食用脂肪掺合物 背景技术
本发明涉及基于橄榄油的产品(olive oil based products)，特别是基于类似于初榨橄榄油的高级橄榄油的产品，该产品含有植物甾烷醇(stanol)酯和/或甾醇酯，和制备该基于橄榄油的产品的方法以及某些可用于制备基于橄榄油的产品的植物甾烷醇酯和/或甾醇酯。
植物甾醇是一组在结构上非常类似于胆固醇的化合物。最常出现于自然界中的植物甾醇是谷甾醇，菜油甾醇和豆甾醇。植物油脂是我们饮食中的植物甾醇的主要来源。在植物油中，大部分甾醇作为脂肪酸酯存在。饱和的植物甾醇如谷甾醇和菜油甾醇少量存在于我们的饮食中。在芬兰饮食中总甾烷醇的日摄取量估计为30-80mg/天。然而，妥尔油甾醇含有10-20％植物甾烷醇(主要是谷甾醇和菜油甾醇)。也可以通过氢化以除去相应的植物甾醇中的双键来生产植物甾烷醇。
近年来，许多注意力集中在植物甾烷醇和甾醇的降低胆固醇的特性，并且许多富含甾烷醇或甾醇的产品例如人造黄油、色拉调料、长条形面包和酸奶已可商购得到。根据最近的研究，日摄取2-3g植物甾烷醇或甾醇可显著降低血清LDL胆固醇水平，甚至当它们用作健康推荐膳食的一部分。富含植物甾烷醇和甾醇的食品可以提供降低提高地总血清和LDL胆固醇水平的强化(Enrichment)膳食方法。可以用脂肪酸酯形式的植物甾烷醇和/或甾醇强化主要食品而不损害口味或口感。基于胆固醇降低功效和植物甾烷醇实质上不能被吸收的事实，更优选植物甾烷醇，但也可以使用植物甾烷醇和甾醇的掺合物或单独使用植物甾醇。
当强化主要食品时，最大益处是可以通过使用植物甾烷醇和/或甾醇来降低提高的总血清和LDL胆固醇水平。例如，在欧洲的北部，人造黄油和涂抹酱是非常适合于这类强化的食物制品，但对于欧洲南部，需要发现其它主要食品代替物。在该地区，橄榄油是较重要的主食。此外，由于健康声誉和高级橄榄油的风味，橄榄油的消耗在世界其它地方也在增长。橄榄油天然含有含量非常低的植物甾醇(典型地＜0.2g/100g油)。
此外，高级橄榄油例如初榨橄榄油含有相当高数量的角鲨烯，即胆固醇的前体。角鲨烯含量是变化的，但特别好的初榨橄榄油一般含有约300mg/100g油。膳食角鲨烯在人体中已显示出增加血清胆固醇水平。这种对总血清和LDL胆固醇水平的作用可以被植物甾烷醇和/或甾醇抵消。因此，现在明确需要制造出可商购得到的用植物甾烷醇和/或甾醇强化的高级橄榄油，以及需要确保这样的橄榄油具有类似于常规使用的橄榄油的特性。
初榨橄榄油当在20℃下贮存24小时时应当保持清澈。一般地，高级橄榄油如初榨橄榄油，当在冷藏温度下长期贮存时，变得混浊甚至产生明显的结晶。用植物甾烷醇和/或甾醇强化的橄榄油会避免混浊。
为了大规膜生产植物甾烷醇和/或甾醇酯，通常使用具有改进的脂肪酸组成的普通植物油或商购的食用油。用带有衍生自该商购植物油或它们的掺合物的脂肪酸的植物甾烷醇和/或甾醇酯强化高级橄榄油例如初榨橄榄油，进一步增强高熔点脂质在室温和低于室温下的沉淀。形成的晶体通常不溶解，甚至在室温下长期贮存后也不能溶解。甚至通过采用酯化衍生自通常商购得到的植物油的甾烷醇和/或甾醇脂肪酸也不能解决该问题，所述植物油含有高水平多不饱和脂肪酸和低水平饱和脂肪酸，例如低饱和大豆油(PUFA：67重量％，SAFA：7，9重量％)，葵花籽油(PUFA：64重量％，SAFA：12重量％)或linola油(PUFA：70重量％，SAFA：11重量％)。
