雌激素如雌甾酮和雌甾二醇涉及许多生理过程。该类甾族化合 物的形成可以由许多种酶所调节。在雄性激素如睾甾酮和雄烯二酮 向雌激素如雌甾二醇和雌甾酮的非可逆性转变中，芳构酶是限制速 度的酶。因此，如芳构酶抑制剂类化合物可以调节或抑制雄性激素 向雌激素转变，因此它们在由于雌激素的存在而加重的临床疾病治 疗中具有治疗用途。
已知19-降脱氧皮质甾酮(19-降DOC)可以引起矿物 类皮质激素高血压。在19-降甾族化合物(如19-降DOC) 的生物合成中，开始的步骤是合适的甾族化合物(如脱氧皮质甾酮 (DOC))的肾上腺羟基化作用。因此，通过抑制DOC的19 -羟基化作用而抑制19-降DOC的生物合成，这样可以减低存 在于有关动物内的19-降DOC的水平和减低由于该物质的存在 而造成的高血压。
本发明是关于2，19-桥环甾族的芳构酶和19-羟基化酶 抑制剂类化合物，它们有关的中间体，以及它们的制备方法，这些 化合物可以用下式表示， 或 其中 表示单键或双键，
A＝O，S，SO或SO2，
R＝H，＝CH2，＝O或-OH，
R1＝H或C1-4烷基，
R2＝＝O，-OH或-O-(C1-4链烷酰基)，
X＝＝O，＝CH2，-OH或-O-(C链烷酰基)
Y＝H，-OH或-O-(C1-4链烷酰基)，并且当 Y＝H、-OH或-O-(C1-4链烷酰基)时，X可以不包括- OH，R可以不包括＝O或-OH。
本发明化合物是芳构酶和19-羟基化酶的抑制剂。作为芳构 酶抑制剂，它们可以用于治疗血雌激素过多。当高含量的雌激素比 较固定时，或者当由于周期性身体机能的作用升高的雌激素含量有 短暂的聚增时，这两种情况异常高含量的雌激素均可以用该类化合 物来控制。可以用于治疗雌性和雄性两者，但是很显然，在雄性中 被认为高含量的雌激素比雌性中被认为是高含量的量要低得多。上 述化合物还可以用作为抗生育力剂，此阻止雌性排卵或胚胎在子宫 内的植入，或者以减少雄性的交配行为，在雄性中对于交配行为要 求脑芳构化。上述化合物对治疗由于雌激素含量增高而产生雄性不 育症、男子女性型乳房，以及血雌激素过多(它们可以引发心肌梗 塞)也具有价值。本发明化合物也可以用于治疗乳房癌和其他各种 雌激素引起的或雌激素激发的肿瘤以及增生组织疾病。
通过19-羟基化酶途径，脱氧皮质甾酮向19-降脱氧皮质 甾酮的生物转变加强了它的矿物类皮质激素的作用。矿物类皮质激 素过多会引起综合症，该综合症的特征在于血钾过少、代谢性碱中 毒、烦渴、多尿和高血压。对于高血压患者，包括原发性醛甾酮过 多症、库欣氏综合症、17α-羟基化酶缺乏以及特发性高血压个 体，19-降脱氧皮质甾酮的排泄增加这一情况已有报道。本发明 化合物可以作为19-羟基化酶抑制剂用作抗高血压剂，对于水肿 病人的治疗通常与钠滞留和钾丢失的问题一同进行考虑。
为了获得所希望的效果，可以将本发明化合物经口服、非经胃 肠道(例如静脉注射、腹膜内注射、肌内注射或皮下注射，包括直 接将有效成分注入组织或肿瘤部位)给予需要治疗的病体，术语 “病体”是指温血动物，例如哺乳动物，如人、灵长类、牛、狗、 猫、马、羊、小白鼠、大白鼠或猪。本发明化合物也可以按药用制 剂的形式服用，还可以将本发明化合物加到延效释放装置中。服用 的化合物的量可以在广泛的范围内变化，并且为任何有效剂量。根 据需要治疗的病体情况、需要治疗的疾病以及给药方式，需用的化 合物的有效剂量每天可以为约0.01-150毫克/公斤体重， 最好为每天约0.1-50毫克/公斤体重。
