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1、(10)授权公告号 CN 103044218 B (45)授权公告日 2014.06.04 CN 103044218 B (21)申请号 201310027833.2 (22)申请日 2013.01.25 C07C 47/277(2006.01) C07C 45/78(2006.01) C07C 45/79(2006.01) C07C 45/80(2006.01) (73)专利权人 南通大学 地址 226019 江苏省南通市啬园路 9 号 (72)发明人 谭湘陵 钱晓伟 潘丹岷 羌利民 (74)专利代理机构 南京知识律师事务所 32207 代理人 汪旭东 (54) 发明名称 ( 反式 )-3-。
2、(3- 羟基 -4- 甲氧基苯基 ) 丙烯 醛的制备方法 (57) 摘要 本 发 明 提 供 了 一 种 ( 反 式 )-3-(3- 羟 基-4-甲氧基苯基)丙烯醛的制备方法， 包括如下 步骤 ：（1） 以杜仲为提取原料， 用醇与水的混合溶 液进行提取 ；（2） 将步骤 （1） 的提取液经中性氧化 铝层析柱除去色素， 收集洗脱液， 浓缩 ；（3） 使用 有机溶剂萃取步骤 （2） 得到的洗脱液 ；（4） 将步骤 （3） 得到的萃取物依次使用制备型 HPLC 和半制备 型HPLC进行分离得到( 反式 )-3-(3- 羟基-4- 甲 氧基苯基 ) 丙烯醛。本发明制备方法条件温和， 步骤简单， 制得产。
3、品纯度高， 对 ( 反式 )-3-(3- 羟 基 -4- 甲氧基苯基 ) 丙烯醛的制备有着开创性意 义。 (51)Int.Cl. 审查员 承倩怡 权利要求书 1 页 说明书 3 页 附图 5 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书1页 说明书3页 附图5页 (10)授权公告号 CN 103044218 B CN 103044218 B 1/1 页 2 1. 一种 ( 反式 )-3-(3- 羟基 -4- 甲氧基苯基 ) 丙烯醛的制备方法， 包括如下步骤 ： （1） 以杜仲为提取原料， 用醇与水的混合溶液进行提取 ； （2） 将步骤 （1） 的提取液经中性氧化铝层析。
4、柱除去色素， 收集洗脱液， 浓缩 ； （3） 使用有机溶剂萃取步骤 （2） 得到的洗脱液 ； （4） 将步骤 （3） 得到的萃取物使用C18柱进行HPLC分离得到(反式)-3-(3-羟基-4-甲 氧基苯基 ) 丙烯醛， 具体为 ： 使用制备型色谱柱 SHIMADZU PRC-ODS 20250mm 15m， 流动 相为甲醇:水=1:1， 流速为15ml/min， 检测波长315nm， 室温操作， 收集保留时间为7-8.5分 钟的组分。 2. 如权利要求 1 所述的制备方法， 其特征在于所述步骤 （1） 醇与水的混合溶液为甲醇、 乙醇或异丙醇中的一种或几种与水任意比例的混合物。 3. 如权利要求。
5、 2 所述的制备方法， 其特征在于所述步骤 （1） 具体为取盐杜仲粉， 60% 乙 醇室温浸泡 10 分钟， 充分溶胀， 60浸提 30 分钟， 过滤， 残渣再用 60% 乙醇 60浸提 30 分 钟， 合并两次提取液。 4. 如权利要求 1 所述的制备方法， 其特征在于所述步骤 （2） 中性氧化铝为 100-200 目。 5. 如权利要求 4 所述的制备方法， 其特征在于所述步骤 （2） 采用 95% 的乙醇进行洗脱。 6. 如权利要求 1 所述的制备方法， 其特征在于所述步骤 （3） 有机溶剂为乙醚、 氯仿、 正 丁醇中的一种或几种混合物。 7. 如权利要求 6 所述的制备方法， 其特征在。
