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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201610335656.8 (22)申请日 2016.05.19 (71)申请人 苏州大学 地址 215123 江苏省苏州市苏州工业园区 仁爱路199号 (72)发明人 徐冬梅洪苗苗 (74)专利代理机构 苏州创元专利商标事务所有 限公司 32103 代理人 陶海锋孙周强 (51)Int.Cl. C07D 491/107(2006.01) C09K 11/06(2006.01) G01N 21/64(2006.01) G01N 21/78(2006.01) (54)发明名称 基。
2、于罗丹明B和氨乙基硫醚的化合物、 其制 备方法及应用 (57)摘要 本发明公开了一种基于罗丹明B和氨乙基硫 醚的化合物、 其制备方法及应用， 其是一个具有 优良综合性能和可逆传感机理的新型罗丹明类 Hg2+比色和荧光探针。 其优良综合性能包括： 原 料易得， 合成方法简单， 分子结构简单； 对Hg2+选 择性好、 灵敏度高、 抗干扰能力强、 细胞毒性小； 检测可以在接近中性的几乎纯水缓冲溶液中进 行； 可以有效检测池塘和自来水样中的Hg2+； 可 以检测HgCl2中的Hg2+； 分子中含有一个脂肪族伯 氨基， 可以进一步进行自身改性或者修饰其他材 料。 权利要求书1页 说明书7页 附图5页 C。
3、N 105859734 A 2016.08.17 CN 105859734 A 1.一种基于罗丹明B和氨乙基硫醚的化合物的制备方法， 包括以下步骤， 氮气环境下， 有机溶剂中， 以罗丹明B和氨乙基硫醚为原料， 以乙胺化合物为添加剂， 搅拌反应得到基于 罗丹明B和氨乙基硫醚的化合物。 2.根据权利要求1所述基于罗丹明B和氨乙基硫醚的化合物的制备方法， 其特征在于： 所述有机溶剂为乙腈、 乙醇、 二氯甲烷中的一种或者几种； 所述添加剂为N,N-二异丙基乙 胺； 反应温度为2060， 反应时间为1836h； 罗丹明B和氨乙基硫醚的摩尔比为1(1 7)。 3.根据权利要求2所述基于罗丹明B和氨乙基硫醚。
4、的化合物的制备方法， 其特征在于： 所述添加剂用量为罗丹明B摩尔量的7倍； 反应温度为3050， 反应时间为2030h； 罗丹 明B和氨乙基硫醚的摩尔比为1(35)。 4.根据权利要求1所述基于罗丹明B和氨乙基硫醚的化合物的制备方法， 其特征在于： 在反应结束后， 旋转蒸发除去溶剂， 进行柱层析分离， 真空干燥后得到基于罗丹明B和氨乙 基硫醚的化合物。 5.根据权利要求14所述任意一种基于罗丹明B和氨乙基硫醚的化合物的制备方法制 备的基于罗丹明B和氨乙基硫醚的化合物； 所述基于罗丹明B和氨乙基硫醚的化合物的化学 结构式如下： 。 6.权利要求5所述基于罗丹明B和氨乙基硫醚的化合物作为Hg2+比。
5、色探针和/或作为Hg2+ 荧光探针的应用。 7.权利要求5所述基于罗丹明B和氨乙基硫醚的化合物在检测Hg2+中的应用。 8.根据权利要求7所述应用， 其特征在于： 检测Hg2+时的溶液体系为CH3CN/HEPES缓冲溶 液体系。 9.根据权利要求8所述应用， 其特征在于： CH3CN/HEPES缓冲溶液体系中， CH3CN与HEPES 缓冲溶液的体积比为1199。 10.权利要求5所述基于罗丹明B和氨乙基硫醚的化合物在检测水环境中Hg2+的应用。 权利要求书 1/1 页 2 CN 105859734 A 2 基于罗丹明B和氨乙基硫醚的化合物、 其制备方法及应用 技术领域 0001 本发明属于重。
