一种禽畜用抗病毒组合物.pdf

本发明所述的一种禽畜用抗病毒组合物涉及一种抗病毒剂，尤其涉及一种用于家禽家畜的抗病毒剂。其是由质量比为3∶1的蓝藻抗病毒蛋白和动物IFN-α组成。本发明首次把蓝藻抗病毒蛋白用于治疗禽畜类的病毒性感染，首次把用基因重组的方法制备的高效价、高纯度的来自猪、鸡、牛等不同种属的具有抗病毒作用的动物IFN-α与有直接抗病毒作用的蓝藻抗病毒蛋白联合应用；抗病毒蛋白的作用直接快速、IFN-α的抗病毒作用广泛持久，比单独使用抗病毒蛋白或IFN-α的都要好。

1、  一种禽畜用抗病毒组合物，其特征在于其是由质量比为3∶1的蓝藻抗病毒蛋白和动物IFN-α组成。

2、  如权利要求1所述的禽畜用抗病毒组合物用于制备治疗禽畜用病毒病的药品。

3、  如权利要求2所述的禽畜用抗病毒组合物用于制备治疗禽畜用病毒病的口服药品，其制备方法为：将禽畜用抗病毒组合物与含抗特异性病毒IgY的鸡蛋粉以5∶2的质量比混合即可。

4、  如权利要求1所述的禽畜用抗病毒组合物，其特征在于所述的蓝藻抗病毒蛋白按以下方法制得：
(1)从蓝藻中提取总RNA，通过RT-PCR扩增蓝藻抗病毒蛋白的基因片段，其中蓝藻抗病毒蛋白的氨基酸序列是：
LGKFSQTCYNSAIQGSVLTSTCERTNGGYNTSSIDLNSVIENVDGSLKWQPSNFIETCRNTQLAGS
SELAAECKTRAQQFVSTKINLDDHIANIDGTLKYE。
蓝藻抗病毒蛋白的核苷酸序列是：
cttggtaaattctcccagacctgctacaactccgctatccagggttccgttctgacctccacctgc
gaacgtaccaacggtggttacaacacctcctccatcgacctgaactccgttatcgaaaacgttgac
ggttccctgaaatggcagccgtccaacttcatcgaaacctgccgtaacacccagctggctggttcc
tccgaactggctgctgaatgcaaaacccgtgctcagcagttcgtttccaccaaaatcaacctggac
gaccacatcgctaacatcgacggtaccctgaaatacgaataa
(2)经测序确认序列无误后，把上述核苷酸序列克隆到pET26b(+)载体，在E.coli BL21感受态细胞中表达；
(3)工程菌经IPTG诱导表达可溶性抗病毒蛋白，用DEAD葡聚糖离子交换层析纯化即可。

5、  如权利要求1所述的禽畜用抗病毒组合物，其特征在于所述的动物IFN-α按以下方法制得：
(1)从动物脾脏中提取总RNA，通过RT-PCR扩增动物IFN-α的基因片段；
(2)经测序确认序列无误后，把上述核苷酸序列克隆到pIC9K载体，在Pichia pastoris载体中表达；
(3)通过甲醇诱导，培养5天，收集培养液，从上清中经DEAE葡聚糖离子交换层析纯化即可。

6、  如权利要求1所述的禽畜用抗病毒组合物，其特征在于所述的动物IFN-α为猪IFN-α，它是按以下方法制得：
(1)从猪脾脏中提取总RNA，通过RT-PCR扩增猪的IFN-α的基因片段，其中，猪IFN-α的的氨基酸序列是：
MAPTSAFLTALVLLSCNAICSLGCDLPQTHSLAHTRALRLLAQMRRISPFSCLDHRRDFGSPHEAF
GGNQVQKAQAMALVHEMLQQTFQLFSTEGSAAAWNESLLHQFCTGLDQQLRDLEACVMQEAGLEGT
PLLEEDSILAVRKYFHRLTLYLQEKSYSPCAWEIVRAEVMRSFSSSRNLQDRLRKKE.
