([(2S)-1-(1,3-苯并噁唑-2-基)-2-哌啶基]羰基氨基)乙基]-3,5-二甲基-1-哌嗪甲酸叔丁酯。1H-NMR(CDCl3)δ:7.40(1H,m),7.25(1H,m),7.20(1H,m),7.00(1H,m),6.60(1H,bs),4.95(1H,s),4.30(1H,d),3.75(2H,bs),3.40-3.20(3H,m),2.75(2H,t),2.45(5H,m),1.80-1.60(5H,m),1.45(9H,s),1.05(6H,d).MS:486(MH+).制备例92-[(2-羟基-1-甲基乙基)氨基]-1-丙醇
将二氧化铂(40mg)加入到含有3A分子筛的d1-2-氨基-1-丙醇(6.4ml)和羟基丙酮(7.0g)的甲醇(75ml)溶液中。将反应混合物于60psi.氢化18小时,然后滤除催化剂并减压蒸除溶剂。将粗产物通过蒸馏(b.p.94℃0.2mbar)进行纯化，得到黄色油状的2-[(2-羟基-1-甲基乙基)氨基]-1-丙醇(3.66g)。1H-NMR(CDCl3)δ:3.60(2H,m),3.30(2H,m),2.90(2H,m),2.40(3H,bs),1.10(3H,d),1.05(3H,d).制备例103,5-二甲基-1,4-噁嗪烷-4-鎓氯化物
将浓硫酸(2.5ml)在迅速搅拌下于0℃加入到2-[(2-羟基-1-甲基乙基)氨基]-1-丙醇(3.66g)[参见制备例9]中。然后将反应混合物加热至回流并搅拌8小时。然后向冷却的混合物中加入氢氧化钾水溶液(6.1g的31ml水溶液)，过滤除去生成的沉淀并用水洗涤数次。然后将含水洗涤液合并，用3M盐酸水溶液酸化至pH 1，减压除去水得到棕色结晶状3,5-二甲基-1,4-噁嗪烷-4-鎓氯化物(3.67g)。1H-NMR(d6-DMSO)δ:9.50(2H,bs),3.85(2H,t),3.50-3.35(3H,m),3.25(1H,m),1.25(3H,d),1.20(3H,d).制备例112-[2-(3,5-二甲基吗啉代)乙基]-1H-异氮杂茚-1,3(2H)-二酮
标题化合物通过与制备例6类似的方法从3,5-二甲基-1,4-噁嗪烷-4-鎓氯化物[参见制备例10]和N(2-溴乙基)邻苯二甲酰亚胺制备。将粗产物通过硅胶柱色谱纯化，用溶剂系统8∶1(体积比)己烷∶乙酸乙酯洗脱得到油状2-[2-(3,5-二甲基吗啉代)乙基]-1H-异氮杂茚-1,3(2H)-二酮(455mg)。1H-NMR(CDCl3)δ:7.85(2H,m),7.70(2H,m),3.80-3.60(4H,m),3,30(2H,m),3.00(3H,m),2.60(1H,m),1.00(6H,m).MS:289(MH+).制备例122-(3,5-二甲基吗啉代)乙基胺标题化合物通过与制备例7类似的方法从2-[2-(3,5-二甲基吗啉代)乙基]-1H-异氮杂茚-1,3(2H)-二酮[参见制备例11]和水合物制备，得到白色固体状的2-(3,5-二甲基吗啉代)乙基胺。1H-NMR(CDCl3)δ:3.65(2H,d),3.40(2H,m),2.90-2.50(8H,m),1.00(6H,m).MS:159(MH+).制备例13(2S)-1-(叔丁氧羰基)-2-哌啶甲酸
将(2S)-哌啶甲酸L-酒石酸盐(55.0g)[参见WO-A-96/11185]溶于水(200ml)。将形成的溶液冷却至0℃，然后在20分钟内依次加入连二碳酸二叔丁酯(86g)的二氧六环(203ml)溶液和1N氢氧化钠水溶液(610ml)。将反应混合物于0℃搅拌1小时，然后室温搅拌56小时。减压蒸除溶剂，将形成的固体溶于水(100ml)并用乙醚(1000ml)洗涤。将水层用1M柠檬酸水溶液(500ml)酸化至pH 2.0，然后将产物用乙酸乙酯(4×500ml)萃取。将合并的有机层用硫酸镁干燥然后减压蒸除溶剂得到白色固体状(2S)-1-(叔丁氧羰基)-2-哌啶甲酸(19.55g)。1H-NMR(d6-DMSO)δ:12.7(1H,bs),4.55(1H,d),3.80(1H,s),2.90-2.60(1H,m),2.05(1H,m),1.60(3H,m),1.30(10H,d),1.10(1H,m).制备例14(2S)-2-[(2-[(顺)-2,6-二甲基-1-哌啶基]乙基氨基)羰基]-1-哌啶甲酸叔丁酯