6、金属离子探针技术领域， 具体涉及一种基于罗丹明B和氨乙基硫醚 的化合物及其制备方法， 以及该化合物作为汞离子探针在检测汞离子中的应用。 背景技术 0002 汞是毒性排行第二的常见有毒重金属， 无论是单质汞、 无机汞， 还是有机汞， 都会 破坏肾、 中枢神经系统以及大脑等器官， 导致认知和运动功能的紊乱， 甚至癌症。 汞及其化 合物若存在天然水体中， 极易污染水环境， 对大范围人群造成伤害。 Hg2+是汞污染物中最常 见的形式， 具有较高的水溶性， 因此， 其检测至关重要。 光谱探针由于操作简单、 检测灵敏快 速、 选择性高、 成本低等优点而备受关注。 罗丹明类光谱探针由于摩尔吸收系数大、 荧光。
7、量 子产率高、 吸收和发射波长长等优点而得到了广泛的发展。 0003 但是目前已报道的罗丹明类光谱探针有些原料难得、 结构复杂、 合成困难， 有些只 能在纯有机溶剂 （比如无水乙醇） 下检测Hg2+， 或抗干扰能力和实用性欠佳， 综合性能好的罗 丹明类Hg2+光谱探针非常少 （参见： XuL,WangS,LvYN,SonYA,CaoDR.Ahighly selectiveandsensitivephotoswitchablefluorescentprobeforHg2+basedon bisthienylethene-rhodamine6Gdyadandforlivecellsimaging.。
8、Spectrochim. ActaPartA2014;128:567-574； BhallaV,TejpalR ,KumarM.Rhodamine appendedterphenyl:Areversible “off-on” fluorescentchemosensorformercury ions.Sens.ActuatorsB2010;151:180-185； ZhangX,ZhuYY.Anewfluorescent chemodosimeterforHg2+-selectivedetectioninaqueoussolutionbasedonHg2+- promotedhydrolysi。
9、sofrhodamine-glyoxylicacidconjugate.Sens.ActuatorsB 2014;202:609-614） 。 另外， 罗丹明类Hg2+光谱探针的信号的转换一般通过两种方法实现， 一种是加入汞离子， 与探针配位并诱导螺内酰胺开环， 这样常常会对其他金属阳离子有响 应或者延迟反应； 另一种是汞离子激活硫代羰基化学剂量反应， 这个最大问题就是汞离子 的反应是不可逆的， 因此就不能作后续分析， 探针无法重复使用， 汞离子也无法回收， 导致 无法实用。 现有含有S原子的罗丹明类光谱探针大多具有不可逆的传感机理 （Jia-Sheng Wu,In-ChulHwang,Kwa。
10、ngS.KimandJongSeungKim.Rhodamine-basedHg2+- selectivechemodosimeterinaqueoussolution:fluorescentOFF-ON.Organic Letters.2007,5(9):907-910； SatheshkumarAngupillai,Ji-YongHwang,Jae- YoungLee ,BodduAnandaRao ,Young-A .Son .Efficientrhodamine- thiosemicarbazide-basedcolorimetric/fluorescent turn-on chemo。
11、dosimeters forthedetectionofHg2+inaqueoussamples.Sens.ActuatorsB2015;214: 101-110） ， 而可逆型探针可以通过加入强络合剂等条件使探针再生， 实现重金属离子的回 收和探针的循环利用， 从而提高探针的实用价值。 因此， 很有必要通过研发新的反应合成一 个具有优良综合性能和可逆识别机理的新型罗丹明类Hg2+比色和荧光探针。 说明书 1/7 页 3 CN 105859734 A 3 发明内容 0004 本发明的目的是提供一种基于罗丹明B和氨乙基硫醚的化合物及其制备方法； 得 到的化合物不但可以从比色和荧光双通道检测Hg2。
