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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201610335380.3 (22)申请日 2016.05.15 (71)申请人 刘雨 地址 239212 安徽省滁州市来安县舜山乡 石固村杨郢组10号 (72)发明人 刘雨 (51)Int.Cl. C07D 493/08(2006.01) A61K 31/343(2006.01) A61K 31/4535(2006.01) A61P 15/00(2006.01) A61P 5/08(2006.01) (54)发明名称 富马酸酮替芬的药物组合物及其在生物医 药中的应用 (57)。
2、摘要 本发明公开了富马酸酮替芬的药物组合物 及其在生物医药中的应用， 本发明提供的富马酸 酮替芬的药物组合物中含有富马酸酮替芬和一 种结构新颖的天然产物化合物()， 富马酸酮替 芬、 化合物()单独作用时， 对高泌乳素血症具有 治疗作用； 富马酸酮替芬和化合物()联合作用 时， 对高泌乳素血症的治疗效果显著提高， 可以 开发成治疗高泌乳素血症的药物， 与现有技术相 比具有突出的实质性特点和显著的进步。 权利要求书1页 说明书5页 CN 105906648 A 2016.08.31 CN 105906648 A 1.一种具有下述结构式的化合物()， 2.一种富马酸酮替芬的药物组合物， 其特征在于。
3、： 包括富马酸酮替芬、 如权利要求1所 述的化合物()和药学上可以接受的载体， 制备成需要的剂型。 3.根据权利要求2所述的富马酸酮替芬的药物组合物， 其特征在于： 药学上可以接受的 载体包括稀释剂、 赋形剂、 填充剂、 粘合剂、 湿润剂、 崩解剂、 吸收促进剂、 表面活性剂、 吸附 载体或润滑剂。 4.根据权利要求2所述的富马酸酮替芬的药物组合物， 其特征在于： 所述剂型包括片 剂、 胶囊剂、 口服液、 口含剂、 颗粒剂、 冲剂、 丸剂、 散剂、 膏剂、 丹剂、 混悬剂、 粉剂、 溶液剂、 注 射剂、 栓剂、 喷雾剂、 滴剂或贴剂。 5.权利要求1所述的化合物()的制备方法， 其特征在于， 。
4、包含以下操作步骤： (a)将华 山参粉碎， 用8595乙醇热回流提取， 合并提取液， 浓缩至无醇味， 依次用石油醚、 乙酸乙 酯和水饱和的正丁醇萃取， 分别得到石油醚萃取物、 乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物； (b) 步骤(a)中正丁醇萃取物用大孔树脂除杂， 先用8乙醇洗脱10个柱体积， 再用70乙醇洗 脱12个柱体积， 收集70洗脱液， 减压浓缩得70乙醇洗脱浓缩物； (c)步骤(b)中70乙醇 洗脱浓缩物用正相硅胶分离， 依次用体积比为40:1、 20:1、 10:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度 洗脱得到4个组分； (d)步骤(c)中组分4用正相硅胶进一步分离， 依次用体积比为8:1、 5:。
5、1和 2:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分； (e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反 相硅胶分离， 用体积百分浓度为75的甲醇水溶液等度洗脱， 收集814个柱体积洗脱液， 洗脱液减压浓缩得到化合物()。 6.根据权利要求5所述的化合物()的制备方法， 其特征在于： 步骤(a)用90乙醇热回 流提取， 合并提取液。 7.根据权利要求5所述的化合物()的制备方法， 其特征在于： 所述大孔树脂为AB-8型 大孔吸附树脂。 8.根据权利要求5所述的化合物()的制备方法， 其特征在于： 步骤(a)中用二氯甲烷代 替乙酸乙酯进行萃取， 得到二氯甲烷萃取物。 9.权利要求1所述的化合物()在制。
6、备治疗高泌乳素血症的药物中的应用。 10.权利要求24任一所述的富马酸酮替芬的药物组合物在制备治疗高泌乳素血症的 药物中的应用。 权利要求书 1/1 页 2 CN 105906648 A 2 富马酸酮替芬的药物组合物及其在生物医药中的应用 技术领域 0001 本发明属于生物医药领域， 涉及富马酸酮替芬的新用途， 具体涉及富马酸酮替芬 的药物组合物及其在生物医药中的应用。 背景技术 0002 富马酸酮替芬兼有组胺H1受体拮抗作用和抑制过敏反应介质释放作用， 不仅抗过 敏作用较强， 且药效持续时间较长， 故对预防各种支气管哮喘发作及外源性哮喘的疗效比 对内源性哮喘更佳。 发明内容 0003 本发明。
