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1、(10)申请公布号 CN 103755561 A (43)申请公布日 2014.04.30 CN 103755561 A (21)申请号 201410013453.8 (22)申请日 2014.01.10 C07C 69/24(2006.01) C07C 49/717(2006.01) C07C 67/14(2006.01) C07C 45/61(2006.01) A23K 1/16(2006.01) (71)申请人 广州英赛特生物技术有限公司 地址 510530 广东省广州市高新技术产业开 发区科学城掬泉路 3 号广州国际企业 孵化器 D 区 415 号 (72)发明人 彭险峰 覃宗华 李方。
2、 黄计军 叶晓岚 李早龙 (74)专利代理机构 广州科粤专利商标代理有限 公司 44001 代理人 刘明星 (54) 发明名称 - 扁柏酚酯或盐及其在制备动物饲料添加 剂中的应用 (57) 摘要 本发明公开了 - 扁柏酚酯或盐及其在制备 动物饲料添加剂中的应用。- 扁柏酚酯或盐化 合物， 其结构式如式 1 或式 2 所示 ： 式 1 中 R1为正 壬基或正十七烷基， 式 2 中 L 为钠、 钾、 钙、 镁、 锌 、 铜或锰。本发明的如式 1 及式 2 所示的 - 扁 柏酚酯及盐化合物对畜禽低毒或者无毒， 其比目 前专利覆盖相关化合物有更高的安全性、 更稳定 及更强的生长促进性能， 因此更适合作。
3、为饲料用 生长促进剂， 在养殖行业具有非常好的应用前景。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 10 页 附图 1 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书10页 附图1页 (10)申请公布号 CN 103755561 A CN 103755561 A 1/1 页 2 1.- 扁柏酚酯或盐化合物， 其结构式如式 1 或式 2 所示 ： 式 1， 其中 R1为正壬基或正十七烷基 ； 式 2， 其中 L 为钠、 钾、 钙、 镁、 锌、 铜或锰。 2.根据权利要求1所述的-扁柏酚酯或盐化合物， 其特征在于， 所述的L为锰、 铜、 锌 或镁。。
4、 3. 权利要求 1 所述的 - 扁柏酚酯或盐化合物在制备动物饲料添加剂中的应用。 4. 根据权利要求 3 所述的应用， 其特征在于， 所述的动物为各个生长阶段的猪、 鸡、 鸭、 鹅、 肉牛、 奶牛、 羊、 鱼、 虾、 狐、 貂或貉。 5. 根据权利要求 3 所述的应用， 其特征在于， 所述的 - 扁柏酚酯或盐化合物， 其在动 物饲料中的添加剂量为 0.1 200ppm。 权 利 要 求 书 CN 103755561 A 2 1/10 页 3 - 扁柏酚酯或盐及其在制备动物饲料添加剂中的应用 技术领域 ： 0001 本发明属于动物饲用生长促进剂领域， 具体涉及 - 扁柏酚酯或盐及其在制备动 物。
5、饲料添加剂中的应用。 背景技术 ： 0002 - 扁柏酚 （-hinokitiol） ， 又名扁柏醇、 桧木醇、 日柏醇 （酚）等名， 化学名 ： 2- 羟基 -4- 异丙基 -1- 环庚三烯酮， 是天然食用精油组分， 在日本已用作食品添加剂多年。 0003 US6387417B1 有公开 - 扁柏酚及其配合物 （2:1 或 3:1） 抗万古霉素耐药肠球菌 的活性及其在治疗中的应用。 0004 中国专利 CN101396021A（公开号） 描述了 hinokitiol 及其金属盐对于植物病原 微生物的活性， 但是未具体公开盐的结构， 是否包括配合物未说明。另外 hinokitiol 包括 -，。