美国专利5089139描述了一种精炼初榨橄榄油的方法，其中将初榨橄榄油在15-35℃的温度下在微过滤器上过滤，获得当在0℃下经受冷却试验24小时时仍保持透明的初榨橄榄油。
美国专利3751569描述了具有低胆醇血特性的透明烹饪用油和色拉油。向液体甘油酯基油中混入0.5-10重量％(以游离甾醇计)甾醇脂肪酸酯。脂肪酸部分定义为C1-12饱和一元羧酸部分或具有最多24个碳原子的不饱和脂肪酸。在一实施方案中，通过高氯酸催化商购的游离甾醇和一元羧酸酐的酯化来制备甾醇脂肪酸酯。少量添加甾醇脂肪酸酯足以防止在冷藏温度下的沉淀。在一说明性实施方案中，通过将液体甘油酯基油和植物甾醇一元羧酸酯溶解在互溶剂中(例如己烷或乙醚)并蒸发溶剂来制备烹饪用油或色拉油。也介绍了植物甾醇的不同脂肪酸酯在三油精的溶解性，显示出对C12(0.6％)和C16(0.1％)饱和脂肪酸植物甾醇酯的溶解性非常低。在US3751569专利中公开的方法和产品具有至少两个缺点。第一，使用由单一商购得到的游离甾醇制备的脂肪酸既不实用也不经济，因为这些起始产品相当贵。第二，在US3751569专利中所使用的高氯酸催化酯化法不是食品级的方法，因为残余氯化物保留在产物中。由此，US3751569专利不适合于商业应用。
英国专利1405346教导了一种方法，通过该方法，天然包含在食用油脂中的游离甾醇经由酯交换过程转化为脂肪酸酯。此外，在实施例2中，描述了一种生产具有提高的甾醇酯含量的植物油的方法。然而，所教导的方法是基于全部油掺合物的酯交换，根据物理特性，对于高级商购橄榄油例如初榨橄榄油不能实施所教导的方法。
发明概述
将植物甾醇掺合物饱和至相应的植物甾烷醇掺合物可以引起相应的具有相同脂肪酸组成的甾醇/甾烷醇酯的熔化特性显著不同。例如，基于植物油的带有低芥酸菜籽油脂肪酸的甾醇酯和相应甾烷醇脂肪酸显示出在不同温度下的下列固体脂肪含量(重量％总脂肪)，根据NRM-技术测量：
10℃ 20℃ 30℃ 35℃ 40℃
植物甾醇 40.5 11.6 3.5 1.7 1.1
植物甾烷醇 82.3 70.2 34.9 9.4 5.2
可以通过改变脂肪酸酯的脂肪酸组成或通过在酯中使用不同比例的植物甾烷醇和甾醇来特制甾烷醇和/或甾醇脂肪酸酯的物理特性。
在本发明中，通过将具有衍生自所谓高PUFA植物油的脂肪酸的植物甾烷醇和/或甾醇脂肪酸酯溶解于高级橄榄油如初榨橄榄油中，并在从冷藏温度至室温范围的温度下从橄榄油结晶任何较高熔点的脂质来克服较高熔点的脂质在高级橄榄油中沉淀/结晶的问题，以获得具有非常少量的包含在橄榄油中的饱和脂肪酸酯的植物甾烷醇和/或甾醇脂肪酸酯掺合物。所需的结晶温度和时间取决于所用甾烷醇和/或甾醇脂肪酸酯的数量和类型。通过适当选择结晶温度和时间，初榨橄榄油要么在冷藏温度下保持清澈，要么当从冰箱取出油并在室温下保持一短时间时变得清澈。与对例如在液体甘油三酯基油(0.1％)中的植物甾醇棕榈酸酯显示出非常有限的溶解性的美国专利3751569相比，具有高含量不饱和脂肪酸的植物甾烷醇和/或甾醇脂肪酸酯掺合物的存在显然提高了甾烷醇和/或甾醇酯的溶解性。
