技术领域
本发明涉及发酵技术领域，特别是涉及龟裂链霉菌发酵生产土霉素的培养 基配方。
背景技术
土霉素是龟裂链霉菌发酵产生的广谱抗生素。是我国生产研究早、工艺成 熟、成本低、产量大的抗生素品种。在医疗、畜牧业和农业方面用途广泛。土 霉素主要用于防治畜禽大肠杆菌、沙门氏菌感染、巴氏杆菌、布氏杆菌感染及 猪喘气病、鸡慢性呼吸道病；也常用于治疗构的立克次氏体病、猫的传染性贫 血，预防狗的衣原体病和钧端螺旋体病。目前，国内企业土霉素工业生产，存 在的主要问题有以下几点：1、种子、发酵培养基成分复杂。国内采用发酵模式 生产土霉素，其培养基中的溶磷分别由磷酸二氢钾和玉米浆组成，其成分比例 对发酵生产影响较大。使用玉米浆为培养基提供溶磷，由于其稳定性差，溶磷 含量高低不定，影响菌种代谢生长，为调控发酵生产造成了较大影响。2、土霉 素发酵培养添加的玉米浆，由于受到产地和加工等环节不稳定因素的影响，质 量很难均一稳定。3、土霉素发酵生产中使用的玉米浆由于价格昂贵，给生产厂 家造成沉重的成本负担。4、国内几个大的土霉素生产厂家有配套的淀粉糖车间， 种子培养基和发酵培养基淀粉已用淀粉乳代替淀粉，但由于补料液糖浓度较高， 需要加入大量淀粉才能满足生产需要，淀粉占到补料液成本的80％以上。而葡 萄糖母液一般作为葡萄糖车间的副产品进行销售，价格低廉。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种龟裂链霉菌发酵生产土霉素的培养 基，它具有质量均一稳定、成本低廉、可实现土霉素稳定、高效生产的特点； 本发明还可有效利用葡萄糖母液，降低生产成本。
为解决上述技术问题，本发明所采取的技术方案是：
一种龟裂链霉菌发酵生产土霉素的培养基，包括一级种子培养基、二级种 子培养基、发酵培养基和补料液，一级种子培养基的组成为：黄豆饼粉 4.4-5.6kg/m3、硫酸铵3.9-5.6kg/m3、淀粉13.9-16.7kg/m3、碳酸钙3.9-5kg/m 3、氯化钠3.9-5.6kg/m3、磷酸二氢钾0.8-1.2kg/m3、氯化钴8.3-11g/m3、酵 母粉5-6.7kg/m3、糊精15-16.7kg/m3、玉米油15-20L/m3、淀粉酶0-0.4kg/m 3；二级种子培养基的组成为：黄豆饼粉18.5-20.5kg/m3、硫酸铵7.3-8.8kg/m 3、淀粉48.8-53.7kg/m3、碳酸钙7.3-8.8kg/m3、氯化钠3.9-4.9kg/m3、磷酸 二氢钾0.5-1.2kg/m3、氯化钴7.3-8.8g/m3、糊精5.6-6.3kg/m3、有机硅消沫 剂0.24-0.97L/m3、淀粉酶0.024-0.097kg/m3；发酵培养基由如下重量kg/m3数的各组分组成：黄豆饼粉27.3-32.7kg/m3、硫酸铵9-11kg/m3、淀粉 83.6-92.7kg/m3、碳酸钙8.7-10kg/m3、氯化钠2.2-2.7kg/m3、磷酸二氢钾 0.5-0.8kg/m3、硫酸锌0.15-0.22kg/m3、淀粉酶0.02-0.09kg/m3；补料液的组 成为：磷酸二氢钾0.92-1.12kg/m3、淀粉260-280kg/m3、葡萄糖母液 132-140kg/m3、碳酸钙2.12kg/m3、淀粉酶0.2kg/m3、有机硅消沫剂0.8L/m3。
本发明进一步改进在于：