6、 -， -3 个同分异构体， 他们的盐的结构也是不同的。 0005 另有论文报道 - 扁柏酚做饲料添加剂应用的体外实验结果。 0006 但是， - 扁柏酚具有热不稳定性及光不稳定性。因此如何获得高稳定性 （热、 光 稳定性） 、 更高安全性， 以及具有非常好的生长促进作用-扁柏酚的化合物是急待研究的。 发明内容 ： 0007 本发明的目的是提供具有更高稳定性、 安全性的能够促进畜禽生长的， 更适合作 为饲料添加剂应用的稳定化的 - 扁柏酚酯及盐化合物。 0008 本发明的稳定化的 - 扁柏酚酯及盐化合物， 其结构式如式 1 或式 2 所示 ： 0009 式 1， 其中 R1为正壬基或正十七烷基。
7、 ； 0010 式 2， 其中 L 为钠、 钾、 钙、 镁、 锌、 铜或锰。 0011 所述的 L 优选为锰、 铜、 锌或镁。 0012 本发明的第二个目的是提供上述 - 扁柏酚酯及盐化合物在制备动物饲料添加 说 明 书 CN 103755561 A 3 2/10 页 4 剂中的应用。 0013 所述的动物饲料添加剂是指动物生长促进剂。 0014 所述的动物为各个生长阶段的猪、 鸡、 鸭、 鹅、 肉牛、 奶牛、 羊、 鱼、 虾、 狐、 貂或貉等 养殖动物。 0015 所述的 - 扁柏酚酯及盐化合物， 其在动物饲料中的添加剂量为 0.1 200ppm。 0016 所述的动物饲料可以为全价配合饲料。
8、。 0017 本发明的如式 1 及式 2 所示的 - 扁柏酚酯及盐化合物对畜禽低毒或者无毒， 其 比目前专利覆盖相关化合物有更高的安全性、 更稳定及更强的生长促进性能， 因此更适合 作为饲料用生长促进剂， 在养殖行业具有非常好的应用前景。 附图说明 ： 0018 图 1 是实施例 2 的 3- 异丙基 -1， 3， 5- 环庚三烯 -7- 酮 - 正癸酯的 HPLC 图 ； 0019 图 2 是实施例 8 的 3- 异丙基 -1， 3， 5- 环庚三烯 -7- 酮锌的 HPLC 图。 具体实施方式 ： 0020 以下实施例是对本发明的进一步说明， 而不是对本发明的限制。 0021 式 1， 其。
9、中 ： R1甲基、 正壬基、 正十七烷基 0022 实施例 1 ： 0023 结构式 ： 0024 0025 3- 异丙基 -1， 3， 5- 环庚三烯 -7- 酮 - 乙酯的制备 0026 制备过程 ： 0027 2- 羟基 -4- 异丙基 -2， 4， 6- 环庚三烯 -1- 酮 （1.64g,10mmol,1eq） 与三乙胺 （1 10eq） 溶于 100ml 二氯甲烷中， -10 25， 取乙酰氯 （0.8 5eq） 溶于约 10ml 二氯甲烷 中， 慢慢滴加到该混合溶液中， 然后保温搅拌 3 8 小时， TLC （展开剂石油醚 ： 乙酸乙酯 =5 ： 1） 显示原料基本反应完全， 有。
10、新点产生。加入约 100ml 水萃取分层， 有机相再用水洗涤一 次。有机相旋蒸出去溶剂， 得到棕红色油状物， HNMR 证实为目标产物 （3- 异丙基 -1， 3， 5- 环 庚三烯 -7- 酮 - 乙酯） ， 收率约 86%。不稳定， 放置过程中发生酯水解。 0028 3- 异 丙 基 -1， 3， 5- 环 庚 三 烯 -7- 酮 - 乙 酯 ： H(DMSO,500MHz)7.126 7.251(4H,m), 0029 2.812 2.866(1H,m),2.257(3H,s),1.162 1.176(6H,d). 说 明 书 CN 103755561 A 4 3/10 页 5 0030。