标题化合物通过与制备例4类似的方法从(2S)-1-(叔丁氧羰基)-2-哌啶甲酸[参见制备例13]和2-[(顺)-2,6-二甲基-1-哌啶基]乙基胺[《药物化学杂志》(J.Med.Chem.),27；5,(1984),684-691]制备。将粗产物通过硅胶柱色谱纯化，用100∶0→92∶8(体积比)二氯甲烷∶甲醇/0.88氨水溶液(20/1)的溶剂梯度以1％的增量洗脱得到油状(2S)-2-[(2-[(顺)-2,6-二甲基-1-哌啶基]乙基氨基)羰基]-1-哌啶甲酸叔丁酯。1H-NMR.(CDCl3)δ:6.40(1H,bs),4.80(1H,m),4.05(1H,d),3.30(2H,m),2.80(3H,m),2.50(2H,m),2.30(1H,m),1.80-1.30(20H,m),1.20(6H,d).MS:368(MH+).制备例15(2S)-N2-2-[(顺)-2,6-二甲基-1-哌啶基]乙基-2-哌啶甲酰胺
标题化合物通过与实施例8类似的方法从(2S)-2-[(2-[(顺)-2,6-二甲基-1-哌啶基]乙基氨基)羰基]-1-哌啶甲酸叔丁酯[参见制备例14]和三氟乙酸制备，得到胶状(2S)-N2-2-[(顺)-2,6-二甲基-1-哌啶基]乙基-2-哌啶甲酰胺。1H-NMR(CDCl3)δ:3.40(2H,bs),3.25(1H,d),3.10(1H,d),2.90(3H,bs),2.70(2H,t),2.00(1H,d),1.80(1H,s),1.75(1H,s),1.60(3H,bs),1.60-1.50(6H,m),1.25(6H,d).旋光度：[α]D=-13.1°(c=0.3甲醇)。制备例162-氯-5-(三氟甲基)-1H-1.3-苯并咪唑-1-甲酸叔丁酯
将连二碳酸二叔丁酯(593mg)加入到2-氯-5-(三氟甲基)-1H-1,3-苯并咪唑(500mg)[参见JP 02306916 A2 901220]的乙腈(5ml)溶液中然后加入二甲氨基吡啶(27mg)。将反应混合物室温搅拌10分钟，然后减压蒸除溶剂并将残余通过硅胶柱色谱纯化，用100∶0→85∶15(体积比)己烷∶乙酸乙酯的溶剂梯度以5％的增量洗脱得到胶状的2-氯-5-(三氟甲基)-1H-1,3-苯并咪唑-1-甲酸叔丁酯(678mg)，为1∶1的区域异构体混合物。1H-NMR(CDCl3)δ:8.25(0.5H,s),8.05(0.5H,d),7.95(0.5H,s),7.80(0.5H,d),7.60(1H,d),1.80(9H,s).制备例17/实施例34(2S)-1-(5-甲基-1.3-苯并噁唑-2-基)-2-哌啶甲酸苄酯
标题化合物通过与制备例2类似的方法从2-氯-5-甲基-1,3-苯并噁唑[参见《药物化学杂志》(J.Med.Chem),1988,31,1719-1728]和(2S)-2-[(苄氧基)羰基]哌啶鎓氯化物[参见EP 530167A1930303]制备。将粗产物通过硅胶柱色谱纯化，用90∶10→70∶30(体积比)己烷∶乙酸乙酯的溶剂梯度进行洗脱得到油状(2S)-1-(5-甲基-1,3-苯并噁唑-2-基)-2-哌啶甲酸苄酯。1H-NMR(CDCl3)δ:7.30(5H,m),7.20(1H,s),7.15(1H,d),6.85(1H,d),5.25(2H,d),5.10(1H,d),4.20(1H,d),3.40(1H,t),2.40(3H,s),2.35(1H,s),1.90-1.60(4H,m),1.40-1.20(1H,m).MS:351(MH+).制备例18(2S)-1-(5-甲基-1,3-苯并噁唑-2-基)-2-哌啶甲酸
将(2S)-1-(5-甲基-1,3-苯并噁唑-2-基)-2-哌啶甲酸苄酯(0.19g)[参见制备例17]溶于乙醇(5ml)并加入10％钯碳(0.05g)。将反应混合物于15psi下室温氢化3小时，然后加入10％钯碳(25mg)并将混合物继续氢化1小时，然后用arabocel垫滤除催化剂并用乙醇洗涤。减压蒸除溶剂得到固体状(2S)-1-(5-甲基-1,3-苯并噁唑-2-基)-2-哌啶甲酸(0.14g)。1H-NMR(CDCl3)δ:8.05(1H,bs),7.20(1H,s),7.10(1H,d),6.80(1H,d),4.90(1H,d),4.20(1H,d),3.40(1H,t),2.40(1H,m),2.35(3H,s),1.80(3H,m),1.60-1.40(2H,m).MS:261(MH+).制备例19/实施例35(2S)-1-(5-氟-1,3-苯并噁唑-2-基)-2-哌啶甲酸乙酯
