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1、(10)授权公告号 CN 103184260 B (45)授权公告日 2014.06.25 CN 103184260 B (21)申请号 201310106975.8 (22)申请日 2013.03.29 C12P 19/62(2006.01) C12R 1/465(2006.01) (73)专利权人 宁夏启元药业有限公司 地址 750101 宁夏回族自治区银川市永宁县 望远工业园启元大道 1 号 (72)发明人 郭海燕 朱娜 张志 (74)专利代理机构 宁夏专利服务中心 64100 代理人 徐淑芬 (54) 发明名称 一种高含量红霉素 B 发酵液的发酵方法 (57) 摘要 本发明涉及一种高含。
2、量红霉素 B 发酵液的发 酵方法， 该发酵方法是在以红色链霉菌为菌种发 酵生产红霉素的过程中， 控制发酵液的通气量和 搅拌转速使发酵液的溶解氧含量保持在 0-15%。 本发明通过在温度31-37， PH在6.7-7.3的发酵 体系中， 控制通入无菌空气的通气比和搅拌转速 来控制发酵过程中的溶解氧含量， 使代谢途径发 生改变， 从而有效提高红霉素 B 的积累， 提高发酵 液中红霉素 B 的含量， 为提纯红霉素 B 提供原料。 通过本发明方法调控发酵过程， 发酵 70 100hr 放罐， 发酵液中红霉素 B 含量可以达到 700 1000ug/ml， 提取后红霉素 B 达到 20-30%， 可以供。
3、 提纯使用。 (51)Int.Cl. 审查员 黄丽君 权利要求书 1 页 说明书 2 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书1页 说明书2页 (10)授权公告号 CN 103184260 B CN 103184260 B 1/1 页 2 1. 一种高含量红霉素 B 发酵液的发酵方法， 其特征是 ： 在以红色链霉菌为菌种、 温度 31 37， PH 在 6.7 7.3 的发酵生产红霉素的发酵体系中， 控制发酵液的通气量和搅 拌转速使发酵液的溶解氧含量保持在 0 15% 且不等于 0， 其中所述通气量按照通气比 1 ： 0.4 1.0L/L/min 的用量加入， 所。
4、述搅拌转速控制在 300-450 转 / 分钟。 2. 按照权利要求 1 所述的高含量红霉素 B 发酵液的发酵方法， 其特征是 ： 发酵 75 96 小时放罐。 权 利 要 求 书 CN 103184260 B 2 1/2 页 3 一种高含量红霉素 B 发酵液的发酵方法 技术领域 0001 发明涉及生物与医药技术领域， 特别是涉及一种高含量红霉素 B 发酵液的发酵方 法。 背景技术 0002 红霉素是由红霉素链霉菌 (Streptomyces erythreus) 所产生的一类大环内酯类 抗生素， 主要包括红霉素 A(ErA)、 红霉素 B(ErB) 和红霉素 C(ErC)， 其中以红霉素 A。
5、 的抗菌 活力最强， B、 C 抗菌活力较低。故而， 医疗上用的大部分都为红霉素 A， 而把红霉素 B、 C 作为 杂质对待， 在红霉素发酵过程中也以提高红霉素 A、 降低红霉素 B、 C 的含量为主要目的， 因 此， 在红霉素药品生产过程中， 需要对其中的红霉素 A、 B、 C 进行高效液相测定， 从而确定药 品的药效， 在用高效液相测定红霉素各组分时， 需要有高含量的标准品对各组分进行定性、 定量。但是中国药品生物制品检定研究院未对社会公开销售红霉素 B， 而欧洲药典委员专 门出售的红霉素 B 标准品价格过高， 所以自制高纯度的红霉素 B 需要有发酵阶段提供高含 量红霉素 B 的发酵液。在。