对于口服，可以将化合物配制成固体或液体制剂，例如胶囊 剂、小丸剂、片剂、锭剂、粉剂、溶液剂、混悬剂或乳剂。固体单 位剂量形式可以是胶囊剂，该胶囊剂可以是含有有效成分和载体 (例如润滑剂和惰性填料，如乳糖、蔗糖和玉米淀粉)的普通明胶 胶囊剂。在另一实施例中，可以将本发明的有效化合物与一般的片 剂基质(如乳糖、蔗糖和玉米淀粉)，以及粘合剂(如阿拉伯胶、 玉米淀粉或明胶)、崩解剂(如马铃薯淀粉或藻酸)和润滑剂(如 硬脂酸或硬脂酸镁)一起制成片剂。
对于非经胃肠道给药，可以将本发明化合物以可注射剂量的溶 液剂或混悬剂形式应用，本发明化合物的溶液剂或混悬剂是由化合 物、生理上适用的稀释剂和为无菌液体的药用载体(如油包水型) 组成的，其中可以加有或者不加有表面活性剂或其他药用辅助剂。 可以用于上述制剂的油其实例有石油产品、动物油、植物油或合成 的油，例如花生油、豆油和矿物油。一般来讲，水、盐水、葡萄糖 和有关糖的水溶液、乙醇和二元醇类(如丙二醇或聚乙二醇)是较 好的液体载体，尤其对注射溶液更适用。
可以将本发明化合物以皮肤膏药、长效注射剂或植入制剂的形 式给药，它们可以按有效成分的缓释剂型进行配制。可以将有效成 分压成小丸剂或小园柱体，并将其以长效注射剂或植入物经皮下或 肌内注射植入。植入物可以应用惰性材料，如可生物降解的聚合物 和合成的聚硅氧烷，例如由Dow Corning公司制造的硅 氧橡胶和Silastic_。此外，关于合适的药用载体和配制 技术的资料可以在一般的教科书，如Remington’s Pharmaceutical Sciences(Mack出 版公司，Easton，宾夕法尼亚)中找到。
应用类似于下述文献的实验室方法证实对芳构酶的抑制作用： U.S.专利4,322,416；Johnston等， Endocrinology 115：776，1984； Burkhart等；Steriods 45：357， 1985。
本试验中在测定活性之前，于高浓度基质存在下先将芳构酶抑 制剂与芳构酶一起预温。与时间相关的酶活性下降说明抑制剂与酶 的不可逆结合。
在此时间依赖试验中，将芳构酶抑制剂置于100ul前述试 验缓冲液中，得到通常为1nM-10uM的试验浓度，将其加到 含600ul NADPH发生系统的35ml离心管中。加入芳 构酶制剂700ul后开始预温，通常每ml试验缓冲液有500 -800ug微粒体蛋白。这些内容物用涡动混合器混合后，移置 25℃分别温育0，10，20和40分钟。然后加入含1β-3H -雄烯二酮的100ul雄烯二酮(约6.8uM)试验缓冲液， 使反应系统中基质的试验浓度达0.55uM，后者至少为雄烯二 酮米氏常数Km(0.04uM)的10倍。涡动混合后继续温育 10分钟，加入氯仿中止反应。用闪烁计数技术测定水相的放射 性，以温育0分钟时载体对照的酶活性设定为100％，计算出各 预温时间各个抑制剂浓度条件下的酶活性。因此，本文的酶抑制作 用以百分率表示，即100％减去抑制剂存在下的酶活性百分率。
时间依赖试验的酶动力学分析采用Kitz-Wilson曲 线图。这些分析可以计算出酶失活的表观Ki值，后者表示产生酶 失活最大速率一半所需要的抑制剂浓度。测定了酶失活的假一级速 率常数(Kcat)和不同抑制剂浓度下失活的半时间(τ50) Kcat/Ki(失活)比值提供了这样一个指数，该指数随酶失 活的加重而增加，并随抑制剂与酶活性部位亲和力的增强而增加。 下面的化合物(4)，即〔 3R-(3α，6aα，6bα， 8aα，11aα，11bβ)〕3，4，6b，7，8，8a， 10，11，11a，11b，12，13-十二氢-8a-甲基 -6H-3，6a-亚甲基环戊并〔5，6〕萘(1，2-C)环 氧辛英-2，9-二酮显示的结果如下：