标题化合物通过与制备例2类似的方法从(2S)-2-(乙氧基羰基)哌啶鎓氯化物[参见《美国化学会志》(J.Am.Chem.Soc.)(1993),11 5,9925-9938]和2-氯-5-氟-1,3-苯并噁唑[参见《药物化学杂志》(J.Med.Chem.)(1988),31,1719-1728]制备。将粗产物通过硅胶柱色谱纯化,用溶剂系统3∶1(体积比)己烷∶乙酸乙酯洗脱得到油状(2S)-1-(5-氟-1,3-苯并噁唑-2-基)-2-哌啶甲酸乙酯。1H-NMR(CDCl3)δ:7.10(1H,m),7.00(1H,m),6.65(1H,m),4.92(1H,d),4.15(3H,m),3.30(1H,t),2.30(1H,d),1.80(3H,m),1.55(1H,m),1.30(1H,m),1.20(3H,t).制备例20(2S)-1-(5-氟-1,3-苯并噁唑-2-基)-2-哌啶甲酸
标题化合物通过与制备例3类似的方法从(2S)-1-(5-氟-1,3-苯并噁唑-2-基)-2-哌啶甲酸乙酯[参见制备例19]和1N氢氧化锂水溶液制备，得到固体状(2S)-1-(5-氟-1,3-苯并噁唑-2-基)-2-哌啶甲酸。1H-NMR(CDCl3)δ:11.7(1H,bs),7.10(2H,m),6.65(1H,m),4.90(1H,d),4.10(1H,d),3.40(1H,t),2.40(1H,d),1.80(3H,m),1.70-1.40(2H,m).制备例212-氯-5-甲氧基-1H-1,3-苯并咪唑-1-甲酸叔丁酯
将连二碳酸二叔丁酯(523mg)加入到2-氯-5-甲氧基-1H-1,3-苯并咪唑(364mg)和二甲基氨基吡啶(24mg)的乙腈(4ml)溶液中。将反应混合物室温搅拌30分钟，然后减压蒸除溶剂。将粗产物通过硅胶柱色谱纯化，用90∶10→85∶15(体积比)己烷∶乙酸乙酯的溶剂梯度进行洗脱得到灰白色固体状2-氯-5-甲氧基-1H-1,3-苯并咪唑-1-甲酸叔丁酯(470mg)，为1∶1区域异构体的混合物。1H-NMR(CDCl3)δ:7.80(0.5H,d),7.55(0.5H,d),7.50(0.5H,s),7.15(0.5H,s),7.00(1H,t),3.85(3H,s),1.70(9H,s).制备例222-氯-6-氟-1H-1,3-苯并咪唑-1-甲酸叔丁酯
标题化合物通过与制备例21类似的方法从2-氯-6-氟-1H-1,3-苯并咪唑[参见JP 62061978 A2 870318.Showa，以及其中引用的参考文献]制备。将粗产物通过硅胶柱色谱纯化，用100∶0→90∶10(体积比)己烷∶乙酸乙酯的溶剂梯度进行洗脱得到白色固体状2-氯-6-氟-1H-1,3-苯并咪唑-1-甲酸叔丁酯，为1∶1区域异构体的混合物。1H-NMR(d4-MeOH)δ:8.00(0.5H,m),7.70(0.5H,d),7.60(0.5H,m),7.40(0.5H,d),7.20(2H,m),1.70(9H,s).制备例232,6-二氯-1H-1,3-苯并咪唑-1-甲酸叔丁酯
标题化合物通过与制备例21类似的方法从2,6-二氯-1H-1,3-苯并咪唑[参见US,44pp.US 5,248,672的部分继续申请。CODEN:USXXAM,US 5574058 A 961112]制备。将粗产物通过硅胶柱色谱纯化，用100∶0→80∶20(体积比)己烷∶乙酸乙酯的溶剂梯度以5％的增量洗脱得到固体状2,6-二氯-1H-1,3-苯并咪唑-1-甲酸叔丁酯，为1∶1区域异构体的混合物。1H-NMR(CDCl3)δ:8.00(0.5H,s),7.95(0.5H,d),7.65(0.5H,s),7.60(0.5H,d),7.40(1H,t),1.75(9H,s).制备例245-碘-1、3-二氢-2H-1,3-苯并咪唑-2-酮
将1,1’-羰基二咪唑(13.6g)加入到2-氨基-4-碘苯基胺(13.2g)[参见Makromol.Chem.(1993),194(3),859-868]的四氢呋喃(100ml)溶液中。将反应混合物室温搅拌18小时，然后减压蒸除溶剂并将残余物在1N氢氧化钠水溶液和乙醚之间进行分配。将水层用浓盐酸水溶液酸化，滤出形成的白色沉淀并用水洗涤得到白色固体状5-碘-1,3-二氢-2H-1,3-苯并咪唑-2-酮(14.0g)。1H-NMR(d6-DMSO)δ:10.70(1H,s),10.65(1H,s),7.25(1H,d),7.20(1H,s),6.75(1H,d).制备例252-氯-6-碘-1H-1,3-苯并咪唑
