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1、(10)申请公布号 CN 102605038 A (43)申请公布日 2012.07.25 CN 102605038 A *CN102605038A* (21)申请号 201210070197.7 (22)申请日 2012.03.16 C12Q 1/04(2006.01) C12R 1/35(2006.01) (71)申请人 李建新 地址 276826 山东省日照市望海路 35 号日 照市中医医院 (72)发明人 李建新 (74)专利代理机构 北京轻创知识产权代理有限 公司 11212 代理人 刘颖 (54) 发明名称 一种支原体培养基 (57) 摘要 本发明公开了一种支原体培养基及其制备方 。
2、法。其特征在于， 配制 1000ml 培养基的配方中 含有 ： 蛋白胨 15g ； 牛心浸粉 8g ； 酵母浸粉 5g ； 苯 酚红 20mg ； 氯化钠 5.2g ； L- 精氨酸 0.5g ； 氟康唑 30mg ； 紫番荔枝素 2mg ； 无菌绵羊血 200ml ； 蒸馏 水加至 1000ml。本发明与现有技术相比较， 具有 检出可靠、 支原体分离率高的特点。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 3 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 3 页 1/1 页 2 1. 一种支原体培养基， 其特征在， 配制 1000ml 培。
3、养基的配方中含有 ： 蛋白胨 15g ； 牛心浸粉 8g ； 酵母浸粉 5g ； 苯酚红 20mg ； 氯化钠 5.2g ； L- 精氨酸 0.5g ； 氟康唑 30mg ； 紫番荔枝素 2mg ； 无菌绵羊血 200ml ； 蒸馏水加至总量为 1000ml。 2.根据权利要求1所述的一种支原体培养基， 其特征在于每1000ml培养基还含有京尼 平酸 2mg。 3.根据权利要求1所述的一种支原体培养基， 其特征在于每1000ml培养基还含有浓度 200g/L 的功劳木水煮液 200ml。 4.根据权利要求1至3任意一种所述的一种支原体培养基， 其特征在于每1000ml培养 基中还含有琼脂 15。
4、g。 权 利 要 求 书 CN 102605038 A 2 1/3 页 3 一种支原体培养基 技术领域 0001 本发明涉及检验口腔微生物培养领域， 具体涉及一种支原体培养基。 背景技术 0002 非淋球菌性尿道炎 （nongonococcal urethritis， NGU） 在性传播疾病 （sexually transmitted disease， STD） 中所占的比例逐年升高， 无论是国外还是国内都居于首位， 而 解尿支原体 （ureaplasma urealyticum， Uu） 和人型支原体 （Mycoplasma hominis， Mh） 是NGU 的主要病原体。因此， 准确有效。
5、地检测支原体的存在， 成为诊断 NGU 的关键因素之一。Uu 和 Mh 的检测目前国内大多采用液体培养法， 培养基由黄变红且液体澄清为阳性， 不变色或者 变色但液体浑浊为阴性。其原理是根据 Uu 和 Mh 分解培养基中的尿素产碱使 pH 上升， 而培 养基中的酚红指示剂在由酸变碱过程中颜色由黄变红， 观察颜色的变化来判断阳性。但是 能分解尿素的微生物很多， 一些细菌能使颜色变红造成假阳性， 还有一些细菌和真菌 （尤其 是白色念珠菌） 能使培养基变红和浑浊， 检验科一般会判断阴性， 但如果其中同时有支原体 生长， 由于浑浊就会造成假阴性的判断。前国内商品化的支原体培养基 （包括液体和固体） 一般。
6、添加青霉素类和多粘菌素， 青霉素对大多数革兰阳性球菌的作用较强， 对肠球菌作用 较差， 多粘菌素为多肽类抗生素， 对绿脓杆菌等革兰氏阴性杆菌作用强大， 但对 G- 球菌和 G+ 细菌均无作用， 这两种对真菌都无抑制作用。所以， 如果标本中有混合真菌感染， 污染少 量则仅变红而不造成沉淀， 可能形成假阳性的判断 ； 污染量多有沉淀和浑浊， 可能形成假阴 性的判断。在固体培养基上， 真菌菌落的生长， 会掩盖支原体生长的琼脂表面， 使不能观察 到支原体的典型菌落。 发明内容 0003 本发明的技术任务是针对以上现有技术的不足， 提供一种适合于支原体生长的培 养基， 降低检验结果的假阳性和假阴性发生率。
7、。 0004 本发明解决其技术问题的技术方案是 ： 一种支原体培养基， 其特征在， 配制 1000ml 培养基的配方中含有 ： 蛋白胨 15g ； 牛心浸粉 8g ； 酵母浸粉 5g ； 苯酚红 20mg ； 氯化 钠 5.2g ； L- 精氨酸 0.5g ； 氟康唑 30mg ； 紫番荔枝素 2mg ； 无菌绵羊血 200ml ； 蒸馏水加至 1000ml。 0005 优化方案中， 每 1000ml 培养基还含有京尼平酸 2mg。 0006 优化方案中， 每 1000ml 培养基还含有浓度 200g/L 的功劳木水煮液 200ml。 0007 以上各方案的固体培养基配方中， 每 1000ml。