此外，本发明教导了可用于直接强化初榨橄榄油的植物甾烷醇和/或甾醇酯组合物。由此，也可以通过添加适量的具有以下脂肪酸组成的植物甾烷醇和/或甾醇酯来获得本发明的油，所述脂肪酸组成含有大于60％、优选大于65％的多不饱和脂肪酸，和小于5％的饱和脂肪酸。当想得到在冷藏温度下是清澈的橄榄油时，使用具有以下脂肪酸组成的植物甾烷醇和/或甾醇酯，所述脂肪酸组成含有大于60％、优选大于65％的多不饱和脂肪酸，和小于5％的饱和脂肪酸，优选小于3％、小于2％，或最优选小于1.5％的饱和脂肪酸，如硬脂酸。通过任何本领域公知的酯化方法如通过酯化脂肪酸掺合物或具有适当预定的脂肪酸组成的脂肪酸醇酯掺合物，可获得这种甾烷醇和/或甾醇脂肪酸酯。上述所有百分数值在整个说明书中是重量％，除非另外说明。
优选实施方案的描述
术语“初榨橄榄油”意在包括特级初榨橄榄油、初榨橄榄油、普通橄榄油和lampante初榨橄榄油，所有这些是根据Official Journal of the EuropeanCommmunities No.L39/2(15.2.1992)定义的。此外，初榨橄榄油和如OfficialJournal of the European Communities定义的低级橄榄油的任何掺合物被该定义所覆盖。优选，该掺合物含有至少25％、更优选至少50％、最优选至少75％的初榨橄榄油。
术语“基于橄榄油的产品”意在包括用植物甾烷醇和/或甾醇脂肪酸酯的掺合物强化的上述定义的初榨橄榄油。约0.3-25重量％、优选约0.3-10重量％、更优选约1.5-10重量％、最优选约3-10重量％植物甾烷醇和/或甾醇脂肪酸酯(以游离甾烷醇计算)可以包含在基于橄榄油的产品中。
术语“高PUFA植物油”意在包括植物油或在脂肪酸组成中含有大于50％多不饱和脂肪酸和至少7％饱和脂肪酸的植物油掺合物。典型的高PUFA植物油包括葵花籽油、玉米油、大豆油、低饱和的大豆油、红花籽油、棉籽油、linola油或它们的掺合物。脂肪酸组成中的饱和脂肪酸的数量典型地约7.5-49％，更优选约8-25％，最优选约10-20％。
术语“植物甾醇”意在包括4-去甲基甾醇、4-一甲基甾醇和4，4-二甲基甾醇(三萜烯醇)或它们的掺合物。术语“植物甾烷醇”意在包括4-去甲基甾烷醇、4-一甲基甾烷醇和4，4-二甲基甾烷醇，优选通过氢化相应的植物甾醇获得。典型的4-去甲基甾醇包括谷甾醇、菜油甾醇、豆甾醇、菜子甾醇、22-脱氢菜子甾醇、Δ5-燕麦甾醇(avenasterol)。典型的4，4-二甲基甾醇包括环阿屯醇、24-亚甲基环阿屯醇和环米糠醇(cyclobranol)。典型的植物甾烷醇包括谷甾烷醇、菜油甾烷醇和它们的24-差向异构体，环阿屯醇和通过饱和三萜烯醇(环阿屯醇、24-亚甲基环阿屯醇和环米糠醇)得到的饱和形式。术语植物甾醇和植物甾烷醇还包括一切可能的天然的4-去甲基甾醇和甾烷醇、4-一甲基甾醇和甾烷醇、4，4-二甲基甾醇和甾烷醇的掺合物以及天然掺合物的混合物。术语植物甾醇和植物甾烷醇进一步包括任何单独的4-去甲基甾醇、4-一甲基甾醇或4，4-二甲基甾醇或它们的相应的饱和(甾烷醇)形式。
术语“植物甾醇(plant sterol)”和“植物甾烷醇(plant stanol)”分别意指术语“植物甾醇(phytosterol)”和“植物甾烷醇(phytostanol)”的异名。“甾醇”和“甾烷醇”也分别指“植物甾醇”“植物甾烷醇”。
