花生同质型乙酰辅酶A羧化酶基因及其编码的蛋白质与克隆方法.pdf

本发明公开了一种花生同质型乙酰辅酶A羧化酶基因及其编码的蛋白质与克隆方法。所述基因序列由SEQ ID NO.1中从核苷酸第172-6954位的核苷酸序列所构成；所述基因编码的蛋白质具有序列表中SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列。本发明的花生同质型乙酰辅酶A羧化酶(AhACCase)基因的核苷酸序列及其编码的蛋白序列以及基因克隆方法，可广泛应用于花生品质的改良、花生的栽培和培养，尤其是花生作为油料作物的开发和利用等领域。

1.  一种花生同质型乙酰辅酶A羧化酶基因，其特征在于所述基因序列由SEQ ID NO.1中从核苷酸第172-6954位的核苷酸序列构成。

2.  根据权利要求1所述的花生同质型乙酰辅酶A羧化酶基因，其特征在于所述基因编码的蛋白质具有序列表中SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列。

3.  一种花生同质型乙酰辅酶A羧化酶基因的克隆方法，包括如下步骤：
(1)提取花生幼苗中的总RNA；
(2)利用Promega的RT-PCR体系反转录获得cDNA；
(3)根据cDNA文库中的EST信息设计引物：
(4)进行PCR扩增，并将PCR产物回收后筛选阳性克隆；
(5)对筛选到的阳性克隆进行序列分析，获得同质型乙酰辅酶A羧化酶基因。

花生同质型乙酰辅酶A羧化酶基因及其编码的蛋白质与克隆方法
技术领域
本发明涉及一种基因工程技术领域，具体涉及花生同质型乙酰辅酶A羧化酶基因及其编码的蛋白质以及基因的克隆方法。
背景技术
乙酰辅酶A羧化酶(Acetyl-CoA Carboxylase，ACCase)属于生物素包含酶，它在生物体内催化乙酰辅酶A羧化形成丙二酰辅酶A，为脂肪酸和许多次生代谢产物的合成提供底物(Konishi T，Shinohara K，Yamada K.Acetyl-CoA carboxylase in higher plants：mostplants other than gramineae have both the prokaryotic and the eukaryotic forms ofthis enzyme[J].Plant Cell Physiol，1996，37(1)：17-122.)。
生物体中ACCase有2种类型。一种是异质型(Heteromeric)，也称多亚基或原核型ACCase，存在于细菌及双子叶植物和非禾本科单子叶植物的细胞质中。异质型ACCase包含4个亚基，即生物素羧化酶(Biotin carboxylase，BC)、生物素羧基载体蛋白(Biotin carboxyl CarrierProtein，BCCP)以及羧基转移酶的2个亚基α-CT和β-CT，其中前2个亚基组成BC和BCCP域，后2个亚基构成CT催化域。另一种ACCase称为同质型(Homomeric)，亦称多功能或真核型，存在于动物、酵母、藻类及植物的胞质溶胶中，具有一个相对分子量为220~260的生物素包含亚基。它的一条多肽链包含着原核型ACCase所有的四个亚基，排列顺序是BC、BCCP、CTβ、CTα，形成了三个功能域(CTβ和CTα算一个功能域)。活性状态下的真核型ACCase呈现出同型二聚体。
这两种同工型ACCase在植物中的定位有两个例外。一个是油菜的叶绿体中可能同时包含两种同工型ACCase(Schulte W，Topfer R，Stracke R，et al.Multi-functional acetyl-CoAcarboxylase from Brassica napus encode by a multi-gene family：indication forplastidic calization of at least one isoform.Proc Natl Acad Sci USA，1997，94：3465-3470)。另一例外是禾本科植物，它们的质体和胞质溶胶中的ACCase都属于真核类型(Gengenbach.Transgenic plants expressing maize acetyl CoA carboxylase geneandmethod of altering oil content.United States Patent，6,222,099，2001-4-24)。
目前已从拟南芥、小麦、油菜、大豆、玉米和苜蓿等多种植物中获得ACCase基因(K RRoesler，B S Shorrosh，and J B Ohlrogge.Structure and expression of an Arabidopsisacetyl-coenzyme A carboxylase gene.Plant Physiol.1994，105(2)：611-617；SergeiReverdatto，Vadim Beilinson，and Niels C.Nielsen.A Multisubunit Acetyl CoenzymeA Carboxylase from Soybean.Plant Physiol.1999，119(3)：961-978；W Schulte，J Schell，and R .A gene encoding acetyl-coenzyme A carboxylase from Brassica napus.PlantPhysiol.1994，106(2)：793-794.)。但花生中尚没有此基因的相关报道。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种花生同质型乙酰辅酶A羧化酶基因及其编码的蛋白质及基因的克隆方法。使该基因在花生中获得较好的表达，以改良花生的品质。
本发明的花生同质型乙酰辅酶A羧化酶基因，其序列由SEQ ID NO.1中从核苷酸第172-6954位的核苷酸序列构成。所述基因来自花生(Arachis hypogaea)，命名为AhACCase基因。
本发明第二个目的是提供所述基因编码的蛋白质，具有序列表中SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列。所述蛋白质命名为AhACCase蛋白质。
同时，本发明还提供所述基因的克隆方法，包括如下步骤：
(1)提取花生幼苗中的总RNA；
(2)利用Promega的RT-PCR体系反转录获得cDNA；
(3)根据cDNA文库中的EST信息设计引物：
(4)进行PCR扩增，并将PCR产物回收后筛选阳性克隆；
(5)对筛选到的阳性克隆进行序列分析，获得同质型乙酰辅酶A羧化酶基因。
由于同质型乙酰辅酶A羧化酶是一个大的多功能域酶，在一条多肽链上同时包含BC，BCCP，CT-α和CT-β四个与原核型ACCase相对应的功能域，单体分子量在200kD以上，该酶活性的提高有利于提高花生种子的含油量。本发明公开的花生同质型乙酰辅酶A羧化酶(AhACCase)基因的核苷酸序列及其编码的蛋白序列以及基因克隆方法，可广泛应用于花生品质的改良、花生的栽培和培养，尤其是花生作为油料作物的开发和利用等领域。
附图说明
图1是本发明的蛋白质的结构域示意图。
具体实施方式
下面结合具体实例对本发明作进一步详细的描述。
实施例1克隆花生同质型乙酰辅酶A羧化酶(AhACCase)基因
(1)选用E12花生幼苗作为实验材料，采用Pbiozol植物组织RNA提取试剂盒提取花生幼苗中的总RNA。RNA含量及质量可采用琼脂糖凝胶电泳检测。
(2)利用Promega的RT-PCR体系反转录获得cDNA。
(3)根据cDNA文库中的EST信息设计花生同质型乙酰辅酶A羧化酶基因编码区引物，其中：
正向引物(5’-GAGAACGAGAATGGCTGGTGTT-3’)
反向引物(5’-ACAGGTATGCTTGCCTTCTAAC-3’)，
反应体系：2.5μl 10×PCR缓冲液(含MgCl₂)，1.0μl 10μM的引物，4.0μl 2.5mM的dNTPs，1μl cDNA样品，0.5μl La-Taq酶(Takara)，15μl双蒸水。PCR反应程序为95℃预变性5min，95℃变性30s，56℃复性30s，72℃延伸7min，28个循环后，72℃延伸10min。
(4)采用Takara的La-Taq酶进行PCR扩增，PCR产物回收后与MD18-T simple vector(Takara)连接，连接产物转化E.coli Top 10感受态细胞，采用蓝白斑法筛选阳性克隆。
(5)筛选的阳性克隆经PCR进一步验证后测序，获得同质型乙酰辅酶A羧化酶基因。
实施例2AhACCase蛋白质的序列信息与特性分析
本发明的AhACCase基因长7315bp，其开放阅读框为6783bp，位于172-6954bp处。BioXM软件分析表明AhACCase共编码2260个氨基酸。根据PROSITE数据库分析花生AhACCase基因编码的2260个氨基酸，发现此序列含Biotin carboxylation domain profile(PS50979，38-545aa)；ATP-grasp domain profile(PS50975，191-383aa)；Biotinyl/lipoyl domainprofile(PS50968，671-745aa)；Acetyl-coenzyme A carboxyl transferase domain N-terminalregion profile(PS50980，1621-1800aa)；Acctyl-coenzyme A carboxyltransferase domainC-terminal region profile(PS50989，1801-2115aa)；Carbamoyl-phosphate synthasesubdomain signature 2(PS00867，352-359aa)；ABC transporters family signature(PS00211，488-502aa)；Biotin-requiring enzymes attachment site(PS00188，703-720aa)；Peroxidases active site signature(PS00436，1086-1097aa)，如图1所示。
用Protparam预测编码蛋白的物理化学性质，推测分子式为C₁₁₂₂₅H₁₇₇₄₉N₃₁₀₇O₃₃₃₇S₈₀，分子量为252187.0，等电点为6.03，理论推导半衰期为30h，不稳定参数是40.18，属于不稳定蛋白。该蛋白中含量相对较多的氨基酸是Leu(9.9％)，Ala(8.1％)，Glu(7.7％)，Val(7.4％)，Gly(7.0％)；该蛋白中不含Pyl和Sec。总的带正电荷的残基为(Arg+Lys)：251；总的带负电荷的残基为(Asp+Glu)：285。该蛋白亲水性平均数为-0.259，预测该蛋白为疏水性蛋白。采用iPSORT进行预测，表明该蛋白不含信号肽序列，为非分泌性蛋白。以Tmpred网站为基础的跨膜结构预测表明该蛋白含5个跨膜信号区。采用在线HNN网站预测花生AhACCase蛋白的二级结构，表明该蛋白含有43.98％的α-螺旋，14.47％的β-折叠以及41.55％的无规则卷曲。
本发明涉及的序列及记号分列如下：
(1)SEQ ID NO.1的信息
(i)序列特征：
(A)长度：7315bp
(B)类型：核苷酸
(C)链性：单链
(D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：核苷酸
(iii)序列描述：SEQ ID NO.1
(2)SEQ ID NO.2的信息
(i)序列特征：
(A)长度：2260aa
(B)类型：氨基酸
(C)链性：单链
(D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：蛋白质
(iii)序列描述：SEQ ID NO.2
序列表
<110>山东省花生研究所
<120>花生同质型乙酰辅酶A羧化酶基因及其编码的蛋白质与克隆方法
<160>2
<170>PatentIn version 3.3
<210>1
<211>7315
<212>DNA
<213>花生(Arachis hypogaea)
<220>
<221>CDS
<222>(172)..(6954)
<400>1
gggcatgatc atctcttctc ttcccttaat cacttctcac cctcccaaat gcttccctaa    60
ctcccaccaa ttttcgttat taccaaactc cacaacgcaa aaattcctca tttcttaacc   120
cacacactcc catcactgag cacataggac ttaaatagaa ggagaacgag a atg gct    177
                                                         Met Ala
                                                         1
ggt gtt ggg cgt gga aat gga tac aca aat ggt gtg gta cct aac agg     225
Gly Val Gly Arg Gly Asn Gly Tyr Thr Asn Gly Val Val Pro Asn Arg
        5                   10                  15
cac cct gct aca ata tct gaa gta gat gaa tac tgc aat gca ctt ggg     273
His Pro Ala Thr Ile Ser Glu Val Asp Glu Tyr Cys Asn Ala Leu Gly
    20                  25                  30
gga aca agg cca att cat agt ata tta att gca aac aat gga atg gcc     321
Gly Thr Arg Pro Ile His Ser Ile Leu Ile Ala Asn Asn Gly Met Ala
35                  40                  45                  50
gca gtc aag ttt ata cgc agt gtg agg agc tgg gct tat gag acg ttt     369