将5-碘-1,3-二氢-2H-1,3-苯并咪唑-2-酮(7g)[参见制备例24]加入到磷酰氯的溶液(135ml)中。将反应混合物加热至120℃并搅拌2小时，然后减压蒸除磷酰氯并将残余物用水稀释。将残余的水溶液用碳酸氢钾水溶液中和并将产物用90∶10(体积比)二氯甲烷∶甲醇提取，用硫酸镁干燥然后减压蒸除溶剂得到白色固体状2-氯-6-碘-1H-1,3-苯并咪唑(3.68g)。1H-NMR(d4-MeOH)δ:7.90(1H,s),7.60(1H,d),7.35(1H,d).MS:279(MH+).制备例262-氯-6-碘-1H-1,3-苯并咪唑-1-甲酸叔丁酯
标题化合物通过与制备例21类似的方法从2-氯-6-碘-1H-1,3-苯并咪唑[参见制备例25]制备。将粗产物通过硅胶柱色谱纯化，用溶剂系统95∶5(体积比)己烷∶乙酸乙酯洗脱得到白色固体状2-氯-6-碘-1H-1,3-苯并咪唑-1-甲酸叔丁酯，为1∶1区域异构体的混合物。1H-NMR(d4-MeOH)δ:8.35(0.5H,s),7.95(0.5H,s),7.75(1.5H,m),7.40(0.5H,d),1.75(9H,s).MS:379(MH+).制备例272、5、6-三氯-1H-1,3-苯并咪唑-1-甲酸叔丁酯
标题化合物通过与制备例21类似的方法从2,5,6-三氯-1H-1,3-苯并咪唑[参见《药物化学杂志》(J.Med.Chem.)(1995),4098]制备。将粗产物通过硅胶柱色谱纯化，用100∶0→90∶10(体积比)己烷∶乙酸乙酯的溶剂梯度进行洗脱得到白色固体状2,5,6-三氯-1H-1,3-苯并咪唑-1-甲酸叔丁酯。1H-NMR(CDCl3)δ:8.10(1H,s),7.80(1H,s),1.75(9H,s).MS:321(MH+).制备例28/实施例36(2S)-1-(5-氯-1,3-苯并噁唑-2-基)-2-哌啶甲酸苄酯
标题化合物通过与制备例2类似的方法从(2S)-2-[(苄氧基)羰基]哌啶鎓氯化物[参见EP 530167 A1 930303]和2,5-二氯-1,3-苯并噁唑[参见《有机化学杂志》(J.O.C.)(1996),61(10),3289-3297]制备。将粗产物通过硅胶柱色谱纯化，用溶剂系统95∶5(体积比)己烷∶乙酸乙酯洗脱得到油状(2S)-1-(5-氯-1,3-苯并噁唑-2-基)-2-哌啶甲酸苄酯。1H-NMR(CDCl3)δ:7.30(6H,m),7.15(1H,d),7.00(1H,d),5.30-5.15(2H,m),5.05(1H,d),4.20(1H,d),3.40(1H,t),2.40(1H,d),1.90-1.50(3H,m),1.40-1.20(2H,m).MS:371(MH+).制备例29(2S)-1-(5-氯-1,3-苯并噁唑-2-基)-2-哌啶甲酸
标题化合物通过与制备例3类似的方法从(2S)-1-(5-氯-1,3-苯并噁唑-2-基)-2-哌啶甲酸苄酯[参见制备例28]和1N氢氧化锂水溶液制备，得到油状的(2S)-1-(5-氯-1,3-苯并噁唑-2-基)-2-哌啶甲酸。1H-NMR(CDCl3)δ:8.70(1H,bs),7.40(1H,m),7.15(1H,d),7.00(1H,d),5.00(1H,m),4.20(1H,m),3.40(1H,t),2.40(1H,m),1.80(2H,d),1.60(1H,m),1.50(1H,m),1.30(1H,m).MS:281(MH+).制备例30/实施例37(2S)-1-[5-(三氟甲基)-1,3-苯并噁唑-2-基]-2-哌啶甲酸苄酯
标题化合物通过与制备例2类似的方法从(2S)-2-[(苄氧基)羰基]哌啶鎓氯化物[参见EP 530167 A1 930303]和2-氯-5-(三氟甲基)-1,3-苯并噁唑[参见《药物化学杂志》(J.Med.Chem.)(1988),31,1719-1728]制备。将粗产物通过硅胶柱色谱纯化，用98∶2→90∶10(体积比)己烷∶乙酸乙酯的溶剂梯度进行洗脱得到油状的(2S)-1-[5-(三氟甲基)-1,3-苯并噁唑-2-基]-2-哌啶甲酸苄酯。1H-NMR(CDCl3)δ:7.60(1H,s),7.30(7H,m),5.20(2H,m),5.15(1H,d),4.20(1H,d),3.40(1H,t),2.40(1H,d),130-1.30(5H,m).MS:405(MH+).