抑制MRP1的方法 除了外科手术和放射性治疗外，对于许多癌症，化学治疗方法始终是有效的治疗方法。事实上，目前某些种类的癌症被认为可通过化学治疗治愈，包括霍奇金(Hodgkin)疾病、大细胞淋巴癌、急性淋巴细胞白血病、睾丸癌和早期乳腺癌。其它癌症，例如卵巢癌、小细胞肺和晚期乳腺癌，尽管还不能治愈，但结合化学治疗显示积极的效果。
在癌症治疗中最重要的未解决问题之一是抗药性。在选择对单个细胞毒性药物的抗药性后，细胞会变得对具有不同结构和细胞目标的药物，例如烷基化剂、抗代谢药物、激素、含铂药物和天然产物具有全面抗药性，该现象称为多药物抗药性(MDR)。在某些类型的细胞中，该抗药性是固有的，而在其它种类中，例如小细胞肺癌，它通常是后天的。
该抗药性已知是多因素的，由至少两种蛋白质带来：170kDaPglycopro tein(MDR1)和最近鉴定的190kDa多药物抗药性蛋白质(MRP1)。虽然MDR1和MRP1都属于运输蛋白质的ATP结合盒样总科，但它们在结构上是非常不同的，带有低于15％的氨基酸同源性。尽管两种蛋白质的结构分歧，直至1994人们仍不知道在MDR1和MRP1细胞系的抗药性类型中的一致差异。然而，MRP1的联合或不足和对特定溶癌药物的抗药性是已知的，参见Cole等，“多药物抗药性MRP转染的人体肿瘤细胞的药理学表征”，Cancer Research，54：5902-5910。阿霉素、柔红霉素、表柔比星、长春新碱和依托伯苷是MRP1的酶作用物，即MRP1能够结合这些溶癌药物，将它们由作用位置，细胞的核和外部移走，重新分布。Id.和Marquardt,D.,和Center,M.S.,Cancer Research,52：3157,1992。
阿霉素、柔红霉素和表柔比星是溶癌药物的蒽环类抗生素，它们是链霉菌的不同菌株的分离物，通过抑制核酸合成起作用。这些药物用于治疗骨骼、卵巢、膀胱、甲状腺和尤其是乳腺肿瘤。它们还用于治疗急性成淋巴细胞和成髓细胞白血病、肾胚胎瘤、成神经细胞瘤、软组织肉瘤、霍奇金和非霍奇金淋巴瘤和支气管癌。
长春新碱，溶癌药物的长春花生物碱种类的成员，是常见开花的药草，长春花植物(Vinca rosea Linn)地提取物，长春新碱作用的机理仍在研究中，蛤与在丝分裂纺锤体中抑制微管形成有关。长春新碱用于治疗急性白血病、霍奇金疾病、非霍奇金恶性淋巴瘤、横纹肌肉瘤、成神经细胞瘤和肾胚胎瘤。
依托伯苷，溶癌药物的表鬼臼毒素种类的成员是鬼臼毒素的半合成衍生物。依托伯苷用作拓扑异构酶抑制剂，和用于治疗睾丸和肺的肿瘤。
人们目前仍不知道是什么决定了一个细胞系将以MDR1和MRP1机理获得抗药性。由于这些运输因子的组织特异性和/或在其中一个机理是占优势或排他的情况下，具有不同于其它的一种选择性抑制剂是有用的。此外，当给药是蛋白质的酶作用物的药物时，有利的是共同给药一种药物，它是蛋白质的选择性抑制剂。因此，人们需要提供用作MDR1和MRP1的选择性抑制剂。
本发明涉及式Ⅰ的化合物：
其中：
R是H、COR1、SO2R2或下式的部分：
R1是C1-C4烷基、芳基、取代芳基、呋喃基、吲哚基、噻吩甲基、5-甲基异噁唑基、NHR4或CHR5OR6；
R2是3，5-二甲基异噁唑基或苯基，其中苯基选择性地被硝基、C1-C4烷基、三氟甲基、C1-C4烷氧基、C2-C4链烷酰基、羰基(C1-C4烷氧基)或氨基(C1-C4烷基)取代一次；
R3是苯基，其中苯基选择性地被三氟甲基或N-乙酰基氨基取代一次；
R4是H、C1-C6烷基或苯基，其中选择性地被硝基、C1-C4烷基、三氟甲基、C1-C4烷氧基、C2-C4链烷酰基、羰基(C1-C4烷氧基)或氨基(C1-C4烷基)取代一次；
R5是H、C1-C4烷基或苯基；和
R6是苯基或乙酰基；或其可药用的盐或溶剂化物。
本发明还涉及在哺乳动物中抑制MRP1的方法，其包括向需要的哺乳动物给药有效量的式Ⅰ化合物或其可药用盐或溶剂化物。
在另一实施方案中，本发明涉及在哺乳动物中抑制抵抗的肿瘤或易受抵抗的肿瘤的方法，其包括向需要的哺乳动物给药有效量的式Ⅰ化合物或其可药用盐或溶剂化物，并结合有效量的溶癌药物。
本发明还涉及药物组合物，其含有式Ⅰ化合物或其可药用盐或溶剂化物，结合一种或多种溶癌药物、可药用载体、稀释剂或赋形剂。
本发明基于发现一个选择组的化合物，式Ⅰ的化合物是多药物抗药性蛋白质(MRP1)的选择性抑制剂，因此在抵抗的肿瘤或易受抵抗的肿瘤中用于治疗MRP1带有的多药物抗药性。
涉及MRP1的术语“抑制”和“抑制的MRP1”是指阻止、减轻、改善、停止、抑制、延缓或逆转MRP1将溶癌药物由作用的溶癌位置，最常见的是细胞的肿瘤核和外部重新分布的进程和降低其能力。
用于本文的术语“有效量的式Ⅰ化合物”是指本发明的化合物能够抑制MRP1的数量。术语“有效量的溶癌药物”是指能够抑制肿瘤、抵抗等的溶癌药物的数量。
术语“抑制抵抗的肿瘤或易受抵抗的肿瘤”是指阻止、停止、抑制、延缓或逆转抵抗的肿瘤和/或易受抵抗的肿瘤的进程、降低其生长或杀死。
术语“抵抗的肿瘤”是指肿瘤，它抵抗化学治疗，其中抵抗部分地或全部地由MRP1带有。该肿瘤包括，但不限于，膀胱、骨骼、乳腺、肺(小细胞)、睾丸和甲状腺的肿瘤，还包括更具体类型的癌症，例如，但不限于，急性成淋巴细胞和成髓细胞白血病、肾胚胎肿瘤、成神经细胞瘤、软组织肉瘤、霍奇金和非霍奇金肿瘤和支气管癌。
“易受抵抗的”肿瘤是指肿瘤，其中抵抗性不是固有的或目前存在的，但可以在化学治疗后由MRP1产生。因此，本发明的方法包括预防和治疗给药式Ⅰ的化合物。
术语“化学治疗”是指使用一种或多种溶癌药物，其中至少一种溶癌药物是MRP1的酶作用物。“MRP1的酶作用物”是指溶癌药物，它结合MRP1，被由溶癌药物作用的位置，(肿瘤核)和细胞外部重新分布，因而使得治疗失效。
术语“处理”具有它们通常的含义，其包括防止、阻止、减轻、改善、停止、抑制、延缓或逆转在多药物抗药性肿瘤中由抗药性产生的MRP1的进行或降低其严重程度。
式Ⅰ化合物含有至少2个手性中心，它位于二氢化茚环系的1和2位。具有绝对R，R或S，S立体化学的对映体包含在本发明的范围内。即在二氢化茚环的1和2位的取代基具有彼此反式的相互关系的式Ⅰ化合物包含在本发明的范围内。