6、现阶段红霉素的发酵过程中， 红霉素 B 的含量仅占总效价的 1% 以 下， 含量低不利于红霉素 B 的提纯。 发明内容 0003 本发明的目的在于克服上述现有技术中的缺陷， 提供一种有效提高红霉素发酵液 中高含量红霉素 B 发酵液的发酵方法。 0004 一种高含量红霉素 B 发酵液的发酵方法， 其特征是 ： 在以红色链霉菌为菌种发 酵生产红霉素的过程中， 控制发酵液的通气量和搅拌转速使发酵液的溶解氧含量保持在 0-15%。 0005 所述通气量按照通气比 1 ： 0.4 1.0L/L/min 的用量加入。 0006 所述搅拌转速控制在 300-450 转 / 分钟。 0007 所述培养温度控制。
7、在 31-37。 0008 所述培养液的 PH 控制在 6.7-7.3。 0009 发酵 70-100 小时放罐， 优选为 75-96 小时放罐。 0010 本发明通过在温度31-37， PH在6.7-7.3的发酵体系中， 控制通入无菌空气的通 气比和搅拌转速来控制发酵过程中的溶解氧含量， 使代谢途径发生改变， 从而有效提高红 霉素 B 的积累， 提高发酵液中红霉素 B 的含量， 为提纯红霉素 B 提供原料。 0011 通过本发明方法调控发酵过程， 发酵 70 100hr 放罐， 发酵液中红霉素 B 含量可 以达到 700 1000ug/ml， 提取后红霉素 B 达到 20-30%， 可以供提。
8、纯使用。 具体实施方式 0012 实施例 1 0013 本方法采用三级发酵法， 挑取新鲜的红色链霉菌的斜面孢子接入到含有淀粉、 豆 说 明 书 CN 103184260 B 3 2/2 页 4 粉等原料的一级种子培养基中， 35培养 40hr， 接入二级种子培养基中 34培养 20hr， 接入灭菌后的发酵培养基 （培养基组成 ： 淀粉 2-5%， 豆粉 2-5%， 硫酸铵 0.1-0.6%、 碳酸钙 0.2-0.8%） 中进行发酵培养， 培养条件 ： 温度 31-37， PH6.7-7.3， 通入无菌空气同时开搅 拌， 通气比 1 ： 0.8L/L/min， 发酵过程通过溶氧浓度调整搅拌转速 。
9、300 450 转 / 分钟， 通过 溶氧电极检测溶氧， 控制溶氧 10 15%， 发酵 94hr 放罐， 发酵液中红霉素 B 含量 820ug/ml， 占总效价的 50%。 0014 实施例 2 0015 本方法采用三级发酵法， 挑取新鲜的红色链霉菌的斜面孢子接入到含有淀粉、 豆 粉等原料的一级种子培养基中， 34培养 45hr， 接入二级种子培养基中 33培养 24hr， 接 入灭菌后的发酵培养基中 （培养基组成 ： 淀粉 2-5%， 豆粉 2-5%， 硫酸铵 0.1-0.6%、 碳酸钙 0.2-0.8%） 进行发酵培养， 培养条件 ： 温度 31-37， PH6.7-7.3， 通入无菌空。
10、气同时开搅拌， 发酵过程中搅拌转速恒定 400 转， 调整通气比 1 ： 0.4 1.0L/L/min， 通过溶氧电极检测溶 氧， 控制溶氧 5 10%， 发酵 96hr 放罐， 发酵液中红霉素 B 含量 900ug/ml， 占总效价的 55%。 0016 实施例 3 0017 本方法采用三级发酵法， 挑取新鲜的红色链霉菌的斜面孢子接入到含有淀粉、 豆 粉等原料的一级种子培养基中， 35培养 42hr， 接入二级种子培养基中 34培养 22hr， 接入灭菌后的发酵培养基 （培养基组成 ： 淀粉 2-5%， 豆粉 2-5%， 硫酸铵 0.1-0.6%、 碳酸钙 0.2-0.8%） 中进行发酵培养， 培养条件 ： 温度 31-37， PH6.7-7.3， 通入无菌空气同时开搅 拌， 通气比 1 ： 0.6L/L/min， 发酵过程通过溶氧调整搅拌转速 300 450 转 / 分钟， 通过溶氧 电极检测溶氧， 控制溶氧 0 10%， 发酵 75hr 放罐， 发酵液中红霉素 B 含量 720ug/ml， 占总 效价的 45%。 说 明 书 CN 103184260 B 4 。