猪IFN-α的核苷酸序列是：
atggccccaacctcagccttcctcacggccctggtgctactcagctgcaatgccatctgctctctg
ggctgtgacctgcctcagacccacagcctggctcacaccagggccctgaggctcctggcacaaatg
aggagaatctctcccttctcctgcctggaccacagaagggactttggatcccctcatgaggctttt
gggggcaaccaggtccagaaggctcaagccatggctctggtgcatgagatgctccagcagaccttc
cagctcttcagcacagagggctcggctgctgcctggaatgagagcctcctgcaccagttctgcact
ggactggatcagcagctcagggacctggaagcctgtgtcatgcaggaggcggggctggaagggacc
cccctgctggaggaggactccatcctggctgtgaggaaatacttccacagactcaccctctatctg
caagagaagagctacagcccctgtgcctgggagatcgtcagggcagaagtcatgagatccttctct
tcctccagaaacctgcaagacagactcaggaagaaggagtga
(2)经测序确认序列无误后，把上述核苷酸序列克隆到pIC9K载体，在Pichia pastoris载体中表达；
(3)通过甲醇诱导，培养5天，收集培养液，从上清中经DEAE葡聚糖离子交换层析纯化即可。

7、  如权利要求1所述的禽畜用抗病毒组合物，其特征在于所述的动物IFN-α为牛IFN-α，它是按以下方法制得：
(1)从牛脾脏中提取总RNA，通过RT-PCR扩增牛的IFN-α的基因片段，其中，牛IFN-α的的氨基酸序列是：
MAPAWSFLLSLLLLSCNAICSLGCHLPHTHSLANRRVLMLLQQLRRVSPSSCLQDRNDFEFLQEAL
GGSQLQKAQAISVLHEVTQHTFQLFSTEGSPATWDKSLLDKLRAALDQQLTDLQACLTQEEGLRGA
PLLKEDSSLAVRKYFHRLTLYLQEKRHSPCAWEVVRAEVMRAFSSSTNLQESFRRKD.
牛IFN-α的核苷酸序列是：
atggccccagcctggtccttcctgctatccctgttgctgctcagctgcaacgccatctgctctctg
ggttgccacctgcctcacacccacagcctggccaacaggagggtcctgatgctcctgcaacaactg
agaagggtctccccttcctcctgcctgcaggacagaaatgacttcgaattcctccaggaggctctg
ggtggcagccagttgcagaaggctcaagccatctctgtgctccacgaggtgacccagcacaccttc
cagctcttcagcacagagggctcgcccgccacgtgggacaagagcctcctggacaagctacgcgct
gcgctggatcagcagctcactgacctgcaagcctgtctgacgcaggaggaggggctgcgaggggct
cccctgctcaaggaggactccagcctggctgtgaggaaatacttccacagactcactctctatctg
caagagaagagacacagcccttgtgcctgggaggttgtcagagcagaagtcatgagagccttctct
tcctcaacaaacttgcaggagagtttcaggagaaaggactga
(2)经测序确认序列无误后，把上述核苷酸序列克隆到pIC9K载体，在Pichia pastoris载体中表达；
(3)通过甲醇诱导，培养5天，收集培养液，从上清中经DEAE葡聚糖离子交换层析纯化即可。

8、  如权利要求1所述的禽畜用抗病毒组合物，其特征在于所述的动物IFN-α为鸡IFN-α，它是按以下方法制得：
(1)从鸡脾脏中提取总RNA，通过RT-PCR扩增鸡的IFN-α的基因片段，其中，鸡IFN-α的的氨基酸序列是：
MAVPASPQHPRGYGILLLTLLLKALATTASACNHLRSQDATFSHDSLQLLRDMAPTLPQLCPQHNA
SCSFNDTILDTSNTRQADKTTHDILQHLFKILSSPSTPAHWNDSQRQSLLNRIHRYTQHLEQCLDS
SDTRSRTRWPRNLHLTIKKHFSCLHTFLQDNDYSACAWEHVRLQARAWFLHIHNLTGNTRT
鸡IFN-α的核苷酸序列是：