11、 实施例 2 ： 0031 结构式 ： 0032 0033 3- 异丙基 -1， 3， 5- 环庚三烯 -7- 酮 - 正癸酯的制备 0034 制备过程 ： 0035 2- 羟基 -4- 异丙基 -2， 4， 6- 环庚三烯 -1- 酮 （3.28g,20mmol,1eq）与三乙胺 （1 10eq）溶于 100ml 二氯甲烷中， -10 25， 取正癸酰氯 （0.8 5eq）溶于约 10ml 二氯甲烷中， 慢慢滴加到该混合溶液中， 然后保温搅拌 3 8 小时， TLC（展开剂石 油醚 ： 乙酸乙酯 =5 ： 1）显示有少量原料没有反应完全， 有新点产生。加入 100 毫升水洗 涤， 然后用饱和。
12、食盐水洗涤， TLC 显示原点处仍然有荧光。用稀的氢氧化钾水溶液洗涤， 原料点仍然洗不尽。加入约 8 克硅胶， 干法上样， 硅胶柱分离， 淋洗剂为石油醚 ： 乙酸乙 酯 ： 三乙胺 =5 ： 1 ： 0.02。得到纯净的产物 （3- 异丙基 -1， 3， 5- 环庚三烯 -7- 酮 - 正癸 酯） ， 纯度为 99.4%。见图 1 所示的 HPLC 图。3- 异丙基 -1， 3， 5- 环庚三烯 -7- 酮 - 正 癸酯 ： H(DMSO,500MHz)7.131 7.251(4H,m),2.824 2.878(1H,m),2.534 2.563(1H,m),1.590 1.649(2H,m)。
13、,1.174 1.371(18H,m),0.843 0.857(3H,m). 0036 实施例 3 ： 0037 结构式 ： 0038 0039 3- 异丙基 -1， 3， 5- 环庚三烯 -7- 酮 - 正十八酯的制备 0040 制备过程 ： 0041 2- 羟基 -4- 异丙基 -2， 4， 6- 环庚三烯 -1- 酮 （3.28g,20mmol,1eq） 与三乙胺 （1 10eq） 溶于 100ml 二氯甲烷中， -10 25， 取正十八碳酰氯 （0.8 5eq） 溶于约 30ml 二 氯甲烷中， 慢慢滴加到该混合溶液中， 然后保温搅拌 3 8 小时， TLC（展开剂石油醚 ： 乙酸 乙。
14、酯 =5 ： 1） 显示有少量原料没有反应完全， 有新点产生。加入 100 毫升水洗涤， 然后用饱和 食盐水洗涤， TLC显示原点处仍然有荧光。 用稀的氢氧化钾水溶液洗涤， 原料点仍然洗不尽。 加入约 8 克硅胶， 干法上样， 硅胶柱分离， 淋洗剂为石油醚 ： 乙酸乙酯 ： 三乙胺 =5 ： 1 ： 0.02。 得到纯净的产物 （3- 异丙基 -1， 3， 5- 环庚三烯 -7- 酮 - 正十八酯） ， 纯度为 99%。 说 明 书 CN 103755561 A 5 4/10 页 6 0042 3- 异 丙 基 -1， 3， 5- 环 庚 三 烯 -7- 酮 - 正 十 八 酯 ： H(CDC。
15、l3,500MHz)7.132( 1H,s),7.017 7.096(2H,m),6.922 6.942(1H,d),2.759 2.813(1H,m),2.596 2.626(2H,m),1.728 1.789(2H,m),1.400 1.428(2H,m),1.221 1.249(32H,m),0.856 0.883(3H,m). 0043 式 2， 其中 ： L 为钠、 钾、 钙、 镁、 锌 0044 实施例 4 ： 0045 结构式 ： 0046 0047 3- 异丙基 -1， 3， 5- 环庚三烯 -7- 酮钾的制备 0048 氢氧化钾 （8.4g,150mmol,1.5eq） 常温。