Ala Val Lys Phe Ile Arg Ser Val Arg Ser Trp Ala Tyr Glu Thr Phe
                55                  60                  65
ggt acg gag agg gct atc ttg ttg gtt gcc atg gct act cca gag gac     417
Gly Thr Glu Arg Ala Ile Leu Leu Val Ala Met Ala Thr Pro Glu Asp
            70                  75                  80
atg aga atc aat gca gaa cat atc aga ata gcc gat caa ttt gtc gaa    465
Met Arg Ile Asn Ala Glu His Ile Arg Ile Ala Asp Gln Phe Val Glu
        85                  90                  95
gta cct ggt ggg acc aat aac aat aac tat gcc aat gtg cag ctt att    513
Val Pro Gly Gly Thr Asn Asn Asn Asn Tyr Ala Asn Val Gln Leu Ile
    100                 105                 110
gta gag atg gct gag ata act cgg gtt gat gct gtg tgg cca ggt tgg    561
Val Glu Met Ala Glu Ile Thr Arg Val Asp Ala Val Trp Pro Gly Trp
115                 120                 125                 130
ggt cat gca tca gaa aat cct gag ctt cca gat gcg tta aaa gca aaa    609
Gly His Ala Ser Glu Asn Pro Glu Leu Pro Asp Ala Leu Lys Ala Lys
                135                 140                 145
gga att gta ttt ctt gga cct cca gct gta tct atg gca gca ctg gga    657
Gly Ile Val Phe Leu Gly Pro Pro Ala Val Ser Met Ala Ala Leu Gly
            150                 155                 160
gac aaa att ggt tca tca ttg att gct caa gca gca gaa gtg cca acc    705
Asp Lys Ile Gly Ser Ser Leu Ile Ala Gln Ala Ala Glu Val Pro Thr
        165                 170                 175
ctt cca tgg agt ggt tct cat gtg aaa att cct ccc gat agt tgc ttg    753
Leu Pro Trp Ser Gly Ser His Val Lys Ile Pro Pro Asp Ser Cys Leu
    180                 185                 190
gtt act att cct gat gaa att tac cgg gaa gca tgt gtt tat aca aca    801
Val Thr Ile Pro Asp Glu Ile Tyr Arg Glu Ala Cys Val Tyr Thr Thr
195                 200                 205                 210
gaa gaa gca att gcc agt tgt caa gtt gtc ggt tac cct gca atg atc    849
Glu Glu Ala Ile Ala Ser Cys Gln Val Val Gly Tyr Pro Ala Met Ile
                215                 220                 225
aaa gca tct tgg ggt ggt ggt ggt aaa ggc ata aga aag gtt cat aat    897
Lys Ala Ser Trp Gly Gly Gly Gly Lys Gly Ile Arg Lys Val His Asn
            230                 235                 240
gat gat gag gta agg gca ttg ttc aag caa gtc caa ggt gaa gtt ccg    945
Asp Asp Glu Val Arg Ala Leu Phe Lys Gln Val Gln Gly Glu Val Pro
        245                 250                 255
ggc tca cct ata ttt ata atg aag gtt gcc tcc cag agc cga cat cta     993
Gly Ser Pro Ile Phe Ile Met Lys Val Ala Ser Gln Ser Arg His Leu
    260                 265                 270
gaa gtc cag tta ctt tgt gat cag tat gga aat gtt gca gcc ttg cat    1041
Glu Val Gln Leu Leu Cys Asp Gln Tyr Gly Asn Val Ala Ala Leu His
275                 280                 285                 290
agc cgt gat tgc agt gtt caa agg agg cac caa aag att att gaa gag    1089
Ser Arg Asp Cys Ser Val Gln Arg Arg His Gln Lys Ile Ile Glu Glu
                295                 300                 305
ggt ccc att act gta gct cct cca caa acg gtg aaa caa cta gaa cag    1137
Gly Pro Ile Thr Val Ala Pro Pro Gln Thr Val Lys Gln Leu Glu Gln
            310                 315                 320
gca gct aga agg ttg gct aaa tct gta aat tat gtt ggg gct gct act    1185
Ala Ala Arg Arg Leu Ala Lys Scr Val Asn Tyr Val Gly Ala Ala Thr
        325                 330                 335
gtt gag tat ctt ttc agt atg gaa act ggc gag tac tac ttt ttg gaa    1233
Val Glu Tyr Leu Phe Ser Met Glu Thr Gly Glu Tyr Tyr Phe Leu Glu
    340                 345                 350
ttg aac cct cga cta cag gtt gag cac cct gtt act gag tgg ata gcg    1281
Leu Asn Pro Arg Leu Gln Val Glu His Pro Val Thr Glu Trp Ile Ala
355                 360                 365                 370
gag ata aat ctg cca gca gca caa gtt gca att ggg atg ggt atc cct    1329
Glu Ile Asn Leu Pro Ala Ala Gln Val Ala Ile Gly Met Gly Ile Pro
                375                 380                 385
ctt tgg caa ctt cct gaa ata aga cgt ttc tat ggg gtg gaa cat ggt    1377
Leu Trp Gln Leu Pro Glu Ile Arg Arg Phe Tyr Gly Val Glu His Gly
            390                 395                 400
ggg ggg aat gat gct tgg agg aaa aca tca gct ttg gct acc cct ttt    1425
Gly Gly Asn Asp Ala Trp Arg Lys Thr Ser Ala Leu Ala Thr Pro Phe
        405                 410                 415
gat ttt gac aaa gca caa tcc aca aag cca aaa ggt cac tgt gtg gct    1473
Asp Phe Asp Lys Ala Gln Ser Thr Lys Pro Lys Gly His Cys Val Ala
    420                 425                 430
gtg cga gtg aca agt gag gac cct gat gat ggt ttc aag cct aca agt    1521
Val Arg Val Thr Ser Glu Asp Pro Asp Asp Gly Phe Lys Pro Thr Ser
435                 440                 445                 450
ggg aaa gtg cag gag ctt agc ttt aaa agc aag cca aat gtg tgg gca    1569
Gly Lys Val Gln Glu Leu Ser Phe Lys Ser Lys Pro Asn Val Trp Ala
                455                 460                 465
tac ttc tct gtt aag tct gga gga gga ata cac gag ttt tca gat tct    1617
Tyr Phe Ser Val Lys Ser Gly Gly Gly Ile His Glu Phe Ser Asp Ser
            470                 475                 480
cag ttt ggg cat gtt ttt gct ttt gga gaa tct agg gct tta gct ata    1665
Gln Phe Gly His Val Phe Ala Phe Gly Glu Ser Arg Ala Leu Ala Ile
        485                 490                 495
gca aat atg gtt cta ggg cta aag gag att caa att cgt gga gag att    1713
Ala Asn Met Val Leu Gly Leu Lys Glu Ile Gln Ile Arg Gly Glu Ile
    500                 505                 510
cgt acc aat gtt gat tat acc att gat ctt ctg aat gct tca gac tac    1761
Arg Thr Asn Val Asp Tyr Thr Ile Asp Leu Leu Asn Ala Ser Asp Tyr
515                 520                 525                 530
aga gac aac aaa att cac acg gga tgg ctg gac agt aga att gcg atg    1809
Arg Asp Asn Lys Ile His Thr Gly Trp Leu Asp Ser Arg Ile Ala Met
                535                 540                 545
agg gtt aga gca gag agg cct ccc tgg tat ctt tct gtt gtt gga ggg    1857
Arg Val Arg Ala Glu Arg Pro Pro Trp Tyr Leu Ser Val Val Gly Gly
            550                 555                 560
gcc ctc tat aaa gct tct gca agc agt gca gct ctg gta tca gac tat    1905
Ala Leu Tyr Lys Ala Ser Ala Ser Ser Ala Ala Leu Val Ser Asp Tyr
        565                 570                 575
gtt ggc tat ctg gaa aag gga caa atc cct ccc aag cat ata tct ctt    1953