“多不饱和脂肪酸”在此定义为含有两个或更多双键的脂肪酸。优选双键具有顺式构型，但一个或更多双键可以是反式构型。已知由于在脱臭过程中的热异构化，许多商购的植物油含有百分含量水平的多不饱和脂肪酸，该脂肪酸含有一个或多个具有反式构型的双键。此外，双键可以是所谓的亚甲基间断的，也可以是共轭的。典型的衍生自植物油的多不饱和脂肪酸是亚油酸、亚麻酸和？-亚麻酸，但也可以利用来自鱼油的多不饱和脂肪酸如二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸。
术语“饱和脂肪酸”是指不带有任何双键的具有4-24个碳原子的脂肪酸，由此包括直链和支链脂肪酸。
术语“高PUFA甾烷醇和/或甾醇酯”是指优先用来自高PUFA植物油的脂肪酸生产的甾烷醇和/或甾醇酯，但也可以使用衍生自鱼油的多不饱和脂肪酸或衍生自植物油和鱼油的多不饱和脂肪酸的掺合物。
优选采用食品级方法生产用于本发明的甾烷醇和/或甾醇脂肪酸酯。“食品级方法”在此定义为包括任何方法，从而甾烷醇和/或甾醇脂肪酸酯产物没有残余化学物质，它们是(1)在最终产物中不需要的化学物质，因为它们或多或少影响甾烷醇和/或甾醇脂肪酸酯的质量，或者(2)从食品安全观点来看，对消费者有害(例如，溶剂或催化剂含有氯化物)。在本领域中公知许多食品级方法，任何一种方法都适合于生产用于本发明的甾烷醇和/或甾醇脂肪酸酯。优选食品级方法是无溶剂食品级方法。可通过美国专利5502045描述的方法生产甾烷醇和/或甾醇脂肪酸酯，例如通过从高PUFA植物油或它们的掺合物获得的脂肪酸醇酯的脂交换来生产。另一个适合生产甾烷醇和/或甾醇脂肪酸酯的方法是在反式或顺式酯交换催化剂存在下，通过游离甾烷醇和/或甾醇和高PUFA植物油的酯化来生产。或者使用直接的优选催化酯化方法，例如那些公开在美国专利5892068中的方法，或者酶促酯化方法，例如那些公开在EP195311中的方法。
另一个生产甾烷醇和/或甾醇脂肪酸酯的可能性是利用过量的存在于根据美国专利5502045所描述的方法酯化高PUFA甾醇和/或甾烷醇酯后获得的油相中的高PUFA醇酯。该高PUFA醇酯和甾醇和/或甾烷醇酯的混合物本身可以经受分级步骤以除去较高熔点的甾醇和/或甾烷醇酯，然后用于甾烷醇和/或甾醇的酯化。
本发明优选通过美国专利5502045概述的方法，采用具有预定的脂肪酸组成的脂肪酸醇酯来生产甾烷醇酯、甾醇酯或它们的掺合物。可通过任何本领域公知的方法例如溶剂或洗涤(detergent)分级从高PUFA液体植物油或高PUFA油的掺合物获得的醇脂肪酸酯来生产脂肪酸醇酯。也可以通过在减压下的蒸馏步骤获得相应的脂肪酸醇酯的掺合物。优先使用该蒸馏步骤以除去具有16个或小于16个碳原子的饱和脂肪酸。也可以通过醇解植物油或例如根据美国专利5670348获得的饱和脂肪酸含量减少的油掺合物来获得具有规定的脂肪酸组成的脂肪酸醇酯。
也可以直接地生产具有所需脂肪酸组成的甾烷醇和/或甾醇酯，优选催化酯化方法，例如美国专利5892068，在游离脂肪酸或组合的脂肪酸掺合物和甾烷醇和/或甾醇之间进行催化酯化。采用反式或酯交换催化剂的甾烷醇和/或甾醇与具有所需脂肪酸组成的甘油三酯的酯化也是适合于生产甾烷醇和/或甾醇酯的方法。此外，也可以通过酶促酯化例如EP195311所述的方法来生产甾烷醇和/或甾醇酯。