Ki(nM)＝17.6
τ50(min)＝2.86
Kcat/Ki＝227.300
在评价化合物对19-羟基化酶抑制作用的试验中，将化合物 溶于二甲亚砜(DMSO)中，浓度为10mM，并用DMSO作 一系列稀释，使2ul等分试样加到微量离心管中后，化合物的终 浓度为0.01-10uM。在试验缓冲液(10mM KCl， 1mM EDTA，100mM Tris-Hcl，PH8.0 中加入NADPH发生系统，使试验液浓度为1mM NADPH， 3mM葡萄糖-6-磷酸，1 I.u./ml葡萄糖-6-磷酸 脱氢酶。置37℃温育5分钟后加入仓鼠肾上腺线粒体蛋白。取出 含5.1ug酶蛋白的反应液等分试样180ul，加入含放射标 记DOC(终浓度为0.85uM，0.01uci，放射化学纯 度为99.8％，NEN Research Products 公司，波士顿，MA)的20ul试验缓冲液，起动反应，于37 ℃温育5分钟。加入800ul 20％CH3CN-2％ HoAc中止反应。将反应物以15,000g速度离心2分钟， 并在二根粒度为5um，0.8×10cm的C18Radial Pak柱(Waters，Millipore公司)，Milford MA)上进行液相色谱(Beckman仪器公司，San Ramon，CA)分析。色谱缓冲液A为10％CH3CN-0.1％HoAc，缓冲液B为80％CH3CN-0.1％ HoAc。先以1ml/分的流速在36分钟内用0-30％缓冲 液B作线性梯度洗脱，接着再用100％缓冲液B洗脱。这样就把 残留的标记DOC基质和起初的羟基化产物即皮质甾酮和19-羟 基-DOC，得以分离，定量测定每个洗脱峰所得到的放射性。 19-羟基化酶活性的测定是以测定经代谢的放射性标记DOC的 量为基础的，因为皮质甾酮和19-羟基-DOC是单一酶作用的 产物。
未标记的甾族化合物采用Kratus Spectroflow 773检测器(Kratus分析仪器公司，Ramsey， NJ)，通过测定240nm处的吸光度加以监测。假定各种 DOC衍生物的消光系数与DOC类似(ε＝17,200M-1cm-1)。 应用联机Flow-One闪烁光谱仪(Radiomatic仪 器-化学公司，Tampa，FL)，用Iml流动池测定DOC 代谢物的放射性。
评价时间依赖的酶抑制作用的方法如下：将酶与甾族化合物在 37℃预温0或60分钟，然后加入放谢性标记基质，监测5分 钟。用Lineweaver-Burk双倒数曲线图求出DOC 最初羟基化的表观Km值。半数抑制浓度(IC50)可从酶活性与 抑制剂浓度对数为座标的线性-对数图上以图解求出。
可以用不同的方法制备本发明化合物。合成路线1用于制备下 述化合物(4)，[-3R(3α，6aα，6bα，8aβ， 11aα，11bβ)〕-3，4-6b，7，8，8a，10， 11，11a，11b，12，13-十二氢-8a-甲基-6H -3，6a-亚甲基环戊并(5，6)萘(1，2-C)环氧辛英 -2，9-二酮。另外，化合物(4)可以命名为2，19-(亚 甲基环氧-雄甾-4-烯-3，17-二酮。为了便于理解本发 明，甾族化合物的名称和化合物编号用于下述步骤和实例。
