增强NKT细胞的药物 【技术领域】
本发明涉及含有下述通式(Ⅰ)所示化合物或其可药用盐作为有效成分具有增强NKT细胞作用的自身免疫应答抑制剂和/或正常免疫应答激活剂。
另外，本发明还涉及下述通式(Ⅰ)表示的化合物或可药用盐的新型合成方法。
背景技术
本发明下述通式(Ⅰ)表示的1，2-二氢喹啉化合物中，某种物质是在WO95/24395及EP 0059698中记载的公知物质，例如，已知具有抑制蛋白尿漏出的作用、抑制抗TNP IgM产生的作用，对大鼠的角叉菜胶浮肿有效、对大鼠的佐剂引起的关节炎有效。但是，尚不知道这些化合物具有增强NKT细胞的作用。
另外，在WO95/24395中作为1，2-二氢喹啉化合物(Ⅰ)的合成方法，以6-氯-1，2-二氢-4-羟基-1-甲基-2-羰基-3-〔N-苯基-N-甲基(硫代氨基甲酰基)〕喹啉(Ⅰa)为例公开了以下合成方法。
(现有方法)
在现有方法中，为了从化合物(Ⅲa)得到目的化合物(Ⅰa)，在回流下使化合物(Ⅲa)和化合物(Ⅸ)反应，以40.8％的收率得到化合物(Ⅹ)。进一步，在氢化钠等强碱存在下，使化合物(Ⅹ)和化合物(Ⅺ)反应，以17.5％的收率得到目的化合物(Ⅰa)。这时从化合物(Ⅲa)得到目的化合物(Ⅰa)的总体收率为7.1％。如上所述在上述公开公报中公开的通式(Ⅰ)所示1，2-二氢喹啉化合物(Ⅰa)的制备方法存在各步骤收率低等缺点。发明描述
本发明涉及具有增强NKT细胞作用的自身免疫应答抑制剂和/或正常免疫应答激活剂，其特征在于含有通式(Ⅰ)所示化合物或其可药用盐作为有效成分。
〔式中，R1表示氢或卤素，
R2表示羟基，
R3表示低级烷基，
R4表示低级烷基，
R5表示氢或低级烷氧基，
Z表示O或S。〕
另外，本发明还提供在收率等方面比公知方法优良地下述制备1，2-二氢喹啉化合物(Ⅰ)或其盐的方法。
本发明涉及的上述1，2-二氢喹啉化合物(Ⅰ)的制备方法如下所述。
方法(1)
〔式中R1、R2、R3、R4、R5及Z分别表示与上述相同的含义，
X1表示离去基团。〕
原料化合物(Ⅱ)可以按照下述制备方法制备。
方法(A)
方法(B)
或在其羧基团的反应活性衍生物，或其盐
〔式中R1、R2、R3、R4、R5、X1及Z分别表示与上述相同的含义，
X2表示离去基团。〕
本说明书的上述及后述说明中，如下所述对于包含在本发明范围内的各种定义的合适实施例乃至具体实例进行详细说明。
化合物(Ⅰ)的合适可药用盐是常用的无毒盐，例如与碱形成的盐或酸加成盐，如与无机碱形成的盐，如碱金属盐(如钠盐、钾盐等)、碱土金属盐(如钙盐、镁盐等)、铵盐；与有机碱形成的盐，如有机胺盐(如三乙胺盐、吡啶盐、甲基吡啶盐、乙醇胺盐、三乙醇胺盐、二环己基胺盐、N，N’-二苯甲基乙二胺盐等)；无机酸加成盐(如盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、磷酸盐等)；有机羧酸或磺酸加成盐(如甲酸盐、乙酸盐、三氟乙酸盐、马来酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐、甲苯磺酸盐等)；与碱性或酸性氨基酸(如精氨酸、天冬氨酸、谷氨酸等)形成的盐等。
只要没有特别的说明，“低级”用来指具有1～6个，优选1～4个碳原子的基团。