此外，多不饱和脂肪酸的掺合物可用于获得具有所需的组成的甾烷醇和/或甾醇酯。
可进一步通过工业上采用的分级方法如干法、洗涤和湿型来分级通过以下方法而获得的甾烷醇和/或甾醇脂肪酸酯来获得具有所需脂肪酸组成的甾烷醇脂和/或甾醇酯：酯化衍生自例如植物油或油的掺合物的高PUFA脂肪酸，例如基于美国专利5502045所述的酯交换的方法，优选任何直接的催化酯化方法或通过使用酶促酯化方法如EP195311所述的。尤其是溶剂分级可用于制备所需的甾醇和/或甾烷醇酯组合物。当使用酶酯化方法如EP195311所述的方法时，在除去酶和可能的水相后，优选直接在用于酯化方法中所用的反应溶剂中进行分级。
以上讨论的方法仅仅是一些可用于制备本发明的甾烷醇和/或甾醇脂肪酸酯的食品级方法。
在一优选实施方案中，优选通过溶解5-50重量％(优选5-25％)甾烷醇和/或甾醇脂肪酸酯来获得含有预定的甾烷醇和/或甾醇脂肪酸酯的掺合物的特级初榨橄榄油，所述脂肪酸酯通过诸如美国专利5502045公开的酯化方法获得，例如采用高PUFA植物油或高PUFA植物油的混合物作为脂肪酸的来源。该方法优选作为初榨橄榄油的常规精炼方法的一部分来进行。加热如此获得的甾烷醇和/或甾醇酯橄榄油掺合物并混合至甾烷醇和/或甾醇酯完全溶解在橄榄油中，之后，进行本领域公知的常规的“冬化”步骤或任何分级过程。例如，可以在0-30℃、优选5-25℃下进行冬化或间歇式干法分级，结果，基于橄榄油的产品在4-25℃温度范围内的某些点值下，更优选在4-8℃温度范围内的某些点值下是清澈的。当从冰箱取出并在室温下即18-30℃温度范围内的某些点值下、更优选8-25℃温度范围内的某些点值下贮存时，就冷藏温度下显示出混浊而论，根据本发明制备的所有基于橄榄油的产品变得清澈。这意味着本发明基于橄榄油的产品在30℃或更高的温度下、优选在25℃或更高的温度下、更优选在20℃或更高的温度下、最优选在18℃或更高的温度下是清澈的。如果产品在冷藏温度下(即约2-12℃，优选约2-8℃)贮存，优选在8℃下是清澈的，更优选在4℃下是清澈的。由于欧洲消费者大多习惯于在室温下贮存油，所以优选在25℃或更高的温度下、更优选在20℃或更高的温度下、最优选在18℃或更高的温度下，基于橄榄油的产品是清澈的。
可以根据所用甾烷醇酯和/或甾醇酯的数量和类型以及所需的终产品来改变结晶温度和时间。通过例如真空过滤除去主要由甾烷醇和/或甾醇的饱和脂肪酸酯组成的固体部分之后，获得的基于橄榄油的产品可原样使用或用未加工的初榨橄榄油稀释以获得所需量的在基于橄榄油产品中的植物甾烷醇和/或甾醇。取决于初榨橄榄油的质量，通过过滤同时除去一部分天然包含在橄榄油中的较高熔点的脂质成分，由此，该过程改善了橄榄油在冷藏温度下(即约2-12℃，优选约2-8℃)的透明度。除了冬化或间歇式干法分级之外，任何类型的分级方法可用于结晶和除去具有较高熔点的甾烷醇和/或甾醇脂肪酸酯，例如基于饱和脂肪酸的甾醇和/或甾烷醇脂肪酸酯，这对本领域技术人员来说是显而易见的。可以使用本领域公知的过滤方法对本领域技术人员来说也是显而易见的。