一级种子培养基的重量配比为：黄豆饼粉5.0kg/m3、硫酸铵4.9kg/m3、 淀粉14.9kg/m3、碳酸钙4.5kg/m3、氯化钠4.9kg/m3、磷酸二氢钾1.0kg/m 3、氯化钴9g/m3、酵母粉5.8kg/m3、糊精15.8kg/m3、玉米油18L/m3、淀 粉酶0.2kg/m3；二级种子培养基的重量配比为：黄豆饼粉19.1kg/m3、硫酸 铵8.1kg/m3、淀粉50.2kg/m3、碳酸钙8.0kg/m3、氯化钠4.3kg/m3、磷酸 二氢钾0.8kg/m3、氯化钴8.2g/m3、糊精5.8kg/m3、有机硅消沫剂0.55L/m 3、淀粉酶0.062kg/m3；发酵培养基的重量配比为：黄豆饼粉30.1kg/m3、硫 酸铵10kg/m3、淀粉88.8kg/m3、碳酸钙9.2kg/m3、氯化钠2.5kg/m3、磷 酸二氢钾0.65kg/m3、硫酸锌0.018kg/m3、淀粉酶0.06kg/m3；补料液的重 量配比为：磷酸二氢钾0.99kg/m3、淀粉270kg/m3、葡萄糖母液138kg/m3、 碳酸钙2.12kg/m3、淀粉酶0.2kg/m3、有机硅消沫剂0.8L/m3。
采用上述技术方案所产生的有益效果在于：
本发明不使用玉米浆作为培养基原料，克服了玉米浆产地和加工等环节不 稳定因素的影响，质量很难均一稳定的缺陷；本发明龟裂链霉菌发酵生产土霉 素的培养基使用磷酸二氢钾代替玉米浆，配方成分稳定，价格低廉，由此培养 基发酵生产土霉素易于调控，并且极大的降低了生产成本。同时，本发明提供 了一种有效利用葡萄糖母液的补料液。采用葡萄糖母液代替淀粉，减少了淀粉 的用量，母液价格低廉，极大的降低了生产成本，而且降低了配料岗位工人的 劳动强度，减少了岗位粉尘的产生，达到了清洁生产和安全的目的。本发明具 有质量均一稳定、成本低廉、可实现土霉素稳定、高效生产的特点；本发明还 可有效利用葡萄糖母液，降低生产成本。
具体实施方式
下面将结合具体实施例对本发明进行进一步详细说明。
下述发酵采用双种发酵，其中1号一级种子培养基对应1号二级种子培养 基。各种培养基配制完成后，实罐灭菌，冷却后待用。
实施例1
1号一级种子培养基制备：将黄豆饼粉7.92kg、硫酸铵7.02kg、淀粉(折 干)25.02kg、碳酸钙7.02kg、氯化钠7.02kg、磷酸二氢钾1.44kg、氯化钴 14.94g、酵母粉9kg、糊精27kg、玉米油27L，配置体积为1.8m3放入一级种 子罐。
2号一级种子培养基制备：将黄豆饼粉7.92kg、硫酸铵7.02kg、淀粉(折 干)25.02kg、碳酸钙7.02kg、氯化钠7.02kg、磷酸二氢钾1.44kg、氯化钴 14.94g、酵母粉9kg、糊精27kg、玉米油27L，配制体积为1.8m3放入一级 种子罐。
1号二级种子培养基制备：将黄豆饼粉351.5kg、硫酸铵138.7kg、淀粉 (折干)927.2kg、碳酸钙138.7kg、氯化钠74.1kg、磷酸二氢钾9.5kg、氯 化钴138.7g、糊精106.4kg、有机硅消沫剂4.56L、淀粉酶0.456kg，配制体 积为19m3放入二级种子罐。
2号二级种子培养基制备：将黄豆饼粉351.5kg、硫酸铵138.7kg、淀粉 (折干)927.2kg、碳酸钙138.7kg、氯化钠74.1kg、磷酸二氢钾9.5kg、氯 化钴138.7g、糊精106.4kg、有机硅消沫剂4.56L、淀粉酶0.456kg，配制体 积为19m3放入二级种子罐。