atggctgtgcctgcaagcccacagcacccacgggggtacggcatcctgctgctcacgctccttctg
aaagctctcgccaccaccgcctccgcctgcaaccaccttcgctcccaggatgccaccttctctcac
gacagcctccagctcctccgggacatggctcccacactaccccagctgtgcccacagcacaacgcg
tcttgctccttcaacgacaccatcctggacaccagcaacacccggcaagccgacaaaaccacccac
gacatccttcagcacctcttcaaaatcctcagcagccccagcactccagcccactggaacgacagc
caacgccaaagcctcctcaaccggatccaccgctacacccagcacctcgagcaatgcttggacagc
agcgacacgcgctcccggacgcgatggcctcgcaaccttcacctcaccatcaaaaaacacttcagc
tgcctccacaccttcctccaagacaacgattacagcgcctgcgcctgggaacacgtccgcctgcaa
gctcgtgcctggttcctgcacatccacaacctcacaggcaacacgcgcacttag
(2)经测序确认序列无误后，把上述核苷酸序列克隆到pIC9K载体，在Pichia pastoris载体中表达；
(3)通过甲醇诱导，培养5天，收集培养液，从上清中经DEAE葡聚糖离子交换层析纯化即可。

9、  如权利要求6所述的禽畜用抗病毒组合物用于制备治疗猪病毒病的药品。

10、  如权利要求9所述的禽畜用抗病毒组合物用于制备治疗猪口蹄疫的药品。

一种禽畜用抗病毒组合物
【技术领域】
本发明涉及一种抗病毒剂，尤其涉及一种用于家禽家畜的抗病毒剂。
【背景技术】
IFN-α是一个具有很强抗病毒活性是的细胞因子，它在治疗人的病毒性疾病中已经广泛应用，并成为一种必需的疗法。比如，在丙型肝炎的治疗中，IFN-α起着无法替代的作用。由于IFN-α抗病毒的作用是间接的，是通过诱导体内的其它抗病毒机理而起作用的，它的一个重要特点是没有病毒特异性，也就是说IFN-α有抗不同病毒的活性；但IFN-α抗病毒作用的另外一个重要特点是种属特异性，也就是说来自某一个种属的IFN-α，只对那个种属感染的病毒有效，而对其余种属感染的病毒无效。比如，人的IFN-α只对人的病毒感染有效，对其它种属包括猪、牛、鸡等则无效。抗其它这些种属的病毒感染则需要制备各自种属特异的IFN-α。IFN-α可由人或不同种属动物的白细胞经干扰素诱导剂(比如新城鸡瘟病毒，PHA、黄芪提取物等)刺激而产生。但这类白细胞干扰素的效价往往比较低，而且一般都是未加纯化的粗制品，所以普遍疗效较差，也难免会有副作用；早期有给人用的，多年前已经禁止给人用。兽用的白细胞干扰素还在流行，但最好是制备基因重组干扰素，以保证最好的疗效、最小的毒副作用。由于不同种属之间的IFN-α基因序列不同，所以就需要分别克隆并表达和纯化不同种属的IFN-α。
蓝藻抗病毒蛋白质是从蓝藻里分离纯化的一个具有高度抗病毒活性的植物蛋白质，为了便于大量制备现已通过基因工程的方法生产。最初发现蓝藻抗病毒蛋白有抗HIV的作用，后来已证实它还有抗流感病毒、疱疹病毒、出血热病毒、丙肝病毒等多种病毒的活性。但由于它是一个植物蛋白质，进入人体后会产生抗体反应，产生的抗体会中和后续进入的蓝藻蛋白，从而减弱其抗病毒作用。也就是说，尽管蓝藻蛋白质在体外有很好的抗病毒活性，但其体内抗病毒的应用一直受到很大的限制。目前报道的是用蓝藻抗病毒蛋白做成阴道栓剂，预防和治疗HIV感染，效果比较肯定；还有人正在研究如何降低其免疫原性，但实用的方法比较少。鉴于蓝藻抗病毒蛋白的这些特点，及动物生命周期短的特性，本发明把蓝藻抗病毒蛋白质用于治疗动物的病毒感染，疗效理想。鸡和鸭的生长期只有6周左右，猪和牛的生长期也只有几个月；而且这些禽畜往往易患急性病毒性感染，比如鸡瘟、猪瘟、口蹄疫、蓝耳病等。从使用蓝藻抗病毒蛋白质到产生特异性抗体往往需要一个月，产生高效价的特异性抗体则需要多次使用，也就是说需要几个月的多次使用，实际上是治疗禽畜类的急性病毒性疾病不需要多次也不会长期使用。因此，虽然使用蓝藻抗病毒蛋白质治疗人的病毒性感染有其局限性，但很适合治疗禽畜类的病毒性感染，尤其是禽畜类的急性病毒性感染。
【发明内容】
本发明旨在提供一种能有效治疗禽畜病毒病的禽畜用抗病毒组合物。
所述的禽畜用抗病毒组合物是由质量比为3∶1的蓝藻抗病毒蛋白和动物IFN-α组成。它可以用于制备治疗禽畜用病毒病的药品。其中，动物IFN-α根据治疗的禽畜种属选择相应种属的IFN-α。
当禽畜用抗病毒组合物与含抗特异性病毒IgY的鸡蛋粉以5∶2的质量比混合后，可以用于制备治疗禽畜用病毒病的口服药品。