7、的目的在于提供一种富马酸酮替芬的药物组合物， 该药物组合物中含有富 马酸酮替芬和一种结构新颖的天然产物， 富马酸酮替芬和该天然产物可以协同治疗高泌乳 素血症。 0004 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的： 0005 一种具有下述结构式的化合物()， 0006 0007 一种富马酸酮替芬的药物组合物， 包括富马酸酮替芬、 如权利要求1所述的化合物 ()和药学上可以接受的载体， 制备成需要的剂型。 0008 进一步地， 药学上可以接受的载体包括稀释剂、 赋形剂、 填充剂、 粘合剂、 湿润剂、 崩解剂、 吸收促进剂、 表面活性剂、 吸附载体或润滑剂。 0009 进一步地， 所述剂型包括。
8、片剂、 胶囊剂、 口服液、 口含剂、 颗粒剂、 冲剂、 丸剂、 散剂、 膏剂、 丹剂、 混悬剂、 粉剂、 溶液剂、 注射剂、 栓剂、 喷雾剂、 滴剂或贴剂。 0010 上述化合物()的制备方法， 包含以下操作步骤： (a)将华山参粉碎， 用8595乙 醇热回流提取， 合并提取液， 浓缩至无醇味， 依次用石油醚、 乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃 取， 分别得到石油醚萃取物、 乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物； (b)步骤(a)中正丁醇萃取物 用大孔树脂除杂， 先用8乙醇洗脱10个柱体积， 再用70乙醇洗脱12个柱体积， 收集70 洗脱液， 减压浓缩得70乙醇洗脱浓缩物； (c)步骤(b)中70乙醇洗脱浓。
9、缩物用正相硅胶 分离， 依次用体积比为40:1、 20:1、 10:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4个组分； (d) 步骤(c)中组分4用正相硅胶进一步分离， 依次用体积比为8:1、 5:1和2:1的二氯甲烷-甲醇 说明书 1/5 页 3 CN 105906648 A 3 梯度洗脱得到3个组分； (e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离， 用体积 百分浓度为75的甲醇水溶液等度洗脱， 收集814个柱体积洗脱液， 洗脱液减压浓缩得到 化合物()。 0011 进一步地， 化合物()的制备方法中， 步骤(a)用90乙醇热回流提取， 合并提取 液。 0012 进一步地， 化合物。
10、()的制备方法中， 所述大孔树脂为AB-8型大孔吸附树脂。 0013 进一步地， 化合物()的制备方法中， 步骤(a)中用二氯甲烷代替乙酸乙酯进行萃 取， 得到二氯甲烷萃取物。 0014 上述化合物()在制备治疗高泌乳素血症的药物中的应用。 0015 上述富马酸酮替芬的药物组合物在制备治疗高泌乳素血症的药物中的应用。 0016 本发明的优点： 本发明提供的富马酸酮替芬的药物组合物中含有富马酸酮替芬和 一种结构新颖的天然产物， 富马酸酮替芬和该天然产物单独作用时， 具有治疗高泌乳素血 症作用； 二者联合作用时， 治疗高泌乳素血症效果进一步提高， 可以开发成治疗高泌乳素血 症的药物。 具体实施方式。
11、 0017 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容， 但并不以此限定本发明保护范 围。 0018 实施例1： 化合物()分离制备及结构确证 0019 试剂来源： 乙醇、 石油醚、 乙酸乙酯、 正丁醇、 二氯甲烷为分析纯， 购自上海凌峰化 学试剂有限公司， 甲醇， 分析纯， 购自江苏汉邦化学试剂有限公司。 0020 分离方法： (a)将华山参(2kg)粉碎， 用90乙醇热回流提取(20L3次)， 合并提取 液， 浓缩至无醇味(4L)， 依次用石油醚(4L3次)、 乙酸乙酯(4L3次)和水饱和的正丁醇 (4L3次)萃取， 分别得到石油醚萃取物、 乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物； (b)步骤(a)。