12、+， 而且具有优良的综合性能， 特别是本发 明的化合物可以在几乎纯水体系中检测汞离子， 真正意义上实现了对自然水体的检测。 0005 为达到上述发明目的， 本发明采用的技术方案是： 一种基于罗丹明B和氨乙基硫醚 的化合物的制备方法为， 氮气环境下， 有机溶剂中， 以罗丹明B和氨乙基硫醚为原料， 以乙胺 化合物为添加剂， 搅拌反应得到基于罗丹明B和氨乙基硫醚的化合物； 简称为RMTE。 0006 上述技术方案中， 有机溶剂为乙腈、 乙醇、 二氯甲烷中的一种或者几种， 本发明公 开的溶剂体系有利于原料的分散， 增加罗丹明B和氨乙基硫醚的反应性， 提高产物收率。 0007 上述技术方案中， 添加剂为。
13、N,N-二异丙基乙胺； 与反应体系具有良好的相容性， 有 利于提高罗丹明B和氨乙基硫醚的反应性， 提高产物收率。 0008 上述技术方案中， 反应温度为2060， 反应时间为1836h； 罗丹明B和氨乙基 硫醚的摩尔比为1(17)。 优选的， 所述添加剂用量为罗丹明B摩尔量的7倍； 反应温度为30 50， 反应时间为2030h； 罗丹明B和氨乙基硫醚的摩尔比为1(35)。 本发明首次利 用氨乙基硫醚改性罗丹明B， 在公开的条件下， 仅需要一步反应， 即可较高收率的得到产物 RMTE， 取得了意想不到的技术效果。 0009 优选的， 在反应结束后， 旋转蒸发除去溶剂， 进行柱层析分离， 真空干燥。
14、后得到基 于罗丹明B和氨乙基硫醚的化合物。 柱层析分离时淋洗液为甲醇/三氯甲烷/石油醚混合液， 优选的体积比为甲醇三氯甲烷石油醚为1122。 得到的产物RMTE为黄色固体粉末， 产率 为35.1%54.4%， 熔点为167.4。 0010 具体合成方法比如， 以乙腈， 或乙醇， 或二氯甲烷为溶剂， N,N-二异丙基乙胺为添 加剂， 摩尔比为1(17)的罗丹明B和氨乙基硫醚， 在N2保护下， 在温度为2060条件下 搅拌反应1836h， 冷却至室温， 旋转蒸发除去溶剂， 进行柱层析分离， 淋洗液为甲醇/三氯 甲烷/石油醚， 1/12/2(v/v/v)， 真空干燥， 得到黄色固体粉末目标产物RMT。
15、E， 熔点为167.4 ， 提纯前收率最高到约80%， 提纯后产率最高到约55%， 达到本领域罗丹明B类化合物的较 高收率。 0011 本发明还公开了根据上述制备方法制备的基于罗丹明B和氨乙基硫醚的化合物， 其化学结构式如下： 。 0012 反应方程式可表示为： 说明书 2/7 页 4 CN 105859734 A 4 通过紫外-可见吸收光谱和荧光光谱分析证实， 本发明的基于罗丹明B和氨乙基硫醚的 化合物对于Hg2+具有非常高的灵敏度以及优异的选择性， 不受共存离子的影响。 因此， 本发 明还公开了上述基于罗丹明B和氨乙基硫醚的化合物在检测Hg2+中的应用。 0013 本发明公开的基于罗丹明B。
16、和氨乙基硫醚的化合物不但可以从比色和荧光双通道 检测Hg2+， 而且具有优良的综合性能； 因此本发明还公开了上述基于罗丹明B和氨乙基硫醚 的化合物作为Hg2+比色探针的应用； 以及上述基于罗丹明B和氨乙基硫醚的化合物作为Hg2+ 荧光探针的应用。 0014 本发明的基于罗丹明B和氨乙基硫醚的化合物可以有效检测来自于HgCl2中的Hg2 +； 解决了现有Hg2+探针对HgCl2中的Hg2+检测效果差甚至不能检测的缺陷， 取得了意想不到 的技术效果， 有效检测来自于HgCl2中的Hg2+更加具有工业实用性。 并且本发明的基于罗丹 明B和氨乙基硫醚的化合物检测范围广， 可以检出Hg2+的浓度低至0.。