其中，所述的蓝藻抗病毒蛋白按以下方法制得：
(1)从蓝藻中提取总RNA，通过RT-PCR扩增蓝藻抗病毒蛋白的基因片段，蓝藻抗病毒蛋白的氨基酸序列是：
LGKFSQTCYNSAIQGSVLTSTCERTNGGYNTSSIDLNSVIENVDGSLKWQPSNFIETCRNTQLAGSSELAAECKTRAQQFVSTKINLDDHIANIDGTLKYE。
蓝藻抗病毒蛋白的核苷酸序列是：
cttggtaaattctcccagacctgctacaactccgctatccagggttccgttctgacctccacctgcgaacgtaccaacggtggttacaacacctcctccatcgacctgaactccgttatcgaaaacgttgacggttccctgaaatggcagccgtccaacttcatcgaaacctgccgtaacacccagctggctggttcctccgaactggctgctgaatgcaaaacccgtgctcagcagttcgtttccaccaaaatcaacctggacgaccacatcgctaacatcgacggtaccctgaaatacgaataa
(2)经测序确认序列无误后，把上述核苷酸序列克隆到pET26b(+)载体，在E.coli BL21感受态细胞中表达；
(3)工程菌经IPTG诱导表达可溶性抗病毒蛋白，用DEAD葡聚糖离子交换层析纯化即可。
所述的动物IFN-α按以下方法制得：
(1)从动物脾脏中提取总RNA，通过RT-PCR扩增动物IFN-α的基因片段；
(2)经测序确认序列无误后，把上述核苷酸序列克隆到pIC9K载体，在Pichia pastoris载体中表达；
(3)通过甲醇诱导，培养5天，收集培养液，从上清中经DEAE葡聚糖离子交换层析纯化即可。
当用于制备猪病毒病药品时，所述的动物IFN-α为猪IFN-α，它是按以下方法制得：
(1)从猪脾脏中提取总RNA，通过RT-PCR扩增猪的IFN-α的基因片段，其中，
猪IFN-α的的氨基酸序列是：
MAPTSAFLTALVLLSCNAICSLGCDLPQTHSLAHTRALRLLAQMRRISPFSCLDHRRDFGSPHEAFGGNQVQKAQAMALVHEMLQQTFQLFSTEGSAAAWNESLLHQFCTGLDQQLRDLEACVMQEAGLEGTPLLEEDSILAVRKYFHRLTLYLQEKSYSPCAWE IVRAEVMRSFSSSRNLQDRLRKKE.
猪IFN-α的核苷酸序列是：
atggccccaacctcagccttcctcacggccctggtgctactcagctgcaatgccatctgctctctgggctgtgacctgcctcagacccacagcctggctcacaccagggccctgaggctcctggcacaaatgaggagaatctctcccttctcctgcctggaccacagaagggactttggatcccctcatgaggcttttgggggcaaccaggtccagaaggctcaagccatggctctggtgcatgagatgctccagcagaccttccagctcttcagcacagagggctcggctgctgcctggaatgagagcctcctgcaccagttctgcactggactggatcagcagctcagggacctggaagcctgtgtcatgcaggaggcggggctggaagggacccccctgctggaggaggactccatcctggctgtgaggaaatacttccacagactcaccctctatctgcaagagaagagctacagcccctgtgcctgggagatcgtcagggcagaagtcatgagatccttctcttcctccagaaacctgcaagacagactcaggaagaaggagtga
(2)经测序确认序列无误后，把上述核苷酸序列克隆到pIC9K载体，在Pichia pastoris载体中表达；
(3)通过甲醇诱导，培养5天，收集培养液，从上清中经DEAE葡聚糖离子交换层析纯化即可。
当用于制备牛病毒病药品时，所述的动物IFN-α为牛IFN-α，它是按以下方法制得：
(1)从牛脾脏中提取总RNA，通过RT-PCR扩增牛的IFN-α的基因片段，其中，
牛IFN-α的的氨基酸序列是：
MAPAWSFLLSLLLLSCNAICSLGCHLPHTHSLANRRVLMLLQQLRRVSPSSCLQDRNDFEFLQEALGGSQLQKAQAISVLHEVTQHTFQLFSTEGSPATWDKSLLDKLRAALDQQLTDLQACLTQEEGLRGAPLLKEDSSLAVRKYFHRLTLYLQEKRHSPCAWEVVRAEVMRAFSSSTNLQESFRRKD.