制备例31(2S)-1-[5-(三氟甲基)-1,3-苯并噁唑-2-基]-2-哌啶甲酸标题化合物通过与制备例3类似的方法从(2S)-1-[5-(三氟甲基)-1,3-苯并噁唑-2-基]-2-哌啶甲酸苄酯[参见制备例30]和1N氢氧化锂水溶液制备，得到油状的(2S)-1-[5-(三氟甲基)-1,3-苯并噁唑-2-基]-2-哌啶甲酸。1H-NMR(CDCl3)δ:7.60(1H,s),7.40(1H,d),7.20(1H,d),5.05(1H,d),4.25(1H,d),3.45(1H,t),2.40(1H,d),1.90(3H,m),1.65(1H,m),135(1H,m).MS:315(MH+).制备例322-氯-1H-苯并味唑-1-甲酸叔丁酯
标题化合物通过与制备例21类似的方法从2-氯苯并咪唑和连二碳酸二叔丁酯制备。将粗产物通过硅胶柱色谱纯化，用100∶0→90∶10(体积比)己烷∶乙酸乙酯的溶剂梯度进行洗脱得到油状2-氯-1H-苯并咪唑-1-甲酸叔丁酯。1H-NMR(CDCl3)δ:7.95(1H,m),7.65(1H,m),7.35(2H,m),1.75(9H,s).制备例332-巯基(sulfanyl)-1,3-苯并噁唑-6-醇
将研磨过的氢氧化钾(3.13g)加入到2,4-二羟基苯胺盐酸盐(6.007g)和黄原酸乙酯钾盐(17.9g)的乙醇(100ml)溶液中。将反应混合物加热回流18小时，然后减压蒸除溶剂，将残余物溶于水并用冰乙酸将pH调至5。形成棕色沉淀，将其放置18小时然后过滤，用水洗涤然后干燥得到棕色固体状2-巯基-1,3-苯并噁唑-6-醇(5.1g)。1H-NMR(d6-DMSO)δ:9.70(1H,b5),7.00(1H,d),6.85(1H,s),6.65(1H,m).MS:168(MH+).制备例342-氯-6-羟基-1,3-苯并噁唑
将2-巯基-1,3-苯并噁唑-6-醇(2.08g)[参见制备例33]加入到亚硫酰氯(12.3ml)中，然后加入二甲基甲酰胺(0.93ml)。将反应混合物加热回流5分钟，然后将混合物冷却。减压蒸除溶剂，将残余物与二甲苯共沸两次，然后将残余物在乙醚和水之间进行分配。分出有机层，用硫酸镁干燥然后减压蒸除溶剂。将粗产物通过硅胶柱色谱纯化，用100∶0→0∶100(体积比)己烷∶乙酸乙酯的溶剂梯度以50％的增量洗脱得到白色固体状2-氯-1,3-苯并噁唑-6-醇(1.715g)。1H-NMR(d6-DMSO)6:9.95(1H,s),7.50(1H,d),7.05(1H,s),6.85(1H,d).MS:168(MH+).制备例35乙酸(2-氯-1,3-苯并噁唑-6-基)酯
将三乙胺(1.48ml)加入到2-氯-1,3-苯并噁唑-6-醇(1.63g)[参见制备例34]的二氯甲烷(20ml)悬浮液中，5分钟后加入乙酸酐(1.01ml)。将反应混合物室温搅拌18小时，然后减压蒸除溶剂。将粗产物通过硅胶柱色谱纯化，用100∶0→40∶10→0∶100(体积比)己烷∶乙酸乙酯的溶剂梯度进行洗脱得到油状乙酸(2-氯-1,3-苯并噁唑-6-基)酯(1.63g)。1H-NMR(CDCl3)6:7.65(1H,d),7.35(1H,s),7.10(1H,d),2.35(3H,s).制备例36/实施例38(2S)-1-[6-(乙酰氧基)-1.3-苯并噁唑-2-基]-2-哌啶甲酸苄酯
标题化合物通过与制备例2类似的方法从(2S)-2-[(苄氧基)羰基]哌啶鎓氯化物[参见EP 530167 A1 930303]和乙酸(2-氯-1,3-苯并噁唑-6-基)酯[参见制备例35]制备。将粗产物通过硅胶柱色谱纯化，用80∶10→40∶10(体积比)己烷∶乙酸乙酯的溶剂梯度进行洗脱得到胶状(2S)-1-[6-(乙酰氧基)-1,3-苯并噁唑-2-基]-2-哌啶甲酸苄酯。1H-NMR(CDCl3)δ:7.30(6H,m),7.05(1H,s),6.90(1H,m),5.25-5.15(2H,q),5.05(1H,d),4.20(1H,d),3.35(1H,t),2.40(1H,d),2.35(3H,s),1.90-1.2(5H,m).MS:395(MH+).旋光度：[α]D=-136°(c=0.1甲醇)。制备例37(2S)-1-[6-(乙酰氧基)-1.3-苯并噁唑-2-基]-2-哌啶甲酸