17、1 M， 利于工业化应用。 0015 根据本发明的实施例， 发现多种金属离子中只有Hg2+可使RMTE在561nm处的吸光 度和在578nm处的荧光大大增强， 其荧光增强达到170倍， 众多其他离子对RMTE的紫外-可 见吸收光谱和荧光光谱基本没影响， 表明在CH3CN/HEPES缓冲溶液(1199,v/v,pH= 7.05)中RMTE对Hg2+有很好的选择性和灵敏度； 同时表明本发明的基于罗丹明B和氨乙基硫 醚的化合物适用于接近纯水的溶剂体系， 克服了现有探针需要在纯有机溶剂中才能检测的 缺陷。 0016 特别的， 本发明的基于罗丹明B和氨乙基硫醚的化合物可以直接用于水环境中汞 离子的检测，。
18、 可有效的检测水中Hg2+； 无论是自然水、 生活水等， 只要含有Hg2+， 都可以有效 检出， 克服了现有技术不能用于环境水检测汞离子的缺陷， 既节约又环保， 从而可以低成本 的检测出与群众生活息息相关的环境水中的汞离子， 在实地环境水样中的Hg2+检测方面有 很好的应用前景， 很强的实用性。 因此本发明进一步公开了基于罗丹明B和氨乙基硫醚的化 合物在检测水环境中Hg2+的应用。 0017 由于上述技术方案的运用， 本发明与现有技术相比具有如下优点： 1.本发明采用一步法， 从罗丹明B和氨乙基硫醚出发， 简单地合成了一种结构简单的 新型罗丹明衍生物RMTE， 反应条件温和； 克服了现有罗丹明。
19、B化合物制备需要多步反应 （至 少两步） 、 需要毒性很大的原料 （氯化亚砜、 三氯氧磷等） 等一系列缺陷； 而且得到的产物提 纯简单、 收率较高 （提纯前收率最高到约80%， 提纯后产率最高到约55%） ， 取得了意想不到的 技术效果。 0018 2.本发明用简单的方法合成了一种结构简单的新型罗丹明衍生物RMTE， 其分子 结构合理， 含有一个脂肪族伯氨基， 不但可以进一步进行自身改性或者修饰其他材料； 而且 能够很好的与罗丹明B分子配合， 在遭遇汞离子时， 能够高效、 准确的检测汞离子， 最低检 出限低至0.1 M。 0019 3.本发明公开的基于罗丹明B和氨乙基硫醚的化合物可以从比色和荧。
20、光双通道 检测Hg2+， 特别是可以检测HgCl2中的Hg2+， 比检测来自Hg(ClO4)2的Hg2+具有更好的实用性； 成功解决了现有罗丹明B类汞离子探针无法检出或者无法准确检出来自HgCl2中的Hg2+的问 题， 为推进罗丹明B类汞离子探针实用化作出重大贡献。 0020 4.本发明公开的基于罗丹明B和氨乙基硫醚的化合物克服了现有技术需要在大 量有机溶剂中甚至在无水乙醇中才能检测汞离子的缺陷， 可用于近100%水相中Hg2+的检测， 说明书 3/7 页 5 CN 105859734 A 5 根据本发明实施例， 在CH3CN/HEPES缓冲溶液(1/99,v/v,pH=7.05， 本领域认为。
21、其为纯水 体系)中RMTE对Hg2+有很好的选择性和灵敏度； 取得了意想不到的技术效果。 0021 5.本发明公开的基于罗丹明B和氨乙基硫醚的化合物对Hg2+检测灵敏度高、 选择 性优异、 检测范围广； 特别是具有可逆性， 成功解决了现有探针不可逆的缺陷， 为罗丹明B类 汞离子探针实现工业实用化作出重大贡献。 附图说明 0022 图1为在RMTE的CH3CN/HEPES缓冲溶液(1/1,v/v,pH=7.05)中加入Hg2+， 测定加 入离子前后的紫外-可见吸收光谱和荧光光谱图； 图2为在RMTE的CH3CN/HEPES缓冲溶液(2/8,v/v,pH=7.05)中加入Hg2+， 测定加入离 子。
22、前后的紫外-可见吸收光谱和荧光光谱图； 图3为在RMTE的CH3CN/HEPES缓冲溶液(1/99,v/v,pH=7.05)中加入金属离子， 测定 加入离子前后的紫外-可见吸收光谱和荧光光谱图； 图4为含有不同浓度Hg2+的RMTE溶液的紫外-可见吸收光谱和荧光光谱图； 图5为共存离子对含有Hg2+的RMTE溶液的吸光度和荧光强度影响图； 图6为RMTE检测Hg2+的可逆性的荧光光谱图； 图7为RMTE对sf-9细胞的毒性图。 具体实施方式 0023 实施例一： Hg2+探针RMTE的制备 根据表1的原料比例 （罗丹明B和氨乙基硫醚的摩尔比） 以及反应条件， 以二氯甲烷为溶 剂， N,N-二异。