16、溶于 150ml 乙醇中， 2- 羟基 -4- 异丙基 -2， 4， 6- 环庚三烯 -1- 酮 （16.4g,100mmol,1eq）溶于其中， 常温反应 1 小时， 反应液澄清， 逐 渐冷却至室温， 没有固体析出， 低温冷却至 -20， 仍没有固体析出， 继续降温至 -30析出 黄色固体， 过滤， 固体迅速软化为液体。补加 8.2 克 2- 羟基 -4- 异丙基 -2， 4， 6- 环庚三 烯 -1- 酮， 室温搅拌 1 小时后旋蒸旋去媒溶， 然后放入烘箱中烘干得到产物 （3- 异丙基 -1， 3， 5- 环庚三烯 -7- 酮钾） 。HPLC 显示纯度为 99%。 0049 实施例 5 ：。
17、 0050 结构式 ： 0051 0052 3- 异丙基 -1， 3， 5- 环庚三烯 -7- 酮钠的制备 0053 氢氧化钠 （1 5eq） 常温溶于 100ml 乙醇中， 2- 羟基 -4- 异丙基 -2， 4， 6- 环庚三 烯-1-酮 （16.4g,100mmol,1eq） 溶于其中， 加热回流15小时， 逐渐有固体析出， 冷却至室 温搅拌两小时， 过滤， 滤饼用冷乙醇洗涤， 40水浴旋干溶剂得产物 （3- 异丙基 -1， 3， 5- 环 庚三烯 -7- 酮钠） 。HPLC 显示纯度为 99% 0054 实施例 6 ： 0055 结构式 ： 0056 说 明 书 CN 10375556。
18、1 A 6 5/10 页 7 0057 3- 异丙基 -1， 3， 5- 环庚三烯 -7- 酮钙的制备 0058 氢氧化钾 （15eq） 常温溶于300ml水中， 自然冷却至室温， 2-羟基-4-异丙基-2， 4， 6-环庚三烯-1-酮 （16.4g,100mmol,1eq） 溶于其中， 常温搅拌至完全溶解。 逐渐滴加80ml 氯化钙 （0.42eq） 的水溶液， 逐渐有固体析出， 并且变得粘稠， 常温搅拌23小时， 吸滤， 滤饼用水 200ml*2 洗涤， 水泵真空吸干水份， 然后 35烘箱中烘干得产物 （3- 异丙基 -1， 3， 5- 环庚三烯 -7- 酮钙） 。HPLC 显示纯度为 9。
19、9% 0059 实施例 7 ： 0060 结构式 ： 0061 0062 3- 异丙基 -1， 3， 5- 环庚三烯 -7- 酮镁的制备 0063 氢氧化钾 （15eq） 常温溶于300ml水中， 自然冷却至室温， 2-羟基-4-异丙基-2， 4， 6- 环庚三烯 -1- 酮 （16.4g,100mmol,1eq）溶于其中， 常温搅拌至完全溶解。逐渐滴加 80ml6 水 . 氯化镁 （0.4 2eq） 的水溶液， 逐渐有固体析出， 并且变得粘稠， 常温搅拌 2 3 小时， 吸滤， 滤饼用水200ml*2洗涤， 水泵真空吸干水份， 然后35烘箱中烘干得产物 （3-异 丙基 -1， 3， 5- 环。
20、庚三烯 -7- 酮镁） 。HPLC 显示纯度为 99% 0064 实施例 8 ： 0065 结构式 ： 0066 0067 3- 异丙基 -1， 3， 5- 环庚三烯 -7- 酮锌的制备 说 明 书 CN 103755561 A 7 6/10 页 8 0068 氢氧化钾 （15eq） 常温溶于300ml水中， 自然冷却至室温， 2-羟基-4-异丙基-2， 4， 6- 环庚三烯 -1- 酮 （16.4g,100mmol,1eq）溶于其中， 常温搅拌至完全溶解。逐渐滴加 100ml 硫酸锌 （0.4 2eq） 的水溶液， 逐渐有固体析出， 并且变得粘稠， 常温搅拌 2 3 小 时， 吸滤， 滤饼用。
