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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 (10)授权公告号 (45)授权公告日 (21)申请号 201610230255.6 (22)申请日 2016.04.14 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 105801392 A (43)申请公布日 2016.07.27 (73)专利权人 重庆大学 地址 400044 重庆市沙坪坝区沙正街174号 (72)发明人 穆小静李泉丹陈刚吴丁丁 祖丽皮艳.阿布力米特 (74)专利代理机构 重庆博凯知识产权代理有限 公司 50212 代理人 李明张先芸 (51)Int.Cl. C07C 45/78(2006.01) C07C 4。
2、5/84(2006.01) C07C 45/85(2006.01) C07C 49/84(2006.01) 审查员 彭英桂 (54)发明名称 一种丹皮酚的提取方法 (57)摘要 本发明提供一种丹皮酚的提取方法， 所述方 法采用水蒸气蒸馏-碱溶酸沉结合方法对丹皮酚 进行提取， 以牡丹皮、 全株徐长卿或徐长卿根为 原料， 将原料粉碎并水提1023h后进行水蒸气 蒸馏， 待馏出液质量为原料的2.53倍时停止蒸 馏， 将馏出液冷却过滤得到产物A， 继而调节水蒸 气蒸馏后烧瓶内的原料和残留液pH至1214进行 碱溶， 碱溶后调节溶液pH至57进行酸沉并经冷 却过滤， 得到产物B。 本发明方法能够高效地提。
3、取 丹皮酚， 提取率高达95.3%， 得到的丹皮酚纯度高 达98.8%， 且本发明方法没有采用有机溶剂， 避免 了环境污染， 更具有环保性。 权利要求书1页 说明书5页 附图1页 CN 105801392 B 2017.11.24 CN 105801392 B 1.一种丹皮酚的提取方法， 其特征在于， 包括如下步骤： 1） 以牡丹皮、 全株徐长卿或徐长卿根为原料， 将所述原料粉碎并加入水中于3040下 浸泡提取1023 h后； 再于100120 KHz、 5080W下超声处理1030min； 其中， 所述原料与水 的质量体积比为1 g:610 mL； 2） 步骤1） 浸泡完成后， 将浸提液和原。
4、料一并转入烧瓶中， 搭建好水蒸气蒸馏装置， 开始 进行水蒸气蒸馏， 收集馏出液， 待所述馏出液的质量为所述原料质量的2.53倍时停止蒸 馏， 将所述馏出液于210下冷却2430 h后过滤， 收集滤渣得到水蒸气蒸馏丹皮酚产物A； 3） 向步骤2） 水蒸气蒸馏后烧瓶内的原料和残留液中加入碱， 调节溶液pH至1214进行 碱提23 h后， 对碱提液进行过滤， 收集滤液， 用酸调节所述滤液的pH至57， 将调节pH后的 滤液于210下冷却2430 h后过滤， 收集滤渣得到碱溶酸沉丹皮酚产物B； 4） 收集步骤3） 对碱提液过滤后得到的残渣， 向所述残渣中加入水浸泡25 h后过滤， 收 集并调节滤液的p。
5、H至57， 将调节pH后的滤液于210下冷却2430h后过滤， 收集滤渣得到 丹皮酚产物C； 其中， 所述残渣与水的质量体积比为1g:0.61mL。 2.根据权利要求1所述丹皮酚的提取方法， 其特征在于， 步骤1） 中将所述原料粉碎至10 12目。 3. 根据权利要求1所述丹皮酚的提取方法， 其特征在于， 步骤1） 中所述原料与水的质 量体积比为1 g:6 mL。 4. 根据权利要求1所述丹皮酚的提取方法， 其特征在于， 于100 KHz、 50 W的超声条件 下超声处理20 min。 5.根据权利要求1所述丹皮酚的提取方法， 其特征在于， 步骤3） 中调节溶液pH至13进行 碱提。 6.根据。