标题化合物通过与制备例18类似的方法从(2S)-1-[6-(乙酰氧基)-1,3-苯并噁唑-2-基]-2-哌啶甲酸苄酯[参见制备例36]制备，得到白色泡沫状(2S)-1-[6-(乙酰氧基)-1,3-苯并噁唑-2-基]-2-哌啶甲酸。1H-NMR(CDCl3)δ:7.35(1H,d),7.05(1H,s),6.90(1H,d),4.95(1H,d),4.15(1H,d),3.40(1H,t),2.45(1H,d),2.30(3H,s),1.90-1.80(3H,m),1.70-1.40(2H,m).MS:305(MH+).旋光度：[α]D=-76.0°(c=0.1甲醇)。制备例38/实施例392-[(2S)-2-[(2-[(顺)-2,6-二甲基-1-哌啶基]乙基氨基)羰基]-1-哌啶基]-1.3-苯并噁唑-6-基乙酸酯
标题化合物按照与实施例1类似的方法从(2S)-1-[6-(乙酰氧基)-1,3-苯并噁唑-2-基]-2-哌啶甲酸[参见制备例37]和2-[(顺)-2,6-二甲基-1-哌啶基]乙基胺[《药物化学杂志》(J.Med.Chem.),27(5),(1984),684-691]制备。将粗产物通过硅胶柱色谱纯化，用100∶0∶0→99.4∶1.4∶0.2(体积比)二氯甲烷∶甲醇∶0.88氨水溶液的溶剂梯度进行洗脱得到白色泡沫状2-[(2S)-2-[(2-[(顺)-2,6-二甲基-1-哌啶基]乙基氨基)羰基]-1-哌啶基]-1,3-苯并噁唑-6-基乙酸酯。1H-NMR(CDCl3)δ:8.25(1H,m),7.10(1H,d),6.90(1H,s),6.70(1H,d),4.80(1H,m),4.05(1H,d),3.50(2H,m),3.30(1H,t),3.20-3.00(4H,bs),2.25(1H,d),2.15(3H,s),1.80-1.20(17H,m).MS:443(MH+).制备例39/实施例40(2S)-N-2-[(顺)-2,6-二甲基-1-哌啶基]乙基-1-(6-羟基-1.3-苯并噁唑-2-基)-2-哌啶甲酰胺
将2N氨水溶液(10ml)和丙酮(20ml)于0℃下加入到2-[(2S)-2-[(2-[(顺)-2,6-二甲基-1-哌啶基]乙基氨基)羰基]-1-哌啶基]-1,3-苯并噁唑-6-基乙酸酯(0.389g)[参见制备例38]中。将反应混合物在冰箱中放置18小时，然后减压蒸除溶剂。将剩余的水层用乙酸乙酯洗涤两次，将合并的有机层用硫酸镁干燥然后减压蒸除溶剂。将粗产物通过硅胶柱色谱纯化，用99∶1.75∶0.25→97∶3.5∶0.5(体积比)二氯甲烷∶甲醇∶0.88氨水溶液的溶剂梯度进行洗脱得到白色泡沫状(2S)-N-2-[(顺)-2,6-二甲基-1-哌啶基]乙基-1-(6-羟基-1,3-苯并噁唑-2-基)-2-哌啶甲酰胺(0.2g)。1H-NMR(CDCl3)δ:7.15(1H,d),6.80(1H,s),6.75(1H,m),6.65(1H,d),4.90(1H,s),4.25(1H,d),3.40(1H,m),3.30-3.20(2H,m),2.75(2H,m),2.50-2.40(3H,m),1.80-1.10(17H,m).MS:401(MH+).旋光度：[α]D=-75.82°(c=0.1甲醇)。制备例40/实施例41(2S)-1-(6-溴-1,3-苯并噁唑-2-基)-2-哌啶甲酸甲酯
将2,4,4,6-四溴-2,5-环己二烯-1-酮(4.7g)在-10℃下于10分钟内加入到(2S)-1-(1,3-苯并噁唑-2-基)-2-哌啶甲酸甲酯(3.0g)[参见制备例2]的二氯甲烷(60ml)溶液中。然后将反应混合物升温至室温并用二氯甲烷稀释。将有机层用饱和碳酸氢钠洗涤，然后用1N氢氧化钠溶液洗涤，用硫酸镁干燥然减压蒸除溶剂得到紫色油状(2S)-1-(6-溴-1,3-苯并噁唑-2-基)-2-哌啶甲酸甲酯(3.7g)。1H-NMR(CDCl3)δ:7.40(1H,s),7.25(1H,d),7.20(1H,d),5.00(1H,d),4.20(1H,d),3.80(3H,s),3.40(1H,t),2.40(1H,d),1.80(3H,m),1.70(1H,m),1.40(1H,m).制备例41/实施例42(2S)-1-(6-异丁基-1,3-苯并噁唑-2-基)-2-哌啶甲酸甲酯将异丁基硼酸(475mg)、碳酸钾(644mg)和四-三苯膦钯(269mg)在氮气氛下依次加入到(2S)-1-(6-溴-1,3-苯并噁唑-2-基)-2-哌啶甲酸甲酯(790mg)[参见制备例40]的甲苯∶四氢呋喃(60∶40，体积比)(20ml)溶液中。