12、中 正丁醇萃取物用AB-8型大孔树脂除杂， 先用8乙醇洗脱10个柱体积， 再用70乙醇洗脱12 个柱体积， 收集70洗脱液， 减压浓缩得70乙醇洗脱浓缩物； (c)步骤(b)中70乙醇洗脱 浓缩物用正相硅胶分离， 依次用体积比为40:1(8个柱体积)、 20:1(8个柱体积)、 10:1(8个柱 体积)和5:1(10个柱体积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4个组分； (d)步骤(c)中组分4用 正相硅胶进一步分离， 依次用体积比为8:1(8个柱体积)、 5:1(10个柱体积)和2:1(5个柱体 积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分； (e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反 相硅胶分离。
13、， 用体积百分浓度为75的甲醇水溶液等度洗脱， 收集814个柱体积洗脱液， 洗脱液减压浓缩得到化合物()(纯度大于98)。 0021 结构确证： HR-ESI-MS显示M+H+为m/z263.1209， 结合核磁特征可得分子式为 C15H18O4， 不饱和度为7。 核磁共振氢谱数据 H(ppm， CD2Cl2， 500MHz)： H-1a(2.14， dd， J16.0， 13.5Hz)， H-1b(2.85， dd， J16.0， 3.7Hz)， H-4(7.26， s)， H-5(2.74， d， J10.6Hz)， H-8 (3.23， d， J10.3Hz)， H-9(1.55， m)。
14、， H-10(1.77， m)， H-12a(5.23， t， J2.0Hz)， H-12a (5.36， t， J2.0Hz)， H-13a(4.32， dd， J13.4， 2.0Hz)， H-13b(4.65， dd， J13.4， 2.0Hz)， H-14(1.12， d， J6.4Hz)， H-15(1.84， s)； 核磁共振碳谱数据 C(ppm， CD2Cl2， 125MHz)： 42.5 (CH2， 1-C)， 199.3(C， 2-C)， 136.5(C， 3-C)， 145.7(CH， 4-C)， 47.5(CH， 5-C)， 73.4(C， 6-C)， 说明书 2/5 页。
15、 4 CN 105906648 A 4 103.7(C， 7-C)， 73.4(CH， 8-C)， 42.4(CH， 9-C)， 40.5(CH， 10-C)， 146.7(C， 11-C)， 112.7(CH2， 12-C)， 69.3(CH2， 13-C)， 15.5(CH3， 14-C)， 16.6(CH3， 15-C)。 IR光谱(1675cm-1)以及紫外吸 收波长(238nm)表明该化合物含有一个 , -不饱和酮羰基。 氢谱显示该化合物含有一个乙 烯甲基质子信号H1.84(3H， s， Me-15)， 一个双峰甲基信号H1.12(3H， d， J6.4Hz， Me- 14)， 一组。
16、环外双键信号H5.23(1H， t， J2.0Hz， H-12a)和5.36(1H， t， J2.0Hz， H- 12b)， 一个连氧亚甲基质子信号H4.32(1H， dd， J13.4， 2.0Hz， H-13a)和4.65(1H， dd， J 13.4， 2.0Hz， H-13b)， 一个烯属次甲基质子信号H7.26(1H， s， H-4)以及一个连氧次甲 基质子信号H3.23(1H， d， J10.3Hz， H-8)。 该化合物的碳谱显示15个碳信号， 其中有两 组双键碳信号， 一个羰基碳信号， 一个半缩酮碳信号以及三个连氧碳信号。 综合高分辨质谱 和核磁数据显示， 该化合物可能为一个倍。
17、半萜类化合物。 查阅文献可知， 该化合物和已知化 合物LyophylloneA具有相似的结构。 比较两者核磁数据可知， 相较于已知化合物， 新化合 物中C-6和C-7位的碳信号向高场位移， 同时新化合物中多出了一个不饱和度。 故而， 猜测该 化合物还含有一个额外的环。 比较新化合物和已知化合物的核磁数据可以发现， C-6和C-7 位的碳信号均向高场位移， 结合高分辨数据， 可以确认该化合物在C-6和C-7之间存在一个 三元氧环。 NOESY谱中， H-10与Me-14， H-5与H-9以及H-8与Me-14的相关性说明8-OH为 构型， H-10与Me-14为 构型。 同时， Ha-12与H-。