6、权利要求1所述丹皮酚的提取方法， 其特征在于， 步骤3） 中用酸调节所述滤液的 pH至5后进行酸沉。 权利要求书 1/1 页 2 CN 105801392 B 2 一种丹皮酚的提取方法 技术领域 0001 本发明属于中草药中提取活性成分及应用领域， 具体涉及一种丹皮酚的提取方 法。 背景技术 0002 丹皮酚是主要从毛茛科芍药属植物牡丹的根皮或摩罗科植物徐长卿干燥根、 全草 中提取分离出来的活性成分。 已发现丹皮酚多种药用功效， 主要的药理作用有镇静、 催眠、 抗氧化、 降血压、 抗菌、 抗炎等作用， 丹皮酚可以将皮肤中沉积的色素还原褪色从而使得皮 肤增白， 广泛应用于化妆品、 牙膏、 含漱液。
7、、 牙粉中。 0003 牡丹皮或徐长卿中丹皮酚的主要提取方法有以下几种： 1、 有机溶剂浸出法。 康业 斌、 商鸿生等在 溶剂法提取丹皮酚的工艺优化 中提出氯仿、 四氯化碳、 丙酮、 乙醇、 乙酸乙 酯提取丹皮酚的量依次降低， 且所含其它杂质的量依次升高， 其中以四氯化碳为溶剂， 2次 提取丹皮酚的总量占3次提取总量的96.9%。 2、 水蒸气蒸馏法。 高丽丽、 朱文娟、 罗晓健在 水 蒸气蒸馏法提取丹皮酚工艺研究 中连续收集2次馏出液， 第一次至溜出液澄清， 第二次继 续收集30 min， 两次共收集丹皮酚的量占88.1%； 3、 CO2超临界流体萃取法。 王立红， 周莉丽， 雷雪等在 超临。
8、界CO2萃取徐长卿中丹皮酚的工艺 中提出以超临界CO2萃取丹皮酚， 以紫外 分光光度法测定丹皮酚含量， 结果显示提取效率增高； 另有专利CN201410021621.8， 申请日 2014.01.17 一种利用CO2超临界萃取技术提取丹皮酚的方法 中也提到超临界萃取方法提 取丹皮酚。 0004 上述目前丹皮酚的几种提取法中， 溶剂法中使用氯仿、 四氯化碳毒性大， 污染重， 不适合工业化生产， 虽然乙醇毒性弱， 但使用乙醇提取的效率稍低， 即使采取多提取几次的 方法解决， 也可能造成提取的杂质量也相应增加的问题， 并且仍然使用有机溶剂， 环保性 差。 仅采用水蒸气蒸馏法经2次提取的提取率为88.。
9、1%， 并且第二阶段水蒸气蒸馏的30 min 效率极低， 能耗成本相应提高， 也存在一定问题。 而CO2超临界萃取技术提取虽可以将药材 中的有机物更好带出来， 但是其它有机杂质含量也高， 选择性差。 发明内容 0005 针对现有技术存在的上述不足， 本发明要解决的技术问题是： 如何提供一种丹皮 酚的提取方法， 使其提取效率高、 提取得到的丹皮酚纯度高， 且具有安全环保、 成本低的特 点。 0006 为了解决上述技术问题， 本发明采用如下技术方案： 一种丹皮酚的提取方法， 包括 如下步骤： 0007 1） 以牡丹皮、 全株徐长卿或徐长卿根为原料， 将所述原料粉碎并加入水中于3040 下浸泡提取1。
10、023 h； 其中， 所述原料与水的质量体积比为1 g:610 mL； 所述牡丹皮、 全 株徐长卿或徐长卿根均为干品； 0008 2） 步骤1） 浸泡完成后， 将浸提液和原料一并转入烧瓶中， 搭建好水蒸气蒸馏装置， 说明书 1/5 页 3 CN 105801392 B 3 开始进行水蒸气蒸馏， 收集馏出液， 待所述馏出液的质量为所述原料质量的2.53倍时停止 蒸馏， 将所述馏出液于210下冷却2430 h后过滤， 收集滤渣得到水蒸气蒸馏丹皮酚产物 A； 0009 3） 向步骤2） 水蒸气蒸馏后烧瓶内的原料和残留液中加入碱， 调节溶液pH至1214 进行碱提23 h后， 对碱提液进行过滤， 收集。