反应路线1
使可以买得到的甾族起始化合物(1)与二异丙基乙胺和1- 氯-2，5-二氧杂己烷反应，生成化合物19-〔(2-甲基基 乙氧基)甲氧基〕雄甾-4-烯-3，17-二酮(2)。然后将 化合物(2)与三甲基甲硅烷基氯化物、二异丙胺和n-Buli的混合物反应，生成化合物19-〔(2-甲氧基乙氧基)甲氧基 -3，17-二〔三甲基甲硅烷基)氧〕雄甾-2，4，16-三 烯(3)。再使化合物(3)与Ticl4反应，得到所需要的化 合物2，19-(亚甲基环氧)雄甾-4-烯-3，17-二酮 (4)。另外，为了制备其中A＝S的化合物，应用相应的19- 硫代甾族起始化合物，并且反应按类似于反应路线1的方法进行。 其中A＝SO和A＝SO2的化合物可以从其中A＝S的相应化合 物制备，其方法是在溶剂如二氯甲烷中将A＝S的相应化合物分别 用1或2相当量的3-氯-过氧苯甲酸处理。
应用反应路线2制备在17位上有羟基乙酰基取代基的化合 物，
反应路线2
于过量的乙二醇中将起始化合物2，19-(亚甲基环氧)雄 甾-4-烯-3，17-二酮(4)用催化量的酸，如甲磺酸处 理，生成相应的3，17-二(二亚甲基二环氧)化合物(5)。 然后于叔丁醇和二氯甲烷中用0.15％高氯酸水溶液使化合物 (5)在17位上进行有选择地水解，得到相应的17-酮(6) 再使酮(6)与甲氧基乙酸甲酯和二异丙基氨基锂反应，生成17 位酮加分路即亚甲基的酯，得到17位取代的17-羟基甾族化合 物(7)。脱水，这样就引入了17-环外双键，将生成的甲氧基 酯(8)用氢化物还原剂如氢化二异丁基铝进行还原，得到相应的 醇(9)，再将醇(9)用酸处理使17位烯醇醚和3位缩酮进行 水解，得到所需的化合物21-羟基-20-酮(10)。
应用反应路线3制备化合物(14)：2，19-(亚甲基环 氧)雄甾-4-烯-3，6，17-三酮。
反应路线3
在二氯甲烷中于0℃使起始化合物二缩酮(5)与间氯过苯甲 酸反应，得到环氧化物(11)。于THF和H2O中用高氯酸使 环氧化物开环，得到相应的二醇(12)。在于环过程中，缩酮也 被脱去。然后用琼斯氧化反应将二醇(12)氧化为羟基-酮 (13)。将羟基-酮(13)溶于苯中，并用对甲苯磺酸脱水， 得到甾族化合物三酮(14)。
用合适的起始化合物进行脱氢，可以得到在甾族化合物环系统 上含有多个双键的化合物。例如，在叔丁醇中用氯醌使2，19- (亚甲基环氧)雄甾-4-烯-3，17-二酮(4)脱氢，得到 相应的二烯(15)，见下面反应路线4所示。
反应路线4
为了得到其中R为＝CH2的本发明化合物，将2，19- (亚甲基环氧)雄甾-4-烯-3，17-二酮(4)与甲醛缩醇 反应，见下面反应路线5所示：
反应路线5
试剂如对甲苯磺酸、强的无机酸、酸性离子交换树脂，或者优 先选用的磷酰氯及甲醛缩二甲醇或甲醛缩二乙醇最适合用于实现上 述缩合反应。
用反应路线6制备2，19-(亚甲基环氧)雄甾-4-烯- 3，17-二醇(19)。
反应路线6
在乙醇中用硼氢化钠还原起始化合物2，19-(亚甲基环 氧)雄甾-4-烯-3，17-二酮(4)，得到相应的二醇 (17)。为了制备5，6-烯二醇(19)，将起始化合物2， 19-(亚甲基环氧)雄甾-4-烯-3，17-二酮(4)用催 化量的对甲苯磺酸处理，并在溶剂(如Ac2O)中加热。然后将 混合物冷却。再向该混合物中依次加入吡啶，乙醇，结果得到二烯 醇乙酸酯(18)。