Val Gly Tyr Leu Glu Lys Gly Gln Ile Pro Pro Lys His Ile Ser Leu
    580                 585                 590
gtg cat tct caa gtg tcc ttg aac att gaa gga agc aaa tac acg att    2001
Val His Ser Gln Val Ser Leu Asn Ile Glu Gly Ser Lys Tyr Thr Ile
595                 600                 605                 610
gac atg gta cga gga ggg tct gga agt tat aga ttg aga atg aat caa    2049
Asp Met Val Arg Gly Gly Ser Gly Ser Tyr Arg Leu Arg Met Asn Gln
                615                 620                 625
tcc gaa gta gaa gct gag ata cat act tta cgt gat gga ggt ttg ctg    2097
Ser Glu Val Glu Ala Glu Ile His Thr Leu Arg Asp Gly Gly Leu Leu
            630                 635                 640
atg cag ttg gat gga aac agt cat gtt ata tat gca gag gaa gaa gct    2145
Met Gln Leu Asp Gly Asn Ser His Val Ile Tyr Ala Glu Glu Glu Ala
        645                 650                 655
gct gga acg cgc ctt cta att gat gga agg act tgc ttg ctt cag aat    2193
Ala Gly Thr Arg Leu Leu Ile Asp Gly Arg Thr Cys Leu Leu Gln Asn
    660                 665                 670
gat cat gat cca tcg aag tta gtt gca gag aca cca tgc aag ctt atg    2241
Asp His Asp Pro Ser Lys Leu Val Ala Glu Thr Pro Cys Lys Leu Met
675                 680                 685                 690
agg tat ttg gtt gta gat gac agc cat att gat gct gac aca cct tat    2289
Arg Tyr Leu Val Val Asp Asp Ser His Ile Asp Ala Asp Thr Pro Tyr
                695                 700                 705
gct gaa gtt gaa gtc atg aag atg tgc atg cca ctt ctt tca cct gct    2337
Ala Glu Val Glu Val Met Lys Met Cys Met Pro Leu Lcu Scr Pro Ala
            710                 715                 720
tct ggg gtt att cat ttc aaa atg tct gaa ggt caa ccg atg cag gct    2385
Ser Gly Val Ile His Phe Lys Met Ser Glu Gly Gln Pro Mct Gln Ala
        725                 730                 735
ggt gaa cta ata gca agg ctt gat cta gat gat cct tca gca gta aga    2433
Gly Glu Leu Ile Ala Arg Leu Asp Leu Asp Asp Pro Ser Ala Val Arg
    740                 745                 750
aag gca gaa ccc ttc aat gga aaa ttc cca gtc ctg ggc cca ccc act    2481
Lys Ala Glu Pro Phe Asn Gly Lys Phe Pro Val Leu Gly Pro Pro Thr
755                 760                 765                 770
gca act tct gat aaa gtt cat cag aaa tgt gct gca agc tta agt gct    2529
Ala Thr Ser Asp Lys Val His Gln Lys Cys Ala Ala Ser Leu Ser Ala
                775                 780                 785
gca cag atg att ctt gct ggt tat gag cac aat att gat gag gtt gtg    2577
Ala Gln Met Ile Leu Ala Gly Tyr Glu His Asn Ile Asp Glu Val Val
            790                 795                 800
caa agt ttg ctc aat tgc ctt gat agt cct gaa tta cct ttc ctt caa    2625
Gln Ser Leu Leu Asn Cys Leu Asp Ser Pro Glu Leu Pro Phe Leu Gln
        805                 810                 815
tgg caa gag tgc ttt gca gtt cta gca aac cgt ctt ccc aaa gat ctg    2673
Trp Gln Glu Cys Phe Ala Val Leu Ala Asn Arg Leu Pro Lys Asp Leu
    820                 825                 830
aaa aat gag ttg gaa tcg aaa tat aag gag tac gag agg att tca agc    2721
Lys Asn Glu Leu Glu Ser Lys Tyr Lys Glu Tyr Glu Arg Ile Ser Ser
835                 840                 845                 850
ttc caa gtt gtt gat ttc cct gcc aaa ctt ttg aag gga att ctt gaa    2769
Phe Gln Val Val Asp Phe Pro Ala Lys Leu Leu Lys Gly Ile Leu Glu
                855                 860                 865
gct cat ttg tcc tca tgt ccc aac aaa gaa aaa ggg gct caa gaa agg    2817
Ala His Leu Ser Ser Cys Pro Asn Lys Glu Lys Gly Ala Gln Glu Arg
            870                 875                 880
ctg att gaa cct ctg ttg agt ctt gtg aag tcc tat gag ggt gga aga    2865
Leu Ile Glu Pro Leu Leu Ser Leu Val Lys Ser Tyr Glu Gly Gly Arg
        885                 890                 895
gag agc cat gct cgt aaa att gtc caa tcc ctt ttt gaa gag tat ctt    2913
Glu Ser His Ala Arg Lys Ile Val Gln Ser Leu Phe Glu Glu Tyr Leu
    900                 905                 910
ttt gtt gaa gaa cta ttt agt gat aat ata cag gct gat gta att gaa    2961
Phe Val Glu Glu Leu Phe Ser Asp Asn Ile Gln Ala Asp Val Ile Glu
915                 920                 925                 930
cgt ctc cgt ctt caa tat aag aaa gat ctg ttg aag att gtg gat ata    3009
Arg Leu Arg Leu Gln Tyr Lys Lys Asp Leu Leu Lys Ile Val Asp Ile
                935                 940                 945
gtt ctc tca cat cag ggt atc aag agc aaa aat aag ctg ata cta cga    3057
Val Leu Ser His Gln Gly Ile Lys Ser Lys Asn Lys Leu Ile Leu Arg
            950                 955                 960
cta atg gat aaa ctg gtt tac cca aat cct gct gcc tac agg gat caa    3105
Leu Met Asp Lys Leu Val Tyr Pro Asn Pro Ala Ala Tyr Arg Asp Gln
        965                 970                 975
tta atc cgc ttc tct caa ctc aac cat act aac tat tct cag ttg gcc    3153
Leu Ile Arg Phe Ser Gln Leu Asn His Thr Asn Tyr Ser Gln Leu Ala
    980                 985                 990
cta aag gca agt caa ttg  ctg gaa caa act aaa  ttg agt gaa ctt     3198
Leu Lys Ala Ser Gln Leu  Leu Glu Gln Thr Lys  Leu Ser Glu Leu
995                 1000                 1005
cga  tcc aac att gct aga  agt ctt tct gag tta  gag atg ttc act    3243
Arg  Ser Asn Ile Ala Arg  Ser Leu Ser Glu Leu  Glu Met Phe Thr
1010                 1015                 1020
gag  gat ggt gaa aat att  gat act ccc aag agg  aaa agc gct att    3288
Glu  Asp Gly Glu Asn Ile  Asp Thr Pro Lys Arg  Lys Ser Ala Ile
1025                 1030                 1035
aat  gac cga atg gag gac  ctt gtt agt gct cct  ttg gca gtt gaa    3333
Asn  Asp Arg Met Glu Asp  Lcu Val Ser Ala Pro  Leu Ala Val Glu
1040                 1045                 1050
gat  gct ttg gtg ggt tta  ttt gat cac agt gat  cac acc ctt caa    3378
Asp  Ala Leu Val Gly Leu  Phe Asp His Ser Asp  His Thr Leu Gln
1055                 1060                 1065
aga  agg gtt gtg gaa act  tat ata cgc aga ctc  tac cag ccg tat    3423
Arg  Arg Val Val Glu Thr  Tyr Ilc Arg Arg Leu  Tyr Gln Pro Tyr
1070                 1075                 1080
ctt  gtc aaa ggg agt gtc  aga atg cag tgg cac  aga tct ggt ctt    3468
Leu  Val Lys Gly Ser Val  Arg Met Gln Trp His  Arg Ser Gly Leu
1085                 1090                 1095
att  gct tca tgg gag ttc  tta gaa gag tac att  gaa agg aag agt    3513
Ilc  Ala Ser Trp Glu Phc  Lcu Glu Glu Tyr Ilc  Glu Arg Lys Ser