21、水200ml*2洗涤， 水泵真空吸干水份， 然后35烘箱中烘干得产物 （3-异丙 基 -1， 3， 5- 环庚三烯 -7- 酮锌） 。HPLC 显示纯度为 99%， HPLC 图如图 2 所示。 0069 实施例 9 ： 0070 结构式 ： 0071 0072 3- 异丙基 -1， 3， 5- 环庚三烯 -7- 酮铜的制备 0073 氢氧化钾 （15eq） 常温溶于300ml水中， 自然冷却至室温， 2-羟基-4-异丙基-2， 4， 6- 环庚三烯 -1- 酮 （16.4g,100mmol,1eq）溶于其中， 常温搅拌至完全溶解。逐渐滴加 100ml 氯化铜 （0.4 2eq） 的水溶液， 。
22、逐渐有固体析出， 并且变得粘稠， 常温搅拌 2 3 小 时， 吸滤， 滤饼用水200ml*2洗涤， 水泵真空吸干水份， 然后35烘箱中烘干得产物 （3-异丙 基 -1， 3， 5- 环庚三烯 -7- 酮铜） 。HPLC 显示纯度为 99% 0074 实施例 10 ： 0075 结构式 ： 0076 0077 3- 异丙基 -1， 3， 5- 环庚三烯 -7- 酮锰的制备 0078 氢氧化钾 （15eq） 常温溶于300ml水中， 自然冷却至室温， 2-羟基-4-异丙基-2， 4， 6- 环庚三烯 -1- 酮 （16.4g,100mmol,1eq）溶于其中， 常温搅拌至完全溶解。逐渐滴加 100。
23、ml 氯化锰 （0.4 2eq） 的水溶液， 逐渐有固体析出， 并且变得粘稠， 常温搅拌 2 3 小 时， 吸滤， 滤饼用水200ml*2洗涤， 水泵真空吸干水份， 然后35烘箱中烘干得产物 （3-异丙 基 -1， 3， 5- 环庚三烯 -7- 酮锰） 。HPLC 显示纯度为 99% 0079 实施例 11 ： 扁柏酚酯的热稳定性试验 0080 将前述实施例制备的扁柏酚的不同酯用玉米芯粉配制为终浓度质量分数 2% 的预 混剂。 分别称取待测试样品 （预混剂） 于坩埚中， 于100烘箱中处理20小时后， 称取1.0g样 说 明 书 CN 103755561 A 8 7/10 页 9 品 （每个样。
24、平行制备 3 份） 于具塞锥形瓶中加乙醇 50ml， 超声提取 10min， 用滤纸过滤， 滤液 转移至 50ml 容量瓶中， 乙醇定容至刻度， 摇匀， 取滤液经 0.45m 微孔滤膜过滤， 进行 HPLC 分析。 0081 色谱条件 0082 色谱柱 ： Wondasil C18（250mm*4.6mm， 5m） 柱 ； 0083 流动相 ： 100% 乙腈或甲醇 -40mM 乙酸铵 （乙酸调 pH 至 4） （65:35， v/v） ； 0084 检测波长 ： 220nm ； 柱温 25 ； 进样量 ： 20L ； 流速 1.0 或 0.8ml/min。 0085 稳定性结果见表 1， 结。
25、果显扁柏酚十碳脂肪酸酯和扁柏酚十八碳脂肪酸酯的热稳 定性提高。 0086 表 1 ： 不同扁柏酚酯的热稳定性比较结果 0087 化合物起始含量 （%）100加热 20h 后含量 （%） 扁柏酚2.00.1 扁柏酚乙酯2.00 扁柏酚十碳脂肪酸酯2.00.65 扁柏酚十八碳脂肪酸酯2.01.21 0088 实施例 12 ： 扁柏酚盐的热稳定性试验 0089 将前述实施例制备的扁柏酚的不同金属盐用玉米芯粉配制为终浓度质量分数 2% 的预混剂。分别称取待测试样品 （预混剂） 于坩埚中， 于 100烘箱中处理不同时间后， 称取 1.0g 样品 （每个样平行制备 3 份） 于具塞锥形瓶中加乙醇 50ml。