6、于所述步骤 （3） 萃取次数为 3 次。 8. 如权利要求 1 所述的制备方法， 其特征在于步骤 （4） 之后还包括将收集的组分浓 缩后， 采用半制备柱 HPLC 进一步纯化的步骤， 具体为 ： 使用色谱柱为 Agilent Eclipse XDB-C18 9.4250mm 5m， 流动相为甲醇 : 水 =1:1， 流速为 4ml/min， 315nm 检测， 30操 作， 收集保留时间为 5.5-6.0 分钟的组分。 权 利 要 求 书 CN 103044218 B 2 1/3 页 3 ( 反式 )-3-(3- 羟基 -4- 甲氧基苯基 ) 丙烯醛的制备方法 技术领域 0001 本发明属于医。
7、药领域， 具体涉及一种 ( 反式 )-3-(3- 羟基 -4- 甲氧基苯基 ) 丙烯 醛的制备方法。 背景技术 0002 ( 反式 )-3-(3- 羟基 -4- 甲氧基苯基 ) 丙烯醛为桂皮醛衍生物， 结构如下 ： 0003 0004 文献 “Cinnamaldehydes inhibit cyclin dependent kinase 4/cyclin D1. （Jeong, H.-W.; Kim, M.-R.; Son, K.-H. et al， Bioorganic Fujita, Shinji; Funakoshi, etc， PCT Int. Appl. (2001), 29 pp.。
8、) 中公开了 ( 反式 )-3-(3- 羟基 -4- 甲氧基苯基 ) 丙烯醛的提取方 法。目前， 尚无对 ( 反式 )-3-(3- 羟基 -4- 甲氧基苯基 ) 丙烯醛的制备及活性的进一步研 究， 存在技术空白。 发明内容 0005 本发明提供了一种 ( 反式 )-3-(3- 羟基 -4- 甲氧基苯基 ) 丙烯醛的制备方法， 采 用天然物提取的方法， 从中药材杜仲中提取得到 ( 反式 )-3-(3- 羟基 -4- 甲氧基苯基 ) 丙 烯醛。 0006 本发明具体技术方案如下 ： 0007 一种 ( 反式 )-3-(3- 羟基 -4- 甲氧基苯基 ) 丙烯醛的制备方法， 包括如下步骤 ： 000。
9、8 （1） 以杜仲为提取原料， 用醇与水的混合溶液进行提取 ； 0009 （2） 将步骤 （1） 的提取液经中性氧化铝层析柱除去色素， 收集洗脱液， 浓缩 ； 0010 （3） 使用有机溶剂萃取步骤 （2） 得到的洗脱液 ； 0011 （4） 将步骤 （3） 得到的萃取物依次使用制备型 HPLC 和半制备型 HPLC 进行分离得 到 ( 反式 )-3-(3- 羟基 -4- 甲氧基苯基 ) 丙烯醛。 0012 上述杜仲优选盐杜仲， 由如下方法制得 ： 将杜仲干燥树皮浸入饱和 NaCl 溶液中 15 分钟， 取出晾干， 制成小块或小条， 150-180烘烤 4h， 形成盐杜仲， 此步骤为破坏杜仲胶。
10、， 以 使有效成分更多的溶出。 说 明 书 CN 103044218 B 3 2/3 页 4 0013 上述杜仲可采用粉碎机粉碎， 提高提取效率。 0014 上述醇与水的混合溶液为甲醇、 乙醇或异丙醇中的一种或几种与水任意比例的混 合物。 0015 上述制备方法， 步骤 （1） 优选条件为取盐杜仲粉， 60% 乙醇室温浸泡 10 分钟， 充分 溶胀， 60浸提 30 分钟， 过滤， 残渣再用 60% 乙醇 60浸提 30 分钟， 合并两次提取液。 0016 上述制备方法， 步骤 （2） 选用中性氧化铝层析柱， 中性氧化铝可吸附去除提取液中 无用的色素， 优选 100-200 目的中性氧化铝， 。
11、优选采用柱体积为 60mm80mm， 填料预先用 乙醇饱和。收集过柱后的流出液， 滤液全部过柱后， 在用 100ml 乙醇洗柱， 并收集流出液。 0017 上述制备方法， 所述醚类有机溶剂为乙醚、 氯仿、 正丁醇中的一种或几种混合物。 0018 上述制备方法， 步骤 （3） 优选萃取次数为 3 次。 0019 上述制备方法， 步骤 （4） 优选采用 C18 柱进行 HPLC 分离， 优选分离条件为使用制 备型色谱柱 SHIMADZU PRC-ODS 20250mm 15m， 流动相为甲醇 : 水 =1:1（体积比） ， 流速 为 15ml/min， 检测波长 315nm， 室温操作， 收集保留。