发酵培养基配制过程：将黄豆饼粉1501.5kg、硫酸铵495kg、淀粉(折干) 4598kg、碳酸钙478.5kg、氯化钠121kg、磷酸二氢钾27.5kg、硫酸锌8.25kg、 淀粉酶1.1kg，配制体积为55m3放入发酵罐。
补料液配制过程：将磷酸二氢钾23kg、淀粉(折干)6500kg、葡萄糖母液 (折干)3300kg、碳酸钙53kg、淀粉酶5kg、有机硅消沫剂20L放入罐体，配 置体积为25m3。
利用上述培养基进行发酵生产，发酵结束，发酵单位为33090u/ml，发酵 周期为160h。
实施例2
1号一级种子培养基制备：将黄豆饼粉9kg、硫酸铵8.82kg、淀粉(折干) 26.82kg、碳酸钙8.1kg、氯化钠8.82kg、磷酸二氢钾1.8kg、氯化钴16.2g、 酵母粉10.44kg、糊精28.44kg、玉米油32.4L、淀粉酶0.36kg，配制体积为 1.8m3放入一级种子罐。
2号一级种子培养基制备：将黄豆饼粉9kg、硫酸铵8.82kg、淀粉(折干) 26.82kg、碳酸钙8.1kg、氯化钠8.82kg、磷酸二氢钾1.8kg、氯化钴16.2g、 酵母粉10.44kg、糊精28.44kg、玉米油32.4L、淀粉酶0.36kg，配制体积为 1.8m3放入一级种子罐。
1号二级种子培养基制备：将黄豆饼粉362.9kg、硫酸铵153.9kg、淀粉(折 干)953.8kg、碳酸钙152kg、氯化钠81.7kg、磷酸二氢钾15.2kg、氯化钴155.8g、 糊精110.2kg、有机硅消沫剂10.45L、淀粉酶1.178kg，配制体积为19m3，放 入二级种子罐。
2号二级种子培养基制备：将黄豆饼粉362.9kg、硫酸铵153.9kg、淀粉(折 干)953.8kg、碳酸钙152kg、氯化钠81.7kg、磷酸二氢钾15.2kg、氯化钴155.8g、 糊精110.2kg、有机硅消沫剂10.45L、淀粉酶1.178kg，配制体积为19m3放入 二级种子罐。
发酵培养基配制过程：将黄豆饼粉1655.5kg、硫酸铵550kg、淀粉(折干) 4884kg、碳酸钙506kg、氯化钠137.5kg、磷酸二氢钾35.75kg、硫酸锌0.99kg、 淀粉酶3.3kg放入发酵罐，配置体积为55m3,放入发酵罐。
补料液配制过程：将磷酸二氢钾24.75kg、淀粉(折干)6750kg、葡萄糖 母液(折干)3450kg、碳酸钙53kg、淀粉酶5kg、有机硅消沫剂20L放入罐体 搅拌均匀，配置体积为25m3。
利用上述培养基进行发酵生产，发酵结束，发酵单位为34390u/ml，发酵 周期为160h。
实施例3
1号一级种子培养基制备：将黄豆饼粉10.08kg、硫酸铵10.08kg、淀粉(折 干)30.06kg、碳酸钙9kg、氯化钠10.08kg、磷酸二氢钾2.16kg、氯化钴19.8g、 酵母粉12.06kg、糊精30.06kg、玉米油36L、淀粉酶0.72kg，配制体积为1.8 m3放入一级种子罐。
2号一级种子培养基制备：将黄豆饼粉10.08kg、硫酸铵10.08kg、淀粉(折 干)30.06kg、碳酸钙9kg、氯化钠10.08kg、磷酸二氢钾2.16kg、氯化钴19.8g、 酵母粉12.06kg、糊精30.06kg、玉米油36L、淀粉酶0.72kg，配制体积为1.8 m3，放入一级种子罐。