18、10以及Ha-13与H-8的相关性说明五元内酯环与六元 环是顺式稠合的， C-6和C-7之间的三元氧环是 朝向的。 综合氢谱、 碳谱、 HMBC谱和NOESY谱， 以及文献关于相关类型核磁数据， 可基本确定该化合物如下所示， 立体构型进一步通过ECD 试验确定， 理论值与实验值基本一致。 0022 该化合物化学式及碳原子编号如下： 0023 0024 实施例2： 药理作用 0025 本实施例使用背部皮下注射盐酸甲氧氯普胺注射液制备高泌乳素血症(HPRL)大 鼠模型， 观察药物降低血清泌乳素(PRL)， 升高雌二醇(E2)、 孕酮(P)水平等方面的抗高泌乳 素血症作用。 0026 1、 材料与方。
19、法 0027 1.1动物 0028 雌性未孕Wistar大鼠60只， SPF级， 体质量200220g， 购于湖北省实验动物研究中 心。 0029 1.2试剂与样品 说明书 3/5 页 5 CN 105906648 A 5 0030 富马酸酮替芬购自中国药品生物制品检定所。 化合物()自制， 制备方法见实施例 1。 盐酸甲氧氯普胺注射液(灭吐灵， 徐州莱恩药业有限公司， 规格1mL： 10mg)； 甲磺酸溴隐亭 (Switzerland， 2.5mg/片， 研碎后用蒸馏水溶解为0.045mg/mL的水溶液， 使用时充分摇匀)。 E2、 P、 PRLELISA酶联免疫试剂盒(上海丽臣生物有限公司。
20、)。 0031 1.3仪器 0032 J2714恒温箱(武汉大江电器仪表厂)； RaytoRT-6000酶标仪、 RaytoRT-3100全自动 洗板机(深圳雷杜生命科学股份有限公司)。 0033 1.4大鼠分组及模型制备 0034 大鼠随机分为6组， 每组10只， 分别为正常对照组、 模型对照组、 阳性对照组(甲磺 酸溴隐亭组， 50mgkg-1)和富马酸酮替芬组(80mgkg-1)、 化合物()组(80mgkg-1)、 富马 酸酮替芬与化合物()组合物组 【40mgkg-1富马酸酮替芬+40mgkg-1化合物()】 。 正常组 每只大鼠背部皮下注射生理盐水1mL， 其他组大鼠背部皮下注射盐。
21、酸甲氧氯普胺注射液 50mg/kg体质量， 每天上午下午分别定时注射1次， 连续5d。 各组动物在造模成功后， 灌胃相 应药物或蒸馏水， 每日1次， 连续20d。 正常对照组与模型对照组大鼠灌胃给予纯化水。 0035 1.5PRL水平测定实验 0036 含量测定采用酶联免疫分析方法， 严格按照ELISA试剂盒说明书中实验操作流程 进行。 0037 1.6E2、 P水平测定实验 0038 采用酶联免疫分析方法， 严格按照ELISA试剂盒说明书中实验操作流程进行。 0039 1.7统计学方法 0040 实验数据用均数标准差(xs)表示， 应用SPSS18.0版统计软件进行单因素方差 分析和t检验，。
22、 以P0.05为差异有统计学意义。 0041 2、 实验结果 0042 2.1对高泌乳素血症(HPRL)模型大鼠PRL水平的影响 0043 与正常对照组比较， 模型对照组大鼠PRL水平明显升高(P0.01)； 与模型对照组 比较， 富马酸酮替芬与化合物()组合物组和甲磺酸溴隐亭组PRL水平显著降低(P0.01)； 与模型对照组比较， 富马酸酮替芬组、 化合物()组PRL水平降低(P0.05)。 结果见表1。 0044 2.2对高泌乳素血症模型大鼠E2、 P水平的影响 0045 与正常对照组比较， 模型对照组大鼠E2、 P水平明显降低(P0.01)。 与模型对照组 比较， 富马酸酮替芬与化合物(。
23、)组合物组和甲磺酸溴隐亭组E2、 P水平显著提高(P 0.01)； 与模型对照组比较， 富马酸酮替芬组、 化合物()组E2、 P水平提高(P0.05)。 见表1。 0046 表1对HPRL大鼠PRL、 E2、 P含量的影响 说明书 4/5 页 6 CN 105906648 A 6 0047 0048 血清PRL浓度的增高会扰乱下丘脑-垂体-性腺轴的功能， 使下丘脑促性腺激素释 放激素(GnRH)合成和分泌受阻， 并减弱了垂体对GnRH的敏感性， 导致促FSH和LH分泌低下， 继而卵巢分泌E2、 P不足， 造成卵泡发育不良和黄体功能不足而致月经失调、 闭经和不孕等。 0049 上述结果表明， 富马酸酮替芬、 化合物()单独作用时， 对高泌乳素血症具有治疗 作用； 富马酸酮替芬和化合物()联合作用时， 对高泌乳素血症的治疗效果显著提高， 可以 开发成治疗高泌乳素血症的药物。 0050 上述实施例的作用在于说明本发明的实质性内容， 但并不以此限定本发明的保护 范围。 本领域的普通技术人员应当理解， 可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换， 而不脱离本发明技术方案的实质和保护范围。 说明书 5/5 页 7 CN 105906648 A 7 。