将反应混合物于80℃加热20小时，然后减压蒸除溶剂并将残余物在水和二氯甲烷之间进行分配。分出有机层，用水洗涤，用硫酸镁干燥然后减压蒸除溶剂。将粗产物通过硅胶柱色谱纯化，用溶剂系统80∶20(体积比)己烷∶乙酸乙酯洗脱得到油状(2S)-1-(6-异丁基-1,3-苯并噁唑-2-基)-2-哌啶甲酸甲酯(100mg)。1H-NMR(CDCl3)δ:7.25(1H,d),7.05(1H,s),6.95(1H,d),5.05(1H,d),4.20(1H,d),3.75(3H,s),3.40(1H,t),2.50(2H,d),2.35(1H,d),1.90-1.80(4H,m),1.70-1.60(1H,m),1.40(1H,m),0.95(6H,d).MS:317(MH+).制备例42(2S)-1-(6-异丁基-1,3-苯并噁唑-2-基)-2-哌啶甲酸
标题化合物通过与制备例3类似的方法从(2S)-1-(6-异丁基-1,3-苯并噁唑-2-基)-2-哌啶甲酸甲酯[参见制备例41]和1N氢氧化锂水溶液制备，得到泡沫状(2S)-1-(6-异丁基-1,3-苯并噁唑-2-基)-2-哌啶甲酸。1H-NMR(CDCl3)δ:7.30(1H,m),7.05(1H,s),6.95(1H,d),5.05(1H,m),4.20(1H,d),3.40(1H,t),2.50-2.20(3H,m),1.85(4H,m),1.70-1.40(2H,m),0.90(6H,d).MS:303(MH+).制备例432-氯-5,6-二氟-1H-1,3-苯并咪唑-1-甲酸叔丁酯
标题化合物通过制备例21的方法从2-氯-5,6-二氟-1H-1,3-苯并咪唑[《药物化学杂志》(J.Med.Chem.)1997,40(5),811]制备。1H-NMR(d4-MeOH)δ:7.85(1H,M),7.53(1H,M),1.71(9H,s).制备例442-氯-5-甲基-1H-1,3-苯并咪唑-1-甲酸叔丁酯
标题化合物通过制备例21的方法从2-氯-4-甲基-1H-1,3-苯并咪唑[WO.9015058]制备。1H-NMR(d4-MeOH)δ:7.74(1H,d),7.25(1H,m),7.16(1H,d),2.60(3H,s),1.73(9H,s).制备例452-氯-5-甲基-1H-1,3-苯并咪唑-1-甲酸叔丁酯
标题化合物通过制备例21的方法从2-氯-5-甲基-1H-1,3-苯并咪唑[G.B.1015937]制备，得到1∶1区域异构体混合物形式的标题化合物。1H-NMR(d4-MeOH)δ:7.78(1H,m),7.53(0.5H,d),7.42(0.5H,s),7.16(1H,m),2.49(1.5H,s),2.45(1.5H,s),1.73(9H,s).制备例464-氟-1,3-二氢-2H-1,3-苯并咪唑-2-酮
标题化合物通过制备例24的方法从1,2-二氨基-3-氟苯[《有机化学杂志》(J.O.C.)1969,34(2),384]和1,1’-羰基二咪唑制备。1H-NMR(d4-MeOH)δ:6.98(1H,m),6.84-6.79(2H,m)。分析：实测值C,54.99；H,3.19；N,18.19；C7H5FN2O的理论值C,55.27；H,3.31；N,18.41％。制备例472-氯-4-氟-1H-1,3-苯并咪唑
标题化合物通过制备例25的方法从4-氟-1,3-二氢-2H-1,3-苯并咪唑-2-酮[参见制备例46]制备。1H-NMR(d4-MeOH)δ:7.32(1H,d),7.28(1H,m),7.00(1H,t).制备例482-氯-4-氟-1H-1,3-苯并咪唑-1-甲酸叔丁酯
标题化合物通过制备例21的方法从2-氯-4-氟-1H-1,3-苯并咪唑[参见制备例47]制备。1H-NMR(d4-MeOH)δ:7.79(1H,d),7.38(1H,m),7.12(1H,t),1.73(9H,s),制备例492-巯基-7-(甲氧基)羰基-1,3-苯并噁唑
向2-羟基-3-氨基苯甲酸甲酯(1.81g)的甲醇溶液中加入黄原酸乙酯钾盐(1.91g)并将混合物加热回流18小时。将反应液冷却，减压蒸除溶剂并将残余物溶于水。向该溶液中加入冰乙酸并通过真空过滤收集形成的白色沉淀。将固体用水洗涤然后干燥得到白色粉末状2-巯基-7-(甲氧基)羰基-1,3-苯并噁唑(1.59g)。1H-NMR(d4-MeOH)δ:7.80(1H,d),7.39(2H,m),3.95(3H,s)MS:227.1(MH+)制备例50/实施例43(2S)-1-[7-(甲氧基)羰基-1,3-苯并噁唑-2-基]-2-哌啶甲酸苄酯