1100                 1105                 1110
ggg  gtt gaa gac caa atg  tca gat aaa acg ctg  gtg gag aaa cac    3558
Gly  Val Glu Asp Gln Met  Ser Asp Lys Thr Leu  Val Glu Lys His
1115                 1120                 1125
act  gag aaa aaa tgg ggc  gta atg gtt gta att  aaa tct ctt cac    3603
Thr  Glu Lys Lys Trp Gly  Val Met Val Val Ile  Lys Ser Leu His
1130                 1135                 1140
ttt  ttg cct gca att atc  act gct gcg tta aag  gaa gca acc aac    3648
Phe  Leu Pro Ala Ile Ile  Thr Ala Ala Leu Lys  Glu Ala Thr Asn
1145                 1150                 1155
aat  ctt cat gaa gca gtt  tca agt gct gct ggt  gaa cca gtt aag    3693
Asn  Leu His Glu Ala Val  Ser Ser Ala Ala Gly  Glu Pro Val Lys
1160                 1165                 1170
cat  ggt aat atg atg cat  gtt gca tta gtg ggc  atc aac aac cag    3738
His  Gly Asn Met Met His  Val Ala Leu Val Gly  Ile Asn Asn Gln
1175                 1180                 1185
atg  agt tta ctg caa gac  agt ggt gac gag gat  cag gct caa gaa    3783
Met  Ser Leu Leu Gln Asp  Ser Gly Asp Glu Asp  Gln Ala Gln Glu
1190                 1195                 1200
aga  atc aat aag ttg gcg  aaa ata cta aaa gaa  gag gaa gta ggc    3828
Arg  Ile Asn Lys Leu Ala  Lys Ile Leu Lys Glu  Glu Glu Val Gly
1205                 1210                 1215
tcc  act ata cga ggt act  ggt gtt gga gta att  agc tgt atc ata    3873
Ser  Thr Ile Arg Gly Thr  Gly Val Gly Val Ile  Ser Cys Ile Ile
1220                 1225                 1230
cag  agg gat gaa ggg cgt  acc ccg atg agg cac  tcc ttt cac tgg    3918
Gln  Arg Asp Glu Gly Arg  Thr Pro Met Arg His  Ser Phe His Trp
1235                 1240                 1245
tca  gca gaa aag ctc tat  tat cag gag gaa cct  ctg ttg cgt cat    3963
Ser  Ala Glu Lys Leu Tyr  Tyr Gln Glu Glu Pro  Leu Leu Arg His
1250                 1255                 1260
ttg  gaa cca ccg cta tcc  att tat ctt gaa ttg  gac aaa ctt aaa    4008
Leu  Glu Pro Pro Leu Ser  Ile Tyr Leu Glu Leu  Asp Lys Leu Lys
1265                 1270                 1275
ggc  tat gag aac ata cgg  tat act cct tct cga  gat cgt caa tgg    4053
Gly  Tyr Glu Asn Ile Arg  Tyr Thr Pro Ser Arg  Asp Arg Gln Trp
1280                 1285                 1290
cat  ctg tac act gtt atg  gac caa aag cct caa  cct gct caa aga    4098
His  Leu Tyr Thr Val Met  Asp Gln Lys Pro Gln  Pro Ala Gln Arg
1295                 1300                 1305
atg  ttt ctt cga aca ctt  tta aga cag cca acc  aca aat gaa gga    4143
Met  Phe Leu Arg Thr Leu  Leu Arg Gln Pro Thr  Thr Asn Glu Gly
1310                 1315                 1320
ttc  tct tcg tat caa agg  acg gat gca gaa aca  cct agt acc gaa    4188
Phe  Ser Ser Tyr Gln Arg  Thr Asp Ala Glu Thr  Pro Ser Thr Glu
1325                 1330                 1335
ttg  gct atg tcc ttc act  tca agg agc att ttt  agg tcc ttg atg    4233
Leu  Ala Met Ser Phe Thr  Ser Arg Ser Ile Phe  Arg Ser Leu Met
1340                 1345                 1350
gct  gca atg gag gag ttg  gaa ctt aat tca cac  aat gcc act atc    4278
Ala  Ala Met Glu Glu Leu  Glu Leu Asn Ser His  Asn Ala Thr Ile
1355                 1360                 1365
aga  cct gaa cac gct cat  atg tac ctc tat att  ata cgc gag cag    4323
Arg  Pro Glu His Ala His  Met Tyr Leu Tyr Ile  Ile Arg Glu Gln
1370                 1375                 1380
gaa  ata aat gat ctt gtg  cct tat ccc aag aga  gtt gac ata gat    4368
Glu  Ile Asn Asp Leu Val  Pro Tyr Pro Lys Arg  Val Asp Ile Asp
1385                 1390                 1395
gcg  ggc caa gaa gaa aca  aca gtt gag gca acc  ttg gaa gaa cta    4413
Ala  Gly Gln Glu Glu Thr  Thr Val Glu Ala Thr  Leu Glu Glu Leu
1400                 1405                 1410
gca  cat gaa atc cat tca  tcg gtt ggt gta aga  atg cat aga tta    4458
Ala  His Glu Ile His Ser  Ser Val Gly Val Arg  Met His Arg Leu
1415                 1420                 1425
gga  gtt gta gtt tgg gaa  gtc aag ctc tgg atg  gca gcc tgt gca    4503
Gly  Val Val Val Trp Glu  Val Lys Leu Trp Met  Ala Ala Cys Ala
1430                 1435                 1440
cag  gca aat ggc gca tgg  agg att gtt gta aac  aat gtg aca ggt    4548
Gln  Ala Asn Gly Ala Trp  Arg Ile Val Val Asn  Asn Val Thr Gly
1445                 1450                 1455
cat  aca tgc act gta cat  ata tac cga gaa atg  gaa gat acc aat    4593
His  Thr Cys Thr Val His  Ile Tyr Arg Glu Met  Glu Asp Thr Asn
1460                 1465                 1470
acc  cat aga gtg gta tac  agt tca atc acc gta  aag ggt cca ctg    4638
Thr  His Arg Val Val Tyr  Ser Ser Ile Thr Val  Lys Gly Pro Leu
1475                 1480                 1485
cat  ggt gta cct gtg aat  gaa act tat caa cct  ttg gga gtt att    4683
His  Gly Val Pro Val Asn  Glu Thr Tyr Gln Pro  Leu Gly Val Ile
1490                 1495                 1500
gat  cga aaa cgt cta tca  gca aga aag aac agt  acc act ttt tgc    4728
Asp  Arg Lys Arg Leu Ser  Ala Arg Lys Asn Ser  Thr Thr Phe Cys
1505                 1510                 1515
tat  gat ttc ccc ctg gca  ttt gaa aca gcc ttg  gaa cag tcg tgg    4773
Tyr  Asp Phe Pro Leu Ala  Phe Glu Thr Ala Leu  Glu Gln Ser Trp
1520                 1525                 1530
gca  atc caa cag ccg gga  ttt cga aga cca aaa  gat aaa aat ctg    4818
Ala  Ile Gln Gln Pro Gly  Phe Arg Arg Pro Lys  Asp Lys Asn Leu
1535                 1540                 1545
tta  aag gta aca gag ctt  aga ttt gct gac aaa  gag ggt agt tgg    4863
Leu  Lys Val Thr Glu Leu  Arg Phe Ala Asp Lys  Glu Gly Ser Trp
1550                 1555                 1560
ggt  act cct ctt gtt cct  gtg gag cat tct gct  gga ctc aat gat    4908
Gly  Thr Pro Leu Val Pro  Val Glu His Ser Ala  Gly Leu Asn Asp
1565                 1570                 1575
gtt  ggc atg gta gct tgg  ttt atg gac atg tgt  acc ccc gaa ttc    4953
Val  Gly Met Val Ala Trp  Phe Met Asp Met Cys  Thr Pro Glu Phe
1580                 1585                 1590
cca  tcc gga agg aca ata  ttg gtt gta gca aat  gat gtg aca ttc    4998
Pro  Ser Gly Arg Thr Ile  Leu Val Val Ala Asn  Asp Val Thr Phe
1595                 1600                 1605
aag  gct ggt tct ttt ggc  cct aga gag gat gca  ttc ttc cgt gca    5043
Lys  Ala Gly Ser Phe Gly  Pro Arg Glu Asp Ala  Phe Phe Arg Ala
1610                 1615                 1620
gtt  act gat ctt gca tgt  gca aaa aaa ttg cct  tta att tat tta    5088