11、滤液， 用酸调节所述滤液的pH至57， 将调节pH 后的滤液于210下冷却2430 h后过滤， 收集滤渣得到碱溶酸沉丹皮酚产物B。 0010 相比现有技术， 本发明具有如下有益效果： 0011 1、 本发明针对现有技术中仅采用水蒸气蒸馏法提取丹皮酚提取总效率不高、 提取 率低下， 而采用有机溶剂法又存在提取成本高、 对环境造成危害等不足， 提出一种采用水蒸 气蒸馏和碱溶酸沉相结合提取丹皮酚的方法。 本发明先采用水蒸气蒸馏使丹皮酚和水可以 形成共沸物馏出， 待水蒸气蒸馏效率下降时， 转为碱溶酸沉方法对丹皮酚进行二次提取， 通 过这样的提取方式， 保证馏分与残渣中的丹皮酚能得到进一步提取回收， 丹。
12、皮酚亦更容易 从其他组分中分离出来。 本发明方法对丹皮酚的提取效率相比于仅采用水蒸气蒸馏法的提 取效率得到很大的提高， 能达到95.3%， 提取效果好， 得到的丹皮酚纯度98.8%。 0012 2、 本发明方法通过研究发现， 当采用本发明试验参数对丹皮酚进行提取时， 可以 使牡丹皮或徐长卿中的丹皮酚较大限度地溶出， 提取率高达95.3%， 且采用本发明水蒸气蒸 馏-碱溶酸沉结合方法进行提取， 随着水蒸气蒸馏进行， 未蒸出的丹皮酚浓度显著降低， 并 由于药材的纤维组织吸附丹皮酚， 从而使提取效率骤然降低； 而除了碱溶酸沉的原理与水 蒸气蒸馏不同外， 碱溶的过程破坏了纤维组织， 从而使丹皮酚更易从。
13、药材内部溶出， 进一步 保证了提取率， 且本发明不会对丹皮酚的性质带来不良影响， 提取得到的丹皮酚品质优良。 0013 3、 本发明采用超声波辅助提取方法使得丹皮酚的溶出更加充分， 且采用超声波辅 助提取有利于缩短浸提时间， 使提取效率提高， 更适用于丹皮酚的大批量提取中， 更加快 捷。 0014 4、 本发明方法相比现有技术仅采用水蒸气蒸馏的方法提取效率更高， 能耗更低； 现有技术中采用有机溶剂进行丹皮酚提取时， 由于丹皮酚易溶于有机溶剂， 故在除去有机 溶剂时会使部分丹皮酚随有机溶剂一起被除去， 降低了丹皮酚的提取率， 而本发明采用水 作为溶剂， 因丹皮酚在冷水中不溶， 所以相比现有技术有。
14、机溶剂提取方法， 本发明进一步减 少了丹皮酚在溶剂中的损失， 保证了丹皮酚的提取率。 综上可见， 本发明相比现有技术提取 方法成本更低， 更具有环境友好性， 符合循环经济的发展要求， 且提取率更高， 得到的丹皮 酚成品纯度高， 因此更具有可推广性， 应用前景好。 附图说明 0015 图1为本发明水蒸气蒸馏丹皮酚产物A的HPLC谱图； 0016 图2为本发明碱溶酸沉丹皮酚产物B的HPLC谱图。 具体实施方式 0017 下面结合具体实施例和说明书附图对本发明作进一步详细说明。 本实施案例在以 本发明技术为前提下进行实施， 现给出详细的实施方式和具体的操作过程， 来说明本发明 具有创造性， 但本发明。
15、的保护范围不限于以下的实施例。 说明书 2/5 页 4 CN 105801392 B 4 0018 下述实施例中采用2 mol/L的盐酸溶液和1 mol/L的氢氧化钠溶液进行pH的调节。 0019 实施例1 一种丹皮酚的提取方法， 包括如下步骤： 0020 1） 将牡丹皮干品打碎成粉末， 粉末呈灰白色， 过10#筛 （粒径小于2 mm） ， 用作原料； 准确称取牡丹皮粉末25.0 g， 置于250 mL圆底烧瓶中， 加入150 mL蒸馏水进行温浸， 温浸时 间为19 h， 为了使牡丹皮中物质更多地溶于蒸馏水中， 浸泡后将其置于超声清洗仪 （100 KHz、 50 W） 中超声20 min。 0。
16、021 2） 步骤1） 浸泡完成后， 将浸提液和原料一并转入烧瓶中， 搭建好水蒸气蒸馏装置， 开始进行水蒸气蒸馏， 收集馏出液， 待冷凝管中蒸馏液的浑浊程度明显下降， 所述原料与馏 出液的质量体积比为1:2.5时停止蒸馏， 称取馏出液的质量为63.564.5g之间 （馏出物质量 是牡丹皮粉末原料质量的2.52.6倍） ， 将所述馏出液于冰箱中 （46） 冷却24 h后过滤， 得 到的滤渣为水蒸气蒸馏产物A； 0022 3） 趁热用玻璃棒边搅拌边向步骤2） 水蒸气蒸馏后烧瓶内的原料和残留液中加入 NaOH溶液， 调节溶液pH至13进行碱提2 h， 冷却至室温， 减压过滤， 去除牡丹皮残渣及不溶性。