牛IFN-α的核苷酸序列是：
atggccccagcctggtccttcctgctatccctgttgctgctcagctgcaacgccatctgctctctgggttgccacctgcctcacacccacagcctggccaacaggagggtcctgatgctcctgcaacaactgagaagggtctccccttcctcctgcctgcaggacagaaatgacttcgaattcctccaggaggctctgggtggcagccagttgcagaaggctcaagccatctctgtgctccacgaggtgacccagcacaccttccagctcttcagcacagagggctcgcccgccacgtgggacaagagcctcctggacaagctacgcgctgcgctggatcagcagctcactgacctgcaagcctgtctgacgcaggaggaggggctgcgaggggctcccctgctcaaggaggactccagcctggctgtgaggaaatacttccacagactcactctctatctgcaagagaagagacacagcccttgtgcctgggaggttgtcagagcagaagtcatgagagccttctcttcctcaacaaacttgcaggagagtttcaggagaaaggactga
(2)经测序确认序列无误后，把上述核苷酸序列克隆到pIC9K载体，在Pichia pastoris载体中表达；
(3)通过甲醇诱导，培养5天，收集培养液，从上清中经DEAE葡聚糖离子交换层析纯化即可。
当用于制备鸡病毒病药品时，所述的动物IFN-α为鸡IFN-α，它是按以下方法制得：
(1)从鸡脾脏中提取总RNA，通过RT-PCR扩增鸡的IFN-α的基因片段，其中，
鸡IFN-α的的氨基酸序列是：
MAVPASPQHPRGYGILLLTLLLKALATTASACNHLRSQDATFSHDSLQLLRDMAPTLPQLCPQHNASCSFNDTILDTSNTRQADKTTHDILQHLFKILSSPSTPAHWNDSQRQSLLNRIHRYTQHLEQCLDSSDTRSRTRWPRNLHLTIKKHFSCLHTFLQDNDYSACAWEHVRLQARAWFLHIHNLTGNTRT
鸡IFN-α的核苷酸序列是：
atggctgtgcctgcaagcccacagcacccacgggggtacggcatcctgctgctcacgctccttctgaaagctctcgccaccaccgcctccgcctgcaaccaccttcgctcccaggatgccaccttctctcacgacagcctccagctcctccgggacatggctcccacactaccccagctgtgcccacagcacaacgcgtcttgctccttcaacgacaccatcctggacaccagcaacacccggcaagccgacaaaaccacccacgacatccttcagcacctcttcaaaatcctcagcagccccagcactccagcccactggaacgacagccaacgccaaagcctcctcaaccggatccaccgctacacccagcacctcgagcaatgcttggacagcagcgacacgcgctcccggacgcgatggcctcgcaaccttcacctcaccatcaaaaaacacttcagctgcctccacaccttcctccaagacaacgattacagcgcctgcgcctgggaacacgtccgcctgcaagctcgtgcctggttcctgcacatccacaacctcacaggcaacacgcgcacttag
(2)经测序确认序列无误后，把上述核苷酸序列克隆到pIC9K载体，在Pichia pastoris载体中表达；
(3)通过甲醇诱导，培养5天，收集培养液，从上清中经DEAE葡聚糖离子交换层析纯化即可。
本发明首次把蓝藻抗病毒蛋白用于治疗禽畜类的病毒性感染，首次把用基因重组的方法制备的高效价、高纯度的来自猪、鸡、牛等不同种属的具有抗病毒作用的动物IFN-α与有直接抗病毒作用的蓝藻抗病毒蛋白联合应用；抗病毒蛋白的作用直接快速、IFN-α的抗病毒作用广泛持久，比单独使用抗病毒蛋白或IFN-α的都要好。
此外，本发明所述的蓝藻抗病毒蛋白的制备纯化方法，所得的产物纯度高达98％以上，产量高达每升0.7克。所述的动物IFN-α的制备纯化方法，所得的产物纯度高达97％，产量高达每升0.5克。
【具体实施方式】
实施例一
一、制备蓝藻抗病毒蛋白
(1)从蓝藻中提取总RNA，通过RT-PCR扩增蓝藻抗病毒蛋白的基因片段，蓝藻抗病毒蛋白的氨基酸序列是：
LGKFSQTCYNSAIQGSVLTSTCERTNGGYNTSSIDLNSVIENVDGSLKWQPSNFIETCRNTQLAGSSELAAECKTRAQQFVSTKINLDDHIANIDGTLKYE。
蓝藻抗病毒蛋白的核苷酸序列是：
cttggtaaattctcccagacctgctacaactccgctatccagggttccgttctgacctccacctgcgaacgtaccaacggtggttacaacacctcctccatcgacctgaactccgttatcgaaaacgttgacggttccctgaaatggcagccgtccaacttcatcgaaacctgccgtaacacccagctggctggttcctccgaactggctgctgaatgcaaaacccgtgctcagcagttcgtttccaccaaaatcaacctggacgaccacatcgctaacatcgacggtaccctgaaatacgaataa
(2)经测序确认序列无误后，把上述核苷酸序列克隆到pET26b(+)载体，在E.coli BL21感受态细胞中表达；
(3)工程菌经IPTG诱导表达可溶性抗病毒蛋白，用DEAD葡聚糖离子交换层析纯化。
二、制备猪IFN-α
(1)从猪脾脏中提取总RNA，通过RT-PCR扩增猪的IFN-α的基因片段，其中，
猪IFN-α的的氨基酸序列是：
MAPTSAFLTALVLLSCNAICSLGCDLPQTHSLAHTRALRLLAQMRRISPFSCLDHRRDFGSPHEAFGGNQVQKAQAMALVHEMLQQTFQLFSTEGSAAAWNESLLHQFCTGLDQQLRDLEACVMQEAGLEGTPLLEEDSILAVRKYFHRLTLYLQEKSYSPCAWEIVRAEVMRSFSSSRNLQDRLRKKE.