在本发明的通式中，一般的化学术语具有其通常的含义。例如，术语“C1-C3烷基”是指甲基、乙基、丙基、异丙基和环丙基。术语“C1-C4烷基”包括C1-C3烷基，还涉及丁基、环丁基、异丁基和叔丁基。术语“C1-C6烷基”包括C1-C4烷基，还包括含有5或6个碳原子的单价直链、支链或环状饱和烃链，包括，但不限于，环戊基、戊基、己基、环己基等。
术语“C2-C4链烷酰基”是指通过羰基连接的C1-C3烷基。
术语“C1-C4烷氧基”是指通过氧原子连接的C1-C4烷基。
术语“卤素”或“卤化物”是指氟、氯、溴或碘。
术语“芳基”是指苯基、苄基和萘基。
术语“取代的芳基”是指苯基、苄基和萘基，它们分别被C1-C4烷基、C1-C4烷氧基或卤素对位取代或被C1-C4烷氧基分别取代3次。
用于本文的术语“氨基保护基团”是指在化合物上的其它官能团反应时通常用于阻断或保护氨基官能团的氨基的取代基。该氨基保护基团的实例包括甲酰基、三苯甲基、苯二酰亚氨基、乙酰基、三氯乙酰基、氯乙酰基、溴乙酰基和碘乙酰基，尿烷型阻断基团，苄氧羰基、9-芴基甲氧基羰基(“FMOC”)等和类似的氨基保护基团。所用的氨基保护基团的种类不是关键的，只要衍生的氨基对于在分子的其它的反应条件下是稳定的和能够在合适的位置除去而不影响分子的其余部分。在头胞菌素、青霉素和肽技术中使用的类似保护基团也包括在上述术语中。上述术语所指的基团的其它实例在T.W.Greene，有机合成中的保护基团，John Wiley and Sons，New York,N.Y.,1991,第7章中描述，下文称为“Greene”，优选的氨基保护基团是叔丁氧基羰基。
术语“羰基活化基团”是指羰基的取代基，它使得羰基有亲核加成的倾向。合适的活化基团是在羰基上具有净吸电子效果的基团，该基团包括，但不限于，烷氧基、芳氧基、含氮的芳香杂环或氨基，例如氧基苯并三唑、咪唑基、硝基苯氧基、五氯苯氧基、N-氧基琥珀酰亚胺、N，N’-二环己基异脲-O-基、N-羟基-N-甲氧基氨基等；乙酸根、甲酸根、磺酸根，例如甲磺酸根、乙磺酸根、苯磺酸根或对甲苯磺酸根等；和卤化物，例如是氯、溴或碘。
通常术语“可药用的”在用作介词时是指对有生命的生物基本上是无毒的。例如，用于本文的术语“可药用盐”是指式Ⅰ化合物的盐，它对有生命的生物基本上是无毒的。参见例如Berge,S.M,Bighley,L.D.,和Monkhouse，D.C.,“可药用盐”，J.Pharm.Sci.,66：1,1977。典型的可药用盐包括通过将式Ⅰ化合物与无机或有机酸反应制备的盐。这种盐作为酸加成盐是已知的，这些可药用盐与衍生出盐的化合物相比通常具有改善的溶解特性，因此，作为液体或乳剂通常是更可接受的。
可药用酸加成盐的实例是式Ⅰ化合物的硫酸盐、焦硫酸盐、硫酸氢盐、亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、磷酸盐、磷酸氢盐、磷酸二氢盐、偏磷酸盐、焦磷酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、乙酸盐、丙酸盐、癸酸盐、辛酸盐、丙烯酸盐、甲酸盐、异丁酸盐、己酸盐、庚酸盐、丙炔酸盐、草酸盐、丙二酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、癸二酸盐、富马酸盐、马来酸盐、丁炔-1，4-二酸盐、己炔-1，6-二酸盐、苯甲酸盐、氯苯甲酸盐、甲氧基苯甲酸盐、邻苯二甲酸盐、磺酸盐、二甲苯磺酸盐、苯基乳酸盐、苯基丙酸盐、苯基丁酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、γ-羟基丁酸盐、乙醇酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、丙磺酸盐、萘-1-磺酸盐、萘-2-磺酸盐、杏仁酸盐等。
术语“溶剂化物”是指一种或多种溶质分子的聚集物，例如式Ⅰ化合物与一种或多种溶剂分子。
术语“合适的溶剂”是指对进行的反应惰性，充分增溶反应物以进行所需反应的溶剂。合适溶剂的实例包括，但不限于，二氯甲烷、氯仿、1，2-二氯乙烷、乙醚、乙腈、乙酸乙酯、1，3-二甲基-2-咪唑啉酮、四氢呋喃、二甲基甲酰胺、甲苯、氯苯、二甲基亚砜和它们的混合物等。
术语“羰基活化试剂”是指将羧酸基团的羰基转化为更有利于亲核加成的基团的试剂，包括，但不限于，例如在肽，Gross和Meienhofer,Eds.,Academic Press(1979),Ch.2和M.Bodanszky，肽合成的原理，2nd Ed.,Springer-Verlag BerlinHeidelberg,1993中列出的试剂，下文分别称为肽和肽合成。更具体地说，羰基活化试剂包括卤素亲核源，例如磺酰基溴、磺酰基氯、草酰基氯等；醇，例如硝基苯酚、五氯苯酚等；胺，例如N-羟基-N-甲氧基胺等；酰卤，例如乙酰、甲酰、甲磺酰、乙磺酰、苯磺酰或对甲苯磺酰卤等和化合物，例如1，1’-羰基二咪唑、苯并三唑、咪唑、N-羟基琥珀酰亚胺、二环己基碳化二亚胺等。
术语“合适的热力学碱”是指用作任何质子的质子捕集的碱，它可作为所需反应的副产物产生，或是指提供酸作用物的可逆去质子作用的并且对所需反应是足够有效的而不明显影响任何不需要的反应的碱。热力学碱的实例包括，但不限于，碳酸盐、碳酸氢盐和氢氧化物(例如锂、钠或钾的碳酸盐、碳酸氢盐和氢氧化物)，三-(C1-C4烷基)胺或芳香含氮杂环(例如吡啶)。
尽管本发明的化合物是有用的，但某些化合物是尤其感兴趣的和优选的。如下列出了若干组优选化合物、制剂和方法。应理解，列出的每个内容可与其它列出的内容结合以产生优选的实施方案的附加组。
a)R是COR1；
b)R是SO2R2；
c)R1是苯基；
d)R1是苄基；
e)R1是3,4,5-三甲氧基苯基；
f)R1是3,4,5-三甲氧基苯基；
g)R2是苯基；
h)R2是4-甲氧基苯基；
i)R2是3，5-二甲氧基异噁唑；
j)化合物是可药用的盐；
k)化合物是盐酸盐；
l)实施例部分的化合物；
m)其中哺乳动物是人的方法；
