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1、(10)授权公告号 CN 101585792 B (45)授权公告日 2013.03.20 CN 101585792 B *CN101585792B* (21)申请号 200910043691.2 (22)申请日 2009.06.12 C07C 323/59(2006.01) C07C 319/12(2006.01) A61P 43/00(2006.01) A61P 39/06(2006.01) A61P 1/00(2006.01) A61P 1/12(2006.01) A61P 37/00(2006.01) A23K 1/18(2006.01) A23K 1/16(2006.01) (73)。
2、专利权人 中国科学院亚热带农业生态研究 所 地址 410125 湖南省长沙市芙蓉区马坡岭远 大二路 1071 号 (72)发明人 印遇龙 吴信 (74)专利代理机构 武汉宇晨专利事务所 42001 代理人 王敏锋 徐衡等 .N- 乙酰 -L- 半胱氨酸合成新 方法 .精细化工 .2000, 第 17 卷 ( 第 4 期 ),205-207. (54) 发明名称 一种仔猪肠道屏障功能调控物质 -N- 乙酰半 胱氨酸的制备方法 (57) 摘要 本发明公开了一种仔猪肠道屏障功能调控 物质 -N- 乙酰半胱氨酸的制备方法。其步骤是 ： a. 将无结晶水的左旋半胱氨酸盐溶于蒸馏水， 在 有活性炭的漏斗中。
3、过滤， 滤液加入乙醇， 再加入工 业吡啶， 冷却后得左旋半胱氨酸 ； b. 将得到的左 旋半胱氨酸加入反应瓶中， 加冰醋酸， 三氯甲烷， 在搅拌下加入乙酐， 升温， 加热， 冷却冰箱过夜， 得 N- 乙酰半胱氨酸粗品 ； c. 得到的 N- 乙酰半胱氨 酸粗品加蒸馏水溶解， 活性炭脱色过滤， 滤液放冰 浴中结晶， 得乙酰半胱氨酸。本发明生产的 N- 乙 酰半胱氨酸， 操作简便， 原料易得， 成本低。 为实现 用 N- 乙酰半胱氨酸在仔猪中的应用提供了切实 可行的途径。有效提高了早期断奶仔猪肠道空肠 粘膜抗氧化酶 GSH 和 GSH-Px 的活性， 降低了 MDA 水平。 (51)Int.Cl.。
4、 (56)对比文件 审查员 韩雅婷 权利要求书 1 页 说明书 3 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书 1 页 说明书 3 页 1/1 页 2 1. 一种仔猪肠道屏障功能调控物质 -N- 乙酰半胱氨酸的制备方法， 其步骤是 ： a. 将无结晶水的左旋半胱氨酸盐溶于蒸馏水， 然后在有活性炭的漏斗中过滤， 在滤液 中加入乙醇， 再加入工业吡啶， 冷却后得左旋半胱氨酸 ； b. 将步骤 (a) 得到的左旋半胱氨酸加入反应瓶中， 加冰醋酸， 三氯甲烷， 在剧烈搅拌下 加入乙酐， 让其自然升温 80 90， 反应 30 60 分钟， 冷却， 在 2 6下静置 6 10。
5、 小 时， 得 N- 乙酰半胱氨酸粗品 ； c. 将步骤 (b) 得到的 N- 乙酰半胱氨酸粗品加蒸馏水溶解， 活性炭脱色过滤， 滤液放冰 浴中结晶， 得乙酰半胱氨酸。 权 利 要 求 书 CN 101585792 B 2 1/3 页 3 一种仔猪肠道屏障功能调控物质 -N- 乙酰半胱氨酸的制备 方法 技术领域 0001 本发明涉及化学合成及该化合物在幼龄仔猪免疫调节技术领域， 更具体涉及一种 仔猪肠道屏障功能调控物质 -N- 乙酰半胱氨酸的制备方法， 适用于畜牧生产中， 具有抗氧 化作用， 可以有效保护肠道黏膜结构与功能的完整性。 背景技术 0002 N- 乙酰半胱氨酸 (N-acetylc。