猪IFN-α的核苷酸序列是：
atggccccaacctcagccttcctcacggccctggtgctactcagctgcaatgccatctgctctctgggctgtgacctgcctcagacccacagcctggctcacaccagggccctgaggctcctggcacaaatgaggagaatctctcccttctcctgcctggaccacagaagggactttggatcccctcatgaggcttttgggggcaaccaggtccagaaggctcaagccatggctctggtgcatgagatgctccagcagaccttccagctcttcagcacagagggctcggctgctgcctggaatgagagcctcctgcaccagttctgcactggactggatcagcagctcagggacctggaagcctgtgtcatgcaggaggcggggctggaagggacccccctgctggaggaggactccatcctggctgtgaggaaatacttccacagactcaccctctatctgcaagagaagagctacagcccctgtgcctgggagatcgtcagggcagaagtcatgagatccttctcttcctccagaaacctgcaagacagactcaggaagaaggagtga
(2)经测序确认序列无误后，把上述核苷酸序列克隆到pIC9K载体，在Pichia pastoris载体中表达；
(3)通过甲醇诱导，培养5天，收集培养液，从上清中经DEAE葡聚糖离子交换层析纯化。
三、将蓝藻抗病毒蛋白和猪IFN-α按质量比：3∶1混合。
四、口服抗病毒试验
(一)口服抗病毒试验：
将步骤三所得的抗病毒组合物与含抗特异性病毒IgY的鸡蛋粉按5∶2的质量比混合，形成抗病毒口服制剂(以下称免力快)，用于治疗患有猪口蹄疫的猪：
患口蹄疫的猪30头，分3组，每组各10头。第一组不做任何特殊治疗，作为阴性对照；第二组用菌毒快克拌料(用量为5克/公斤饲料)，作为阳性对照；第三组用免力快拌料(用量为5克/公斤饲料)，作为治疗组。结果5天后，第一组全部死亡，第二组仅存2头，第三组全部存活。
(二)注射抗病毒试验：
将步骤三所得的抗病毒组合物冻干，制成抗病毒粉针剂，用于治疗患有猪口蹄疫的猪：
患口蹄疫的猪30头，分3组，每组各10头。第一组不做任何特殊治疗，作为阴性对照；第二组用口蹄疫抗血清0.5ml/kg体重皮下注射，作为阳性对照；第三组皮下注射抗病毒粉针剂(用量为0.1g/kg体重)，作为治疗组。结果3天后，第一组全部死亡，第二组仅存4头，第三组全部存活。
序列表
<110>广州罗森生物科技有限公司
<120>一种禽畜用抗病毒组合物
<160>4
<210>1
<211>306
<212>DNA
<213>蓝藻抗病毒蛋白
<221>CDS
<222>(1)...(306)
<400>1
ctt ggt aaa ttc tcc cag acc tgc tac aac tcc gct atc cag ggt  45
Leu Gly Lys Phe Ser Gln Thr Cys Tyr Asn Ser Ala Ile Gln Gly
1               5                   10                  15
tcc gtt ctg acc tcc acc tgc gaa cgt acc aac ggt ggt tac aac  90
Ser Val Leu Thr Ser Thr Cys Glu Arg Thr Asn Gly Gly Tyr Asn
                20                  25                  30
acc tcc tcc atc gac ctg aac tcc gtt atc gaa aac gtt gac ggt  135
Thr Ser Ser Ile Asp Leu Asn Ser Val Ile Glu Asn Val Asp Gly
                35                  40                  45
tcc ctg aaa tgg cag ccg tcc aac ttc atc gaa acc tgc cgt aac  180
Ser Leu Lys Trp Gln Pro Ser Asn Phe Ile Glu Thr Cys Arg Asn
                50                  55                  60
acc cag ctg gct ggt tcc tcc gaa ctg gct gct gaa tgc aaa acc  225
Thr Gln Leu Ala Gly Ser Ser Glu Leu Ala Ala Glu Cys Lys Thr
                65                  70                  75
cgt gct cag cag ttc gtt tcc acc aaa atc aac ctg gac gac cac  270
Arg Ala Gln Gln Phe Val Ser Thr Lys Ile Asn Leu Asp Asp His
                80                  85                  90
atc gct aac atc gac ggt acc ctg aaa tac gaa taa 306
Ile Ala Asn Ile Asp Gly Thr Leu Lys Tyr Glu ＊
                95                  100
<210>2
<211>570
<212>DNA
<213>猪IFN-α
<221>CDS
<222>(1)...(570)
<400>2
atg gcc cca acc tca gcc ttc ctc acg gcc ctg gtg cta ctc agc  45
Met Ala Pro Thr Ser Ala Phe Leu Thr Ala Leu Val Leu Leu Ser
1               5                   10                  15
tgc aat gcc atc tgc tct ctg ggc tgt gac ctg cct cag acc cac  90
Cys Asn Ala Ile Cys Ser Leu Gly Cys Asp Leu Pro Gln Thr His
                20                  25                  30
agc ctg gct cac acc agg gcc ctg agg ctc ctg gca caa atg agg  135
Ser Leu Ala His Thr Arg Ala Leu Arg Leu Leu Ala Gln Met Arg
                35                  40                  45
aga atc tct ccc ttc tcc tgc ctg gac cac aga agg gac ttt gga  180