n)其中溶癌药物选自阿霉素、柔红霉素、表柔比星、长春新碱和依托伯苷的方法；
o)其中肿瘤是肾胚胎肿瘤、膀胱、骨骼、乳腺、肺(小细胞)、睾丸和甲状腺的肿瘤或与急性成淋巴细胞和成髓细胞白血病、成神经细胞瘤、软组织肉瘤、霍奇金和非霍奇金肿瘤和支气管癌有关的肿瘤的方法；
p)其中溶癌药物选自阿霉素、柔红霉素、表柔比星、长春新碱和依托伯苷的制剂；
q)化合物是R异构体；
r)化合物是S异构体；和
s)化合物是异构体的混合物。
本发明的化合物可通过各种方法制备，包括固体相或溶液相合成技术。固体相技术在如下方案1中说明，产生式Ⅰ化合物的所需步骤的特定次序取决于合成的具体化合物、起始化合物和取代部分的相对不稳定性。
方案1的反应均在固体相中进行。即在不同转化过程中操作的分子结合于不溶解的聚苯乙烯树脂，用于改性或加入结合分子的试验是溶解的。适用于该情况的这种合成的普通策略采用相对于结合的试剂大摩尔过量的未结合的试剂，以确保结合分子的完全转化。当转化基本上完成后，溶解的试剂可简单地过滤出，将含有刚完成的反应的残余物的不纯树脂可简单地通过用例如用于反应的相同溶剂漂洗简单地清洁。例如，如果反应在四氢呋喃中进行，你可以用纯四氢呋喃漂洗树脂，这些原理适用于在方案1中讨论的所有反应。
式Ⅰ化合物可如以下方案1中所述制备，其中PS是聚苯乙烯树脂，R5是羰基活化基团，和R、R1、R2和R3是如上所述的。
方案1
式Ⅱ的酸可通过化学领域中已知的方法活化以形成式Ⅲ的活化羧酸。参见例如肽或肽合成中溶液相活化的一般讨论和如下用于固体相活化的制备部分。更具体地说，式Ⅲ的化合物通常通过将羧基化的聚苯乙烯树脂在合适溶剂中暴露于摩尔过量的活化试剂制备。方便和优选的溶剂是二氯甲烷和二甲基甲酰胺的混合物。草酰氯是通常优选和方便的活化试剂，通常采用3摩尔过量的该活化试剂。通常反应在混合物的回流温度下进行约24小时。
式Ⅴ的树脂键合的酯可通过化学领域中已知的方法由式Ⅳ化合物和式Ⅲ的树脂键合活化的酸制备。对于活化羧酸向酯的溶液相转化的一般讨论，参见例如Larock，“综合有机转化过程”，978-979页，VCH Publishers New York，N.Y.,1989，下文称为“Larock”。更具体地说，式Ⅲ的酯在热力学碱的存在下，选择性地在热力学碱的存在下和选择性地在二甲基氨基吡啶(DMAP)存在下，暴露于式Ⅳ的化合物。四氢呋喃通常是方便和优选的溶剂，DMAP优选以催化方式使用，通常相对于键合的物质为约50摩尔％。然而，式Ⅳ化合物以过量，通常为约1.4-约2.5摩尔过量使用，优选的碱是吡啶，通常以大摩尔过量使用，通常为约20摩尔过量。一旦所有试剂混合，反应通常在混合物的回流温度下进行8-12天。
现在可除去在式Ⅴ化合物中包含的氨基保护基团以形成式Ⅵ化合物。保护基团和试剂的选择和用于加上或除去它们的方法可在上述Greene的参考文献中找到。优选的保护基团和它们的除去方法在如下制备例部分公开。
在合适溶剂的存在下，和选择性地在热力学碱存在下和选择性地在二甲基氨基吡啶(DMAP)存在下式Ⅵ的树脂键合的游离爱可用式Ⅶ的化合物处理以制备其中R是COR1的式Ⅹ的化合物。通常优选和方便的溶剂是二氯甲烷，当采用碱时，吡啶通常是优选的碱。此外，当使用碱时，相对于树脂键合的物质，碱和式Ⅶ化合物通常以大化学计量过量使用。例如碱通常以15-20摩尔过量使用，而式Ⅳ化合物通过以5-8摩尔过量使用。当不使用碱时，式Ⅶ化合物通常以较大化学计量过量使用。反应通常在0℃-约溶剂的回流温度下进行10分钟-18小时。反应优选在约15℃-约40℃下进行12-24小时，最优选在室温下进行18小时。
在如上段相同的条件下，式Ⅵ化合物另外可用式Ⅷ或Ⅸ化合物处理以分别得到其中R是SO2R2的式Ⅹ化合物或下式的部分(原文第14页结构式，空2行)
在方案1的下一反应中，二氢化茚环的2位上的硝基被还原为氨基形成式Ⅺ化合物。将硝基还原为胺的方法是已知的，参见Larock412-415页或如下的制备例和实施例部分。通常转化过程通过将式Ⅹ的树脂键合的化合物在合适溶剂中暴露于大摩尔过量的还原剂完成。二甲基甲酰胺通常是用于该过程的方便和优选的溶剂。氯化锡(Ⅱ)二水合物通常是优选的还原剂。反应通常在0℃-约溶剂的回流温度下进行12小时-72小时。反应优选在约15℃-约40℃下进行30-60小时，最优选在室温下进行48小时。
方案2的下一反应是在上述反应中形成的氨基部分的酰化以形成式ⅩⅢ化合物。该酰化过程具有如式Ⅵ化合物转化为式Ⅹ化合物的相同反应和试剂情况，只是在该情况下使用的仅有酰化试剂是式Ⅻ化合物，即3-(2-氯-6-氟代苯基)-5-甲基异噁-4-唑基活化酸。
最后，式ⅩⅢ的化合物可环化和除去树脂以形成式ⅩⅣ化合物。该转化过程可通过将式ⅩⅢ的树脂键合的化合物在合适溶剂中暴露于合适热力学碱中完成。通常优选和方便的溶剂是四氢呋喃，通常方便和优选的热力学碱是氢氧化钠，作为在甲醇中的2N溶液加入。反应通常在约15℃-约混合物的回流温度下进行30分钟-约18小时，优选反应在室温下进行约18小时。碱通常以大摩尔过量进行，相对于式ⅩⅣ化合物通常为约10-约15摩尔过量，优选使用约11-约13摩尔过量。
在式Ⅰ的环化化合物中存在的任何氨基保护基团可选择性地如Greene中所教导除去以得到游离胺。保护基团和它们的除去方法的优选选择在如下制备例和实施例部分公开。
本发明的可药用的盐通常通过将式Ⅰ化合物与等摩尔或过量酸反应制备。反应物通常在共有溶剂，例如乙醚、四氢呋喃、甲醇、乙醇、异丙醇、苯等。盐通常在约1小时-约10天内由溶液中沉淀出来，可通过过滤或其它常规方法分离。
通常用于形成可药用酸加成盐的酸是无机酸，例如盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、磷酸等，和有机酸，例如对甲苯磺酸、甲磺酸、乙磺酸、草酸、对溴苯基磺酸、碳酸、琥珀酸、柠檬酸、酒石酸、苯甲酸、乙酸等。优选的可药用酸加成盐是用无机酸，例如盐酸、氢溴酸和硫酸形成的盐，和用有机酸，例如马来酸、酒石酸和甲磺酸形成的盐。
应认识到形成本发明的任何盐部分的特定抗衡离子不是关键的性质，只要盐作为整体是药用的和抗衡离子不对盐的整体带来不需要的质量。