23、丙基乙胺为添加剂， 在N2保护下， 搅拌反应， 冷却至室温， 旋转蒸发除去溶剂， 进行柱层析分离， 淋洗液为甲醇/三氯甲烷/石油醚， 1/12/2(v/v/v)， 干燥， 得到黄色固体 粉末目标产物RMTE。 0024 核磁， 1HNMR(400MHz,CDCl3), /ppm:1.16(t,12H,J=6.8Hz),2.23 (t,2H,J=8Hz),2.50(t,2H,J=6.4Hz),2.77(t,2H,J=6.4Hz),3.272.37 (m,10H),3.66(s,2H),6.27(d,2H,J=6.4Hz),6.37(d,2H,J=2.4Hz),6.44 (s,2H),7.087.。
24、10(m,1H),7.437.46(m,2H),7.897.91(m,1H)， 13CNMR(300 MHz,CDCl3), /ppm:12.35,29.37,34.71,40.24,40.83,44.31,64.69,97.34, 105.62,107.96,122.63,123.74,128.02,128.89,131.11,132.33,148.82, 153.13,167.90； 质谱， LC-MS:M+H+=545.2944,M+Na+=567.2755； 红外光谱， FTIR (cm-1):v(NH)3431;v(CH3,CH2)2972,2925,2854;v(C=O)1695;。
25、v(ArH)1548, 1519,1463;v(C-O-C)1118； 元素分析， C32H40N4O2S3(%):计算值C,70.55;N,10.28; H,7.40， 实验值C,70.34;N,10.04;H,7.42。 0025 表1原料比例以及反应条件 说明书 4/7 页 6 CN 105859734 A 6 实施例二： RMTE对Hg2+的响应 在RMTE的CH3CN/HEPES缓冲溶液(1/1,v/v,pH=7.05)中加入Hg2+， 测定加入离子前 后的紫外-可见吸收光谱和荧光光谱， 结果如图1， 溶剂： CH3CN/HEPES缓冲溶液(1/1,v/v, pH=7.05)， 浓度。
26、： 20 M(RMTE)， 200 M(Hg2+)。 激发波长： 520nm， 狭缝宽度： 5nm。 Hg2+的 加入使RMTE的紫外-可见吸收光谱在560nm处出现新的吸收峰 （图1左图） ， 荧光显著增强 33.9倍 （图1右图） 。 0026 在RMTE的CH3CN/HEPES缓冲溶液(2/8,v/v,pH=7.05)中加入Hg2+， 测定加入离 子前后的紫外-可见吸收光谱和荧光光谱， 结果如图2， 溶剂： CH3CN/HEPES缓冲溶液(2/8, v/v,pH=7.05)， 浓度： 20 M(RMTE)， 200 M(Hg2+)。 激发波长： 520nm， 狭缝宽度： 5nm。 Hg2。
27、+的加入使RMTE的紫外-可见吸收光谱在560nm处出现新的吸收峰 （图2左图） ， 荧光显著 增强143.3倍 （图2右图） 。 0027 在RMTE的CH3CN/HEPES缓冲溶液(1/50,v/v,pH=7.05)中加入Hg2+， 测定加入离 子前后的紫外-可见吸收光谱和荧光光谱， 溶剂： CH3CN/HEPES缓冲溶液(1/50,v/v,pH= 7.05)， 浓度： 20 M(RMTE)， 200 M(Hg2+)， 激发波长： 520nm， 狭缝宽度： 5nm。 Hg2+的加入 使RMTE的紫外-可见吸收光谱在560nm处出现新的吸收峰， 荧光显著增强156.4倍。 0028 在RMT。