Val  Thr Asp Leu Ala Cys  Ala Lys Lys Leu Pro  Leu Ile Tyr Leu
1625                 1630                 1635
gca  gca aat tct ggt gcc  cgt tta ggt gct gcc  gag gaa gtc aaa    5133
Ala  Ala Asn Ser Gly Ala  Arg Leu Gly Ala Ala  Glu Glu Val Lys
1640                 1645                 1650
gcc  tgt ttt aaa gtt ggt  tgg tct gag gag tcc  aac cct gag cat    5178
Ala  Cys Phe Lys Val Gly  Trp Ser Glu Glu Ser  Asn Pro Glu His
1655                 1660                 1665
ggt  ttt cag tat gta tat  tta aca cct gag gat  ttt gct cgg att    5223
Gly  Phe Gln Tyr Val Tyr  Leu Thr Pro Glu Asp  Phe Ala Arg Ile
1670                 1675                 1680
gga  tca tct gtg att gca  cac gag cta aag ctt  gaa agc ggt gaa    5268
Gly  Ser Ser Val Ile Ala  His Glu Leu Lys Leu  Glu Ser Gly Glu
1685                 1690                 1695
acc  aga tgg ata ata gat  acc att gtt ggg aaa  gag gat ggc ctg    5313
Thr  Arg Trp Ile Ile Asp  Thr Ile Val Gly Lys  Glu Asp Gly Leu
1700                 1705                 1710
ggg  gtt gaa aac ttg agt  ggt agt gga gcc att  gct ggt tcc tac    5358
Gly  Val Glu Asn Leu Ser  Gly Ser Gly Ala Ile  Ala Gly Ser Tyr
1715                 1720                 1725
tca  agg gca tac aag gaa  act ttc aca tta aca  tat gtg act ggt    5403
Ser  Arg Ala Tyr Lys Glu  Thr Phe Thr Leu Thr  Tyr Val Thr Gly
1730                 1735                 1740
agg  act gtt gga ata ggg  gct tat ctt gct agg  ctt gga atg aga    5448
Arg  Thr Val Gly Ile Gly  Ala Tyr Leu Ala Arg  Leu Gly Met Arg
1745                 1750                 1755
tgc  ata cag agg ctt gat  cag cct ata att ctt  act ggt ttc tca    5493
Cys  Ile Gln Arg Leu Asp  Gln Pro Ile Ile Leu  Thr Gly Phe Ser
1760                 1765                 1770
gca  cta aac aaa ctt ctt  ggt cgg gag gta tac  agc tct cac atg    5538
Ala  Leu Asn Lys Leu Leu  Gly Arg Glu Val Tyr  Ser Ser His Met
1775                 1780                 1785
caa  ctt ggt gga cct aaa  atc atg gct act aat  gga gtt gta cat    5583
Gln  Leu Gly Gly Pro Lys  Ile Met Ala Thr Asn  Gly Val Val His
1790                 1795                 1800
ctt  aca gtt tca gat gac  ctt gaa ggt gtt tct  gct att ttg aag    5628
Leu  Thr Val Ser Asp Asp  Leu Glu Gly Val Ser  Ala Ile Leu Lys
1805                 1810                 1815
tgg  ctt agc tac att cct  tct cat gta ggt ggc  tca ctt ccc atc    5673
Trp  Leu Ser Tyr Ile Pro  Ser His Val Gly Gly  Ser Leu Pro Ile
1820                 1825                 1830
gta  aag ccc ctt gac cct  cct gaa aga cca gtg  gag tac tta cca    5718
Val  Lys Pro Leu Asp Pro  Pro Glu Arg Pro Val  Glu Tyr Leu Pro
1835                 1840                 1845
gaa  aat tct tgt gat cct  cgt gct gct att tct  gga act ttg gat    5763
Glu  Asn Ser Cys Asp Pro  Arg Ala Ala Ile Ser  Gly Thr Leu Asp
1850                 1855                 1860
ggt  aat gga aga tgg ctc  ggt gga att ttt gac  aag gac agc ttc    5808
Gly  Asn Gly Arg Trp Leu  Gly Gly Ile Phe Asp  Lys Asp Ser Phe
1865                 1870                 1875
gtg  gag aca cta gaa gga  tgg gca agg aca gtc  gtt aca gga agg    5853
Val  Glu Thr Leu Glu Gly  Trp Ala Arg Thr Val  Val Thr Gly Arg
1880                 1885                 1890
gca  aag ctt gga gga atc  cct gtg ggg att gtt  gct gta gaa aca    5898
Ala  Lys Leu Gly Gly Ile  Pro Val Gly Ile Val  Ala Val Glu Thr
1895                 1900                 1905
cag  aca gtg atg caa ata  ata cct gct gat ccg  ggc cag ctt gat    5943
Gln  Thr Val Met Gln Ile  Ile Pro Ala Asp Pro  Gly Gln Leu Asp
1910                 1915                 1920
tcc  cat gag aga gtt gtt  cct cag gct ggc caa  gtg tgg ttc cct    5988
Ser  His Glu Arg Val Val  Pro Gln Ala Gly Gln  Val Trp Phe Pro
1925                 1930                 1935
gat  tct gct act aaa aca  gcc caa gca ata atg  gat ttc aac aga    6033
Asp  Ser Ala Thr Lys Thr  Ala Gln Ala Ile Met  Asp Phe Asn Arg
1940                 1945                 1950
gaa  gag ctc cca ctt ttc  att cta gca aac tgg  aga ggc ttc tct    6078
Glu  Glu Leu Pro Leu Phe  Ile Leu Ala Asn Trp  Arg Gly Phe Ser
1955                 1960                 1965
ggt  ggt cag agg gac ctt  ttc gaa gga att ctc  cag gct ggt tcg    6123
Gly  Gly Gln Arg Asp Leu  Phe Glu Gly Ile Leu  Gln Ala Gly Ser
1970                 1975                 1980
aca  att gtg gag aac ctt  aga aca tac aag cag  ccc att ttt gta    6168
Thr  Ile Val Glu Asn Leu  Arg Thr Tyr Lys Gln  Pro Ile Phe Val
1985                 1990                 1995
tac  atc cca atg atg ggt  gaa ctc cgt ggt gga  gca tgg gtt gtc    6213
Tyr  Ile Pro Met Met Gly  Glu Leu Arg Gly Gly  Ala Trp Val Val
2000                 2005                 2010
gtt  gac agt cgg atc aat  tcc gac cac att gaa  atg tat gcc gac    6258
Val  Asp Ser Arg Ile Asn  Ser Asp His Ile Glu  Met Tyr Ala Asp
2015                 2020                 2025
aga  aca gct aaa gga aat  gtc ctt gaa cca gaa  ggg atg att gag    6303
Arg  Thr Ala Lys Gly Asn  Val Leu Glu Pro Glu  Gly Met Ile Glu
2030                 2035                 2040
att  aag ttt aga aca agg  gaa ttg ttg gag tgc  atg ggt aga ctt    6348
Ile  Lys Phe Arg Thr Arg  Glu Leu Leu Glu Cys  Met Gly Arg Leu
2045                 2050                 2055
gat  cag aag ttg ata act  ctg aag gca aaa ctt  cag gag gct aag    6393
Asp  Gln Lys Leu Ile Thr  Leu Lys Ala Lys Leu  Gln Glu Ala Lys
2060                 2065                 2070
gac  aag agg gac acc gag  tcc ttt gaa tct cta  cag cag cag att    6438
Asp  Lys Arg Asp Thr Glu  Ser Phe Glu Ser Leu  Gln Gln Gln Ile
2075                 2080                 2085
aaa  tct cgc gaa aaa cag  ctt ttg cct ctg tat  acc cag ata gct    6483
Lys  Ser Arg Glu Lys Gln  Leu Leu Pro Leu Tyr  Thr Gln Ile Ala
2090                 2095                 2100
acc  aaa ttt gct gaa ctt  cat gat act tcc tta  aga atg gct gct    6528
Thr  Lys Phe Ala Glu Leu  His Asp Thr Ser Leu  Arg Met Ala Ala
2105                 2110                 2115
aag  ggg gta ata aga caa  gtt ctg gac tgg ggt  aac tcg cgc gcc    6573
Lys  Gly Val Ile Arg Gln  Val Leu Asp Trp Gly  Asn Ser Arg Ala
2120                 2125                 2130
gtc  ttc tac cgg aga ctg  tac agg aga att ggt  gag cag tca ctt    6618
Val  Phe Tyr Arg Arg Leu  Tyr Arg Arg Ile Gly  Glu Gln Ser Leu
2135                 2140                 2145
atc  aac aat gtg aga gaa  gct gct ggt gac cat  ttg tca cat gtt    6663