合适的“低级烷基”例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、叔丁基、戊基、己基等直链或支链状物质。其中更优选C1～C4烷基。
合适的“低级烷氧基”例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、叔戊氧基、己氧基等，其中更优选C1～C4烷氧基。
合适的“卤素”例如氟、氯、溴和碘。
合适的“离去基团”例如氟、氯、溴、碘等卤素，甲氧基、乙氧基、丙氧基等低级烷氧基，甲磺酰氧基、苯磺酰氧基等磺酰氧基等。
本发明化合物(Ⅰ)优选的具体实例如下所述。
6-氯-1，2-二氢-4-羟基-1-甲基-2-羰基-3-〔N-苯基-N-甲基(硫代氨基甲酰基)〕喹啉
6-氯-1，2-二氢-4-羟基-1-甲基-2-羰基-3-〔N-甲基-N-(4-甲氧基苯基)(硫代氨基甲酰基)〕喹啉
1，2-二氢-4-羟基-1-甲基-2-羰基-3-〔N-苯基-N-甲基氨基甲酰基〕喹啉
以下详细说明本发明化合物(Ⅰ)以及作为中间体有用的化合物(Ⅱ)的制备方法。
方法(1)
化合物(Ⅰ)或其盐可以通过使化合物(Ⅱ)或其盐进行环化反应制备。
该反应通常是在水、醇(例如甲醇、乙醇等)、苯、N，N-二甲基甲酰胺、四氢呋喃、甲苯、二氯甲烷、二氯乙烷、氯仿、二氧六环、或乙醚等溶剂或对反应没有不良影响的其它任意溶剂或它们的混合物中实施。
反应温度没有特别的限定，通常是在冷却条件下乃至加热条件下进行反应。
反应通常是通过使用无机碱或有机碱，例如碱金属(例如钠、钾等)、碱金属氢氧化物(例如氢氧化钠、氢氧化钾等)、碱金属碳酸氢盐(例如碳酸氢钠、碳酸氢钾等)、碱金属碳酸盐(例如碳酸钠、碳酸钾等)、三(低级)烷胺(例如三甲胺、三乙胺、二异丙基乙胺等)、碱金属氢化物(例如氢化钠等)、碱金属(低级)醇化物(例如甲醇钠、乙醇钠等)、吡啶、二甲基吡啶、甲基吡啶、二甲氨基吡啶、N-(低级)烷基吗啉、N，N-二(低级)烷基苯甲胺、N，N-二(低级)烷基苯胺等的方法进行。
该碱和/或原料化合物为液态时，也可以使用它们作为溶剂。
方法(A)-(1)
化合物(Ⅴ)或其盐可以通过使化合物(Ⅲ)或其盐与化合物(Ⅳ)或其盐反应制备。
该反应可以按照下述制备例1-(1)所示方法或与之相似的方法进行。
方法(A)-(2)
化合物(Ⅵ)或其盐可以通过使化合物(Ⅴ)或其盐进行羰基转化为硫羰基反应制备。
该反应可以按照制备例1-(2)或2所示方法或者与之相似的方法进行。
方法(A)-(3)
化合物(Ⅶ)或其盐可以通过使化合物(Ⅵ)或其盐进行引入羧基的反应制备。
该反应可以按照下述制备例3或4所示方法或与之相似的方法进行。
方法(A)-④
化合物(Ⅶ)或其盐可以通过使化合物(Ⅴ)或其盐进行引入羧基的反应制备。
该反应可以按照下述制备例3或4所示方法或者与之相似的方法进行。
方法(B)
化合物(Ⅱ)或其盐可以通过化合物(Ⅶ)或其羧基上的反应活性衍生物或它们的盐与化合物(Ⅷ)或其亚氨基上的反应活性衍生物或它们的盐反应制备。
化合物(Ⅷ)的亚氨基上合适的反应活性衍生物例如化合物(Ⅷ)与N，O-二(三甲基甲硅烷基)乙酰胺、N-三甲基甲硅烷基乙酰胺等甲硅烷基化合物反应形成的甲硅烷基衍生物；化合物(Ⅷ)与三氯化磷或光气反应形成的衍生物等。