式Ⅱ、Ⅳ、Ⅶ、ⅤⅢⅠ、Ⅸ和Ⅻ化合物是现有技术中已知的，对于商业上无法获得的物质可通过现有技术中采用的标准方法容易地合成。例如式Ⅰ化合物可如如下制备例部分所述制备。
用于进行方案1反应的最佳时间可通过用常规色谱法技术监测反应过程确定。此外，优选在惰性气氛下进行本发明的反应，例如氢气，或尤其是氮气。溶剂的选择通常不是关键的，只要所用的溶剂对于进行的反应是惰性的和充分增溶反应物以进行所需的反应即可。本发明的中间体化合物优选在用于随后反应之前分离和纯化，中间体的纯化通常包括如上所述的洗涤树脂。式Ⅰ化合物可在其形成过程中由反应溶液中结晶，随后通过过滤收集这些化合物，此外可通过提取、蒸发或倾析除去反应溶剂。如果需要，式Ⅰ的这些最终产物可通过常规技术，例如重结晶或在固体载体，例如硅胶或氧化铝上的色谱法进一步纯化。
提供如下制备例和实施例以更好地说明本发明的实践，不应解释为以任何方式限制本发明的范围。本领域的技术人员将认识到可进行各种改性而不违背本发明的精神和范围。在说明书中提到的所有出版物是对本发明的领域中技术人员的指示。用于制备例和实施例的术语和缩写具有其通常的含义，除非另有说明。例如℃、N、mmol、g、ml、M、HPLC、MS(IS)、MS(FAB)和H NMR分别是指摄氏度、当量或当量浓度、毫摩尔或毫摩尔数、克或克数、毫升或毫升数、摩尔或摩尔浓度、高性能液相色谱、离子喷洒质谱、快速原子轰击质谱和质子核磁共振。此外，在IR光谱中列出的吸收最大值只是感兴趣的数值，不是所有观察到的最大值。
制备例
制备例1
6-硝基-1-二氢化茚酮
在0℃下向1-二氢化茚酮(25.0g，189mmol)在浓硫酸(84ml)中的溶液中以足以保持低于15℃的内部温度下加入硝酸钾(8.33g，82.4mmol)在硫酸(40ml)中的溶液。在加完后，使反应混合物在0℃下搅拌1小时，将反应混合物倾入碎冰中，剧烈搅拌30分钟，随后过滤悬浮液，空气干燥和通过液相色谱法(5％乙酸乙酯/甲苯)纯化得到18.90g标题化合物(56％)。
制备例2
6-硝基-1-二氢化茚醇
将6-硝基-1-二氢化茚酮(18.9g，107mmol)在甲醇(300ml)中的溶液冷却到0℃，以若干小批量加入硼氢化钠(4.04g，107mmol)，反应混合物随后在25℃下搅拌过夜。溶液在0℃下用甲醇盐酸(200ml)骤冷，用水洗涤，有机层再次浓缩得到粗醇，为棕色固体，它无需进一步纯化用于制备例3。
制备例3
6-硝基-1-茚
向6-硝基-1-二氢化茚醇在甲苯(300ml)中的溶液中加入催化量的对-甲苯磺酸，将反应混合物用Dean Stark分水器回流1小时以除去水。有机层用饱和碳酸氢钠水溶液(3×200ml)洗涤、用硫酸镁干燥、过滤和减压除去滤液溶剂。粗残余物由甲醇中结晶得到13.41g标题化合物(两步78％)。
制备例4
6-硝基-1，2-环氧二氢化茚
在0℃向6-硝基-1-茚(10.5g，65.3mmol)在二氯甲烷(350ml)中的溶液中以小数量在1小时内加入间氯过苯甲酸(29.0g，92.4mmol)。在25℃下搅拌过夜后，混合物用饱和亚硫酸钠水溶液(2×200ml)和饱和碳酸氢钠水溶液(2×200ml)洗涤，用棉花柱过滤和真空浓缩得到标题化合物，它无需进一步纯化用于制备例5中。
制备例5
反-6-硝基-1-氨基-2-羟基二氢化茚
将6-硝基-1，2-环氧二氢化茚在浓氢氧化铵(250ml)中的悬浮液在45℃的油浴中加热过夜。第二天加入水，碱性水层用氯化钠饱和，混浊的反应混合物用四氢呋喃提取直至由TLC不能在水层中更多的产物。混合有机层，用硫酸镁干燥，过滤、浓缩和由乙酸乙酯中重结晶得到11.54g标题化合物(两步91％)。
制备例6
反-N-叔丁氧基羰基-6-硝基-1-氨基-2-羟基二氢化茚
向反-6-硝基-1-氨基-2-羟基二氢化茚(8.34g，42.9mmol)在四氢呋喃(200ml)中的溶液中加入二叔丁基焦碳酸酯(11.3g，51.5mmol)在四氢呋喃(50ml)中的溶液，在25℃下搅拌1小时后，减压除去溶剂，得到的固体由乙酸乙酯中重结晶得到11.37g标题化合物(90％)。
制备例7
反-0-树脂键合的1-氨基-2-羟基-6-硝基二氢化茚的固相合成
步骤1：树脂的活化/键合到树脂-反-0-树脂键合的N-叔丁氧基羰基-1-氨基-2-羟基-6-硝基二氢化茚
在氮气气氛下，在带有塔顶搅拌器和添加漏斗的3L三颈圆底烧瓶中加入羧基化聚苯乙烯树脂(70g，2.8mmol，CO2H/g树脂)、无水二氯甲烷(1L)和无水二甲基甲酰胺(10ml)。随后由添加漏斗经缓慢滴加加入草酰氯(50.8ml，582mmol)，在氮气中回流过夜后，用气体分散管真空除去溶剂。树脂随后用无水二氯甲烷(3×500ml)洗涤，一旦最后的洗涤完成后，真空干燥树脂2-3小时。同时，将聚合物重新悬浮在无水四氢呋喃(1L)，随后加入无水吡啶(314ml，3.88mol)、DMAP(12g，97mmol)和反-O-树脂键合的1-氨基-2-羟基-6-硝基二氢化茚(85.6g，291mmol)。混合物在惰性气氛中回流10天，真空过滤除去溶剂，树脂用四氢呋喃(3×300ml)、二氯甲烷(3×300ml)洗涤，在真空烘箱中干燥过夜得到122.18g标题化合物，为黄褐色树脂。
步骤2：去保护-反-0-树脂键合的1-氨基-2-羟基-6-硝基二氢化茚
在装有搅拌棒的圆底烧瓶中放入反-0-树脂键合的N-叔丁氧基羰基-1-氨基-2-羟基-6-硝基二氢化茚(28mg，0.028mmol)、500μl二氯甲烷和三氟乙酸(109μl，0.141mmol)，将反应混合物在25℃下搅拌过夜。通过过滤收集树脂，重新悬浮在10％三乙胺/二氯甲烷中，搅拌15分钟，重新过滤，最后用二氯甲烷洗涤得到标题化合物。
制备例8-36的一般方法
反-0-树脂键合的N-“R”-(异噁唑并[3,4-c]-1,2-二氢-3-甲基-6-氯喹啉-2-酮基)-1-氨基-2-羟基二氢化茚
步骤：安装“R”部分-反-O-树脂键合的N-“R”-1-氨基-2-羟基-6-硝基二氢化茚
