一种从红莲外皮提取原花青素的方法技术领域
本发明属于天然产物加工科学领域，特别是一种从红莲外皮提取原花青素的方法。
背景技术
聚黄烷醇类多酚，又称原花青素，它包括单体原花青素和聚合体原花青素。通常将聚合度较低的二-四聚体称低聚原花青素或寡聚原花青素（oligomericproanthocyanidins，简称OPC），五聚体及以上则称为高聚原花青素或多聚原花青素（polymericproanthocyanidins，简称PPC）。原花青素（proanthocyanidin，PC）是很有利用价值的天然产物。随着对植物原花青素的结构、性质、生理活性及其应用价值的深入研究，它所具有的清除自由基、抗氧化、抗病毒、抗细菌和抑制肿瘤等多种生物活性为大量实验所证实。因此，从不同植物中提取分离原花青素，并进行精细化利用的研究引起了人们广泛的关注。
莲子(SemenNelumbinis)是睡莲科水生草本植物莲的成熟种子，具有很高的营养价值和保健价值，是一种滋补元气的珍品，在中医处方上，莲子通常称为莲肉。古人说，吃莲子能返老还童、长生不老。莲子的加工需要经过干燥、分级、去壳、除皮、去心等工序。在除皮过程中产生的红莲外皮(约占莲子重量的15%)，由于味涩，被丢弃，造成了极大的浪费，开发和利用红莲外皮已成为保障莲子产业健康发展的重要课题。红莲外皮含有较丰富的原花青素，原花青素具有的多种生物药理活性且无毒性，是一种极具开发潜力的天然活性物质。本发明以红莲外皮为原料，提取红莲外皮原花青素，对于提高莲子加工的附加值，促进莲子产业的发展具有重要意义，这不但在医药和食品行业有广阔的应用前景，而且也为当地丰富的莲子的资源开发和利用提供一条新途径，提高莲子的利用率和经济效益。
发明内容
本发明的目的是克服现有提取方法的不足，提出一种利用酶制剂结合溶剂从红莲外皮中提取原花青素的方法。此方法所得到的原花青素产品可用于医药保健及化妆品等行业。
本发明的一种从红莲外皮提取原花青素的方法，原料为红莲外皮，试剂有果胶酶(30000IU)，纤维素酶(15000IU)，95%乙醇（食品级），柠檬酸（食品级），磷酸氢二钠（食品级）。
本发明的一种从红莲外皮提取原花青素的方法，由以下步骤组成：
(1)备料：将红莲外皮进行恒温减压干燥，粉碎称量后，40目过筛，得到原料干粉备用；
(2)配制缓冲溶液：将0.1mol/L柠檬酸溶液与0.2mol/L磷酸氢二钠溶液按1：1.5～2的体积比混合，再加水稀释2倍，配制成缓冲溶液：
(3)配制酶液：混合缓冲溶液、果胶酶和纤维素酶，并充分搅拌使其完全溶解，从而形成均匀的酶液；缓冲溶液的用量按原料干粉重量(kg)：缓冲溶液体积(L)=1：15～30的比例计算果胶酶和纤维素酶的用量为每L的缓冲溶液加入0.1～0:3g果胶酶与0.1～0.3g纤维素酶；
(4)投料：按原料干粉重量(kg)：缓冲溶液体积(L)=1：15～30的比例，将原料干粉加入酶液中；
(5)酶解：将原料干粉与酶液搅拌均匀后，在50～55℃的恒温水浴锅内避光保温，每30min搅动一次，酶解3-4h，生成酶解液和残渣的混合物；
(6)提取：按每kg原料干粉加入15～30L的75～95%乙醇的方法，将75～95%乙醇加入上述酶解液和残渣混合物中，在60～65℃条件下提取2～3h，经过滤，得到提取液；
(7)纯化：采用AB-8树脂对提取液纯化，上样流速1～3mL/min、解吸流速0.5～1..5mL/min、解吸剂体积分数45～55%，得洗脱液；
(8)冻干：将洗脱液于冷冻真空干燥后，制得原花青素精制品粉末，冷藏保存。
本发明的一种从红莲外皮提取原花青素的方法，以红莲外皮为主要原料，采用酶制剂结合溶剂提取原花青素，其优点是原青花素产品安全性好、质量佳，原青花素提取率较醇提取法高30～40%，酶制剂的用量少，而且工艺简单，操作方便，效率高，适合工业化生产。使用果胶酶和纤维素酶可以破坏植物原料中以纤维素为主的细胞壁结构及其细胞间相连的果胶物质，使提取传质阻力减小，使内容物原青花素成分易于溶出。乙醇溶液作为醇溶性原青花素的提取溶剂。柠檬酸·磷酸缓冲溶液起到调节溶液pH值的作用。按本发明的方法配制的缓冲溶液，经检测其pH=6，可以保证酶制剂作用的最佳效果。纯化采用AB-8树脂，最佳工艺为上样流速2mL/min、解吸流速1mL/min、解吸剂体积分数50%，在此条件下，得到红莲外皮原花青素精制品并通过原花青素反应与RP-HPLC-ESI-MS定性分析，证实该精制品中含有的原花青素3个单体、4个二聚体和2个四聚体,3个单体分别为桔儿茶素、儿茶素、表儿茶素,4个二聚体和2个四聚体都是由儿茶素或表儿茶素单体聚合而成，原花青素纯度为95.4%。
具体实施方式
为了充分公开本发明的一种从红莲外皮提取原花青素的方法，下面结合实施例加以说明。
实施例：一种从红莲外皮提取原花青素的方法
取采收期的红莲外皮为原料，提取方法包括以下步骤：
(l)置新鲜的红莲外皮于65℃烘箱中烘干，用高速组织捣碎机粉碎，40日过筛，得到原料干粉备用。
(2)取0.1mol/L柠檬酸溶液160ml，0.2mol/L磷酸氢二钠溶液320ml，混合并稀释定容至1000ml，配制成缓冲溶液。
(3)取250ml的缓冲溶液，加入0.05g果胶酶与0.075g纤维素酶，搅拌使其完全溶解，形成均匀的酶液。
(4)在上述的酶液中加入10g的原料干粉。
(5)搅拌均匀后于50℃的恒温水浴锅内避光保温，每30min搅动一次，酶解3h，生成酶解液和残渣的混合物。
(6)在酶解液和残渣的混合物中加入250m195%乙醇，于60℃条件下提取2h，经过滤得提取液。
(7)采用AB-8树脂对提取液纯化，上样流速2mL/min、解吸流速2mL/min、解吸剂体积分数50%，得洗脱液；
(8)将洗脱液于冷冻真空干燥后，制得原花青素精制品粉末。
上述得到的制得原花青素精制品通过原花青素反应与RP-HPLC-ESI-MS定性分析，证实该精制品中含有的原花青素3个单体、4个二聚体和2个四聚体,3个单体分别为桔儿茶素、儿茶素、表儿茶素,4个二聚体和2个四聚体都是由儿茶素或表儿茶素单体聚合而成，原花青素纯度为95.4%。