化合物(Ⅶ)的羧基上合适的反应活性衍生物例如酰卤化物、酸酐、活性酯等。合适的例子有酰氯；酰基叠氮化物；与取代磷酸(例如二烷基磷酸、苯基磷酸、二苯基磷酸、二苯甲基磷酸、卤代磷酸等)、二烷基亚磷酸、亚硫酸、硫代硫酸、烷基磺酸(例如甲磺酸、乙磺酸等)、硫酸、烷基碳酸、脂肪族羧酸(例如新戊酸、戊酸、异戊酸、2-乙基丁酸、三氯乙酸等)、芳香族羧酸(例如苯甲酸等)等酸形成的混合酸酐；对称酸酐；与咪唑、4-取代咪唑、二甲基吡唑、三唑或四唑形成的活性酰胺；活性酯(例如氰基甲酯、甲氧基甲酯、二甲基亚氨基甲基〔(CH3)2N+=CH-〕酯、乙烯基酯、炔丙酯、对硝基苯酯、2，4-二硝基苯酯、三氯苯酯、五氯苯酯、甲磺酰基苯酯、苯偶氮基苯酯、苯基硫代酯(phenylthio ester)、对硝基苯基硫代酯(p-nitrophenylthio ester)、对甲苯基硫代酯(p-cresylthio ester)、羧甲基硫代酯、吡喃基酯、吡啶基酯、哌啶基酯、8-喹啉基硫代酯等)；与N-羟基化合物(例如N，N-二甲基羟胺、1-羟基-2(1H)-吡啶酮、N-羟基琥珀酰亚胺、N-羟基苯并三唑、N-羟基邻苯二甲酰亚胺、1-羟基-6-氯-1H-苯并三唑等)形成的酯等。
这些反应活性衍生物可以根据所使用的化合物(Ⅶ)的种类，从其中适当选择。
反应通常是在丙酮、二氧六环、乙腈、氯仿、二氯甲烷、二氯乙烷、四氢呋喃、乙酸乙酯、N，N-二甲基甲酰胺、吡啶等常用溶剂或对反应没有不良影响的其它任意溶剂或它们的混合物中实施。
反应优选在分子筛3埃或4埃等脱水剂的存在下实施。
化合物(Ⅶ)以游离酸或其盐的形式进行反应时，优选在N，N’-二环己基碳二亚胺；N-环己基-N’-吗啉基乙基碳二亚胺；N-环己基-N’-(4-二乙氨基环己基)碳二亚胺；N，N’-二异丙基碳二亚胺；N-乙基-N’-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺；N，N’-羰基二(2-甲基咪唑)；环戊乙烯酮-N-环己基亚胺；二苯基乙烯酮-N-环己基亚胺；乙氧基乙炔；1-烷氧基-1-氯乙烯；亚磷酸三烷基酯；多磷酸异丙酯、磷酰氯(三氯氧化磷)；三氯化磷；亚硫酰氯；草酰氯；三苯基磷化氢；2-乙基-7-羟基苯并异噁唑翁盐；氢氧化2-乙基-5-(间硫代苯基)异噁唑翁分子内盐；1-(对氯苯磺酰氧基)-6-氯-1H-苯并三唑；N，N-二甲基甲酰胺与亚硫酰氯、光气、磷酰氯等反应制得的所谓Vilsmeier试剂等常用缩合剂的存在下进行反应。
另外，反应也可以在碱金属碳酸氢盐类、三(低级)烷胺类、吡啶、N-低级烷基吗啉类、N，N-二(低级)烷基苯甲胺类等有机碱或无机碱存在下进行。
反应温度没有特别的限定，通常在冷却条件下乃至加热条件下进行反应。
另外，下面以6-氯-1，2-二氢-4-羟基-1-甲基-2-羰基-3-〔N-苯基-N-甲基(硫代氨基甲酰基)〕喹啉(Ⅰa)的合成为例详细说明本发明的新型合成方法。
在该新型合成方法中，步骤(a)～(e)的收率分别为90.2％、73.2％、66.4％、86.0％、96.9％，能够以各步骤较高的收率得到目的产物。由化合物(Ⅲa)得到目的化合物(Ⅰa)的总收率为36.5％，与上述公开公报(WO95/24395)中公开的由(Ⅲa)得到(Ⅰa)的收率7.1％相比，在收率方面得到了相当的改善。另外，各步骤将在下述制备例和实施例中分别详细公开(步骤(a)在制备例1-(1)中公开，步骤(b)在制备例1-(2)中公开，步骤(c)在制备例3中公开，步骤(d)在制备例5中公开，步骤(e)在实施例1中公开)。