在10ml圆底烧瓶中加入反-0-树脂键合的1-氨基-2-羟基-6-硝基二氢化茚(0.0283mmol)，随后加入500μl吡啶(36.6μl，0.452mmol)和DMAP(0.518mg，0.00424mmol)在二氯甲烷中的溶液。随后加入商业上可获得的式Ⅵ、Ⅶ或Ⅷ化合物在二氯甲烷中的1M溶液(184μl，0.184mmol)，将得到的混合物在25℃下搅拌过夜，此时，通过真空过滤除去溶剂，树脂分别用50ml的二氯甲烷、二甲基甲酰胺、甲醇、二甲基甲酰胺、甲醇和二氯甲烷洗涤得到标题化合物(式Ⅹ化合物)。
步骤2：还原-反-0-树脂键合的6-氨基-1-(N-“R”)-氨基-2-羟基二氢化茚向反-0-树脂键合的N-“R”-1-氨基-2-羟基-6-硝基二氢化茚(0.0283mmol)在二甲基甲酰胺(0.625ml)的溶液中加入氯化锡(Ⅱ)二水合物(102mg,0.452mmol)，在25℃下搅拌48小时，通过过滤分离树脂，分别用50ml二氯甲烷、二甲基甲酰胺、甲醇、二甲基甲酰胺、甲醇和二氯甲烷洗涤得到标题化合物(式Ⅺ化合物)。
步骤3：酰化-反-0-树脂键合的N-“R”-(异噁唑并[3,4-c]-1,2-二氢-3-甲基-6-氯喹啉-2-酮基)-1-氨基-2-羟基二氢化茚
在10ml圆底烧瓶中加入反-0-树脂键合的6-氨基-1-((N-“R”)-氨基)-2-羟基-二氢化茚(0.0283mmol)，随后加入500μl吡啶(36.6μl,0.452mmol)和DMAP(0.518mg,0.00424mmol)在二氯甲烷中的溶液。随后加入3-(2-氯-6-氟苯基)5-甲基异噁-4-唑基氯化物在二氯甲烷中的1M溶液(184μl,0.184mmol)，将得到的混合物在25℃下搅拌过夜，此时，通过真空过滤除去溶剂，树脂分别用50ml的二氯甲烷、二甲基甲酰胺、甲醇、二甲基甲酰胺、甲醇和二氯甲烷洗涤得到二酰基化产物(式ⅩⅢ化合物)。
制备例8-36相应于用于如下实施例1-29的前体。
制备例37
反-6-氨基-1-((N-叔丁氧基羰基)-氨基)-2-羟基二氢化茚
钯/碳(10％,500mg)用甲醇润湿，加入溶解于100ml甲醇中的反-N-叔丁氧基羰基-6-硝基-1-氨基-2-羟基二氢化茚(2.63g,8.94mmol)。在50psi下产生氢气气氛，保持在Parr摇动器中18小时。通过滑石过滤出催化剂，用甲醇洗涤。真空除去甲醇得到2.23g标题化合物(94％)。MS(FD)m/z 264(M+)。IR(CHCl3)3444，3009,2983,1692,1625cm-1。
制备例38
1-(反-1-((N-叔丁氧基羰基)-氨基)-2-羟基二氢化茚-6-基)异噁唑并[3,4-c]-1,2-二氢-3-甲基-6-氯喹啉-2-酮
将反-1-((N-叔丁氧基羰基)-氨基)-6-氨基-2-羟基二氢化茚(4g,7.97mmol)溶解在l0ml2N氢氧化钠甲醇溶液，在氮气下在室温搅拌18小时。用乙酸乙酯稀释反应混合物，用1N含水盐酸和盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤和浓缩。残余物由二氯甲烷中重结晶得到4.07g标题化合物(100％)。C25H24ClN3O5EA计算值：C,62.31；H,5.02；N,8.72。实验值：C,62.11；H,5.08,N,8.65。MS(FD)m/z 481(M-H)。
制备例39
1-(反-1-氨基-2-羟基二氢化茚-6-基)异噁唑并[3,4-c]-1,2-二氢-3-甲基-6-氯喹啉-2-酮三氟乙酸盐
将1-(反-1-((N-叔丁氧基羰基)-氨基)-2-羟基二氢化茚-6-基)异噁唑并[3,4-c]-1,2-二氢-3-甲基-6-氯喹啉-2-酮(759mg,1.57mmol)溶解在25ml无水二氯甲烷中，在氮气下在室温搅拌。加入三氟乙酸(10ml)，反应混合物搅拌1小时。随后真空除去溶剂，残余物用二氯甲烷/己烷处理沉淀出850mg标题化合物(100％)。MS(FD)m/z 38l(M+)。IR(KBr)3058,2998,1792,1657,1629,1598cm-1。
实施例
实施例1-29的一般方法
向加入了反-O-树脂键合的N-“R”-6-(异噁唑并[3,4-c]-1,2-二氢-3-甲基-6-氯喹啉-2-酮基)-1-氨基-2-羟基二氢化茚(0.0283mmol)的烧瓶中加入氢氧化钠在甲醇中的1M溶液(375μl,0.375mmol)和四氢呋喃(400μl)。在25℃搅拌后，反应混合物用4M盐酸的甲醇溶液(100μl,0.400mmol)中和。过滤树脂，减压浓缩滤液得到实施例1-29的化合物，它们满足1H NMR和MS(IS)分析。
实施例1
1-(反-1-((N-乙酰基)-氨基)-2-羟基二氢化茚-6-基)异噁唑并[3,4-c]-1,2-二氢-3-甲基-6-氯喹啉-2-酮
实施例2
1-(反-1-((N-苯甲酰基)-氨基)-2-羟基二氢化茚-6-基)异噁唑并[3,4-c]-1,2-二氢-3-甲基-6-氯喹啉-2-酮
实施例3
1-(反-1-((N-[4-甲基苯甲酰基])-氨基)-2-羟基二氢化茚-6-基)异噁唑并[3,4-c]-1,2-二氢-3-甲基-6-氯喹啉-2-酮
实施例4
1-(反-1-((N-[4-甲氧基苯甲酰基])-氨基)-2-羟基二氢化茚-6-基)异噁唑并[3,4-c]-1,2-二氢-3-甲基-6-氯喹啉-2-酮
实施例5
1-(反-1-((N-[4-氟苯甲酰基])-氨基)-2-羟基二氢化茚-6-基)异噁唑并[3,4-c]-1,2-二氢-3-甲基-6-氯喹啉-2-酮
实施例6
1-(反-1-((N-[4-氯苯甲酰基])-氨基)-2-羟基二氢化茚-6-基)异噁唑并[3,4-c]-1,2-二氢-3-甲基-6-氯喹啉-2-酮
实施例7
1-(反-1-((N-[α-苯基乙酰基])-氨基)-2-羟基二氢化茚-6-基)异噁唑并[3,4-c]-1,2-二氢-3-甲基-6-氯喹啉-2-酮
实施例8
1-(反-1-((N-[α-(4-氯苯基)乙酰基])-氨基)-2-羟基二氢化茚-6-基)异噁唑并[3,4-c]-1,2-二氢-3-甲基-6-氯喹啉-2-酮
实施例9
1-(反-1-((N-[α-苯氧基乙酰基])-氨基)-2-羟基二氢化茚-6-基)异噁唑并[3,4-c]-1,2-二氢-3-甲基-6-氯喹啉-2-酮