生产具有所需脂肪酸组成的甾烷醇和/或甾醇酯的另一种方式是利用过量的在美国专利5502045所公开的酯交换之后获得的高PUFA甾醇和/或甾烷醇酯掺合物的脂肪酸甲酯。在干燥步骤后，将甾烷醇和/或甾醇酯脂肪酸醇酯混合物冷却到5-25℃，这根据生产的甾烷醇和/或甾醇酯的组成而定，并且允许高熔点组份结晶4-24小时。任选地，添加附加的脂肪酸醇酯以促进分级过程。可以使用任何的脂肪酸醇酯，但优选使用高PUFA醇酯。过滤后，优选将清澈的油相脱臭以除去过量的脂肪酸醇酯并获得无味甾烷醇和/或甾醇酯。优选将如此获得的甾烷醇和/或甾醇酯混合进初榨橄榄油中。
此外，可以由脂肪酸或具有适当组成的脂肪酸醇酯生产具有所需脂肪酸组成的植物甾烷醇和/或甾醇脂肪酸酯。如此得到的植物甾烷醇和/或甾醇脂肪酸酯可直接加到初榨橄榄油中以获得本发明教导的基于橄榄油的产品。
此外，可利用“脂肪酸原料”如通过包括例如利用微生物、酶或新培育的产油植物获得的脂肪酸、脂肪酸醇酯或油来生产本发明的甾烷醇和/或甾醇酯组合物。可从任何甾醇和/或甾烷醇源例如从纸浆工业或从植物油加工获得甾醇和/或甾烷醇部分。也包括通过常规方法或基因改性生产的新的改良品种作为可能的生产甾烷醇和/或甾醇的原料，所述改良品种能产生数量增加的或更吸引人的组成的适合的甾醇和/或甾烷醇。优选其后在食品级方法中利用甾烷醇和/或甾醇来生产本发明基于橄榄油的产品。
在本发明一优选实施方案中，用具有预定的脂肪酸组成的植物甾烷醇脂肪酸酯强化初榨橄榄油。
另外，也可以使用植物甾烷醇和甾醇脂肪酸酯或植物甾醇脂肪酸酯的掺合物。
下面描述实施例以便更详细地公开本发明。所有给出的百分数是重量％。
实施例
实施例1：制备基于低饱和大豆油脂肪酸(LowSatSoy)的甾烷醇脂肪酸酯
小规模生产甾烷醇脂肪酸酯。将6kg通过氢化商购得到的植物甾烷醇(组成：68.2％谷甾烷醇(sitostanol)，28.3％菜油甾烷醇(campestanol)，1.1％谷甾醇和痕量其它不饱和甾醇)与8.6kg LowSatSoy甲酯混合物掺合并在110-120℃下干燥。将干燥混合物的温度降至90-95℃并添加甲醇钠催化剂(73g)。将温度增加至120℃，在真空(40mmHg)下进行反应4小时。通过GC分析控制转化率。一旦达到大于98％的转化率，将温度降至100℃，添加30重量％大于90℃的热水，以破坏催化剂。除去水相并再洗涤油相以使皂含量小于1000ppm。在95℃下干燥油相，采用1重量％漂白助剂(Trisyl，Grace，德国)在真空和95℃下漂白干燥的物料20分钟。通过过滤除去漂白助剂后，进行标准小规模脱臭(间歇式脱臭器，容量9kg)以除去过量的大豆油甲酯，获得无味甾烷醇酯产物。获得的植物甾烷醇酯的脂肪酸组成如下：SAFA：8.7％，MUFA：27.5％和PUFA：63.8％。两者C16：0和C18：0的含量都是3.6％。甾烷醇含量是57.6重量％，具有高的酯化转化率(游离甾烷醇的量为1.5重量％)。
实施例2：制备具有衍生自linola油的脂肪酸的基于植物油的甾烷醇脂肪酸酯
用和实施例1所述的相同的植物甾烷醇掺合物和方法制备具有衍生自linola油的脂肪酸的甾烷醇脂肪酸酯掺合物。获得的植物甾烷醇酯的脂肪酸组成如下：SAFA：10.6％，MUFA：17.7％和PUFA：71.8％。C16：0和C18：0的含量分别是6.2％和3.9％。甾烷醇含量是57.9重量％，具有高的酯化转化率(游离甾烷醇的量为0.13重量％)。