NKT细胞是同时具有T细胞受体和NK细胞受体的独特细胞，它同时具有T细胞和NK细胞两种淋巴细胞的特征。
本发明的化合物(Ⅰ)及其可药用盐具有激活乃至增强NKT细胞的作用，因此作为增强NKT细胞的自身免疫应答抑制剂和/或正常免疫应答激活剂是特别有效的，例如可以有效治疗和/或预防人和动物的炎症状态、各种疼痛、胶原病、自身免疫疾病、各种免疫疾病等，特别是可以有效治疗和/或预防关节和肌肉的炎症和疼痛〔例如慢性关节风湿、风湿性脊椎炎、骨关节病、尿酸性关节炎等〕、皮肤的炎症状态〔例如晒伤、湿疹等〕、眼的炎症状态〔例如结膜炎等〕、伴有炎症的肺部疾病〔例如哮喘、支气管炎、鸽子饲养者病、农夫肺等〕、伴有炎症的消化器官疾病〔例如口疮性溃疡、克罗恩氏病、萎缩性胃炎、疣状胃炎、溃疡性大肠炎、脂肪便、局部性回肠炎、过敏性肠综合症等〕、牙龈炎、(手术或损伤后的炎症、疼痛、肿胀)、与炎症有关的发热、疼痛、其它症状、移植引起的排斥、全身性红斑狼疮、硬皮病、多发性肌炎、多发性软骨炎、结节性动脉周炎、强直性脊椎炎、炎症性慢性肾病〔例如肾小球性肾炎、狼疮肾炎、膜性肾炎等〕、风湿热、斯耶格伦氏综合征、贝切特氏病、甲状腺炎、Ⅰ型糖尿病、皮肤肌炎、慢性活动性肝炎、重症肌无力、特发性口炎性腹泻、Grave氏病、多发性硬化症、原发性胆汁性肝硬化、莱特尔氏综合症、自身免疫性血液疾病〔例如溶血性贫血、纯红细胞性贫血、特发性血小板减少、再生障碍性贫血等〕、葡萄膜炎、接触性皮炎、牛皮癣、川崎病、与Ⅰ型过敏反应有关的疾病(例如过敏性哮喘、特应性皮炎、寻麻疹、过敏性结膜炎、花粉病等)、休克(例如脓毒性休克、过敏性休克、成人型呼吸窘迫综合症等)、肉状瘤病、韦格内氏肉芽肿病、何杰金氏病、癌〔例如肺癌、胃癌、结肠癌、肾癌、肝癌等〕、病毒引起的疾病〔例如肝炎、慢性疲劳性综合症等〕等。
本发明的有效成分化合物(Ⅰ)或其可药用盐可以直接给药，一般是作为可药用的各种制剂组合物给药。
制剂组合物的剂型例如溶液、乳浊液、悬浊液、胶囊剂、颗粒剂、散剂、片剂、糖浆剂等口服制剂、软膏剂、滴眼剂、滴鼻剂等外用或局部给药制剂、注射剂、栓剂等。
这些制剂组合物可以使用蔗糖、淀粉、甘露醇、山梨醇、乳糖、葡萄糖、纤维素、滑石粉、磷酸钙、碳酸钙等赋形剂，纤维素、甲基纤维素、羟丙基纤维素、聚丙基吡咯烷酮、明胶、阿拉伯胶、聚乙二醇、蔗糖、淀粉等粘合剂，淀粉、羧甲基纤维素、羟丙基淀粉、碳酸氢钠、磷酸钙、羧甲基纤维素钙、枸橼酸钙等崩解剂，硬脂酸镁、滑石粉、月桂基硫酸钠等润滑剂，枸橼酸、薄荷醇、甘氨酸、山梨醇、橙粉等矫味剂，苯甲酸钠、亚硫酸氢钠、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯等保存剂，枸橼酸、枸橼酸钠、乙二胺四乙酸钠、醋酸等稳定剂，甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、硬脂酸铝等悬浊剂，羟丙基甲基纤维素等分散剂，水等溶剂，盐酸等溶解剂，单硬脂酸钠等乳化剂，柠檬香精等香料，苯扎氯铵等防腐剂，可可脂、聚乙二醇、微晶蜡、白蜂蜡、液体石蜡、白凡士林等基质等，按照常规方法制成制剂。
本发明制剂组合物的给药量根据患者的年龄、体重、症状、给药方法等有所不同，通常作为其有效成分的化合物(Ⅰ)或其可药用盐在1次0.001～300mg/kg的范围内，优选在0.32～32mg/kg的范围内口服给药或非口服给药。