1号二级种子培养基制备：将黄豆饼粉389.5kg、硫酸铵167.2kg、淀粉(折 干)1020.3kg、碳酸钙167.2kg、氯化钠93.1kg、磷酸二氢钾22.8kg、氯化钴 167.2g、糊精119.7kg、有机硅消沫剂18.43L、淀粉酶1.843kg放入发酵罐， 配置体积为19m3。
2号二级种子培养基制备：将黄豆饼粉389.5kg、硫酸铵167.2kg、淀粉(折 干)1020.3kg、碳酸钙167.2kg、氯化钠93.1kg、磷酸二氢钾22.8kg、氯化钴 167.2g、糊精119.7kg、有机硅消沫剂18.43L、淀粉酶1.843kg，配制体积为 19m3，放入二级种子罐。
发酵培养基配制过程：将黄豆饼粉1798.5kg、硫酸铵605kg、淀粉(折干) 5098.5kg、碳酸钙550kg、氯化钠148.5kg、磷酸二氢钾44kg、硫酸锌12.1kg、 淀粉酶4.95kg放入发酵罐，配置体积为55m3。
补料液配制过程：将磷酸二氢钾28kg、淀粉(折干)7000kg、葡萄糖母液 (折干)3500kg、碳酸钙53kg、淀粉酶5kg、有机硅消沫剂20L放入罐体搅拌 均匀，配置体积为25m3。
利用上述培养基进行发酵生产，发酵结束，发酵单位为32390u/ml，发酵 周期为160h。
对比实施例
1号一级种子培养基制备：将黄豆饼粉9kg、硫酸铵8.82kg、淀粉(折干) 26.82kg、碳酸钙8.1kg、氯化钠8.82kg、磷酸二氢钾0.45kg、玉米浆8L、氯 化钴16.2g、酵母粉10.44kg、糊精28.44kg、玉米油32.4L、淀粉酶0.36kg， 配制体积为1.8m3,放入一级种子罐。
2号一级种子培养基制备：将黄豆饼粉9kg、硫酸铵8.82kg、淀粉(折干) 26.82kg、碳酸钙8.1kg、氯化钠8.82kg、磷酸二氢钾0.45kg、玉米浆8L、氯 化钴16.2g、酵母粉10.44kg、糊精28.44kg、玉米油32.4L、淀粉酶0.36kg， 配制体积为1.8m3,放入一级种子罐。
1号二级种子培养基制备：将黄豆饼粉362.9kg、硫酸铵153.9kg、淀粉(折 干)953.8kg、碳酸钙152kg、氯化钠81.7kg、磷酸二氢钾5kg、玉米浆340L、 氯化钴155.8g、糊精110.2kg、有机硅消沫剂10.45L、淀粉酶1.178kg,配制体 积为19m3放入二级种子罐。
2号二级种子培养基制备：将黄豆饼粉362.9kg、硫酸铵153.9kg、淀粉(折 干)953.8kg、碳酸钙152kg、氯化钠81.7kg、磷酸二氢钾5kg、玉米浆340L、 氯化钴155.8g、糊精110.2kg、有机硅消沫剂10.45L、淀粉酶1.178kg，配制 体积为19m3,放入二级种子罐。
发酵培养基配制过程：将黄豆饼粉1655.5kg、硫酸铵550kg、淀粉(折干) 4884kg、碳酸钙506kg、氯化钠137.5kg、磷酸二氢钾10kg、玉米浆1100L、硫 酸锌0.99kg、淀粉酶3.3kg,配制体积为55m3放入发酵罐。
补料液配制过程：将磷酸二氢钾5kg、玉米浆800L、淀粉(折干)6750kg、 葡糖糖母液(折干)3450kg、碳酸钙53kg、淀粉酶5kg、有机硅消沫剂20L放 入罐体搅拌均匀，配制体积为25m3。
利用上述培养基进行发酵生产，发酵结束，发酵单位为32890u/ml，发酵 周期为160h。