另外，二烯醇乙酸酯(18)最好按下法制备：将过量的 Ac2O和催化量的70％HClO4水溶液加到甾族化合物 (4)的EtoAc中。然后将混合物搅拌15分钟，并注入稀 Na2O3中，萃取，用稀Na2CO3和盐水洗涤，得到二烯醇 乙酸酯(18)。在EtOH中，于-15℃将二烯醇乙酸酯 (18)用硼氢化钙处理。反应混合物中加入HOAc，并在 EtOAc和H2O之间进行分配，得到二醇(19)。将二醇 (19)用酐(如乙酸酐)处理，得到相应的二乙酸酯。
用反应路线7制备其中R1为CH3的化合物。
反应路线7
已知的二缩酮化合物(20)经过Swern氧化反应，得到 氧化的二缩酮(21)。然后将化合物(21)用R1MgBr或 R1Li处理，得到R1取代的羟基化合物(22)，其中R1的 定义同上。在THF中用Hcl水溶液处理化合物(22)，得 到二酮(23)。按反应路线1类似的方式处理二酮(23)，得 到R1取代的2，19-(亚甲基环氧)雄甾-4-烯-3，17 -二酮(24)。
用反应路线8制备其中X为＝CH2的化合物。
反应路线8
在EtOH中，于0℃向起始的17-酮基化合物(6)中加 入过量的NaBH4。30分钟后加入CH3COCH3，并浓 缩。将残余物加到CH2cl2中，依次用0.5N盐酸溶液、 水、盐水洗涤，得到相应的17-羟基化合物(25)。向化合物 (25)的THF溶液中加入盐酸水溶液，生成相应的3-酮基- 17-羟基化合物(26)。然后用(C6H5)3P＝CH2处 理化合物(26)，得到相应的3-亚甲基-17-羟基化合物 (27)。再用琼斯氧化法使化合物(27)的C-17位氧化， 生成3-亚甲基-17-酮化合物(28)。然后按反应路线2类 似的方法有选择地处理化合物(28)，生成相应的21-羟基- 20-酮化合物。
提供下述实例，以便详细叙述本发明。无论如何不应将它们解 释为是对本发明的限制。
实例1
在氩气流下将19-羟基雄甾-4-烯-3，17-二酮 (1)(4.54g，15.0mmol)在CH2cl2(40 ml)中的溶液搅拌，并向其中加入二异丙基乙胺(5.23 ml，30.0mmol)，随后再加入1-氯-2，5-二氧杂 己烷(2.57ml，22.5mmol)。20小时后，反应液 用CH2cl2(60ml)稀释，有机相依次用水(75ml)、 0.5N盐酸(2×75ml)、饱和NaHCO3(35ml) 和盐水(75ml)洗涤。经干燥(MgSO4)和浓缩得到橙色 油状物(6.33g)。将该油状物溶于10ml EtOAc/ 己烷(65∶35)中，并装入柱中。经快速层析(7.5×15 cm硅胶柱)，用EtOAc/己烷(65∶35)洗脱，得到 19-〔(2-甲氧基乙氧基)甲氧基〕雄甾-4-烯-3，17 -二酮(2)。重量为4.44g。高分辨率质谱(C23H34O5)，计算值(M+)：390.2406；实测值(M)： 390.2401；误差：-1.3ppm。
实例2