实施例3：基于蒸馏的衍生自葵花油的高PUFA脂肪酸来制备植物甾烷醇脂肪酸酯
采用和实施例1所述的相类似的步骤，用在蒸馏基于葵花油的甲酯后得到的脂肪酸甲酯生产高PUFA植物甾烷醇酯。混和的蒸馏馏分含有5.6％SAFA(0.3％C16：0，5.0％C18：0)，26.5％MUFA和67.9％PUFA。植物甾烷醇酯的总甾醇(植物甾醇+植物甾烷醇)含量是59.5％，而植物甾烷醇含量是58.4重量％。游离甾烷醇的量是0.86％。
实施例4：通过在+7℃下结晶来制备富集植物甾烷醇酯的初榨橄榄油
通过将油加热至60℃并在常压下搅拌，将7重量％按照实施例1生产的具有衍生自低饱和大豆油的脂肪酸的植物甾烷醇酯(相当于4.0％植物甾烷醇和0.05重量％植物甾醇)溶解在特级初榨橄榄油(CarksganbMejeri，瑞典)中。当全部植物甾烷醇酯溶解时，使掺合物在慢速搅拌和+7℃下结晶21小时。通过采用真空和在冬化方法中常规使用的厚(碳)过滤纸过滤油。滤液的重量是起始特级初榨橄榄油植物甾烷醇酯掺合物的1.1重量％。获得的基于橄榄油的产物含有3.7重量％植物甾烷醇，其中0.12重量％植物甾烷醇是游离形式。植物甾烷醇酯的脂肪酸含有4.9％饱和脂肪酸(2.4％C16：0和1.5％C18：0)，与在添加的植物甾烷醇酯中的8.7％饱和脂肪酸相比，明显显示出其主要是结晶的饱和植物甾烷醇酯。滤液的植物甾烷醇的含量是19.3重量％，其中仅0.18重量％植物甾烷醇是游离形式。获得的富集植物甾烷醇酯的初榨橄榄油在5℃下保持清澈至少5天，而在对照特级初榨橄榄油中，3天后可以在瓶的玻璃壁上看见明显的结晶。
实施例5：通过在16℃下结晶来制备富集植物甾烷醇酯的初榨橄榄油
按照和实施例4类似的方法制备富集植物甾烷醇酯的特级初榨橄榄油，除了在16℃下进行结晶21小时之外。获得的基于橄榄油产品含有3.7重量％植物甾烷醇，其中0.11重量％植物甾烷醇是游离形式。植物甾烷醇酯的脂肪酸组成是4.5％SAFA(2.3％C16：0和1.4％C18：0)，29.0％MUFA和66.6％PUFA。滤液的重量是起始特级初榨橄榄油甾烷醇酯掺合物的1.5重量％。滤液的植物甾烷醇的含量是10.7重量％，其中仅0.1重量％是游离植物甾烷醇。滤液的植物甾烷醇酯的脂肪酸组成是36.9％SAFA(18.9％C16：0和15.4％C18：0)，19.7％MUFA和43.4％PUFA。该数据清楚地表明大部分饱和脂肪酸植物甾烷醇酯被结晶。获得的富集植物甾烷醇酯的初榨橄榄油在5℃下保持清澈至少5天，而在对照特级初榨橄榄油中，3天后可以在瓶的玻璃壁上看见明显的结晶。
实施例6：制备富集植物甾烷醇酯的初榨橄榄油
按照实施例4，将7重量％根据实施例2生产的植物甾烷醇酯溶解在特级初榨橄榄油(Carlshamr Mejeri，瑞典)中并在16℃下结晶20小时。将过滤后获得的油样品贮存在7℃的冰箱中24小时，发现变得混浊。该样品在室温下是清澈的，但在室温下1天后变得混浊，在室温下2天后形成明显的结晶。获得的基于橄榄油的产品含有3.3重量％植物甾烷醇。与源自linola甾烷醇酯的10.6％SAFA，17.7％MUFA和71.8％PUFA相比，植物甾烷醇酯的脂肪酸组成是6.0％SAFA，19.4MUFA和74.6％PUFA。根据该数据，显然植物甾烷醇酯的脂肪酸的6％SAFA含量太高，以致不能获得所需的基于橄榄油的产品的性质。