6、ysteine， NAC) 化学式为 C5H9NO3S， 相对分子质量为 163.2， 为硫醇类化合物， 作为小分子物质， 进入机体后 97被小肠迅速吸收， 并经小肠和肝 脏细胞代谢与蛋白肽链结合形成多种代谢产物， 对各种原因引起的肠黏膜损伤、 萎缩、 肠粘 膜通透性增加以及肠菌群失调等等具有较好的防治作用。 0003 发明人前期的研究中发现， L- 半胱氨酸， NAC 是天然氨基酸 L- 半胱氨酸与还原型 谷胱甘肽 (glutathione， GSH) 的前体， 亦是一种强有力的抗氧化剂， 对改善其生物活性主 要在于硫基， 提高谷胱甘肽 -S- 转移酶活性， 并具有较强的清除活性氧自由基 (。
7、reactive oxygen species， ROS) 能力， 其中半胱氨酸为 GSH 的前体， 可通过直接抗过氧化性损伤以及 促进机体内 GSH 合成两种途径来发挥清除 ROS 的功效。而乙酰基使其抗氧化性更稳定。 0004 N- 乙酰半胱氨酸在胞浆不被分解， 低剂量的 N- 乙酰半胱氨酸在增加氧化物酶、 超 氧化物歧化酶 (SOD)、 过氧化氢酶、 谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH-Px) 的含量等等具有高敏感 性 ； 而且N-乙酰半胱氨酸对血浆色氨酸、 赖氨酸和组氨酸浓度没有影响， 说明NCG不影响小 肠对这些氨基酸的吸收。 发明内容 0005 本发明的目的在于提供了一种仔猪肠道屏障功能。
8、调控物质 -N- 乙酰半胱氨酸的 制备方法， 方法易行、 操作简便、 成本低。 本品具有抗氧化作用， 可以有效保护肠道黏膜结构 与功能的完整性。使用 N- 乙酰半胱氨酸可以有效地提高抗氧化物酶、 超氧化物歧化酶、 过 氧化氢酶、 谷胱甘肽过氧化物酶的含量， 发挥清除超氧游离基、 过氧化氢产物等活性氧簇的 作用， 进而有效保护肠道黏膜结构与功能的完整性， 对心、 肝、 肺及肾脏等组织器官也产生 广泛的保护作用。 0006 为了实现上述的目的， 本发明采用以下技术措施， 采用的材料是 ： 半胱氨酸、 乙醇、 工业吡啶、 冰醋酸、 活性炭、 三氯甲烷、 乙酐。 0007 一种仔猪肠道屏障功能调控物质。
9、 -N- 乙酰半胱氨酸的制备方法， 其特征包括下列 步骤 ： 0008 a. 将左旋半胱氨酸盐 ( 无结晶水 ) 溶于 0.6 1.0 倍蒸馏水， 然后在有活性炭的 漏斗中过滤， 在滤液中加入2.04.0倍体积的95的乙醇， 再加入工业吡啶0.20.8倍 体积， 冷却到室温 (20 25， 以下相同 ) 后得左旋半胱氨酸。 0009 b. 将步骤 a 得到的左旋半胱氨酸加入反应瓶中， 加冰醋酸 ( 容量为 0.3 0.6 说 明 书 CN 101585792 B 3 2/3 页 4 份)， 三氯甲烷(容量为0.250.40份)， 在剧烈搅拌下加入乙酐(容量为0.61.0份)， 让其自然升温 8。
10、0 90， 反应 30 60 分钟， 冷却， 在 2 6下静置 6 10 小时， 得 N- 乙 酰半胱氨酸粗品。 0010 c.将步骤b得到的N-乙酰半胱氨酸粗品加蒸馏水0.30.6倍溶解， 活性炭脱色 过滤， 滤液放冰浴中结晶， 得乙酰半胱氨酸。 0011 本方法生产的 N- 乙酰半胱氨酸， 采用谷氨酸为原料操作简便， 原料易得， 成本低， 为实现用 N- 乙酰半胱氨酸作精氨酸的替代品提供了切实可行的途径。申请人研究发现， N- 乙酰半胱氨酸可以维持早期断奶仔猪胃肠道的健康， 降低仔猪腹泻率， 增强仔猪机体免 疫力， 缓解仔猪断奶应激。研究表明， N- 乙酰半胱氨酸有效提高了断奶仔猪肠道空肠。
11、粘膜 抗氧化酶 GSH 和 GSH-Px 的活性， 降低了 MDA 水平 ( 表 1)。 具体实施方式 0012 根据以上生产流程， 以下给出几个具体实施方式 ： 0013 实施例 1 ： 0014 一种仔猪肠道屏障功能调控物质 -N- 乙酰半胱氨酸的制备方法， 其步骤是 ： 0015 a. 将左旋半胱氨酸盐 ( 无结晶水 ) 溶于 0.6 倍蒸馏水， 然后在有活性炭的漏斗中 过滤， 在滤液中加入 2.0 倍体积的 95的乙醇， 再加入工业吡啶 0.2 倍体积， 冷却至室温后 得左旋半胱氨酸。 0016 b. 将步骤 a 得到的左旋半胱氨酸加入反应瓶中， 加冰醋酸 ( 容量为 0.3 份 )，。