28、E的CH3CN/HEPES缓冲溶液(1/99,v/v,pH=7.05)中， 加入Na+、 K+、 Ag+、 Ca2 +、 Mg2+、 Fe3+、 Cu2+、 Zn2+、 Cr3+、 Pb2+、 Ni2+、 Fe2+、 Mn2+、 Co2+、 Cd2+和Hg2+， 测定加入离子前后的紫 外-可见吸收光谱和荧光光谱， 结果如图3， 紫外-可见吸收光谱(a)和荧光光谱(b)， 溶 说明书 5/7 页 7 CN 105859734 A 7 剂： CH3CN/HEPES缓冲溶液(1/99,v/v,pH=7.05)， 浓度： 20 M(RMTE)， 200 M(金属离 子)， 激发波长： 520nm， 狭。
29、缝宽度： 5nm。 发现只有Hg2+可使RMTE在561nm处的吸光度 （图3a） 和在578nm处的荧光 （图3b） 大大增强， 其荧光增强达到170倍， 众多其他离子对RMTE的紫 外-可见吸收光谱和荧光光谱基本没影响。 表明在CH3CN/HEPES缓冲溶液(1/99,v/v,pH= 7.05)中RMTE对Hg2+有很好的选择性和灵敏度。 0029 实施例三： RMTE与Hg2+浓度的关系 图4为含有不同浓度Hg2+的RMTE溶液的紫外-可见吸收光谱(左)和荧光光谱(右)， 溶剂： CH3CN/HEPES缓冲溶液(1/99,v/v,pH=7.05)， 浓度： 20 M （RMTE） ， H。
30、g2+浓度从下至 上为0、 10、 20、 30、 40、 60、 80、 100、 120、 140、 160、 180和200 M， 插图分别为在561nm处RMTE 吸光度(A)与Hg2+浓度的关系和在578nm处RMTE荧光强度(F)与Hg2+浓度的关系， 激发 波长： 520nm， 狭缝宽度： 5nm。 从图4左图可以看到， 随着Hg2+浓度增加， RMTE在561nm处的 吸光度先增加， 后趋于稳定。 在Hg2+浓度很广的范围内， 吸光度A与Hg2+浓度呈有良好的线性 关系， 线性方程为A=0.00096Hg2+， 相关系数R=0.994。 从图4右图可以看到， 不加Hg2+时， 。
31、RMTE几乎无荧光， 加入Hg2+后， RMTE荧光大幅增强， 并且在Hg2+浓度0120 M范围内， 在578 nm处的荧光强度F与Hg2+浓度具有良好的线性关系， 线性方程为F=24.7536Hg2+15.57， 相关系数R=0.990。 根据公式 =3S/K计算得到利用紫外-可见吸收光谱和荧光光谱检测Hg2+ 的检测限 分别为2.08 M和0.144 M， 其中S为不含Hg2+的空白溶液5次测定的吸光度或荧 光强度的标准偏差， K为溶液吸光度或荧光强度与Hg2+浓度线性关系中的直线斜率。 0030 实施例四： 共存离子对RMTE检测Hg2+的影响 为了考察RMTE检测Hg2+的实用性， 。
32、在含有Hg2+的RMTE溶液中， 分别加入200 LNa+、 Ca2 +、 Mg2+、 Cd2+、 Fe2+、 Ni2+、 Zn2+、 Co2+和Ag+， 或150 LK+、 Fe3+、 Pb2+、 Cr3+、 Mn2+、 Cu2+等常见金属离 子中的一种， 图5为共存离子对含有Hg2+的RMTE溶液的吸光度(图5a)和荧光强度(图5b) 影响， 溶剂： CH3CN/HEPES缓冲溶液(1/99,v/v,pH=7.05)， 浓度： 20 M(RMTE)， 200 M (Hg2+、 Na+、 Ca2+、 Mg2+、 Cd2+、 Fe2+、 Cr3+、 Mn2+、 Ni2+、 Co2+、 Zn2+。