8、 培养基还含有琼脂 15g。 0008 其中所述的蛋白胨提供碳氮源和能量 ； 牛心浸粉含有各种多肽、 脂肪、 生长因子、 激素等， 这些物质对促进支原体的繁殖和生长都是很重要的因素 ； 酵母浸粉提供支原体生 长所需的维生素 B 族 ； 氯化钠维持均衡的渗透压， 且由于支原体较其他的细菌更为耐受高 渗环境， 所以氯化钠水平适当的提高还有利于抑制其他细菌生长 ； 琼脂是培养基的凝固剂 ； 无菌绵羊血提供能量环境 ； L- 精氨酸属氨基酸类， 为营养剂 ； 苯酚红为指示剂 ； 氟康唑可以 说 明 书 CN 102605038 A 3 2/3 页 4 有效的抑制白色念珠菌在其中的生长 ； 紫番荔枝素有。
9、抑制白假丝酵母的真菌作用， 且还有 一定的细胞毒作用， 2mg/L 的浓度可以有效的抑制杂菌成长， 较普通支原体培养集中使用的 高毒醋酸铊安全。京尼平酸能广泛抑制革兰氏阴、 阳性菌的生长。功劳木为小檗科植物阔 叶十大功劳、 细叶十大功劳的茎或茎皮， 现代研究表明， 功劳木水煎剂在体外对金黄色葡萄 球菌、 大肠杆菌、 绿脓杆菌和白色念珠菌均有抑制作用。 0009 本发明与现有技术相比较， 具有支原体检出可靠的特点。 具体实施方式 0010 以下结合实际情况， 对本发明的具体实施方式作详细说明。 0011 实施例 1 液体培养基， 配制 1000ml 培养基的配方中含有 ： 蛋白胨 15g ； 牛。
10、心浸粉 8g ； 酵母浸粉5g ； 苯酚红20mg ； 氯化钠5.2g ； L-精氨酸0.5g ； 氟康唑30mg ； 紫番荔枝素2mg ； 无菌绵羊血 200ml ； 蒸馏水加至总量为 1000ml。同配方中加入琼脂 15g 既可以用来制备实 施例 2 固体培养基。 0012 实施例 3 液体培养基， 配制 1000ml 培养基的配方中含有 ： 蛋白胨 15g ； 牛心浸粉 8g ； 酵母浸粉5g ； 苯酚红20mg ； 氯化钠5.2g ； L-精氨酸0.5g ； 氟康唑30mg ； 紫番荔枝素2mg ； 京尼平酸 2mg ； 无菌绵羊血 200ml ； 蒸馏水加至总量为 1000ml。同配。
11、方中加入琼脂 15g 既可 以用来制备实施例 4 固体培养基。 0013 实施例 5 液体培养基， 配制 1000ml 培养基的配方中含有 ： 蛋白胨 15g ； 牛心浸粉 8g ； 酵母浸粉5g ； 苯酚红20mg ； 氯化钠5.2g ； L-精氨酸0.5g ； 氟康唑30mg ； 紫番荔枝素2mg ； 浓度200g/L的功劳木水煮液200ml ； 无菌绵羊血200ml ； 蒸馏水加至总量为1000ml。 同配方 中加入琼脂 15g 既可以用来制备实施例 6 固体培养基。实施例 6 固体培养基制备方法为 ： 取功劳木加水煮沸 1 小时， 过滤， 取滤液， 调整体积到浓度为 200g/L， 得。
12、功劳木水煮液 ； 将蛋 白胨、 牛心浸粉、 酵母浸粉、 苯酚红、 氯化钠、 琼脂、 功劳木水煮液和蒸馏水混匀， 在涡旋器上 震荡15min， 过滤， 滤液210灭菌15 min， 冷却到45， 加入无菌绵羊血、 灭菌氟康唑、 灭菌 紫番荔枝素， 混匀后灭菌蒸馏水定容到 1000ml 后分装。 0014 所述的功劳木水煮液浓度为 200g/L， 指的是每升功劳木水煮液中含有生药 200g。 0015 本发明所得支原体培养基具有检出可靠、 支原体分离率高的特点， 为临床资料充 分证明， 有关资料如下。 0016 1 对象与方法 1.1 培养基制备 ： 共设 8 组， 分别为实施例 16 方案组和对。
13、照 1 组、 对照 2 组。对照 1 组为支原体肉汤液体培养基， 对照 2 组为支原体肉汤固体培养基。 0017 1.2 标本采集培养方法 ： 妇科和皮肤科门诊患者的泌尿生殖道标本拭子 108 例。 采集方法 ： 男性患者用无菌棉球擦干尿道口后 , 用无菌棉拭子插入尿道口 23 cm, 轻轻旋 转后取出 ； 女性患者清除阴道口分泌物后， 用无菌棉拭子插入宫颈口12 cm， 轻轻旋转后取 出。用拭子先接种固体培养基， 然后用于液体培养基接种， 36培养。 0018 1.3 结果判定方法 1.3.1 阳性确定金标准 ： 显微镜下见到典型支原体生长结合生化反应确认 Uu、 Mh。 0019 1.3.。
14、2 液体培养基阳性确定标准 ： 分别于 2448 h 观察颜色由黄色变红色， 严格按 照结果判读表读取结果。 说 明 书 CN 102605038 A 4 3/3 页 5 0020 1.3.3 固体培养基阳性确定标准 ： 为 24 h 后逐日观察颜色的变化 （黄色变为红 色） 。同时在显微镜下观察典型支原体菌落 ： Mh 煎蛋样菌落 （100300m） ， Uu 棕褐色颗粒、 棕褐色菌线或棕褐色团块样菌落。 0021 2 结果 ： 108 份标本最后确定阳性为 41 例， 各组阳性例数见下表。 金标准 实施例 1 实施例 2 实施例 3 实施例 4 实施例 5 实施例 6 对照 1 组 对照 2 组 例数 （例）413937403940424529 0022 3 结论 ： 实施例 16 培养基可以有效的提高泌尿生殖道标本支原体检验的准确 率， 减少假阴性和假阳性的发生， 使妇科患者的临床诊断正确率进一步加强。 说 明 书 CN 102605038 A 5 。