实施例7：制备富集植物甾烷醇酯的初榨橄榄油
将实施例3获得的11和16重量％植物甾烷醇酯溶解在特级初榨橄榄油(Carlshamn Mejeri，瑞典)中，并根据实施例4进行加工。16重量％样品的结晶温度是+7℃(20小时)和+23℃(7天)。11重量％样品的结晶温度是+23℃(7天)。在7℃下结晶的16重量％样品在7℃下保持清澈至少1星期。该基于橄榄油的产品中的总甾烷醇含量是8.9重量％，包含在基于橄榄油的产品中的植物甾烷醇酯的脂肪酸组成是1.7％SAFA(0.65％C16：0和0.34％C18：0)，26.8％MUFA和71.5％PUFA。可以用未加工的初榨橄榄油稀释该基于橄榄油的产品以获得所需植物甾烷醇含量的基于橄榄油的产品，并使之商品化。
在23℃下结晶7天的样品在7℃下变得混浊，但两个样品在室温下都变得清澈。两个基于橄榄油的产品即11％样品和16％样品的甾烷醇的含量分别是6.3和8.9重量％。
实施例8：制备富集植物甾烷醇酯的初榨橄榄油
将4.5重量％在实施例1、2和3获得的植物甾烷醇酯溶解在特级初榨橄榄油(Carlshamn Mejeri，瑞典)中，并在7℃下贮存11小时。用基于向日葵甲酯馏分(SAFA：5.6％；C16：0 0.3％，C18：0 5.0％)的植物甾烷醇酯富集的基于橄榄油的产品在+7℃下显示出明显的结晶，这些样品在室温下没有变得清澈，其清楚地表明C18：0甾烷醇酯的含量在此基于橄榄油的产品中太高。由于SAFA含量太高(8.7％，10.6％和5.6％)，所有这三种掺合物也产生结晶。
实施例9：通过溶剂分级制备具有所需脂肪酸组成的植物甾烷醇脂肪酸酯
将10g通过实施例1概述的步骤获得的植物甾烷醇酯溶解在200ml离心管中的90ml正己烷中。将混合物在+7℃下保持24小时，之后在温度可程序控制的离心机中离心混合物。除去己烷相，并蒸发己烷。获得的植物甾烷醇酯含有4.6％SAFA(2.4％，C16：0和1.8％C18：0)，27.2％MUFA和68.2％PUFA。
实施例10：使用具有所需脂肪酸组成的植物甾烷醇酯制备基于橄榄油的产品
按照类似于实施例4概述的步骤，将7重量％由实施例9获得的植物甾烷醇酯溶解在特级初榨橄榄油中并在+7℃下贮存。油保持清澈至少7天。
实施例11：制备用甾烷醇脂肪酸酯富集的基于橄榄油的产品
用类似于实施例3描述的方式，通过蒸馏制备两批脂肪酸甲酯，但具有以下获得的脂肪酸组成：4.9％ SAFA，34.1％MUFA和61％PUFA，另外一个是2.5％SAFA，36.5％MUFA和61％PUFA。采用实施例1描述的方法，将获得的脂肪酸甲酯用于植物甾烷醇的酯化。将0.3g甾烷醇脂肪酸酯溶解在10g特级初榨橄榄油中。两批油在室温下保持清澈至少1星期。
实施例12：制备用甾醇脂肪酸酯富集的基于橄榄油的产品
将与实施例11制备的并在实施例11中使用的含有4.9％SAFA，44.1％MUFA和61％PUFA的相同的脂肪酸甲酯用于植物甾醇的酯化，将0.6g甾醇脂肪酸酯溶解在10g特级初榨橄榄油中。油在室温下保持清澈至少1星期。