12、 三氯 甲烷 ( 容量为 0.25 份 )， 在剧烈搅拌下加入乙酐 ( 容量为 0.6 份 )， 让其自然升温至 80， 反应 30 分钟， 冷却， 在 2下静置 6 小时， 得 N- 乙酰半胱氨酸粗品。 0017 c. 将步骤 b 得到的 N- 乙酰半胱氨酸粗品加蒸馏水 0.3 倍溶解， 活性炭脱色过滤， 滤液放冰浴中结晶， 得乙酰半胱氨酸精品。 0018 实施例 2 ： 0019 一种仔猪肠道屏障功能调控物质 -N- 乙酰半胱氨酸的制备方法， 其步骤是 ： 0020 a. 将左旋半胱氨酸盐 ( 无结晶水 ) 溶于 0.8 倍蒸馏水， 然后在有活性炭的漏斗中 过滤， 在滤液中加入 3.0 倍。
13、体积的 95的乙醇， 再加入工业吡啶 0.4 倍体积， 冷却至室温后 得左旋半胱氨酸。 0021 b. 将步骤 a 得到的左旋半胱氨酸加入反应瓶中， 加冰醋酸 ( 容量为 0.4 份 )， 三氯 甲烷 ( 容量为 0.30 份 )， 在剧烈搅拌下加入乙酐 ( 容量为 0.8 份 )， 让其自然升温至 85， 反应 35 分钟， 冷却， 在 3下静置 7 小时， 得 N- 乙酰半胱氨酸粗品。 0022 c. 将步骤 b 得到的 N- 乙酰半胱氨酸粗品加蒸馏水 0.4 倍溶解， 活性炭脱色过滤， 滤液放冰浴中结晶， 得乙酰半胱氨酸精品。 0023 实施例 3 ： 0024 一种仔猪肠道屏障功能调控。
14、物质 -N- 乙酰半胱氨酸的制备方法， 其步骤是 ： 0025 a. 将左旋半胱氨酸盐 ( 无结晶水 ) 溶于 1.0 倍蒸馏水， 然后在有活性炭的漏斗中 过滤， 在滤液中加入 4.0 倍体积的 95的乙醇， 再加入工业吡啶 0.6 倍体积， 冷却至室温后 得左旋半胱氨酸。 0026 b. 将步骤 a 得到的左旋半胱氨酸加入反应瓶中， 加冰醋酸 ( 容量为 0.5 份 )， 三氯 说 明 书 CN 101585792 B 4 3/3 页 5 甲烷 ( 容量为 0.35 份 )， 在剧烈搅拌下加入乙酐 ( 容量为 0.9 份 )， 让其自然升温至 90， 反应 40 分钟， 冷却， 在 4下静置。
15、 8 小时， 得 N- 乙酰半胱氨酸粗品。 0027 c. 将步骤 b 得到的 N- 乙酰半胱氨酸粗品加蒸馏水 0.5 倍溶解， 活性炭脱色过滤， 滤液放冰浴中结晶， 得乙酰半胱氨酸精品。 0028 实施例 4 ： 0029 a. 将左旋半胱氨酸盐 ( 无结晶水 ) 溶于 1.0 倍蒸馏水， 然后在有活性炭的漏斗中 过滤， 在滤液中加入 4.0 倍体积的 95的乙醇， 再加入工业吡啶 0.8 倍体积， 冷却至室温后 得左旋半胱氨酸。 0030 b. 将步骤 a 得到的左旋半胱氨酸加入反应瓶中， 加冰醋酸 ( 容量为 0.6 份 )， 三氯 甲烷 ( 容量为 0.4 份 )， 在剧烈搅拌下加入乙。
16、酐 ( 容量为 1.0 份 )， 让其自然升温至 90， 反 应 50 分钟， 冷却， 在 6下静置 10 小时， 得 N- 乙酰半胱氨酸粗品。 0031 c. 将步骤 b 得到的 N- 乙酰半胱氨酸粗品加蒸馏水 0.6 倍溶解， 活性炭脱色过滤， 滤液放冰浴中结晶， 得 N- 乙酰半胱氨酸精品。 0032 用本发明方法制得的 N- 乙酰半胱氨酸对仔猪服用方式如下 ： 0033 一、 针对哺乳仔猪和断奶后不采食的仔猪， 将 N- 乙酰半胱氨酸用生理盐水配制成 浓度为 1， 按哺乳仔猪每天 2 次， 每次 50 200mg/kg 体重给服。 0034 二、 针对会采食的仔猪， 按每 kg 饲料添加 0.5 1g N- 乙酰半胱氨酸配成日粮供 用。 0035 通过本发明获得的 N- 乙酰半胱氨酸有效提高了断奶仔猪肠道空肠粘膜抗氧化酶 GSH 和 GSH-Px 的活性， 降低了 MDA 水平 ( 表 1)。 0036 表 1N- 乙酰半胱氨酸对早期断奶仔猪肠道空肠粘膜抗氧化的影响 0037 说 明 书 CN 101585792 B 5 。