其次，通过实验例证明本发明的化合物或其可药用盐对NKT细胞的增强具有优良作用，对于自身免疫疾病的一种——狼疮肾炎具有优良的治疗效果。
实验例1：NKT细胞的增强作用
1、试验方法
对于狼疮肾炎自然发病的W/BF1小鼠，在6～16周龄期间，使之连续每日口服试验化合物(10mg/kg)。在16周龄时摘出脾脏，溶血除去红细胞，测定总脾细胞中的NKT细胞比例。NKT细胞的检测是使用抗TCR抗体和抗NK1.1抗体进行二重染色后，通过流式细胞术进行解析。
2、试验化合物
6-氯-1，2-二氢-4-羟基-3-〔N-甲基-N-(4-甲氧基苯基)(硫代氨基甲酰基)〕-1-甲基-2-羰基喹啉
3、试验结果总脾细胞中NKT细胞的比例(％)对照组0.48±0.08试验化合物给药组1.19*±0.05
*：P＜0.01与对照组相比有显著差异
实验例2：对狼疮肾炎的治疗效果
1、试验方法
对于狼疮肾炎自然发病的雄性W/BF1小鼠，在6～16周龄期间，使之连续每日口服试验化合物(10mg/kg)。摘出肾脏，用福尔马林固定后，制成病理标本，进行肾炎病理组织判定。
2、试验化合物
6-氯-1，2-二氢-4-羟基-3-〔N-甲基-N-(4-甲氧基苯基)(硫代氨基甲酰基)〕-1-甲基-2-羰基喹啉
3、试验结果 肾炎病理组织判定 对照组 2.80±0.49 试验化合物给药组 0.50*±0.22
*：P＜0.01与对照组相比有显著差异
实验例3：毒性试验
将试验化合物(10mg/kg)1日1次，每周7日，连续2周投给大鼠(1组雌雄各5只)，确认在这个过程中没有出现死亡例。
以下，结合制备例和实施例进一步说明本发明。
制备例1-(1)
在0℃下，向N-甲基苯胺(27ml)和吡啶(40.3ml)的二氯甲烷(270ml)溶液中滴加乙酰氯23.0ml，在相同温度下搅拌该混合物15分钟。加入水(300ml)，分层，用1N盐酸(300ml)洗涤有机层2次。再依次用碳酸氢钠水溶液、盐水洗涤后，用硫酸镁干燥，蒸馏除去溶剂。将残渣用异丙基醚重结晶，得到N-苯基-N-甲基乙酰胺(33.5g；收率90.2％)的无色晶体。
熔点：97～98℃
制备例1-(2)
将甲苯中的N-苯基-N-甲基乙酰胺(13.9g)与五硫化磷(4.2g)的混合物在110℃下搅拌3小时。将反应混合物注入到碳酸钠、水和二氯甲烷的混合物中。用硅藻土过滤反应混合物，将滤液分层。用无水硫酸镁干燥有机层，蒸发。将残渣用硅胶(250g)柱色谱法(正己烷∶乙酸乙酯=10∶1)处理，得到N-苯基-N-甲基(硫代乙酰胺)(11.3g；收率73.2％)。
熔点：53～54℃
制备例2
将甲苯中的N-(4-甲氧基苯基)-N-甲基乙酰胺(96.9g)和五硫化磷(31.3g)的混合物在110℃下搅拌3小时。将反应混合物注入到碳酸钠、水和二氯甲烷的混合物中。用硅藻土过滤反应混合物，将滤液分层。用无水硫酸镁干燥有机层，蒸发。将残渣用硅胶(620g)柱色谱法(正己烷∶乙酸乙酯=10∶1)处理，得到N-(4-甲氧基苯基)-N-甲基(硫代乙酰胺)(103g；)。
核磁(CDCl3，δ)：2.40(3H，s)，3.72(3H，s)，3.84 (3H，s)，6.9-7.2(4H，m)。
质谱(m/z)：196(M+1)+。
制备例3