26、， 超声提取 10min， 用滤纸过 滤， 滤液转移至50ml容量瓶中， 乙醇定容至刻度， 摇匀， 取滤液经0.45m微孔滤膜过滤， 进 行 HPLC 分析。 0090 色谱条件 0091 色谱柱 ： Wondasil C18（250mm*4.6mm， 5m） 柱 ； 0092 流动相 ： 甲醇 - 水 （65:35， v/v） 或甲醇 -0.2% 乙酸水溶液 （65:35， v/v） 或甲醇 -2% 磷酸水溶液 （65:35， v/v） ； 0093 检测波长 ： 220nm ； 柱温 25 ； 进样量 ： 20L ； 流速 0.8ml/min。 0094 稳定性结果见表 2， 结果显扁柏酚。
27、的各种金属盐均提高了热稳定性， 其中镁、 铜和 锰盐改善最显著。 0095 表 2 ： 扁柏酚不同金属盐的热稳定性试验结果 0096 说 明 书 CN 103755561 A 9 8/10 页 10 0097 实施例 13 ： 扁柏酚盐及酯的光稳定性试验 0098 将前述实施例制备的扁柏酚酯或盐用玉米芯粉配制为终浓度质量分数 2% 的预混 剂。取待测试样品 （预混剂） 平铺药物稳定性试验箱内， 置光照强度 4500-5000 勒克斯之下 处理事 5 天之后， 称取 1.0g 样品 （每个样平行制备 3 份） 于具塞锥形瓶中加乙醇 50ml， 超 声提取 10min， 用滤纸过滤， 滤液转移至 。
28、50ml 容量瓶中， 乙醇定容至刻度， 摇匀， 取滤液经 0.45m 微孔滤膜过滤， 进行 HPLC 分析。 0099 色谱条件 0100 色谱柱 ： Wondasil C18（250mm*4.6mm， 5m） 柱 ； 0101 流动相 ： 甲醇 - 水 （65:35， v/v） 或甲醇 -0.2% 乙酸水溶液 （65:35， v/v） 或甲醇 -2% 磷酸水溶液 （65:35， v/v） ； 0102 检测波长 ： 220nm ； 柱温 25 ； 进样量 ： 20L ； 流速 0.8ml/min。 0103 稳定性结果见表 3， 结果显示扁柏酚盐的光稳定性均提高， 其中以锰、 铜、 锌和镁盐。
29、 的光稳定性提高最明显。 0104 表 3 ： 扁柏酚酯或盐的光稳定性试验结果 0105 化合物起始含量 (%)强光照 5 天后剩余含量 (%) 扁柏酚2.00 扁柏酚钠2.00.19 扁柏酚钾2.00.08 扁柏酚钙2.01.2 扁柏酚镁2.01.57 说 明 书 CN 103755561 A 10 9/10 页 11 扁柏酚铜2.01.87 扁柏酚锰2.01.87 扁柏酚锌2.01.62 扁柏酚乙酯2.00 扁柏酚十碳脂肪酸酯2.00 扁柏酚十八碳脂肪酸酯2.00 0106 实施例 14 ： 扁柏酚镁盐在肉鸡饲料中的应用 0107 600 羽 1 日龄快大黄羽肉鸡 （母苗） 按表 4 随机。
30、分成 6 个处理组， 每组 100 羽， 并 分别在每组饲料中添加不同剂量的扁柏酚盐或酯。试验期笼养， 自由采食和饮水。试验期 共30天， 结果显示试验期-扁柏酚盐试验组的试验鸡的增重和料肉比方面均有显著改善 （表 5） 。 0108 表 4 扁柏酚盐或酯在肉鸡料中应用的试验分组设计 0109 0110 0111 * ： 所添加剂量是以 - 扁柏酚的含量计。 0112 表 5 扁柏酚盐或酯在肉鸡料中应用的试验结果 说 明 书 CN 103755561 A 11 10/10 页 12 0113 说 明 书 CN 103755561 A 12 1/1 页 13 图 1 图 2 说 明 书 附 图 CN 103755561 A 13 。