实施例10
1-(反-1-((N-[α-苯氧基丁酰基])-氨基)-2-羟基二氢化茚-6-基)异噁唑并[3,4-c]-1,2-二氢-3-甲基-6-氯喹啉-2-酮
实施例11
1-(反-1-((N-[α-苯基-α-乙酰氧基丁酰基])-氨基)-2-羟基二氢化茚-6-基)异噁唑并[3,4-c]-1,2-二氢-3-甲基-6-氯喹啉-2-酮
实施例12
1-(反-1-((N-萘酰基)-氨基)-2-羟基二氢化茚-6-基)异噁唑并[3,4-c]-1,2-二氢-3-甲基-6-氯喹啉-2-酮
实施例13
N-正丁基-N’-(反-2-羟基-6-(异噁唑并[3,4-c]-1,2-二氢-3-甲基-6-氯喹啉-2-酮基)二氢化茚基脲
实施例14
N-环己基-N’-(反-2-羟基-6-(异噁唑并[3,4-c]-1,2-二氢-3-甲基-6-氯喹啉-2-酮基)二氢化茚基脲
实施例15
N-苯基-N’-(反-2-羟基-6-(异噁唑并[3,4-c]-1,2-二氢-3-甲基-6-氯喹啉-2-酮基)二氢化茚基脲
实施例16
N-(4-异丙基苯基)-N’-(反-2-羟基-6-(异噁唑并[3,4-c]-1,2-二氢-3-甲基-6-氯喹啉-2-酮基)二氢化茚基脲
实施例17
N-(3-三氟甲基苯基)-N’-(反-2-羟基-6-(异噁唑并[3,4-c]-1,2-二氢-3-甲基-6-氯喹啉-2-酮基)二氢化茚基脲
实施例18
N-(4-甲氧基苯基)-N’-(反-2-羟基-6-(异噁唑并[3,4-c]-1,2-二氢-3-甲基-6-氯喹啉-2-酮基)二氢化茚基脲
实施例19
N-(3-乙酰基苯基)-N’-(反-2-羟基-6-(异噁唑并[3,4-c]-1,2-二氢-3-甲基-6-氯喹啉-2-酮基)二氢化茚基脲
实施例20
N-(3-(氨基甲基)苯基)-N’-(反-2-羟基-6-(异噁唑并[3,4-c]-1,2-二氢-3-甲基-6-氯喹啉-2-酮基)二氢化茚基脲
实施例21
N-(3-羰基乙氧基苯基)-N’-(反-2-羟基-6-(异噁唑并[3,4-c]-1,2-二氢-3-甲基-6-氯喹啉-2-酮基)二氢化茚基脲
实施例22
1-(反-1-((N-[3-硝基苯基磺酰基])-氨基)-2-羟基二氢化茚-6-基)异噁唑并[3,4-c]-1,2-二氢-3-甲基-6-氯喹啉-2-酮
实施例23
1-(反-1-((N-[(5-甲基异噁唑-4-基)磺酰基])-氨基)-2-羟基二氢化茚-6-基)异噁唑并[3,4-c]-1,2-二氢-3-甲基-6-氯喹啉-2-酮
实施例24
N-(3-三氟苯基)-N’-(反-2-羟基-6-(异噁唑并[3,4-c]-1,2-二氢-3-甲基-6-氯喹啉-2-酮基)二氢化茚基异硫脲
实施例25
N-(N-乙酰基-3-氨基苯基)-N’-(反-2-羟基-6-(异噁唑并[3,4-c]-1,2-二氢-3-甲基-6-氯喹啉-2-酮基)二氢化茚基异硫脲
实施例26
1-(反-1-((N-[呋喃-2-基])-氨基)-2-羟基二氢化茚-6-基)异噁唑并[3,4-c]-1,2-二氢-3-甲基-6-氯喹啉-2-酮
实施例27
1-(反-1-((N-[1H-吲哚-3-基])-氨基)-2-羟基二氢化茚-6-基)异噁唑并[3,4-c]-1,2-二氢-3-甲基-6-氯喹啉-2-酮
实施例28
1-(反-1-((N-[α-(噻吩-2-基)乙酰基])-氨基)-2-羟基二氢化茚-6-基)异噁唑并[3,4-c]-1,2-二氢-3-甲基-6-氯喹啉-2-酮
实施例29
1-(反-1-((N-[5-甲基异噁唑-3-基])-氨基)-2-羟基二氢化茚-6-基)异噁唑并[3,4-c]-1,2-二氢-3-甲基-6-氯喹啉-2-酮
(原文第28页方框，空7行)
实施例30
1-(反-1-((N-[3,4,5-三甲氧基苯甲酰基])-氨基)-2-羟基二氢化茚-6-基)异噁唑并[3,4-c]-1,2-二氢-3-甲基-6-氯喹啉-2-酮
将1-(反-1-氨基)-2-羟基二氢化茚-6-基)异噁唑并[3,4-c]-1,2-二氢-3-甲基-6-氯喹啉-2-酮三氟乙酸盐(305mg,0.615mmol)溶解在10ml无水二甲基甲酰胺中，在室温和氮气中搅拌。加入3,4,5-三甲氧基苯甲酰基氯(142mg,0.615mmol)，随后加入三乙胺(187mg,1.85mmol)。反应混合物搅拌约18小时，加工如下：用乙酸乙酯和1N含水盐酸稀释，用1N含水盐水洗涤有机层，用碳酸氢钠和盐水洗涤有机层3次，用硫酸钠干燥有机层。除去乙酸乙酯，白色固体用二氯甲烷/己烷研制得到275mg标题化合物(78％)。MS(IS)576(M+)。C30H26ClN3O7EA计算值：C,62.56；H,4.55；N,7.30。实验值：C,62.41；H,4.40；N,7.19。
本发明的化合物是MRP1的抑制剂，因此，本发明的化合物可用于抑制任何具有内在的和/或部分或全部由MRP1带来的抗药性的任何肿瘤。换句话说，用有效量的本发明的化合物治疗该肿瘤将导致肿瘤对由于MRP1而使得不太有效的化学治疗更敏感。
长春新碱、表柔比星、柔红霉素、阿霉素和依托伯苷是溶癌药物，它们是MRP1的酶作用物，参见Cole等，多药物抗药性MRP转染的人体肿瘤细胞的药理学表征，Cancer Research,54：5902-5910。由于MRP1在哺乳动物中，尤其在人体中是普遍存在的，Nooter,K，等，在人体癌症中与多药物抗药性有关的蛋白质(MRP)基因的表达，Clin.Can.Res.,1：1301-1310,(1995)，其目的是采用任何试剂抑制肿瘤的化学治疗会由于MRP1而变得不太有效。因此，膀胱、骨骼、乳腺、肺(小细胞)、睾丸和甲状腺的肿瘤，和更具体类型的癌症，例如急性成淋巴细胞和成髓细胞白血病、肾胚胎肿瘤、成神经细胞瘤、软组织肉瘤、霍奇金和非霍奇金肿瘤和支气管癌可用一种或多种上述溶癌药物和本发明的化合物的结合抑制。
本发明的化合物的生物学活性用初期的筛选试验评价，它迅速和准确地测定所测试的化合物抑制MRP1或MDR1活性。用于评价该逆转能力的试验是现有技术中已知的。参见例如McGrath等，BiochemicalPharmacology,38：3611,1989；D.Marquardt和M.S.Center,Cancer Research,52：3157,1992；D.Marquardt等CancerResearch,50：1426,1990；和Cole等，Cancer Research,54：5902-5910,1994。