在氮气环境中，在0℃下，将丁基锂(己烷中1.53M溶液)(11.4ml)滴加到二异丙胺(2.8ml)的四氢呋喃(50ml)溶液中。将该混合物搅拌10分钟，冷却到-20℃。加入N-苯基-N-甲基(硫代乙酰胺)(2.0g)，在-20℃下将其搅拌80分钟。加入干冰(3g)，在-20℃下搅拌生成的混合物40分钟。将异丙基醚(50ml)和水(50ml)加入到反应混合物中。在水层中混入二氯甲烷(50ml)，在5℃下用4N盐酸(10ml)酸化。分离出有机层，干燥，蒸发。在-15℃下在甲苯(10ml)和己烷(8ml)中搅拌残渣1小时，收集沉淀，用己烷和甲苯(1∶1)的冷混合溶液洗涤，得到3-(N-苯基-N-甲氨基)-3-硫代丙酸(1.68g；收率66.4％)的白色晶体。
红外(石蜡糊)：3450，1715，1590cm-1。
核磁(CDCl3，δ)：3.70(2H，s)，3.77(3H，s)，7.1- 7.6(5H，m)。
制备例4
在氮气环境中，在0℃下，将丁基锂(己烷中1.53M溶液)(506ml)滴加到二异丙胺(124ml)的四氢呋喃(1.01)溶液中。将该混合物搅拌10分钟，冷却到-20℃。然后加入N-(4-甲氧基苯基)-N-甲基(硫代乙酰胺)(105g)，在-20℃下将其搅拌80分钟。加入干冰(132g)，在-20℃下搅拌生成的混合物40分钟。将异丙基醚(400ml)和水(11)加入到该反应混合物中。在水层中混入二氯甲烷(1.31)，在5℃下用浓盐酸(157ml)酸化。分离出有机层，干燥，蒸发。在-15℃下在甲苯(307ml)和己烷(244ml)中搅拌残渣1小时，收集沉淀，用己烷和甲苯(1∶1)的冷混合溶液洗涤，得到3-〔N-(4-甲氧基苯基)-N-甲氨基〕-3-硫代丙酸(81. 2)的淡茶色晶体。
核磁(CDCl3，δ)：3.70(2H，s)，3.74(3H，s)，3.85 (3H，s)，6.9-7.2(4H，m)。
制备例5
在氮气环境中室温下，在二氯甲烷(250ml)中将3-(N-苯基-N-甲氨基)-3-硫代丙酸(25.3g)、粉末分子筛(4埃，活性型，Aldrich公司生产，12.7g)以及吡啶(19.5ml)的混合物搅拌30分钟，冷却到-20℃。滴加新戊酰氯(14.9ml)，在-20℃下将混合物搅拌30分钟。再加入5-氯-2-(甲氨基)苯甲酸乙酯(21.6g)，在-20℃下搅拌1分钟，在0℃下搅拌1小时，在室温下搅拌过夜。将该混合物注入到乙酸乙酯(11)和食盐水(600ml)的混合物中，全部用硅藻土过滤。分离有机层，依次用稀盐酸、盐水和碳酸氢钠水溶液洗涤，干燥，蒸发。将残渣用硅胶(500g)柱色谱法(己烷∶乙醚=1∶2)处理，得到5-氯-2-〔N-〔3-(N’-苯基-N’-甲氨基)-3-硫代丙酰基〕-N-甲氨基〕苯甲酸乙酯(35.2g；收率86.0％)。
核磁(CDCl3，δ)：1.20(3H，t，J=7Hz)，3.12(3H，s)， 3.35(2H，s)，3.71(3H，s)，4.20(2H，q，J=7Hz)， 7.1-7.5(7H，m)，7.87(1H，d，J=2.6Hz)。
质谱(m/z)：405(M+1)+。
制备例6