Ile  Asn Asn Val Arg Glu  Ala Ala Gly Asp His  Leu Ser His Val
2150                 2155                 2160
tcc  gcc atg gac ttg gtc  aaa aac tgg tat ttg  agt tcc aac att    6708
Ser  Ala Met Asp Leu Val  Lys Asn Trp Tyr Leu  Ser Ser Asn Ile
2165                 2170                 2175
gcc  aaa ggt aga aaa gat  gct tgg ctg gac gat  gaa gcc ttc ttc    6753
Ala  Lys Gly Arg Lys Asp  Ala Trp Leu Asp Asp  Glu Ala Phe Phe
2180                 2185                 2190
agt  tgg aag gaa aat cca  tcg aat tat gag gat  aaa ctg aag gaa    6798
Ser  Trp Lys Glu Asn Pro  Ser Asn Tyr Glu Asp  Lys Leu Lys Glu
2195                 2200                 2205
ttg  cgt gca cag aaa gtg  ttg ctt caa ttg aca  aac att ggt gac     6843
Leu  Arg Ala Gln Lys Val  Leu Leu Gln Leu Thr  Asn Ile Gly Asp
2210                 2215                 2220
tcg  gtt cta gat ttg caa  gct ctg cct caa gga  ctt gct gct ctt     6888
Ser  Val Leu Asp Leu Gln  Ala Leu Pro Gln Gly  Leu Ala Ala Leu
2225                 2230                 2235
tta  agc aag ttg gag cca  tcg agt cgg gtg aag  ttg gcg gag gaa     6933
Leu  Ser Lys Leu Glu Pro  Ser Ser Arg Val Lys  Leu Ala Glu Glu
2240                 2245                 2250
ctt  cga aaa gta ctt ggt  tag aacttagaag ttagaaggca agcatacctg     6984
Leu  Arg Lys Val Leu Gly
2255                 2260
taatcgtagt ttcactgttt agtgtttact acgttgatag tcgcatatat gtatccattt  7044
tattagtgca atccgttggc tatgttgtat catcccttgc ttcaaagtgt atatgagaga  7104
tgttgatagc tttgtaattt tagtctggga atggatcaca accagcacca ccagattcct  7164
tctatttatt tgctggttaa ttcatccatg tcatgtatct caataaattt gtaataattt  7224
gtaacattta ttattatcaa catcattatt tattattatt cttgaataag aaaagttttg  7284
gtcaaattta tattagcaaa aaaaaaaaaa a                                 7315
<210>2
<211>2260
<212>PRT
<213>花生(Arachis hypogaea)
<400>2
Met Ala Gly Val Gly Arg Gly Asn Gly Tyr Thr Asn Gly Val Val Pro
1               5                   10                  15
Asn Arg His Pro Ala Thr Ile Ser Glu Val Asp Glu Tyr Cys Asn Ala
            20                  25                  30
Leu Gly Gly Thr Arg Pro Ile His Ser Ile Leu Ile Ala Asn Asn Gly
        35                  40                  45
Met Ala Ala Val Lys Phe Ile Arg Ser Val Arg Ser Trp Ala Tyr Glu
    50                  55                  60
Thr Phe Gly Thr Glu Arg Ala Ile Leu Leu Val Ala Met Ala Thr Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Met Arg Ile Asn Ala Glu His Ile Arg Ile Ala Asp Gln Phe
                85                  90                  95
Val Glu Val Pro Gly Gly Thr Asn Asn Asn Asn Tyr Ala Asn Val Gln
            100                105                 110
Leu Ile Val Glu Met Ala Glu Ile Thr Arg Val Asp Ala Val Trp Pro
        115                 120                 125
Gly Trp Gly His Ala Ser Glu Asn Pro Glu Leu Pro Asp Ala Leu Lys
    130                 135                 140
Ala Lys Gly Ile Val Phe Leu Gly Pro Pro Ala Val Ser Met Ala Ala
145                 150                 155                 160
Leu Gly Asp Lys Ile Gly Ser Ser Leu Ile Ala Gln Ala Ala Glu Val
                165                 170                 175
Pro Thr Leu Pro Trp Ser Gly Ser His Val Lys Ile Pro Pro Asp Ser
            180                 185                 190
Cys Leu Val Thr Ilc Pro Asp Glu Ile Tyr Arg Glu Ala Cys Val Tyr
        195                 200                 205
Thr Thr Glu Glu Ala lle Ala Ser Cys Gln Val Val Gly Tyr Pro Ala
    210                 215                 220
Met Ile Lys Ala Ser Trp Gly Gly Gly Gly Lys Gly Ile Arg Lys Val
225                 230                 235                 240
His Asn Asp Asp Glu Val Arg Ala Leu Phe Lys Gln Val Gln Gly Glu
                245                 250                 255
Val Pro Gly Ser Pro Ile Phe Ile Met Lys Val Ala Ser Gln Ser Arg
            260                 265                 270
His Leu Glu Val Gln Leu Leu Cys Asp Gln Tyr Gly Asn Val Ala Ala
        275                 280                 285
Leu His Ser Arg Asp Cys Ser Val Gln Arg Arg His Gln Lys Ile Ile
    290                 295                 300
Glu Glu Gly Pro Ile Thr Val Ala Pro Pro Gln Thr Val Lys Gln Leu
305                 310                 315                 320
Glu Gln Ala Ala Arg Arg Leu Ala Lys Ser Val Asn Tyr Val Gly Ala
                325                 330                 335
Ala Thr Val Glu Tyr Leu Phe Ser Met Glu Thr Gly Glu Tyr Tyr Phe
            340                 345                 350
Leu Glu Leu Asn Pro Arg Leu Gln Val Glu His Pro Val Thr Glu Trp
        355                 360                 365
Ile Ala Glu Ile Asn Leu Pro Ala Ala Gln Val Ala Ile Gly Met Gly
    370                 375                 380
Ile Pro Leu Trp Gln Leu Pro Glu Ile Arg Arg Phe Tyr Gly Val Glu
385                 390                 395                 400
His Gly Gly Gly Asn Asp Ala Trp Arg Lys Thr Ser Ala Leu Ala Thr
                405                 410                 415
Pro Phe Asp Phe Asp Lys Ala Gln Ser Thr Lys Pro Lys Gly His Cys
            420                 425                 430
Val Ala Val Arg Val Thr Ser Glu Asp Pro Asp Asp Gly Phe Lys Pro
        435                 440                 445
Thr Ser Gly Lys Val Gln Glu Leu Ser Phe Lys Ser Lys Pro Asn Val
    450                 455                 460
Trp Ala Tyr Phe Ser Val Lys Ser Gly Gly Gly Ile His Glu Phe Ser
465                 470                 475                 480
Asp Ser Gln Phe Gly His Val Phe Ala Phe Gly Glu Ser Arg Ala Leu
                485                 490                 495
Ala Ile Ala Asn Met Val Leu Gly Leu Lys Glu Ile Gln Ile Arg Gly
            500                 505                 510
Glu Ile Arg Thr Asn Val Asp Tyr Thr Ile Asp Leu Leu Asn Ala Ser
        515                 520                 525
Asp Tyr Arg Asp Asn Lys Ile His Thr Gly Trp Leu Asp Ser Arg Ile
    530                 535                 540
Ala Met Arg Val Arg Ala Glu Arg Pro Pro Trp Tyr Leu Ser Val Val
545                 550                 555                 560
Gly Gly Ala Leu Tyr Lys Ala Ser Ala Ser Ser Ala Ala Leu Val Ser
                565                 570                 575
Asp Tyr Val Gly Tyr Leu Glu Lys Gly Gln Ile Pro Pro Lys His Ile
            580                 585                 590
Ser Leu Val His Ser Gln Val Ser Leu Asn Ile Glu Gly Ser Lys Tyr