33、和Ag+)， 150 M(K+、 Fe3+、 Pb2+和Cu2 +)， 激发波长： 520nm， 狭缝宽度： 5nm。 加入这些金属离子几乎不影响含有Hg2+的RMTE溶液 的最大吸光度和最大荧光强度。 因此RMTE在检测Hg2+时具有很强的抗干扰能力。 0031 实施例五： 用RMTE分析环境水样中的Hg2+ 在与前面所用的相同的检测条件下， 用RMTE对苏州大学独墅湖校区的自来水和池塘水 进行加标分析， 具体的检测方法： 分别取1mL苏州大学独墅湖校区的池塘水 （过滤后用） 和 自来水， 加入100 L的RMTE储备液， 再分别加入35 M和80 M的Hg2+， 用0.02mol/L的HE。
34、PES 缓冲溶液定容， 体系为CH3CN/HEPES缓冲溶液 （pH=7.05）（1/99,v/v） 。 测定溶液的荧光光 谱， 根据荧光强度与Hg2+浓度之间的线性关系得到所测Hg2+浓度。 结果如表2所示。 被检测到 的Hg2+浓度与所加入的Hg2+浓度相近， Hg2+的回收率在96%到102%之间， 三次平行实验的相对 标准偏差都小于2.26%。 因此， RMTE可以用于检测环境水样中的Hg2+。 0032 表2检测水样中的Hg2+ 说明书 6/7 页 8 CN 105859734 A 8 溶剂： CH3CN/HEPES缓冲溶液(1/99,v/v,pH=7.05)， 浓度： 20 M(R。
35、MTE)。 0033 实施例六： RMTE检测Hg2+的可逆性 用Na2S研究RMTE检测Hg2+的可逆性。 图6为RMTE检测Hg2+的可逆性的荧光光谱， 溶剂： CH3CN/HEPES缓冲溶液(1/99,v/v,pH=7.05)， 浓度： 20 M(RMTE)， 200 M(金属离子)， 激发波长： 520nm， 狭缝宽度： 5nm； 由图6可见， 不加Hg2+时的RMTE的CH3CN/HEPES缓冲溶液 （1/99,v/v,pH=7.05） 呈现无荧光状态， 加入Hg2+后， 溶液的荧光明显增强， 但是， 继续加入 过量的Na2S， 溶液几乎恢复到无荧光状态， 说明RMTE检测Hg2+是。
36、一个可逆过程。 0034 实施例七： RMTE的细胞毒性 在27条件下， 以含有10%胎牛血清的TC-100作为培养液， 将sf-9细胞置于24孔板中 培养24h， 保证每一个孔中细胞的密度为1104。 然后将12个孔平均分为4组， 每组3个平行 样品。 第1组作为参照组； 第2、 3、 4组分别加入20、 30、 40MRMTE， 培养24h后， 用Muse智能 触控细胞分析仪自动分析RMTE对sf-9细胞的毒性， 结果如图7所示， 把不加RMTE处理的细胞 的存活率视作100%， 经过含有20、 30和40 MRMTE的培养液培养24h后细胞存活率分别为 98.72%、 94.54%和96。
37、.92%。 这说明RMTE没有对sf-9细胞的存活率产生很大影响。 因此 RMTE是一个毒性很低的物质， 可以在活体细胞中应用。 0035 综上所述， 本申请公开的基于罗丹明B和氨乙基硫醚的化合物， 是一个具有优良综 合性能和可逆传感机理的新型罗丹明类Hg2+比色和荧光探针。 其优良综合性能包括： 原料易 得， 合成方法简单， 分子结构简单； 对Hg2+选择性好、 灵敏度高、 抗干扰能力强、 细胞毒性小； 检测可以在接近中性的几乎纯水缓冲溶液中进行； 可以有效检测池塘和自来水样中的Hg2+； 可以检测HgCl2中的Hg2+； 分子中含有一个脂肪族伯氨基， 可以进一步进行自身改性或者修 饰其他材料。 说明书 7/7 页 9 CN 105859734 A 9 图 1 图 2 说明书附图 1/5 页 10 CN 105859734 A 10 图 3 说明书附图 2/5 页 11 CN 105859734 A 11 图 4 图 5 说明书附图 3/5 页 12 CN 105859734 A 12 图 6 说明书附图 4/5 页 13 CN 105859734 A 13 图 7 说明书附图 5/5 页 14 CN 105859734 A 14 。