Arg Ile Ser Pro Phe Ser Cys Leu Asp His Arg Arg Asp Phe Gly
                50                  55                  60
tcc cct cat gag gct ttt ggg ggc aac cag gtc cag aag gct caa  225
Ser Pro His Glu Ala Phe Gly Gly Asn Gln Val Gln Lys Ala Gln
                65                  70                  75
gcc atg gct ctg gtg cat gag atg ctc cag cag acc ttc cag ctc  270
Ala Met Ala Leu Val His Glu Met Leu Gln Gln Thr Phe Gln Leu
                80                  85                  90
ttc agc aca gag ggc tcg gct gct gcc tgg aat gag agc ctc ctg  315
Phe Ser Thr Glu Gly Ser Ala Ala Ala Trp Asn Glu Ser Leu Leu
                95                  100                 105
cac cag ttc tgc act gga ctg gat cag cag ctc agg gac ctg gaa  360
His Gln Phe Cys Thr Gly Leu Asp Gln Gln Leu Arg Asp Leu Glu
                110                 115                 120
gcc tgt gtc atg cag gag gcg ggg ctg gaa ggg acc ccc ctg ctg  405
Ala Cys Val Met Gln Glu Ala Gly Leu Glu Gly Thr Pro Leu Leu
                125                 130                 135
gag gag gac tcc atc ctg gct gtg agg aaa tac ttc cac aga ctc  450
Glu Glu Asp Ser Ile Leu Ala Val Arg Lys Tyr Phe His Arg Leu
                140                 145                 150
acc ctc tat ctg caa gag aag agc tac agc ccc tgt gcc tgg gag  495
Thr Leu Tyr Leu Gln Glu Lys Ser Tyr Ser Pro Cys Ala Trp Glu
                155                 160                 165
atc gtc agg gca gaa gtc atg aga tcc ttc tct tcc tcc aga aac  540
Ile Val Arg Ala Glu Val Met Arg Ser Phe Ser Ser Ser Arg Asn
                170                 175                 180
ctg caa gac aga ctc agg aag aag gag tga  570
Leu Gln Asp Arg Leu Arg Lys Lys Glu ＊
                185
<210>3
<211>534
<212>DNA
<213>牛IFN-α
<221>CDS
<222>(1)...(534)
<400>3
atg gcc cca gcc tgg tcc ttc ctg cta tcc ctg ttg ctg ctc agc tgc  48
Met Ala Pro Ala Trp Ser Phe Leu Leu Ser Leu Leu Leu Leu Ser Cys
1               5                   10                  15
aac gcc atc tgc tct ctg ggt tgc cac ctg cct cac acc cac agc ctg  96
Asn Ala Ile Cys Ser Leu Gly Cys His Leu Pro His Thr His Ser Leu
                20                  25                  30
gcc aac agg agg gtc ctg atg ctc ctg caa caa ctg aga agg gtc tcc  144
Ala Asn Arg Arg Val Leu Met Leu Leu Gln Gln Leu Arg Arg Val Ser
                35                  40                  45
cct tcc tcc tgc ctg cag gac aga aat gac ttc gaa ttc ctc cag gag  192
Pro Ser Ser Cys Leu Gln Asp Arg Asn Asp Phe Glu Phe Leu Gln Glu
                50                  55                  60
gct ctg ggt ggc agc cag ttg cag aag gct caa gcc atc tct gtg ctc  240
Ala Leu Gly Gly Ser Gln Leu Gln Lys Ala Gln Ala Ile Ser Val Leu
65                  70                  75                  80
cac gag gtg acc cag cac acc ttc cag ctc ttc agc aca gag ggc tcg  288
His Glu Val Thr Gln His Thr Phe Gln Leu Phe Ser Thr Glu Gly Ser
                85                  90                  95
ccc gcc acg tgg gac aag agc ctc ctg gac aag cta cgc gct gcg ctg  336
Pro Ala Thr Trp Asp Lys Ser Leu Leu Asp Lys Leu Arg Ala Ala Leu
            100                 105                 110
gat cag cag ctc act gac ctg caa gcc tgt ctg acg cag gag gag ggg  384