在氮气环境中室温下，在二氯甲烷(234ml)中将3-〔N’-(4-甲氧基苯基)-N’-甲氨基〕-3-硫代丙酸(30.8g)、粉末分子筛(4埃，活性型，Aldrich公司生产)以及吡啶(18.1ml)的混合物搅拌30分钟，冷却到-20℃。滴加新戊酰氯(13.8ml)，在-20℃下将混合物搅拌30分钟。再加入5-氯-2-(甲氨基)苯甲酸乙酯(20g)，在-20℃下搅拌1分钟，在0℃下搅拌1小时，在室温下搅拌过夜。将混合物注入到乙酸乙酯(11)和盐水(600ml)的混合物中，全部用硅藻土过滤。分离有机层，依次用稀盐酸、盐水和碳酸氢钠水溶液洗涤，干燥，蒸发。将残渣(64g)用硅胶(480g)柱色谱法(己烷∶乙醚=1∶2)处理，得到5-氯-2-〔N-〔3-〔N’-(4-甲氧基苯基)-N’-甲氨基〕-3-硫代丙酰基〕-N-甲氨基〕苯甲酸乙酯(33.7g)。
核磁(CDCl3，δ)：1.22(3H，t，J=7Hz)，3.14(3H，s)， 3.36(2H，s)，3.68(3H，s)，3.83(3H，s)，4.20 (2H，q，J=7Hz)，6.9-7.6(6H，m)，7.88(1H，d， J=2.5Hz)。
质谱(m/z)：435(M+1)+，222。
实施例1
在5-氯-2-〔N-〔3-(N’-苯基-N’-甲氨基)-3-硫代丙酰基〕-N-甲氨基〕苯甲酸乙酯(35.2g)的乙醇(434ml)冰冷悬浊液中加入甲醇钠(7.70g)。在5℃下将混合物搅拌40分钟，注入到冰水(2.21)中。加入3N盐酸(43ml)，收集生成的沉淀，用水洗涤，得到6-氯-1，2-二氢-4-羟基-1-甲基-3-〔N-苯基-N-甲基(硫代氨基甲酰基)〕-2-羰基喹啉(30.2g；收率96.9％)。
mp：218℃(分解)
红外(石蜡糊)：3150，1625，1590，1570，1495cm-1。
核磁(DMSO-d6，δ)：3.42(3H，s)，3.74(3H，s)， 7.1-7.7(7H，m)，7.81(1H，d，J=2Hz)，11.15 (1H，s)。
实施例2
在5-氯-2-〔N-〔3-〔N，-(4-甲氧基苯基)-N，-甲氨基〕-3-硫代丙酰基〕-N-甲氨基〕苯甲酸乙酯(33.7g)的乙醇(390ml)冰冷悬浊液中加入甲醇钠(6.87g)。在5℃下将混合物搅拌40分钟，注入到冰水(1.81)中。加入3N盐酸(36ml)，收集生成的沉淀，用水洗涤，得到6-氯-1，2-二氢-4-羟基-1-甲基-3-〔N-(4-甲氧基苯基)-N-甲基(硫代氨基甲酰基)〕-2-羰基喹啉(32.4g)。
mp：195℃(分解)
红外(KBr)：1629，1606，1571，1508cm-1。
核磁(DMSO-d6，δ)：3.43(3H，s)，3.63(3H，s)，
3.69(3H，s)，6.79(2H，d，J=9Hz)，7.2-7.6(4H， m)，7.82(1H，d，J=2Hz)，11.12(1H，s)。
质谱(m/z)：389(M+1)+。
实施例3
将下述制剂中的成分按照常规方法混合，压缩得到片剂。
片剂的配方内容
主药 试验化合物 32mg
崩解剂 羧甲基纤维素钙 6mg
粘合剂 羟丙基纤维素 2mg
赋形剂 结晶纤维素 适量
润滑剂 硬脂酸镁 5mg
总量 90mg
实施例4
将下述制剂中的成分按照常规方法混合，制成软膏剂。
软膏剂的配方内容
主药 试验化合物 5g
基质 白蜂蜡 5g
基质 液体石蜡 24g
基质 白凡士林 40g
基质 微晶蜡 2g
乳化剂 单硬脂酸甘油酯 2g
溶剂 蒸馏水 适量 总量 100g