12、时间为 7-8.5 分钟的组分， 纯度 95%。 0020 上述制备方法， 步骤 （4） 之后还可以进一步将收集的组分浓缩后， 再次进行 HPLC 的纯化， 使用色谱柱为 Agilent Eclipse XDB-C18 9.4250mm 5m， 流动相为甲醇 : 水 =1:1， 流速为4ml/min， 315nm检测， 30操作， 收集保留时间为5.5-6.0分钟的组分， 可获得 高达 99.5% 以上的纯度。 0021 经测定， 杜仲中 ( 反式 )-3-(3- 羟基 -4- 甲氧基苯基 ) 丙烯醛的含量约为 0.8 克 /kg， 应用上述提取方法获得的 ( 反式 )-3-(3- 羟基 -4。
13、- 甲氧基苯基 ) 丙烯醛得率为 55% 左 右。 0022 本发明制备方法条件温和， 步骤简单， 制得产品纯度高， 对 ( 反式 )-3-(3- 羟 基 -4- 甲氧基苯基 ) 丙烯醛的制备有着开创性意义。 附图说明 0023 图 1 为制备型 HPLC 分离杜仲提取液高效液相图谱。 0024 图 2 为半制备型 HPLC 制备 ( 反式 )-3-(3- 羟基 -4- 甲氧基苯基 ) 丙烯醛的高效 液相图谱。 0025 图 3 为本发明方法制得的 ( 反式 )-3-(3- 羟基 -4- 甲氧基苯基 ) 丙烯醛化学结构 鉴定质谱图。 0026 图 4 为本发明方法制得的 ( 反式 )-3-(3。
14、- 羟基 -4- 甲氧基苯基 ) 丙烯醛化学结构 鉴定核磁共振氢谱图。 0027 图 5 为本发明方法制得的 ( 反式 )-3-(3- 羟基 -4- 甲氧基苯基 ) 丙烯醛化学结构 鉴定核磁共振碳谱图。 具体实施方式 0028 实施例 1 杜仲提取物的制备 0029 取杜仲干燥树皮， 浸入饱和 NaCl 溶液中 15 分钟， 取出晾干， 制成小块或小条， 150-180烘烤4h， 粉碎机粉碎， 制得盐杜仲粉。 取100克盐杜仲粉， 加入300ml 60%乙醇室 温浸泡 10 分钟， 充分溶胀， 60水浴 30 分钟， 滤液加入到填料为中性氧化铝 （100-200 目） 说 明 书 CN 103。
15、044218 B 4 3/3 页 5 层析柱中， 柱体积为 60mm80mm， 填料预先用乙醇饱和。收集过柱后的流出液， 滤液全部 过柱后， 在用 100ml 乙醇洗柱， 并收集流出液。抽滤漏斗滤纸减压过滤， 残渣再一次 60水 浴30分钟， 减压过滤， 合并滤液。 使用旋转蒸发仪60减压蒸发浓缩， 直至剩余100ml左右 时结束。分别使用 100ml 乙醚萃取浓缩液 3 次， 收集合并乙醚萃取液， 室温蒸发乙醚。使用 30ml 80%甲醇溶解乙醚蒸发后的产物， 搅拌， 8000rpm离心5分钟， 取上清得到杜仲粗提物。 0030 实施例 2 制备型 HPLC 分离杜仲提取液 0031 采用色。
16、谱条件为 ： 色谱柱 SHIMADZU PRC-ODS 20250mm 15m， 流动相为甲醇 : 水 =1:1， 流速为 15ml/min， 315nm 检测， 室温操作， 收集保留时间为 7-8.5 分钟的组分。 （见 图 1， DZ_2 标记的峰为 ( 反式 )-3-(3- 羟基 -4- 甲氧基苯基 ) 丙烯醛） 。 0032 实施例 3 半制备型 HPLC 制备 ( 反式 )-3-(3- 羟基 -4- 甲氧基苯基 ) 丙烯醛 0033 使用旋转蒸发仪浓缩实施例 2 得到的组分， 温度 60， 蒸发至剩余 99.9%。( 反式 )-3-(3- 羟基 -4- 甲氧基苯基 ) 丙烯醛质谱鉴定图谱见图 3， 核磁共振氢谱 图见图 4， 核磁共振碳谱图见图 5。 说 明 书 CN 103044218 B 5 1/5 页 6 图 1 说 明 书 附 图 CN 103044218 B 6 2/5 页 7 图 2 说 明 书 附 图 CN 103044218 B 7 3/5 页 8 图 3 说 明 书 附 图 CN 103044218 B 8 4/5 页 9 图 4 说 明 书 附 图 CN 103044218 B 9 5/5 页 10 图 5 说 明 书 附 图 CN 103044218 B 10 。