将2-巯基-7-(甲氧基)羰基-1,3-苯并噁唑(1.00g)[参见制备例49]加入到亚硫酰氯(4.9ml)中，然后加入二甲基甲酰胺(0.37ml)并将混合物加热回流10分钟。将混合物冷却然后减压蒸除溶剂，将残余物与二甲苯共沸两次得到黄褐色固体。将该固体立即溶于乙腈(20ml)中并加入N-乙基二异丙基胺(3.3ml)和(2S)-2-[(苄氧基)羰基]哌啶鎓氯化物(1.22g)，然后将混合物加热回流7小时。将反应液冷却，减压蒸除溶剂，并将残余物溶于乙酸乙酯中。依次用1M柠檬酸水溶液、饱和碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤，然后用硫酸镁干燥并减压蒸除溶剂。将粗产物通过硅胶柱色谱纯化，用5∶1(体积比)己烷∶乙酸乙酯的溶剂梯度进行洗脱得到橙色胶状(2S)-1-[7-(甲氧基)羰基-1,3-苯并噁唑-2-基]-2-哌啶甲酸苄酯(0.44g)。1H NMR(CDCl3)δ:7.62(1H,d),7.55(1H,d),7.28(5H,m),7.20(1H,t),5.25(2H,m),5.18(1H,m),4.25(1H,m),3.92(3H,s),3.40(1H,m),2.38(1H,m),1.90(3H,m),1.60(1H,m),1.39(1H,m)MS:395.3(MH+)精确质量测量：C22H23N2O5(MH+)的理论值395.1607。实测值395.1610。制备例51(2S)-1-[7-(甲氧基)羰基-1,3-苯并噁唑-2-基]-2-哌啶甲酸
标题化合物通过与制备例18类似的方法从(2S)-1-[7-(甲氧基)羰基-1,3-苯并噁唑-2-基]-2-哌啶甲酸苄酯[参见制备例50]制备，得到棕色胶状(2S)-1-[7-(甲氧基)羰基-1,3-苯并噁唑-2-基]-2-哌啶甲酸。1H NMR(d4-MeOH)δ:7.59(1H,d),7.42(1H,d),7.20(1H,t),4.80(1H,m),4.12(1H,m),3.95(3H,s),3.55(1H,m),2.42(1H,d),1.80-1.40(5H,m)MS:304.9(MH+)精确质量测量：C15H16N2O5(M+)的理论值304.1059。实测值304.1064。制备例52/实施例44(2S)-1-[5,6-二甲基-1,3-苯并噁唑-2-基]-2-哌啶甲酸苄酯
标题化合物通过与制备例2类似的方法从2-氯-5,6-二甲基-1,3-苯并噁唑[参见《药物化学杂志》(J.Med.Chem.)(1972),15,523-9]和(2S)-2-[(苄氧基)羰基]哌啶[参见EP 530167 A1 930303]制备。将粗产物通过硅胶柱色谱纯化，用100∶0→80∶20(体积比)己烷∶乙酸乙酯的溶剂梯度进行洗脱得到黄色固体状(2S)-1-[5,6-二甲基-1,3-苯并噁唑-2-基]-2-哌啶甲酸苄酯。1H NMR(CDCL3)δ:7.25(5H,m),7.15(1H,s),7.00(1H,s),5.15(2H,q),5.05(1H,m),4.15(1H,d),3.35(1H,t),2.35(1H,m),2.25(6H,s),1.85(1H,m),1.75(2H,m),1.60(1H,m),1.30(1H,m).MS:365.5(MH+)制备例53(2S)-1-[5,6-二甲基-1,3-苯并噁唑-2-基]-2-哌啶甲酸
标题化合物通过与制备例18类似的方法从(2S)-1-[5,6-二甲基-1,3-苯并噁唑-2-基]-2-哌啶甲酸苄酯[参见制备例52]制备，得到白色泡沫状(2S)-1-[5,6-二甲基-1,3-苯并噁唑-2-基]-2-哌啶甲酸。1H NMR(CDCL3)δ:7.15(1H,s),7.00(1H,s),4.90(1H,m),4.15(1H,d),3.40(1H,t),2.40(1H,d),2.25(6H,s),1.80(3H,m),1.55(2H,m).MS:275.3(MH+)生物学数据
为了说明本发明物质的FKBP抑制特性，将实施例3、11、12、17、18、19、27和31的化合物按照以上描述对FKBP-12和/或FKBP-52进行了试验。观察到的IC50和Ki,app值低于1μM。