17、 物质， 收集滤液， 用盐酸调节所述滤液的pH至5， 冷至室温， 于46下冷却24 h后过滤， 收集 滤渣， 用冷水洗涤滤渣， 得碱溶酸沉产物B （淡黄色） ； 0023 4） 收集步骤3） 对碱提液过滤得到的滤渣， 向所述滤渣中加入30 mL蒸馏水 （所述滤 渣与水的质量体积比为3 g:2 mL） 浸泡2h后抽滤， 除去丹皮残渣及不溶性物质， 收集并调节 滤液的pH至5， 冷至室温， 并于46冷却24h后过滤， 收集滤渣得到丹皮酚产物C， 微量冷水 洗涤产物C， 称量重量为0.0251 g。 0024 通过计算， 经两步提取后， 得丹皮酚总重量为0.3493 g， 占丹皮粉末总重量的 1.4。
18、0%， 提取率高。 进一步计算水蒸汽蒸馏所得丹皮酚占提取总量的67.9%； 第二步提取量占 提取总量的25.4%， 前两步所得丹皮酚占总提取量的93.3%， 第三步得总重量的6.7%。 由此可 见， 采用本发明两步提取的方法基本能提取全牡丹皮中的丹皮酚， 提取效率高。 0025 对水蒸汽蒸馏法提取丹皮酚的过程中可能含有的杂质进行分析。 取0.2-0.3 mL水 蒸气蒸馏馏出液， 加入乙酸乙酯+石油醚 （体积比1 :5） 混合溶液振摇， 待静止分层后， 以毛 细管吸取少量上层有机相溶液进行薄层色谱分析 （TLC） ， 硅胶薄层板， 以乙酸乙酯+石油醚 （体积比1:5） 为展开剂， 展开， 晾干，。
19、 在UV灯下254 nm检视斑点， 分析2次平行测定的结果与 对照品丹皮酚的TLC结果， 结果显示馏出液主斑点的Rf值为0.64， 馏出液样品的主斑点Rf值 与对照品一致， 说明水蒸气蒸馏的馏出液中成分即为丹皮酚。 0026 对水蒸气蒸馏产物A的纯度进行HPLC分析， 取少量水蒸气蒸馏产物A于西林瓶中， 用2 mL甲醇进行溶解， 溶解后的溶液经0.45 m有机相滤膜过滤后， 取20 L注射入色谱柱， 以高效液相色谱分析色谱条件： ODS柱 （4.6250 mm, 5 m)； 甲醇+H2O （体积比80:20） 为流动相， 流动相流速1.0 mL/min； 紫外检测器， 检测波长为274 nm。。
20、 样品色谱图如图1所 示， 由图1可见保留时间 （t） 在5 min以内的峰是因为样品的溶剂与流动相不匹配产生的溶 剂峰， t=49.7 min的峰为丹皮酚， t=26.4 min的峰为提取物中含有的杂质峰， 分析图1可见， 本发明水蒸气蒸馏产物A中杂质含量少， 纯度高。 0027 取少量碱溶酸沉产物B用甲醇溶解， 用毛细管取少量溶液进行TLC薄层分析乙酸 乙酯+石油醚 （体积比1:5） 为展开剂， 结果显示碱溶酸沉产物B即为丹皮酚， 仅含有微量杂 质， 纯度高。 对碱溶酸沉产物B进行HPLC分析， 结果如图2所示， 由图2可以看出仅在保留时间 说明书 3/5 页 5 CN 105801392。
21、 B 5 （5-15 min之间） 有微量杂质峰 （由于极性较强的易溶于水的其它组分被提取） ， 并没有出现 其他杂质峰， 表明碱溶酸沉产物B的纯度高， 杂质含量少。 0028 实施例2 一种丹皮酚的提取方法， 包括如下步骤： 0029 1） 将全株徐长卿干品打碎成粉末， 过10#筛 （粒径小于2 mm） ， 用作原料； 准确称取 全株徐长卿粉末25.0 g， 置于250 mL圆底烧瓶中， 加入250 mL蒸馏水进行温浸， 温浸时间为 15 h， 为了使全株徐长卿中物质更多地溶于溶剂水中， 浸泡后将其置于超声清洗仪 （100 KHz、 50 W） 中超声10 min。 0030 2） 步骤1）。