在氩气流下将二异丙胺(0.37ml，2.65mmol) 在THF(7ml)中的溶液搅拌并冷却至-20℃，向其中加入 正丁基锂(1.03ml，2.42M的己烷溶液，2.49 mmol)。12分钟后，再快速地加入己冷却(-20℃)的三 甲基甲硅烷基氯化物(0.74ml，5.81mmol)在 THF(1ml)中的溶液。2分钟后向其中滴加已冷却(-20 ℃)的实例1的产物(2)(324mg，0.83mmol)在 THF(2ml)中的溶液，然后加入0.5ml THF。反应液 于-20℃搅拌30分钟，然后慢慢地将其温热至室温。反应液于 室温下搅拌30分钟，加入三乙胺(1ml)，反应液用乙醚稀释 至50ml。有机相依次用饱和NaHCO3溶液(50ml+ 20ml)和盐水/饱和NaHCO3溶液(20ml，3∶1的 混合液)洗涤。经干燥(MgSO4)和浓缩，得到淡黄色油状 物。向该产品中加入己烷，混合物经浓缩，然后在高真空下放置5 分钟，以除去THF和三乙胺，得到19-〔(2-甲氧基乙氧 基)甲氧基〕-3，1 7-二〔(三甲基甲硅烷基)氧〕雄甾- 2，4，16-三烯(3)(定量的)。
实例3
在氩气流中将实例2的产物(3)(0.83mmol)在 CH2Cl2(8ml)中的溶液搅拌并冷却至-20℃，向其中 快速地加入TiCl4溶液(2.49ml，1MllCl4的 CH2Cl2溶液，2.49mmol)。生成褐色混悬液，再加入 CH2Cl2(8ml)。于-20℃将反应混悬液搅拌35分 钟，用CH2Cl2稀释，并倒入饱和的NaHCO3溶液中。分 层，水层用另外的CH2Cl2萃取。合并的有机层依次用饱和 NaHCO3(2X)溶液、0.5N盐酸(1X)和盐水洗涤， 经干燥(MgSO4)和浓缩得到乳白色油状物。向该产物中加入 4ml EtOAc/已烷(50∶50)，将固体压碎，加热混 悬液，在将上清液倒入柱(2×1Ocm硅胶柱)中进行快速层析 前将其冷却至室温。上清液按上述方法装填柱，(2×10cm硅 胶柱)，用EtOAc/己烷(50∶50)洗脱，以15-20 ml流出液的一份进行收集。将含产物的流出液浓缩，得到淡黄色 油状物。向残余物中加入Et2O，振摇烧瓶，得到固体。经浓缩 得到油腻的白色固体(0.14g)。然后将该产物和2ml EtOAc/己烷(3∶1)-起研磨。从烧瓶壁尽可能多的将固 体刮下来，过滤混悬液，得到白色固体(56mg)。于高真空和 丙酮回流的温度下将白色固体干燥6小时，得到化合物，〔3R- (3α，6aα，6bα，8aβ，11aα，11bβ)〕- 3，4-6b，7，8，8a，10，11，11a，11b， 12，13-十二氢-8a-甲基-6H-3，6a-亚甲基环戊 并(5，6)萘(1，2-C)环氧辛英-2，9-二酮，或命名 为2，19-(亚甲基环氧)雄甾-4-烯-3，17 -二酮， mp.204-213℃，(重量仍然为56mg)。 元素分析：C20H26O3：计算值：C，76.40；H，8.34。 实测值：C，76.60；H，8.53。
以类似的方法制得相应的硫化合物，2，19-(亚甲基环 硫)雄甾-4-烯-3，17-二酮，mp.183-199℃。
实例4
实例3的产物用催化量的甲磺酸和过量的乙二醇的苯溶液处 理，并在迪安-斯达克装置中加热回流，生成相应的化合物(5) 3，17-二(亚乙基二环氧)-5-烯
实例5
将实例4的产物在二氯甲烷和叔丁醇中的溶液用0.15％高 氯酸水溶液处理。混合物在搅拌下以缓缓回流的状态加热2小时， 然后使其冷却至室温。将反应混合物倒入饱和碳酸钠水溶液中，并 萃取到EtOAc中。EtOAc萃取液用水和盐水洗涤，经硫酸 镁干燥、浓缩并经硅胶层析，用EtOAc/己烷(2∶3)洗 脱，得到相应的17-酮化合物(6)。
实例6