        595                 600                 605
Thr Ile Asp Met Val Arg Gly Gly Ser Gly Ser Tyr Arg Leu Arg Met
    610                 615                 620
Asn Gln Ser Glu Val Glu Ala Glu Ile His Thr Leu Arg Asp Gly Gly
625                 630                 635                 640
Leu Leu Met Gln Leu Asp Gly Asn Ser His Val Ile Tyr Ala Glu Glu
                645                 650                 655
Glu Ala Ala Gly Thr Arg Leu Leu Ile Asp Gly Arg Thr Cys Leu Leu
            660                 665                 670
Gln Asn Asp His Asp Pro Ser Lys Leu Val Ala Glu Thr Pro Cys Lys
        675                 680                 685
Leu Met Arg Tyr Leu Val Val Asp Asp Ser His Ile Asp Ala Asp Thr
    690                 695                 700
Pro Tyr Ala Glu Val Glu Val Met Lys Met Cys Met Pro Leu Leu Ser
705                 710                 715                 720
Pro Ala Ser Gly Val Ile His Phe Lys Met Ser Glu Gly Gln Pro Met
                725                 730                 735
Gln Ala Gly Glu Leu Ile Ala Arg Leu Asp Leu Asp Asp Pro Ser Ala
            740                 745                 750
Val Arg Lys Ala Glu Pro Phe Asn Gly Lys Phe Pro Val Leu Gly Pro
        755                 760                 765
Pro Thr Ala Thr Ser Asp Lys Val His Gln Lys Cys Ala Ala Ser Leu
    770                 775                 780
Ser Ala Ala Gln Met Ile Leu Ala Gly Tyr Glu His Asn Ile Asp Glu
785                 790                 795                 800
Val Val Gln Ser Leu Leu Asn Cys Leu Asp Ser Pro Glu Leu Pro Phe
                805                 810                 815
Leu Gln Trp Gln Glu Cys Phe Ala Val Leu Ala Asn Arg Leu Pro Lys
            820                 825                 830
Asp Leu Lys Asn Glu Leu Glu Ser Lys Tyr Lys Glu Tyr Glu Arg Ile
        835                 840                 845
Ser Ser Phe Gln Val Val Asp Phe Pro Ala Lys Leu Leu Lys Gly Ile
    850                 855                 860
Leu Glu Ala His Leu Ser Ser Cys Pro Asn Lys Glu Lys Gly Ala Gln
865                 870                 875                 880
Glu Arg Leu Ile Glu Pro Leu Leu Ser Leu Val Lys Ser Tyr Glu Gly
                885                 890                 895
Gly Arg Glu Ser His Ala Arg Lys Ile Val Gln Ser Leu Phe Glu Glu
            900                 905                 910
Tyr Leu Phe Val Glu Glu Leu Phe Ser Asp Asn Ile Gln Ala Asp Val
        915                 920                 925
Ile Glu Arg Leu Arg Leu Gln Tyr Lys Lys Asp Leu Leu Lys Ile Val
    930                 935                 940
Asp Ile Val Leu Ser His Gln Gly Ile Lys Ser Lys Asn Lys Leu Ile
945                 950                 955                 960
Leu Arg Leu Met Asp Lys Leu Val Tyr Pro Asn Pro Ala Ala Tyr Arg
                965                 970                 975
Asp Gln Leu Ile Arg Phe Ser Gln Leu Asn His Thr Asn Tyr Ser Gln
            980                 985                 990
Leu Ala Leu Lys Ala Ser Gln Leu  Leu Glu Gln Thr Lys  Leu Ser Glu
        995                 1000                 1005
Leu Arg  Ser Asn Ile Ala Arg  Ser Leu Ser Glu Leu  Glu Met Phe
    1010                 1015                 1020
Thr Glu  Asp Gly Glu Asn Ile  Asp Thr Pro Lys Arg  Lys Ser Ala
    1025                 1030                 1035
Ile Asn  Asp Arg Met Glu Asp  Leu Val Ser Ala Pro  Leu Ala Val
    1040                 1045                 1050
Glu Asp  Ala Leu Val Gly Leu  Phe Asp His Ser Asp  His Thr Leu
    1055                 1060                 1065
Gln Arg  Arg Val Val Glu Thr  Tyr Ile Arg Arg Leu  Tyr Gln Pro
    1070                 1075                 1080
Tyr Leu  Val Lys Gly Ser Val  Arg Met Gln Trp His  Arg Ser Gly
    1085                 1090                 1095
Leu Ile  Ala Ser Trp Glu Phe  Leu Glu Glu Tyr Ile  Glu Arg Lys
    1100                 1105                 1110
Ser Gly  Val Glu Asp Gln Met  Ser Asp Lys Thr Leu  Val Glu Lys
    1115                 1120                 1125
His Thr  Glu Lys Lys Trp Gly  Val Met Val Val Ile  Lys Ser Leu
    1130                 1135                 1140
His Phe  Leu Pro Ala Ile Ile  Thr Ala Ala Leu Lys  Glu Ala Thr
    1145                 1150                 1155
Asn Asn  Leu His Glu Ala Val  Ser Ser Ala Ala Gly  Glu Pro Val
    1160                 1165                 1170
Lys His  Gly Asn Met Met His  Val Ala Leu Val Gly  Ile Asn Asn
    1175                 1180                 1185
Gln Met  Ser Leu Leu Gln Asp  Ser Gly Asp Glu Asp  Gln Ala Gln
    1190                 1195                 1200
Glu Arg  Ile Asn Lys Leu Ala  Lys Ile Leu Lys Glu  Glu Glu Val
    1205                 1210                 1215
Gly Ser  Thr Ile Arg Gly Thr  Gly Val Gly Val Ile  Ser Cys Ile
    1220                 1225                 1230
Ile Gln  Arg Asp Glu Gly Arg  Thr Pro Met Arg His  Ser Phe His
    1235                 1240                 1245
Trp Ser  Ala Glu Lys Leu Tyr  Tyr Gln Glu Glu Pro  Leu Leu Arg
    1250                 1255                 1260
His Leu  Glu Pro Pro Leu Ser  Ile Tyr Leu Glu Leu  Asp Lys Leu
    1265                 1270                 1275
Lys Gly  Tyr Glu Asn Ile Arg  Tyr Thr Pro Ser Arg  Asp Arg Gln
    1280                 1285                 1290
Trp His  Leu Tyr Thr Val Met  Asp Gln Lys Pro Gln  Pro Ala Gln
    1295                 1300                 1305
Arg Met  Phe Leu Arg Thr Leu  Leu Arg Gln Pro Thr  Thr Asn Glu
    1310                 1315                 1320
Gly Phe  Ser Ser Tyr Gln Arg  Thr Asp Ala Glu Thr  Pro Ser Thr
    1325                 1330                 1335
Glu Leu  Ala Met Ser Phe Thr  Ser Arg Ser Ile Phe  Arg Ser Leu
    1340                 1345                 1350
Met Ala  Ala Met Glu Glu Leu  Glu Leu Asn Ser His  Asn Ala Thr
    1355                 1360                 1365
Ile Arg  Pro Glu His Ala His  Met Tyr Leu Tyr Ile  Ile Arg Glu
    1370                 1375                 1380
Gln Glu  Ile Asn Asp Leu Val  Pro Tyr Pro Lys Arg  Val Asp Ile
    1385                 1390                 1395
Asp Ala  Gly Gln Glu Glu Thr  Thr Val Glu Ala Thr  Leu Glu Glu
    1400                 1405                 1410
Leu Ala  His Glu Ile His Ser  Ser Val Gly Val Arg  Met His Arg
    1415                 1420                 1425