22、 浸泡完成后， 将浸提液和原料一并转入烧瓶中， 搭建好水蒸气蒸馏装置， 开始进行水蒸气蒸馏， 待冷凝管中蒸馏液的浑浊程度明显下降， 馏出物质量是全株徐长卿 粉末原料质量的2.5倍时停止蒸馏， 将所述馏出液于冰箱中 （46） 冷却24 h后过滤， 得到 的滤渣为水蒸气蒸馏产物A； 0031 3） 趁热用玻璃棒边搅拌边向步骤2） 水蒸气蒸馏后烧瓶内的原料和残留液中加入 NaOH溶液， 调节溶液pH至13进行碱提2.5 h， 冷却至室温， 减压过滤， 去除全株徐长卿残渣及 不溶性物质， 收集滤液， 用盐酸调节所述滤液的pH至5， 冷至室温， 于46下冷却24 h后过 滤， 收集滤渣， 用冷水洗涤滤渣。
23、， 得碱溶酸沉产物B （淡黄色） ； 0032 4） 收集步骤3） 对碱提液过滤得到的滤渣， 向所述滤渣中加入30 mL蒸馏水 （所述滤 渣与水的质量体积比为6 g:5 mL） 浸泡2.5h后抽滤， 除去全株徐长卿残渣及不溶性物质， 收 集并调节滤液的pH至5， 冷至室温， 并于46冷却24h后过滤， 收集滤渣得到丹皮酚产物C。 0033 通过计算， 经两步提取后， 得丹皮酚总重量为0.3407g， 占全株徐长卿粉末总重量 的1.36%， 提取率高。 进一步计算水蒸汽蒸馏所得丹皮酚占提取总量的65.2%； 第二步提取量 占提取总量的22.6%， 前两步所得丹皮酚占总提取量的87.8%， 第三步。
24、得总重量的12.2%。 0034 实施例3 一种丹皮酚的提取方法， 包括如下步骤： 0035 1） 将徐长卿根干品打碎成粉末， 过10#筛 （粒径小于2 mm） ， 用作原料； 准确称取徐 长卿根粉末25.0 g， 置于250 mL圆底烧瓶中， 加入200 mL蒸馏水进行温浸， 温浸时间为10 h， 为了使徐长卿根中物质更多地溶于溶剂水中， 浸泡后将其置于超声清洗仪 （100 KHz、 50 W） 中超声30 min。 0036 2） 步骤1） 浸泡完成后， 将浸提液和原料一并转入烧瓶中， 搭建好水蒸气蒸馏装置， 开始进行水蒸气蒸馏， 待冷凝管中蒸馏液的浑浊程度明显下降， 馏出物质量是徐长卿根。
25、粉 末原料质量的3倍时停止蒸馏， 将所述馏出液于冰箱中 （46） 冷却24 h后过滤， 得到的滤 渣为水蒸气蒸馏产物A； 0037 3） 趁热用玻璃棒边搅拌边向步骤2） 水蒸气蒸馏后烧瓶内的原料和残留液中加入 NaOH溶液， 调节溶液pH至13进行碱提3h， 冷却至室温， 减压过滤， 去除徐长卿根残渣及不溶 性物质， 收集滤液， 用盐酸调节所述滤液的pH至5， 冷至室温， 于46下冷却24 h后过滤， 收 集滤渣， 用冷水洗涤滤渣， 得碱溶酸沉产物B （淡黄色） ； 0038 4） 收集步骤3） 对碱提液过滤得到的滤渣， 向所述滤渣中加入30mL蒸馏水 （所述滤 渣与水的质量体积比为7 g： 。
26、5 mL） 浸泡3h后抽滤， 除去徐长卿根残渣及不溶性物质， 收集并 调节滤液的pH至5， 冷至室温， 并于46冷却24h后过滤， 收集滤渣得到丹皮酚产物C。 0039 通过计算， 经两步提取后， 得丹皮酚总重量为0.3391g， 占徐长卿根粉末总重量的 1.35%， 提取率高。 进一步计算水蒸汽蒸馏所得丹皮酚占提取总量的67.2%； 第二步提取量占 说明书 4/5 页 6 CN 105801392 B 6 提取总量的24.5%， 前两步所得丹皮酚占总提取量的91.7%， 第三步得总重量的8.3%。 0040 最后说明的是， 以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制， 尽管参照较 佳实施例对本发明进行了详细说明， 本领域的普通技术人员应当理解， 可以对本发明的技 术方案进行修改或者等同替换， 而不脱离本发明技术方案的宗旨和范围， 其均应涵盖在本 发明的权利要求范围当中。 说明书 5/5 页 7 CN 105801392 B 7 图1 图2 说明书附图 1/1 页 8 CN 105801392 B 8 。