用于MRP1传递的阿诺素抗药性和MDR1传递的长春新碱抗药性逆转的试验：HL60/ADR和HL60/VCR是连续细胞系，分别用于阿诺素和长春新碱抗药性，在增加浓度的阿诺素或长春新碱中培养HL60，人体急性原始粒细胞性白血病细胞系直至获得高抗药性变体。
HL/60ADR和HL60/VCR细胞在含有10％牛犊胎血清(FBS)和250μM/ml GENTAMICINTM(Sigma)的RPMI 1640(Gibco)中生长，收获细胞，用试验介质(与培养介质相同)洗涤两次，计数，在试验介质中稀释至2x105细胞/ml。将15微升细胞等分至加入96孔组织培养板的孔中，每个96孔板的一栏用作负对照，加入不含有细胞的试验介质。
将试验化合物和参考化合物以5mM的浓度溶解在二甲基亚砜(DMSO)，样品在试验介质中稀释至20μM，在6个孔中加入25μl每种化合物。试验标准一式四份，将25μl 0.4％DMSO加入4个孔中作为溶剂对照，将试验介质加入所有孔中以获得每个孔100μl的最终体积。
将板在具有5％二氧化碳气氛的潮湿培养器中在37℃培养72小时，采用标准条件通过四唑翁盐的氧化测定细胞生活力和活力，板在37℃下培养3小时，用微量滴定板计数仪在490nm测定吸光率。
试验化合物逆转HL60/ADR和HLL60/VCR细胞对阿诺素的抗药性的能力通过比较含有除溶癌药物(阿诺素)之外的试验化合物的孔的吸光率和含有溶癌药物而不含试验化合物的孔的吸光率测定。对照组用于确定基础以确保结果是非人工的。试验结果用细胞生长的百分抑制率表示。在试验浓度下单独的溶癌药物通常不能抑制HL60/ADR和HL60/VCR细胞的生长。
式Ⅰ的代表性化合物说明在逆转MRP1多药物抗药性方面的明显效果，与单独的溶癌药物相反，与溶癌药物结合许多化合物显示非常明显的活性提高。此外，所试验的大部分化合物显示对HL60/ADR细胞系比对HL60/VCR细胞系的明显程度的选择性抑制。
在本发明的方法中当给药溶癌药物时，所使用的溶癌药物的数量是可变的。应理解实际给药的溶癌药物的量将由医师根据有关事项，包括所治疗的症状、所选择的给药途径、给药的实际溶癌药物、每个患者(哺乳动物)的年龄、体重和响应和患者症状的严重程度确定。当然，给药的溶癌药物的数量将由患者的医师决定和密切监督。在决定所使用的溶癌药物之后，The Physician’s Desk Reference,MedicalEconomics Company,Montvale,NJ 07645-1742出版，对于医师在决定给药的溶癌药物的数量方面是有用的资源，是每年更新的。
优选的制剂和使用这些制剂的本发明的方法是不包含溶癌药物的方法，因此，优选本发明的化合物与溶癌药物分开给药。在说明书中提到的上述溶癌药物是商业可获得的，可以适用于本发明方法的预配制形式给药。
单独的式Ⅰ化合物，或选择性地与溶癌药物的结合通常以药物制剂的形式给药，这些制剂可通过各种途径给药，包括口服、直肠、眼内、皮下、静脉内、肌内和鼻内。该制剂以药物领域中已知的方法制备，其包括至少一种式Ⅰ的活性化合物。
本发明还包括使用药物制剂的方法，所述制剂含有作为活性组分的式Ⅰ化合物，和选择性地一种溶癌药物和可药用载体。在制备本发明的制剂过程中，活性组分通常与赋形剂混合，用赋形剂稀释或封闭在该载体中，它们可以是胶囊、药囊、纸或其它容器形式。当赋形剂用作稀释剂时，它可以是固体、半固体或液体物质，它们用作活性组分的赋形剂、载体或介质。因此制剂可以是片剂、丸剂、粉末、锭剂、药囊、扁囊剂、酏剂、悬浮剂、乳剂、溶液、糖浆、气溶胶(作为固体或在液体介质中)、含有例如按重量计至多10％活性化合物的软膏、软和硬明胶胶囊、栓剂、无菌注射溶液和无菌包装粉末。
在制备制剂过程中，在与其它组分混合之前将需要粉碎活性化合物以得到合适的颗粒尺寸。如果活性化合物是基本上不溶解的，它通常粉碎至小于200目的颗粒尺寸。如果活性化合物是基本上溶解于水的，颗粒尺寸通常通过粉碎调节到提供在制剂中基本上均匀的分布，例如约40目。
合适赋形剂的某些实例包括乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露糖醇、淀粉、阿拉伯胶、磷酸钙、藻酸盐、黄芪胶、明胶、硅酸钙、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、水、糖浆剂和甲基纤维素。制剂还可附加地包括：润滑剂，例如滑石、硬脂酸镁和矿物油；润湿剂；乳化和悬浮剂；防腐剂，例如甲基和丙基羟基苯甲酸酯；增甜剂；和香料剂。本发明的制剂可配制以便在给药后通过采用本领域中已知的方法向患者提供快速、持续或延迟释放的活性组分。
制剂优选配制成单位剂量形式，每个剂量含有约5-约100mg，更常见的约10-约30mg的活性组分。术语“单位剂量形式”是指适用于人体受体和其它哺乳动物的单元剂量的物理分散的单位，每个单位含有得到所需治疗效果的预定数量的活性物质和合适的药物赋形剂。
式Ⅰ化合物在各种剂量范围内是有效的，例如日剂量通常为约0.5-约30mg/kg体重。在治疗成年人时，以单个或分开的剂量，约1-约15mg/kg/天的范围是尤其优选的。然而，应理解化合物实际给药的数量将由医师根据有关事项，包括所治疗的症状、所选择的给药途径、给药的实际化合物、每个患者(哺乳动物)的年龄、体重和响应和患者症状的严重程度确定，因此，上述剂量范围不是以任何方式限制本发明的范围。在某些情况下，剂量水平低于上述范围的下限将是非常足够的，而在其它情况下，会采用更大的剂量而不产生任何有害的副作用，只要在一整天内该较大剂量首先分成若干较小剂量给药即可。
为制备固体制剂，例如片剂，主要的活性组分与药物赋形剂混合以形成含有本发明的化合物的均匀混合物的预配制组合物。当称这些预配制的组合物为均匀物时，它是指活性组分平均分散在整个制剂，使得制剂可容易地分成相等有效的单位剂量形式，例如片剂、丸剂和胶囊，该固体预配制物随后分成含有0.1-约500mg本发明的活性组分的上述类型的单位剂量形式。