Asp Gln Gln Leu Thr Asp Leu Gln Ala Cys Leu Thr Gln Glu Glu Gly
        115                 120                 125
ctg cga ggg gct ccc ctg ctc aag gag gac tcc agc ctg gct gtg agg  432
Leu Arg Gly Ala Pro Leu Leu Lys Glu Asp Ser Ser Leu Ala Val Arg
    130                 135                 140
aaa tac ttc cac aga ctc act ctc tat ctg caa gag aag aga cac agc  480
Lys Tyr Phe His Arg Leu Thr Leu Tyr Leu Gln Glu Lys Arg His Ser
145                 150                 155                 160
cct tgt gcc tgg gag gtt gtc aga gca gaa gtc atg aga gcc ttc tct  528
Pro Cys Ala Trp Glu Val Val Arg Ala Glu Val Met Arg Ala Phe Ser
                165                 170                 175
tcc tca aca aac ttg cag gag agt ttc agg aga aag gac tga  570
Ser Ser Thr Asn Leu Gln Glu Ser Phe Arg Arg Lys Asp ＊
            180                 185
<210>4
<211>546
<212>DNA
<213>鸡IFN-α
<221>CDS
<222>(1)...(546)
<400>4
atg gct gtg cct gca agc cca cag cac cca cgg ggg tac ggc atc ctg  48
Met Ala Val Pro Ala Ser Pro Gln His Pro Arg Gly Tyr Gly Ile Leu
1               5                   10                  15
ctg ctc acg ctc ctt ctg aaa gct ctc gcc acc acc gcc tcc gcc tgc  96
Leu Leu Thr Leu Leu Leu Lys Ala Leu Ala Thr Thr Ala Ser Ala Cys
            20                  25                  30
aac cac ctt cgc tcc cag gat gcc acc ttc tct cac gac agc ctc cag  144
Asn His Leu Arg Ser Gln Asp Ala Thr Phe Ser His Asp Ser Leu Gln
        35                  40                  45
ctc ctc cgg gac atg gct ccc aca cta ccc cag ctg tgc cca cag cac  192
Leu Leu Arg Asp Met Ala Pro Thr Leu Pro Gln Leu Cys Pro Gln His
    50                  55                  60
aac gcg tct tgc tcc ttc aac gac acc atc ctg gac acc agc aac acc  240
Asn Ala Ser Cys Ser Phe Asn Asp Thr Ile Leu Asp Thr Ser Asn Thr
65                  70                  75                  80
cgg caa gcc gac aaa acc acc cac gac atc ctt cag cac ctc ttc aaa  288
Arg Gln Ala Asp Lys Thr Thr His Asp Ile Leu Gln His Leu Phe Lys
                85                  90                  95
atc ctc agc agc ccc agc act cca gcc cac tgg aac gac agc caa cgc  336
Ile Leu Ser Ser Pro Ser Thr Pro Ala His Trp Asn Asp Ser Gln Arg
            100                 105                 110
caa agc ctc ctc aac cgg atc cac cgc tac acc cag cac ctc gag caa  384
Gln Ser Leu Leu Asn Arg Ile His Arg Tyr Thr Gln His Leu Glu Gln
        115                 120                 125
tgc ttg gac agc agc gac acg cgc tcc cgg acg cga tgg cct cgc aac  432
Cys Leu Asp Ser Ser Asp Thr Arg Ser Arg Thr Arg Trp Pro Arg Asn
    130                 135                 140
ctt cac ctc acc atc aaa aaa cac ttc agc tgc ctc cac acc ttc ctc  480
Leu His Leu Thr Ile Lys Lys His Phe Ser Cys Leu His Thr Phe Leu
145                 150                 155                 160
caa gac aac gat tac agc gcc tgc gcc tgg gaa cac gtc cgc ctg caa  528
Gln Asp Asn Asp Tyr Ser Ala Cys Ala Trp Glu His Val Arg Leu Gln
                165                 170                 175
gct cgt gcc tgg ttc ctg cac atc cac aac ctc aca ggc aac acg cgc  576
Ala Arg Ala Trp Phe Leu His Ile His Asn Leu Thr Gly Asn Thr Arg
            180                 185                 190
act tag  582
Thr ＊
193