向冷的二异丙基氨基锂(由二异丙基胺和正丁基锂在己烷中反 应制得)的四氢呋喃溶液中缓缓地加入甲氧基乙酸甲酯在四氢呋喃 中的溶液。再滴加实例5产物在四氢呋喃中的溶液，5-10分钟 内加完。该溶液于相同温度下搅拌3小时。然后滴入饱和氯化铵水 溶液，将混合物倒入冰水中，并用乙酸乙酯萃取。萃取液用盐水洗 涤，经硫酸钠干燥、过滤并浓缩，得到17-取代的甾族化合物 (7)。粗产物经硅胶层析，用1∶1乙酸乙酯∶己烷洗脱，得到 的产物为异构体的混合物。
实例7
将实例6的产物在吡啶和CH2Cl2中的溶液冷却至0℃， 并滴入亚硫酰氯，在5-10分钟内滴完。于相同温度搅拌75分 钟后，将溶液倒入冰水中。有机层用盐水洗涤2次，经硫酸钠干 燥、过滤和浓缩，得到粗产物。经快速层析(以30％乙酸乙酯/ 70％己烷洗脱)得到甲氧基酯(8)。
实例8
将实例7的产物在甲苯中的溶液冷却至-20℃，并滴入20 ％氢化二异丁基铝的己烷溶液。溶液于-20℃搅拌30分钟。加 入水，混合物于0℃搅拌20分钟，倒入冰水中并用3∶1乙醚∶ 二氯甲烷萃取。萃取液用盐水洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩。将残余 物进行快速层析，用3∶2乙酸乙酯∶己烷洗脱，得到醇(9)。
实例9
将0.5NHcl水溶液加入实例8产物的THF溶液中。 4天后，反应液用CH2cl2/H2O稀释，分层，有机层用盐 水洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩。下式所示的羟基酮经硅胶快速层析 分离，用EtOAc/己烷(4∶1)洗脱。 高分辨率质谱(C22H31O4)，计算值：MH+359.2222 实测值：MH+359.2204；误差：5.0ppm。
实例10
于0℃将间氯过苯甲酸的二氯甲烷溶液加入实例4产物(5) 的溶液中。混合物于0℃保持16小时，然后用二氯甲烷稀释，依 次用水、10％碳酸钠和盐水洗涤，再经干燥和蒸发。通过层析分 离得到环氧化物(11)。
实例11
将70％高氯酸水溶液滴入实例10产物(11)的THF和 水的溶液中，反应液于室温搅拌48小时。混合物用二氯甲烷稀 释，用Na2CO3水溶液和盐水洗涤，然后经干燥(MgSO4) 和浓缩。通过层析分离得到相应的二醇(12)
实例12
于0℃将琼斯试剂滴入实例11产物(12)的丙酮溶液中， 直至棕色持续15分钟。加入甲醇。然后混合物在二氯甲烷和水之 间进行分配。有机相用盐水洗涤，再经干燥和浓缩。通过层析分离 得到羟基酮(13)。
实例13
将催化量的对甲苯磺酸加入实例12产物(13)的苯溶液 中。用迪安-斯达克水分离器将混合物加热回流30分钟。然后将 冷却的溶液倒入水中。有机相用Na2CO3水溶液和盐水洗涤， 经干燥和蒸发将残余物层析分离得到下式所示的三酮化合物，2， 19-(亚甲基环氧)雄甾-4-烯-3，6，17-三酮 (14)。
实例14
将氯醌(1.2当量)加入实例3产物(4)的叔丁醇溶液 中。混合物回流3小时、冷却，然后浓缩缩残余物溶于CHCl3中，并依次用水、NaOH水溶液和盐水洗涤。经干燥和浓缩，再 通过层析分离得到下式所示的化合物：
实施例15
将乙酸钠和含有甲醛缩二甲醇和磷酰氯的无水氯仿组成的混悬 液搅拌回流1小时。加入实例3产物(4)后，向混合物中滴入磷 酰氯，在2.5小时内滴加完毕。然后将反应液搅拌回流适当时 间。将混悬液冷却，并在剧烈搅拌下滴入饱和碳酸钠水溶液直至水 层的PH呈碱性。分离有机层，用水洗涤，经硫酸钠干燥。浓缩和 纯化后得到下式所示的化合物。