Leu Gly  Val Val Val Trp Glu  Val Lys Leu Trp Met  Ala Ala Cys
    1430                 1435                 1440
Ala Gln  Ala Asn Gly Ala Trp  Arg Ile Val Val Asn  Asn Val Thr
    1445                 1450                 1455
Gly His  Thr Cys Thr Val His  Ile Tyr Arg Glu Met  Glu Asp Thr
    1460                 1465                 1470
Asn Thr  His Arg Val Val Tyr  Ser Ser Ile Thr Val  Lys Gly Pro
    1475                 1480                 1485
Leu His  Gly Val Pro Val Asn  Glu Thr Tyr Gln Pro  Leu Gly Val
    1490                 1495                 1500
Ile Asp  Arg Lys Arg Leu Ser  Ala Arg Lys Asn Ser  Thr Thr Phe
    1505                 1510                 1515
Cys Tyr  Asp Phe Pro Leu Ala  Phe Glu Thr Ala Leu  Glu Gln Ser
    1520                 1525                 1530
Trp Ala  Ile Gln Gln Pro Gly  Phe Arg Arg Pro Lys  Asp Lys Asn
    1535                 1540                 1545
Leu Leu  Lys Val Thr Glu Leu  Arg Phe Ala Asp Lys  Glu Gly Ser
    1550                 1555                 1560
Trp Gly  Thr Pro Leu Val Pro  Val Glu His Ser Ala  Gly Leu Asn
    1565                 1570                 1575
Asp Val  Gly Met Val Ala Trp  Phe Met Asp Met Cys  Thr Pro Glu
    1580                 1585                 1590
Phe Pro  Ser Gly Arg Thr Ile  Leu Val Val Ala Asn  Asp Val Thr
    1595                 1600                 1605
Phe Lys  Ala Gly Ser Phe Gly  Pro Arg Glu Asp Ala  Phe Phe Arg
    1610                 1615                 1620
Ala Val  Thr Asp Leu Ala Cys  Ala Lys Lys Leu Pro  Leu Ile Tyr
    1625                 1630                 1635
Leu Ala  Ala Asn Ser Gly Ala  Arg Leu Gly Ala Ala  Glu Glu Val
    1640                 1645                 1650
Lys Ala  Cys Phe Lys Val Gly  Trp Ser Glu Glu Ser  Asn Pro Glu
    1655                 1660                 1665
His Gly  Phe Gln Tyr Val Tyr  Leu Thr Pro Glu Asp  Phe Ala Arg
    1670                 1675                 1680
Ile Gly  Ser Ser Val Ile Ala  His Glu Leu Lys Leu  Glu Ser Gly
    1685                 1690                 1695
Glu Thr  Arg Trp Ile Ile Asp  Thr Ile Val Gly Lys  Glu Asp Gly
    1700                 1705                 1710
Leu Gly  Val Glu Asn Leu Ser  Gly Ser Gly Ala Ile  Ala Gly Ser
    1715                 1720                 1725
Tyr Ser  Arg Ala Tyr Lys Glu  Thr Phe Thr Leu Thr  Tyr Val Thr
    1730                 1735                 1740
Gly Arg  Thr Val Gly Ile Gly  Ala Tyr Leu Ala Arg  Leu Gly Met
    1745                 1750                 1755
Arg Cys  Ile Gln Arg Leu Asp  Gln Pro Ile Ile Leu  Thr Gly Phe
    1760                 1765                 1770
Ser Ala  Leu Asn Lys Leu Leu  Gly Arg Glu Val Tyr  Ser Ser His
    1775                 1780                 1785
Met Gln  Leu Gly Gly Pro Lys  Ile Met Ala Thr Asn  Gly Val Val
    1790                 1795                 1800
His Leu  Thr Val Ser Asp Asp  Leu Glu Gly Val Ser  Ala Ile Leu
    1805                 1810                 1815
Lys Trp  Leu Ser Tyr Ile Pro  Ser His Val Gly Gly  Ser Leu Pro
    1820                 1825                 1830
Ile Val  Lys Pro Leu Asp Pro  Pro Glu Arg Pro Val  Glu Tyr Leu
    1835                 1840                 1845
Pro Glu  Asn Ser Cys Asp Pro  Arg Ala Ala Ile Ser  Gly Thr Leu
    1850                 1855                 1860
Asp Gly  Asn Gly Arg Trp Leu  Gly Gly Ile Phe Asp  Lys Asp Ser
    1865                 1870                 1875
Phe Val  Glu Thr Leu Glu Gly  Trp Ala Arg Thr Val  Val Thr Gly
    1880                 1885                 1890
Arg Ala  Lys Leu Gly Gly Ile  Pro Val Gly Ile Val  Ala Val Glu
    1895                 1900                 1905
Thr Gln  Thr Val Met Gln Ile  Ile Pro Ala Asp Pro  Gly Gln Leu
    1910                 1915                 1920
Asp Ser  His Glu Arg Val Val  Pro Gln Ala Gly Gln  Val Trp Phe
    1925                 1930                 1935
Pro Asp  Ser Ala Thr Lys Thr  Ala Gln Ala Ile Met  Asp Phe Asn
    1940                 1945                 1950
Arg Glu  Glu Leu Pro Leu Phe  Ile Leu Ala Asn Trp  Arg Gly Phe
    1955                 1960                 1965
Ser Gly  Gly Gln Arg Asp Leu  Phe Glu Gly Ile Leu  Gln Ala Gly
    1970                 1975                 1980
Ser Thr  Ile Val Glu Asn Leu  Arg Thr Tyr Lys Gln  Pro Ile Phe
    1985                 1990                 1995
Val Tyr  Ile Pro Met Met Gly  Glu Leu Arg Gly Gly  Ala Trp Val
    2000                 2005                 2010
Val Val  Asp Ser Arg Ile Asn  Ser Asp His Ile Glu  Met Tyr Ala
    2015                 2020                 2025
Asp Arg  Thr Ala Lys Gly Asn  Val Leu Glu Pro Glu  Gly Met Ile
    2030                 2035                 2040
Glu Ile  Lys Phe Arg Thr Arg  Glu Leu Leu Glu Cys  Met Gly Arg
    2045                 2050                 2055
Leu Asp  Gln Lys Leu Ile Thr  Leu Lys Ala Lys Leu  Gln Glu Ala
    2060                 2065                 2070
Lys Asp  Lys Arg Asp Thr Glu  Ser Phe Glu Ser Leu  Gln Gln Gln
    2075                 2080                 2085
Ile Lys  Ser Arg Glu Lys Gln  Leu Leu Pro Leu Tyr  Thr Gln Ile
    2090                 2095                 2100
Ala Thr  Lys Phe Ala Glu Leu  His Asp Thr Ser Leu  Arg Met Ala
    2105                 2110                 2115
Ala Lys  Gly Val Ile Arg Gln  Val Leu Asp Trp Gly  Asn Ser Arg
    2120                 2125                 2130
Ala Val  Phe Tyr Arg Arg Leu  Tyr Arg Arg Ile Gly  Glu Gln Ser
    2135                 2140                 2145
Leu Ile  Asn Asn Val Arg Glu  Ala Ala Gly Asp His  Leu Ser His
    2150                 2155                 2160
Val Ser  Ala Met Asp Leu Val  Lys Asn Trp Tyr Leu  Ser Ser Asn
    2165                 2170                 2175
Ile Ala  Lys Gly Arg Lys Asp  Ala Trp Leu Asp Asp  Glu Ala Phe
    2180                 2185                 2190
Phe Ser  Trp Lys Glu Asn Pro  Ser Asn Tyr Glu Asp  Lys Leu Lys
    2195                 2200                 2205
Glu Leu  Arg Ala Gln Lys Val  Leu Leu Gln Leu Thr  Asn Ile Gly
    2210                 2215                 2220
Asp Ser  Val Leu Asp Leu Gln  Ala Leu Pro Gln Gly  Leu Ala Ala
    2225                 2230                 2235
Leu Leu  Ser Lys Leu Glu Pro  Ser Ser Arg Val Lys  Leu Ala Glu
    2240                 2245                 2250
Glu Leu  Arg Lys Val Leu Gly
    2255                 2260