本发明的片剂或丸剂可涂覆或另外化合以得到提供延长作用优点的剂量形式。例如片剂或丸剂可含有内剂量和外剂量组分，后者是前体之上的膜形式。两种组分可由肠溶衣隔开，肠溶衣用于防止在胃中破碎，允许内组分完整地进入十二指肠或延缓释放。各种物质可用于该肠溶衣或涂层，例如包括各种聚合物酸和聚合物酸与诸如虫胶、十六醇和纤维素乙酸酯的物质的混合物的物质。
液体形式的新制剂可以用于口服或通过注射给药，包括水溶液、有合适香味的糖浆、含水或油悬浮液和含有可食用油，例如棉籽油、芝麻油、椰子油或花生油的加香味的乳液，以及酏剂和类似药物赋形剂。
用于吸入或吹入的制剂包括在药物、水或有机溶剂或它们的混合物中的溶液和悬浮液和粉末。液体或固体制剂可含有上述合适的药物赋形剂。制剂优选通过用于表面或系统效果的口腔或鼻腔呼吸途径给药。在优选药物溶剂中的组合物可通过使用惰性气体喷雾，可喷雾的溶液可直接由喷雾装置呼吸或喷雾装置可连接于面罩、帷或间歇正压呼吸机呼吸。溶液、悬浮液或粉末制剂可优选由以合适方式提供制剂的装置优选由口腔或鼻腔给药。
如下制剂实施例仅用于举例说明，而不是以任何方式限制本发明的范围。“活性组分”是指式Ⅰ的化合物或其可药用盐或溶剂化物，并选择性地含有一种或多种溶癌药物。
制剂实施例1
制备含有如下组分的更明胶胶囊：
数量
组分 (mg/胶囊)
活性组分 30.0
淀粉 305.0
硬脂酸镁 5.0
混合上述组分，以340mg的数量填充入硬明胶胶囊中。
制剂实施例2
使用如下组分制备片剂制剂：
数量
组分 (mg/片)
活性组分 25.0
微晶纤维素 200.0
胶体二氧化硅 10.0
硬脂酸 5.0
混合组分，压制成每个重240mg的片。
制剂实施例3
制备含有如下组分的干粉吸入制剂：
组分 重量％
活性组分 5
乳糖 95
将活性组分与乳糖混合，将混合物加入干粉吸入器具中。
制剂实施例4
制备如下含有30mg活性组分的片剂：
组分 数量(mg/片)
活性组分 30.0mg
淀粉 45.0mg
微晶纤维素 35.0mg
聚乙烯基吡咯烷酮(水中的10％溶 4.0mg液)
羧甲基淀粉钠 4.5mg
硬脂酸镁 0.5mg
滑石 1.0mg
总共 120mg
活性组分、淀粉和纤维素通过20号目US筛，充分混合。聚乙烯基吡咯烷酮的溶液与得到的粉末混合，随后它们通过16目US筛。所产生的颗粒在50-60℃下干燥，通过16目US筛。将预先通过30号目US筛的羧甲基淀粉钠、硬脂酸镁和滑石加入颗粒中，在混合后在压片机上压制产生每个重120mg的片。
制剂实施例5
制备如下含有40mg药物的胶囊：
数量
组分 (mg/胶囊)
活性组分 40.0mg
淀粉 109.0mg
硬脂酸镁 1.0mg
总共 150.0mg
将活性组分、纤维素、淀粉和硬脂酸镁混合，通过20号目US筛，填充入每个150mg的硬明胶胶囊。
制剂实施例6
制备如下每个含有25mg活性组分的栓剂：
组分 数量
活性组分 25mg
饱和脂肪酸甘油酯至 2000mg
将活性组分通常60号目US筛，悬浮在用最少所需加热预先熔融的饱和脂肪酸甘油酯中，随后将混合物倾入正常2.0g容量的栓剂模型中，使其冷却。
制剂实施例7
制备如下每5.0ml剂量含有50mg药物的悬浮液：
组分 数量
活性组分 50.0mg
黄原胶 4.0mg
羧甲基纤维素钠(11％) 50.0mg
微晶纤维素(89％)
蔗糖 1.75mg
苯甲酸钠 10.0mg
香料和色素 q.v.
纯水至 5.0ml
将活性组分、蔗糖和黄原胶混合，通过10号目US筛，随后与预先制备的微晶纤维素和羧甲基纤维素的水溶液混合。苯甲酸钠、香料和色素用一些水稀释，在搅拌下加入。随后加入足够的水以产生所需的体积。
制剂实施例8
制备如下每个含有15mg药物的胶囊：
数量
组分 (mg/胶囊)
活性组分 15.0mg
淀粉 407.0mg
硬脂酸镁 3.0mg
总共 425.0mg
将活性组分、纤维素、淀粉和硬脂酸镁混合，通过20号目US筛，以425mg的数量填充入硬明胶胶囊中。
制剂实施例9
制备如下静脉内制剂：
组分 数量
活性组分 250.0mg
等渗盐水 1000ml
制剂实施例10
制备如下表面制剂：
组分 数量
活性组分 1-10g
乳化蜡 30g
液体石蜡 20g
白色软石蜡 至100g
将白色软石蜡加热直至熔融，加入液体石蜡和乳化蜡，搅拌直至溶解。加入活性组分，持续搅拌直至分散，随后将混合物冷却直至固化。
制剂实施例11
制备如下每个含有10mg活性组分的舌下或口腔片：
组分 数量/片
活性组分 10.mg
甘油 210.5mg
水 143.0mg
柠檬酸钠 4.5mg
聚乙烯醇 26.5mg
聚乙烯吡咯烷酮 15.5mg
总共 410.0mg
将甘油、水、柠檬酸钠、聚乙烯醇和聚乙烯吡咯烷酮通过连续搅拌和保持约90℃的温度混合在一起。当聚合物溶解在溶液中时，将溶液冷却至约50-55℃，缓慢加入活性组分。将均匀混合物倒入由惰性物质制造的模型中以产生含有厚度为约2-4mm的扩散基质的药物。该扩散基质随后切割以形成单个的具有合适尺寸的片剂。
另一用于本发明方法的优选制剂采用经皮提供装置(“补片”)。该经皮的补片可用于以控制的数量提供连续或不连续的本发明化合物的扩散，用于提供药物的经皮补片的结构和用途在现有技术中是已知的，参见例如1991年6月11日颁布的US5023252，列为本文参考文献。该补片可构成用于药物的连续、搏动或所需提供。
通常人们想要或需要将药物制剂直接或间接输入大脑。直接技术通常包括将药物输送导管放置在患者心室系统以旁路心脑障壁。一种用于将生物学因子输送至身体的特定解剖学区域的植入提供系统在1991年4月30日颁布的US5011472中描述，列为本文参考文献。
通常是优选的间接技术通常包括配制组合物以通过将亲水药物转化为脂溶药物或前药提供药物潜伏化作用。潜伏化作用通常通过阻断在药物中存在的羟基、羰基、硫酸根和伯胺基团使得药物更加脂溶和会被接纳以输送通过心脑障壁。此外，亲水药物的提供可通过高渗溶液的动脉内扩散提高，它可方便地打开心脑障壁。